تقييم الموجات فوق الصوتية غير الغازية لتطور سرطان بطانة الرحم في الحذف الموجه Pax8 لمثبطات الورم Arid1a و Pten في الفئران

تظهر هذه الدراسة أن الموجات فوق الصوتية الموجهة يدويا مناسبة تماما لمراقبة تطور أمراض الرحم في نموذج فأر مستحث لسرطان بطانة الرحم. التصوير بالموجات فوق الصوتية غير جراحي وبالتالي يسمح بإجراء دراسات طولية للفئران الفردية عبر الأيام والأسابيع. وهذا يسمح بالتقاط التباين الفردي وفي النهاية استخدام عدد أقل من الحيوانات للدراسة.

يمكن تطبيق هذه الطريقة بسهولة لمراقبة التغيرات المرضية ونماذج النسخ المتطابق الأخرى ، بما في ذلك تلك الخاصة بالأورام والأمراض المزمنة في المسالك البولية والجهاز الهضمي. ابدأ في إعداد جهاز الموجات فوق الصوتية لتصوير الرحم أو المبيض عن طريق اختيار محول طاقة أو مسبار بنطاق يتراوح من 32 إلى 56 ميغاهرتز. انتقل إلى علامة التبويب التطبيقات من الشاشة الرئيسية وحدد وضع البطن الصغير للماوس.

ثم انقر فوق Scan للعودة إلى الشاشة الرئيسية وانتظر حتى يتم عرض صورة حية. بعد ذلك ، حدد B Mode من الخيارات الموجودة على شريط الأدوات الأيسر قبل النقر فوق خيار المزيد من عناصر التحكم لعرض أدوات إضافية لتحسين الصورة ، مثل اكتساب الصورة وعمقها أو لضبط إعدادات الحصول على المقطع ، مثل عدد الإطارات في الثانية. بمجرد تحديد إعدادات الصورة ، ارجع إلى الشاشة الرئيسية بالنقر فوق B Mode.

ضع حقنة من ثلاثة إلى 10 ملليلتر مملوءة بمحلول سائل معقم متساوي التوتر بين وسادة تسخين ووسادة ماصة لعدة دقائق لتسخينها مسبقا إلى 35 إلى 40 درجة مئوية. إذا لم يكن الجهاز يحتوي على جهاز تدفئة ، فضع زجاجة من جل الموجات فوق الصوتية على وسادة التدفئة. لحقن واحد إلى ملليلتر من المحلول في التجويف البريتوني للماوس ، قم بتأمين الماوس بواسطة القفا بيد واحدة ، وفضح البطن.

ثم أمسك الماوس بزاوية 20 درجة تقريبا مع توجيه الأنف إلى الأرض. أدخل إبرة حقنة السلين قياس 25 عبر الجلد وجدار البطن للربع الأيمن الذيلي من البطن. لتجنب الحقن في الأوعية الدموية أو الجهاز الهضمي ، اسحب مكبس المحقنة بأقل ضغط للبحث عن الدم.

ضع الماوس في الاستلقاء البطني على وسادة الامتصاص فوق وسادة التدفئة قبل وضع مخروط أنف القوارض بإحكام على أنف الفأر وكمامته. ضع كمية صغيرة من هلام الموجات فوق الصوتية الذي تم تسخينه مسبقا على العمود الفقري على جانبي الفأر المخدر بين الضلع الأخير والحوض. ضع كمية صغيرة من الجل على مسبار الموجات فوق الصوتية.

بعد ذلك ، ضع المسبار بالتوازي مع الفقرات مع مقدمة المسبار على جانب الجمجمة. باستخدام فأر في الاستلقاء البطني ، قم بمسح المنطقة ببطء بحثا عن معلم الكلى. مع وضع الكلى في العرض ، اسحب المسبار الذيلي للعثور على المبيض ، وهو عبارة عن هيكل بيضاوي مفرط الصدى قليلا إلى هيكل دائري داخل وسادة دهنية مبيضة مفرطة الصدى ، يحدها من الجمجمة البطنية ومن الناحية الظهرية الجانبية جدار البطن الظهري.

قم بتحسين تباين الصورة عن طريق ضبط كسب الإشارة باستخدام شريط التمرير الموجود أسفل شاشة التحكم. لتحسين تصوير الكلى ، اضغط على البطن المقابل باستخدام إصبع. قم بتغيير الضغط والزاوية من موازية للعمود الفقري إلى حوالي 20 درجة بطنية.

بمجرد عرض الجهاز محل الاهتمام ، التقط مقطع فيديو بالنقر فوق حفظ مقطع أو بدء التسجيل. بمجرد الانتهاء ، انقر فوق إيقاف التسجيل للاحتفاظ بالصور بعدد محدد مسبقا من الإطارات. امسك المسبار ذيليا حتى يصبح المبيض في الجانب الأكثر جمجمة من مجال الرؤية.

قم بتغيير ضغط المسبار وزاويته لعرض الرحم وتصويره. كرر جمع الفيديو والإطار لكل جهاز مهم. ابحث عن الرحم الذي يمتد طوليا على طول جدار البطن الظهري مع رؤية عضلات الساق الجانبية.

راقب الأنسجة بحثا عن حركة تمعجية لتمييز الحلقات المعوية عن قرون الرحم الثابتة. ضع الماوس في الاستلقاء الظهري لجمع الصور من النهج البطني. تأكد من أن تزييت العين كاف وأن الكمامة مثبتة في مخروط الأنف.

ضع كمية صغيرة من هلام الموجات فوق الصوتية الذي تم تسخينه مسبقا على البطن البطني قبل تطبيق المسبار عند خط الوسط والجمجمة في العانة لتحديد موقع المثانة كمعلم ناقص الصدى. للعثور على قرون الرحم ، اسحب المسبار الجانبي إلى المثانة. قم بتطبيق ضغط رقمي خفيف من أي من جانبي الماوس أو كلاهما.

بمجرد أن تصبح قرون الرحم في مجال الرؤية ، أمسك المسبار بشكل عمودي على الماوس وامسح جانبي البطن لالتقاط مناظر عرضية لكلا القرنين. قم بتدوير المسبار لالتقاط طرق العرض السهمية. بعد الموجات فوق الصوتية ، امسح الماوس بمنشفة ورقية قبل إعادته إلى قفصه للتعافي.

بمجرد أن يستيقظ الفأر تماما بعد دقيقتين إلى خمس دقائق ، أعد الماوس إلى غرفة الحيوانات. أظهرت مقارنة صور الموجات فوق الصوتية لتجويف بطن الفأر قبل وبعد الحقن بالمحلول الملحي التصور المحسن لأعضاء البطن ، بما في ذلك الرحم والمبيض بعد الحقن بالمحلول الملحي. تم استخدام نهج بطني لدراسة المقاطع العرضية لقرون الرحم المجاورة للمثانة ناقص الصدى.

تم استخدام الكيمياء الهيستولوجية المناعية مع الأجسام المضادة الموجهة ضد Arid1a و Pten لدراسة فقدان البروتين الكابت للورم الكافي الذي تم تحقيقه في الخلايا الظهارية الرحمية مقارنة بالأنسجة اللحمية المجاورة. تم الكشف عن صور الموجات فوق الصوتية لرحم الفأر مع تغيرات مبكرة في علم الأمراض بعد ثلاثة أسابيع من العلاج بالدوكسيسيكلين ، مما يدل على تجويف الرحم الناقص الصدى والمتوسع. في دراسة علم الأمراض وعلم الأنسجة المرضي الإجمالي لنفس الرحم ، لوحظ وجود رحم أصغر ولكن متوسع رقيق الجدران وتضخم بطانة الرحم المبكر مع الحفاظ على التجويف المميز على التوالي.

أظهرت الفئران التي تم قتلها رحيما في نقاط زمنية لاحقة رحم أكبر مع تجويف أصغر وجدار سميك. عند تعلم استخدام الوضع اليدوي للمجسات ، يمكن أن يؤدي الضغط المفرط أو الحركة السريعة إلى صعوبة تحديد الأعضاء. استخدم حركات لطيفة ومدروسة وركز على تحديد الأعضاء التي تعتبر معالم أولا.

في نقطة نهاية الدراسة ، يتم التضحية بالفئران ويتم جمع الأنسجة لتأكيد ضربة قاضية للجينات وتوصيف تغيرات الأنسجة. تسمح هذه التقنية للمحققين بمراقبة الآفات داخل البطن بمرور الوقت. وفي حالتنا ، استخدمناه لمراقبة تطور سرطان الرحم في نموذج iPad ، والذي أكدناه بعد ذلك من خلال علم أمراض الأنسجة.