العلاج الجهازي للفئران البالغة بعد الولادة والأحداث والجريان عن طريق حقن الجيوب الأنفية خلف القضيب

يتضمن بحثنا تطوير العلاجات الجينية للاضطرابات الوراثية النادرة على وجه الخصوص مع التركيز على مجموعة من الاضطرابات الأيضية المعروفة باسم حموضات الدم العضوية. الهدف من بحثنا هو تحديد الأساليب التي قد تكون الأنسب للتقدم إلى التجارب السريرية البشرية. تمت الموافقة على العلاجات الجينية المتعددة لعلاج مجموعة متنوعة من الأمراض الوراثية ، وهو ما لم يكن هو الحال قبل عقد من الزمان.

في الواقع ، تم الانتهاء من العديد من التجارب السريرية للعلاج الجيني للحموضة العضوية أو جارية أو مخطط لها. يمكن أن يكون التسليم الجهازي لنماذج النسخ المتطابقة للأمراض الوراثية الشديدة أمرا صعبا لأن الفئران قد لا تصل إلى حجم البالغين. سيسمح بروتوكول الحقن retrobulbar هذا باختبار العلاجات الجينية في نماذج النسخ المتطابق ذات الأنماط الظاهرية الشديدة ونأمل أن يمكن من تطوير علاجات جديدة للمرضى.

للبدء ، قم بتخفيف AAV إلى حجم الحقن المطلوب والتركيز باستخدام PBS معقم في أنبوب طرد مركزي دقيق معقم سعة 1.5 مليلتر لكل حقنة. قبل ملء المحقنة المعقمة ذات الاستخدام الواحد ، حرك المكبس لأعلى ولأسفل عدة مرات لضمان إمكانية الضغط على المكبس بسلاسة. ثم املأ المحقنة بالحجم المطلوب مع التأكد من عدم وجود فقاعات هواء.

إذا كنت تستخدم اليد اليمنى ، ضع الفأر المخدر على جانبه الأيسر مع توجيه الخطم نحو اليد اليمنى لحقن العين اليمنى. بعد ذلك ، ضع قطرة أو قطرتين من مخدر العين على مقلة العين المراد حقنها. باستخدام وسادة شاش ماصة معقمة ، قم بإزالة أي محلول مخدر عيون زائد.

ضعي ضغطا برفق بأطراف الأصابع على الجلد والظهر والبطني على العين لإبرز مقلة عين الفأر جزئيا من التجويف. الآن ، أدخل شطبة الإبرة لأسفل بزاوية 30 درجة في القنثوس الإنسي. اضغط ببطء وسلاسة على مكبس المحقنة لتوصيل الحقن.

أخيرا ، قم بإزالة قناع الوجه من الماوس للسماح بالتعافي من التخدير. لوحظ التعبير عن إنزيم ميثيل مالونيل CoA الطفرة الحمض النووي الريبي في خلايا الكبد مما يشير إلى نجاح الحقن خلف البصلة.