Name: Trypsinizing Subculturing وخلايا الثدييات (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-06-12T13:28:00.000+00:00
Duration: 5 min 59 s
Description: تعلم تقنيات إعادة زراعة الخلايا اللاصقة والمعلقة باستخدام التربسين للحفاظ على صحة الخلايا وقابليتها للحياة. يوضح هذا الفيديو الإجراءات الأساسية لإجراءات مختبر زراعة الأنسجة.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

بروتوكول النص الكامل لهذا النهج التجريبي هو متاح في <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb0101/current/abstract" target="_blank">البروتوكولات الحالية في بيولوجيا الخلية</a> .

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإفصاح عنه.

trypsinizing subculturing وخلايا الثدييات

Trypsinizing and Subculturing Mammalian Cells

كما تصل الخلايا confluency ، يجب subcultured أو أنها passaged. الفشل في نتائج فرعية خلايا متكدسة في مؤشر الإنقسامية وخفض في نهاية المطاف في موت الخلايا. الخطوة الأولى في subculturing هو فصل خلايا من سطح السفينة الثقافة الابتدائي بحلول trypsinization أو الوسائل الميكانيكية. ثم تنقسم الخلية الناتجة تعليق ، أو reseeded ، في ثقافات جديدة. يتم التحقق من الثقافات الثانوية للنمو وتغذية دوريا ، وربما لاحقا لإنتاج subcultured الثقافات العالي. الوقت بين الركض من الخلايا يختلف مع خط الخلية ويعتمد على معدل النمو.

كما تصل الخلايا confluency ، يجب subcultured أو أنها passaged. وسوف يبرهن على وجود هذا الفيديو الداخلي لكلا subculturing ملتصقة والخلايا التعليق.

Trypsinizing Subculturing وخلايا الثدييات

عندما تصل الخلايا إلى مرحلة التلاقي، يجب إجراء عملية استزراع فرعي أو تمرير لها. ويؤدي الإخفاق في إجراء الاستزراع الفرعي للخلايا المتلاقية إلى انخفاض المؤشر الميتوزي، وفي نهاية المطاف إلى ...

لقد وجدت تقنية زراعة الأنسجة تطبيقاً واسعاً في مجال بيولوجيا الخلية. ومع ذلك، تتطلب الخلايا المزروعة صيانة دورية لتبقى سليمة. وعندما تصل الخلايا إلى مرحلة الاندماج (confluency)، يجب إجراء عملية إعادة زراعة أو تمرير لها.يؤدي عدم القيام بذلك إلى تراجع النمو وفي النهاية موت الخلايا. سنوضح في هذا الفيديو كيفية الحفاظ على خلايا الزراعة النسيجية لكل من خطوط الخلايا الملتصقة والمعلقة. مرحباً، أنا ريكي من مختبر د. LAN في شبكة مختبرات الباثولوجيا الجزيئية في شرق تينيسي.أود اليوم أن أعرض لكم تقنيتين لنقل الخلايا العالقة والخلايا الملتصقة. لنقل طبق من الخلايا، سنبدأ بمزرعة أولية نمت حتى وصلت إلى حالة التلاقي الكامل في طبق بتري بقطر 60 مليمتر أو قارورة زراعة أنسجة بمساحة 25 سنتيمتر مربع تحتوي على 5 ملس من وسط زراعة الأنسجة.نبدأ بإزالة جميع أوساط الزراعة من المزرعة الأولية باستخدام ماصة معقمة. بعد ذلك، نقوم بغسل الطبقة أحادية الخلايا الملتصقة مرة أو مرتين بحجم صغير من محلول HBSS عند درجة حرارة 37 درجة مئوية بدون الكالسيوم والمغنيسيوم؛ وذلك لإزالة أي بقايا من مصل العجل الجنيني التي قد تثبط عمل إنزيم التربسين الذي سيضاف في الخطوة التالية.بعد ذلك، أضف كمية كافية من محلول trypsin EDTA الدافئ إلى المزرعة بحيث تغطي طبقة الخلايا الملتصقة. ثم يمكنك وضع الطبق على صينية تدفئة بدرجة حرارة 37 درجة Celsius لمدة دقيقة إلى دقيقتين. وبعد فترة التحضين، انقر على قاع الطبق فوق سطح مستوٍ لفصل الخلايا.افحص المزرعة باستخدام مجهر مقلوب للتأكد من أن الخلايا قد أصبحت مستديرة، مما يشير إلى انفصالها عن السطح. إذا لم تكن الخلايا منفصلة بشكل كافٍ، أعد الطبق إلى صينية التسخين لمدة دقيقة أو دقيقتين إضافيتين. بعد الفحص المجهري، اشطف الطبق باستخدام وسط غذائي كامل وانقل المعلق بواسطة الماصة إلى أنبوب مخروطي سعة 15 mil يحتوي على 2 mils من الوسط الغذائي الكامل.قم بطرد الخلايا مركزياً لترسيبها، ثم أعد تعليق الراسب في وسط غذائي كامل. الآن، أضف حجماً مساوياً من معلق الخلايا إلى كل طبق من الأطباق الجديدة التي تم تمييزها بملصقات مناسبة. بدلاً من ذلك، يمكن عد الخلايا باستخدام مقياس كرات الدم (hemo cytometer) وتخفيفها للوصول إلى الكثافة المطلوبة بحيث يمكن إضافة عدد محدد من الخلايا إلى كل طبق.تأكد من وضع ملصق على كل طبق يتضمن تاريخ المزرعة الفرعية ورقم الممر. بعد إضافة معلق الخلايا، أضف 1 ml من الوسط الغذائي الطازج إلى كل مزرعة جديدة. الآن، يتم تحضين الأطباق في حضانة رطبة عند 37 °C و5%CO2.بعد تحضين الخلايا طوال الليل، أضف وسطاً غذائياً جديداً إلى الأطباق وأعدها إلى درجة حرارة 37 درجة. وبمجرد أن تصل الخلايا في الطبق إلى مرحلة الالتحام الكامل (confluency)، يمكنك تمرير الطبق مرة أخرى عن طريق تكرار هذا الإجراء والاستمرار في التمرير حسب الضرورة. سنوضح لكم الآن كيفية تمرير الخلايا في المزارع المعلقة.تعد عملية تعبئة الخلايا في المزارع المعلقة أبسط منها في الخلايا الملتصقة. وقبل تعبئة المزارع المعلقة، يجب الحفاظ على الخلايا عن طريق التغذية كل يومين إلى ثلاثة أيام حتى تصل إلى مرحلة التلاقي، وهي المرحلة التي تتكتل فيها الخلايا معاً في المعلق ويظهر الوسط عكراً عند تحريك القارورة.للقيام بذلك، أخرج قارورة الخلايا المعلقة من الحاضنة، مع الحرص على عدم تعكير الخلايا التي استقرت في قاع القارورة. وبطريقة معقمة، قم بإزالة والتخلص من حوالي ثلث الوسط من القارورة واستبدله بحجم مساوٍ من الوسط الذي تم تسخينه مسبقاً عند 37 درجة مئوية. بعد تغيير الوسط، قم بتدوير القارورة بلطف وأعدها إلى الحاضنة عند 37 درجة مئوية و 5%CO2.إذا كانت كمية الوسط في القارورة أقل من 15 مل، يتم تحضين القارورة في وضع أفقي لتعزيز تلامس الخلايا مع الوسط. وخلاف ذلك، يمكن تحضين القارورة عموديًا في الأيام التي لا يتم فيها تغذية المزارع. تحقق من الخلايا عن طريق تدوير القارورة لإعادة تعليق الخلايا.تأكد من ملاحظة أي تغيرات في لون الوسط تشير إلى نمو أيضي جيد. وبمجرد أن تصبح المزارع متلاحمة، وهو ما يجب أن يكون حوالي 2.5 million cells per mil، يمكنك إجراء عملية النقل. ومرة أخرى، لقد عرضنا لك للتو كيفية نقل الخلايا المستزرعة لكل من المزارع الملتصقة والمزارع المعلقة.هذا كل شيء. شكراً للمشاهدة وبالتوفيق في جميع تجاربكم.

trypsinizing-and-subculturing-mammalian-cells

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

الجزئي تشريح تقنية explants هو أسلوب قوي وموثوق بها من أجل عزل التكاثري خلايا عضلات الهيكل العظمي من العضلات ، والأحداث أو البالغين الجنينية كمصدر للخلايا الجذعية العظمية العضلية. فريد ، كانت هذه الخلايا المشتقة clonally الهيكل العظمي لإنتاج خطوط الخلايا الجذعية العضلية تستخدم لزرع في الجسم الحي.

الكبار والعضلات والهيكل العظمي الجنينية Microexplant الثقافة وعزل خلايا جذعية عضلية هيكلية

في هذا التقرير ، إلا أننا يبرهن على وجود نظام لعزل الخلايا المانحة والثقافة من الغدة الثديية الماوس ، وزرع هذه الخلايا في orthotopically الفئران المتلقي لتحليل انسجة : التفاعلات الظهارية أثناء تطوير ورم الثدي.

الثدي زرع الخلايا اللحمية وسرطان الخلايا في الفئران C57BL/6J

يوضح هذا الفيديو تقنية لدراسة التوطين في الجسم الحي للأجسام المضادة الخاصة بالورم في نموذج الطعم الغريب لورم الفأر. عند حقن الخلايا السرطانية تحت الجلد في الفئران لتكوين الورم ، يتم حقن الأجسام المضادة ذات العلامات الفلورية التي ترتبط بالمستقبلات الخاصة بالورم ، مما يتيح التقييم في الجسم الحي لتوطين الأجسام المضادة عن طريق التصوير.

تقنية لتقييم توطين الأجسام المضادة الخاصة بالورم في الجسم الحي

يوضح الفيديو فحصا لتقييم نشاط العزل الذاتي السائب في خلايا الثدييات. يستخدم التثقيب الكهربائي لإطلاق بروتينات العصارة الخلوية ، بما في ذلك نازعة هيدروجين اللاكتات (LDH). يتم تحديد LDH المعزولة وكسور LDH الخلوية الكلية لتقييم عزل LDH ، مما يوفر رؤى حول نشاط العزل السائب الكلي.

القياس الكمي لنشاط عزل البلغم الذاتي السائب في خلايا الثدييات

يوضح هذا الفيديو بروتوكولا لعزل واستزراع خلايا القشرة الدماغية الأولية من الدماغ الظهري الجانبي لأجنة الفئران.

عزل واستزراع الخلايا من الدماغ الظهري الجانبي لجنين الفأر

هذه التقنية يوفر طريقة لجني، وتطبيع وقياس النمو داخل الخلايا من مسببات الأمراض البكتيرية التي تم مسبقا المزروعة في الطبيعية الخلايا المضيفة الأوالي قبل التهابات خلايا الثدييات. يمكن تعديل هذه الطريقة لاستيعاب مجموعة واسعة من الخلايا المضيفة للمرحلة فتيلة وكذلك أنواع الخلايا المستهدفة.

لين العريكة التهابات خلايا الثدييات مع طفيل وحيد الخلية، تستعد البكتيريا

وصفنا إجراءات لوضع العلامات والتنميط الجيني الفئران حديثي الولادة وتوليد الثقافات العصبية الأولية منها. والتنميط الجيني هو سريع وفعال وموثوق بها، ويسمح لاستخراج-نوكليك حمض الآلي. وهذا مفيد خصوصا بالنسبة للفئران المميتة neonatally وثقافاتهم التي تتطلب استكمال مسبق من التنميط الجيني.

رابيد التنميط الجيني للحيوانات تلاه إنشاء الثقافات الأولية من الخلايا العصبية في الدماغ

الهدف من هذا البروتوكول هو عزل الخلايا القرنية البشرة من الجلد الظهري للفئران البالغة لمجموعة متنوعة من التطبيقات النهائية مثل البيولوجيا الجزيئية، والكيمياء الحيوية، وفرز الخلايا المنشطة الفلورية، والاستخدامات الأولية في المختبر (على سبيل المثال، clonogenic الخلايا الكيراتينية).

عزل الخلايا الكيراتينية البشرة الماوس وثقافتهم في المختبر Clonogenic

نحن نقدم تقنية لتحقيق الاستقرار السريع في المجمعات التحويلية (التمثيل الحيوي البروتيني) مع الفورمالديهايد المترابطة في الخميرة الحية وخلايا الثدييات. النهج يتيح تشريح وسيطة عابرة وديناميكية الحمض النووي الريبي: التفاعلات البروتين. يمكن استخدام المجمعات المترابطة في تطبيقات متعددة في المصب مثل طرق التنميط العميق المستندة إلى التسلسل ، والتنظير الدقيق ، وقياس الطيف الكتلي.

تثبيت سريع في Vivo وعزل المجمعات الترجمية من الخلايا Eukaryotic

تقنية البيوتينيل المعززة بالإضاءة المحددة بالموقع الخاصة ب AviTag (ALIBi) هي طريقة جديدة مفعلة بصريا تم تطويرها لوضع وسم وتنقية تجمعات الخلايا الفرعية للريبوسومات لأغراض التسلسل اللاحق والتحليل البروتيومي.

عزل مجموعات الريبوسومات تحت الخلوية بناء على بيوتينيل معززة بموقع معين للببتيدات المؤتلفة، مقيدة بالإضاءة،

تعلم تقنيات إعادة زراعة الخلايا اللاصقة والمعلقة باستخدام التربسين للحفاظ على صحة الخلايا وقابليتها للحياة. يوضح هذا الفيديو الإجراءات الأساسية لإجراءات مختبر زراعة الأنسجة.

Trypsinizing Subculturing وخلايا الثدييات

استكشف المزيد من الفيديوهات