في الجسم الحي توصيل الجينات إلى الخلايا الظهارية الثديية للفأر من خلال الحقن الثديي داخل القناة

تقوم هذه الطريقة بتوصيل المادة الوراثية إلى الخلايا الظهارية للغدة الثديية بطريقة خاصة ومؤقتة ويمكن التحكم فيها كميا. نظرا لأن توصيل المادة الوراثية إلى الخلايا الظهارية الثديية أمر خاص ، يتم التحكم فيه مؤقتا وكميا ، فإن النماذج الثديية الناتجة عن هذه الطريقة تحاكي بشكل أفضل نشأة الورم الطبيعي. ابدأ تحضير المحاقن عن طريق قطع إبر المحور المعدني ذات المقياس 33 إلى طول سنتيمتر واحد تقريبا وتخزينها في الكحول.

قم بإزالة المحاقن والإبر من الكحول وادفع الكحول المتبقي من المحقنة والإبر. ثم تفكيك حقنة لتجفيف الهواء. بعد التجفيف ، قم بتجميع المحقنة.

أخرج أنابيب المخزون الفيروسية من الفريزر الذي تبلغ درجة حرارته 80 درجة مئوية تحت الصفر وقم بإذابتها على الجليد. لإضافة بروموفينول أزرق ، اغمس طرف الماصة على عمق سنتيمتر واحد في مسحوق البروموفينول الأزرق. ثم أحضر الكمية النزرة المرفقة من البروموفينول الأزرق في تعليق الفيروس.

امزج البروموفينول الأزرق مع محلول الفيروس عن طريق سحب اللأعلى ولأسفل 10 مرات ، قبل وضع الفيروس على الجليد. تحقق من عمق التخدير عن طريق الضغط على إصبع أنثى الفأر المخدرة. ضع مرهما على العينين لمنع الجفاف أثناء تخدير الحيوان.

ضع الماوس في وضع ضعيف على وسادة دافئة وأرفق جميع الأطراف الأربعة بالمقعد باستخدام شريط لاصق. تحديد الحلمة المراد حقنها وفضحها عن طريق قص الشعر المحيط باستخدام المقص. ضعي 70٪ كحول وأربع مسحات في ثلاث جولات متناوبة على منطقة الحلمة لتنظيف الحلمة وكشفها.

قم بتحريك الطرف البعيد للحلمة باستخدام زوج من مقص زنبركي التشريح الدقيق المعقم ، حتى يمكن رؤية فتحة قنوية مركزية صغيرة تحت مصباح مكبر. ثم قم بتحميل 10 ميكرولتر من خليط بروموفينول الأزرق للفيروس في المحقنة وأدخل الإبرة بعناية في فتحة الحلمة بمساعدة مصباح المكبر. قم بحقن 10 ميكرولترات كاملة من الفيروس في شجرة القناة وضع الماوس على جهاز تدفئة منزلق على 45 درجة مئوية حتى يستيقظ الفأر تماما.

افتح التجويف الصدري بعد ثلاثة إلى خمسة أيام من حقن الفيروس. قطع الجلد على طول الخط الأوسط البطني والأطراف العلوية والسفلية باستخدام المقص. رفع الجلد وفضح الغدد الثديية.

إزالة الغدة الثديية المحقونة من الجلد والغدة غير المحقونة كعنصر تحكم باستخدام ملقط ومقص. بمجرد الانتهاء من ذلك ، ضع الغدة الثديية على شريحة زجاجية وانشر الغدة إلى شكلها الأصلي قبل مراقبتها وتصويرها تحت مجهر ستيريو فلوري. تم تأكيد نجاح الحقن داخل القناة من خلال تعريض الغدة الثديية ومراقبة شجرة الأقنية الزرقاء.

بعد يومين إلى خمسة أيام من حقن فيروس lenti-EGFPFUCGW ، تم تقييم عدوى الخلايا الظهارية الثديية من خلال مراقبة إعداد جبل كامل تحت مجهر ستيريو فلوري. لتحليل التدفق الخلوي للبروتينات الفلورية أو علامات سطح الخلية التي ينتجها الفيروس ، تم جمع الغدد غير المصابة والغدد المصابة ومعالجتها في تعليق خلية واحدة لتقدير معدل العدوى الفيروسية. أدى ERBBB2 المنشط إلى آفات ما قبل سرطانية في غضون أسابيع قليلة وأورام في غضون بضعة أشهر.

يمكن أن يختلف حجم الحلمات اختلافا كبيرا بسبب الاختلافات في الكتلة والعمر ووزن الجسم والقوة بين الفئران الفردية. يعد تقليم طرف الحلمة بشكل صحيح لفضح فتحة القناة الثديية وتركيب الإبرة خطوة مهمة لحقن الفيروس بنجاح.