تقييم سلامة حاجز الأمعاء في الفئران باستخدام ديكستران المسمى بالفلوريسئين أيزوثيوسيانات

تساعد هذه الطريقة في الإجابة على أسئلة حول ما إذا كانت الحالة تغير سلامة حاجز الأمعاء أو أسئلة حول ما إذا كان العلاج المحتمل يمكن أن يحافظ على سلامة حاجز الأمعاء. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تقدم تقنية غير جراحية ومنخفضة العبء لتقييم وقياس نفاذية الأمعاء في الجسم الحي. للبدء ، قم بتسريع الفئران لمدة أربع ساعات ، ثم قم بإعطاء 200 ميكرولتر من معلق FITC-dextran عن طريق التزويج الفموي لكل فأر باستخدام إبرة تجويف منحنية معقمة مقاس 38 ملم 22.

ابدأ مؤقتا بعد التجويف الأول وانتظر من خمس إلى 10 دقائق بين كل تجويف للسماح بإجراء قياسات في الجسم الحي ، مع الحفاظ على ساعة واحدة بعد التزويج. احتفظ بنظام التعليق FITC-dextran المتبقي للمنحنى القياسي. ابدأ تشغيل الجهاز والبرنامج بالنقر مع الاستمرار فوق زر البدء والسماح للنظام بالإحماء.

انقر فوق حالة الجهاز وتأكد من أن جميع الأجهزة التي تم تكوينها تظهر موافق قبل المتابعة. ثم انقر فوق دراسة جديدة واحفظ الملف بالاسم المطلوب. بعد ذلك ، انقر فوق خيارات الدراسة.

أدخل معرف العينة واختر الليزر الصحيح والتجربة. ثم قم بإزالة الفراء من منطقة البطن باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية ، وتطبيق مرهم بيطري بسخاء على العينين لمنع الجفاف. افتح غرفة التصوير وضع الحيوان ظهريا على لوحة المسح.

ثم تأمين الأطراف والذيل مع الشريط. بعد ذلك ، حدد المنطقة المراد مسحها ضوئيا باستخدام أداة الرسم. تأكد من تضمين العرض الكامل للبطن من أعلى الكبد مباشرة إلى المستقيم.

ثم انقر فوق أداة التعديل لضبط المنطقة بمجرد رسمها. اضبط دقة الفحص على 2.0 ملم وانقر فوق ابدأ لبدء الفحص. بعد ذلك ، افتح ملفات الصور من خلال العثور عليها تحت اسم الملف المختار وافتح جميع الملفات ذات الإعدادات المتزامنة في نفس الوقت.

باستخدام شريط أدوات إعدادات الصورة، استخدم زري مزامنة الصورة ومقياس المزامنة لمزامنة إعدادات الصورة لإجراء مقارنة دقيقة. ثم احفظ الصور بالمقاييس المعدلة. قارن مضان البطن لكل وماوس التحكم على الصور ذات القياس الموحد باستخدام برنامج مرتبط بنظام التصوير.

اجمع كريات برازية من كل فأر في أنبوب معقم بعد أربع ساعات من التزوير. ثم احتفظ بالأنابيب على الجليد وضعها في الظلام. بعد ذلك ، أجهزة الطرد المركزي عينات الدم في 9،390 × غرام لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة.

ثم انقل البلازما إلى أنبوب معقم جديد واحتفظ بها على الجليد في الظلام. تمييع 50 ملليغرام من عينات البراز في 200 ميكرولتر من PBS ، وتخفيف البلازما مع PBS بنسبة واحد إلى اثنين. لوحة 100 ميكرولتر عينات ومعايير في لوحة سوداء غير شفافة 96 بئر.

اقرأ التألق على قارئ لوحة الفلورسنت مع الإثارة عند 485 نانومتر والامتصاص عند 530 نانومتر. أخيرا ، حدد تركيز FITC-dextran لكل عينة من خلال مقارنة التألق بالتركيزات المعروفة للمنحنى القياسي. أظهر تحليل التألق في الجسم الحي أن الفئران التي تلقت النظام الغذائي الشاهد فقط كان لديها كمية كبدية أعلى من FITC-dextran ومستويات أعلى من التألق المتبقي في تجويف البطن مقارنة بالفئران التي تلقت النظام الغذائي المكمل بالأنسولين.

كان لدى الفئران التي تلقت النظام الغذائي المكمل بالأنسولين مستويات أقل بكثير من FITC-dextran في البلازما مقارنة بالفئران التي تلقت النظام الغذائي الشاهد فقط. وبالتوافق، كان لدى الفئران التي تلقت حمية الأنسولين مستويات أعلى بكثير من FITC-dextran في برازها من الفئران التي تلقت النظام الغذائي الضابط فقط. تشير المستويات المنخفضة من FITC-dextran في براز الفئران الخاضعة للرقابة إلى أنه يتخلل الحاجز المعوي في الدورة الدموية بدلا من إفرازه بشكل مناسب.

عززت المستويات العالية من FITC-dextran في البلازما هذه النتيجة. التوقيت ضروري عند محاولة هذا الإجراء. يجب أن تحدث القراءة الفلورية وجمع العينات في أقرب وقت ممكن لمدة ساعة وأربع ساعات بعد التزويج لكل فأر على حدة.