Name: إعداد وصيانة الخلايا العصبية العقد الجذرية الظهرية في الثقافات Compartmented (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-10-17T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 43 s
Description: تعلم إعداد وصيانة الخلايا العصبية الحسية من العقد الجذرية الظهرية في ثقافات مُقسمة باستخدام أجنة فئران E15. تتيح هذه الطريقة دراسة نمو المحاور وتفاعلات الخلايا العصبية في بيئة مراقبة.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

نود أن نشكر كاتارينا Cosker وCourchesne ستيفاني لإجراء مناقشات مفيدة.

إعداد الكواشف <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> طلاء الكولاجين : الكولاجين معطف زراعة الأنسجة لوحات P35 ومكان في الفرن عند 37 درجة مئوية لمدة 2 قبل أيام تشحيم وفواصل. وينبغي تركيز النهائي من الكولاجين تكون على 0.71 ملغ / مل حمض الهيدروكلوريك المخفف في N 0.001. ثم ، إضافة 1 مل من مزيج لكل لوحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لوادر الشحوم : من أجل ملء المحمل الشحوم ، يجب أولا أن 60mL حقنة مليئة الشحوم فراغ كورنينج. استخدام حقنة لملء المحمل الشحوم ، وذلك في التفاف احباط ومن ثم تعقيم لمدة 45 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تفلون فواصل : يجب أولا أن تكون فواصل إعادة استخدامها بعد كل تجربة لكن يجب تنظيفها بشكل صحيح. إزالة حاجز من لوحة ، وتمحو كل ما تبقى من الشحوم ومكان في حامض الكبريتيك لمدة 2 ايام. بعد إزالة من الحامض ، شطف مع غلي الماء ، 3X لمدة 20 دقيقة ، والسماح ليجف ، ومكان في طبق بتري P100 الزجاج وتعقيم لمدة 20 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> N2 - methylcellulose : زن من 1.5G من methylcellulose ووضعه في زجاجة 500mL. إضافة بقضيب والأوتوكلاف أنه لمدة 20 دقيقة على الجاف (من هذه النقطة يجب أن تكون جميع الأعمال العقيمة). المقبل ، إضافة 500 مليليتر من الدم وسائل الاعلام الحرة (N 2) ، واثارة في غرفة باردة حتى يذوب. قسامة إلى 50 مل وتجميد conicals في -20 درجة مئوية. قسامة للعمل ، واحدة من الأسهم conicals 50 مل في أنابيب 1mL وتجميد في -20 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> DRG وسائل الإعلام : DMEM ، 5 ٪ مصل الحصان الحرارة المعطل ، و 1 ٪ الستربتوميسين البنسلين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 100ng/mL DRGN وسائل الإعلام : إن تركيز الأسهم على حد سواء عامل النمو العصبي (NGF) والدماغ الناجم عن عوامل عصبية (BDNF) هو 1mg/mL. تمييع كل من neurotrophins 1:10،000 إلى وسائل الإعلام DRG. يمكن زراعتها في الثقافات وحدها NGF ، وهذا يغير من الخلايا العصبية التي تكمل البقاء في الثقافات. ملاحظة : عند الحاجة ، وتركيز (السيتوزين الأرابينوزيد) أراك هو 1uM وتستخدم بتركيز نهائي 0.3uM. هذا وسوف تمنع نمو الخلايا الدبقية شوان وغيرها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 10ng/mL DRGN وسائل الإعلام : خفف من وسائل الاعلام DRGN 100ng/mL (1:10) مع وسائل الاعلام DRG. <img src="/files/ftp_upload/old/951_2008_10_27_6/951_Figure-01.png" alt="الشكل 1" width="392" height="294"> الشكل 1. الأدوات اللازمة لانشاء </li></ol> إعداد غرف compartmented (1-2 بدء هذه العملية قبل أيام من تشريح) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل الصفر في وسط صحن الكولاجين P35 المغلفة مع الحركة في الخارج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 30ul مكان methylcellulose - N2 في منتصف الصفر. مجموعة الأطباق جانبا حتى يتم مدهون المفرق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرفاق عيار 23 محول كعب luer لودر الشحوم. وضع قبضة المفرق تفلون مع زوج من زاوية 90 درجة المرقأة وانها مسطحة مع مقسم مواجهة تحت المجهر. تتبع المفرق الشحوم مع التأكد من أنه في كل مرة يتم وضع محول على نقطة انطلاق جديدة يتم إدراج محول في الشحوم من الخطوة السابقة حتى لا يكون هناك خط متواصل من الشحوم (انظر الرسم البياني). حالما يتم تطبيق الشحوم إلى مقسم كامل ، بدوره واحدا من الأطباق المعدة P35 رأسا على عقب وضعه بحيث N2 - methylcellulose هو على المقصورة المتوسطة. اضغط لأسفل على الجزء السفلي من الطبق مع زوج من ملاقط. تأكد من الضغط على الداخل من مقسم في أربع زوايا (أعلى اليسار ، وانخفاض الحق ، والحق العلوي ، أسفل اليسار ، والمبينة في الرسم التخطيطي بواسطة "X"). <img src="/files/ftp_upload/old/951_2008_10_9_2/951_Figure-02.png" alt="الشكل 2" width="171" height="183"> الشكل 2 : خطوات لتشحيم المفرق ملاحظة : من المهم للضغط بقوة كافية بحيث يجعل الشحوم ختم كاملة مع الطبق ، ولكن إذا تم إضافة الكثير من الضغط ، والمحاور ولن العبور الى الجانب مقصورات. التقط المرقأة ، اقلبه وunclamp المفرق. أخيرا ، ضع الطبق مع المفرق ترتبط بقوة تحت المجهر التركيز على الجزء السفلي من المقصورة المتوسطة. مع المحمل الشحوم ، وجعل حاجز صغير (0.25 سم) مرة واحدة بحيث توضع الخلايا في وسط المقصورة التي لا يمكن تسرب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد اقامة عدة ثقافات ، ووسائل الإعلام في كل مكان DRG من المقصورات الجانبية ومكان في حاضنة التي سيتم الإبقاء على الخلايا. السماح للثقافات على الجلوس لعدة ساعات ومن ثم تحقق من وجود تسرب. إذا كانت وسائل الاعلام قد تسربت الى حجرة متوسطة ، ثم ثقافة غير قابلة للاستخدام. ملاحظة : عندما تعلم الاولى من هذا الأسلوب ، فإنه من المهم لاقامة المزيد من الثقافات وهناك حاجة لإجراء التجربة ، كما سيتم عدة تتسرب منها المياه. <img src="/files/ftp_upload/old/951_2008_10_9_3/951_Figure-03.png" alt="الشكل 3" width="254" height="191"> الشكل 3 : "جيد ضد تسرب" ثقافة </li></ol> الحفاظ على الخلايا العصبية في الثقافات compartmented DRG <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اليوم 1 : استبدال DRG وسائل الإعلام في المقصورات جنب مع 100ng/mL DRGN أراك + وسائل الإعلام. إجراء تشريح الخلايا وإضافة إلى مركز صحي (100،000 الخلايا). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يوم 2 : إضافة وسائل الاعلام + 10ng/mL أراك إلى خارج الفاصل تفلون حتى وسائل الإعلام أكثر من التدفقات حاجز الشحوم والسوائل التبادلات مع مركز صحي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اليوم 3 : استبدال وسائل الإعلام في المقصورات الجانبية لDRGN 100ng/mL إهمال أراك وتحيط مع 10ng/mL DRGN إهمال أراك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اليوم 6 : استبدال وسائل الإعلام في المقصورات الجانبية ل1ng/mL + أراك وتحيط مع وسائل الاعلام DRG + أراك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يوم 9 : استخدام لالتجريب. <img src="/files/ftp_upload/old/951_2008_10_9_5/951_Figure-04.png" alt="الشكل 4" width="267" height="148"> الشكل 4 : صور IHC الهيئات الخلية والمحاوير القاصي ملاحظة : عند تغيير وسائل الإعلام ، من المهم أن نضح السائل من أعلى المقصورة الجانبية لكل منهما. أيضا ، لا تتغير أبدا وسائل الإعلام من منتصف المقصورة نفسها ، فقط من المحيط ، والسماح لها تدفق أكثر من حاجز الشحوم في المركز. </li></ol>

<ol><li>Campenot, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Independent+Control+of+the+Local+Environment+of+Somas+and+Neurites%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Enzymology%22%5BJournal%5D)">Independent Control of the Local Environment of Somas and Neurites.</a> Methods in Enzymology. 58, 302-307 (1979).</li>
<li>Watson, F. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotrophins+use+the+Erk5+pathway+to+mediate+a+retrograde+survival+response%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Neurotrophins use the Erk5 pathway to mediate a retrograde survival response.</a> Nature Neuroscience. 4, 981-988 (2001).</li>
<li>Heerssen, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynein+motors+transport+activated+Trks+to+promote+survival+of+target-dependent+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Dynein motors transport activated Trks to promote survival of target-dependent neurons.</a> Nature Neuroscience. 7, 596-603 (2004).</li>
<li>Taylor, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+microfluidic+culture+platform+for+CNS+axonal+injury%2C+regeneration+and+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">A microfluidic culture platform for CNS axonal injury, regeneration and transport.</a> Nature Methods. 2, 599-605 (2006).</li>
<li>Park, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+culture+platform+for+neuroscience+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Microfluidic culture platform for neuroscience research.</a> Nat Protoc. 4, 2128-2136 (2006).</li>
<li>Ure, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retrograde+transport+and+steady-state+distribution+of+125I-nerve+growth+factor+in+rat+sympathetic+neurons+in+compartmented+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Retrograde transport and steady-state distribution of 125I-nerve growth factor in rat sympathetic neurons in compartmented cultures.</a> J Neuroscience. 4, 1282-1290 (1997).</li>
</ol>

في هذا الفيديو ، لقد أثبتنا كيفية إعداد وصيانة غرف compartmented لاستخدامها في زراعة الخلايا العصبية DRG. ذلك صحيح ، وهذا النظام يسمح الفصل بين خلايا الجسم من محور عصبي ، من أجل دراسة الآليات التي neurotrophins إشارة عبر محاور عصبية طويلة. لأنه ليس هناك عزلة fluidic بين المقصورات ، لأنها تتيح لتحفيز انتقائية أو علاج صحي واحد دون أن تتأثر المقصورات الأخرى. يمكن أن الثقافات غرفة Compartmented دعم أنواع الخلايا الأخرى بما فيها الخلايا العصبية المتعاطفة من العقد لعنق الرحم متفوقة ، والعقدة العصبية في شبكي...

<table><tbody><tr><td>كولاجين</td><td>كاشف</td><td>BD Biosciences</td><td>354249</td><td></td></tr><tr><td>N2-methylcellulose 400CPS</td><td>كاشف</td><td>Sel-Win Chemicals</td><td></td><td></td></tr><tr><td>فاصل تيفلون</td><td>أخرى</td><td>Tyler Research</td><td>CAMP10</td><td>تتوفر أنواع عديدة أخرى من الفواصل</td></tr><tr><td>مجرفة دبابيس</td><td>أداة</td><td>Tyler Research</td><td>Camp-PR</td><td></td></tr><tr><td>شاحن شحم</td><td>أداة</td><td>Tyler Research</td><td>Camp-GLSS</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>كاشف</td><td>Fisher Scientific</td><td>MT10017CV</td><td></td></tr><tr><td>NGF</td><td>كاشف</td><td>PeproTech Inc</td><td>450-01</td><td></td></tr><tr><td>BDNF</td><td>كاشف</td><td>PeproTech Inc</td><td>450-02</td><td></td></tr><tr><td>شحم تفريغ عالٍ</td><td>كاشف</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-635-5D</td><td></td></tr><tr><td>AraC</td><td>كاشف</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C-1768</td><td></td></tr><tr><td>محول وصلة لوير عيار 23</td><td>أداة</td><td>Fisher Scientific</td><td>427565</td><td></td></tr><tr><td>ملقط إرقاء بزاوية 90&amp;#x00B0;</td><td>أداة</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-7035</td><td></td></tr></tbody></table>

إعداد وصيانة الخلايا العصبية العقد الجذرية الظهرية في الثقافات compartmented

Preparation and Maintenance of Dorsal Root Ganglia Neurons in Compartmented Cultures

الخلايا العصبية توسيع عمليات محواري التي هي بعيدة كل البعد من خلايا الجسم ليعصب الأنسجة المستهدفة ، حيث هناك حاجة الهدف المستمدة من عوامل نمو الخلايا العصبية من أجل البقاء والوظيفة. مطلوبة على وجه التحديد Neurotrophins للحفاظ على البقاء والتفريق بين الخلايا العصبية الحسية التعصيب ولكن مسألة كيف يمكن لهذه neurotrophins الهدف المستمدة من التواصل لخلايا الجسم من الخلايا العصبية التعصيب كان مجال للبحث نشطة لأكثر من 30 عاما. النموذج الأكثر شيوعا عن كيفية قبول اشارات neurotrophin تصل إلى خلايا الجسم يقترح أن يشير الإندوسومات تحمل هذه الإشارة retrogradely على طول محور عصبي. وكان من أجل دراسة النقل إلى الوراء ، وضعت أصلا لنظام الثقافة من خلال Campenot روبرت ، الذي يتم عزل أجسام الخلايا من المحاور الخاصة بهم. أسلوب إعداد هذه الدوائر compartmented لزراعة الخلايا العصبية الحسية يجمل تحفيز الانتقائي للمحطات التي تحدث في الخلايا العصبية بعد الافراج فيفو الهدف المستمدة neurotrophins. مما يشير إلى الوراء الأحداث التي تتطلب طويلة المدى تعتمد على النقل أنيبيب الوراء لها انعكاسات هامة لعلاج الاضطرابات العصبية.

نحن هنا وصف أسلوب إعداد وصيانة غرف compartmented عن خلايا عصبية حسية للزراعة العقد الجذرية الظهرية.

إعداد وصيانة الخلايا العصبية العقد الجذرية الظهرية في الثقافات Compartmented

تمدد العصبونات استطالات محورية تبتعد كثيراً عن جسم الخلية لتغذية الأنسجة المستهدفة، حيث تبرز الحاجة إلى عوامل نمو مشتقة من الأنسجة المستهدفة من أجل...

تبدأ هذه العملية بعمل خدش باستخدام مِشط دبابيس في مركز طبق مطلي بالكولاجين، ثم نقل 30 µL من Methylcellulose بواسطة الماصة إلى مركز الخدوش. يتم تشحيم كل فاصل باستخدام أداة تحميل الشحم وتثبيته في الطبق المطلي بالكولاجين. يتم وضع 100,000 خلية من أجنة الجرذان في المرحلة E 15 في الحجرة الوسطى.بعد تسعة أيام، ستكون الخلايا قد مدت محاورها العصبية إلى الحجرة الجانبية وأصبحت جاهزة للتجارب. مرحباً، أنا ماريا ميرفي من مختبر الدكتورة روزالين سيجل في قسم أورام الأطفال بمعهد دانا فاربر للسرطان. سنعرض لكم اليوم إجراءً لتحضير وصيانة عصبونات العقد الجذرية الظهرية في مزارع مقسمة إلى حجرات.نستخدم هذا الإجراء في مختبرنا لدراسة إشارات النيوروتروفين (neurotrophin signaling). لذا لنبدأ. قبل إعداد الغرف المقسمة، يجب طلاء أطباق زراعة الأنسجة P 35 بالكولاجين.للقيام بذلك، أضف 1 mL من محلول كولاجين بتركيز 0.71 mg/mL في 0.001 N HCl إلى الأطباق واحضنها عند 37 °C لمدة يومين. بعد يومين، اصنع خدشاً في وسط الأطباق المغطاة بالكولاجين باستخدام مِشط دبابيس، مع التحريك في اتجاه الخارج.ثم ضع 30 µL من Methylcellulose N على منتصف الخدش. ضع الأطباق جانبًا. بعد ذلك، قم بتركيب محول سدادة طُعم قياس 23 gauge في شاحن الشحم.أمسك الفاصل المصنوع من التفلون باستخدام ملقط شرياني بزاوية 90 درجة، وضعه بشكل مسطح بحيث يكون الفاصل متجهاً للأعلى تحت المجهر. ومن خلال النظر عبر المجهر، قم بطلاء الفاصل بالشحم. تأكد في كل مرة يتم فيها وضع المهايئ عند نقطة بداية جديدة، أن يتم إدخاله في الشحم الموضع في الخطوة السابقة لضمان وجود خط مستمر من الشحم.بمجرد دهن الفاصل بالكامل بالشحم، اقلب أحد أطباق P 35 المجهزة وضعه بحيث يكون N two Methylcellulose فوق الحجرة الوسطى. اضغط على قاع الطبق باستخدام ملقط. تأكد من الضغط على الجزء الداخلي من الفاصل في الزوايا الأربع.من المهم الضغط بقوة كافية لضمان إحكام غلق الشحم مع الطبق. ولكن إذا تم تطبيق ضغط زائد، فلن تعبر المحاور العصبية إلى المقصورات الجانبية. بعد ذلك، أمسك بالملاقط الشريانية (Hemostats).اقلب الطبق وفك مشبك الفاصل. ثم ضع الطبق والفاصل مثبت فيه بإحكام تحت المجهر، مع التركيز على قاع الحجرة الوسطى. استخدم أداة تحميل الشحم لإنشاء حاجز صغير يربط كلا جانبي الفاصل بارتفاع يبلغ حوالي ربع سنتيمتر.ستمنع هذه الخطوة تسرب الخلايا بمجرد وضعها في المقصورة الوسطى. بعد إعداد عدة مستنبتات، ضع وسط DRG في كل من المقصورات الجانبية. ثم ضعها في الحاضنة حيث سيتم الحفاظ على الخلايا.اترك المزارع لعدة ساعات ثم افحصها للتأكد من عدم وجود تسريب. إذا تسرب الوسط إلى الحجرة الوسطى، فإن المزرعة تصبح غير صالحة للاستخدام. عند تعلم هذه التقنية لأول مرة، من المهم تجهيز مزارع أكثر من العدد المطلوب للتجربة، حيث يُحتمل أن يكون عدد منها مسرباً.بعد التأكد من أن الغرف المقسمة صالحة للاستخدام، ابدأ في صيانة مستنبت عصبونات العقد الجذرية الظهرية. قبل البدء في التجربة، يتم الحفاظ على عصبونات DRG في المستنبتات المقسمة. وعلى مدار فترة تمتد لتسعة أيام عند 37 درجة مئوية، وفي اليوم الأول، استبدل وسط DRG في الغرف الجانبية بـ 100 nanograms per milliliter.يحتوي وسط DRGN media بالإضافة إلى وسط A-C-D-R-G-N media على كل من عامل نمو العصب (nerve growth factor) والعامل العصبي المشتق من الدماغ (brain derived neurotrophic factor). تتوفر وصفة هذا الوسط في البروتوكول المكتوب الخاص بنا. قم بإجراء عملية التشريح على أجنة الجرذان في اليوم الجنيني E 15 وأضف 100, 000 خلية إلى الحجرة المركزية.في اليوم الثاني، أضف 10 nanograms per milliliter من وسط DRGN مضافاً إليه C إلى الجزء الخارجي من الفاصل التفلوني حتى يتدفق الوسط فوق حاجز الشحم ويتبادل السوائل مع الحجرة المركزية؛ وفي اليوم الثالث، استبدل الوسط في الحجرات الجانبية بـ 100 nanogram per milliliter من DRGN دون إضافة C.استبدل أيضاً الوسط المحيط بـ 10 nanogram per milliliter من DRGN مع حذف RSC في اليوم السادس. استبدل الوسائط في المقصورات الجانبية بـ 1 nanogram per milliliter من DRGN بالإضافة إلى RSC، والوسط المحيط بـ DRG media بالإضافة إلى RSC.في اليوم التاسع، تكون المزرعة المقسمة جاهزة للتجربة. وبعد الانتهاء من التجربة، يمكن إعادة استخدام فواصل التفلون، ولكن يجب تنظيفها بشكل صحيح. وللقيام بذلك، يتم إزالة الفاصل من الطبق ومسح كل ما تبقى من الشحم.ثم توضع في حمض الكبريتيك لمدة يومين. وبعد مرور يومين، تُزال الفواصل من الحمض وتُشطف بالماء ثلاث مرات، ثم تُغلى لمدة 20 دقيقة وتُترك لتجف. توضع الفواصل الجافة في طبق بتري زجاجي P 100 وتُعقم في الموصدة (autoclave) لمدة 20 دقيقة، وبعد التعقيم، تصبح جاهزة للتجارب المستقبلية.يتيح نظام الزرع المجزأ هذا فصل جسم الخلية عن المحوار من أجل دراسة الآليات التي ترسل من خلالها العوامل المغذية للعصب إشاراتها عبر المحاور الطويلة. وبما أن هناك عزلاً مائعياً بين الأقسام، فإن ذلك يسمح بالتحفيز أو المعالجة الانتقائية لقسم واحد دون أن تتأثر الأقسام الأخرى. لقد أظهرنا لكم للتو كيفية تحضير وصيانة عصبونات العقد الجذرية الظهرية في مزارع مجزأة.عند تنفيذ هذا الإجراء، من المهم تذكر الضغط برفق عند تثبيت فاصل الشحم باللوحة المطلية بالكولاجين. قم بسحب السائل من الجزء العلوي لكل مقصورة جانبية عند تغيير الوسط الغذائي لتجنب إزعاج المحاور العصبية. لا تقم أبداً بتغيير الوسط الغذائي مباشرة من المقصورة الوسطى عند تغذية العصبونات.قم بتغيير الوسط من المحيط فقط واتركه يتدفق فوق حاجز الشحم إلى الحجرة الوسطى. هذا كل شيء. شكراً للمشاهدة وتمنياتنا لكم بالتوفيق في تجاربكم.

preparation-maintenance-dorsal-root-ganglia-neurons-compartmented

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

دراسة وراثية من التجديد أكسون مع الكبار الظهرية مثقف الخلايا العصبية العقدة الجذر

يوضح هذا الفيديو إجراء لعزل الخلايا العصبية العقدية الجذرية الظهرية (DRG) من أجنة الفئران ومشاركتها مع سلائف خلايا شوان لتوليد خلايا شوان الناضجة. تتم معالجة DRGs المعزولة لعزل الخلايا العصبية والخلايا الدبقية. يتم زراعة الخلايا المعزولة لتنقية الخلايا العصبية ، والتي يتم استزراعها بعد ذلك مع الخلايا الشبيهة بخلايا شوان (SCLCs) في وسط زراعة مشتركة. يؤدي التفاعل مع الخلايا العصبية DRG إلى نضوج الخلايا العصبية SCLCs في خلايا شوان.

عزل الخلايا العصبية DRG والزراعة المشتركة مع سلائف خلايا شوان لتوليد خلايا شوان

يوضح هذا الفيديو إنشاء نظام زراعة خلايا من ثلاث أقسام باستخدام الكولاجين والشحوم غير التفاعلية. يستخدم هذا النظام لمراقبة التفاعلات بين خلايا الورم الدبقي والمحاور في الوقت الفعلي.

تحضير أطباق الثقافة المجزأة المغلفة بالكولاجين لزراعة الخلايا العصبية

&lt; p class = "jove_content" &gt;يوضح هذا الفيديو طريقة لحصاد الخلايا العصبية من العقد الجذرية الظهرية (DRG). يتم عزل DRG من العمود الفقري للفئران ، ومعالجته بالإنزيمات ، ثم فصله ميكانيكيا للحصول على تعليق أحادي الخلية. يتم فصل الخلايا العصبية عن الخلايا الدبقية باستخدام الطرد المركزي المتدرج للكثافة ويتم زراعتها في وسط النمو.

تقنية لحصاد وفصل العقد الجذرية الظهرية للثقافات العصبية

يوضح هذا الفيديو نموذج التثقيف لشحن عقدة الجذر الظهري وخلايا شوان. في ظروف الزراعة المشتركة ، يعزز حمض الأسكوربيك تمايز خلايا شوان إلى أشكال مايلينات. تقوم خلايا شوان النخاعية بلف المحاور عدة مرات لإنشاء غمد المايلين ، وهو أمر ضروري لوظيفة الأعصاب.

الزراعة المشتركة لزرع عقدة الجذر الظهري مع خلايا شوان لتكوين النخاع العصبي

يوضح هذا الفيديو تقنية لعزل واستزراع خلايا العقد الجذرية الظهرية (DRG) من العمود الفقري للفئران. يتم التعامل مع DRGs المستخرجة من العمود الفقري بالإنزيمات وفصلها ميكانيكيا للحصول على تعليق أحادي الخلية. يتم زراعة الخلايا في وسط يحتوي على مثبطات وعوامل نمو تحد من تكاثر الخلايا الدبقية وتعزز نمو الخلايا العصبية ، على التوالي.

إنشاء ثقافة خلايا العقد الجذرية الجذرية الأولية من العمود الفقري للفئران

يصف هذا البروتوكول عزل الخلايا العصبية العقدية الجذرية الظهرية (DRG) المعزولة من الفئران وثقافة الخلايا العصبية DRG على نظام زراعة الخلايا الممتدة مسبقا لتعزيز محاذاة المحاور العصبية ، مع الزراعة المشتركة اللاحقة لخلايا شوان (SCs) لتعزيز تكوين النخاع.

مدخل لتعزيز التوافق وتكون الميالين في ظهري الجذر العقدة العصبية

كثيرا ما تستخدم الجذر الظهرية ganglia (DRG) الثقافات الأولية لدراسة الوظائف الفسيولوجية أو الأحداث المتعلقة بعلم الأمراض في الخلايا العصبية الحسية. هنا، نحن شرح استخدام الثقافات DRG القطني للكشف عن الإفراج عن العصبية بعد مستقبلات neuropeptide فرنك فرنسي اكتب التحفيز 2 مع مؤثر انتقائية.

عزل العقد الجذرية الظهرية والثقافة الأولية لدراسة الإفراج عن ناقل عصبي

هنا نقدم السابقين فيفو مختلطة نظام الثقافة أحاديه الطبقة لدراسة الهجرة الخلية البشرية الورم (hGC) في الوقت الحقيقي. يوفر هذا النموذج القدرة علي مراقبه التفاعلات بين عارضه والمحاور النخاعية وغير النخاعية داخل غرفه مجزاه.

في الوقت الحقيقي رصد الهجرة الخلية البشرية الورم علي العقدة الجذر الظهرية اكسون-اوليغوداندورونسيتي الثقافات المشتركة

يوفر هذا البروتوكول تقنية لحصاد وزراعة العقدة الجذرية الظهرية المزروعة (DRG) من فئران Sprague Dawley البالغة في جهاز متعدد الأجزاء (MC).

حصاد وتضمين وزراعة العقد الجذرية الظهرية في أجهزة متعددة الأجزاء لدراسة السمات العصبية الطرفية

يصف هذا البروتوكول طرق إنشاء ثقافات كاملة ومنفصلة للعقد الجذرية الظهرية للفأر (DRG) واستخدامها لتقييم تفاعلات الورم والعصب.

إنشاء نماذج في المختبر لثقافة العقد الجذرية الظهرية: مناهج تكميلية للتحقيق في الحديث المتبادل بين السرطان والأعصاب

تعلم إعداد وصيانة الخلايا العصبية الحسية من العقد الجذرية الظهرية في ثقافات مُقسمة باستخدام أجنة فئران E15. تتيح هذه الطريقة دراسة نمو المحاور وتفاعلات الخلايا العصبية في بيئة مراقبة.

إعداد وصيانة الخلايا العصبية العقد الجذرية الظهرية في الثقافات Compartmented

استكشف المزيد من الفيديوهات