تقنية لجمع المسلسل من السائل النخاعي من ماجنا في صهريج للماوس

يبدأ الإجراء بتخدير الفأر وإعداد موقع الجراحة. ثم يتم وضع الماوس على الأداة التجسيمية. تم إجراء شق سهمي للجلد أدنى من القفا ويتم فصل الأنسجة تحت الجلد وعضلات الرقبة من خلال خط الوسط بشكل صريح.

ثم يتم وضع الجزء الخلفي من الجسم بحيث يشكل الجسم زاوية 135 درجة مع الرأس الثابت ، ويتم اختراق الأم الجافية لعظمة القص CI مع الشعيرات الدموية الزجاجية وسيتم جمع السائل الدماغي النخاعي. بعد أخذ عينات السائل الدماغي النخاعي ، يتم إعادة تنظيم العضلات وخياطة الجلد حوالي ملليلتر واحد من 0.9٪ يتم حقن محلول ملحي من NACL تحت الجلد لمنع الجفاف ويبقى الفأر دافئا حتى يتعافى. مرحبا ، اسمي ليو من مختبر الدكتورة كارين داف في معهد توب بجامعة كولومبيا.

سأوضح لك اليوم كيفية جمع العمود الفقري الدماغي للسوائل من نظام ماج الفأر. باستخدام هذه التقنية ، يمكننا جمع عينات السائل الدماغي النخاعي التسلسلية لما يصل إلى ثلاث مرات من نفس الفأر بفاصل شهرين إلى ثلاثة أشهر. في مختبرنا ، نستخدم هذه التقنية لتحديد مستويات بيتا أو تاو CSFA في أعمار مختلفة من نماذج الفئران المعدلة وراثيا لمرض الزهايمر ونربط هذه القيم بتلك الموجودة في الدماغ.

في النهاية ، نحن مهتمون بإمكانات مستويات CSFA beta أو tau كعلامات بيولوجية محتملة لتطور المرض وأيضا للتجارب العلاجية على الفئران. لذلك دعونا نبدأ. لهذا الإجراء ، من الضروري عمل الشعيرات الدموية بماصة صغيرة قطبية.

الشعيرات الدموية المستخدمة هنا هي زجاج سيليكات BOA B 175 10 من Sutter Instruments تسحب الشعيرات الدموية على ماصة صغيرة مشتعلة Sutter P 87 مع ضبط مؤشر الحرارة على 300 ومؤشر الضغط المحدد عند ثلاثة 30. يبلغ طول الشعيرات الدموية الزجاجية خمسة سنتيمترات ولها طرف مدبب. يتم قطع طرف الشعيرات الدموية بالمقص بحيث يبلغ قطرها الداخلي حوالي 0.5 ملم.

يبدأ الإجراء الجراحي بتخدير الفأر بالكيتامين 100 ملليغرام لكل كيلوغرام وزيلازين 10 ملليغرام لكل كيلوغرام يعطى داخل الصفاق أثناء التخدير ، والحفاظ على دفء الفأر في حاضنة 37 درجة مئوية. بعد تحديد أن مخدر تماما باستخدام منعكس انسحاب قرصة إصبع القدم ، اختبر حلق الرقبة ، ثم ضع الماوس على الأداة التجسيمية مثل هذه الأداة من ديفيد شبك. عند التلامس المباشر مع وسادة التدفئة ، أدخل مسبار درجة حرارة المستقيم حتى يمكن ضبط الحرارة من الوسادة وفقا لدرجة حرارة جسم الفأر.

قم بتأمين الرأس بمحولات الرأس ، وامسح جلد الرقبة باستخدام 10٪ من اليود بوفيدون و 70٪ من الإيثانول ثلاث مرات وقم بعمل شق سهمي أدنى من الجزء الخلفي من الرأس أو القفف. يجب تنفيذ الخطوات التالية تحت مجهر تشريح باستخدام ملقط حاد. افصل الأنسجة والعضلات تحت الجلد M عن طريق خدمات التهوية و M rectus capita dorsalis major بحيث تتعرض مادة الجافية في عظمة القص استخدم بشكل صحيح زوجا من الضاعات الدقيقة لفصل العضلات.

أخيرا ، ضع الماوس مع الرأس بزاوية 135 درجة على الجسم. الماوس جاهز الآن لجمع السائل الدماغي النخاعي. تم نشر هذه التقنية لجمع السائل الدماغي النخاعي من عظمة القص سابقا.

C الشكل واحد أ تحت مجهر التشريح. تظهر مادة الجافية على شكل مثلث عكسي لامع وواضح يمكن من خلاله رؤية النخاع المستطيل والأوعية الدموية الرئيسية. الشرايين الجافية الشوكة C الشكل واحد B.يمكن رؤية النبض الدوري للنخاع ومساحة السائل الدماغي النخاعي المجاورة.

لطخة مادة جافية تجف بقطعة قطن معقمة ، تخترق الشعيرات الدموية في عظمة القص CI من خلال مادة الجاف الجانبية إلى الإسبنيل الظهري للشريان. سيكون هناك تغيير ملحوظ في المقاومة عندما يتم إدخال الشعيرات الدموية بشكل صحيح وسيتدفق السائل الدماغي النخاعي بعد ذلك إلى الشعيرات الدموية. بعد جمع السائل الدماغي النخاعي ، قم بإزالة الشعيرات الدموية بعناية وتوصيلها بحقنة ثلاثة ملليلتر باستخدام أنابيب البولي إيثيلين التي يبلغ قطرها الداخلي ملليمتر واحد.

حقن السائل الدماغي النخاعي في أنبوب 0.5 ملليلتر. قم بتسمية الأنبوب وتجميده على الفور على الثلج الجاف. بمجرد التجميد ، انقل السائل النخاعي إلى فريزر 80 درجة مئوية تحت الصفر.

تقنية أخذ العينات الموضحة للتو لطيفة للغاية وتسمح بأخذ عينات السائل الدماغي النخاعي اللاحقة من نفس الفأر على مدى شهرين إلى ثلاثة أشهر. وبالتالي ، بعد أخذ عينات من الرقبة ، يجب إعادة تنظيم العضلات والجلد وإغلاقها بالغرز. بعد خياطة الشق ، قم بحقن حوالي ملليلتر واحد من المحلول الملحي 0.9٪ NACL تحت الجلد لإعادة ترطيب الفأر.

حافظ على دفء الفأر عند حوالي 37 درجة مئوية حتى يتعافى. راقب وزنه في اليوم الأول والسابع بعد الجراحة. لقد أوضحت لك للتو كيفية جمع السائل الشوكي الدماغي من نظام ماج الفأر.

عند القيام بهذا الإجراء ، هناك ثلاثة أشياء مهمة يجب تذكرها. أولا ، ضع رأس وجسم الماوس بشكل صحيح على الإطار التجسيمي بحيث يمكن تعريض ماتور Cy Magna قدر الإمكان. ثانيا ، تجنب الأوعية الدموية بعناية عند اختراق مقياس التحمل باستخدام الشعيرات الدموية.

خلاف ذلك ، سوف تتلوث عينتك بالدم. أخيرا وليس آخرا ، يرجى تذكر إبقاء الفئران دافئة أثناء الإجراء بأكمله لمنع انخفاض حرارة الجسم. انخفاض حرارة الجسم ليس ضارا بالفئران فحسب ، بل يمكن أن يؤثر أيضا بشكل كبير على نتائجك عن طريق إحداث إنتاج بيتا أو علاقة نقص الفسفرة الطويلة.

حسنا ، هذا كل شيء. شكرا لك على المشاهدة ونتمنى لك التوفيق في تجاربك.