استخدام التروية الدقيقة المفتوحة للدماغ لجمع السائل الخلالي طوليا في نموذج حيواني للورم الأرومي الدبقي

نحن نقوم بتوصيف مكونات الإشارات القابلة للذوبان داخل السائل الخلالي في ورم الدماغ التي تساهم في تقدم المرض والاستجابة للعلاج. يظل تقييم تركيزات المذاب المطلقة داخل ورم الدماغ الخلالي تحديا بحثيا يتطلب استخدام طرق تجريبية متقدمة. للبدء، باستخدام مشرط معقم، قم بعمل شق وسطي سهمي على طول سطح الجمجمة، يبدأ بين العينين ويمتد إلى الذيل لمسافة 8 إلى 10 مليمترات.

ثم استخدم ملقط معقم لسحب الجلد من الشق الأوسطي جانبيا. تأكد من أن كل من البريغما واللامبدا مرئيان، وقم بتمديد الجرح إذا لزم الأمر. بعد ذلك، باستخدام مشرط معقم، اقطع الشاحنة واسحب النسيج جانبيا باستخدام الملقط.

ضع بيروكسيد الهيدروجين بنسبة 1٪ إلى 3٪ باستخدام أداة تطبيق معقمة ذات طرف قطني لتنظيف سطح الجمجمة. الآن استخدم حقنة أنسولين بسعة 0.3 إلى 1.0 ملليلتر لتطبيق 20 إلى 40 ميكرولتر من مادة لاصق الأسنان القابلة للنقش الذاتي بشكل متساو على سطح الجمجمة. ثم عرضها لمصباح تصلب الأسنان لنقش اللاصق.

بعد المعالجة، امسح أي مادة لاصقة زائدة باستخدام أدوات معقمة ذات رؤوس قطنية ومحلول ملحي. أعد وضع رأس الحفر إلى إحداثيات دليل cOFM. اضبط المثقاب على 15,000 دورة في الدقيقة واحفر فتحة بربرية باستخدام قرص DV Micromanipulator.

راقب سمك الجمجمة بشكل متكرر أثناء الحفر، وغسل المحلول الملحي الفسيولوجي لإزالة الحطام وتقليل الحرارة. كرر عملية الحفر عند كل إحداثي برغبة مرساة. الآن قم بتركيب براغي تثبيت باستخدام ملقط معقم ومفك براغي معقم حتى يتم إدخاله بعمق من طول إلى خيطين.

ثم قم بتركيب دليل cOFM وتركيب الوهمي في حامل الدليل وربط الحامل بإطار المجسم. ضع رأس الدليل فوق فتحة الحافة وخفضها ببطء إلى العمق المحدد مسبقا بسرعة 1 ملم في الدقيقة. ضع عامل الإسمنت على الجمجمة بطبقات رقيقة وموحدة، تغطي المناطق تحت وحول دليل cOFM والبراغي.

استخدم ضوء معالجة الأسنان لتقوية كل طبقة قبل وضع الطبقة التالية. تأكد من أن الأسمنت يغطي كامل المنطقة بين المكونات مع تجنب الإسفين المغلق. افصل حامل الدليل عن دليل cOFM وارفعه ببطء باستخدام مقبض DV في جهاز التحكم الدقيق.

باستخدام الملقط، قم بإزالة الوتد القفل من دليل cOFM ومجموعة الوهم. ارفع الدمية برفق من الدليل. استخدم مقابض التحكم الدقيق ML وAP لمحاذاة مجموعة إدخال حقن الحقنة فوق دليل cOFM.

خفض إدخال التسريب باستخدام مقبض DV وتثبيته في مكانه عن طريق إعادة إدخال الوتد القفل بقوة باستخدام الملقط. الآن حقن 3 ميكرولتر من تعليق الخلايا من الحقنة بسرعة 1 ميكرولتر في الدقيقة. راقب المنطقة حول دليل cOFM للتأكد من عدم خروج أي تدفق لتعليق الخلية من التجميع.

استخدم الملقط لإزالة الوتد القفل من الدليل وتركيب إدخال الحقن. ثم ارفع بحذر إدخال التسريب من الدليل باستخدام مقبض ضبط DV. املأ أنابيب الدفع والسحب مسبقا بسائل صناعي دماغي شوكي باستخدام حقن زجاجية محكمة الإغلاق للغاز.

قم بتركيب القسم البائسي من الأنبوب في رأس مضخة الميكروترويو. قم بتوصيل كيس البيرفوسيت بأنبوب الدفع باستخدام موصل Luer lock. ثم قم بتوصيل إدخال العينة بالأنبوب باستخدام موصلات ذات حافة.

قم بتوصيل عمود السحب الأطول بطرف الخرج من أنبوب الدفع وعمود المخرج الأقصر بطرف الإدخال من أنبوب السحب. ضع إدخال العينة المتصلة في أنبوب طرد مركزي دقيق معقم يحتوي على 750 ميكرولتر من السائل الصناعي الدماغي الشوكي. قم بتوصيل إبرة جامع الكسور بخط إخراج أنبوب السحب باستخدام موصل أنابيب ذو حواف.

ثم قم بغسل أنابيب لمدة 20 دقيقة بسرعة 10 ميكرولتر في الدقيقة للقضاء على فقاعات الهواء. بعد ذلك، املأ خط السحب مسبقا بسائل دماغي شوكي صناعي باستخدام حقن محكمة الإغلاق للغاز. أعد تركيب أنبوب التباهي في رأس مضخة الميكروترويو.

قم بتوصيل إدخال العينة مرة أخرى باستخدام موصلات أنابيب ذات حواف. قم بتوصيل المدخل بطرف الخرج من أنبوب السحب والمخرج إلى طرف الإدخال في أنبوب السحب. ضع الإدخال في أنبوب طرد مركزي دقيق معقم يحتوي على 750 ميكرولتر من السائل الدماغي الشوكي الصناعي.

قم بعمل نظام أنابيب آخر لمدة 20 دقيقة بسرعات 10 ميكرولتر في الدقيقة لإزالة أي فقاعات هواء متبقية. ضع حيوانا مخدرا في سترة بحجم مناسب. اسحب الأطراف الأمامية بالكامل عبر فتحات الذراعين وثبت السترة بإحكام على ظهر الحيوان.

استخدم ملقطا لإزالة الوتد القفل من الدليل وتركيب الوهمية. ثم ارفع الإدخال الوهمي بحذر من الدليل. قم بتركيب إدخال العينة بلطف في الدليل وأعد إدخال الوتد القفل.

أخرج الحيوان من التخدير وضعه في نظام الأقفاص الدوار. اربط حبل القفص بسترة الحيوان وفعل نظام القفص الدوار. بعد أخذ عينات cOFM، قم بإيقاف نظام الأقفاص الدوار وافصل رباط القفص عن سترة الحيوان.

الآن استخدم الملقط لإزالة الوتد القفل من الدليل ومجموعة إدخال العينة. ارفع إدخال العينات بحذر من الدليل، ثم أعد إدخال الإدخال الوهمي بلطف إلى الدليل وأعد إدخال الوتد المثبت. افصل المثبتات من ظهر سترة الحيوان وقم بإزالة السترة برفق من الحيوان.

أكد التصوير المضيء الحيوي وجود أورام في الحيوانات باستخدام زرع الخلايا الورمية التي تم تدخلها بدليل cOFM. كشف تحليل المكونات الرئيسية للبروتيومية للسائل الخلالي المأخوذ بعينات من cOFM عن فصل واضح بين مجموعات الحيوانات المعالجة بالتيموزولوميد والمعالج بثنائي ميثيل كبريتسايد. تداخلت توزيعات الإشارات الأيضية العالمية تقريبا بشكل مثالي بين عينات تيموزولوميد وثنائي ميثيل كبريتسايد.

على الرغم من تداخل الإشارات، كشف تحليل البراكين الأيضية عن تحول واضح مدفوع بالتيموزولوميد. أظهرت المقارنات الكمية للقيم الأيضية من نفس الحيوانات أن التكوينات المعاد تدويرها حسنت تركيزات المحللات مع الحفاظ على نسب المستقلبات النسبية. لا يزال توفر العناصر الغذائية النسبية داخل بيئة أورام الدماغ غير مفهوم جيدا.

يتم استخدام هذا البروتوكول لسد هذه الفجوة. يمكن لتوصيف توفر العناصر الغذائية والإشارات داخل البيئة الدقيقة للورم أن يوضح آليات تقدم الورم الدبقي والمقاومة التكيفية للعلاج.