تقييم انهيار الحاجز الدموي الدماغي في نموذج فأر لإصابات الدماغ الرضحية الخفيفة

نسعى لفهم الآليات المعقدة الكامنة وراء إصابات الدماغ الرضحية الخفيفة الناتجة عن التعرض لموجات الصدمة الناجمة عن الانفجار. نحن نبحث أيضا عن طرق تخفيف هذه الأعراض. لقد كان وصفا شاملا للمرحلة الأولى من انهيار الحاجز الدموي الدماغي بسبب موجات الصدمة الناجمة عن الانفجار منخفضة الشدة.

على وجه التحديد ، يبدأ الانهيار فجأة بعد حوالي ثلاث ساعات من التعرض ، وتخضع الآفات المصابة لإعادة التشكيل لمدة يوم واحد تقريبا بعد ظهورها. تسمح لنا هذه الطريقة بفحص انهيار BBB بمزيد من التفصيل ، مما يوفر مقياسا إضافيا لتقييم فعالية العلاجات المختلفة التي يمكن استخدامها في حالة حدوث انفجار. للبدء ، قم بإعداد أنبوب صدمة لتعريض لموجات الصدمة الناجمة عن الانفجار.

ضع الفأر المخدر على بعد خمسة سنتيمترات من نهاية خروج أنبوب الصدمة، وتأكد من أن محور جسمه مواز لمحور الأنبوب، ولكن لا يتماشى معه. ثم قم بتوصيل موجة صدمة واحدة مع ذروة ضغط زائد تبلغ 25 كيلو باسكال على رأس. بالنسبة لحقن إيفانز الأزرق ، قم بإعداد محلول إيفانز الأزرق بالوزن بنسبة 4٪ من حيث الحجم في محلول ملحي.

دوامة المحلول وتخزينه في الظلام حتى الاستخدام. حقن محلول إيفانز الأزرق في وريد الذيل بجرعة 2.5 ميكرولتر لكل جرام. بعد حشو الفأر المخدر بصبغة FITC-dextern وبارافورمالدهايد ، استخدم المقص الجراحي والملاقط لإزالة الدماغ بعناية.

بعد تثبيت الدماغ طوال الليل في نفس المثبت عند أربع درجات مئوية. في اليوم التالي ، استبدل المثبت ب PBS. للبدء ، احصل على الدماغ الثابت من فأر معالج بالموجات الصدمية بالانفجار محقون بأصباغ إيفانز الزرقاء و FITC-dextran.

قم بإعداد لوح مكون من 24 بئرا يحتوي على 500 ميكرولتر من 20٪ من الجلسرين في مخزن الفوسفات المعدل إلى درجة الحموضة 7.4 في كل بئر. باستخدام قطاعة الدماغ ، قم بتقطيع الدماغ إلى 12 شريحة ، كل منها بسمك ملليمتر واحد. انقل كل شريحة إلى البئر المقابل للوحة 24 بئرا ، وقم بتخزين الطبق عند أربع درجات مئوية لمدة ساعتين على الأقل.

ثم استبدل المحلول بمحلول فوسفات الجلسرين بنسبة 50٪ وقم بتخزينه مرة أخرى عند أربع درجات مئوية لمدة ساعتين على الأقل. أخيرا ، استبدل المحلول ب 100٪ من الجلسرين. للمراقبة المجهرية الفورية ، اترك الشرائح تقف لمدة ساعتين على الأقل في درجة حرارة الغرفة.

أضف 500 ميكرولتر من الجلسرين إلى قاع طبق زجاجي مقاس 35 ملم. انقل شريحة الدماغ إلى محلول الجلسرين وقم بتغطية السطح بغطاء زجاجي. قم بإزالة الجلسرين الزائد من حافة زجاج الغطاء.

قم بقياس شدة التألق للشريحة تحت المجهر الفلوري. بعد القياس المجهري ، أعد الشريحة إلى بئر اللوحة. أضف 500 ميكرولتر من مخزن الفوسفات إلى كل بئر وقم بتخزين الصفيحة المكونة من 24 بئرا عند أربع درجات مئوية طوال الليل.

استبدل المحلول بمحلول فوسفات الجلسرين بنسبة 30٪ واحتضان اللوحة عند أربع درجات مئوية لمدة ساعتين على الأقل قبل إجراء الكيمياء المناعية أظهر وضع العلامات الزرقاء على إيفانز أن انهيار الحاجز الدموي الدماغي أو BBB بدأ في غضون ست ساعات بعد التعرض لموجات الصدمة الانفجارية واستمر لمدة تصل إلى سبعة أيام. اختلفت النقاط الساخنة الفلورية في الحجم والشدة ، حيث تشير النقاط الساخنة الزرقاء فقط في إيفانز إلى انهيار BBB أثناء حقن إيفانز الأزرق وإصلاحه بعد حقن FITC-dextran. ارتبطت مجموعات الخلايا النجمية التفاعلية ارتباطا وثيقا بمواقع انهيار BBB التي أكدتها الكيمياء المناعية.

لوحظت الخلايا الدبقية الصغيرة المنشطة والخلايا الدبقية الصغيرة الأميبية جنبا إلى جنب مع الخلايا النجمية التفاعلية بعد ثلاثة أيام من التعرض للموجات الصدمية للانفجار.