تقنيات فعالة لأخذ عينات شاملة من الأنسجة التي يمكن الوصول إليها في Xenopus البالغين

يهدف هذا العمل إلى إنشاء طريقة قابلة للتكرار لجمع بطين قلب Xenopus بسرعة ، والجذع الشرياني ، وفص الكبد الأيسر ، والمرارة ، والرئة ، والبنكرياس ، والطحال ، والحنجرة ، والمريء ، والمعدة ، والأمعاء ، والخصيتين ، والجسم الدهني ، وقناة البيض ، والكلى المزدوجة ، والضفيرة الوركي ، والجلد ، والغدة الصعترية ، والعين بأكملها في أقل من ساعة واحدة. التحدي التجريبي هو تحسين نضارة الأنسجة. لهذا السبب ، تم تصميم البروتوكول ليتم إكماله في أقل من ساعة واحدة. من خلال إعطاء الأولوية لنضارة الأنسجة ، يمكن استخدام هذه الأنسجة لإكمال التحليلات الكيميائية الحيوية عالية الجودة مثل البروتينات ، مع تقليل عدد المستخدمة. في المستقبل ، سنكتب بروتوكولا على الأنسجة التي يصعب الوصول إليها ، مثل الدماغ والعضلات والعظام.

[مدرب] للبدء ، ضع الضفدع القتل رحيم لإجراء التشريح وقم بتثبيت الأطراف. باستخدام مقص التشريح ، قم بقص الجلد على طول خط الوسط ، ثم بشكل جانبي لإنشاء سدائل جلدية. باستخدام الملقط ، أمسك الخط ألبا واسحبه بعيدا عن التجويف الغونجي. قم بقطع العضلات بعناية باتجاه الرأس وقم بإنشاء لوحتين من جدار التجويف. قلل من عظام الغرابي للوصول بشكل أفضل إلى القلب. قم بتمديد التامور وثقبله وقشره مرة أخرى لكشف غرف القلب الثلاث. الآن قم بقص أوراكل عند التقاطع حيث تلتقي بالبطين والجذع الشرياني. استخدم الملقط لإمساك قمة البطين وقطعها أسفل تقاطعها مع جذع الشريان مباشرة ، مع ترك هامش. عند ملاحظة تشعب جذع الشرايين ، اسحب الجذع مشدودا وقطع جذوع الأبهر مباشرة بعد النقاط التي تنقسم فيها إلى أقواس. بعد ذلك ، أمسك شفة فص الكبد الأيسر وارفعها برفق لكشف القنوات الكبدية والكيسية. أخذ عينة من الثلثين السفليين من الفص الأيسر أسفل هذه المرفقات. بعد تحديد المرارة ، أمسكها واسحبها بعيدا عن فص الكبد الأيمن واقطع ارتباطها. ثم أمسك قمة الرئة واسحبها مشدودة. قطع الرئة عند الحدود حيث تنتقل إلى الشعب الهوائية. قم بإزالة الشعب الهوائية من الحنجرة. لإزالة المبيض ، قم بتحويل فصوص المبيض إلى جانبيها لتصور مواقع التعلق البطنية للكلى. باستخدام المقص ، قم بإزالة المبايض القريبة من الكلى دون التسبب في تلف. بعد ذلك ، افحص الفص الأمامي للكبد ، المعروف أيضا باسم الفص المتوسط ، ولاحظ ارتباطه بالاثني عشر من خلال المساريق. استخدم مقص استئصال قزحية العين لقطع الرباط العضلي والرباط الكبدي الاثني عشر. الكتلة اللحمية المتبقية هي البنكرياس والقناة الصفراوية المشتركة. قطع اتصال البنكرياس والقناة الصفراوية المشتركة من فص الكبد الأمامي ، وترك هامش. أمسك المعدة بالملقط المسنن وأحد طرفي البنكرياس بملقط الأنسجة. تحت التكبير ، قم بإثارة البنكرياس برفق بعيدا عن المعدة. ثم حدد الطحال وأخذ عينات منه عن طريق قطع ارتباطه بالصفاق. أمسك الحنجرة من نهايتها السفلية وابدأ في رفعها من التجويف ، وقطع أي مرفقات بريتونية عند مواجهتها. عندما تكون الحنجرة مرتفعة ، استخدم مقص استئصال القزحية المنحني لفصل أنسجة المريء عن الحنجرة وقطعها بعناية. ثم اسحب الحنجرة لأسفل وقم بقصها من تجويف الفم مع قطع المرفقات المرئية المتبقية. راقب انحناء المعدة الذي يميزها عن المريء وتقييد البواب الذي يشير إلى بداية الأمعاء. اقطع القناة الهضمية أمام انحناء المعدة لفصلها عن المريء. افتح الفم وحدد موقع الفتحة المشتركة لأنابيب استاكيوس على سطحه. مع إبقاء الفم مفتوحا ، اسحب المريء لمراقبة ارتباطه. ثم قطع المريء من التجويف الشدقي أسفل فتحة استاكيوس مباشرة. ثم قم بإزالة المريء. الآن أمسك المعدة واقطعها عند تقييد البواب حيث تتصل بالاثني عشر. اسحب القولون مشدودا واقطعه بالقرب من العباءة قدر الإمكان. قم بإزالة الأمعاء ، وقطع أي مرفقات بريتونية مرئية على طول الطريق. إذا كان الضفدع ذكرا ، فحدد الخصيتين وقم بإزالة أحدهما باستخدام مقص استئصال القزحية ، مع ضمان بقاء الكلية سليمة. قم بفصل الأجسام الدهنية ووضعها على جانبيها لفضح التعلق البريتوني بالقرب من الكلى. أمسك قاعدة الجسم الدهني واقطعها من الصفاق ، مع ترك هامش. لإزالة المثانة البولية ، اقطع بالقرب من العباءة قدر الإمكان. إذا كان الضفدع أنثى أو لديه قناة بيض أثرية مرئية ، فأمسك الطرف السفلي لقناة البيض واسحبه بعيدا عن العباءة. اقطع قناة البيض بالقرب من العباءة ثم اسحبها من التجويف الغوفي ، وقطع أي مرفقات صفاقية. باستخدام الملقط ، أمسك الكلى المزدوجة خلف الصفاق وقطع الصفاق في قاعدتها. ارفع الكلى من التجويف ، وقطع جميع المرفقات الصفاقية. بعد ذلك ، أمسك الحزمة العصبية في الضفيرة الوركي بالملقط وقطع الأعصاب حيث تخرج من التجويف الغوفني. ارفع حزمة العصب واقطعها مرة أخرى عند توصيلها بالعمود الفقري. الآن قم بإزالة المسامير واقلب على جانبه البطني. أعد تثبيت الأطراف وحدد طرفا خلفيا واحدا لأخذ العينات ، وتثبيت قدمه. استئصال جزء من الجلد على شكل لوز فوق منطقة المعدة والظنبوب الشظويرية. أمسك الجلد الظهري وقم بعمل شق جانبي حول الجزء الأوسط من. لإنشاء قطع دائري مستمر. قم بإزالة المسامير ، وتأمين الساقين بيد واحدة ، واستخدم ملقط أسنان الفئران لإمساك الجلد الظهري الأمامي. جلد عن طريق سحب الجلد الظهري بقوة فوق الرأس والذراعين. لأخذ عينات من الغدة الصعترية ، حدد الكتلة الدهنية التي تغطي مفصل الفك وقم بقطع الحافة الخلفية للكتلة حيث تندمج مع أنسجة العضلات الوردية. استخدم مقص استئصال القزحية لقطع الكتلة من العظام للكشف عن مجموعات الميلانوفور ، إن وجدت. ثم قم بقص الأنسجة للقضاء على أي عضلة أو غضاريف. بعد ذلك ، أعد وحدد العين. أدخل مقص استئصال القزحية المنحني في المدار واقطع برفق حول انحناء العين لتحرير ملحقات العضلات. أخيرا ، حرك المقص بشكل أعمق في المدار واقطع العصب البصري خلف العين. قم بإزاحة العين من تجويفها وقطع أي عضلات متبقية. باتباع هذا الإجراء ، تم استخراج جميع الأعضاء الرئيسية وشطفها وتشذيبها في غضون ساعة واحدة من القتل الرحيم.