نموذج الفئران لزراعة القلب غير المتجانسة خارج الموقع النورمومري

لقد طورنا نموذجا لتقليل المضاعفات المرتبطة بالتروية الطبيعية الحرارة خارج الموقع وزيادة وقت الحفظ الآمن لقلوب المتبرعين. بالمقارنة مع النماذج الحيوانية البديلة ، فإن هذا النموذج بسيط وفعال من حيث التكلفة ، ويمكن تنفيذه بواسطة مجرب واحد. يمكن أن يكون هذا النموذج مفيدا في اختبار الفعالية طويلة المدى للتدخلات الدوائية والجينية على قلوب المتبرعين بعد عمليات الزرع.

يتطلب الإجراء الجراحي مهارة جراحية مجهرية. العامل الرئيسي في تحقيق النجاح في هذا النموذج هو الممارسة والتركيز على الخطوات الحاسمة الموضحة في المخطوطة. للبدء ، قم بتجميع جهاز Langendorff ، بما في ذلك خطوط الأكسجين والمضخة والتروية.

املأ دائرة التروية ب 20 مل من المحلول الملحي ، وقم بتدويرها حتى يتم تحضيرها بالدم الذاتي. على الفئران المانحة المخدرة ، قم بعمل شق في منتصف الخط بطول 7 سم ، ثم شقوق ثنائية بقياس 3 سم من عملية الخنجري إلى منتصف الترقوة. إزالة القشرة من المنطقة الصدرية.

حقن 1،000 وحدة دولية من الهيبارين المذاب في 0.3 ملليلتر من محلول ملحي متساوي التوتر من خلال الوريد الأجوف السفلي باستخدام حقنة 1 ملليلتر أوقف أي نزيف من ثقب الإبرة عن طريق ضغطه برفق باستخدام قطعة قطن. أدخل قسطرة فخذية 5 فرنسية في الشريان الأورطي البطني. تأكد من وصول طرف القسطرة إلى قوس الأبهر ، وتأكد من موقع القسطرة من خلال تقييم الطول التقريبي للجزء المدخل من القسطرة.

اجمع حوالي 10 ملليلتر من الدم عن طريق القسطرة التي يتم إدخالها في الشريان الأورطي البطني. قم بتوصيل خط نضح محلول شلل القلب بالقسطرة البطنية ، وابدأ إدارة محلول شلل القلب بمضخة المحقنة بمعدل 800 ملليلتر في الساعة. افتح التجويف الصدري من الحجاب الحاجز، واقطع الوريد الأجوف السفلي بالقرب من الحجاب الحاجز لمنع انتفاخ البطين.

قطع الأضلاع بشكل ثنائي على طول العمود الفقري الصدري حتى مدخل الصدر. تعكس جدار الصدر البطني المتحرك بشكل متفوق مع ملقط البعوض. بعد إعطاء كل محلول شلل القلب ، قم بعزل قوس الأبهر عن الأنسجة المحيطة ، وقم بتشريحه بعناية أسفل الشريان تحت الترقوة الأيسر.

قم بعبور الشرايين السباتية العضدية الرأسية واليسرى في موضع بعيد ، تاركا جذوع أطول من قوس الأبهر لسهولة التعامل معها أثناء قنية الشريان الأورطي. ثم قم بعبور الشريان الرئوي الرئيسي في أقرب وقت ممكن من التشعب. اربط بعناية الوريد الأجوف العلوي والوريد الأجوف السفلي مع 5-0 خيوط حريرية ، مما يمنع انسداد الأذين الأيمن والجيوب التاجية.

قم بتغطية الحواف اليسرى للصدر بشاش مبلل ، ضع القلب عليه ، واسحب برفق الوريد الأجوف العلوي وأربطة الوريد الأجوف السفلي لكشف الهيلوم. اربط الأوردة الرئوية والأزيجوس مع خياطة حرير 5-0. قطع الأنسجة الظهرية إلى الرباط واستخراج القلب.

وزن القلب بعد فحصه بحثا عن أي إصابة. استبدل الدائرة المحضرة بالمحلول الملحي بفتيلة الدم ، وابدأ التروية بمعدل تدفق يتراوح من 2 إلى 3 ملليلتر في الدقيقة ، مما يسمح للبيرفوسات بالتسرب من موقع القنية لإزالة أي فقاعات هواء. بعد وضع الرباط الدائم ، تأكد من أن القلب يبدأ في الانقباض في غضون ثوان قليلة ، ويصل إلى إيقاع طبيعي في 60 ثانية.

ويشير متوسط ضغط التروية الذي يتراوح بين 55 و 65 ملليمترا من الزئبق مع معدل تدفق الشريان التاجي من ثلاثة إلى أربعة ملليلتر عند 37 درجة مئوية إلى التروية الكافية. اجمع 0.15 ملليلتر من الدم من الخزان ، وتحقق من تحليل غازات الدم في بداية التروية وكل 20 دقيقة بعد ذلك. بعد 120 دقيقة من التروية ، يتم تطبيق ثلاثة ملليلتر من Custodiol من خلال مضخة حقنة بمعدل 250 ملليلتر في الساعة لإيقاف القلب.

إجراء بضع البطن منتصف الخط وإدراج ضامد لتوسيع تجويف البطن. قم بتعبئة أعضاء البطن إلى الجانب الأيسر من المتلقي باستخدام مسحات القطن لإفساح المجال للإجراء. باستخدام المجهر الجراحي مع تكبير 10x ، قم بتعبئة الاثني عشر والصائم القريب عن طريق التشريح الحاد باستخدام مسحات القطن.

لفضح الشريان الأورطي البطني والوريد الأجوف السفلي. ضع 5-0 أربطة حريرية على الفروع المساريقية لكل من الجانبين الجمجفي والذيلي للأوعية الرئيسية. ارفع الأوعية البطنية وقم بتخثر أو ربط الفروع القطنية بخيوط من الحرير 5-0.

تذكر أن تجنيب شرايين وأوردة الخصية ، ولا تشبكها. استخدم الأربطة لرفع الأوعية ووضع المشابك الدقيقة على الفروع المساريقية والجوانب الذيلية والجمجمة للأوعية الرئيسية لوقف تدفق الدم في موقع المفاغرة. ثقب الشريان الأورطي باستخدام إبرة قياس 27 ، وإطالة الشق بمقص دقيق بطول يساوي أو أكبر قليلا من فتحة الشريان الأورطي الصاعد للمتبرع.

قم بعمل شق طولي للوريد الأجوف السفلي بنفس طريقة بضع الأبهر ، ولكن اجعله أقرب بثلاثة ملليمترات إلى الجانب الذيلي مقارنة بشق الشريان الأورطي. بدء المفاغرة ، ضع قلب المتبرع على الجانب الأيمن من بطن المتلقي ، وقم بتوصيل الشريان الأورطي الصاعد للمتبرع بالشريان الأورطي البطني للمتلقي بغرزة واحدة بسيطة متقطعة في الزاوية القحفية للشق الطولي. حرك القلب إلى الجانب الأيسر من بطن المتلقي ، وقم بإجراء مفاغرة الشريان الأورطي الصاعد للمتبرع مع الشريان الأورطي البطني للمتلقي ، باستخدام خياطة البولي بروبلين 9-0.

ثبت الشريان الرئوي المتبرع به على الوريد الأجوف السفلي مع اثنين من الغرز المتقطعة في الزوايا الذيلية والجمجمية للشق الطولي. بعد الانتهاء من مفاغرة ، قم بإزالة المشبك الذيلي والمشبك القحفي. تأمين الإرقاء الكافي ، واستبدال أعضاء البطن بطريقة تشبه التعرج ، وإغلاق طبقات شق البطن باستخدام خيوط البولي بروبلين المستمرة 5-0.

يوضح هذا الشكل المعلمات المستخدمة لتقييم صلاحية القلب أثناء التروية خارج الموقع ، مثل اللاكتات والبوتاسيوم ومتوسط ضغط الأبهر. هنا ، أدى استخدام الحفظ خارج الموقع الطبيعي الحرارة إلى تقليل إجمالي الوقت الإقفاري لست حالات ناجحة إلى 46.2 زائد ناقص 4.7 دقيقة ، في حين كان إجمالي وقت الخروج من الجسم 166.2 زائد ناقص 4.7 دقيقة. كان استخراج القلب من المتبرع والتحضير للتروية خارج الموقع والزرع غير المتجانس المطلوب 5.8 زائد ناقص 1.3 دقيقة.

كان معدل النجاح الإجمالي للجراحة 70٪ وكان متوسط وقت المفاغرة للحالات الست الناجحة 38.4 زائد ناقص 3.4 دقيقة. يتم عرض الأداء الفيزيولوجي الكهربية لقلب المتبرع قبل الشراء وبعد الزرع في هذا الشكل. في جميع التجارب ، انخفض معدل ضربات القلب بشكل ملحوظ بعد الزرع مباشرة ، لكنه تعافى في النهاية بمرور الوقت.

يظهر هنا المظهر العياني والمجهري لقلب المتبرع قبل الحفظ الطبيعي للحرارة خارج الموقع ، وبعد الحفظ الطبيعي للحرارة خارج الموقع ، وبعد ساعتين من الزرع غير المتجانس. عند القيام بهذا الإجراء ، من المهم أخذ ما يكفي من الدم للتروية ، وقطع الشريان الأورطي بعناية دون الإضرار بالجزء الصاعد ، ومراقبة المعلمات الفسيولوجية عن كثب أثناء الحفظ. باتباع هذا الإجراء ، يمكننا اختبار فعالية حلول الحفظ الجديدة والاستجابة المناعية للمتلقي لطرق الحفظ التي تم إدخالها حديثا.

من خلال الجمع بين التروية خارج الموقع والزرع غير المتجانس ، نحن قادرون على التحقيق في التقنيات الجديدة من خلال إطالة وقت الحفظ ، ومراقبة التأثير طويل المدى على الاستجابة المناعية للمتلقي.