March 7th, 2025
طورت هذه الدراسة بروتوكولا محسنا لعزل الخلايا المتوسطة الفئران (MCs) وزراعة الخلايا خارج الجسم الحي . يمكن تمرير هذه الخلايا عدة مرات وتجميدها وإحيائها وزراعتها دون المساس بنمو الخلايا أو التعبير عن البروتين.
يركز أحد أبحاثنا على القصور الكلوي المرتبط بالورم النخاعي المتعدد. لدعم بحثنا ، قمنا بتطوير بروتوكولات وتحسينها الآن للثقافة الأولية للخلايا المتوسطة الفئران. يمكن الوصول بسهولة إلى المعدات اللازمة للإجراءات ، والخطوات الإجرائية مباشرة.
يتطلب اكتساب الخلايا المستهدفة أسبوعين إلى ثلاثة أسابيع فقط. تسهل هذه التقنية أبحاث الكلى وتدعم الدراسات التي تبحث في وظيفة الخلايا المتوسطة في نماذج الأمراض أو التطوير العلاجي أو أبحاث نقل الإشارة. لبدء عزل الخلايا المتوسطة في الفئران ، أو MCs ، عن الذي تم القتل الرحيم بشكل صحيح ، باستخدام المقص والملاقط ، قم بإزالة الكلى من الفأر بشكل معقم ووضعها في طبق بتري.
اشطف الكلى بمحلول الملح المتوازن من إيرل ، ثم استخدم الملقط لإزالة النسيج الضام وكبسولة الكلى بعناية. قم بتقطيع الكلية رأسيا إلى النصف باستخدام مشرط. أضف ثلاثة إلى أربعة ملليلتر من محلول الكولاجيناز الأول إلى طبق بتري وطحن الأنسجة جيدا باستخدام مدقة خلية بلاستيكية.
ماصة جميع الأنسجة والمحلول من طبق بتري إلى أنبوب طرد مركزي سعة 15 ملليلترا. اشطف طبق بتري بمل إلى ملليلتر من محلول الكولاجيناز الأول لضمان نقل الأنسجة بالكامل. ضع الأنبوب في شاكر عند 37 درجة مئوية ، مع رج 120 دورة في الدقيقة لمدة 30 دقيقة.
ثم أضف حجما متساويا من محلول التوقف أو وسائط الثقافة إلى الخليط. قم بزيارة المحلول من أنبوب الطرد المركزي وقم بتمريره عبر مصفاة خلية 100 ميكرون. اجمع المرشح في أنبوب طرد مركزي سعة 50 ملليلتر.
مرر المرشح عبر مصفاة خلية 40 ميكرون ، مع الاحتفاظ فقط بالخلايا الموجودة على المصفاة. اشطف المصفاة بشكل متكرر باستخدام وسائط الثقافة لزيادة تجمع الخلايا. انقل الخلايا التي تم جمعها من المصفاة إلى أنبوب طرد مركزي جديد سعة 50 ملليلترا.
قم بالطرد المركزي للتعليق عند 600 جرام لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. بعد الطرد المركزي ، أعد تعليق الخلايا في طبق زراعة الخلايا وفقا لكثافة الخلية المطلوبة. ضع الأطباق في حاضنة خلية 37 درجة مئوية مع 95٪ هواء و 5٪ ثاني أكسيد الكربون.
أضف ملليلترا إلى ملليلترين من PBS على طول الحافة الداخلية لطبق الثقافة لشطف الخلايا. استخدم ماصة لإزالة كل PBS من قاع الطبق ، ثم أضف 10 مل من وسائط الثقافة على طول الحافة الداخلية للطبق. بمجرد أن تصل الخلايا إلى 80٪ من التقاء ، عادة في غضون سبعة إلى 10 أيام ، اغسل الخلايا مرتين باستخدام PBS المعقم.
أضف 0.25٪ محلول التربسين إلى الطبق لتربسين الخلايا. ضع الطبق في حاضنة 37 درجة مئوية. عندما تظهر معظم الخلايا مورفولوجيا مستديرة وتنفصل عن السطح ، قم بإنهاء التربسينية بإضافة حجم متساو من الوسائط اثنين.
الطرد المركزي للخلايا على حرارة 600 جرام لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة ، ثم أعد تعليقها في الوسائط الثانية. أظهرت MCs المعزولة في هذه الدراسة تعبيرا عاليا بشكل ملحوظ عن ألفا SMA و fibronectin و vimentin. أظهر تلطيخ الفلورسنت المناعي ل MCs المنقاة والمزروعة التي تم إجراؤها بعد 10 أيام من الثقافة في الوسائط الثانية أن أكثر من 95٪ من الخلايا عبرت عن كل من alpha-SMA و vimentin.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
تركز هذه الدراسة على تطوير بروتوكول محسّن لعزل وزراعَة الخلايا المسانجية الفأرية (MCs)، وهي ضرورية لأبحاث الكلى. تسمح الطريقة بعمليات نقل متعددة، تجميد، وإحياء مع الحفاظ على نمو الخلايا والتعبير عن البروتين.
Efficient isolation and purification of murine glomerular mesangial cells (MCs) directly supports early-stage nephrology research and disease modeling. This optimized protocol accelerates access to high-purity MCs, enabling robust target validation and mechanistic studies in renal pathobiology. The approach reduces cycle time and enhances reproducibility, strengthening predictive confidence for downstream therapeutic discovery.
This protocol positions MC isolation at the interface of early discovery and preclinical research, enabling seamless progression from target validation to lead identification in renal disease programs.