نوفمبر 25, 2025
يحدد هذا البروتوكول طريقة لصبغ المناعة في المعدة بأكملها معدلة من تقنية "لفافة سويسرية" التي تم تطويرها أصلا لأمعاء الفئران.
تركز أبحاثنا على تحسين كيفية تحضير وتحليل المعدة المعتدلة للتصوير. قمنا بتكييف تقنية الرول السويسري التي طورت أصلا لأمعاء الفأر بحيث يمكن دمج جميع المناطق الرئيسية في المعدة، بما في ذلك القاع والجسم والأنف الخلوي، معا في قسم تجميد واحد. يتيح لنا ذلك تصور بنية المعدة وتركيب الخلايا جنبا إلى جنب مع الحفاظ على تحديد الموقع الدقيق وجودة الصورة العالية.
المعدة عضو معقد ذو أنسجة حساسة. يمكن أن تتلف الأخطاء الصغيرة الخلايا أو تشوه الترتيب، مما يجعل التصوير عالي الدقة والتلوين المناعي غير متسق. تقنية الرول السويسري لدينا تحل هذه المشكلة من خلال الحفاظ على جميع المناطق، بما في ذلك الاثني عشر والمريئ، سليمة في كتلة تجميد واحدة، مما يجعل التجارب أكثر موثوقية وقابلية للتكرار.
للبدء، استخدم المقص لقطع المجريق البطني في الاثني عشر والمعدة حتى الدبوس عند الجسم. باستخدام ماصة نقل مملوءة ب PBS، قم بإزالة أي طعام متبقي من التلوين المعدي. قم بتمديد البطن المفتوح بلطف لتحقيق اتجاه مسطح.
ثبت النسيج مرة أخرى بعد التثبيت القصير. باستخدام المقص، قم بقص البطن على طول الخط المتخطف لخلق شكل موحد مناسب للدحرجة. ضع نسيج المعدة المقطوع على ورق ترشيح مبلل ب PBS.
لف المنديل في شكل لف سويسري وتثبيته بإدخال عود أسنان في المنتصف. بعد لفها، أدخل إبرة عيار 30 لتثبيت شكلها. ثم ثني الإبرة بزاوية 90 درجة لتثبيت المعدة الملتوية.
ثبت النسيج الملفوف في 4٪ بارافورمالديهيد عند درجة حرارة أربع درجات مئوية لمدة ست ساعات. ثم أزل الإبرة المثبتة بلطف. قم بإدخال النسيج في مركب بدرجة حرارة القطع المثلى باستخدام قوالب قاعدة قابلة للاستخدام مرة واحدة.
ثم جمد القالب على الثلج الجاف. بمجرد تجميده الكامل، خزن العفن عند ناقص 80 درجة مئوية. مكنت الطريقة الجديدة من إدراج القاع، والجسم، والجسيم، وجزء من المريء، والاثني عشر داخل قسم واحد من اللفافة المعدة السويسرية في المعدة الفئرانية.
كشفت تلوين الهيماتوكسيلين والإيوزين في لفافة المعدة السويسرية عن بنية محفوظة جيدا في القاع، والجسم، والجسيم، والجذع، والمريئ، والاثني عشر، مع وجود طبقات مخاطية وتحت مخاطية وعضلية واضحة بوضوح. أظهر التلوين المناعي الفلوري تعبيرا عن KIT و ANO1 في الخلايا البينية لكاخال وتعبيرا عن بيتا تيوبولين 3 في الخلايا العصبية المعوية، مما أكد الحفاظ على الخلايا في اللفافة السويسرية المعدية. تم اكتشاف تعبير KIT أيضا في خلايا البانيث والكأس في الغشاء المخاطي المعدي، بينما كان ANO1 معبر عنه بقوة في الخلايا الظهارية العمودية الأساسية.
لوحظ تعبير بيتا توبولين الثالث في الخلايا المعدة والغدد الصماء والمخاط بالإضافة إلى الخلايا العصبية المعوية. أكد تلوين السلسلة الثقيلة بالميوسين 11 وجود خلايا عضلية ملساء وأرومات ليفية عضلية في الغشاء المخاطي المعدي، بينما أظهر تلوين E-cadherin خلايا ظهارية وصبغة KIT مرة أخرى خلايا بينية في كاخال. يمكن لتقنية الطرق السويسرية أن تعزز الأبحاث حول التغيرات الخاصة بالمنطقة في نسيج المعدة.
على عكس الطرق التقليدية التي تدمج المناطق بشكل منفصل، تعالج تقنية الرول السويسري جميع مناطق المعدة تحت ظروف متطابقة، مما يوفر الوقت والمواد الكيميائية. وهذا يجعلها منصة عملية وقابلة للتوسع للتحليل الشامل للأنسجة المعدية في كل من الصحة والمرض.
يوضح هذا البروتوكول طريقة صبغ مناعي للمعدة بأكملها، وهي نسخة معدلة من تقنية "اللفافة السويسرية" (Swiss roll) التي طُورت في الأصل لأمعاء الفئران. تسمح هذه الطريقة بتصور بنية المعدة والتركيب الخلوي مع الحفاظ على التوجيه المكاني وجودة الصور.
يعد التخطيط المكاني المتسق لطبقات العضلات المعدية أمراً بالغ الأهمية للتحقق من الأهداف بدقة عالية وتقليل المخاطر الميكانيكية في عملية اكتشاف أدوية الجهاز الهضمي. تتيح تقنية اللفافة السويسرية (Swiss roll) المعدلة إجراء تحليل متكرر وجنباً إلى جنب لجميع المناطق المعدية الرئيسية في الفأر، مما يدعم الدراسات المقارنة القوية ويقلل من التباين التجريبي. ويعزز هذا النهج القابل للتوسع من الثقة التنبؤية لمسارات الاكتشاف المبكر وأبحاث البحوث الانتقالية التي تركز على بيولوجيا المعدة.
تتكامل هذه الطريقة ضمن تسلسل الاكتشاف، بدءًا من التحقق الأولي من الهدف وصولًا إلى تطوير المقايسات والأبحاث قبل السريرية، مما يوفر منصة قابلة للتكرار للتحليل المكاني والجزيئي لأنسجة المعدة.