Name: من MEFs إلى 2 Matrigel : hESCs من تقسيم MEFs على Matrigel (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-06-09T18:48:00.000+00:00
Duration: 6 min 40 s
Description: تعلم تقنيات زراعة خلايا الجنين البشرية الجذعية في ظروف خالية من الخلايا المغذية باستخدام Matrigel. يوضح هذا الفيديو طرق التمرير المستمر والتحقق من التعددية باستخدام مجهر التألق الضوئي.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وتدعم الخلايا الجذعية الجنينية البشرية الدراسات في المختبر Teitell بواسطة معهد كاليفورنيا للطب التجديدي (CIRM) منح البذور RS1 - 00313. نشكر أعضاء المركز واسع في الطب التجديدي ، وأبحاث الخلايا الجذعية في جامعة كاليفورنيا ، وخصوصا الدكتور Amander كلارك ، والدكتور جيروم زاك ، وأعضاء معهد الجذعية في جامعة كاليفورنيا واسع مرفق الخلية الأساسية لدعمهم لدراساتنا.

hESC صيانة الثقافة اليومية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يجب تغيير الثقافة وسائل الإعلام كل ساعة hESC 24. من المخزون ES زجاجة الوسائط المخزنة في 4 درجات مئوية ، واخراج كمية من محلول اللازمة (~ 20ml في 6 - جيدا لوحة) ، ضع في أنبوب الصقر 50ml ، ودافئة إلى 37 درجة مئوية في حمام مائي. بمجرد تحسنت وسائل الإعلام ، إضافة bFGF المخزنة في 4 درجات مئوية إلى التركيز النهائي لل10ng/ml. طرح الأسهم bFGF الوراء في 4 درجات مئوية بعد الاستعمال مباشرة! </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة لوحات من 6 جيدا في جميع ~ 500μl لكن وسائل الإعلام. تأكد من دوامة الطبق الثقافة بتعليق لازالة الحطام. تأكد من أن وسائل الإعلام في bFGF الثقافة hESC يختلط جيدا وإضافة وسائل جديدة 3ml مرة أخرى إلى كل بئر من لوحة 6 - جيدا. وضع لوحة في مؤخرة الحاضنة. </li></ol> تقسيم hESCs من MEFs على Matrigel عادة ما يمكن تقسيم متموجة 6 - جيدا على طبق من hESCs MEFs 1:02 حتي 01:03 Matrigel على 6 لوحات جيدا ، مع الآبار تصبح متكدسة مرة أخرى 4-5 أيام بعد انفصالها. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما يستخدم على تقسيم hESCs Matrigel ، MEF مكيفة وسائل الاعلام (CM) للحفاظ على تعدد القدرات. يرصد MEF مكيفة وسائل الاعلام مقدما. في اليوم الأول ، والمصنفة 1.5 × 10 7 - γ MEFs المشع في قارورة T75. في اليوم الثاني ، يتم غسلها MEFs مرة واحدة مع درجة حرارة الغرفة 1 × PBS ، ودرجة الحموضة 7.4 ، ثم يضاف 15ml من وسائل الإعلام وفاق تستكمل مع bFGF 5ng/ml إلى القارورة. (ملاحظة : يمكن مطلي MEFs في قوارير أصغر أو أكبر ولكن النسبة بين كثافة الخلايا وحجم وسائل الإعلام ينبغي أن يكون وفاق دائم.) هو المحتضنة القارورة في درجة مئوية لمدة 37 ساعة 24. في اليوم الثالث ، يتم جمع CM واستبدالها 15ml من وسائل الإعلام وفاق جديدة تستكمل مع bFGF 5ng/ml. يتم تخزين CM جمعها في 4 درجة مئوية. ويتم حصاد MEF مكيفة وسائل الاعلام من الطلاء من MEFs على مدى سبعة أيام متتالية لتوليد 15 × 7 = 105ml. بعد سبعة أيام ، يتم دمج جميع الكسور CM ، العقيمة التي تمت تصفيتها ، وتخزينها في aliquoted -20 درجة مئوية. أعدت وسائل الاعلام كما هو موضح CM يمكن تخزينها واستخدامها في 1 الشهر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل يوم واحد تقسيم hESC ، وطرح aliquots Matrigel في أنابيب إيبندورف في 4 درجات مئوية لذوبان الجليد بين عشية وضحاها (واحد يحتوي على 76.2mg قسامة من Matrigel ، وهذا هو المبلغ اللازم لوحة 6 - جيدا واحد). يوم تقسيم ، تأخذ واحدة من القارورة Matrigel إذابة لوحة 6 - جيدا واحد ، وضع قنينة من وسائل الإعلام و6ml DMEM/F12 الباردة على الجليد. نقل إلى وسائل الإعلام Matrigel DMEM/F12 وتخلط جيدا. إضافة 1ml من حل كل بئر من لوحة 6 - جيدا. دوامة لوحة توزيع Matrigel على سطح اللوحة ، واحتضان Matrigel مغطاة في درجة حرارة الغرفة لمدة لا تقل عن 1 ساعة قبل تقسيم hESCs. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم غسلها على hESCs MEFs مرة واحدة مع 1 × PBS ، ودرجة الحموضة 7.4. وأضاف في وقت لاحق من 1ml الرابع كولاجيناز الدافئة (1mg/ml) إلى كل جانب من لوحة 6 - جيدا ثم يتم تحضين لوحة عند 37 درجة مئوية لمدة 5-10 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 1ml من وسائل الإعلام من دون وفاق bFGF إلى كل بئر. استخدام ماصة 1ml لتفجير الخلايا الجذعية خارج اللوحة. جمع كل وسائل الإعلام التي تحتوي على كتل من hESCs وMEFs القتلى في أنبوب الصقر 50ml. اسمحوا كتل كبيرة من الخلايا لتسوية 50-10 دقيقة حتى يتسنى للكتل hESC تشكيل بيليه في أسفل الأنبوب ، بينما تظل معلقة في MEFs في طاف. تجاهل طاف ، وتغسل عن طريق إعادة التعليق على بيليه hESC باستخدام وسائل الإعلام التي تفتقر إلى وفاق bFGF ، تليها الطرد المركزي في درجة حرارة الغرفة في 200G لمدة 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لوحة الخلايا الجذعية على لوحات Matrigel ، وغسل أول لوحات Matrigel مع درجة حرارة الغرفة DMEM/F12 (1ml لكل بئر) وإضافة 2.5ml من CM تستكمل مع bFGF 10ng/ml لكل بئر. Resuspend الكرية في حجم مناسب لCM تستكمل مع bFGF 10ng/ml ، ماصة تعليق خلية صعودا وهبوطا عدة مرات حتى تصبح موحدة وكتل صغيرة في الحجم. قسامة التعليق في 0.5ml لكل بئر على لوحة Matrigel. علما بأن كثافة مستعمرة على Matrigel أعلى من كثافة المستعمرات من خلال تقسيم المعتاد على MEFs. وضع لوحة في 37 درجة مئوية نسيج الثقافة الحاضنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للحفاظ على hESCs على Matrigel ، يتم تغيير وسائل الاعلام CM تستكمل مع bFGF 10ng/ml كل ساعة لمدة تصل إلى 24 يوما 4-5. </li></ol>

<ol><li>Thomson, J. amesA., Itskovitz-Eldor, J. oseph, Shapiro, S. anderS., Waknitz, M. ichelleA., Swiergiel, J. enniferJ., Marshall, V. ivienneS., Jones, J. effreyM. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+Stem+Cell+Lines+Derived+from+Human+Blastocysts++%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Embryonic Stem Cell Lines Derived from Human Blastocysts .</a> Science. 282, 1145-1147 (1998).</li>
<li>Xu, C. hunhui, Inokuma, M. argaretS., Denham, J. errod, Golds, K. athaleen, Kundu, P. ratima, Gold, J. osephD., Carpenter, M. elissaK. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feeder-free+growth+of+undifferentiated+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Feeder-free growth of undifferentiated human embryonic stem cells.</a> Nature Biotechnology. 19, 971-974 (2001).</li>
</ol>

هذا الفيديو يوضح كيفية الانتقال من لوحات hESCs MEF لوحات التغذية Matrigel خالية من الخلايا. علما بأن كثافة مستعمرة على Matrigel أعلى من كثافة المستعمرات من خلال تقسيم المعتاد على MEFs. وهناك حاجة وتلطيخ المناعي الخلوي المجهري أو تدفق للعلامات hESC تعدد القدرات ، مثل أكتوبر وSSEA - 4 - 4 ، لتأكيد الحفاظ على hESCs في حالة غير متمايزة في ظروف خالية من الثقافة الفرعية.

<table><tbody><tr><td>بديل المصل خالي الخلايا (KSR)</td><td>كاشف</td><td>GIBCO، من شركة Life Technologies</td><td>10828-028</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>كاشف</td><td>GIBCO، من إنتاج Life Technologies</td><td>11330-057</td><td></td></tr><tr><td> الأحماض الأمينية غير الأساسية</td><td>كاشف</td><td>GIBCO، من شركة Life Technologies</td><td>11140-050</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMax </td><td>كاشف</td><td>GIBCO، من إنتاج Life Technologies</td><td>35050-061</td><td></td></tr><tr><td>وسط ميرل هانسن المعدل بمجموعات من الأحماض الأمينية الأساسية (DMEM)</td><td>كاشف</td><td>GIBCO، من إنتاج Life Technologies</td><td>11995-065</td><td></td></tr><tr><td>مصل جنين البقر</td><td>كاشف</td><td>مختبرات Clontech</td><td>631107</td><td></td></tr><tr><td>إل-جلوتامين</td><td>كاشف</td><td>GIBCO، من إنتاج Life Technologies</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>الهندسة الطبية الحيوية</td><td>كاشف</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP176-100</td><td></td></tr><tr><td>عامل نمو الأرومة الليفية الأساسي (bFGF)</td><td>كاشف</td><td>R&amp;أنظمة Amp&D</td><td>233-FB-025</td><td></td></tr><tr><td>كولاجيناز IV</td><td>كاشف</td><td>GIBCO، من إنتاج Life Technologies</td><td>17104-019</td><td></td></tr><tr><td>ديسبيز (Dispase)</td><td>كاشف</td><td>تقنيات الخلايا الجذعية</td><td>17105-041</td><td></td></tr><tr><td>بنسلين / ستربتوميسين </td><td>كاشف</td><td>GIBCO، المقدمة من Life Technologies</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>جيلاتين</td><td>كاشف</td><td>Chemicon International</td><td>ES-006-B</td><td></td></tr><tr><td>ماتريجيل (Matrigel)</td><td>كاشف</td><td>BD Biosciences</td><td>354277</td><td></td></tr><tr><td>جسم مضاد لـ Oct-4</td><td>كاشف</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>SC-9081</td><td></td></tr><tr><td>Anti-h/mSSEA-4 Phyc&amp;#8211;IgG3 فأري مقترن بالريثرين</td><td>كاشف</td><td>ر&amp;amp;D Systems</td><td>FAB1435P</td><td></td></tr><tr><td>مضاد IgG للأرنب المقترن بـ FITC</td><td>كاشف</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>715-095-152</td><td></td></tr></tbody></table>

من mefs إلى 2 matrigel : hescs من تقسيم mefs على matrigel

From MEFs to Matrigel 2: Splitting hESCs from MEFs onto Matrigel

هذا الفيديو يوضح كيفية زراعة الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESCs) على الخلايا الليفية الماوس الجنينية (MEF) الخلايا المغذية ، وكيفية الانتقال من لوحات hESCs MEF لتغذية خالية من الخلايا لوحات Matrigel.

هذا الفيديو يوضح كيفية الحفاظ على نمو خلايا المنشأ الجنينية البشرية (hESCs) في ظروف خالية من الخلايا المغذية وكيفية hESCs مرور مستمرة في تغذية الخلايا خالية من الشروط. تأكيد hESC تعدد القدرات التي تزرع في تغذية الخلايا خالية من الشروط التي المجهري المناعي ويتجلى أيضا. الجزء 2 من 3.

من MEFs إلى 2 Matrigel : hESCs من تقسيم MEFs على Matrigel

يوضح هذا الفيديو كيفية تنمية الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESCs) على خلايا مغذية من الأرومات الليفية الجنينية للفأر (MEF)، وكيفية تمرير الخلايا الجذعية الجنينية البشرية من خلايا MEF...

للحفاظ على مستنبت الخلايا الجذعية الجنينية البشرية، يجب تغيير أوساط الاستنبات كل 24 ساعة. وللقيام بذلك، ابدأ باستخدام زجاجة مخزون من وسط استنبات الخلايا الجذعية الجنينية المحفوظة في درجة حرارة أربع درجات مئوية. اسحب كمية المحلول المطلوبة، والتي تكون عادةً حوالي 20 milliliters لكل ستة.صفيح الآبار وضع تلك الكمية في أنبوب فالكون سعة 50 milliliter وقم بتدفئة الأنبوب ومحتوياته إلى 37 degrees Celsius في حمام مائي. وبمجرد تدفئة الوسط، أضف FGF، الذي تم تخزينه في درجة حرارة 4 degrees Celsius، ليصل إلى تركيز نهائي قدره 10 nanograms per mil. تأكد من تذكر إعادة مخزون BFGF إلى درجة حرارة 4 degrees Celsius فور الاستخدام.تأكد من خلط عامل نمو الأرومة الليفية الأساسي (BFGF) جيداً في وسط استزراع الخلايا الجذعية البشرية amox. بعد ذلك، قم بإزالة جميع أوساط الاستزراع من كل بئر مع ترك حوالي 500 microliters في كل بئر. ثم، أضف ثلاثة milliliters من وسط استزراع جديد إلى كل بئر من أطباق الاستزراع ذات الستة آبار، وأعد الطبق إلى الحاضنة.بعد أن أوضحنا لكم كيفية الحفاظ على الخلايا الجذعية الجنينية البشرية في مصفوفات نانوية مرتبة (ONMs)، سنوضح لكم الآن كيفية نقلها إلى الماتريجيل (matrigel). لتقسيم الخلايا الجذعية الجنينية البشرية النامية على مصفوفات ONMs إلى ماتريجيل، نبدأ بصفيحة ذات ستة آبار تحتوي على خلايا جذعية متوافقة (confluent) على مصفوفات ONMs، والتي يمكن تقسيمها بنسبة 1:2 أو 1:3 على صفائح ماتريجيل ذات ستة آبار.سيسمح ذلك للآبار بأن تصبح متلاصقة مرة أخرى بعد أربعة إلى خمسة أيام من عملية التقسيم. عند تقسيم الخلايا الجذعية الجنينية البشرية على matrigel، استخدم meth condition media للحفاظ على تعدد القدرات، حيث يتم تحضير meth conditioned media مسبقاً. يتم ذلك عن طريق جمع الوسط الغذائي، المكمل بـ 5 ng/mL من BFGF من مزرعة meth نامية يومياً لمدة سبعة أيام، ويُستخدم الوسط الغذائي للخلايا الجذعية الجنينية لاستبدال meth conditioned media الذي تمت إزالته.يومياً. يجب استخدام الأوساط الغذائية المكيفة بـ Meth لمدة تصل إلى شهر واحد بعد جمعها وتخزينها مجمدة. وفي اليوم الذي يسبق تقسيم الخلايا الجذعية الجنينية البشرية، ننقل حصص matrigel في أنابيب EOR من -20 °C إلى 4 °C لإذابتها طوال الليل.تحتوي كل حصة على مليجرامين من Matrigel، وهي الكمية اللازمة للوحة واحدة ذات ستة آبار. في يوم التقسيم، خذ قارورة واحدة من Matrigel المذاب.لكل طبق مكون من ستة آبار، اخلط كل أنبوبة بـ 6 mL من وسط D-M-E-M-F 12 البارد. تذكر الحفاظ على هذا المزيج فوق الثلج. أضف 1 mL من المحلول إلى كل بئر من آبار الطبق المكون من ستة آبار.ثم قم بتدوير الطبق لتوزيع الماتريجيل (matrigel) على السطح، واحضن الطبق المغطى بالماتريجيل في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة على الأقل قبل تقسيم الخلايا الجذعية الجنينية البشرية. وقبل تقسيم الخلايا الجذعية الجنينية البشرية، اغسل الخلايا الجذعية الموجودة على وسط MES مرة واحدة باستخدام XPBS pH 7.4. بعد ذلك، أضف واحد ملليليتر من الكولاجينيز 4 (collagenase four) الدافئ بتركيز 1 mg/mL إلى كل بئر من الآبار التي سيتم تقسيمها، ثم احضن الطبق عند 37 °C لمدة تتراوح من 5 إلى 10 دقائق.بعد الحضن، أضف 1 milliliter من وسط الخلايا الجذعية الجنينية بدون BFGF إلى كل بئر، واستخدم ماصة سعة 1 milliliter لنزع الخلايا الجذعية من الطبق. اجمع كل الوسط الذي يحتوي على تكتلات الخلايا الجذعية والخلايا المتوسطة الميتة في أنبوب falcon سعة 15 milliliter. اترك تكتلات الخلايا الكبيرة تترسب لمدة خمس دقائق بحيث تشكل تكتلات الخلايا الجذعية راسباً في قاع الأنبوب بينما تظل الخلايا المتوسطة معلقة في السائل العلوي.بمجرد أن تبدو الخلايا قد استقرت، تخلص من السائل الطافي واغسل الخلايا عن طريق إعادة تعليق كريسولة الخلايا الجذعية الجنينية. باستخدام وسط زراعة الخلايا الجذعية الجنينية الخالي من BFGF، قم بإجراء عملية الطرد المركزي عند درجة حرارة الغرفة بسرعة 200 ×g لمدة خمس دقائق. وأثناء دوران الخلايا، يمكننا تحضير أطباق الماتريجيل (matrigel) لزراعة الخلايا الجذعية عن طريق غسل الأطباق بـ D-M-E-M-F 12 بدرجة حرارة الغرفة بمعدل 1 mL لكل بئر، وإضافة 2.5 mL من الوسط المكيف المدعم بـ 10 ng/mL.BFGF لكل بئر بعد عملية الطرد المركزي. أعد تعليق الراسب في حجم مناسب من الوسط المكيف بـ meth والمضاف إليه 10 nanograms per mil من BFGF، ثم اسحب معلق الخلايا بالماصة صعوداً وهبوطاً عدة مرات حتى تصبح التجمعات متجانسة وصغيرة الحجم.بعد ذلك، يتم توزيع المعلق بمقدار 0.5 milliliters لكل بئر في طبق الماتريجل (matrigel) للوصول إلى حجم نهائي قدره 3 milliliters لكل بئر. بالنسبة للماتريجل، نستخدم كثافة مستعمرات أعلى مما هو معتاد عند التقسيم التقليدي بمجرد إضافة الخلايا. ضع الطبق في حاضنة زراعة أنسجة عند درجة حرارة 37 °C.للحفاظ على الخلايا الجذعية الجنينية البشرية في ظروف مصفوفة الماتريجيل (matrigel)، يتم تغيير الوسط الغذائي المضاف إليه 10 nanograms per mil من عامل نمو الأرنب الأساسي (BFGF) كل 24 ساعة ولمدة تصل إلى أربعة أو خمسة أيام.عادةً ما تكون الخلايا الجذعية الجنينية البشرية ملوثة بكميات متبقية من خلايا MEFs بعد عملية التقسيم الأولى على matrigel، وسوف تؤدي عملية التقسيم الثانية من matrigel إلى Matrigel إلى إزالة أي آثار للخلايا المغذية التي تلوث مستنبت الخلايا الجذعية تماماً.

from-mefs-to-matrigel-2-splitting-hescs-from-mefs-onto-matrigel

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

في هذا الفيديو كيف نظهر مختبرنا الممرات بشكل روتيني الأشكال البشرية خطوط الخلايا الجذعية الجنينية مع التربسين.

الأشكال الركض الجذعية الجنينية البشرية خلية خطوط مع التربسين

هذا الفيديو يوضح كيفية زراعة الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESCs) على الخلايا الجنينية الماوس الليفية التغذية (MEF). جزء 1 من 3.

من MEFs لMatrigel الأول : hESCs الركض في وجود MEFs

هذا الفيديو يوضح كيفية الحفاظ على نمو خلايا المنشأ الجنينية البشرية (hESCs) في ظروف خالية من الخلايا المغذية وكيفية hESCs مرور مستمرة في تغذية الخلايا خالية من الشروط. تأكيد hESC تعدد القدرات التي تزرع في تغذية الخلايا خالية من الشروط التي المجهري المناعي ويتجلى أيضا. الجزء 3 من 3.

من MEFs لMatrigel 3 : hESCs من الركض على Matrigel Matrigel

هذه المادة سوف تركز على جيل من الأديم الباطن كبدي الإنسان من الجنينية البشرية السكان الخلايا الجذعية.

قوية من الجيل الكبدية مثل خلايا الجنينية البشرية من السكان الخلايا الجذعية

تمليه نوعية الخلايا الليفية الجنينية الماوس (MEFs) عن طريق الضغط على الفأرة اليمين مثل CF-1. وينبغي أن تعدد القدرات الداعمة للMEFs وسائل الإعلام مكيفة (CM) التي تم الحصول عليها من هذه تحتوي على تركيزات الأمثل للActivin، عفريت وTgfβ1 اللازمة لActivin / العقدية ومسارات جمعية جيل المستقبل إلى تعاونية الحفاظ على الذات وتجديد تعدد القدرات.

إعداد خلايا الفأر الجنينية الخلايا الليفية مناسبة للالإنسان التثقيف الجنينية والتي يسببها الخلايا الجذعية المحفزة

على الرغم من الجهود الجارية لثقافات الانتقال إلى شروط التغذية الحرة، والاشتقاق وثقافة الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESC) لا تزال تعتمد إلى حد كبير على الثقافات بالتعاون مع مغذيات الماوس الجنينية (MEFs). هنا، وتبين لنا منهجية جديدة لإزالة بسرعة من مغذيات الثقافات hESC قبل التجريب.

إزالة الخلايا الليفية السريع من الكثافة البشرية العالية الجنينية الخلايا الجذعية الثقافات

هنا، نحن تصف البروتوكول استنادا إلى إعادة برمجة جينية للخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESCs) نحو توليد السكان متجانسة من الأسلاف العضلات والهيكل العظمي أنه في ظل ظروف ثقافة متساهلة تشكيل مجموعات ثلاثية الأبعاد من myofibers مقلص (myospheres)، والتي تلخص السمات البيولوجية البشرية عضلات الهيكل العظمي.

جيل من Myospheres من hESCs بواسطة إعادة برمجة جينية

هنا ، نقدم بروتوكولات زراعة الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات (hPSC) ، بناء على نمو أحادي الطبقة من النوع غير المستعمري (NCM) للخلايا المفردة المنفصلة. هذه الطريقة الجديدة ، باستخدام مثبطات كيناز مرتبطة بالروي أو الشكل الإسوي اللامينين 521 (LN-521) ، مناسبة لإنتاج كميات كبيرة من hPSCs المتجانسة ، والتلاعب الجيني ، واكتشاف الأدوية.

الثقافات البديلة لافرة القوة البشرية الجذعية إنتاج الخلية، الصيانة، والتحليل الوراثي

خطوط الخلايا مراسل توفر وسيلة لتصور، وتتبع وعزل الخلايا من الاهتمام من السكان غير متجانسة. ومع ذلك، باستخدام إعادة التركيب مثلي التقليدية في الخلايا الجذعية الجنينية البشرية استهداف الجين غير فعال للغاية. هنا، نحن تصف استهداف CNS محدد المخ الأوسط عامل النسخ PITX3 موضع مع EGFP باستخدام إصبع الزنك نوكلياز تعزيز إعادة التركيب مثلي.

الزنك الاصبع نوكلياز المحسن استهداف الجينات في الخلايا الجذعية الجنينية البشرية

هنا ، نقدم بروتوكولا لتوليد خلايا الأرومة الغاذية البشرية بكفاءة من الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات باستخدام البروتين المورفوجينيك للعظام 4 ومثبطات مسارات Activin / Nodal. هذه الطريقة مناسبة للتمايز الفعال للخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات ويمكن أن تولد كميات كبيرة من الخلايا للتلاعب الجيني.

في المختبر تمايز متعددة القدرات البشرية الخلايا الجذعية إلى خلايا الأرومة الغاذية

غالبا ما تحتوي على البروتينات المجالات المتعددة التي يمكن أن تمارس الوظائف الخلوية المختلفة. الجينات ضرب الرافضة (KO) لا يعتبرون هذا التنوع الوظيفي. هنا، نحن الإبلاغ عن النهج المستندة إلى هيكل الوظائف بوساطة إعادة التركيب الصرف كاسيت (RMCE) في KO الخلايا الجذعية الجنينية التي تسمح للتشريح الجزيئي للمجالات أو أنواع من البروتين وظيفية مختلفة.

الدراسات هيكل الوظائف في الخلايا الجذعية الجنينية الماوس عن طريق بوساطة Recombinase-كاسيت تبادل

تعلم تقنيات زراعة خلايا الجنين البشرية الجذعية في ظروف خالية من الخلايا المغذية باستخدام Matrigel. يوضح هذا الفيديو طرق التمرير المستمر والتحقق من التعددية باستخدام مجهر التألق الضوئي.

من MEFs إلى 2 Matrigel : hESCs من تقسيم MEFs على Matrigel

استكشف المزيد من الفيديوهات