نموذج موحد للفئران مع سير عمل من ثلاثة أشخاص لدراسة الرفض الخلوي الحاد والوسيط بالأجسام المضادة في زراعة الأجسام الغريبة

يركز بحثنا على نماذج موحدة لنقل الأعضاء بين الأنواع في الحيوانات الصغيرة لدراسة آليات الرفض الخلوي الحاد والرفض بوساطة الأجسام المضادة. غالبًا ما تعاني النماذج الحالية من التأثر بمهارة المشغل وصعوبات الإجراءات الرئوية. يوفر هذا البروتوكول سير عمل سريع وموحد وقابل للتكرار.

يوضح هذا الشكل سير العمل المعياري المكون من ثلاثة أشخاص لعملية الزرع الغريب في الفئران، حيث يقوم المشغلون في آن واحد بتجهيز المستقبل، واستئصال قلب المتبرع، ومفاغرة قلب المتبرع. للبدء، يتم الحصول على جرذان من سلالة sprayed dolly حديثة الولادة بعمر 10 إلى 12 يوماً، وفئران من سلالة C57 Black six أو BALB/c بعمر سبعة إلى ثمانية أسابيع. تُربى جميع جرذان المتبرعين وفئران المستقبلين في بيئة خالية من مسببات الأمراض المحددة.

باستخدام كرات قطنية مبللة بالبوفيدون أيودين، قم بتطهير منطقة الصدر والبطن للجرذ المخدر. قم بإجراء شق في البطن باستخدام المقص. بعد ذلك، استخدم مسحة قطنية لإزاحة الأمعاء برفق إلى الجانب للكشف عن الوريد الأجوف السفلي.

استخدم سرنجة إنسولين لحقن 0.2 إلى 0.5 milliliters من المحلول الملحي المعبأ بالهيبارين في الوريد الأجوف السفلي. اضغط بلطف على موضع الحقن باستخدام كرة قطنية لمنع النزيف. قم بشق الحجاب الحاجز.

يتم قطع جدار الصدر من الجانبين وإبعاده للكشف عن القلب بشكل كامل. بعد ذلك، يتم إزالة الغدة الزعترية وقطع الوريد الأجوف العلوي لتخفيف الضغط. ثم يُضخ 1 mL من محلول جامعة ويسكونسن في الأبهر لتحفيز التوقف القلبي.

استمر في عملية التروية حتى يتغير لون القلب من الأحمر إلى الشاحب. ضع قطعة شاش مغموسة في محلول ملحي مبرد بالثلج فوق القلب لخفض درجة حرارته ومنع الجفاف. اربط الوريد الأجوف العلوي والسفلي باستخدام خيط جراحي حريري بمقاس 8.0.

قم بإجراء قطع عرضي في كلا الوعاءين. ثم اقطع الأبهر عند القوس الأبهري. وافصل الشريان الرئوي عند نقطة تفرعه.

قم بربط جميع الأوردة الرئوية باستخدام خيط حريري 8-O. ثم استأصل قلب المتبرع. ضع القلب المستخرج في محلول ملحي بارد جداً للحفظ المؤقت.

باستخدام كريم لإزالة الشعر، قم بإزالة الشعر من منطقة الرقبة للفأر المستقبل المُخدّر. قم بتطهير الجلد من خلال تبادل جولات من البوفيدون أيودين والكحول ثلاث مرات لكل منهما. قم بإجراء شق طولي بطول 2 cm على بُعد 1 cm تقريباً إلى يمين الخط الناصف في الرقبة باستخدام شفرة جراحية.

أجرِ تشريحاً غير حاد لإزالة طبقات الدهون والعضلات تحت الجلد. استأصل الغدة تحت الفكية. بعد كشف الوريد الوداجي الخارجي، استخدم قلم الكي الكهربائي مضبوطاً على وضع التخثر المنخفض لكي الفروع بشكل فردي.

ضع غرزتين من الحرير بمقاس 8.0 بالقرب من الطرف القاصي للوريد من أجل الربط. بعد ذلك، استخدم مقص الجراحة المجهرية لقطع الوريد الوداجي الخارجي بين الربطتين. أدخل الوريد الوداجي الخارجي عبر السوار الوريدي وادفع السوار حتى قاعدة الوريد.

ثم قم بتثبيتها باستخدام مشبك وعائي. استخدم مقصات الجراحة المجهرية لإزالة الرباطات. بعد ذلك، قم بغسل الدم المتبقي من الوريد باستخدام محلول ملحي مُهبّن.

باستخدام ملقط جراحة مجهرية، قم بقلب الوريد الوداجي الخارجي فوق الرباط وتثبيته بغرزة حريرية مقاس 8.0. أجْرِ تسليخاً غير حاد خلف العضلة القصية الترقوية الخشائية لتحديد موقع الغمد السباتي. ثم افتح الغمد السباتي.

افصل الشريان السباتي المشترك بعناية عن الوريد الوداجي الداخلي والعصب المبهم. بعد ذلك، قم بربط الشريان السباتي وقطعه. ثم أدخل الطرف السفلي من الشريان المقطوع عبر الغمد الشرياني.

قم بقلب الشريان فوق الكفة وثبته في مكانه. ثم مرر الأبهر المتبرع فوق الكفة الشريانية في الشريان السباتي للمستقبل. وثبته باستخدام رباط حريري 8.0.

قم بعمل عقدة رخوة حول الشريان الرئوي للمانح. قم بتمرير الشريان الرئوي فوق الغمد الوريدي في الوريد الوداجي الخارجي للمستقبل. ثم قم بتثبيته باستخدام رابطة حريرية.

قم بتحرير الملاقط الوعائية من الشريان السباتي والوريد الوداجي الخارجي للمستقبل لاستعادة تدفق الدم. لاحظ استئناف القلب المانح لانقباضات قوية وتحوله إلى اللون الأحمر بسرعة خلال 10 ثوانٍ. وبمجرد أن يستعيد القلب المانح إيقاعاً مستقراً، قم بتعديل موضعه.

باستخدام غرز جراحية بقياس 4.0، قم بإغلاق شق الجلد في منطقة الرقبة. قم بتطهير الموقع الجراحي باستخدام بوفيدون أيودين. ضع الفأر على وسادة دافئة وناعمة يتم الحفاظ عليها عند درجة حرارة 37 to 38 °C للحفاظ على درجة حرارة الجسم.

راقب الفأر حتى يستعيد وعيه. ضع الفأر بشكل فردي في قفص مع توفير وصول كافٍ إلى الغذاء والماء بمجرد استيقاظه تماماً. كان متوسط وقت بقاء الطعم في مستقبلي BALB/c أربعة أيام.

بينما في مستقبلات C57 Black 6، تمددت المدة بشكل ملحوظ لتصل إلى 6.5 days. وفي مجموعة SD-to-BALB/c، أظهر تلوين الهيماتوكسيلين والإيوزين تدميراً شديداً في عضلة القلب مع تسرب واسع النطاق لكريات الدم الحمراء. أما في مجموعة SD-to-C57 Black 6، فقد أظهر تلوين الهيماتوكسيلين والإيوزين تلفاً في عضلة القلب تميز بشكل أساسي بارتشاحات التهابية.

في مجموعة SD-to-BALB/c، أظهر الصبغ المناعي الفلوري الحد الأدنى من ارتشاح الخلايا التائية الموجبة لـ CD3، والحد الأدنى من ارتشاح البلاعم الموجبة لـ CD68، وترسباً واسع النطاق وكثيفاً لـ C4D. أما في مجموعة SD-to-C57 Black 6، فقد أظهر الصبغ المناعي الفلوري ارتشاحاً بارزاً للخلايا التائية الموجبة لـ CD3، ووجوداً متوسطاً للبلاعم الموجبة لـ CD68، وترسباً متوسطاً لـ C4D. وبلغ متوسط معدل النجاح 93.3% في مجموعة الأشخاص الثلاثة، مقارنة بـ 86.7% في مجموعة الشخص الواحد.

يتمثل التحدي الرئيسي في ارتباط الفريق، وممارسة الاكتساب، والتدوير، وضمان إقامة حديثة مستقرة ومنظمة. ويمكن للدراسات المستقبلية استخدام هذا النموذج الموحد لاستقصاء الآليات المناعية للطُّعوم الغريبة وتقييم الاستراتيجيات المعتادة المثبطة للمناعة أو المحفزة للتسامح المناعي.