Name: قياس قطر وعاء الشبكية من صور تصوير الأوعية الفلورية للفأر (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-19T13:20:00.000+00:00
Duration: 4 min 4 s
Description: تعلم قياس قطر أوعية الشبكية في الفئران المخدرة باستخدام برنامج MATLAB مخصص لتحليل صور تصوير الأوعية الفلورية. هذه الطريقة موثوقة ومفيدة لدراسة أمراض الشبكية وتتبع فعالية العلاجات.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

تم دعم هذا العمل من خلال منحة زمالة ما بعد الدكتوراه من صندوق البحوث الأيسلندي (217796-052) (AGL) وصندوق Helga Jónsdóttir و Sigurlidi Kristjánsson التذكاري (A.G.L و T.E.). يشكر المؤلفون البروفيسور إيريكور شتاينغريمسون على توفير الفئران.

تمت الموافقة على جميع التجارب من قبل هيئة الأغذية والطب البيطري الأيسلندية (ترخيص MAST رقم 2108002). أجريت جميع الدراسات على وفقا لبيان جمعية أبحاث الرؤية وطب العيون (ARVO) لاستخدام في أبحاث العيون والرؤية. تم استخدام ذكور وإناث C57BL / 6J و Mitfmi-vga9 / + الفئران في هذه الدراسة. تم استخدام الفئران C57BL / 6J (n = 7) كعنصر تحكم. تم الحصول على الأنواع البرية تجاريا (انظر جدول المواد) ، ولكن تم تربية جميع الفئران الطافرة (ن = 7) وتربيتها في مرافق في المركز الطبي الحيوي بجامعة أيسلندا. في هذه الدراسة ، تم استخدام عمرها 3 أشهر. ومع ذلك ، ينطبق البروتوكول حتى على 1 شهر الأكبر سنا.
1. التحضير التجريبي
<ol><li>تحضير خليط التخدير. خذ أمبولة واحدة من محلول مخزون الكيتامين سعة 2 مل (25 مجم / مل) ومحلول مخزون زيلازين 250 ميكرولتر (2٪) لتحضير محلول عملي من خليط الكيتامين / الزيلازين (25 مجم / مل من الكيتامين و 20 مجم / مل من الزيلازين) (انظر جدول المواد).</li>
	<li>تخدير الفأر بحقن داخل الصفاق لخليط الكيتامين / الزيلازين ، بحجم سائل يبلغ أربعة أضعاف وزن جسم الفأر ؛ على سبيل المثال ، يحتاج وزن الفأر 20 جم إلى 35 ميكرولتر من محلول عمل زيلازين / كيتامين للحصول على جرعة عملية من زيلازين (4 مغ / كغ من وزن الجسم) وخليط الكيتامين (40 مغ / كغ من وزن الجسم).</li>
	<li>قم بتوسيع حدقة العين بقطرة عين 10٪ فينيليفرين هيدروكلوريد و 1٪ تروبيكاميد مباشرة بعد التخدير.</li>
	<li>انتظر حتى يتم تخدير بالكامل ويتم توسيع تلاميذه على نطاق واسع.</li>
	<li>تحضير محلول ملح الفلوريسين. أضف 9 مل من محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS ؛ 1x) إلى 1 مل من محلول الفلوريسئين (تركيز مخزون 100 مجم / مل) (انظر جدول المواد). محلول عمل التركيز النهائي هو 10 مجم / مل.</li>
</ol>2. التصوير في الجسم الحي للأوعية الدموية في شبكية العين باستخدام نظام تصوير الشبكية للقوارض
<ol><li>تطبيق محلول عمل الفلوريسئين داخل الصفاق (5 ميكرولتر/غرام من وزن الجسم) للحيوان المخدر.</li>
	<li>ضع قطرة من 2٪ هلام ميثيل سلولوز على سطح القرنية ثم ضع في مرحلة تحديد المواقع في نظام التصوير (انظر جدول المواد).</li>
	<li>ضع عدسة كاميرا تصوير قاع الشبكية للمس قرنية الفأر مباشرة وبرفق. لوضع رأس العصب البصري في منتصف المجال البصري ، اضبط المحاذاة قليلا.</li>
	<li>قم بالتبديل إلى قناة الفلورسنت الخضراء على كاميرا قاع العين.</li>
	<li>ركز على أوعية الشبكية لالتقاط الصور.</li>
	<li>للعثور على النقطة الزمنية المثالية ، التقط عددا من الصور في 1 و 3 و 5 و 10 دقائق (ولكن ليس أكثر من 10 دقائق) بعد حقن الفلوريسين. ملاحظة: يجب إكمال معالجة FA في غضون 10 دقائق ، حيث قد يصبح الفلوريسئين منتشرا جدا بعد ذلك الوقت ، وتصبح الأوعية غير قابلة للكشف.</li>
	<li>عند الانتهاء من التصوير ، بينما لا يزال الفأر مخدرا ، قم بالقتل الرحيم عن طريق خلع عنق الرحم.</li>
</ol>3. تحليل قطر الوعاء الشبكي
<ol><li>افتح برنامج MATLAB (انظر جدول المواد).</li>
	<li>قم بتنزيل وحفظ رمز "fundusDiameter.m" (انظر ملف الترميز التكميلي 1 وملف الترميز التكميلي 2 وملف الترميز التكميلي 3).</li>
	<li>افتح المجلد حيث تم حفظ الرمز. اسحب الرمز وأفلته فوق المجلد الحالي في MATLAB.</li>
	<li>قم بسحب وإسقاط صورة FFA (صورة تصوير الأوعية الفلورية قاع العين) أو الصور التي يرغب المرء في تحليلها عبر المجلد الحالي في MATLAB.</li>
	<li>اضغط على الأداة "تشغيل " من شريط أدوات MATLAB.</li>
	<li>ستظهر نافذة منبثقة. اكتب اسم ملف الصورة المهمة في المربع أدخل اسم الملف واضغط على موافق. ملاحظة: لا تقم بتغيير أو تعديل بقية المعلمات.</li>
	<li>حدد مركز القرص البصري، ثم حدد حافة القرص البصري. يحسب البرنامج الآن شدة وحدات البكسل في صور قاع الماوس في دائرة نصف قطرها ضعف نصف قطر القرص البصري ، في اتجاه عقارب الساعة من مركز القرص البصري (الشكل 1).</li>
	<li>بعد ذلك ، تأكد من أن البرنامج يرسم متوسط قطر الوعاء (بالبكسل) لكل وعاء في قاع العين كدالة لرقم الوعاء (الشكل 2).</li>
	<li>بعد ذلك ، تأكد من أن البرنامج ينقل بيانات القياس لكل سفينة إلى مستند Excel ، حيث يتم حساب المتوسط والوسيط والانحراف المعياري لهذه القيم (الجدول 1 والجدول 2).</li>
	<li>انقل القيم من جدول النتائج إلى برنامج جدول بيانات عن طريق تحديد جميع القيم في الجدول. الصق القيم في جدول البيانات.</li>
	<li>ارسم الرسوم البيانية وقم بإجراء التحليل الإحصائي باستخدام البيانات التي تم لصقها في برنامج جدول بيانات من اختيارك (انظر جدول المواد).</li>
</ol>

<ol><li>Cheung, C. Y., Ikram, M. K., Chen, C., Wong, T. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+retina+to+study+dementia+and+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Imaging retina to study dementia and stroke.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 57, 89-107 (2017).</li>
<li>Selvam, S., Kumar, T., Fruttiger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+vasculature+development+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Retinal vasculature development in health and disease.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 63, 1-19 (2018).</li>
<li>Ma, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+retinal+vessel+attenuation+in+eyes+with+retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of retinal vessel attenuation in eyes with retinitis pigmentosa.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 53 (7), 4306-4314 (2012).</li>
<li>Eysteinsson, T., Hardarson, S. H., Bragason, D., Stefansson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+vessel+oxygen+saturation+and+vessel+diameter+in+retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">Retinal vessel oxygen saturation and vessel diameter in retinitis pigmentosa.</a> Acta Ophthalmologica. 92 (5), 449-453 (2014).</li>
<li>Al-Latayfeh, M., Silva, P. S., Sun, J. K., Aiello, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiangiogenic+therapy+for+ischemic+retinopathies%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Perspectives+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">Antiangiogenic therapy for ischemic retinopathies.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 2 (6), 006411(2012).</li>
<li>Wang, S., Villegas-Perez, M. P., Vidal-Sanz, M., Lund, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+optic+axon+dystrophy+and+vacuslar+changes+in+rd+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Progressive optic axon dystrophy and vacuslar changes in rd mice.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 41 (2), 537-545 (2000).</li>
<li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoreceptor+cells+influence+retinal+vascular+degeneration+in+mouse+models+of+retinal+degeneration+and+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Photoreceptor cells influence retinal vascular degeneration in mouse models of retinal degeneration and diabetes.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 57 (10), 4272-4281 (2016).</li>
<li>Steingrimsson, E., Copeland, N. G., Jenkins, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melanocytes+and+the+microphthalmia+transcription+factor+network%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Genetics%22%5BJournal%5D)">Melanocytes and the microphthalmia transcription factor network.</a> Annual Review of Genetics. 38, 365-411 (2004).</li>
<li>Arnheiter, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+discovery+of+the+microphthalmia+locus+and+its+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Mitf.+Pigment+Cell+%26+Melanoma+Research%22%5BJournal%5D)">The discovery of the microphthalmia locus and its gene.</a> Mitf. Pigment Cell & Melanoma Research. 23 (6), 729-735 (2010).</li>
<li>Garcia-Llorca, A., Aspelund, S. G., Ogmundsdottir, M. H., Steingrimsson, E., Eysteinsson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microphthalmia-associated+transcription+factor+%28Mitf%29+gene+and+its+role+in+regulating+eye+function%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">The microphthalmia-associated transcription factor (Mitf) gene and its role in regulating eye function.</a> Scientific Reports. 9 (1), 15386(2019).</li>
<li>Bharti, K., Liu, W., Csermely, T., Bertuzzi, S., Arnheiter, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+promoter+use+in+eye+development%3A+the+complex+role+and+regulation+of+the+transcription+factor+MITF%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Alternative promoter use in eye development: the complex role and regulation of the transcription factor MITF.</a> Development. 135 (6), 1169-1178 (2008).</li>
<li>Lu, S. Y., Li, M., Lin, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitf+induction+by+RANKL+is+critical+for+osteoclastogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+of+the+Cell%22%5BJournal%5D)">Mitf induction by RANKL is critical for osteoclastogenesis.</a> Molecular Biology of the Cell. 21 (10), 1763-1771 (2010).</li>
<li>Pillaiyar, T., Manickam, M., Jung, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+development+of+signaling+pathways+inhibitors+of+melanogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Signalling%22%5BJournal%5D)">Recent development of signaling pathways inhibitors of melanogenesis.</a> Cellular Signalling. 40, 99-115 (2017).</li>
<li>Danielsson, S. B., Garcia-Llorca, A., Reynisson, H., Eysteinsson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+microphthalmia-associated+transcription+factor+%28Mitf%29+mutations+affect+the+structure+of+the+retinal+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">Mouse microphthalmia-associated transcription factor (Mitf) mutations affect the structure of the retinal vasculature.</a> Acta Ophthalmologica. 100 (8), 911-918 (2022).</li>
<li>Burns, S. A., Elsner, A. E., Gast, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+the+retinal+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Vision+Science%22%5BJournal%5D)">Imaging the retinal vasculature.</a> Annual Review of Vision Science. 7, 129-153 (2021).</li>
<li>Wei, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+vessel+diameter+quantification+and+vessel+tracing+for+OCT+angiography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biophotonics%22%5BJournal%5D)">Automated vessel diameter quantification and vessel tracing for OCT angiography.</a> Journal of Biophotonics. 13 (12), e202000248(2020).</li>
<li>Salas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compact+akinetic+swept+source+optical+coherence+tomography+angiography+at+1060+nm+supporting+a+wide+field+of+view+and+adaptive+optics+imaging+modes+of+the+posterior+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Compact akinetic swept source optical coherence tomography angiography at 1060 nm supporting a wide field of view and adaptive optics imaging modes of the posterior eye.</a> Biomedical Optics Express. 9 (4), 1871-1892 (2018).</li>
<li>Albanna, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+evaluation+of+neurovascular+coupling+in+the+murine+retina+by+dynamic+retinal+vessel+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Non-invasive evaluation of neurovascular coupling in the murine retina by dynamic retinal vessel analysis.</a> PLoS One. 13 (10), e0204689(2018).</li>
<li>Moult, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+anesthetic+protocols+for+functional+blood+flow+imaging+in+the+rat+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Optics%22%5BJournal%5D)">Evaluating anesthetic protocols for functional blood flow imaging in the rat eye.</a> Journal of Biomedical Optics. 22 (1), 16005(2017).</li>
</ol>

ويعلن أصحاب البلاغ أنه لا توجد مصالح متنافسة.

هذه المقالة هي الأولى التي تقدم طريقة لتحليل قطر الأوعية الدموية في شبكية العين والأوعية الدموية في شبكية العين من صور FA للفأر. نظرا لأنه تم استخدام تصوير قاع العين فقط لالتقاط صور للأوعية الدموية في شبكية العين ، فإن الطريقة لها العديد من العيوب ، أحدها أنه لا يمكن للمرء إلا أن يستنتج التغيرات في الطبقات السطحية من الأوعية الدموية الشبكية في الفئران التي تم فحصها في هذه الدراسة. أي اختلافات في الطبقات العميقة غير معروفة حتى الآن. 
تم تقديم طريقة فريدة لتحليل صور التصوير المقطعي للتماسك البصر...

ربما يكون السرير الوعائي الأكثر بحثا في الجسم هو الأوعية الدموية في شبكية العين. مع التطور التقني المتطور باستمرار ، يتم تصوير الأوعية الدموية في شبكية العين بسهولة في المرضى الأحياء واستخدامها في العديد من مجالات البحث1. بالإضافة إلى ذلك ، أثبتت الأوعية الدموية في شبكية الفأر أثناء التطور أنها نظام نموذجي فعال للغاية للبحث في البيولوجيا الأساسية لنمو الأوعية الدموية. الغرض الأساسي من الأوعية الدموية في شبكية العين هو تزويد الجزء الداخلي من شبكية العين بدعم التمثيل الغذائي من خلال شبكة شعرية صفائحية تتخلل الأنسجة العصبية2. ومع ذلك ، فإن حالة شبكية العين ، وبالتالي أي خلل وظيفي أو ضمور ، يمكن أن يكون لها آثار كبيرة على كل من تشعب الأوعية الدموية في شبكية العين وقطر الشرايين ، مما يدل على تفاعل بين خلايا الشبكية والأوعية الدموية 3,4. من المعروف أن العديد من أمراض العين ، بما في ذلك اعتلال الشبكية الخداجي (ROP) ، واعتلال الشبكية السكري (DR) ، والتنكس البقعي المرتبط بالعمر (AMD) ، والزرق ، والأوعية الدموية الجديدة للقرنية ، يمكن أن تؤدي إلى تكوين الأوعية الدموية العينية غير الطبيعية5. في حالة الأوعية الدموية في شبكية العين ، غالبا ما تظهر نماذج الفئران من تنكس الشبكية تغييرات مماثلة لتلك التي تظهر في أمراض الأوعية الدموية البشرية 6,7. تتضمن عائلة Myc supergene لعوامل النسخ الحلزونية الحلزونية الأساسية عامل النسخ المرتبط ب microphthalmia (Mitf) المعبر عنه في ظهارة صبغة الشبكية (RPE) 8،9،10.
ثبت أن العديد من الأعضاء ، بما في ذلك العين والأذن والجهاز المناعي والجهاز العصبي المركزي والكلى والعظام والجلد ، يتم تنظيمها بواسطة Mitf9،11،12،13. لقد اكتشفنا أن بنية ووظيفة RPE تتأثر في الفئران التي تحمل طفرات مختلفة في جين Mitf ، مما يؤدي إلى بعض حالات تنكس الشبكية ، وفي النهاية فقدان البصر10. في الآونة الأخيرة ، تبين أن عدد الأوعية وقطر السفينة يختلف اختلافا كبيرا بين متحولة Mitf والفئران البرية14. يمكن للباحثين والأطباء الآن تحديد كمية الأوعية الدموية في الشبكية بدقة في الجسم الحي بسبب تطورات تصوير الشبكية. منذ أواخر القرن الثامن عشر ، استفاد الباحثون والأطباء من فائدة تصور الأوعية الدموية في شبكية العين ، وأظهر تصوير الأوعية بالفلوريسئين (FA) كلا من تدفق الدم في شبكية العين وتدهور حاجز الدموالشبكية 15.
توضح هذه المقالة كيفية تحليل قطر وعاء الشبكية من صور FA للماوس باستخدام رمز مكتوب خصيصا في برنامج MATLAB.

<table><tbody><tr><td>1٪ تروبيكاميد (ميدرياسيل)</td> <td>مختبرات</td><td></td> Alcon Inc <td>عامل Mydriatic</td></tr><tr><td>2٪ Methocel</td><td>OmniVision Eye Care</td><td></td><td>Hydroxypropryl methylcellulose</td></tr><tr><td>gel C57BL / 6J</td><td>Jackson Laboratory</td><td>000664</td><td>Wild نوع الفئران</td></tr><tr><td>Excel لبرنامج Microsoft 365</td><td>Microsoft Inc</td><td></td> حزمة <td>البرامج</td></tr><tr><td>ملح الصوديوم</td> <td>الفلورسينسيجما ألدريتش</td><td>28803-100G</td><td>تصوير الأوعية الفلورية</td></tr><tr><td>Matlab 8.0</td><td>The MathWorks، Inc.</td><td></td><td>حزمة البرمجيات</td></tr><tr><td>ميكرون الرابع القوارض قاع العين الكاميرا</td><td>فينيكس ميكرون</td><td>40-2200</td><td>قاع العين</td></tr> التصوير <tr><td>الفوتوغرافي فينيليفرين 10٪ ث / v</td><td>Bausch & عامل لومب</td><td></td><td>ميدرياتيك</td></tr><tr><td>محلول ملحي مخزن بالفوسفات - 100 قرص</td><td>جيبكو</td><td>18912-014</td><td>التخفيف</td></tr><tr><td>سيجمابلوت 13</td><td>حزمة برامج</td><td>البرمجيات</td><td></td> العلمية من</tr><tr><td>جاندل S-Ketamine ، 25 مجم / مل</td> شركة <td>Pfizer Inc.</td><td>PAA104470</td><td>التخدير IP</td></tr></tbody></table>

قياس قطر وعاء الشبكية من صور تصوير الأوعية الفلورية للفأر

Measuring Retinal Vessel Diameter from Mouse Fluorescent Angiography Images

من المهم دراسة تطور الأوعية الدموية في شبكية العين في اعتلال الشبكية حيث يمكن أن يؤدي نمو الأوعية الدموية غير الطبيعي في النهاية إلى فقدان البصر. تظهر الطفرات في جين عامل النسخ المرتبط ب microphthalmia (Mitf) نقص التصبغ ، و microphthalmia ، وتنكس الشبكية ، وفي بعض الحالات ، العمى. يعد التصوير في الجسم الحي لشبكية العين بوسائل غير جراحية أمرا حيويا لأبحاث العين. ومع ذلك ، نظرا لصغر حجمه ، فإن تصوير قاع الفئران صعب وقد يتطلب أدوات متخصصة وصيانة وتدريبا. في هذه الدراسة ، قمنا بتطوير برنامج فريد يتيح تحليل قطر الأوعية الشبكية في الفئران باستخدام برنامج آلي مكتوب في MATLAB. تم الحصول على صور قاع العين باستخدام نظام كاميرا قاع العين التجاري بعد الحقن داخل الصفاق لمحلول ملح الفلوريسين. تم تغيير الصور لتحسين التباين ، وسمح برنامج MATLAB باستخراج متوسط قطر الأوعية الدموية تلقائيا على مسافة محددة مسبقا من القرص البصري. تم فحص التغيرات الوعائية في الفئران البرية والفئران مع طفرات مختلفة في جين Mitf من خلال تحليل قطر وعاء الشبكية. برنامج MATLAB المكتوب خصيصا والذي تم تطويره هنا عملي وسهل الاستخدام ، ويسمح للباحثين بتحليل متوسط القطر ومتوسط القطر الإجمالي ، بالإضافة إلى عدد الأوعية من الأوعية الدموية في شبكية الفأر ، بشكل مريح وموثوق.

يوضح الشكل 1 العملية المستخدمة لتحليل الأوعية الدموية في شبكية العين ، والتي يتم تطبيقها على صور FFA للفأر من جميع الفئران المختبرة. يستخدم نصف قطر أكبر مرتين من القرص البصري لقياس شدة وحدات البكسل في اتجاه دائري في اتجاه عقارب الساعة من مركز القرص البصري. يقوم بتمييز وحدات البكسل بنقطة بداية أو نهاية عندما يصادف نقاطا أعلى وأسفل عتبة محددة من قبل المستخدم ، على التوالي. يتكرر هذا 30 مرة ، في كل مرة يبتعد قليلا عن مركز القرص البصري. يتم التقاط صور FFA بعد 5 دقائق من حقن الفلوريسئين (<strong ...

الأوعية الدموية في شبكية الفأر مثيرة للاهتمام بشكل خاص في فهم آليات تشكيل نمط الأوعية الدموية. يقيس هذا البروتوكول تلقائيا قطر أوعية شبكية الفأر من صور قاع تصوير الأوعية الفلورية على مسافة ثابتة من القرص البصري.

It is important to study the development of retinal vasculature in retinopathies in which abnormal vessel growth can ultimately lead to vision loss. ...

يوفر هذا البروتوكول طريقة سهلة وموثوقة لقياس قطر الأوعية الشبكية تلقائيا في الفئران المخدرة بسبب الطفرات الجينية أو أمراض الشبكية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أن برنامج MATLAB المكتوب المخصص هنا عملي وسهل الاستخدام ومريح وموثوق. تحدث تغيرات قطر الأوعية الدموية في شبكية العين بشكل شائع في الأمراض التنكسية مثل RP وأمراض الأوعية الدموية الأخرى في شبكية العين.تقدم نماذج الفئران نظرة ثاقبة حول فعالية العلاج وتأثيرها على الأوعية الشبكية. قد تكون هذه الطريقة مفيدة كعلامات سريرية قابلة للقياس الكمي بعد تطور اضطرابات الأوعية الدموية في العين ، ولمراقبة العلاجات المحتملة. للبدء ، قم بإعداد حقنة بمحلول عمل الفلوريسئين وإدارتها داخل الصفاق للحيوان المخدر وتطبيق قطرة من 2٪ هلام السليلوز الميثيل على سطح القرنية.ثم ضع في مرحلة تحديد المواقع في نظام التصوير. ضع عدسة كاميرا تصوير قاع الشبكية للمس قرنية الفأر مباشرة وبرفق ، واضبط المحاذاة قليلا لوضع رأس العصب البصري في منتصف المجال البصري. ثم قم بالتبديل إلى القناة الفلورية الخضراء على كاميرا قاع العين وركز على أوعية الشبكية لالتقاط الصور.التقط الصور في النقاط الزمنية المطلوبة بعد حقن الفلوريسئين لتحديد النقطة الزمنية المثالية وتصور صورة قاع الفلورسين. أولا ، افتح برنامج MATLAB. ثم قم بتنزيل وحفظ قطر قاع العين.م كود. بعد ذلك ، افتح مجلد تحليل صورة قاع العين واسحب قطر قاع العين وأفلته. رمز m في مجلد التحليل.اسحب صورة FFA وأفلتها في مجلد تحليل الصور. في برنامج MATLAB ، انقر مرتين على ملف الكود لتنشيطه. حدد خيار التشغيل.ستظهر قائمة منبثقة لتحديد الصورة. حدد الصورة ، وستظهر قائمة منبثقة لمعلمات التحليل على الشاشة. اضبط معلمات التحليل في القائمة المنبثقة واضغط على موافق. حدد مركز القرص البصري ثم حدد حافة القرص البصري.سيتم إجراء التحليل في الخلفية وستظهر نتائج التحليل على الشاشة. يحتوي الجدول على قيم المتوسط والانحراف المعياري والخطأ المعياري لكل سفينة. احفظ الجدول.ثم احفظ الشكل مع متوسط سمك مجموعة. افتح مجلد التحليل مع الملفات المحفوظة ثم افتح الشكل المحفوظ. افتح الجدول المحفوظ وانسخ القيم والصقها في ملف Excel.بعد حقن الفلوريسئين ، تم الحصول على صور من ماوس تحكم وماوس MITFMI-VGA9 / متحولة ، حيث تم قياس أقصر مسافة من مركز القرص البصري إلى نقاط النهاية على الأوعية في اتجاه عقارب الساعة. تم الحصول على متوسط قطر الوعاء كدالة لعدد الوعاء للنوع البري والفئران الطافرة. أهم الأشياء التي يجب تذكرها هي وضع كاميرا قاع العين وتوسيط القرص البصري في صورة قاع العين.بالإضافة إلى هذه التقنية ، يمكن إجراء التقنيات الجزيئية من أجل استكشاف أدوية جديدة ، وتشخيص حالات الأوعية الدموية المختلفة في العين ، وفهم عمل الأوعية الدموية في شبكية العين بشكل أفضل.

measuring-retinal-vessel-diameter-from-mouse-fluorescent-angiography

Research

JoVE Journal

Medicine

الطب

يمكن استخدام الفحص المجهري داخل الحيوية في لتصور وقياس أقطار الأوعية الدموية في الشبكية ، وسرعات مجرى الدم ، وتدفق الدم الكلي في الشبكية.

قياسات المجهر بالفيديو داخل الحيوية لتدفق دم الشبكية في الفئران

يصف بروتوكول الفحص micropocket القرنية كما وضعت في الفئران.

والقرنية Micropocket الفحص: نموذج من الأوعية الدموية في العين ماوس

للتحقيق في نفاذية الحاجز الدموي والشبكي وسلامة الغشاء الداخلي المحدد في النماذج الحيوانية لأمراض الشبكية ، استخدمنا العديد من متغيرات الفيروس المرتبط بالغدة (AAV) كأدوات لتسمية الخلايا العصبية والشبكية الدبقية. ثم يتم استخدام التعبير الجيني للمراسل بوساطة الفيروس كمؤشر على نفاذية حاجز الشبكية.

باستخدام فيروس الغدة اسوشيتد كأداة لدراسة الحواجز الشبكية في مرض

أبرز أوجه التشابه مع الدماغ الشبكية وهكذا يمثل نافذة فريدة لدراسة المفرج وهيكل الخلايا العصبية في الدماغ غير إينفاسيفيلي. ويصف هذا البروتوكول وسيلة لدراسة استخدام تقنيات التصوير الشبكية الخرف. يحتمل أن يمكن أن تساعد هذه الطريقة في تشخيص وتقييم المخاطر للعته.

باستخدام تصوير الشبكية لدراسة الخرف

العديد من أمراض العين تهدد الرؤية ترتبط باختلال ميكروفيسيلس الشبكية. ولذلك، من المهم قياس الاستجابات arteriole الشبكية للتحقيق في الآليات الفيزيولوجية المرضية الكامنة. توضح هذه المقالة بروتوكول مفصل للماوس arteriole الشبكية العزلة والتحضير لتقييم آثار المواد فعال في الأوعية على قطر الأوعية الدموية.

خطوات الإعداد لقياس مفاعليه في الماوس الشرايين الشبكية السابقين فيفو

وهنا نحن نناقش بروتوكول أسلوب الذي سوف تسمح بإجراء تحليل سهلة tg(fli:EGFP) الكبار الزرد المفرج الشبكية كقراءة سريعة في الإعدادات لأمراض الأوعية الدموية الطويلة الأجل المرتبطة بالتغييرات الهيكلية ونيوانجيوجينيسيس.

دراسة "مرض السكر من خلال عيون" من الأسماك: ميكروديسيكتيون، والتصور، وتحليل tg(fli:EGFP) الكبار "الزرد الشبكية المفرج"

التصوير في الجسم الحي هو أداة قوية لدراسة علم الأحياء في الصحة والمرض. يصف هذا البروتوكول التصوير عبر الحدقتين لشبكية الفأر باستخدام مجهر قياسي ثنائي الفوتون. كما أنه يوضح اختلافا في طرق التصوير الحي لتسمية مجموعات خلوية متعددة من شبكية العين.

تصوير الفوتون عبر الحدقة في الجسم الحي لشبكية العين الفأرية

يصف هذا البروتوكول طريقة مفصلة لإعداد وتلطيخ التألق المناعي للحوامل المسطحة لشبكية العين لدى الفئران وتحليلها. يتم وصف استخدام تصوير الأوعية الدموية قاع العين بالفلوريسين (FFA) لجراء الفئران ومعالجة الصور بالتفصيل أيضا.

مراقبة النمو الديناميكي لأوعية الشبكية في نموذج فأر اعتلال الشبكية الناجم عن الأكسجين

تصف هذه المقالة فحص بقع اللكتين الراسخ والقابل للتكرار لمستحضرات الشبكية الكاملة والبروتوكولات المطلوبة للقياس الكمي لمعلمات الأوعية الدموية التي يتم تغييرها بشكل متكرر في اعتلال الشبكية التكاثري وغير التكاثري.

القياس الكمي للمعلمات الوعائية في شبكية العين الكاملة للفئران ذات اعتلال الشبكية غير التكاثري والتكاثري

هنا ، نقدم ثلاثة بروتوكولات لتحليل البيانات لتصوير الأوعية بالفلوريسئين (FA) والتصوير المقطعي للتماسك البصري (OCT) في دراسة انسداد الوريد الشبكي (RVO).

في الجسم الحي قراءات إصابة الأوعية الدموية في شبكية الفأر لتعزيز التكاثر

تم فحص الخلايا المحيطة في الأوعية الدموية الشبكية عن طريق تلطيخ الفلورسنت المناعي باستخدام مستقبلات عامل النمو المشتق من الصفائح الدموية β بعد الحقن المداري الرجعي ليكتين الطماطم الفلوري. تمت معالجة شبكية العين المسماة بطريقة تطهير الأنسجة وتم تركيبها بالكامل لتصور المناظر ثلاثية الأبعاد للخلايا المحيطة بالأوعية الدموية الشبكية تحت مجهر متحد البؤر.

تصور ثلاثي الأبعاد للخلايا الوعائية الشبكية في الفئران عن طريق التلوين المناعي 

تعلم قياس قطر أوعية الشبكية في الفئران المخدرة باستخدام برنامج MATLAB مخصص لتحليل صور تصوير الأوعية الفلورية. هذه الطريقة موثوقة ومفيدة لدراسة أمراض الشبكية وتتبع فعالية العلاجات.

قياس قطر وعاء الشبكية من صور تصوير الأوعية الفلورية للفأر

استكشف المزيد من الفيديوهات