استئصال الوراثة الثنائية الثنائية للشدة الكلوية في الفأر

ندرس حركة الخلايا المناعية من العقدة اللمفاوية الكلوية إلى الكلى ومستضد الكلى إلى العقدة اللمفاوية المتصيفة. يتيح نهجنا الجراحي ميزة فريدة تتمثل في إمكانية تعطيل العقد اللمفاوية الكلوية بشكل انتقائي مع إبقاء جميع العقد اللمفاوية الأخرى سليمة في نموذج بقاء طويل الأمد وقابل للتحمل جيدا. الآن بعد تطوير هذا النموذج، يمكننا استكشاف مساهمات العقد اللمفاوية الكلوية والاستجابات المناعية وكيف تساهم إزالة هذه العقد في إصابات الكلى المرتبطة بالمناعة.

للبدء، ضع الحيوان المخدر على طاولة العمليات وضع المرهم. استخدم الشريط اللاصق لتثبيت ذراع الحيوان اليسرى في اتجاه أعلى والذيل في اتجاه أدنى لخلق وضعية مسترخية لكنها ممدودة. احلق الفراء وقم بتعقيم منطقة الجراحة ثلاث مرات.

بعد التأكد من عمق التخدير باستخدام قرص إصبع القدم، قم بعمل شق مائل بطول سنتيمتر واحد عبر الجلد أسفل الطحال مباشرة، أي أقل بحوالي سنتيمتر واحد من الضلع الأخير. باستخدام تشريح غير حاد، افصل الجلد عن جدار البطن والصدر وحدد الطحال داخل البطن. ثم، قم بعمل شق بطول سنتيمتر واحد عبر عضلات جدار البطن أسفل الطحال لدخول تجويف الصفاق.

حدد الكلية اليسرى كعضو أملس يقع على طول الجدار الخلفي للبطن أسفل الطحال مباشرة. باستخدام ملقطين مائلين، قم بتشريح مباشر خلف الكلية اليسرى للوصول إلى الخلف الصاعقي وعكس الكلية اليسرى بلطف في الاتجاه الأمامي الوسطي. حدد موقع وسادة الأنسجة الدهنية المحيطة بالعقدة اللمفاوية الكلوية اليسرى، والتي تقع خلف الكلى وأعلى الأوعية الكلوية.

حدد وتجنب الغدة الكظرية الموجودة في الأعلى، والشريان الأبهري الخلفي، والشريان الكيلي في الجهة الأمامية الوسطى. باستخدام ملقط ذو رؤوس دقيقة، قم بتشريح خفيف حول كبسولة العقدة اللمفاوية لفصلها عن الأوعية المجاورة مع توفير شد معاكس لطيف باستخدام ملقط مائل. استخدم ملقط مستقيم ذو طرف دقيق لسحب العقدة اللمفاوية بشكل أعلى.

ثم استخدم مقص دقيق لقطع ملحقات الخلفية الدقيقة بشكل حاد. افحص المنطقة للتأكد من وجود دم. بعد ذلك، أعد الكلية إلى وضعها التشريحي الطبيعي.

أغلق جدار البطن ثم الجلد باستخدام خياطة بولي بروبيلين أحادية 6-0 في غرزة مستمرة. ضع غراء جراحي معقم لإغلاق الجرح. اختياريا، لتحسين تحديد العقد اللمفاوية الكلوية، حقن 10 إلى 20 ميكرولتر من صبغة إيفانز الزرقاء المعقمة والمفلترة بنسبة 5٪ في PBS في كلا وسادتي القدم الخلفية قبل استئصال الغدة اللمفاوية الكلوية.

خلال خمس دقائق من الحقن، تصل الصبغة إلى العقد اللمفاوية الكلوية عبر تصريف على طول المسار اللمفاوي الحرقفي. أعد وضع الحيوان إلى وضعية ديكوبيتوس الجانبية اليسرى بحيث يكون الجانب الأيسر مواجها للأسفل. استخدم الشريط اللاصق لتثبيت ذراع الحيوان اليمنى في اتجاه أعلى والذيل في اتجاه أدنى للحفاظ على وضعية مسترخية لكنها ممدودة.

الآن، قم بعمل شق جلدي مائل بطول سنتيمتر واحد أسفل الضلع الأخير، والذي سيكون موضوعا أعلى قليلا من الجانب الأيسر. باستخدام تشريح غير مباشر، افصل الجلد عن جدار البطن والصدر. ثم قم بعمل شق بطول سنتيمتر واحد عبر عضلات جدار البطن للوصول إلى تجويف الصفاق.

حدد الكلية اليمنى، وهي عضو أملس يقع على طول الجدار الخلفي للبطن وتحت الكبد مباشرة. باستخدام ملقطين مائلين، قم بتشريح مباشر خلف الكلية اليمنى للوصول إلى المساحة الخلفية البريتونية وعكس الكلية اليمنى في الاتجاه الأمامي الوسطي. حدد وسادة الأنسجة الدهنية المحيطة بالعقدة اللمفاوية الكلوية اليمنى، والتي تقع خلف الكلى وأعلى الأوعية الكلىية.

حدد وتجنب الغدة الكظرية الموجودة فوق العقدة اللمفاوية. الآن، باستخدام ملقط ذو أطراف دقيقة، قم بتشريح خفيف حول كبسولة العقدة اللمفاوية لفصلها عن الأوعية القريبة مع تطبيق شد معاكس لطيف باستخدام ملقط مائل. ثم، باستخدام ملقط مستقيم ذو طرف دقيق، اسحب العقد اللمفاوية للأعلى واقطع الوصلات الخلفية العضلية بقوة باستخدام مقص دقيق.

افحص المنطقة للتأكد من وجود دم. وأخيرا، أعد الكلية اليمنى إلى وضعها التشريحي. أغلق جدار البطن والجلد على طبقتين باستخدام خياطة بولي بروبيلين أحادية الفتيل 6-0 بنمط متتابع ووضع غراء جراحي معقم على موقع الشق.

أكدت القياس الخلوي المتدفق نجاحا في استخراج العقد اللمفاوية في جميع العينات الخمس لاستئصال الغدة اللمفاوية اليسرى والخمس من اليمين، حيث أظهرت كل واحدة أكثر من 50٪ من الخلايا الحية إيجابية للقرص CD45، مقارنة بأقل من 2٪ في العينات الضائعة للدهون الحشوية. أظهر قياس الخلايا الموجبة ل CD45 فرقا ذا دلالة كبيرة بين عينات استئصال الغدة اللمفاوية الكلوية اليسرى والأيمن مقارنة بنسيج الدهون الحشوية دون وجود فرق ذي دلالة إحصائية بين الجانبين الأيسر والأيمن.