Name: تشريح الأوعية الدموية للفأر البالغ من أجل تسلسل النواة المفردة أو تلطيخ المناعة (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-04-21T12:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 51 s
Description: تعلم تشريح الوعاء الشعري في الفئران البالغة لتحليل تسلسل النواة المفردة والتلطيخ المناعي. تساعد هذه الطريقة الباحثين على فهم آليات اضطرابات السمع المرتبطة بخلل التوازن الداخلي.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

تم دعم هذا البحث جزئيا من قبل برنامج البحوث الداخلية التابع للمعاهد الوطنية للصحة ، NIDCD إلى M.H. (DC000088)

تشريح الأوعية الدموية المجهرية للخطوط الدموية لتسلسل النواة المفردة أو تلطيخ المناعة

<ol><li>Bosher, S. K., Warren, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Observations+on+the+electrochemistry+of+the+cochlear+endolymph+of+the+rat%3A+a+quantitative+study+of+its+electrical+potential+and+ionic+composition+as+determined+by+means+of+flame+spectrophotometry%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Royal+Society+of+London.+Series+B.+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Observations on the electrochemistry of the cochlear endolymph of the rat: a quantitative study of its electrical potential and ionic composition as determined by means of flame spectrophotometry.</a> Proceedings of the Royal Society of London. Series B. Biological Sciences. 171 (1023), 227-247 (1968).</li>
<li>Patuzzi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ion+flow+in+stria+vascularis+and+the+production+and+regulation+of+cochlear+endolymph+and+the+endolymphatic+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">Ion flow in stria vascularis and the production and regulation of cochlear endolymph and the endolymphatic potential.</a> Hearing Research. 277 (1-2), 4-19 (2011).</li>
<li>Wangemann, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((K%2B+cycling+and+the+endocochlear+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">K+ cycling and the endocochlear potential.</a> Hearing Research. 165 (1-2), 1-9 (2002).</li>
<li>Adachi, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanism+underlying+maintenance+of+the+endocochlear+potential+by+the+K%2B+transport+system+in+fibrocytes+of+the+inner+ear%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">The mechanism underlying maintenance of the endocochlear potential by the K+ transport system in fibrocytes of the inner ear.</a> The Journal of Physiology. 591 (18), 4459-4472 (2013).</li>
<li>Hibino, H., Nin, F., Tsuzuki, C., Kurachi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+is+the+highly+positive+endocochlear+potential+formed%3F+The+specific+architecture+of+the+stria+vascularis+and+the+roles+of+the+ion-transport+apparatus%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Archiv%22%5BJournal%5D)">How is the highly positive endocochlear potential formed? The specific architecture of the stria vascularis and the roles of the ion-transport apparatus.</a> Pflugers Archiv. 459 (4), 521-533 (2010).</li>
<li>Lang, F., Vallon, V., Knipper, M., Wangemann, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+significance+of+channels+and+transporters+expressed+in+the+inner+ear+and+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Cell+Physiology%22%5BJournal%5D)">Functional significance of channels and transporters expressed in the inner ear and kidney.</a> American Journal of Physiology. Cell Physiology. 293 (4), C1187-C1208 (2007).</li>
<li>Liu, W., Schrott-Fischer, A., Glueckert, R., Benav, H., Rask-Andersen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+human+%26%2334%3Bcochlear+battery%26%2334%3B-claudin-11+barrier+and+ion+transport+proteins+in+the+lateral+wall+of+the+cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Molecular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The human &#34;cochlear battery&#34;-claudin-11 barrier and ion transport proteins in the lateral wall of the cochlea.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 10, 239(2017).</li>
<li>Marcus, D. C., Wu, T., Wangemann, P., Kofuji, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KCNJ10+%28Kir4.1%29+potassium+channel+knockout+abolishes+endocochlear+potential%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Cell+Physiology%22%5BJournal%5D)">KCNJ10 (Kir4.1) potassium channel knockout abolishes endocochlear potential.</a> American Journal of Physiology. Cell Physiology. 282 (2), C403-C407 (2002).</li>
<li>Spicer, S. S., Schulte, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+inner+ear+fibrocytes+according+to+their+ion+transport+related+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">Differentiation of inner ear fibrocytes according to their ion transport related activity.</a> Hearing Research. 56 (1-2), 53-64 (1991).</li>
<li>Wangemann, P., Liu, J., Marcus, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ion+transport+mechanisms+responsible+for+K%2B+secretion+and+the+transepithelial+voltage+across+marginal+cells+of+stria+vascularis+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">Ion transport mechanisms responsible for K+ secretion and the transepithelial voltage across marginal cells of stria vascularis in vitro.</a> Hearing Research. 84 (1-2), 19-29 (1995).</li>
<li>Yoshida, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+unique+ion+permeability+profile+of+cochlear+fibrocytes+and+its+contribution+to+establishing+their+positive+resting+membrane+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Archiv%22%5BJournal%5D)">The unique ion permeability profile of cochlear fibrocytes and its contribution to establishing their positive resting membrane potential.</a> Pflugers Archiv. 468 (9), 1609-1619 (2016).</li>
<li>Johns, J. D., Adadey, S. M., Hoa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+stria+vascularis+in+neglected+otologic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">The role of the stria vascularis in neglected otologic disease.</a> Hearing Research. 428, 108682(2023).</li>
<li>Kim, J., Ricci, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+real-time+imaging+reveals+megalin+as+the+aminoglycoside+gentamicin+transporter+into+cochlea+whose+inhibition+is+otoprotective%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">In vivo real-time imaging reveals megalin as the aminoglycoside gentamicin transporter into cochlea whose inhibition is otoprotective.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 119 (9), e2117846119(2022).</li>
<li>Zdebik, A. A., Wangemann, P., Jentsch, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potassium+ion+movement+in+the+inner+ear%3A+insights+from+genetic+disease+and+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology%22%5BJournal%5D)">Potassium ion movement in the inner ear: insights from genetic disease and mouse models.</a> Physiology. 24, 307-316 (2009).</li>
<li>Chen, J., Zhao, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+an+inwardly+rectifying+K%2B+channel+%28Kir4.1%29+in+the+inner+ear+and+hearing+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The role of an inwardly rectifying K+ channel (Kir4.1) in the inner ear and hearing loss.</a> Neuroscience. 265, 137-146 (2014).</li>
<li>Steel, K. P., Barkway, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Another+role+for+melanocytes%3A+their+importance+for+normal+stria+vascularis+development+in+the+mammalian+inner+ear%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Another role for melanocytes: their importance for normal stria vascularis development in the mammalian inner ear.</a> Development. 107 (3), 453-463 (1989).</li>
<li>Ito, T., Nishio, A., Wangemann, P., Griffith, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+irreversible+hearing+loss+is+caused+by+stria+vascularis+degeneration+in+an+Slc26a4-insufficient+mouse+model+of+large+vestibular+aqueduct+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Progressive irreversible hearing loss is caused by stria vascularis degeneration in an Slc26a4-insufficient mouse model of large vestibular aqueduct syndrome.</a> Neuroscience. 310, 188-197 (2015).</li>
<li>Gu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+rare+spindle+and+root+cell+transcriptional+profiles+in+the+stria+vascularis+of+the+adult+mouse+cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Characterization of rare spindle and root cell transcriptional profiles in the stria vascularis of the adult mouse cochlea.</a> Scientific Reports. 10 (1), 18100(2020).</li>
<li>Gow, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deafness+in+claudin+11-null+mice+reveals+the+critical+contribution+of+basal+cell+tight+junctions+to+stria+vascularis+function%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Deafness in claudin 11-null mice reveals the critical contribution of basal cell tight junctions to stria vascularis function.</a> The Journal of Neuroscience. 24 (32), 7051-7062 (2004).</li>
<li>Chang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Virally+mediated+Kcnq1+gene+replacement+therapy+in+the+immature+scala+media+restores+hearing+in+a+mouse+model+of+human+Jervell+and+Lange-Nielsen+deafness+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Virally mediated Kcnq1 gene replacement therapy in the immature scala media restores hearing in a mouse model of human Jervell and Lange-Nielsen deafness syndrome.</a> EMBO Molecular Medicine. 7 (8), 1077-1086 (2015).</li>
<li>Faridi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutational+and+phenotypic+spectra+of+KCNE1+deficiency+in+Jervell+and+Lange-Nielsen+Syndrome+and+Romano-Ward+Syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Mutation%22%5BJournal%5D)">Mutational and phenotypic spectra of KCNE1 deficiency in Jervell and Lange-Nielsen Syndrome and Romano-Ward Syndrome.</a> Human Mutation. 40 (2), 162-176 (2019).</li>
<li>Wangemann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+KCNJ10+protein+expression+abolishes+endocochlear+potential+and+causes+deafness+in+Pendred+syndrome+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Medicine%22%5BJournal%5D)">Loss of KCNJ10 protein expression abolishes endocochlear potential and causes deafness in Pendred syndrome mouse model.</a> BMC Medicine. 2, 30(2004).</li>
<li>Kitajiri, S. -I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+patterns+of+claudins%2C+tight+junction+adhesion+molecules%2C+in+the+inner+ear%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">Expression patterns of claudins, tight junction adhesion molecules, in the inner ear.</a> Hearing Research. 187 (1-2), 25-34 (2004).</li>
<li>Jagger, D. J., Nevill, G., Forge, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+membrane+properties+of+cochlear+root+cells+are+consistent+with+roles+in+potassium+recirculation+and+spatial+buffering%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Association+for+Research+in+Otolaryngology%22%5BJournal%5D)">The membrane properties of cochlear root cells are consistent with roles in potassium recirculation and spatial buffering.</a> Journal of the Association for Research in Otolaryngology. 11 (3), 435-448 (2010).</li>
<li>Ito, T., Kurata, N., Fukunaga, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-resident+macrophages+in+the+stria+vascularis%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neurology%22%5BJournal%5D)">Tissue-resident macrophages in the stria vascularis.</a> Frontiers in Neurology. 13, 818395(2022).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VEGFA165+gene+therapy+ameliorates+blood-labyrinth+barrier+breakdown+and+hearing+loss%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">VEGFA165 gene therapy ameliorates blood-labyrinth barrier breakdown and hearing loss.</a> JCI Insight. 6 (8), e143285(2021).</li>
<li>Shi, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiology+of+the+cochlear+intrastrial+fluid-blood+barrier+%28review%29%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">Pathophysiology of the cochlear intrastrial fluid-blood barrier (review).</a> Hearing Research. 338, 52-63 (2016).</li>
<li>Gu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+potential+Meniere%27s+disease+targets+in+the+adult+stria+vascularis%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neurology%22%5BJournal%5D)">Identification of potential Meniere's disease targets in the adult stria vascularis.</a> Frontiers in Neurology. 12, 630561(2021).</li>
<li>Fischer, J., Ayers, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+nucleus+RNA-sequencing%3A+how+it%27s+done%2C+applications+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22Emerging+Topics+in+Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">Single nucleus RNA-sequencing: how it's done, applications and limitations.</a> Emerging Topics in Life Sciences. 5 (5), 687-690 (2021).</li>
<li>Korrapati, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+cell+and+single+nucleus+RNA-Seq+reveal+cellular+heterogeneity+and+homeostatic+regulatory+networks+in+adult+mouse+stria+vascularis%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Molecular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Single cell and single nucleus RNA-Seq reveal cellular heterogeneity and homeostatic regulatory networks in adult mouse stria vascularis.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 12, 316(2019).</li>
<li>Pyle, M. P., Hoa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+single-cell+sequencing+for+the+field+of+otolaryngology%3A+A+contemporary+review%5BTitle%5D)+AND+%22Laryngoscope+Investigative+Otolaryngology%22%5BJournal%5D)">Applications of single-cell sequencing for the field of otolaryngology: A contemporary review.</a> Laryngoscope Investigative Otolaryngology. 5 (3), 404-431 (2020).</li>
<li>Hwang, B., Lee, J. H., Bang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+RNA+sequencing+technologies+and+bioinformatics+pipelines%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+%26+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Single-cell RNA sequencing technologies and bioinformatics pipelines.</a> Experimental & Molecular Medicine. 50 (8), 1-14 (2018).</li>
<li>Shafer, M. E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cross-species+analysis+of+single-cell+transcriptomic+data%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Cross-species analysis of single-cell transcriptomic data.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 7, 175(2019).</li>
<li>Chen, G., Ning, B., Shi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+RNA-Seq+technologies+and+related+computational+data+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Genetics%22%5BJournal%5D)">Single-cell RNA-Seq technologies and related computational data analysis.</a> Frontiers in Genetics. 10, 317(2019).</li>
<li>Longo, S. K., Guo, M. G., Ji, A. L., Khavari, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrating+single-cell+and+spatial+transcriptomics+to+elucidate+intercellular+tissue+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Genetics%22%5BJournal%5D)">Integrating single-cell and spatial transcriptomics to elucidate intercellular tissue dynamics.</a> Nature Reviews Genetics. 22 (10), 627-644 (2021).</li>
<li>Kim, N., Kang, H., Jo, A., Yoo, S. A., Lee, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perspectives+on+single-nucleus+RNA+sequencing+in+different+cell+types+and+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pathology+and+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Perspectives on single-nucleus RNA sequencing in different cell types and tissues.</a> Journal of Pathology and Translational Medicine. 57 (1), 52-59 (2023).</li>
<li>Grindberg, R. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA-sequencing+from+single+nuclei%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">RNA-sequencing from single nuclei.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 110 (49), 19802-19807 (2013).</li>
<li>Montgomery, S. C., Cox, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+mount+dissection+and+immunofluorescence+of+the+adult+mouse+cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visuazlied+Experiments%22%5BJournal%5D)">Whole mount dissection and immunofluorescence of the adult mouse cochlea.</a> Journal of Visuazlied Experiments. (107), e53561(2016).</li>
</ol>

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

قبل ظهور تسلسل الخلية الواحدة ، استخدم العديد من الباحثين تحليل الأنسجة السائبة ، مما جعل من الممكن فقط تحليل النسخ المتوسط عبر الخلايا. على وجه الخصوص ، جعلت الخلية المفردة و sNuc-Seq من الممكن عزل نسخة خلية واحدة أو نواة واحدة ، على التوالي32. في هذه الحالة ، يمكن تحديد النسخ أحادي النواة للخلايا الهامشية والمتوسطة والقاعدية ، وكذلك خلايا المغزل30. يتيح ذلك التحقيق في عدم تجانس النسخ بين أنواع خلايا SV ويمكن استخدامه في المستقبل للتحقيق في مساهمة هذه الأنواع من الخلايا في...

تتكون القوقعة من ثلاث غرف مملوءة بالسوائل ، سكالا الدهليز ، سكالا ميديا ، وسكالا تيمباني . يحتوي كل من سكالا الدهليزي وسكالا تيمباني على perilymph ، الذي يحتوي على تركيز عال من الصوديوم (138 mM) وتركيز منخفض من البوتاسيوم (6.8 mM) 1. تحتوي وسائط سكالا على اللمف الداخلي ، الذي يحتوي على تركيز عال من البوتاسيوم (154 مللي مول) وتركيز منخفض من الصوديوم (0.91 مللي مول) 1،2،3. يمكن الإشارة إلى هذا الاختلاف في تركيز الأيونات باسم جهد القوقعة الداخلية (EP) ، ويتولد بشكل أساسي عن طريق حركة أيونات البوتاسيوم عبر قنوات أيونية مختلفة وتقاطعات الفجوة في الأوعية الدموية السطورية (SV) على طول الجدار الجانبي للقوقعة4،5،6،7،8،9،10،11. SV هو نسيج غير متجانس شديد الأوعية الدموية يبطن الجانب الإنسي للجدار الجانبي للقوقعة ويحتوي على ثلاثة أنواع رئيسية من الخلايا: الخلايا الهامشية والمتوسطة والقاعدية12 (الشكل 1).
ترتبط الخلايا الهامشية عن طريق تقاطعات ضيقة لتشكيل السطح الأكثر وسطية ل SV. يواجه الغشاء القمي اللمف الداخلي لوسط سكالا ويساهم في نقل أيونات البوتاسيوم إلى اللمف الداخلي باستخدام قنوات مختلفة ، بما في ذلك KCNE1 / KCNQ1 و SLC12A2 و Na + -K + -ATPase (NKA) 5،10،13،14. الخلايا الوسيطة هي خلايا مصطبغة تقع بين الخلايا الهامشية والقاعدية وتسهل نقل البوتاسيوم عبر SV باستخدام KCNJ10 (Kir 4.1) 15,16. تقع الخلايا القاعدية على مقربة من الجدار الجانبي للقوقعة وترتبط ارتباطا وثيقا بالخلايا الليفية في الرباط الحلزوني لتعزيز إعادة تدوير البوتاسيوم من perilymph12. وقد تورط علم الأمراض من SV في العديد من اضطرابات الأذن17،18. يمكن أن تسبب الطفرات في الجينات المعبر عنها في أنواع خلايا SV الرئيسية ، مثل Kcnq1 و Kcne1 و Kcnj10 و Cldn11 ، الصمم واختلال SV ، بما في ذلك فقدان EP19،20،21،22،23. بالإضافة إلى أنواع الخلايا الرئيسية الثلاثة ، هناك أنواع أخرى من الخلايا أقل دراسة في SV ، مثل خلايا المغزل 22 ، وخلايا الجذر12,24 ، والبلاعم 25 ، والخلايا المحيطة 26 ، والخلايا البطانية 27 ، التي لها أدوار غير محددة بشكل كامل تتضمن التوازن الأيوني وتوليد EP 28.
بالمقارنة مع تسلسل الحمض النووي الريبي السائب ، يوفر تسلسل الحمض النووي الريبي أحادي النوى (sNuc-Seq) معلومات حول عدم تجانس الخلية ، بدلا من متوسط mRNA عبر مجموعة من الخلايا29 ، ويمكن أن يكون مفيدا بشكل خاص عند دراسة SV30 غير المتجانس. على سبيل المثال ، أنتجت sNuc-Seq تحليلا نسخيا يشير إلى أنه قد يكون هناك دور لخلايا المغزل والجذر في توليد EP وفقدان السمع ومرض Meniere18. يمكن أن يزودنا التوصيف النسخي الإضافي لأنواع خلايا SV المختلفة بمعلومات لا تقدر بثمن حول الفيزيولوجيا المرضية الكامنة وراء الآليات والأنواع الفرعية المختلفة لتقلب السمع وفقدان السمع المرتبط ب SV. إن حصاد هياكل الأذن الداخلية الحساسة هذه له أهمية قصوى لتحليل الأنسجة الأمثل.
في هذه الدراسة ، تم وصف نهج التشريح المجهري للوصول إلى السطور الوعائية وعزلها من قوقعة الفئران البالغة من أجل sNuc-Seq أو التلوين المناعي. مطلوب تشريح الفأر البالغ SV لفهم أنواع خلايا SV المختلفة وتوصيف دورها في السمع.

<table><tbody><tr><td>10-& مرشح م (Polyethylenterephthalat)</td> <td>PluriSelect</td> <td># 43-50010-01</td><td>تصفية الأنسجة أثناء sNuc-Seq</td></tr><tr><td>18 × 18 مم غطاء زجاجي</td><td>فيشر Scientific</td><td>12-541A</td><td>غطاء الانزلاق لتركيب SV</td></tr><tr><td>30-& micro ؛ مرشح m (Polyethylenterephthalat)</td><td>PluriSelect</td> <td># 43-50030-03</td><td>تصفية الأنسجة أثناء sNuc-Seq</td></tr><tr><td>75 × 25 مم Superfrost Plus / Colorforst Plus Microslide</td><td>Daigger</td><td>EF15978Z</td><td>Microslide لتركيب SV على</td></tr><tr><td>الفئران C57BL / 6J</td><td>مختبر جاكسون</td><td>RRID: IMSR_JAX:000664</td><td>سلالة الماوس للأغراض العامة التي تحتوي على صبغة يمكن رؤيتها بسهولة أكبر في الخلايا الوسيطة ل SV.</td></tr><tr>شعارات <td>عداد الخلايا</td><td>Biosystems</td><td>L20001</td><td>تستخدم لعد الخلايا</td></tr><tr><td>كشط Chalizon 5 '' ، مقاس 3 2.5 مم</td><td>أدوات البحث الطبية الحيوية</td><td>15-1020</td><td>تستخدم لنقل SV</td></tr><tr><td>Chromium Next GEM خلية واحدة 3 'GEM Kit v3.1</td><td>Chromium</td><td>PN-1000141</td><td>يولد خلية واحدة 3 'مكتبات التعبير الجيني</td></tr> طلاء <tr><td>الأظافر الشفاف</td><td>فيشر العلمي</td><td>NC1849418</td><td>تستخدم لختم</td></tr><tr><td>أطباق ثقافة الأنسجة القياسية من كورنينج فالكون ، طبق ثقافة 24 بئر Corning</td><td></td><td>08-772B</td><td>يستخدم لحمل العينة أثناء التشريح</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Invitrogen</td><td>D1306 ، RRID: AB_2629482</td><td>وصمة عار تستخدم لوضع العلامات على النواة</td></tr><tr><td>الخالط</td><td>Dounce Sigma-Aldrich</td><td>D8938</td><td>تستخدم لتجانس الأنسجة من أجل ملقط</td></tr> <tr><td></td><td>sNuc-seq Dumont # 5أدوات العلوم الدقيقة</td><td>11252-30</td><td>ملقط عام للتشريح</td></tr><tr><td>Dumont # 55 ملقط</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>11255-20</td><td>ملقط بطرف رفيع يجعل التلاعب ب SV أسهل</td></tr><tr><td>مصل الأبقار</td><td>الجنيني ThermoFisher</td><td></td><td>16000044 يستخدم لخطوات عصا الغراء sNuc-Seq</td></tr><tr><td></td><td>Fisher Scientific</td><td>NC0691392</td><td>يستخدم لتركيب</td></tr><tr><td>الأجسام المضادة الجزيئية SV GS-IB4</td><td> مجسات</td><td>I21411 ، RRID: AB-2314662</td><td>الجسم المضاد المستخدم في وضع العلامات الشعرية</td></tr><tr><td>KCNJ10-ZsGreen Mice</td><td>n / a</td><td>n / a</td><td>فأر معدل وراثيا يعبر عن KCNJ10-ZsGreen ، جزئيا في الخلايا الوسيطة ل SV.</td></tr><tr><td>يستخدم</td> <td>AM9530G MgCl2</td><td>ThermoFisher</td> لخطوات كاشف تركيب <td>sNuc-Seq</td></tr><tr><td></td><td>ThermoFisher</td><td>#S36940</td><td>كاشف التركيب للوحة SV</td></tr><tr><td>Multiwell 24 بئر</td><td>Corning</td> <td># 353047</td><td>لوحة تستخدم لتلطيخ المناعة</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>ThermoFisher</td><td>AAJ216183</td><td>تستخدم لخطوات sNuc-Seq</td></tr><tr><td>Nonidet P40</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9-16-45-9</td><td>تستخدم لخطوات sNuc-Seq</td></tr><tr><td>ماء خال من النوكليز</td><td>ThermoFisher</td><td>4387936</td><td>يستخدم لخطوات sNuc-Seq</td></tr><tr><td>Orbital shaker</td><td>Silent Shake</td><td>SYC-2102A</td><td>يستخدم لخطوات التلوين</td></tr><tr><td>المناعي PBS</td><td>ThermoFisher</td><td>J61196. AP</td><td>تستخدم لخطوات التلوين المناعي وتشريح</td></tr><tr><td>الحمض النووي الريبي لاحقا</td><td>Invitrogen</td><td>AM7021</td><td>يستخدم للحفاظ على SV ل sNuc-Seq</td></tr><tr><td>Scizzors</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>14058-09</td><td>تستخدم لتقسيم جمجمة الفأر</td></tr><tr><td>Tris-HCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>15506017</td><td>تستخدم لخطوات sNuc-Seq</td></tr><tr><td>Trypan Blue stain</td><td>Gibco</td><td>15250061</td><td>تستخدم في عد الخلايا</td></tr><tr><td>Tween20</td><td>ThermoFisher</td><td>AAJ20605AP&nbsp;</td><td>تستخدم لخطوات sNuc-Seq</td></tr><tr><td>Zeiss STEMI SV 11 Apo مجهر مجهر مجهر</td><td>Zeiss</td><td>n / a</td><td>مجهر يستخدم للتشريح</td></tr></tbody></table>

تشريح الأوعية الدموية للفأر البالغ من أجل تسلسل النواة المفردة أو تلطيخ المناعة

Dissection of Adult Mouse Stria Vascularis for Single-Nucleus Sequencing or Immunostaining

تعد إمكانات Endocochlear ، التي يتم إنشاؤها بواسطة السطور الوعائية ، ضرورية للحفاظ على بيئة مواتية للنقل الميكانيكي المناسب لخلايا الشعر والسمع في نهاية المطاف. يمكن أن تؤدي أمراض الأوعية الدموية السطورية إلى انخفاض السمع. يسمح تشريح الأوعية الدموية للخطوط البالغة بالتقاط نواة واحدة مركزة وتسلسل النواة المفردة اللاحقة والبقع المناعية. تستخدم هذه التقنيات لدراسة الفيزيولوجيا المرضية للأوعية الدموية السعيرة على مستوى الخلية الواحدة. 
يمكن استخدام تسلسل النواة المفردة في إعداد التحليل النسخي للأوعية الدموية السطورية. وفي الوقت نفسه، لا يزال التلوين المناعي مفيدا في تحديد مجموعات معينة من الخلايا. تتطلب كلتا الطريقتين تشريح الأوعية الدموية المناسب كشرط أساسي ، والذي يمكن أن يكون تحديا تقنيا.

نقدم طريقة لعزل SV لاستخدامها إما في sNuc-Seq أو تلطيخ المناعة. يمكن أن يساعد التشريح ذي الصلة (الشكل 1) للقوقعة بالنسبة إلى SV المستخدمين على فهم تنظيم SV وخطوات بروتوكول التشريح بشكل أفضل.
يتم تفصيل كل خطوة من خطوات هذا التشريح الدقيق ل SV من ماوس P30 في الفيديو المرتبط ، ويتم عرض لقطات من الخطوات الرئيسية لهذا التشريح وعزل SV في الشكل 2.
sNuc-Seq مفيد في التحقيق في ملف النسخ للخلايا المختلفة في SV غير ال...

السطور الوعائية أمر حيوي لتوليد إمكانات القوقعة الداخلية. هنا ، نقدم تشريح الأوعية الدموية للفأر البالغ لتسلسل النواة المفردة أو تلطيخ المناعة.

Endocochlear potential, which is generated by the stria vascularis, is essential to maintain an environment conducive to appropriate hair cell ...

تعمل السطور الوعائية على توليد جهد القوقعة الداخلية وتنظيم الاتزان الأيوني في قوقعة الأذن. يسعى برنامج التطوير السمعي والترميم إلى فهم الآليات الأساسية التي تربط التوازن الأيوني المختل وظيفيا باضطرابات السمع والاستقرار ، وهي أمراض يحدث فيها تذبذب أو فقدان السمع المفاجئ. لقد أسس العمل في مختبري المشهد النسخي للأوعية الدموية السطورية وساهم في فهمنا لأهميتها في السمع.لقد استخدمنا هذه البيانات لرسم أوجه تشابه مع اضطرابات السمع والاستقرار غير المفهومة بشكل جيد ، بما في ذلك مرض مينيير. يتيح هذا البروتوكول تشريح وعزل الأوعية الدموية السطورية الكاملة لمزيد من الدراسات الجزيئية بما في ذلك الكيمياء الهيستولوجية المناعية. بالنظر إلى أن أنواع خلايا السطور الوعائية متشابكة بشكل معقد مع بعضها البعض ، فإن استخدام العزل النووي وتسلسل الحمض النووي الريبي أحادي النواة قد سهل فهمنا لآلية النسخ المتميزة المعنية.

dissection-adult-mouse-stria-vascularis-for-single-nucleus-sequencing

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

المصدر: Daynac, M., et. al. فرز الخلايا للخلايا الجذعية العصبية والخلايا السلفية من المنطقة تحت البطينية للفأر البالغ والتصوير الحي لديناميكيات دورة الخلية. J. Vis. Exp.  (2015) يوضح هذا الفيديو التصوير بفاصل زمني للخلايا الجذعية العصبية (NSCs) من دماغ فأر معدل وراثيا باستخدام مجهر مسح ليزر متحد البؤر. تتألق الخلايا العصبية العصبية باللون الأحمر خلال المرحلة G1 وتكون غير فلورية في مراحل دورة الخلية الأخرى. يتم وضع ثقافة NSC ملتصقة في غرفة التصوير ، ويتم تعيين معلمات التصوير ، ويتم التقاط الصور...

التصوير بفاصل زمني لانقسام الخلايا الجذعية العصبية للفأر باستخدام الفحص المجهري متحد البؤر

هنا نصف إجراء يعتمد على استخدام جزيئات الفيروسات العدسية للتعديل الجيني طويل المدى للخلايا الجذعية العصبية و / أو الخلايا البطانية العصبية المجاورة لها في مكانة عصبية البطين تحت البطين البالغة والتي تسمح بتحليل منفصل للخلايا المستقلة وغير المستقلة والمعتمدة على الخلايا الجذعية العصبية.

مستقر وكفاءة التحوير الوراثي للخلايا في الكبار ماوس V-SVZ لتحليل العصبية الخلايا الجذعية الذاتية الحكم والآثار لغير المتمتعة بالحكم الذاتي

نقدم هنا، بروتوكولا لسرعة عزل نواة عالية الجودة من الأنسجة الطازجة أو المجمدة المصب تسلسل الحمض النووي الريبي موازية على نطاق واسع. نحن تشمل الأنسجة الميكانيكية والمنظفات الصناعية والميكانيكية وناقص التوتر تعطل وخلية تحلل الخيارات، التي يمكن أن تستخدم لعزل نواة.

عزل نويات الحبل الشوكي الكبار لتسلسل الحمض النووي الريبي المفرد-نواة موازية على نطاق واسع

نحن نقدم بروتوكولا لعزل الخلايا الصغيرة من المناطق تشريح مختلفه من نصف الكره الدماغ الفار الكبار ، تليها اعداد المكتبة شبه المؤتمتة لعمق خليه واحده الحمض الريبي النيبالي تسلسل كامل طول الكتابات النصية. ستساعد هذه الطريقة علي توضيح التغاير الوظيفي للدبقيه الصغيرة في الصحة والمرض.

عزل ميكروليا الخاصة بالمنطقة من واحد الكبار الفار الدماغ نصف الكره لعمق خليه واحده التسلسل RNA

يصف هذا البروتوكول ميكروديستيون بمساعدة الترانويلومي من أجزاء من الأنابيب الماوس الكبار شبهiferous التي تمثل مراحل محددة من دورة الظهارة شبه المائلة، وأنواع الخلايا فيها، والمناعة اللاحقة من الاستعدادات الاسكواش وقطاعات الأنابيب سليمة.

التسلخ المُساعد للتنقية في مراحل محددة من دورة الظهارة الظهارية شبه المائلة للماوس لتحليلات المناعة المصبية

هنا ، نقدم بروتوكولا لعزل النوى عالية الجودة من كلى الفئران المجمدة التي تعمل على تحسين تمثيل أنواع خلايا الكلى النخاعية وتجنب آثار التعبير الجيني من تفكك الأنسجة الأنزيمية.

عزل النوى من كلية الفأر البالغة لتسلسل الحمض النووي الريبي أحادي النواة

يصف هذا البروتوكول إعداد العينة المفصلة والمنخفضة المدخلات لتسلسل النواة الواحدة، بما في ذلك تشريح العقد العنقية والنجمية المتفوقة للفأر، وتفكك الخلايا، والحفظ بالتبريد، وعزل النواة، والترميز الشريطي للوسوم.

عزل النواة منخفضة الإدخال وتعدد الإرسال باستخدام الأجسام المضادة المشفرة للعقد الودية للفأر لتسلسل الحمض النووي الريبي أحادي النواة

تسمح القدرة على وضع علامة دائمة على الخلايا الجذعية وذريتها باستخدام الفلوروفور باستخدام خط فأر تتبع النسب المعدلة وراثيا القابل للتحريض بإجراء تحليل مكاني وزمني للتنشيط والانتشار والهجرة و / أو التمايز في الجسم الحي. يمكن أن يكشف تتبع النسب عن معلومات جديدة حول الالتزام بالنسب ، والاستجابة للتدخل (التدخلات) ، وتعدد القدرات.

تتبع نسب الخلايا الجذعية المستحثة ذات العلامات الفلورية في دماغ الفأر البالغ

تظهر هنا طريقة لتسلسل النوى المفردة المعزولة من التلفيف المسنن للفأر الذي يستبعد معظم الخلايا العصبية من خلال فرز النوى المنشطة بالتألق (FAN). يولد هذا النهج ملفات تعريف تعبير عالية الجودة ويسهل دراسة معظم أنواع الخلايا الأخرى الممثلة في مكانه ، بما في ذلك المجموعات السكانية النادرة مثل الخلايا الجذعية العصبية.

الفرز السلبي للنوى المنشطة بالفلورة للخلايا العصبية جنبا إلى جنب مع تسلسل الحمض النووي الريبي أحادي النوى لدراسة مكانة الحصين العصبية

تظهر شبكية العين تنظيما مكانيا معقدا عبر هيكلها الرقائقي. تتطلب تقنيات النسخ المكاني والتسلسل المكانية الحديثة أقساما &lt; الأنسجة بسمك 20 ميكرومتر ، مما يحد من قابليتها لتطبيق أبحاث الشبكية. تنتج طريقة التقطيع بالتبريد المجمدة حديثا أقساما رقيقة من شبكية العين مع الحفاظ على العلاقات المكانية المستوية ، مما يتيح رسم خرائط جزيئية شاملة عبر الصفائح.

أون الوجه التقطيع بالتبريد لشبكية العين الفأرية للتحليل الجزيئي المكاني عالي الأبعاد

توفر هذه المقالة بروتوكولا مبسطا لتشريح وتفكك ظهارة الفئران الشمية لغرض تسلسل الحمض النووي الريبي أحادي النواة.

التشريح السريع والتفكك للظهارة الشمية للفأر للمعلقات أحادية النواة

تعلم تشريح الوعاء الشعري في الفئران البالغة لتحليل تسلسل النواة المفردة والتلطيخ المناعي. تساعد هذه الطريقة الباحثين على فهم آليات اضطرابات السمع المرتبطة بخلل التوازن الداخلي.

تشريح الأوعية الدموية للفأر البالغ من أجل تسلسل النواة المفردة أو تلطيخ المناعة

استكشف المزيد من الفيديوهات