الحقن الأمثل في الوريد في أسماك الزرد البالغة

يستفيد بحثنا من نموذج سمك الزرد لدراسة اضطرابات الدم البشري ، مع التركيز على تحديد المؤشرات الحيوية الجديدة والأهداف العلاجية والعلاجات لحالات مثل سرطان الدم. من خلال الاستفادة من المزايا الفريدة لأسماك الزرد ، نهدف إلى استكشاف الآليات الجزيئية الكامنة وراء أمراض الدم وتطوير استراتيجيات علاجية مبتكرة لتحسين نتائج المرضى. يمثل الحقن الوريدي في أسماك الزرد البالغة أمرا صعبا نظرا لصغر حجمها والأوعية الدموية المعقدة.

لقد طورنا طريقة حقن وريدية محسنة لتوصيل المواد أو الخلايا بدقة وكفاءة إلى أسماك الزرد البالغة. بالمقارنة مع الحقن داخل القلب والحقن الرجعي ، أدت الطريقة الوريدية التي نقدمها هنا إلى بقاء أفضل للأسماك ونقش أفضل للخلايا. هذه الطريقة تجعل الزرد البالغ أكثر قابلية للاستخدام في الدراسات غير المصطلحة.

للتغلب على بعض حدود النماذج الجديدة ، تزيد تقنية IV المحسنة من دقة نماذج المرض وفحوصات الأدوية ، مما يساعد على تطوير علاجات جديدة. للبدء ، ضع أسماك الحمار الوحشي المعدلة وراثيا mpo: EGFP على طاولة تشريح. تشريح أسماك الحمار الوحشي لعزل نخاع الكلى.

ثم انقل نخاع الكلى إلى أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 مل يحتوي على وسط تعليق الخلية. ماصة المعلق لتفكيك خلايا نخاع الكلى. قم بتصفية تعليق الخلية من خلال مصفاة خلايا نايلون 40 ميكرومتر.

ثم قم بالطرد المركزي للخلايا عند 500 جرام لمدة ثماني دقائق وتخلص من المادة الطافية ، قبل إعادة تعليق الحبيبات في 500 ميكرولتر من وسط تعليق الخلية. باستخدام عداد الخلايا الآلي ، قم بحساب الخلايا بمقدار 10 ميكرولتر. اغسل حقنة هاميلتون جيدا ثلاث إلى أربع مرات باستخدام 75٪ من الإيثانول.

ثم اشطف المحقنة ثلاث إلى أربع مرات بالماء فائق النقاء لضمان إزالة جميع بقايا الإيثانول. بعد إعطاء التخدير لسمك الزرد ، تأكد من عمق التخدير عن طريق تناقص الحركة وفقدان الاستجابات الانعكاسية. ضع الجانب الظهري للسمكة لأعلى مع توجيه الرأس إلى اليسار على مناديل ورقية رطبة نظيفة لتثبيتها للحقن.

أمسك حقنة هاميلتون بإحكام وزاوية الإبرة بحوالي 45 درجة على الوريد الذيلي. بالنسبة لسمك الزرد Casper ، استهدف جزءا مرئيا من الوعاء من خلال الجسم الشفاف. أدخل الإبرة برفق في الوعاء وقم بإدارة ميكرولتر من خلايا نخاع الكلى الكاملة المعزولة من mpo: EGFP الزرد المعدلة وراثيا.

بعد الحقن ، ضع ضغطا برفق على موقع الحقن باستخدام برعم قطني لمدة 10 ثوان للسيطرة على النزيف. راقب سمكة الزرد المحقونة تحت المجهر لتأكيد إشارات GFP داخل السفينة. اسمح لسمك الزرد المحقون بالتعافي في ماء السمك المعقم حديثا لمدة 10 دقائق.

ثم انقل السمكة إلى خزان ثابت. أسفرت طريقة الحقن عن طريق الوريد عن أعلى معدل نجاح مع إشارات GFP المرئية في 41 من أصل 43 سمكة. في حين أن الطريقة المدارية الرجعية قد تم اكتشافها في ثلاثة فقط من أصل 37 سمكة وأظهرت الطريقة داخل القلب نجاحا في 11 من أصل 40 سمكة.

أدت طريقة الحقن الوريدي إلى معدلات بقاء أفضل في الأسماك المحقونة ، خاصة مع جرعات الخلايا الأعلى مقارنة بالطرق الرجعية الحجاجية وداخل القلب. تم الكشف عن إشارات GFP في وقت مبكر من اليوم الثالث بعد الزرع في الأسماك المحقونة في الوريد بينما أظهرت الطرق المدارية الرجعية وداخل القلب تأخر ظهور إشارة GFP. بحلول اليوم 17 ، عرضت الأسماك المحقونة عن طريق الوريد أبرز إشارات GFP في نخاع الكلى.

أظهر قياس التدفق الخلوي لنخاع الكلى حوالي 18٪ من الخلايا الإيجابية في الأسماك المحقونة في الوريد مع ثلاثة أضعاف 10 إلى قوة خمس خلايا تتماشى مع مستويات GFP في نخاع الكلى المتبرع. في المقابل ، أظهرت الطرق داخل القلب والحجاج الرجعي 5٪ و 2٪ خلايا إيجابية GFP على التوالي.