Name: تقنية التصوير السريع للخلايا الخميرة لايف مشلول (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-09T00:00:00.000+00:00
Duration: 2 min 54 s
Description: تعلم تقنية التصوير السريع للخلايا الخميرة المشلولة باستخدام كتل الأغار والوسط السائل. تتيح هذه الطريقة مراقبة التغيرات الوراثية أثناء الانقسام الخلوي لفترات طويلة.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

نود أن نشكر بيت هيوستن وشو يوجينيا لما قدموه من مساعدة الجميع.

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يجمد الخلايا للدوام epifluorescence المجهري. يرجى ملاحظة أن هذا البروتوكول هو الوحيد المفيد إذا كان الهدف من عدسات المجهر الخاص يقعون تحت المجهر المرحلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلايا في مكان التركيز المطلوب في وسائل الإعلام السائلة على ساترة طويلة (24x50mm تقريبا) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خفض كتلة آغار من الحجم المطلوب من وسائل الإعلام لوحة الاصطناعية (وهذه أقل وتألق ذاتي) ووضع على الخلايا. مكان جانب كتلة آغار لم يتم التعامل معها بواسطة الملقط في اتصال مع الخلايا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لدورات زمنية أقصر (حتى 3 ساعات) ، وهذا هو ما يصل مجموعة كافية. إذا الخلايا تتحرك عندما تصور على المجهر ، وانخفاض حجم الخلايا أو زيادة مساحة كتلة آغار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لدورات زمنية أطول ، ضع قطرة من وسائل الاعلام السائل الطازج على رأس كتلة آغار ، ووضع شريحة زجاجية على رأس كتلة آغار. هذه الشريحة من خلال يقلل تبخر الجزء العلوي من كتلة آغار. إذا رغبت في ذلك ، يمكن أن تكون مختومة حواف كتلة أغار على اتصال مع انزلاق الغطاء مع الفازلين لخفض مزيد من الرطوبة. ولقد استخدمت هذا إعداد للأفلام يصل إلى 9 ساعات طويلة ، مع تقسيم الخلايا بمعدلات نوع البرية. </li></ol>

<ol>
	<li>Xu, E. Y., Zawadzki, K. A., Broach, J. R. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+observations+reveal+intermediate+transcriptional+silencing+states.">Single-cell observations reveal intermediate transcriptional silencing states.</a> Mol. Cell. 23, 219-229 (2006).</li></ol>

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإفصاح عنه.

هذا هو الأسلوب السريع الذي يشل خلايا الخميرة في حين لا يزال يسمح النمو. لقد تابعنا نمو الخميرة لمدة تصل إلى عشر ساعات ، مع عرض الخميرة البرية معدلات تقسيم النوع في كافة مراحل التجربة. علما بأن هذا الإعداد يتطلب أن يكون الهدف عدسة تحت المجهر المرحلة.

تقنية التصوير السريع للخلايا الخميرة لايف مشلول

A Rapid Technique for the Visualization of Live Immobilized Yeast Cells

نقدم هنا تقنية بسيطة وسريعة ومرنة للغاية بالنسبة للتجميد والتصور من خلايا الخميرة تنمو بنسبة epifluorescence المجهري. هي مناسبة أيضا لرؤية هذه التقنية للسكان الخميرة ثابت ، أو الوقت تجارب دورات تصل إلى عشر ساعات في الطول. المجهري بلدي يحقق الميراث اللاجينية في مواضع التزاوج صامتة في البيرة س. هناك نوعان من التزاوج مواضع الصمت ، وHML HMR ، والتي عادة لا يعبر عنه وتغليفها في المغاير. في إسكات sir1 خلفية متحولة يضعف بحيث كل مكان يمكن أن يكون إما في الدولة أو إسكاته وأعرب اللاجينية ، وذلك في عدد السكان ككل هناك مزيج من خلايا جينية مختلفة من الدول على حد سواء وHML HMR. أظهر الفحص المجهري أرى أن هناك أي علاقة بين الدولة واللا جينية للHML HMR في زنزانة منفردة. sir1 خلايا جينية تبديل عشوائيا الدول ، ووضع في مكان إسكات أعرب سابقا ، أو تعبر عن موضع إسكات سابقا. مجنزرة المجهري بلدي دوام الفردية sir1 الخلايا وذريتهم ليسجل وتيرة كل من مفاتيح four اللاجينية ممكن ، وبالتالي على استقرار كل دولة من الدول جينية في خلايا sir1. انظر أيضا شو وآخرون ، مول. خلية 2006.

تقنية سريعة للتصور المتزايد يجمد خلايا الخميرة ، وتطبق هنا للصحفيين في فلوري HML التزاوج مواضع الصمت وHMR

نقدم هنا تقنية بسيطة وسريعة ومرنة للغاية لتثبيت وتصور خلايا الخميرة النامية باستخدام الفلورة فوق البؤرية (epifluorescence)...

الهدف من التجربة هو القدرة على تتبع مجموعة من خلايا sir one تحت المجهر، وذلك لرصد كيفية تغير الحالات فوق الجينية ومعدل تكرار هذا التغير مع كل انقسام متتالٍ للخلايا. أحضر شريحة غطاء طويلة، ثم خذ حوالي 7 µL من الخلايا وضعها على شريحة الغطاء الطويلة، واستخدم طبق وسط تخليقي. استخدم شفرة حلاقة لإجراء قطع في الآجار؛ قم بأخذ كتلة من الآجار، وارفعها ثم ضعها فوق الخلايا.حسنًا، بالنسبة للتجارب قصيرة المدى، التي تصل مدتها إلى ثلاث ساعات، فإن هذه الطريقة وحدها كافية. أما بالنسبة للتجارب طويلة المدى، فسيتم تثبيت الخلايا عن طريق إضافة وسط سائل إلى الجزء العلوي من وسادة الآجار، ثم وضع شريحة زجاجية فوق المجموعة كاملة.سيعمل الوسط كختم بين الاثنين. أما الشريحة، فهي مخصصة فقط لمنع التبخر من الجزء العلوي لكتلة الآجار. وبذلك، ومع هذا الإعداد، ستظل كتلة الآجار رطبة وستستمر الخلايا في الانقسام لمدة تصل إلى ثماني ساعات على الأقل.

a-rapid-technique-for-visualization-live-immobilized-yeast

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

حذف الجينات والبروتينات overexpression طرق مشتركة لدراسة وظائف للبروتينات. في هذه المقالة ، نحن تصف بروتوكولا لتحليل تطور النمط الظاهري كدالة للتركيز البروتين في السكان وحيدة الخلية في...

تحليل للوضع النمط الظاهري المورفولوجية كدالة للتركيز البروتين في الخميرة الناشيء.

وهناك طريقة لتضمين مستعمرات الخميرة السماح لsectioning المجهر الضوئي والإلكترون. هذا البروتوكول يسمح بتحديد توزيع الخلايا والخلايا sporulated الكاذبة داخل المستعمرات توفير أداة جديدة لفهم تنظيم أنواع الخلايا داخل المجتمع الفطرية.

أسلوب الخميرة مستعمرة التضمين

ووصف نهج قوي لمراقبة تسليم العضيات لمعة الحامضية للفجوة الخميرة للتحلل وإعادة التدوير. الأسلوب يعتمد على وضع العلامات المحددة الهدف العضيات مع مضان المزدوجة الانبعاثات المرمزة وراثيا الحموضة ، جهاز الاستشعار البيولوجي ، والتصور من الخلايا الفردية باستخدام المجهر مضان.

والفحص المجهري لالإسفار Mitophagy الرصد في الخميرة السكيراء الجعوية

الكمية خلية حية الإسفار - المجهري تحليل الخميرة الانشطار

نقدم بروتوكول بسيط للحصول على الأفلام المجهري مضان من خلايا الخميرة في التزايد، ومجموعة من البرامج المستندة إلى واجهة المستخدم الرسومية لاستخراج البيانات وحيدة الخلية سلسلة زمنية. يتضمن تحليل النسب الآلي وتقسيم الوقت الاحالة متكاملة مع الفحص البصري وكرأيشن اليدوي للبيانات مجنزرة.

الحصول على الإسفار الوقت الفاصل بين الأفلام من الخميرة في مهدها وتحليل ديناميات وحيدة الخلية باستخدام الطعوم

يتم تقديم طريقة للكروموسومات المنتشرة على السطح من الخميرة الناشئة. هذه الطريقة مشتقة من طريقة وصفها Loidl و Klein سابقا. بالإضافة إلى ذلك ، نعرض إجراء للتلوين المناعي للكروموسومات المنتشرة.

سطح نشر والمناعية من الكروموسومات الخميرة

نحن نقدم طريقة أساسية قابلة للتكرار للفحص المجهري طويل المدى لدورة الحياة الجنسية للخميرة الانشطارية. مع التعديلات الطفيفة الموصوفة ، يسمح البروتوكول المقدم بالتركيز البحثي على خطوات مختلفة من عملية الإنجاب.

المجهر من دورة حياة الجنسية الانشطار الخميرة

يصف هذا البروتوكول تحليل المقصورات داخل الخلايا التي تحمل علامة الفلورسنت في الخميرة الناشئة باستخدام مجهرية متعددة الألوان 4D (الفاصل الزمني 3D). يتم اختيار معلمات التصوير لالتقاط إشارات كافية مع الحد من الأضرار الضوئية. تسمح الإضافات المخصصة لـ ImageJ بتتبع الهياكل المسماة وتحليلها كمياً.

4D مجهرية الخميرة

هنا، نقدم التصوير بالخلايا الحية وهو طريقة مجهرية غير سامة تسمح للباحثين بدراسة سلوك البروتين والديناميات النووية في خلايا الخميرة الانشطارية الحية أثناء الداء الميتوميوميس.

فحص الديناميات النووية الخميرة الانشطارية الميتومية وMeiotic عن طريق الفلورة الخلية الحية المجهرية

الاصباغ الفلورية الحيوية هي أدوات أساسيه لتحليلات التصوير بالخلايا الحية في بيولوجيا الخلايا الفطرية الحديثة. هذه الورقة تفاصيل تطبيق الاصباغ الفلورية الثابتة والمعروفة لتتبع ديناميات غشاء البلازما ، اندو-/الندرات والخلايا الجدارية تخلق في الفطريات الخيطية.

تطبيق غشاء وجدار الخلية الاصباغ الفلورية الانتقائية لتصوير الخلايا الحية من الفطريات الخيطية

تعلم تقنية التصوير السريع للخلايا الخميرة المشلولة باستخدام كتل الأغار والوسط السائل. تتيح هذه الطريقة مراقبة التغيرات الوراثية أثناء الانقسام الخلوي لفترات طويلة.

تقنية التصوير السريع للخلايا الخميرة لايف مشلول

استكشف المزيد من الفيديوهات