إنشاء نموذج الفئران لارتفاع ضغط الدم الشرياني الرئوي المرتبط بالتليف الرئوي والتحقق من صحته

يبحث هذا البحث في التسبب في ارتفاع ضغط الدم الرئوي من المجموعة الثالثة ، مع التركيز على الآليات الجزيئية في حالة الارتباط بالتليف الرئوي. على عكس ارتفاع ضغط الدم الشرياني الرئوي ، لا تزال الآليات الكامنة وراء ارتفاع ضغط الدم الرئوي الخلالي المرتبط بمرض الرئة الخلالي غير مفهومة جيدا. تشمل التطورات الأخيرة في هذا المجال الفعالية في عكس إعادة تشكيل الأوعية الدموية. اكتشاف الأنماط الظاهرية للبطانة الشبيهة بالسرطان ونتائج التمثيل الغذائي ، وربط الأحماض الأمينية وخلل تنظيم الدهون بالتسبب في ارتفاع ضغط الدم الرئوي. تعد عمليات التمثيل الغذائي المتسلسلة السائبة وحيدة الخلية I-A والمقايسات الوظيفية ، مثل اختبار مقاومة الحالة المزعجة ، تقنيات محورية لرسم خرائط لارتفاع ضغط الدم الرئوي ، وعدم التجانس ، وتحديد الأهداف العلاجية.

[مدرب] للبدء ، قم بتنبيب القصبة الهوائية للفأر باستخدام أنبوب PE-50 ، يتم إدخاله على عمق ثلاثة سنتيمترات ، وهي المسافة من المزمار إلى نهاية الأنبوب. باستخدام حقنة سعة مليلتر واحد بإبرة قياس 26 ، اسحب 0.2 مل من البيوميسين وحقنها في مجرى الهواء من خلال قنية كجرعة واحدة. ضع الجرذ في وضع ضعيف لضمان التوزيع المتساوي للبليومايسين. أمسك الفئران برفق وقم بتدويرها ببطء ، بالتناوب بين الجانبين بزاوية 30 درجة إلى 45 درجة. حافظ على كل دورة لمدة 10 إلى 15 ثانية وكرر ثلاث إلى أربع مرات. افتح برنامج PFT وتحقق من التعرف على الجهاز. الآن قم بتشغيل مفتاح أداة التحكم الرئيسي وتأكد من إيقاف تشغيل كل مفتاح مضخم إشارة. لضبط تدفق الهواء ، قم بتشغيل صامولة تنظيم تدفق الهواء للشفط واضبط الإلهام على خمسة. ثم قم بتشغيل صامولة تنظيم تدفق الهواء الزفير واضبط الزفير البطيء على أربعة تحت الصفر. اضبط قيمة الضغط على 60. قم بمعايرة الجهاز بترتيب تدفق FRC ، والتدفق ، والتدفق العالي ، وضغط الرئة بخطأ أقل من 5٪. بعد تخدير الفئران ، قم بقص الجلد على طول منتصف الرقبة. افصل العضلات طبقة تلو الأخرى لكشف الجزء العلوي من القصبة الهوائية العنقية. قم بعمل شق أفقي بين حلقات غضروف القصبة الهوائية. أدخل القنية المعدنية بسرعة في شق القصبة الهوائية ، مما يضمن الوضع الصحيح ، وقم بتثبيتها بأربع خيوط خيوط حريرية صفرية. ضع الجرذ في حجرة PFT وقم بتوصيل قنية القصبة الهوائية بواجهة قناة تدفق الهواء خارج الجهاز. انقر فوق زر البدء وافحص السعة الحيوية القسرية أو FVC والامتثال الديناميكي للرئة. للكشف عن الضغط الانقباضي للبطين الأيمن ، أو RVSP ، قم بإصلاح بطن الجرذ المخدر لأعلى على المقعد التجريبي. قم بعمل شق بطول حوالي أربعة سنتيمترات على الجانب الأيمن من الرقبة باستخدام مقص جراحي. افصل الوريد الوداجي الخارجي برفق باستخدام ملقط جراحي مجهري ، مع ضمان عزل طول حوالي سنتيمتر واحد. أدخل خطين جراحيين في الأطراف البعيدة والقريبة من الوريد المنفصل. اربط الطرف البعيد للوريد الوداجي الخارجي باستخدام أربعة خيوط حريرية صفرية. ارفع الخط الجراحي القريب برفق وضعه على جدار الوريد البعيد. قم بعمل شق صغير يبلغ حوالي 0.3 ملم بمقص صغير. بعد إدخال أنبوب PE-50 في الوريد الوداجي الخارجي ، قم بربط أنبوب PE-50 والوريد معا باستخدام أربعة خيوط حريرية صفرية لمنع تسرب الدم. راقب شكل موجة الضغط الوريدي على المسجل. ادفع القسطرة ببطء إلى الأذين الأيمن، ودفعها إلى البطين الأيمن لإظهار شكل موجة ضغط البطين الأيمن. عندما يكون الضغط مستقرا ، سجل الضغط البطيني الأيمن لمدة دقيقة واحدة واحفظ البيانات للتحليل. بعد بضع الصدر ، قم بإزالة قلب الفئران السليم باستخدام الملقط. قطع أوراكل والنسيج الضام بالقرب من القلب بالمقص. قطع الجدار الحر للبطين الأيمن على طول الشريان الرئوي. هذا النسيج هو البطين الأيمن والأنسجة المتبقية هي البطين الأيسر بالإضافة إلى الحاجز البطيني. بعد الانفصال ، قم بتصريف سطح البطين الأيمن والبطين الأيسر بالإضافة إلى الحاجز داخل البطين باستخدام ورق الترشيح. قم بوزن البطين الأيمن والبطين الأيسر بالإضافة إلى الحاجز البطيني بشكل منفصل باستخدام ميزان تحليلي قبل حساب نسبة وزنهما. يوضح هذا الشكل التغيرات الديناميكية الدموية ، وإعادة تشكيل الأوعية الدموية الرئوية ، وضعف وظائف الرئة التي لوحظت في نموذج الفئران PF PH الناجم عن البليومايسين. زاد الضغط الانقباضي للبطين الأيمن والبطين الأيمن إلى البطين الأيسر بالإضافة إلى نسبة الحاجز بشكل ملحوظ في المجموعة النموذجية مقارنة بالمجموعة الضابطة. كشف التلوين النسيجي عن المزيد من المناطق الملطخة باللون الأزرق حول الشرايين الرئوية في المجموعة النموذجية ، مما يشير إلى تراكم أكبر للكولاجين. انخفضت القدرة الحيوية القسرية والامتثال الديناميكي للرئة بشكل كبير في المجموعة النموذجية مقارنة بالمجموعة الضابطة. انخفضت نسب وقت تسريع الشريان الرئوي إلى وقت القذف ، والرحلة الانقباضية ذات المستوى الحلقي ثلاثي الشرف ، وتغير المنطقة الكسرية للبطين الأيمن ، ونتاج القلب بشكل ملحوظ في المجموعة النموذجية. كان تركيز هيدروكسي برولين أعلى بشكل ملحوظ في المجموعة النموذجية ، مما يشير إلى زيادة محتوى الكولاجين في أنسجة الرئة. لم تكن أوزان الكبد والكلى مختلفة بشكل كبير بين المجموعات الضابطة والنموذجية.