Name: تسريب عديد السكاريد الشحمي كنموذج صدمة للسموم الداخلية للخنزير (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-12-08T13:40:00.000+00:00
Duration: 5 min 52 s
Description: اكتشف بروتوكولاً موثوقاً لإحداث صدمة التسمم الداخلي في الخنازير باستخدام تسريب عديد السكاريد الشحمي. يتيح هذا النموذج دراسة عدم استقرار الدورة الدموية والفشل التنفسي لتطوير علاجات جديدة.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

يود المؤلفون أن يشكروا داغمار ديرفونسكيس على دعمها الفني الممتاز.

تمت الموافقة على التجارب في هذا البروتوكول من قبل لجنة رعاية الحكومية والمؤسسية (Landesuntersuchungsamt Rheinland-Pfalz ، كوبلنز ، ألمانيا ، TVA G21-1-080). أجريت التجارب وفقا لإرشادات ARRIVE. في هذه الدراسة ، تم استخدام ستة خنازير ألمانية سليمة تتراوح أعمارهم بين 2-3 أشهر ووزنها 30-35 كجم. يلخص الشكل 1 الجدول الزمني التجريبي . التفاصيل المتعلقة بجميع المواد والأدوات المستخدمة في هذا البروتوكول مدرجة في جدول المواد.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66039/66039fig01.jpg"> الشكل 1: الجدول الزمني التجريبي. تم أخذ القياسات الصحية الأساسية بعد تحضير وفترة استقرار مدتها 30 دقيقة. تم إحداث التسمم الداخلي عن طريق حقن LPS على مدى 30 دقيقة وتم أخذ قياسات 0 ساعة بعد 30 دقيقة أخرى. بعد ذلك ، استمرت القياسات بالساعة لمدة 4 ساعات. الاختصارات: BLH = خط الأساس صحي. LPS = عديد السكاريد الشحمي. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66039/66039fig01large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
1. إعداد
<ol><li>احتفظ بالحيوانات في بيئتها المعتادة لأطول فترة ممكنة لتقليل التوتر. حجب الطعام لمدة 6 ساعات قبل إعطاء التخدير ، مع السماح بحرية الوصول إلى الماء.</li>
	<li>قم بتخدير بالحقن العضلي للأزابيرون (3 مجم -1) والميدازولام (0.5 مجم كجم -1) بينما لا تزال في بيئتها الطبيعية.</li>
	<li>بمجرد أن يصبح التخدير ساري المفعول ، والذي يحدث عادة في غضون 15-20 دقيقة تقريبا بعد تناوله ، انقل الخنازير إلى المختبر. ملاحظة: من الأهمية بمكان ضمان الحفاظ على التخدير المستمر طوال فترة النقل. اعتمادا على الهيئة التشريعية الإقليمية ، قد يتطلب ذلك الإشراف الدائم على طبيب بيطري.</li>
	<li>انتبه جيدا للحفاظ على درجة حرارة الجسم الطبيعية للخنازير (~ 38 درجة مئوية) أثناء النقل. على سبيل المثال ، ضع في اعتبارك تغطية ببطانية لمنع انخفاض حرارة الجسم. ملاحظة: من المهم تحديد وقت النقل بحيث لا يتجاوز مدة التخدير ، والتي تتراوح عادة من 30 دقيقة إلى 60 دقيقة.</li>
	<li>بعد التطهير ، قم بإنشاء مدخل عن طريق الوريد عن طريق إدخال قسطرة 22 G في الوريد الأذني. قبل الشروع في أي حركة أخرى للخنزير أو تحريض التخدير ، تأكد من تثبيت القسطرة بإحكام لمنع الخلع بسبب أي حركات مفاجئة.</li>
	<li>راقب باستمرار تشبع الأكسجين المحيطي باستخدام مستشعر مثبت على الذيل أو الأذن.</li>
</ol>2. التخدير والتهوية الميكانيكية
<ol><li>تطبيق الفنتانيل الوريدي (4 ميكروغرام كغ-1) والبروبوفول (3 ملغ كغ-1) للحث على التخدير.</li>
	<li>ضع الخنزير في وضع ضعيف.</li>
	<li>تطبيق الأتراكوريوم (0.5 ملغ كجم -1) كمرخي للعضلات والبدء فورا في التهوية غير الغازية باستخدام قناع تهوية للكلاب. ضع القناع فوق الخطم واضغط بقوة بالإبهام أثناء سحب الفك السفلي للأمام باستخدام الإصبع الأوسط / البنصر. اضبط جهاز التنفس الصناعي على المعلمات التالية: جزء الأكسجين الشهيقي (FiO2 ) = 100٪ ، حجم المد والجزر = 6-8 مل كجم -1 ، ضغط الزفير الإيجابي (PEEP) = 5 ملي بار ، ذروة ضغط الشهيق ≤ 20 ملي بار ، معدل التنفس = 18-20 دقيقة -1.</li>
	<li>الحفاظ على التخدير عن طريق الشروع في التسريب المستمر لمحلول إلكتروليت متوازن (5 مل كجم -1 ح-1) ، فنتانيل (10 ميكروغرام كجم -1 ح-1) ، وبروبوفول (6 ملغ كجم -1 ح-1).</li>
	<li>إجراء التنبيب الرغامي باستخدام أنبوب القصبة الهوائية القياسي (ID 6-7 مم) ، وسلك توجيه ، ومنظار الحنجرة المجهز بشفرة Macintosh (الحجم 4).<ol><li>اطلب من مساعد فتح الفم وأمسك اللسان على الجانب الأيسر.</li>
		<li>أدخل شفرة ماكنتوش حتى يصبح لسان المزمار مرئيا. ثم ارفع منظار الحنجرة لأعلى لتحريك لسان المزمار بطنيا وتصور الحبال الصوتية. في بعض الأحيان ، قد يلتصق لسان المزمار بالحنك الرخو. في هذه الحالة ، قم بتعبئتها عن طريق التمرير برفق جانبيا باستخدام الأنبوب أو البوجي.</li>
		<li>أدخل بعناية أنبوب القصبة الهوائية من خلال الحبال الصوتية وإزالة المحفز. إذا واجهت صعوبة ، فحاول تدوير الأنبوب دون استخدام القوة المفرطة. إذا لزم الأمر ، استخدم أنبوبا أصغر. بمجرد وضع الأنبوب في مكانه ، قم بنفخ الكفة ب 10 مل من الهواء.</li>
	</ol></li>
	<li>قم بتوصيل الأنبوب الرغامي بجهاز التنفس الصناعي وابدأ التهوية. تأكد من وضع الأنبوب المناسب عن طريق الكشف عن ثاني أكسيد الكربون2 الزفيري النهائي وإجراء التسمع الثنائي. استخدم إعدادات التهوية التالية: FiO2 = 40٪ ، حجم المد والجزر = 6-8 مل كجم -1 ، PEEP = 5 ملي بار ، نسبة الإلهام إلى انتهاء الصلاحية = 1: 2 ، معدل التنفس = معدل المعدل لتحقيق مستوى CO2 في نهاية المد والجزر من &lt;45 مم زئبق ، عادة 30-40 دقيقة -1 . ملاحظة: إذا تم وضع الأنبوب بشكل غير صحيح في المريء ، فسوف ينفخ الهواء المعدة ، مما يتسبب في انتفاخ مرئي. في مثل هذه الحالات ، قم بإزالة الأنبوب على الفور ، وإدارة التهوية غير الغازية لمدة 1-2 دقيقة ، وإعادة وضع الأنبوب بشكل صحيح.</li>
	<li>أدخل أنبوبا معديا لمنع الارتجاع أو القيء. إذا ثبت أن الإدخال يمثل تحديا، فاستخدم منظار الحنجرة للحصول على رؤية أفضل لمدخل المريء.</li>
</ol>3. الأجهزة
<ol><li>ضع خطا شريانيا ووريديا مركزيا في الشريان الفخذي والوريد ، على التوالي ، لمراقبة الدورة الدموية والعلاج بالحجم الوريدي.</li>
	<li>استخدم الضمادات لسحب وتأمين الساقين الخلفيتين ، مما يوفر وصولا أفضل إلى الأوعية الفخذية.</li>
	<li>قم بإعداد جميع المواد اللازمة قبل الأجهزة. املأ جميع القسطرة بمحلول ملحي وتأكد من سهولة الوصول إلى الأسلاك والقسطرة لتقليل الحاجة إلى محاولات قسطرة متعددة وفقدان الدم غير الضروري.</li>
	<li>ضع مطهرا كحوليا على المنطقة الأربية وامسحها بمسحة معقمة. كرر هذه العملية مرتين. ضع المطهر مرة أخرى دون مسح وانتظر لمدة 3 دقائق. ضع ثنى معقم على المنطقة الأربية.</li>
	<li>استخدم الموجات فوق الصوتية لتحديد الأوعية الدموية الفخذية. استخدم تقنية Seldinger الموجهة بالموجات فوق الصوتية داخل الطائرة للقسطرة لتقليل تلف الأنسجة وفقدان الدم.</li>
	<li>تصور الشريان الفخذي طوليا. ثقب الشريان مع حقنة تعلق على الإبرة للطموح المستمر. أحمر مشرق ، الدم النابض يؤكد ثقب الشرايين. أخرج المحقنة وأدخل السلك المحضر. قم بإزالة الإبرة مع ترك السلك في مكانه.</li>
	<li>كرر نفس الإجراء للوريد الفخذي. يتم تأكيد البزل الوريدي عن طريق الدم الأحمر الداكن بطيء التدفق.</li>
	<li>تأكد من الموضع الصحيح لكلا السلكين من خلال تصور كلا الأوعية الفخذية باستخدام الموجات فوق الصوتية.</li>
	<li>استخدم تقنية Seldinger لإدخال غمد المدخل الشرياني أولا ، متبوعا بغمد الإدخال الوريدي. تأكيد الوضع المناسب من خلال تحليل غازات الدم لعينات الدم المسحوبة من الخطين.</li>
	<li>تأكد من إمكانية استنشاق الدم من جميع الخطوط. اغسل جميع الخطوط بمحلول ملحي لمنع تكوين الجلطة.</li>
	<li>ثبت الخطوط على الجلد بإحكام باستخدام الغرز الجراحية لمنع الخلع.</li>
	<li>قم بتوصيل الخطوط الوريدية الشريانية والمركزية بمحولات الطاقة لقياس معلمات الدورة الدموية.</li>
	<li>أدخل قسطرة نبض القلب (PiCCO) في غلاف الإدخال الشرياني وقم بتوصيله بمحول الضغط الشرياني وكابل واجهة درجة الحرارة لجهاز PiCCO.</li>
	<li>قم بتوصيل قسطرة Swan-Ganz بمحول الطاقة.<ol><li>أثناء قياس الضغط باستمرار ، أدخل القسطرة في غلاف الإدخال الوريدي المركزي. نفخ البالون بعد حوالي 30 سم ، عندما يصبح منحنى الضغط الوريدي المركزي مرئيا.</li>
		<li>تقدم القسطرة ببطء أثناء مراقبة منحنى الضغط. عندما تدخل القسطرة إلى البطين الأيمن ، ابحث عن منحنى نبضي ذو قيمة انقباضية عالية ومنخفضة الانبساطي. سيؤدي المزيد من التقدم في القسطرة إلى قيمة انقباضية ثابتة وزيادة القيمة الانبساطية ، مما يشير إلى وضعها في الشريان الرئوي.</li>
		<li>ثبت القسطرة في هذا الوضع (عادة بين 50 و 70 سم). قم بتوصيل مستشعر درجة حرارة الحقن لنظام PiCCO بالتجويف القريب لقسطرة Swan-Ganz.</li>
	</ol></li>
	<li>احلق جبين الخنزير وضع قطب المستشعر اللاصق لقياس تشبع الأكسجين الإقليمي الدماغي.</li>
	<li>بعد تحريض التخدير والأجهزة ، اسمح للحيوان بالاستقرار لمدة 30 دقيقة أو حتى تستقر معلمات الدورة الدموية قبل إجراء قياسات خط الأساس وإحداث صدمة التسمم الداخلي.</li>
</ol>4. صدمة التعريفي
ملاحظة: عند العمل مع LPS ، ارتد دائما قفازات ونظارات واقية وقناعا ومعطفا للمختبر. تجنب الاتصال المباشر مع LPS.
<ol><li>تحضير محلول LPS بتركيز 100 ميكروغرام mL-1 عن طريق إذابة 5 ملغ من LPS في 50 مل من 0.9 ٪ كلوريد الصوديوم.</li>
	<li>احصل على قياسات الدورة الدموية الأساسية مباشرة قبل بدء ضخ LPS.</li>
	<li>تطبيق جرعة 150 ميكروغرام كغ-1 من LPS خلال 30 دقيقة (أي ما يعادل معدل تسريب مستمر يبلغ 300 ميكروغرام كغ-1∙h-1 لمدة 30 دقيقة).</li>
	<li>بعد 30 دقيقة ، قلل معدل التسريب إلى 15 ميكروغرام ∙ كجم -1∙ ساعة -1 لبقية التجربة.</li>
	<li>مراقبة المعلمات الدورة الدموية باستمرار ، بما في ذلك ضغط الدم الشرياني الشرياني والرئوي ، ومعدل ضربات القلب ، ومعلمات التهوية. مراقبة درجة حرارة الجسم باستمرار للحفاظ على الحرارة الطبيعية.</li>
</ol>5. علاج عدم استقرار الدورة الدموية
<ol><li>عندما ينخفض متوسط ضغط الدم الشرياني إلى أقل من 60 مم زئبق ، استخدم PiCCO لقياس مؤشر القلب (CI) ، ومؤشر الحجم الانبساطي العالمي (GEDI) ، ومؤشر ماء الرئة خارج الأوعية الدموية (ELWI). عالج انخفاض ضغط الدم وفقا للتوصيات الواردة في مخطط التدفق في الشكل 2.<ol><li>على شاشة PiCCO ، اضغط على زر التخفيف الحراري (TD).</li>
		<li>اضغط على زر إدخال الضغط الوريدي المركزي (CVP) وأدخل قيمة CVP الحالية.</li>
		<li>اضغط على زر البدء .</li>
		<li>عند طلب منك القيام بذلك ، قم بحقن 10 مل من محلول ملحي بارد في مستشعر درجة حرارة الحقن المتصل بقسطرة Swan-Ganz. ملاحظة: لا تحقن أي شيء آخر مباشرة قبل أو أثناء قياس PiCCO لأن هذا من شأنه أن يضر بالقياس.</li>
	</ol></li>
	<li>بعد الحصول على قياسات CI و GEDI و ELWI ، عالج عدم استقرار الدورة الدموية وفقا لمخطط التدفق في الشكل 2. إذا كان يوصى بتحميل الحجم ، فقم بضخ 200 مل من محلول الإلكتروليت المتوازن بسرعة. إذا كان العلاج بالكاتيكولامين موصى به ، فقم بزيادة معدل ضخ النورإبينفرين بمقدار 1 ميكروغرام كجم -1 ساعة -1.</li>
	<li>كرر هذه العملية كلما انخفض متوسط ضغط الدم الشرياني إلى أقل من 60 مم زئبق. في حالة عدم استقرار الدورة الدموية الشديد ، اختر التصعيد السريع للعلاج.</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66039/66039fig02.jpg"> الشكل 2: العلاج الموجه ب PiCCO لعدم استقرار الدورة الدموية. بعد الحصول على قياسات CI و GEDI و ELWI ، قم بتطبيق العلاج وفقا للرسم البياني. تم تكييف هذا الرقم من دليل مستخدم PiCCO12. الاختصارات: PiCCO = نبض كفاف النتاج القلبي. V + = تحميل الحجم ؛ القط = العلاج الكاتيكولامين. V- = تخفيض الحجم ؛ CI = مؤشر القلب. GEDI = مؤشر حجم نهاية الانبساطي العالمي ؛ ELWI = مؤشر مياه الرئة خارج الأوعية الدموية. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66039/66039fig02large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
6. نهاية التجربة والقتل الرحيم
<ol><li>حقن 0.5 ملغ من الفنتانيل عن طريق الوريد. انتظر 5 دقائق. حقن 200 ملغ من البروبوفول.</li>
	<li>القتل الرحيم للخنزير بحقن سريع قدره 40 مل من كلوريد البوتاسيوم 1 متر عبر الخط الوريدي المركزي.</li>
</ol>

تحريض الدم الداخلي المعتمد على الجرعة في الخنازير عن طريق ضخ LPS

<ol><li>Vincent, J. -L., Jones, G., David, S., Olariu, E., Cadwell, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Frequency+and+mortality+of+septic+shock+in+Europe+and+North+America%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Care%22%5BJournal%5D)">Frequency and mortality of septic shock in Europe and North America: a systematic review and meta-analysis.</a> Critical Care. 23 (1), 196(2019).</li>
<li>Reinhart, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recognizing+sepsis+as+a+Global+Health+Priority+-+A+WHO+Resolution%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Recognizing sepsis as a Global Health Priority - A WHO Resolution.</a> New England Journal of Medicine. 377 (5), 414-417 (2017).</li>
<li>Cecconi, M., Evans, L., Levy, M., Rhodes, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sepsis+and+septic+shock%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Sepsis and septic shock.</a> The Lancet. 392 (10141), 75-87 (2018).</li>
<li>Font, M. D., Thyagarajan, B., Khanna, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sepsis+and+septic+shock+-+basics+of+diagnosis%2C+pathophysiology+and+clinical+decision+making%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Sepsis and septic shock - basics of diagnosis, pathophysiology and clinical decision making.</a> Medical Clinics of North America. 104 (4), 573-585 (2020).</li>
<li>Singer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Third+International+Consensus+definitions+for+sepsis+and+septic+shock+%28Sepsis-3%29%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">The Third International Consensus definitions for sepsis and septic shock (Sepsis-3).</a> JAMA. 315 (8), 801(2016).</li>
<li>Jerala, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+biology+of+the+LPS+recognition%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Medical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Structural biology of the LPS recognition.</a> International Journal of Medical Microbiology. 297 (5), 353-363 (2007).</li>
<li>Copeland, S., Warren, H. S., Lowry, S. F., Calvano, S. E., Remick, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation+and+the+host+response+to+injury+investigators+acute+inflammatory+response+to+endotoxin+in+mice+and+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Diagnostic+Laboratory+Immunology%22%5BJournal%5D)">Inflammation and the host response to injury investigators acute inflammatory response to endotoxin in mice and humans.</a> Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 12 (1), 60-67 (2005).</li>
<li>Dickson, K., Lehmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+response+to+different+toxins+in+experimental+sepsis+models%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Inflammatory response to different toxins in experimental sepsis models.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20 (18), 4341(2019).</li>
<li>Bassols, A., Costa, C., Eckersall, P. D., Osada, J., Sabrià, J., Tibau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pig+as+an+animal+model+for+human+pathologies%3A+A+proteomics+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22PROTEOMICS+-+Clinical+Applications%22%5BJournal%5D)">The pig as an animal model for human pathologies: A proteomics perspective.</a> PROTEOMICS - Clinical Applications. 8 (9-10), 715-731 (2014).</li>
<li>Meurens, F., Summerfield, A., Nauwynck, H., Saif, L., Gerdts, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pig%3A+a+model+for+human+infectious+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">The pig: a model for human infectious diseases.</a> Trends in Microbiology. 20 (1), 50-57 (2012).</li>
<li>Ali, J., Cody, J., Maldonado, Y., Ramakrishna, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near-infrared+spectroscopy+%28NIRS%29+for+cerebral+and+tissue+oximetry%3A+analysis+of+evolving+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiothoracic+and+Vascular+Anesthesia%22%5BJournal%5D)">Near-infrared spectroscopy (NIRS) for cerebral and tissue oximetry: analysis of evolving applications.</a> Journal of Cardiothoracic and Vascular Anesthesia. 36, 2758-2766 (2022).</li>
<li>Getinge Deutschland GmbH PiCCO Technologie Erweitertes hämodynamisches Monitoring auf höchstem Niveau. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.getinge.com/dam/hospital/documents/german/picco_haemodynamisches_monitoring_broschuere-de-non_us.pdf">https://www.getinge.com/dam/hospital/documents/german/picco_haemodynamisches_monitoring_broschuere-de-non_us.pdf</a> (2023).</li>
<li>Breslow, M. J., Miller, C. F., Parker, S. D., Walman, A. T., Traystman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+vasopressors+on+organ+blood+flow+during+endotoxin+shock+in+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Effect of vasopressors on organ blood flow during endotoxin shock in pigs.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 252 (2), H291-H300 (1987).</li>
<li>Fink, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+and+mesenteric+O2+metabolism+in+endotoxic+pigs%3A+effect+of+ibuprofen+and+meclofenamate%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">Systemic and mesenteric O2 metabolism in endotoxic pigs: effect of ibuprofen and meclofenamate.</a> Journal of Applied Physiology. 67 (5), Bethesda, Md. 1950-1957 (1989).</li>
<li>Lado-Abeal, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipopolysaccharide+%28LPS%29-induced+septic+shock+causes+profound+changes+in+myocardial+energy+metabolites+in+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Metabolomics%22%5BJournal%5D)">Lipopolysaccharide (LPS)-induced septic shock causes profound changes in myocardial energy metabolites in pigs.</a> Metabolomics. 14 (10), 131(2018).</li>
<li>Park, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+fecal+peritonitis-induced+sepsis+in+a+porcine+model%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Characterization of fecal peritonitis-induced sepsis in a porcine model.</a> The Journal of Surgical Research. 244, 492-501 (2019).</li>
<li>Jarkovska, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+rate+variability+in+porcine+progressive+peritonitis-induced+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Heart rate variability in porcine progressive peritonitis-induced sepsis.</a> Frontiers in Physiology. 6, 412(2015).</li>
<li>Kohoutova, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vagus+nerve+stimulation+attenuates+multiple+organ+dysfunction+in+resuscitated+porcine+progressive+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Vagus nerve stimulation attenuates multiple organ dysfunction in resuscitated porcine progressive sepsis.</a> Critical Care Medicine. 47 (6), e461-e469 (2019).</li>
<li>Vintrych, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+sepsis%2C+with+a+special+focus+on+large+animal+models+of+porcine+peritonitis+and+bacteremia%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Modeling sepsis, with a special focus on large animal models of porcine peritonitis and bacteremia.</a> Frontiers in Physiology. 13, 1094199(2022).</li>
<li>Stengl, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+L-type+calcium+current+in+ventricular+myocytes+from+pigs+with+hyperdynamic+septic+shock%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Reduced L-type calcium current in ventricular myocytes from pigs with hyperdynamic septic shock.</a> Critical Care Medicine. 38 (2), 579-587 (2010).</li>
</ol>

تم توفير جهاز NIRS دون قيد أو شرط من قبل Medtronic PLC ، الولايات المتحدة الأمريكية ، لأغراض البحث التجريبي. تلقى ألكسندر زيبارت رسوم محاضرة من شركة ميدترونيك PLC. لم يبلغ أي من المؤلفين عن أي تضارب في المصالح المالية أو غيرها. تم تدقيق المخطوطة وتحريرها بواسطة ChatGPT® (برنامج Python ، الإصدار: 24 مايو 2023).

نقدم بروتوكولا لإحداث تسمم داخلي تجريبي في الخنازير من خلال ضخ LPS ، بهدف إحداث تغييرات موثوقة شائعة في الإنتان والصدمة الإنتانية. يجب النظر في العديد من الخطوات الحاسمة في هذا البروتوكول. يعد التخدير الكافي للخنازير قبل النقل أمرا بالغ الأهمية لمنع ارتفاع مستويات الكاتيكولامين الناجم عن الإجهاد ، مما قد يضر بالنتائج. قد يشكل تنبيب الخنازير تحديات مقارنة بالبشر بسبب السمات التشريحية لأنفهم الممدود. لمعالجة هذا الأمر ، نوصي باستخدام شفرة Macintosh للتنبيب ، ويجب أن يكون الأنبوب الرغامي مزودا بمحفز مستقيم. من الشائع أن يلت...

يصنف الإنتان والصدمة الإنتانية من بين الأسباب الرئيسية للوفيات في المرضى الذين يتلقون علاج العناية المركزة1،2،3. ينشأ الإنتان عندما تؤدي العدوى إلى استجابة مناعية غير منظمة مما يؤدي إلى فشل متعدد الأعضاء. يتميز بأعراض تهدد الحياة ، بما في ذلك عدم استقرار الدورة الدموية ، وضيق التنفس ، والفشل الكبدي والكلوي ، وكذلك الضعف الإدراكي 4,5. تمثل الصدمة الإنتانية مجموعة فرعية من الإنتان مع أعراض حادة بشكل خاص تزيد بشكل كبير من معدل الوفيات. تشمل هذه الأعراض انخفاض ضغط الدم المستمر الذي يتطلب علاجا بخافض للأوعية ومستوى لاكتات المصل يتجاوز 2 مليمول ∙L-1 4,5. قدرت معدلات الوفيات في المرضى الذين يعانون من الصدمة الإنتانية بنسبة تصل إلى 40٪ ، حتى مع العلاج في المستشفى1،3،5. 
غالبا ما تسبب البكتيريا سالبة الجرام ، مثل Pseudomonas و Escherichia coli ، التهابات تؤدي إلى هذه الاستجابة المناعية غير المنظمة4. الآليات الفيزيولوجية المرضية الأساسية معقدة وغير مفهومة تماما بعد. يتضمن أحد الجوانب الموصوفة جيدا تنشيط المستقبلات الشبيهة بالحصيلة على الخلايا المناعية بواسطة الأنماط الجزيئية المرتبطة بمسببات الأمراض (PAMPs) ، مما يؤدي إلى إطلاق السيتوكينات مثل عامل نخر الورم ألفا (TNFα) أو Interleukin 1 (IL 1) 4. أحد هذه PAMPs هو عديد السكاريد الدهني (LPS) ، والذي يشكل مكونا من غشاء الخلية في البكتيريا سالبةالجرام 6. تم استخدام LPS في النماذج الحيوانية للحث على التسمم الداخلي وصدمة التسمم الداخلي 7,8.
توفر النماذج الحيوانية بيئة خاضعة للرقابة وموحدة لتطوير استراتيجيات العلاج الجديدة والتحقيق فيها. نظرا لتشريحه المماثل ، وعلم وظائف الأعضاء المناعي ، ومعلمات الدورة الدموية المماثلة ، فإن نموذج الخنزير مناسب بشكل خاص لدراسة آثار صدمة التسمم الداخلي 9,10. علاوة على ذلك ، يمكن تطبيق المعدات الطبية القياسية المستخدمة بشكل شائع في المرضى من البشر بسهولة في الخنازير نظرا لالحجم المماثل للممرات الهوائية والأوعية الدموية ، مما يسهل الأجهزة ومراقبة الدورة الدموية.
باستخدام هذا البروتوكول ، نقدم نموذجا تجريبيا لصدمة التسمم الداخلي في الخنازير عن طريق حقن LPS المشتق من الإشريكية القولونية عن طريق الوريد. لمراقبة الآثار ، قمنا بقياس المعلمات الديناميكية الدموية والرئوية ، بما في ذلك ضغط الدم الشرياني ومعدل ضربات القلب وتشبع الأكسجين المحيطي والضغط الشرياني الرئوي وضغط مجرى الهواء. لتقييم تأثير التسمم الداخلي على إمدادات الأكسجين الدماغي ، استخدمنا قياس الطيف القريب من الأشعة تحت الحمراء (NIRS). باستخدام هذه الطريقة ، يمكن تقييم تشبع الأكسجين الدماغي عبر قطب كهربائي لاصق مطبق على الجبهة11.

<table><tbody><tr><td>Atracurium Hikma 50 مجم / 5 مل</td><td>Hikma Pharma GmbH ، Martinsried</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Azaperone (Stresnil) 40 مجم / مل</td><td>Lilly Deutschland GmbH ، باد هومبورغ ، ألمانيا</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD Discardit II Spritze 2 ، 5 ، 10 ، 20 مل</td><td>Becton Dickinson S.A. Carretera ، Mequinenza Fraga ،</td><td>حقنة</td><td></td>إسبانيا</tr><tr><td>BD Luer Connecta & nbsp ؛</td><td>بكتون ديكنسون العلاج بالتسريب ، AB Helsingborg ، Schweden</td><td>3-way-stopcock</td><td></td></tr><tr><td>Curafix i.v. كلاسيكيات</td><td>Lohmann & Rauscher International GmbH & شركة KG ، Rengsdorf ، ألمانيا</td> ضمادة <td></td><td>الاحتفاظ بالقنية</td></tr><tr><td>Datex Ohmeda S5</td><td>GE Healthcare Finland Oy ، هلسنكي ، فنلندا</td><td>مراقب</td><td></td>الديناميكية</tr><tr><td>الدموية Engstr & ouml ؛ م Carestation</td><td>GE Heatcare ، جهاز التنفس</td><td></td><td></td>الصناعي ماديسون الولايات المتحدة الأمريكية</tr><tr><td>Fentanyl-Janssen 0.05 مجم / مل</td><td>Janssen-Cilag GmbH ، Neuss</td><td>fentanyl</td><td></td></tr><tr><td>F &uuml ؛ hrungsstab ، Durchmesser 4.3</td><td>R & uuml. sch</td> أنبوب <td></td><td>القصبة الهوائية</td></tr> مقدمة <tr><td>Incetomat-line 150 سم</td><td>Fresenius, Kabi Deutschland, GmbH</td><td>perfusor line</td><td></td></tr><tr><td>Intrafix Primeline</td><td>B. Braun Melsungen AG, Melsungen, Germany</td><td>Infusion line</td><td></td></tr><tr><td>Introducer غمد 5 Fr.Terumo</td> <td>Healthcare</td><td>الشرايين مقدمة &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>INVOS</td><td>Medtronic ، دبلن ، أيرلندا</td><td>بالقرب من قياس</td><td></td>الطيف بالأشعة تحت الحمراء</tr><tr><td>JOZA Einmal Nitril Untersuchungshandschuhe&nbsp;</td><td>جوزا ، إم & أومل. nchen ، ألمانيا</td><td>قفازات</td><td></td>يمكن التخلص منها</tr><tr><td>منظار الحنجرة ، 45.48.50 ، KL 2000</td><td>مقبض</td><td></td>منظار الحنجرة <td>Medicon</td></tr><tr><td>Littmann Classic III سماعة الطبيب</td><td>3M Deutschland GmbH ، Neuss ، سماعة</td><td></td><td></td>الطبيب الألمانية</tr><tr><td>LPS (الإشريكية القولونية ؛ النمط المصلي O111: B4)</td> <td>سيجما ألدريتش ، سويسرا</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MAC مجموعة الوصول الوريدي المركزي ثنائي التجويف</td><td>Arrow international inc. القراءة ، بنسلفانيا ، الولايات المتحدة الأمريكية</td><td>مقدمة</td><td></td>وريدية</tr><tr><td>Mimp Vlieskompresse</td><td>Maimed GmbH ، Neuenkirchen ، ألمانيا</td><td>ضغط الصوف لإصلاح اللسان</td><td></td></tr><tr><td>Masimo LNCS Adtx SpO2 sensor</td><td>Masimo Corporation Irvine ، Ca 92618 تشبع الولايات المتحدة الأمريكية</td><td> مقطع للذيل</td><td></td></tr><tr><td>Masimo LNCS TC-I SpO2 مستشعر مشبك الأذن</td><td>Masimo Corporation Irvine ، Ca 92618 الولايات المتحدة الأمريكية</td><td>مشبك التشبع للأذن</td><td></td></tr><tr><td>Masimo Radical 7</td><td>Masimo Corporation Irvine ، Ca 92618 الولايات المتحدة الأمريكية</td><td>تشبع الأكسجين المحيطي &nbsp ؛ &nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>ميدازولام 15 مجم / 3 مل</td><td>B.Braun Melsungen AG ، ألمانيا</td><td></td><td></td></tr><tr><td>قناع Midmark بلاستيك صغير مع غشاء FRSCM-0005</td><td>Midmark Corp. ، دايتون ، أوهايو ، الولايات المتحدة الأمريكية</td><td>قناع</td><td></td>تهوية</tr><tr><td>خياطة جراحية أحادية</td><td>اللون جونسون آند أمبير جونسون, بلجيكا</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>B.Braun Melsungen AG, ألمانيا</td><td>محلول</td><td></td>ملحي</tr><tr><td>NaCl 0.9٪</td> <td>Sanofi- Aventis, Seutschland GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Octeniderm farblos</td><td>Sch&uuml; lke & Mayr GmbH ، Nordenstedt ، ألمانيا</td><td>مطهر</td><td></td>كحولي</tr><tr><td>حقنة Perfusor الأصلية 50 مل</td><td>B.Braun Melsungen AG ، ألمانيا</td><td>حقنة</td><td></td>perfusor</tr><tr><td>PA-Katheter Swan Ganz 7.5 Fr 110 cm</td><td>Edwards Lifesciences LLC ، إيرفين كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية</td><td>قسطرة</td><td></td>Swan-Ganz</tr><tr><td>Perfusor FM Braun</td><td>B.Braun Melsungen AG ، ألمانيا</td><td>مضخة</td><td></td>حقنة</tr><tr><td>قسطرة</td> <td>PiCCOPULSION Medical Systems SE و Feldkirchen و DE</td><td></td><td></td></tr><tr><td>كلوريد البوتاسيوم 1 M</td><td>Fresenius و Kabi Germany GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Propofol 2٪ 20 mg / ml (50 mL قوارير)</td> <td>Fresenius و Kabi Deutschland و GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>نظام الانتاج القلبي المستمر PiCCO2</td><td>PULSION Medical Systems SE و Feldkirchen و DE</td><td></td><td></td></tr><tr><td>R & uuml. schelit سوبر سيفتي كلير >معرف 6 / 6.5 / 7.0 مم</td><td>Teleflex Medical Sdn. دينار بحريني ، أنبوب</td><td></td><td>القصبة الهوائية</td> الماليزي</tr><tr><td>Sonosite Micromaxx Ultrasoundsystem</td><td>Sonosite Bothell ، واشنطن ، الولايات المتحدة الأمريكية &nbsp ؛</td><td>الموجات فوق الصوتية&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>غير القابل للصدأ ماكنتوش Gr&ouml; &szlig; ه 4</td> شفرة <td>Welch Allyn69604</td><td>لمنظار</td><td></td>الحنجرة</tr><tr><td>Sterofundin</td><td>B.Braun Melsungen AG ، Melsungen ، ألمانيا</td><td>محلول</td><td></td>المنحل بالكهرباء المتوازن</tr><tr><td>Vasco OP حساس &nbsp ؛</td><td>B.Braun Melsungen AG ، ألمانيا</td><td>قفازات</td><td></td>معقمة</tr><tr><td>Vasofix Safety 22 G-16 G</td><td>B.Braun Melsungen AG ، ألمانيا</td><td>القسطرة الوريدية</td><td></td></tr><tr><td>VBM الكفة Manometer</td><td>VBM Medizintechnik GmbH ، Sulz a.N. ، ألمانيا & nbsp ؛</td>مقياس <td></td><td>ضغط الكفة</td></tr></tbody></table>

تسريب عديد السكاريد الشحمي كنموذج صدمة للسموم الداخلية للخنزير

Lipopolysaccharide Infusion as a Porcine Endotoxemic Shock Model

كثيرا ما تصادف الإنتان والصدمة الإنتانية في المرضى الذين يعالجون في وحدات العناية المركزة (ICUs) وهي من بين الأسباب الرئيسية للوفاة لدى هؤلاء المرضى. وهو ناتج عن استجابة مناعية غير منظمة للعدوى. حتى مع العلاج الأمثل ، تظل معدلات الوفيات مرتفعة ، مما يجعل المزيد من الأفكار حول الفيزيولوجيا المرضية وخيارات العلاج الجديدة ضرورية. عديد السكاريد الشحمي (LPS) هو أحد مكونات غشاء الخلية للبكتيريا سالبة الجرام ، والتي غالبا ما تكون مسؤولة عن العدوى التي تسبب الإنتان والصدمة الإنتانية. 
إن شدة الإنتان والصدمة الإنتانية وارتفاع معدل الوفيات فيها تجعل الدراسات التجريبية الموحدة في البشر مستحيلة. وبالتالي ، هناك حاجة إلى نموذج حيواني لمزيد من الدراسات. الخنزير مناسب بشكل خاص لهذا الغرض لأنه يشبه البشر إلى حد كبير في علم التشريح وعلم وظائف الأعضاء والحجم. 
يوفر هذا البروتوكول نموذجا تجريبيا لصدمة التسمم الداخلي في الخنازير عن طريق ضخ LPS. تمكنا من إحداث تغييرات موثوقة لوحظت بشكل متكرر في مرضى الصدمة الإنتانية ، بما في ذلك عدم استقرار الدورة الدموية وفشل الجهاز التنفسي والحماض. سيسمح ذلك للباحثين باكتساب نظرة ثاقبة قيمة حول هذه الحالة ذات الصلة للغاية وتقييم الأساليب العلاجية الجديدة في بيئة تجريبية.

في هذه الدراسة ، تم تخدير ستة خنازير ذكور سليمة تتراوح أعمارهم بين 2-3 أشهر ووزنها 30-35 كجم وتلقوا ضخ عديد السكاريد الدهني (LPS) للحث على تسمم الدم الداخلي. لتحديد الجرعة المناسبة من LPS المطلوبة للحث باستمرار على أعراض الصدمة ، تم إعطاء الخنازير جرعات تحريضية مختلفة من LPS تتراوح من 100 ميكروغرام كجم -1 إلى 200 ميكروغرام كجم -1 على مدى فترة 30 دقيقة ، تليها جرعة صيانة 1/10 من الجرعة الأولية في الساعة لبقية التجربة. أظهرت جميع علامات الصدمة بعد وقت قصير من ضخ LPS. تمت مراقبة معلمات الدورة الدموية ب...

نحن نقدم بروتوكولا لنموذج صدمة التسمم الداخلي التجريبي في الخنازير عن طريق ضخ عديد السكاريد الدهني.

Sepsis and septic shock are frequently encountered in patients treated in intensive care units (ICUs) and are among the leading causes of death in these ...

مع هذا البروتوكول ، نحث على صدمة تجريبية للتسمم الداخلي في الخنازير. كنا قادرين على التسبب بشكل موثوق في أعراض التسمم الداخلي ، مثل عدم استقرار الدورة الدموية وفشل الجهاز التنفسي. عديد السكاريد الدهني مادة سامة.عند العمل مع عديد السكاريد الدهني ، من الضروري دائما ارتداء القفازات والنظارات الواقية والقناع ومعطف المختبر. يوفر هذا البروتوكول طريقة سهلة وموثوقة للحث على التسمم الداخلي في الدم. بسبب تشريحها وعلم وظائف الأعضاء المتشابهين ، فإن الخنازير مناسبة بشكل خاص لهذا النوع من الأبحاث حيث يمكن استخدام المعدات الطبية القياسية.باستخدام هذا البروتوكول ، سنكون قادرين على دراسة آثار استراتيجيات التهوية المختلفة في فشل الجهاز التنفسي وتلف الرئة أثناء صدمة التسمم الداخلي.

lipopolysaccharide-infusion-as-a-porcine-endotoxemic-shock-model

Research

JoVE Journal

Medicine

الطب

المصدر: رادولوفيتش، ك.، وآخرون. حقن بوليبوليسكاريد في الفئران لمحاكاة دخول المنتجات المشتقة من الميكروبات بعد اختراق الحاجز المعوي. J. Vis. Exp. (2018)يوضح هذا الفيديو إجراء خطوة بخطوة لحقن بوليبوليسكاريد (LPS) في الفئران داخل الصفاق لتحفيز الالتهاب الجهازي.

الحقن داخل الصفاق لدهون بوليسكاريد البكتيري في الفئران لدراسة الاستجابات المناعية الجهازية

الصدمة النزفية هي مضاعفات حادة في المرضى المصابين بجروح خطيرة، مما يؤدي إلى نقص في إمدادات الأكسجين التي تهدد الحياة. نقدم طريقة موحدة للحث على الصدمة النزفية عن طريق سحب الدم في الخنازير التي تسترشد الهيموديناميكا والأوكسجين الدماغي الدورة الدموية الدقيقة.

الحث الموحد للصدمات النزفية مسترشداً بالقياس الأكسجة الدماغية والرصد الهيمودينامي الموسع في الخنازير

هنا ، نقدم نموذجا للسموم الداخلية الموجهة نحو وحدة العناية المركزة القابلة للتكرار في الفئران.

نموذج السموم الداخلية الموجه نحو وحدة العناية المركزة القابلة للتكرار في الفئران

تلعب دوران الحبل الشوكي دورا محوريا في إصابة الحبل الشوكي. معظم الطرق لا تسمح بتقييم في الوقت الحقيقي من دوران الحبل الشوكي، وهو أمر ضروري لتطوير العلاجات الموجهة نحو دوران الأوعية الدقيقة. هنا، نقترح بروتوكول باستخدام الليزر دوبلر تدفق إبرة المسابير في نموذج حيواني كبير من نقص التروية / reperfusion.

في الوقت الحقيقي تقييم النخاع الشوكي Microperfusion في نموذج Porcine من الإقفارية / Reperfusion

يظهر هنا بروتوكول لقياس الأوكسجين الكلوي في النخاع والضغط الجزئي لأكسجين البول غير الباضع في نموذج خنزير صدمة نزفية لتحديد الضغط الجزئي لأكسجين البول كمؤشر مبكر لإصابة الكلى الحادة (AKI) ونقطة نهاية إنعاش جديدة.

مراقبة نقص الأكسجة الكلوي غير الغازية والغازية في نموذج الخنازير للصدمة النزفية

تهدف هذه المقالة إلى تزويد الباحثين بدليل مفصل ويمكن الوصول إليه لإعداد نموذج خنزير للرضع للصدمة النزفية.

وصف نموذج رضيع الخنازير للصدمة النزفية التي يتم التحكم فيها بالحجم

يؤدي غرس حمض الأوليك باستمرار في الشريان الرئوي لخنزير بالغ مخدر إلى فشل تنفسي حاد ، مما يتيح إجراء تجارب خاضعة للرقابة أثناء المعاوضة التنفسية الحادة.

نموذج خنزير للفشل التنفسي الحاد مع التسريب المستمر لحمض الأوليك

تقدم هذه الدراسة نموذجا للانسداد الرئوي (PE) باستخدام صمات ذاتية كبيرة تكرر PE الحاد متوسط الخطورة. النموذج مناسب تماما لتقييم كل من الفيزيولوجيا المرضية واستجابات العلاج.

نموذج خنزير للانسداد الرئوي الذاتي الحاد

في هذه الدراسة، تم إثبات أن تقنية الغرس غير الغازية في الحنجرة تطور ALI في الفئران باستخدام منظار الحنجرة الأساسي لضمان توصيل LPS بدقة إلى الرئتين. يتم حقن LPS عبر أنبوب في القصبة الهوائية باستخدام منظار الحنجرة. يتم تقييم حجم إصابة الرئة في عدة نقاط زمنية.

إعطاء دهنية السكاريد غير الجراحية في القصبة الهوائية لتحفيز إصابة حادة في الرئة لدى القوارض

لقد كان النموذج الصدمة النزفية مورد موثوق بها وقابلة للتكرار تسهيل تحديد وفهم الإشارات شلالات المرتبطة الالتهاب والضرر نهاية الجهاز بعد الصدمة. توفر هذه المقالة وصفا خطوة بخطوة من الجوانب الجراحية والميكانيكية المرتبطة الداخلي الصدمة النزفية التجريبية في الفئران.

حجم ثابت أو ضغط ثابت : نموذج الفئران من الصدمة النزفية

اكتشف بروتوكولاً موثوقاً لإحداث صدمة التسمم الداخلي في الخنازير باستخدام تسريب عديد السكاريد الشحمي. يتيح هذا النموذج دراسة عدم استقرار الدورة الدموية والفشل التنفسي لتطوير علاجات جديدة.

تسريب عديد السكاريد الشحمي كنموذج صدمة للسموم الداخلية للخنزير

استكشف المزيد من الفيديوهات