دراسة مقارنة لمحتويات عديد السكاريد والأنشطة المضادة للأكسدة لفرس النهر rhamnoides subsp. سينينسيس وفرس النهر الجيانتسينسيس

تقارن هذه الدراسة محتوى السكريات والنشاط المضاد للأكسدة بين Hippophae rhamnoides sub. sinensis و Hippophae gyantsensis لتوضيح الاختلافات بينهما. الدراسة سليمة من الناحية المنهجية ، وتعالج فجوة في الأدبيات المتعلقة بالاختلافات الخاصة بالأنواع في خصائص عديد السكاريد.

نتائج هذه الدراسة مهمة لتقييم الجودة والتطبيقات الصيدلانية المحتملة. للبدء ، انقل خمسة جرامات من مسحوق عينة نبق البحر إلى قارورة مستديرة القاع سعة 250 مل. ثم أضف 50 مل من الإيثانول اللامائي ، وانقعه في درجة حرارة الغرفة 25 درجة مئوية لمدة 24 ساعة.

في اليوم التالي ، قم بتصفية مسحوق العينة المنقوع باستخدام قمع Buchner للحصول على بقايا المرشح. اغسل بقايا الفلتر ثلاث مرات ب 50 مل من الماء منزوع الأيونات. الآن ، انقل بقايا المرشح منزوع الدهن إلى قارورة مجففة ذات قاع دائري سعة 250 مل.

أضف 150 ملليلترا من الماء منزوع الأيونات بنسبة صلبة إلى سائلة من واحد إلى 30 جراما لكل مليلتر. قم بإجراء شفط الارتجاع في حمام مائي عند 80 درجة مئوية لمدة ساعتين مرتين. ثم تركيز المستخلص باستخدام مبخر دوار.

قم بتخزين المحلول المركز في الثلاجة على حرارة أربع درجات مئوية لاستخدامه لاحقا. بعد ذلك ، أضف كاشف Sevag إلى محلول عديد السكاريد الخام بنسبة حجم من واحد إلى أربعة وضعه على محرك مغناطيسي. ثم انقل الخليط إلى أنبوب طرد مركزي سعة 50 مل.

قم بالطرد المركزي للتعليق عند 4 ، 000 جم لمدة 15 دقيقة ، واجمع الطافية. لتركيز مستخلص عديد السكاريد بعد إزالة البروتين ، أضف الإيثانول اللامائي بنسبة حجم من واحد إلى ثلاثة لترسيب السكريات. ضع الخليط على حرارة أربع درجات مئوية طوال الليل.

في اليوم التالي ، قم بإزالة الطبقة العليا من الإيثانول. انقل الخليط إلى أنبوب طرد مركزي سعة 50 مل وجهاز طرد مركزي كما كان من قبل. تجميد الراسب للحصول على السكريات الكلية.

انقل ثلاثة جرامات من الفينول إلى قارورة حجمية بنية. أضف 50 مل من الماء منزوع الأيونات لإذابة الفينول. رج العبوة حتى تصبح متجانسة ، ثم قم بتسمية القارورة وتخزينها لاستخدامها لاحقا.

بعد ذلك ، انقل 10 ملليغرام من الجلوكوز اللامائي إلى قارورة حجمية 10 ملليلتر. يضاف الماء منزوع الأيونات ويرج الخليط جيدا. ثم قم بتسمية القارورة.

لتحضير محلول عينة الاختبار ، قم بوزن خمسة ملليغرامات من عديد السكاريد النبق المجفف بالتجميد في قوارير حجمية. أضف الماء منزوع الأيونات ليصل كل منها إلى الحجم النهائي 50 مل. صوتنة كل خليط لمدة 20 دقيقة حتى يذوب تماما.

قم بتخفيف محلول الجلوكوز القياسي بالماء منزوع الأيونات إلى 0.1 ملليغرام لكل مليلتر. ثم باستخدام ماصة دقيقة ، قم بنقل 200 و 300 و 400 و 500 و 600 و 700 ميكرولتر إلى ستة أنابيب اختبار نظيفة. أضف الماء النقي ليصل كل منها إلى الحجم الإجمالي للملليلتر الواحد ، واخلط كل محلول برفق لضمان تخفيف موحد.

أضف مليلترا واحدا من محلول الفينول 6٪ وخمسة ملليلتر من حمض الكبريتيك إلى كل أنبوب اختبار واخلطه جيدا. انقل العينات إلى كوفيت. استخدم الماء النقي كفراغ وقم بقياس الامتصاص عند 490 نانومتر باستخدام مقياس الطيف الضوئي المرئي للأشعة فوق البنفسجية في ثلاثة تكرارات.

لاختبار الدقة ، قم بإعداد محلول الاختبار. إجراء قياس الألوان حمض الفينول والسلفريك. حدد الامتصاص وكرر ست مرات لحساب الانحراف المعياري النسبي.

لاختبار الثبات ، قم بإعداد محلول الاختبار. قم بإجراء قياس الألوان عند الصفر والثانية والأربع والستة والثمانية و 10 ساعات بعد التحضير. تحديد الامتصاص عند النقاط الزمنية المذكورة أعلاه لحساب الانحراف المعياري النسبي.

لاختبار التكرار ، قم بإعداد ستة نسخ مكررة متوازية للعينة. إجراء قياس ألوان حمض الفينول والسلفوريك ، وتحديد الامتصاص باتباع الإجراء المعمول به. لإجراء اختبار الاسترداد، قم بإعداد تسعة نسخ متماثلة متوازية من حل الاختبار.

أضف وحدات تخزين مرجعية تعادل 80 و100 و120٪ من إجمالي محتوى عديد السكاريد. ثم قم بإجراء قياس الألوان لحمض الفينول والكبريتيك. لتحديد المحتوى، قم بإعداد نموذج الحل.

قم بإجراء قياس ألوان حمض الفينول والكبريتيك باتباع الطريقة المعمول بها. ثم تحديد الامتصاص. تزن 2.7 ملليغرام من DPPH في قارورة حجمية فارغة 50 مل.

أضف 50 مل من الإيثانول اللامائي لإذابة DPPH وإعداد محلول مخزون. بعد ذلك ، قم بإذابة خمسة ملليغرامات من فيتامين سي في 10 ملليلتر من الماء منزوع الأيونات لتحضير محلول 0.5 ملليغرام لكل مليلتر. قم بتخفيف هذا المحلول على التوالي لتحضير محاليل اختبار فيتامين سي.

الآن قم بإذابة خمسة ملليغرامات من كل عينة من عديد السكاريد النبق البحري في 10 ملليلترا من الماء منزوع الأيونات لتحضير محلول 0.5 ملليغرام لكل مليلتر. قم بتخفيف هذه المحاليل على التوالي للحصول على تركيزات الاختبار. باستخدام محلول DPPH كركيزة ، قم بإعداد مجموعات الاختبار في لوحة 96 بئر.

أضف 150 ميكرولتر من الماء و 50 ميكرولتر من DPPH لمجموعة التحكم السلبية ، A0. أضف 150 ميكرولتر من العينة أو محلول فيتامين سي و 50 ميكرولتر من DPPH لمجموعة العينة A1. بالنسبة للعينة الضابطة A2 ، أضف 150 ميكرولتر من العينة و 50 ميكرولتر من الإيثانول اللامائي. اترك رد الفعل يستمر في الظلام لمدة 30 دقيقة. ثم قم بقياس الامتصاص عند 517 نانومتر.

أظهر المنحنى القياسي للجلوكوز علاقة خطية قوية بين الامتصاص والتركيز في حدود 0.02 إلى 0.07 ملليغرام لكل مليلتر. كان متوسط محصول عديد السكاريد من Hippophae gyantsensis أعلى بكثير من Hippophae rhamnoides الأنواع الفرعية sinensis. أظهر اختبار الدقة تباينا ضئيلا في الامتصاص عبر ستة قياسات ، و RSD بنسبة 0.21٪ مما يشير إلى دقة عالية للأجهزة.

أظهر اختبار الثبات أن قيم الامتصاص ظلت ثابتة على مدى 10 ساعات ، مع قيمة RSD البالغة 0.45٪ مما يؤكد استقرار محلول العينة. أنتج اختبار التكرار قيم امتصاص متسقة عبر ستة تكرارات مع RSD بنسبة 0.5٪ للتحقق من صحة تكرار الطريقة. أسفرت تجربة الاسترداد لمحتوى الجلوكوز عن متوسط معدل استرداد 99.18٪ مما يؤكد دقة الطريقة.

كان متوسط محتوى عديد السكاريد في Hippophae rhamnoides subspecies sinensis أعلى بكثير من محتوى Hippophae gyantsensis. أظهر Hippophae gyantsensis نشاطا مضادا للأكسدة أعلى قليلا من Hippophae rhamnoides sspecies الفرعي sinensis في جميع التركيزات المختبرة. عند 0.5 ملليغرام لكل مليلتر ، وصل معدل إزالة DPPH من Hippophae gyantsensis إلى 81.93٪ بينما وصل Hippophae rhamnoides sspecies sinensis إلى 75.17٪