إكس فيفو تصوير الكالسيوم لنموذج ذبابة الفاكهة للصرع
October 13th, 2023
هنا ، نقدم بروتوكولا لتصوير الكالسيوم خارج الجسم الحي في ذبابة الفاكهة البالغة التي تعبر عن GCaMP6 لمراقبة أنشطة الصرع. يوفر البروتوكول أداة قيمة للتحقيق في أحداث ictal في ذبابة الفاكهة للبالغين من خلال تصوير الكالسيوم خارج الجسم الحي ، مما يسمح باستكشاف الآليات المحتملة للصرع على المستويات الخلوية.
في الآونة الأخيرة ، تم العثور على العديد من الجينات المرشحة للصرع في اختبارات الجينات ثم بسهولة عن طريق التجارب على. نقدم مجموعة من التقنيات لدراسة النشاط العصبي المرتبط بالصرع ، بما في ذلك تسجيل الخلية الكاملة ، وتسجيل EPSP المستحضر والجديد الذي سنقدمه هنا ، تصوير الكالسيوم خارج الجسم الحي. نظرا لأن سلامة الدماغ وشبكاته العصبية لا يمكن تكرارها بالكامل في زراعة الخلايا أو شرائح الدماغ ، فإن الميزة الرئيسية للتجربة الحالية هي الحصول على أنسجة دماغية سليمة مع حماية الشبكات العصبية من التلف.
لقد أنشأنا تقنية تصوير الكالسيوم خارج الجسم الحي جنبا إلى جنب مع اختبار السلوك الشبيه بالنوبات الحساسة للنطاق لفحص الجينات المرتبطة بالصرع بكفاءة واستكشاف الآليات الأساسية للصرع على المستوى الخلوي. قمنا بتنفيذ أنسجة دماغية ذبابة الفاكهة المعزولة والسليمة لتصوير الكالسيوم ، والتي يمكن أن تتجنب تقنياتها الجراحية المعقدة وتحافظ على سلامة الشبكات العصبية. ويمكن أن ينتج عن النهج خارج الجسم الحي أيضا نسبة إشارة إلى ضوضاء فائقة عند مقارنتها بتقنيات التصوير في الجسم الحي.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
نظرة عامة
تقدم هذه الدراسة بروتوكولاً للتصوير الكالسيومي ex vivo في الذبابة البالغة التي تعبر عن GCaMP6 للتحقيق في الأنشطة الشبيهة بالصرع. تهدف الطريقة إلى مراقبة الأحداث النوبية في الذبابة، وتوفير رؤى حول الآليات الخلوية الكامنة وراء الصرع.
مكونات الدراسة الرئيسية
مجال العلم
- علم الأعصاب
- بحوث الصرع
- التصوير الكالسيومي
الخلفية
- تتطلب جينات الصرع المرشحة التحقق من خلال نماذج حيوانية.
- التقنيات ex vivo تحتفظ بشبكات عصبية سليمة، وهي حاسمة لدراسة الصرع.
- يوفر التصوير الكالسيومي جودة إشارة أعلى مقارنة بالمقاربات in vivo.
- تعمل الذبابة ككائن حي نموذجي مناسب لدراسات النشاط العصبي.
غرض الدراسة
- لتطوير تقنيات التصوير الكالسيومي ex vivo في الذبابة.
- لفحص الجينات المرتبطة بالصرع والتحقيق في الآليات العصبية الكامنة.
- لقياس السلوكيات الشبيهة بالنوبات بشكل كمي.
الطرق المستخدمة
- المنصة الرئيسية المستخدمة هي التصوير الكالسيومي ex vivo مع أنسجة الدماغ السليمة للذبابة.
- يتكون النموذج البيولوجي من الذبابة البالغة التي تعبر عن GCaMP6.
- يتم توفير بروتوكولات مفصلة لتشريح الدماغ، وإعداد التصوير، وتحليل البيانات.
- تم استخدام اختبارات سلوكية لتقييم النشاط الشبيه بالنوبات.
- تم تحليل المقاييس الكمية مثل شدة الفلورة باستخدام ImageJ.
النتائج الرئيسية
- تمت ملاحظة إشارات الكالسيوم في خلايا عصبية لجسم الفطر، مع اهتمام خاص بالاختلافات بين الذباب المكبوت ونوع الذباب البري.
- أظهر الذباب المكبوت في Cac نشاطًا شبيهًا بالنوبات بشكل كبير وأوقات تعافي متغيرة.
- تشير بيانات الفلورة إلى زيادة في التذبذبات الكبيرة في مجموعة الذباب المكبوت، مما يقدم رؤى ميكانيكية حول الصرع.
الاستنتاجات
- يمكن لهذا البروتوكول الباحثين من دراسة آليات النوبات في الذبابة، مما يسهل التحقق من الجينات في أبحاث الصرع.
- يوفر فهم أنماط الإشارة الكالسيومية رؤى حول الإثارة العصبية والأهداف العلاجية المحتملة.
- تعزز النتائج المعرفة حول آليات الصرع من خلال نهج تصوير متين.
