تقييم السمية المرتبطة بالخلايا التائية لمستقبلات المستضد الخيمري باستخدام نموذج فأر Xenograft المشتق من سرطان الدم الليمفاوي الحاد

يستخدم هذا البروتوكول CAR-T البشري والخلايا السرطانية ويوضح بدقة السميات المرتبطة بإدارة CART19. لذلك ، تلخيص ما لوحظ في العيادة. الميزة الرئيسية لاستخدام هذه المنصة هي أنها توفر نموذجا قابلا للترجمة وملائما سريريا حيث يتم استخدام الخلايا التائية البشرية والخلايا السرطانية.

لا يسمح هذا النموذج بالتقييم الفعال للسميات المرتبطة ب CART19 فحسب ، بل يسمح لنا أيضا بفهم أفضل لكيفية التغلب على هذه السميات من خلال استراتيجيات المعالجة المحسنة. للبدء ، راقب الفئران التي تدار CART19 مرتين في اليوم لتقييم أي تغييرات في صحتهم ، مثل ضعف الحركة والجسم المنحني وفقدان وزن الجسم. بمجرد أن تصاب الفئران بضعف حركي وانخفاض الوزن ، اجمع دمها المحيطي لتحليل عبء الورم.

وإجراء عزل المصل للسيتوكينات كما هو موضح في المخطوطة. بعد العزل ، قم بتخزين أنابيب الطرد المركزي الدقيقة في المصل عند 80 درجة مئوية ، واستخدم cera لتحليل chemokines والسيتوكينات باستخدام مقايسة تعدد الإرسال. لتصوير التصوير بالرنين المغناطيسي ، امزج 120 ميكرولترا من الجادولينيوم مع 880 ميكرولتر من محلول ملحي ، وقم بتحميله في حقنة أنسولين سعة ملليلتر واحد.

حقن 100 ميكرولتر من المحلول المحضر داخل الصفاق في كل ماوس. تخدير الفأر ووضعه على مسبار المهد المتوافق مع القوارض. ثم ربط أسنانها على شريط لدغة.

اسحب رأس الماوس إلى ملف الحجم 25 ملم ، واضبط مخروط الأنف المربوط بنظام التخدير isoflurane. أحكم ربط مقبض شريط العضة للحفاظ على الوضع طوال مدة الفحص. لتقييم التنفس ، قم بتوصيل مسبار جهاز مراقبة التنفس بالقرب من الحجاب الحاجز ، وقم بتثبيته بشريط جراحي.

حافظ على معدل التنفس بين 20 إلى 60 نفسا في الدقيقة حتى تظل حالة الفئران مستقرة. أدخل مسبار الحيوان في التجويف الصغير داخل نظام التصوير بالرنين المغناطيسي للحيوانات الصغيرة ذات التجويف العمودي واضبط رأس الحيوان في وسط الملف. باستخدام القفل ، قم بتأمين الجهاز في الوضع الرأسي وقم بتوصيل الجهاز بالكمبيوتر.

بعد ذلك ، افتح برنامج ParaVision لإعداد مواضع الفحص وأنواع عمليات الفحص. تحديد المواضع السهمية والمحورية المثلى مع الحفاظ على اتساقها لجميع المجموعات التجريبية. لجمع بيانات التصوير بالرنين المغناطيسي المرجحة T1 ، استخدم تسلسلا متعدد الشرائح متعدد الصدى مرجحا T1 مع وقت تكرار يبلغ 300 مللي ثانية ، وزمن صدى يبلغ 9.5 مللي ثانية ، ومجال رؤية 4.00 × 2.00 × 2.00 سم ، ومصفوفة 192 × 96 × 96.

بالنسبة لصور التصوير بالرنين المغناطيسي المرجحة T2 ، استخدم تسلسلا متعدد الشرائح ومتعدد الصدى مع معلمات مماثلة. بمجرد اكتمال عمليات الفحص ، قم بإزالة المسبار من التجويف واستخراج الماوس برفق عن طريق إزالة الأسنان من شريط اللدغة. بعد استخراج البيانات من البرنامج ، استخدم برنامج التحليل للقياس الكمي وعرض الحجم ثلاثي الأبعاد لمناطق فرط الكثافة CD19 + تمت مقارنة مجموعات الخلايا السرطانية بين الفئران المعالجة ب CART19 ، والفئران غير المعالجة باستخدام قياس التدفق الخلوي.

لوحظ انخفاض كبير في الوزن في الفئران التي عولجت بخلايا CART19. يعتبر فقدان الوزن أحد أعراض ظهور CRS ، والذي يرتبط بالسميات المرتبطة بخلايا CART. كشف فحص متعدد الإرسال عن التعبير عن السيتوكينات والكيموكينات في مصل الفئران NSG قبل وبعد إعطاء CART19.

كشفت الصور المرجحة T2 عن دليل على الوذمة والتسلل الالتهابي المحتمل أثناء الالتهاب العصبي في الفئران المعالجة ب CART19. بينما أظهر التصوير بالرنين المغناطيسي المرجح T1 تحسنا في التباين داخل حمة الدماغ ، مما يشير إلى زيادة نفاذية الأوعية الدموية. تم تجميع عمليات إعادة البناء ثلاثية الأبعاد لدماغ القوارض بناء على مناطق فرط الكثافة T1 المقابلة لنفاذية الأوعية الدموية ، مما يجعل حجم تسرب الجادولينيوم في الدماغ.

من المهم أن تتذكر أن المراقبة الجسدية اليومية للفئران بعد إعطاء CART19 ، إلى جانب النزيف المحيطي ، ستكون أفضل مؤشر للمضي قدما في التصوير بالرنين المغناطيسي لإجراء تقييم كامل لأي تغييرات في الدماغ تشير إلى CRS أو السمية العصبية. هذه التقنية قابلة للتطبيق على نطاق واسع على علاجات الخلايا التائية ذات مستقبلات المستضدات الوهمية الإضافية ، وستسمح للعلماء باختبار السمية المحتملة الناشئة عن الخلايا التائية ذات مستقبلات المستضدات الوهمية الجديدة. هذا النموذج المقترح هو نقطة انطلاق في فهم كيفية مراقبة السمية المرتبطة بالخلايا التائية ذات مستقبلات المستضدات الوهمية ومعالجتها واستخدامها للتحقق من صحة نماذج الخلايا التائية ذات مستقبلات المستضدات الوهمية الجديدة.