فرز الخلية الواحدة للخلايا الجذعية الوسيطة المناعية من الأسنان اللبنية المقشرة البشرية

يفصل هذا البروتوكول طريقة حاسمة لتوصيف وتنقية الخلايا الجذعية الوسيطة البشرية بدقة على منصة واحدة ، مما يتيح تطبيقات فعالة في المراحل النهائية مثل زرع الخلايا الجذعية. إنه مهم بشكل خاص للمختبرات السريرية التي تعزز المقايسات الجزيئية والخلوية الوراثية من خلال الفرز الدقيق للخلية المفردة للخلايا الجذعية المهندسة أو الطبيعية. تشير الطرق الشائعة الاستخدام لعزل مجموعات الخلايا الجذعية النقية إلى تقنيات مثل الفصل المغناطيسي المناعي أو تدرج الكثافة أو فرز خلايا الموائع الدقيقة.

تسمح تقنية مثل فرز الفهرس بربطها بتوصيف الحمض النووي الريبي أحادي الخلية الذي يمكنه استخراج معلومات النسخ لكل خلية تم فرزها. تتضمن التحديات الرئيسية الحفاظ على جودة العينة ، وتحسين ظروف زراعة الخلايا ، بما في ذلك كثافة الخلية وصلاحيتها أثناء وبعد الفرز. بالإضافة إلى ذلك ، سيتم أيضا النظر في اختيار أحجام فوهات مناسبة للأداة وضمان الوصول في الوقت المناسب إلى آلات الفرز.

يوضح هذا البروتوكول لوحة تلطيخ دقيقة للتنميط المناعي وفرز عدد الخلايا المطلوب. إنه يضمن جودة العينة الموحدة ، والجدوى المثلى للخلية ، وكثافة فرز عدد الخلايا وتحديد المعلمات التجريبية للفرز على برنامج FACSDiva. تتيح هذه الطريقة الاختيار المباشر والتنميط المناعي لسكان الخلايا الجذعية الذين يعبرون عن مؤشرات حيوية محددة.

تسمح هذه المنصة البسيطة بالفرز الفعال بناء على السكان المستهدفين الذين يساعدون في الحصول على عينات منقاة للتطبيقات اللاحقة.