توحيد النقل عبر المختبرات بين أجهزة قياس التدفق الخلوي للكشف عن الخلايا الليمفاوية في الأطفال الذين تم تطعيمهم بالتهاب الدماغ الياباني
فبراير 10, 2023
في هذه الدراسة ، تم تطوير طريقة لتسهيل نقل الإعدادات التجريبية وقوالب التحليل بين اثنين من مقاييس التدفق الخلوي في مختبرين للكشف عن الخلايا الليمفاوية في الأطفال اليابانيين الذين تم تطعيمهم ضد التهاب الدماغ. ستسمح طريقة التوحيد القياسي لتجارب مقياس التدفق الخلوي بإجراء مشاريع بحثية بفعالية في مراكز متعددة.
توفر طريقة التوحيد القياسي لمقياس التدفق الخلوي نهجا مجديا للاعتماد المتبادل لنتائج المختبر وتضمن اتساق النتائج مع المشاريع البحثية عبر مراكز متعددة. طريقة تقليل استهلاك الوقت سهلة التنفيذ ، وهي مجهزة لأتمتة وتحليل القالب ، ويمكن أن تقلل بشكل كبير من متطلبات تحليل البيانات. ابدأ في إنشاء تكوين جديد في برنامج مقياس الخلايا A ، من مختبر النقل ، بالنقر فوق زر مقياس الخلايا ، واختيار تكوينات العرض.
انقر بزر الماوس الأيمن فوق مجلد التكوينات الأساسي في قائمة التكوين ، واختر مجلدا جديدا وأعد تسميته. بعد ذلك ، قم بإنشاء تكوين جديد بالنقر بزر الماوس الأيمن فوق التكوين الأساسي ونسخه. انقر بزر الماوس الأيمن فوق المجلد الجديد والصق التكوين الأساسي قبل إعادة تسمية التكوين الجديد ، نقل الطريقة الموحدة "اسحب اسم المعلمة ، مثل ، FETC من قائمة المعلمات ، إلى الكاشف المناسب 530/30 ، وقم أيضا بتحرير معلمات إضافية للتكوين الجديد.
لتوحيد التجربة في مختبر النقل ، قم بإجراء فحص أداء باستخدام إعداد مقياس الخلايا A هذا وتتبع الخرزات للتحقق من أن مقياس الخلايا A يعمل بشكل جيد. انقر بزر الماوس الأيمن فوق إعدادات cytometer A في نافذة متصفح البرنامج وقم بإنشاء ورقة عمل عن طريق تحديد إعدادات التطبيق. ثم استخدم عينة غير ملوثة لضبط أنبوب مضاعف الصورة ، أو الفولتية PMT ، لمنطقة التشتت الأمامية ، أو FSC ، ومنطقة التشتت الجانبي ، أو SSC ، وجميع معلمات التألق.
احفظ إعدادات التطبيق بالنقر بزر الماوس الأيمن فوق إعدادات مقياس الخلايا للتجربة وتحديد إعدادات التطبيق. لإضافة عناصر التحكم في التعويض تلقائيا، انقر على زر التجربة وحدد قائمة إعداد التعويض، قبل تحديد إنشاء عناصر التحكم في التعويض. تسجيل البيانات لجميع حبات التحكم في التعويض.
بمجرد الانتهاء من ذلك ، انقر فوق التجربة وحدد إعداد التعويض ، واحسب التعويض تلقائيا ، قبل تسجيل البيانات لعناصر التحكم الملطخة بخلية واحدة. استخدم CD45 RAA APC لتعديل قيمة التعويض من R7-18 إلى 15٪ APC ، واستخدم CD19 BB700 لتعديل قيمة تعويض APC H7 إلى 14٪ BB700 ، واستخدم CD8 R7-18 لتعديل قيمة تعويض APC H7 إلى 60٪ R7-18. بعد تسجيل البيانات الخاصة بخرز CST ، قم بإنشاء ورقة عمل عالمية لقالب القيمة المستهدفة للخرز اللامع CST ، بمجرد الانتهاء من ذلك ، قم بتشغيل العينات على صفيف مقياس التدفق الخلوي وجمع 25،000 خلية لمفاوية.
إنشاء ورقة عمل عمومية لقالب التحليل للعينات وحفظ القالب التجريبي على مقياس الخلايا A.Export القالب التجريبي باستخدام القرص المضغوط. لنقل القالب التجريبي إلى مقياس الخلايا B في مختبر الاختبار ، قم بإجراء فحص أداء باستخدام حبات CST للتحقق من أن مقياس الخلايا B يعمل بشكل جيد. قم باستيراد القالب التجريبي من مقياس الخلايا A وإنشاء تجربة لمقياس الخلايا B باستخدام القالب.
باستخدام نفس المجموعة من حبات CST ، اضبط جهد معلمة الفلورسنت لكل قناة مضان لتتناسب مع أداة MFI السابقة. إذا لزم الأمر ، اضبط جهد FSC باستخدام العينة غير الملوثة. انقر بزر الماوس الأيمن على إعدادات مقياس الخلايا التجريبي وحدد إعدادات التطبيق لحفظ إعدادات التطبيق.
بعد ذلك ، قم بتعديل قيمة التعويض من R7-18 إلى 15٪ APC باستخدام CD45 RA APC. استخدم CD19 BB700 لتعديل قيمة تعويض APC H7 إلى 24٪ BB700. واستخدم CD8 R7-18 لتعديل قيمة تعويض APC H7 إلى 60٪ R7-18.
بعد تعديل قيمة التعويض ، قم بتشغيل العينات على مقياس التدفق الخلوي B وجمع 25،000 خلية لمفاوية. في ورقة عمل عالمية لقالب القيمة الهدف لإعداد مقياس الخلايا وتتبعه ، أو حبات CST الساطعة ، تم الحصول على مخططات الرسم البياني ل 10 قنوات مضان ، وتم عرض القيمة المستهدفة لكل معلمة من خلال إظهار الوسيط داخل بوابات الرسم البياني. أظهرت المخططات النقطية للعينة التي تم الحصول عليها باستخدام مقياس الخلايا A و B بعد توحيد الأجهزة ، اتساق البيانات بين الأدوات المختلفة باستخدام قالب التحليل التلقائي.
لم يلاحظ أي فرق كبير عند مقارنة النتائج من ست عينات عبر نموذجين مختلفين للأداة. اكتسبت نتائج 15 مجموعة فرعية لمفاوية تم الحصول عليها من أدوات مختلفة باستخدام الطريقة الموحدة بيانات قابلة للمقارنة للغاية. يعد نفس اسم التكوين وإنشاء القالب وجعل قيم التكنولوجيا البيئية لخرز الأمان في أدوات مختلفة خطوات حاسمة في هذا البروتوكول.
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية
النظرة العامة
تقدم هذه الدراسة طريقة قياسية لنقل الإعدادات التجريبية وقوالب التحليل بين مقاييس التدفق الخلوي في مختبرات مختلفة. يهدف هذا النهج إلى تعزيز اكتشاف الخلايا الليمفاوية لدى الأطفال الذين تم تطعيمهم ضد التهاب الدماغ الياباني، مما يسهل مشاريع البحث متعدد المراكز.
مكونات الدراسة الرئيسية
مجال العلوم
- قياس التدفق الخلوي
- علم المناعة
- طرق المعايرة
الخلفية
- يعد قياس التدفق الخلوي أداة حاسمة لتحليل مجموعات الخلايا الليمفاوية.
- المعايرة ضرورية لضمان اتساق النتائج عبر المختبرات.
- تطعيم التهاب الدماغ الياباني مهم للصحة العامة.
- التعاون بين المختبرات يمكن أن يعزز نتائج البحث.
هدف الدراسة
- لتطوير طريقة لمعايرة تجارب قياس التدفق الخلوي.
- لتسهيل نقل الإعدادات التجريبية بين المختبرات.
- لتحسين موثوقية اكتشاف الخلايا الليمفاوية لدى الأطفال المطعمين.
الطرق المستخدمة
- إنشاء تكوينات جديدة في برامج مقياس التدفق الخلوي.
- نقل التكوينات الأساسية بين المختبرات.
- تحرير المعلمات للتحليل المعياري.
- أتمتة عمليات تحليل البيانات.
النتائج الرئيسية
- تتيح الطريقة الاعتراف المتبادل بنتائج المختبرات.
- تحد من استهلاك الوقت وتبسط التنفيذ.
- يقلل التحليل الآلي الحاجة إلى معالجة البيانات على نطاق واسع.
- تعزز التكوينات المعيارية الاتساق عبر المراكز.
الاستنتاجات
- تحسن الطريقة المعيارية التعاون بين المختبرات.
- تضمن نتائج موثوقة للأبحاث التي تتضمن الخلايا الليمفاوية.
- يمكن تطبيق هذا النهج على دراسات متعددة المراكز مختلفة.
الأسئلة الشائعة
Executive Industry Relevance
Multi-center immunology studies require robust standardization to ensure data comparability and reproducibility across diverse flow cytometry platforms. This method enables the transfer of experimental settings and analysis templates between different instruments and laboratories, directly supporting portfolio-wide immune monitoring and cross-site data integration. Standardized workflows reduce biological and operational variability, strengthening predictive confidence in immune function assessments for vaccine research and beyond.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables consistent immune cell phenotyping across sites for target validation studies.
- Reduces mechanistic ambiguity by harmonizing instrument setup and gating strategies.
- Supports predictive confidence in immunological endpoints for early-stage programs.
Screening & Assay Development
- Facilitates preparation of validated flow cytometry assays for multi-site screening campaigns.
- Improves assay reproducibility and quantitative comparability through standardized templates.
- Enables reliable evaluation of immune responses in diverse cohorts and settings.
Translational & Preclinical Research
- Aligns immune monitoring protocols for translational biomarker studies in vaccine development.
- Ensures continuity of immune function data from discovery through preclinical validation.
- Supports risk-adjusted advancement decisions by minimizing inter-lab variability.
Pipeline & Workflow Integration
This standardization method integrates into the discovery-to-preclinical continuum, enabling seamless immune monitoring from early research through multi-center validation.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing and pathway clarification by ensuring consistent lymphocyte detection.
- Screening: Delivers assay readiness and reproducibility for immune cell subset analysis across platforms.
- Analytics: Provides quantitative fluorescence intensity and compensation outputs for robust data comparison.
- Translational Research: Maintains biomarker alignment and data integrity in multi-site vaccine studies.
- Enterprise Reuse: Establishes a reusable standardization protocol for future multi-center immunology projects.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in immune monitoring.
- Operational Value: Streamlines assay setup, minimizes manual adjustments, and enhances reproducibility.
- Strategic Value: Enables reliable go/no-go decisions and efficient resource allocation in multi-site studies.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization and cross-study data integration for vaccine and immunology programs.
Implementation Considerations
- Requires expertise in flow cytometry configuration and compensation adjustment.
- Needs compatible software and access to standardized fluorescence beads for calibration.
- Demands cross-team agreement on template design and gating strategies.
- Adaptation may be needed for different instrument models or sample types.
- Dependent on consistent reagent lots and instrument maintenance for optimal comparability.
Biopharma FAQs
Chapters in this video
0:05
Introduction
0:57
Create Identical Configuration with the Same Name on Different Cytometers
1:45
Standardizing Experiment Using Cytometer A in the Transferring Lab
3:48
Transferring the Experimental Template to Cytometer B in the Test Method Lab
5:02
Results: A Rapid and Feasible Standardization Method to Transfer Parameters Across Different Flow Cytometers
5:50
Conclusion
