التحسين التقني لنموذج فأر ثنائي لنقص التروية الكلوية لأبحاث إصابات الكلى الحادة
نوفمبر 3, 2023
أنشأت هذه الدراسة بروتوكولا يركز على التحسين التقني لنموذج فأر من نقص التروية الكلوية الثنائية لأبحاث إصابات الكلى الحادة.
إصابة الكلى الحادة هي عامل خطر رئيسي مرتبط بارتفاع معدل الوفيات في المرضى الذين يعانون من السكتة القلبية بعد عودة الدورة الدموية. يمكن إجراء هذا الإجراء للحث على إصابة الكلى الحادة. يهدف هذا البروتوكول إلى إعادة تروية نقص التروية الكلوية بدقة وأمان واتساق.
سيوضح الإجراء هوانغ تشنغ وي ، مساعد من مختبري. للبدء ، ضع فأرا ذكرا من C57BL / 6 يبلغ من العمر ثمانية أسابيع في وضع الانبطاح على منصة جراحية ببطانية كهربائية للحفاظ على درجة حرارة الجسم. بعد ذلك ، المس الظهر ، وابحث عن العمود الفقري القطني ، وابحث عن الزوايا الضلعية الفقرية أسفل جانبي الضلع الأخير.
ضعي غسول إزالة الشعر لحلاقة الشعر وفركه بالقرب من جانبي منطقة الزاوية الضلعية الفقرية. تطهير المنطقة الجراحية باستخدام محلول Betadine و 75٪ كحول باستخدام كرات القطن. استخدم ملقط رفيع الأطراف لرفع الجلد برفق أسفل الزاوية الضلعية الفقرية اليسرى.
ثم ، باستخدام المقص ، قم بإنشاء شق ظهري جانبي مائل بطول سنتيمتر واحد على طول خطوط توتر الجلد من خط الوسط القطني على الجانب الأيسر. بعد ذلك ، قم بتحريك الجدار العضلي للجناح الأيسر لتصور الكلية اليسرى. دفع وفصل الكلى اليسرى بعناية من الأنسجة المحيطة مع ملقط.
ثم ، تحديد عنيق الكلى. المشبك عنيق الكلوي الأيسر مع مقطع الأوعية الدموية الدقيقة. تأكيد نقص التروية عن طريق تغيير واضح في لون الكلى من الوردي إلى الأحمر الداكن.
لتجنب الجفاف أثناء التثبيت ، قم بتغطية الكلى بكرات قطنية معقمة مبللة بالمحلول الملحي. بعد 25 دقيقة ، افتح مشبك الأوعية الدموية الدقيقة الأيسر لبدء إعادة تروية الكلية اليسرى. إعادة الكلى إلى تجويف البطن.
أغلق تجويف البطن بمواد خياطة قابلة للامتصاص 6/0. راقب الماوس حتى يبدأ في التحرك بحرية ويتغذى. يظهر هنا نقص التروية الكلوية بعد لقط عنيق الكلى.
يكشف تغير لون الكلى من اللون الوردي إلى الأحمر الداكن أن نضح الكلى أصبح غير كاف. بالمقارنة مع الضوابط ، زادت مستويات مصل نيتروجين اليوريا في الدم والكرياتينين بعد يومين من إعادة التروية الكلوية. تمهد هذه التقنية الطريق للباحثين لاستكشاف أساليب علاجية جديدة ضد الإصابة الكلوية الحادة.
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية
نظرة عامة
وضعت هذه الدراسة بروتوكولاً يركز على التحسين التقني لنموذج فأر مصاب بنقص التروية وإعادة التروية الكلوية الثنائية لأبحاث إصابة الكلى الحادة. يهدف هذا الإجراء إلى تحفيز إصابة الكلى الحادة بدقة واتساق.
مكونات الدراسة الرئيسية
مجال العلوم
- طب الكلى
- إصابة الكلى الحادة
- النماذج الحيوانية
خلفية علمية
- تعد إصابة الكلى الحادة عامل خطر كبير لارتفاع معدلات الوفيات لدى المرضى بعد توقف القلب.
- تركز الدراسة على نقص تروية الكلى وإعادة التروية كوسيلة لإحداث إصابة الكلى الحادة.
- يمكن أن يؤدي فهم هذه العملية إلى ابتكار مقاربات علاجية جديدة.
- يهدف البروتوكول إلى تحقيق الدقة والأمان في إحداث إصابة الكلى.
الغرض من الدراسة
- تحسين نموذج فأر لدراسة إصابة الكلى الحادة.
- توضيح طريقة موثوقة لتحفيز نقص التروية وإعادة التروية الكلوية.
- تسهيل الأبحاث المتعلقة بالتدخلات العلاجية لإصابة الكلى.
الطرق المستخدمة
- استخدام ذكور الفئران من سلالة C57BL/6 المخدّرة لإجراء العملية.
- إجراء شق جراحي للوصول إلى الكلية اليسرى.
- ربط السويقة الكلوية لتحفيز نقص التروية (Ischemia).
- مراقبة تغير لون الكلية كمؤشر على حدوث نقص التروية.
النتائج الرئيسية
- أكد التغير الملحوظ في لون الكلية حدوث نقص التروية.
- لوحظ ارتفاع في مستويات نيتروجين يوريا الدم والكرياتينين في المصل بعد إعادة التروية.
- توفر هذه الطريقة نهجاً متسقاً لاستحثاث إصابة الكلى الحادة.
- تدعم النتائج المزيد من استكشاف الاستراتيجيات العلاجية.
الاستنتاجات
- يعزز البروتوكول المطور من موثوقية أبحاث إصابة الكلى الحادة.
- ويعمل كقاعدة للدراسات المستقبلية حول علاجات الكلى.
- يُعد فهم نقص التروية وإعادة التروية الكلوية أمراً بالغ الأهمية لتطوير التدخلات العلاجية.
الأسئلة الشائعة
الأهمية الصناعية التنفيذية
تعد النماذج قبل السريرية الموثوقة للإصابة الكلوية الحادة (AKI) ضرورية لتقليل المخاطر المرتبطة بالفرضيات العلاجية المبكرة وتوضيح الدوافع الميكانيكية للاعتلال الكلوي الذي يلي التوقف القلبي. يتيح هذا النموذج المطور لإعادة تروية نقص التروية الكلوية الثنائية في الفئران استحثاثاً وقياساً قابلاً للتكرار للإصابة الكلوية الحادة، مما يدعم الثقة التنبؤية في التحقق من الأهداف والبحوث الانتقالية. كما تعمل بروتوكولات الإصابة الموحدة على تقليل التباين البيولوجي، مما يسهل عملية فرز المحافظ الدوائية واتخاذ قرارات التطوير في مجال اكتشاف أدوية أمراض الكلى.
التطبيقات الاستراتيجية في البحث والتطوير الصيدلاني الحيوي
الاكتشاف المبكر والتحقق من الهدف
- يتيح استقصاء آليات الإصابة الكلوية ذات الصلة بإصابة الكلى الحادة (AKI) بعد توقف القلب.
- يدعم التحقق الوظيفي من الأهداف من خلال قياس الإصابة عبر المؤشرات الحيوية في المصل.
- يسهل الحد من المخاطر الميكانيكية من خلال إصابة نقص التروية وإعادة التروية المحكومة.
- يعزز الثقة التنبؤية لبرامج أمراض الكلى في مراحلها المبكرة.
الفحص وتطوير المقايسة
- يوفر نظاماً قابلاً للتكرار في الجسم الحي (in vivo) لتقييم التدخلات المرشحة.
- يوحد عملية تحفيز الإصابة وقياس النتائج لضمان قابلية مقارنة الاختبارات.
- يولد مخرجات كمية (نيتروجين يوريا الدم، والكرياتينين) لفحص المركبات.
- يتيح إمكانية التوسع وقابلية التكرار عبر الدراسات المختلفة في سير العمل قبل السريري.
الأبحاث الانتقالية وما قبل السريرية
- يتماشى مع الفسيولوجيا المرضية السريرية للإصابة الكلوية الحادة (AKI) الملحوظة بعد التوقف القلبي واستعادة الدورة الدموية التلقائية (ROSC).
- يدعم الاستمرارية من مرحلة الاكتشاف الميكانيكي إلى تقييم الفعالية قبل السريرية.
- يتيح تطوير أصول طب الكلى مع تعديل المخاطر بناءً على نقاط نهاية ذات صلة انتقالياً.
- يسهل التحقق من صحة المؤشرات الحيوية من أجل الترجمة السريرية المستقبلية.
تكامل مسار العمل وسير العمل
يتموضع هذا النموذج ضمن التسلسل الممتد من الاكتشاف إلى المرحلة قبل السريرية، حيث يربط بين الدراسات الميكانيكية واختبارات الفعالية الانتقالية لتدخلات إصابة الكلى الحادة (AKI).
- بيولوجيا الاكتشاف: تدعم اختبار الفرضيات المتعلقة بآليات الإصابة الكلوية ونقاط التدخل العلاجي.
- الفحص: توفر قراءات كمية ومعيارية لتقييم المركبات.
- التحليلات: تتيح المقارنة الإحصائية لشدة الإصابة والتأثير العلاجي عبر علامات المصل.
- الأبحاث الانتقالية: توفر نموذج إصابة ذو صلة سريرياً للتحقق من صحة المؤشرات الحيوية والفعالية.
- إعادة الاستخدام المؤسسي: تضع بروتوكولاً قابلاً للتكيف عبر محافظ أبحاث أمراض الكلى.
التأثير التشغيلي والمؤسسي
- القيمة العلمية: تزيد من الثقة التنبؤية وتقلل من الغموض الميكانيكي في أبحاث إصابة الكلى الحادة (AKI).
- القيمة التشغيلية: تعزز إمكانية التكرار والتوحيد القياسي لنماذج إصابة الكلى قبل السريرية.
- القيمة الاستراتيجية: توجه قرارات المضي قدماً أو التوقف، وتحسن تخصيص الموارد في مسارات أبحاث أمراض الكلى.
- التأثير على المحفظة: تدعم تحديد الأولويات المعدلة حسب المخاطر والنهوض بالمرشحات العلاجية للكلى.
اعتبارات التنفيذ
- يتطلب خبرة في جراحة الحيوانات الصغيرة والرعاية المحيطة بالجراحة.
- يستلزم إمكانية الوصول إلى التخدير، والتحكم في درجة الحرارة، والأدوات الجراحية.
- يتطلب بروتوكولات موحدة لضمان إمكانية التكرار بين الفرق المختلفة.
- قد يكون التكييف مطلوباً لسلالات الفئران المختلفة أو لدرجات الإصابة المتفاوتة.
- يجب إدارة معدلات النفوق والتباين لضمان الحصول على مخرجات بيانات موثوقة.
