التصنيع القابل للتكرار ل SPOT كمنصة ثقافية عالية الإنتاجية قائمة على السقالات

يركز بحثنا على تطوير منصات عالية الإنتاجية ومدعومة بالسقالات للثقافات الأصلية القوية والقابلة للتكرار والمشتقة من المريض لتحسين سير عمل فحص الدواء والمساعدة في نمذجة الأمراض المتقدمة.

تعد معالجات السوائل الآلية ، ومنصات الهيدروجيل المدعومة بالسقالات ، وتقنيات الأعضاء على الرقاقة ، والمقايسات أحادية الخلية مثل قياس التدفق الخلوي و CYTOPs بعض التقنيات المتاحة حاليا.

تشمل التحديات الحالية الحفاظ على سلامة الهيدروجيل ، والتغلب على الغضروف المفصلي الهلامي للتصوير في الوقت الفعلي ، وضمان توزيع الخلايا بشكل موحد في المقايسات العضوية طويلة الأجل.

يتيح بروتوكولنا تحميل هيدروجيل متسق ومدعوم بالسقالات ، ويقلل من مشاكل الغضروف المفصلي ، ويدعم الثقافة العضوية على المدى الطويل ، ويتكامل بسلاسة مع معالجات السوائل الآلية ونظام التصوير عالي المحتوى.

نحن متحمسون للغاية لاستخدام منصات نمذجة الأمراض الخاصة بنا لاستكشاف آليات تطور المرض في السرطان وتطور السمنة.

[مدرب] للبدء ، خذ سقالة بنمط PMMA إما ل 96 أو 384 SPOT. قم بقص الورق الزائد حول المنطقة الزرقاء من السقالة ، مع ترك هامش أبيض بطول خمسة ملليمترات حول المحيط. تأكد من أن حجم الورقة الناتجة حوالي 760 ملم × 1,300 ملم. لتحضير سقالة 96 SPOT للتجميع ، ضع قطعة من فيلم البولي إيثيلين فوق دعامة أكريليك صلبة. ضع هذا الدعامة المغطاة بالفيلم على سطح العمل وضع السقالة فوق فيلم البولي إيثيلين. قم بمحاذاة حافة المسطرة بين الصفين الأولين من السقالة لتجنب التتبع في الآبار. ضع عجلة التتبع في الجزء السفلي من السقالة ولفها لأعلى إلى الأعلى ، مسترشدة بالمسطرة. بالنسبة لسقالة 384 SPOT ، لا تقم بإجراء ثقب. بعد ذلك ، ضع السقالة بحيث يكون الجانب الخشن متجها لأعلى على لوح PDMS ، مما يضمن تشغيل الصفوف أفقيا. استخدم خط التحضير لتحديد الجانب الخشن ، ثم قم بتنعيم السقالة على البلاطة لإزالة التجاعيد أو الفقاعات. قم بإزالة الطبقة الواقية من الجانب غير المحفور من الشريط على الوجهين. قم بربط الشريط قليلا في المنتصف وقم بمحاذاة العمودين الأوسطين من الشريط مع السقالة. الآن ، اضغط على منتصف الشريط على السقالة لتأمين المحاذاة. قم بتنعيم الشريط للخارج من المركز لتثبيته بالتساوي. باستخدام الملقط ، ارفع السقالة برفق من لوح PDMS. قم بتخزين البلاطة لاستخدامها في المستقبل. لتوصيل السقالة بشريط البئر الثاني ، اقلب السقالة بحيث يكون الجانب الأملس غير المسجل متجها لأعلى على طاولة العمل. قم بإزالة الطبقة الواقية الوسطى من الجانب المحفور من الشريط الثاني لكشف عمودين مركزيين. قم بربط منتصف الشريط الثاني قليلا وقم بمحاذاة الأعمدة الوسطى للسقالة ، ثم اضغط على مركز الشريط لتثبيته في مكانه. إذا تم استخدام شريط محفور ، فقم بإزالة الطبقات الواقية المتبقية المجاورة للمركز المكشوف. قم بتنعيم الشريط ، بدءا من المنتصف والتحرك للخارج. لإرفاق السقالة باللوحة التي لا نهاية لها ، قم بإزالة الطبقة الواقية. قم بمحاذاة السقالة أسفل اللوحة التي لا نهاية لها بغطاء. بمجرد محاذاة المحاذاة ، اضغط على منتصفها على اللوحة. في حالة استخدام شريط محفور ، قم بإزالة الطبقات المجاورة وقم بتنعيم السقالة على اللوحة للخارج من المركز. لربط السقالة بغشاء البولي كربونات ، استخدم الملقط لفك الطبقة الواقية بعناية من جانب واحد من فيلم البولي كربونات ، ثم قم بتقشير الطبقة الواقية ببطء دون التسبب في أي فجوات في الفيلم. كرر العملية للجانب الثاني ، ثم ضع الفيلم جانبا على طاولة العمل. قشر طبقة الشريط الواقي من قاع اللوحة واضغط على طبقة البولي كربونات على السقالة من المنتصف إلى الخارج. ثم اضغط بقوة على فيلم البولي كربونات على السقالة للتأكد من أن كل بئر له حدود محددة. باستخدام سكين دقيق ، قم بقطع أي مواد زائدة بعناية من أسفل اللوحة. بعد التجميع الكامل ، ضع لوحة 96 SPOT في كيس بلاستيكي شفاف قابل لإعادة الإغلاق وخذها خارج خزانة السلامة الحيوية. ضع دعامة أكريليك صلبة أسفل اللوحة وقم بتثبيتها في الزوايا المتقابلة. قم بتخزين الطبق في مكان نظيف وجاف حتى الاستخدام مرة أخرى. لم يلاحظ أي تسرب أو تبادل للوسائط عند ملء الآبار المتناوبة في لوحة 384 SPOT بالفلوريسين و PBS خلال فترة اختبار مدتها 30 يوما ، مما يؤكد فعالية حاجز PMMA في الحفاظ على عزل الآبار إلى البئر. ظلت عضيات ورم البنكرياس التي تعبر عن GFP المزروعة في 96 لوحة SPOT قابلة للحياة وتوسعت تدريجيا من يوم الصفر حتى اليوم 12 من الثقافة. في اليوم 12 ، أظهرت العضيات المزروعة في SPOT تعبيرا قويا من السيتوكيراتين 19 و Zonula Occludens-1 ، إلى جانب وجود هياكل التجويف الداخلية. كانت نتائج بذر الأنسجة دون المستوى الأمثل والمثلى في 384 لوحة SPOT يمكن تمييزها بصريا من خلال تعريف الحافة وتوحيد توزيع الخلية. تم تحقيق البذر الموحد باستمرار عبر 96 لوحة SPOT و 384 SPOT بأكملها باستخدام معالج السوائل الآلي.