Name: ES خلايا الإنسان : ثقافة ابتداء من خلايا مجمدة (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-09T00:00:00.000+00:00
Duration: 2 min 47 s
Description: تعلم بروتوكول استزراع خلايا جذعية جنينية بشرية من مخزون مجمد لأبحاث علم الأعصاء والتنمية الحيوية. يضمن هذا الأسلوب قابلية التكرار والحفاظ على حيوية الخلايا للتجارب المستقبلية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

ذوبان الجليد من الأسهم المجمدة : <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل ذوبان الأشكال الخلايا ، وضمان مطلي بشكل صحيح لوحة MEF لديك بالفعل وعلى استعداد في حالة جيدة. DO NOT محاولة استخدام لوحة أقل من المرغوب فيه ، أو واحد هو أن أقدم من ثلاثة أيام. فمن المستحسن أن التسمية السابقة تستخدم جميع الأنابيب المخروطية والآبار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل الدافئة الاشكال وسائل الاعلام الى 37 درجة مئوية. قسامة الأشكال وسائل الاعلام في أنبوب مخروطي معقمة في كل سطر. إزالة الأشكال فيال / ق -80 ويغرق من الفور في النصف السفلي من الأنبوب في حمام مائي 37 ° C. وينبغي أن يستغرق حوالي 45-60 ثانية قبل أن الخلايا 80 ٪ إذابة (جزء صغير مجمدة اليسار). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جلب بسرعة الأنبوب إلى تدفق الصفحي هود ، الرذاذ أسفل مع الكحول 70 ٪ ، ونقل الخلايا برفق إلى ما قبل تحسنت وسائل الإعلام. تدور في أنبوب ، وإزالة وسائل الإعلام ، وresuspend في حجم مناسب لالعذبة ، والأشكال وسائل الاعلام قبل تحسنت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح قبالة الإعلام MEF من حيث العديد من الآبار كما أنك سوف تكون في الذوبان. بسرعة ، قسامة قبل تحسنت الأشكال وسائل الإعلام مرة أخرى في كل بئر من لوحة ، والحرص على عدم تعكير صفو MEFs المرفقة. تعيين لوحة جانبا في غطاء محرك السيارة. كما هو الحال مع MEFs ، ويتم الحصول على أفضل النتائج إذا ما وزعت بالتساوي قطرات حول اللوحة. عودة بعناية لوحة للحاضنة 37 درجة مئوية خلال الليل للسماح للخلايا الأشكال إلى البذور MEFs. تغيير الإعلام ~ بعد 48 ساعة من ذوبان الجليد ، لتحل محل وسائل الاعلام مع الأشكال الجديدة. </li></ol>

<ol><li>Cowan, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+Embryonic+Stem+Cells+from+Human+Blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Derivation of Embryonic Stem Cells from Human Blastocysts.</a> , 1650-1656 (2004).</li>
</ol>

ليس لدى المؤلفين أي تعارض في المصالح للإفصاح عنه.

في هذا الفيديو ، وتبين لنا كيف يحدد المختبر لدينا بشكل روتيني الأشكال الجذعية الجنينية البشرية خلية ثقافة من الأسهم المجمدة. هذه العملية هي قابلة للاستخدام العام مع أي خلايا الثدييات إذا المجمدة في حل DMSO. ذوبان كفاءة أمر ضروري لإرساء ثقافة جديدة من الخلايا الأشكال من الأسهم المجمدة ، والمهم بالنسبة الاتساق التجريبية.

الأشكال وسائل الاعلام 651.5 مل KO - DMEM 500 مل 6.5 مل PenStrep Glutamin 6.5 مل 6.5 مل NEAA بيتا المركابتويثانول 0.5ul استبدال المصل KO 65 مل 65 مل Plasmanate bFGF2 (10 نانوغرام / مل النهائي) 0.65 مل

es خلايا الإنسان : ثقافة ابتداء من خلايا مجمدة

Human ES cells: Starting Culture from Frozen Cells

نحن هنا لشرح كيفية مختبرنا يبدأ الأشكال الجذعية الجنينية البشرية خلية ثقافة سطر من الأسهم المجمدة. أولا ، يتم شطف a 1-2 اليوم وحة الطول العمر عشرة من واحد تقريبا (لاثنين) مليون المشع الليفية التغذية الماوس الجنينية خلايا الاشكال مع وسائل الاعلام لازالة الحطام وبقايا مصل الخلية ، ثم الأشكال وسائل الاعلام واليسار وأضاف أن يوازن في الخلية الثقافة الحاضنة. هو مصدر المجمدة قارورة من الخلايا على المدى الطويل من تخزين النتروجين السائل أو المجمد A - 80C وسرعان ما غرقت في حمام مائي 37C لذوبان سريع. ثم تتم إزالة الخلايا في وسائل الاعلام من تجميد القارورة ووضعها في مجلد كبير من وسائل الاعلام الأشكال. حجم كبير من الأشكال وسائل الاعلام المصل يسهل إزالة الزائدة وDMSO ، والتي يمكن أن تسبب الأشكال الخلايا الجذعية الجنينية البشرية للتمييز. هي نسج الخلايا برفق من التعليق ، ومن ثم إعادة معلقة في حجم صغير وسائل الاعلام الأشكال الجديدة التي يتم استخدامها بعد ذلك إلى البذور لوحة MEF. ويعتبر أن من المهم أن البذور لوحة MEF بإضافة بلطف خلايا الأشكال بطريقة حكيمة لتفريق قطرة بالتساوي لهم في جميع أنحاء اللوحة. يتم إرجاع الثقافة الأشكال التي أنشئت حديثا لوحة إلى حاضنة لمدة 48 ساعة قبل أن يتم استبدال وسائل الإعلام ، ثم يتم تغذية كل 24 ساعة بعد ذلك.

نحن هنا لشرح كيفية مختبرنا يبدأ الأشكال الجذعية الجنينية البشرية خلية ثقافة سطر من الأسهم المجمدة.

ES خلايا الإنسان : ثقافة ابتداء من خلايا مجمدة

نوضح هنا كيفية بدء مختبرنا في استزراع خط خلايا جذعية جنينية بشرية من نوع HuES من مخزون مجمد. أولاً، يتم أخذ طبق مقاس 10 سم عمره من يوم إلى يومين من...

human-es-cells-starting-culture-from-frozen-cells

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

نحن هنا لشرح كيفية مختبرنا يتجمد الأشكال الجذعية الجنينية خطوط الخلايا البشرية.

تجميد الخلايا البشرية ES

منذ جيمس طومسون وآخرون تطوير تقنية في عام 1998 لعزل وتنمو HES في الثقافة ، وتصبح خلايا لاستخدامها لاحقا تجميد والذوبان ، وتوسيع الخلايا من الأوراق المالية المجمدة الاجراءات الهامة التي أجريت في خلية ثقافة HES الروتينية. منذ HES خلايا حساسة للغاية لتؤكد للتجميد والذوبان ، يجب توخي الحذر خاصة. نحن هنا لشرح الطريقة المناسبة لإذابة الخلايا بسرعة HES من المخزونات النيتروجين السائل ، والطلاء لهم على الخلايا الجنينية الماوس المغذية ، وتجميد ببطء لهم على المدى الطويل التخزين.

تجميد والذوبان الخلايا الجذعية الجنينية البشرية

نقدم لبروتوكول لإعادة برمجة الخلايا الجسدية من كفاءة الإنسان في صنع الإنسان الخلايا الجذعية المحفزة (hiPSC) باستخدام نواقل فيروس ترميز Oct3 / 4، Sox2، Klf4 و C-myc (OSKM) وتحديد hiPSC برمجتها بشكل صحيح عن طريق تلطيخ على الهواء مباشرة مع هيئة تنظيم الاتصالات 1-81 الأجسام المضادة.

اختيار وعزل المستعمرات من صنع الإنسان الخلايا الجذعية المحفزة برمجتها من الخلايا الليفية الكبار

نصف بروتوكولا لعزل واستزراع الخلايا الظهارية للسلى البشري (hAECs) باستخدام الكواشف الخالية من المنتجات الحيوانية وفقا لإرشادات ممارسات التصنيع الجيدة الحالية (cGMP).

العزلة، والحفظ بالتبريد والثقافة من الخلايا الظهارية البشرية السلى للتطبيقات السريرية

توفر هذه المخطوطة إجراء خطوة بخطوة لاشتقاق الخلايا الكيراتينية البشرية وصيانتها من الشعر المقطوع والجيل اللاحق من الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان الخالية من التكامل (hiPSCs) بواسطة النواقل العرضية.

جيل من التكامل خالية الإنسان المستحثة متعددة القدرات الخلايا الجذعية عن طريق الشعر المستمدة من الخلايا الكيراتينية

يوفر هذا البروتوكول طريقة بسيطة وفعالة لنشر الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات (hPSCs) باستخدام الوسائط المكيفة فقط المشتقة من المشيمة البشرية في طبق مغطى بالجيلاتين دون مكملات خارجية إضافية أو طبقات أساسية اصطناعية خاصة ب hPSC.

ثقافة نموذج رواية لالمحفزة الإنسان الجذعية نشر خلية على الجيلاتين في وسائل الإعلام مكيفة المشيمة-

جلد الإنسان يعمل كخط أول للدفاع ضد البيئة الخارجية. نحن نقدم طريقة لعزل الخلايا الكيراتينيه البشرية الأساسية من الجلد الكبار. هذه الخلايا الكيراتينيه معزولة هي مفيدة في الأجهزة التجريبية العديدة، وهي نموذج مناسب جداً لدراسة الآليات الجزيئية في البيولوجيا الجلدي في المختبر.

جيل واستزراع من الخلايا الكيراتينيه البشرية الأساسية من الجلد الكبار

ويرد على بروتوكول تحضير البولي فينيل الكحول-co-إيتاكونيك الهلاميات المائية الحمضية بصلابة متفاوتة، التي كانت المطعمة مع أو بدون أوليجوبيبتيديس، للتحقيق في تأثير صلابة الحيوية على التفرقة وانتشار الخلايا الجذعية. وتسيطر صلابة من الهلاميات المائية الوقت كروسلينكينج.

ثقافة الخلايا الجذعية Pluripotent البشرية على حمض البولي فينيل الكحول-Co-إيتاكونيك الهلاميات المائية مع صلابة متفاوتة تحت ظروف خالية من كرة

هذا البروتوكول يتيح الحفاظ على الخلايا الجذعية الدموية البشرية هادئة في المختبر عن طريق محاكاة البيئة الدقيقة نخاع العظام باستخدام الأحماض الدهنية وفيرة, الكوليسترول, انخفاض تركيزات السيتوكينات, ونقص الأكسيجة.

طريقة ثقافية للحفاظ على الخلايا الجذعية الدموية البشرية الكويسنت

يوضح البروتوكول الحالي خطوات استكشاف أخطاء اشتقاق الخلايا الجذعية متعددة القدرات المستحثة (iPSC) من خلايا الدم أحادية النواة المحيطية (PBMCs) في عينات المرضى والتي كان من الصعب إعادة برمجتها وفقا لتعليمات الشركة المصنعة. هذا البروتوكول خاص بعينات الطبقة المجمدة من الطبقة البافي لكنه قد يطبق أيضا على إعادة برمجة أنابيب PBMC المنقية.

إعادة برمجة خطوط الخلايا الجذعية متعددة القدرات المستحثة من عينات معطف بافي المجمدة

تعلم بروتوكول استزراع خلايا جذعية جنينية بشرية من مخزون مجمد لأبحاث علم الأعصاء والتنمية الحيوية. يضمن هذا الأسلوب قابلية التكرار والحفاظ على حيوية الخلايا للتجارب المستقبلية.

ES خلايا الإنسان : ثقافة ابتداء من خلايا مجمدة

استكشف المزيد من الفيديوهات