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Mouse Genome Engineering Using Designer Nucleases

Transgenic mice carrying site-specific genome modifications (knockout, knock-in) are of vital importance for dissecting complex biological systems as well ...

University of Zurich

&#x6EE4;&#x6CE1;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;FDC&#xFF09; &#x7684;&#x5206;&#x5316;&#x5BF9;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x6EE4;&#x6CE1;&#x7684;&#x975E;&#x51E1;&#x663E;&#x5FAE;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A; FDC &#x4EA7;&#x751F;&#x8868;&#x793A;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x884D;&#x751F;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53; &beta; (PDGFR&beta;) &#x7684;&#x524D;&#x4F53;&#x65E0;&#x5904;&#x4E0D;&#x5728;&#x7684;&#x8840;&#x7BA1;&#x5468;&#x56F4; &#xFF08;preFDC&#xFF09;&#x3002;PDGFR&beta; Cre &#x9A71;&#x52A8;&#x8BB0;&#x8005;&#x57FA;&#x56E0;&#x91CD;&#x7EC4;&#x5BFC;&#x81F4; FDC &#x6807;&#x7B7E;&#xFF0C;&#x800C;&#x6761;&#x4EF6;&#x6D88;&#x878D;&#x7684; PDGFR&beta; (+)-&#x6D3E;&#x751F;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x53D6;&#x6D88; FDC&#xFF0C;&#x6307;&#x793A; FDC &#x6E90;&#x81EA; PDGFR&beta;(+) &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x6DCB;&#x5DF4; &alpha; &#x8D85;&#x91CF;&#x8868;&#x8FBE;&#x670A;&#x86CB;&#x767D; (PrP)(+) &#x80BE;&#x810F;&#x5916;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x5668;&#x5B98;&#x4E0D;&#x53D1;&#x8FBE;&#x7684; PrP(+) FDC PrP(-) &#x5C0F;&#x9F20;&#x79FB;&#x690D;&#x540E;&#x786E;&#x8BA4;&#x8BE5; preFDC &#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x8102;&#x80AA; PDGFR&beta;(+) &#x57FA;&#x8D28;&#x8840;&#x7BA1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53CD;&#x5E94; FDC &#x6210;&#x719F;&#x56E0;&#x7D20;&#x548C;&#x5F53;&#x79FB;&#x690D;&#x5230;&#x6DCB;&#x5DF4; &beta; &#x53D7;&#x4F53; (LT&beta;R)(-) &#x80BE;&#x80F6;&#x56CA;&#xFF0C;&#x5411; Mfge8(+)CD21/35(+)Fc&gamma;RII&beta;(+)PrP(+) FDC &#x80FD;&#x591F;&#x6355;&#x83B7;&#x514D;&#x75AB;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x548C;&#x62DB;&#x52DF; B &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5206;&#x5316;&#x3002;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7F3A;&#x9677;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x813E;&#x810F;&#x6240;&#x8F7D;&#x5176;&#x6269;&#x5F20;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC4;&#x7EC7; (LTi) &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7684;&#x8840;&#x7BA1;&#x5468;&#x56F4; PDGFR&beta;(+) FDC &#x524D;&#x4F53;&#x3002;&#x65E0;&#x5904;&#x4E0D;&#x5728;&#x7684; preFDC&#xFF0C;&#x5176;&#x5730;&#x7406;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x4F18;&#x8D8A;&#x5728;&#x8840;&#x7BA1;&#x53EF;&#x80FD;&#x89E3;&#x91CA;&#x5FB7;&#x8BFA;&#x4EE3;&#x7684;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x708E;&#x75C7;&#x90E8;&#x4F4D;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x3002;PAPERFLICK&#xFF1A;

&#x6EE4;&#x6CE1;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x65E0;&#x5904;&#x4E0D;&#x5728;&#x7684;&#x8840;&#x7BA1;&#x5468;&#x56F4;&#x524D;&#x4F53;&#x3002;

The differentiation of follicular dendritic cells (FDC) isÂ essential to the remarkable microanatomic plasticity of lymphoid follicles. Here we show that FDC arise from ubiquitous perivascular precursors (preFDC) expressing platelet-derived growth factor receptor Î² (PDGFRÎ²). PDGFRÎ²-Cre-driven reporter gene recombination resulted in FDC labeling, whereas conditional ablation of PDGFRÎ²(+)-derived cells abolished FDC, indicating that FDC originate from PDGFRÎ²(+) cells. Lymphotoxin-Î±-overexpressing prion protein (PrP)(+) kidneys developed PrP(+) FDC after transplantation into PrP(-) mice, confirming that preFDC exist outside lymphoid organs. Adipose tissue-derived PDGFRÎ²(+) stromal-vascular cells responded to FDC maturation factors and, when transplanted into lymphotoxin Î² receptor (LTÎ²R)(-) kidney capsules, differentiated into Mfge8(+)CD21/35(+)FcÎ³RIIÎ²(+)PrP(+) FDC capable of trapping immune complexes and recruiting B cells. Spleens of lymphocyte-deficient mice contained perivascular PDGFRÎ²(+) FDC precursors whose expansion required both lymphoid tissue inducer (LTi) cells and lymphotoxin. The ubiquity of preFDC and their strategic location at blood vessels may explain the de novo generation of organized lymphoid tissue at sites of lymphocytic inflammation. PAPERFLICK:

Follicular dendritic cells emerge from ubiquitous perivascular precursors.

La diff&eacute;renciation des cellules dendritiques folliculaires (FDC) est essentielle &agrave; la plasticit&eacute; remarquable microanatomic des follicules lympho&iuml;des. Nous d&eacute;montrons que FDC proviennent de l&#39;omnipr&eacute;sent p&eacute;rivasculaires pr&eacute;curseurs (preFDC) exprimant le r&eacute;cepteur de facteur de croissance d&eacute;riv&eacute; des plaquettes &beta; (PDGFR&beta;). Recombinaison de g&egrave;ne de journaliste PDGFR&beta;-Cre-driven a abouti &agrave; la FDC, &eacute;tiquetage, tandis que conditionnel ablation de PDGFR&beta; (+)-cellules d&eacute;riv&eacute;es aboli FDC, attestant que le FDC proviennent des cellules PDGFR&beta;(+). Lymphotoxine-&alpha;-surexprimant la prot&eacute;ine prion (reins PrP)(+) FDC du PrP(+) d&eacute;velopp&eacute;s apr&egrave;s transplantation chez des souris PrP(-), confirmant que preFDC existe en dehors des organes lympho&iuml;des. D&eacute;riv&eacute;es du tissu adipeux PDGFR&beta;(+) cellules stromales-vasculaires a r&eacute;pondu &agrave; des facteurs de maturation FDC et, lorsque transplant&eacute;s dans les r&eacute;cepteurs &beta; de lymphotoxine (capsules de rein LT&beta;R)(-), se diff&eacute;renci&eacute;s en Mfge8(+)CD21/35(+)Fc&gamma;RII&beta;(+)PrP(+) FDC capable de pi&eacute;ger des complexes immuns et recruter des cellules B. Rates de souris d&eacute;ficientes en lymphocytes contenaient des pr&eacute;curseurs de PDGFR&beta;(+) FDC p&eacute;rivasculaires dont l&#39;expansion n&eacute;cessaire tant les cellules du tissu lympho&iuml;de inducteur (LTi) et la lymphotoxine. L&#39;omnipr&eacute;sence de la preFDC et de leur emplacement strat&eacute;gique &agrave; des vaisseaux sanguins peut-&ecirc;tre expliquer la g&eacute;n&eacute;ration de novo du tissu lympho&iuml;de organis&eacute; aux sites d&#39;inflammation lymphocytaire. PAPERFLICK :

Les cellules dendritiques folliculaires &eacute;mergent des pr&eacute;curseurs omnipr&eacute;sents p&eacute;rivasculaires.

Die Differenzierung der follikul&auml;re dendritische Zellen (FDC) ist entscheidend f&uuml;r die bemerkenswerte microanatomic Plastizit&auml;t von lymphoide Follikel. Hier zeigen wir, dass FDC ergeben sich aus der allgegenw&auml;rtigen perivaskul&auml;ren Vorstufen (PreFDC) Platelet-derived Growth Factor Rezeptor &beta; (PDGFR&beta;) zum Ausdruck zu bringen. PDGFR&beta;-Cre-gesteuerte Reporter-gen Rekombination f&uuml;hrte zu etikettieren, w&auml;hrend bedingte FDC Ablation des PDGFR&beta; (+)-abgeleitete Zellen abgeschafft FDC, darauf hinweist, dass FDC stammen aus PDGFR&beta;(+) Zellen. Lymphotoxin-&alpha;-&uuml;berexprimierenden Prionprotein (PrP)(+) Nieren entwickelten PrP(+) FDC nach der Transplantation in PrP(-) M&auml;use, best&auml;tigt, dass PreFDC au&szlig;erhalb lymphoide Organe bestehen. Fettgewebe gewonnenen PDGFR&beta;(+) Stromale-Kreislauf Zellen reagiert auf FDC Reifung Faktoren und transplantierten in Lymphotoxin-&beta;-Rezeptor (LT&beta;R)(-) Niere Kapseln, unterschieden in Mfge8(+)CD21/35(+)Fc&gamma;RII&beta;(+)PrP(+) FDC &Uuml;berf&uuml;llung Immunkomplexe und Rekrutierung von B-Zellen. Milz von Lymphozyte-defizienten M&auml;usen enthaltenen perivaskul&auml;ren PDGFR&beta;(+) FDC Vorl&auml;ufer dessen Erweiterung Lymphgewebe Induktor (LTi) Zellen und Lymphotoxin erforderlich. Die Allgegenw&auml;rtigkeit von PreFDC und ihrer strategischen Lage am Blutgef&auml;&szlig;e k&ouml;nnte erkl&auml;ren, dass die de-Novo-Generation von organisierten Lymphgewebe an Standorten der lymphozyt&auml;re Entz&uuml;ndung. PAPERFLICK:

Follikul&auml;re dendritische Zellen entstehen aus allgegenw&auml;rtigen perivaskul&auml;ren Vorl&auml;ufersubstanzen.

La differenziazione delle cellule dendritiche follicolari (FDC) &egrave; essenziale per la notevole plasticit&agrave; microanatomic dei follicoli linfoidi. Qui vi mostriamo che FDC derivano da precursori onnipresente perivascolare (preFDC) che esprime il fattore di crescita derivato dalle piastrine dei recettori &beta; (PDGFR&beta;). Ricombinazione genica PDGFR&beta;-Cre-driven reporter ha provocato FDC etichettatura, considerando che condizionale ablazione di PDGFR&beta; (+)-cellule derivate abolito FDC, che indica che FDC provengono da cellule PDGFR&beta;(+). Lymphotoxin-&alpha;-con sovraesprimono relativa proteina prionica (reni PrP)(+) FDC PrP(+) sviluppati dopo il trapianto in topi PrP(-), confermando che preFDC esistono di fuori degli organi linfoidi. Derivate da tessuto adiposo cellule stromale vascolare PDGFR&beta;(+) risposero a fattori di maturazione FDC e, quando trapiantate nei recettori &beta; di lymphotoxin (capsule di rene LT&beta;R)(-), differenziati in FDC Mfge8(+)CD21/35(+)Fc&gamma;RII&beta;(+)PrP(+) in grado di intrappolare gli immunocomplessi e reclutamento di cellule B. Milze di linfociti-deficient mice contenevano precursori FDC PDGFR&beta;(+) perivascolare cui espansione necessaria sia le cellule di tessuto linfoide dell&#39;induttore (LTi) e lymphotoxin. L&#39;ubiquit&agrave; di preFDC e la loro posizione strategica a vasi sanguigni pu&ograve; spiegare generazione de novo di tessuto linfoide organizzato presso siti di infiammazione linfocitaria. PAPERFLICK:

Le cellule dendritiche follicolari emergono dall&#39;onnipresente perivascolare precursori.

&#x6FFE;&#x80DE;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE; (FDC) &#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x306F;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x6FFE;&#x80DE;&#x306E;&#x8457;&#x3057;&#x3044; microanatomic &#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005; FDC &#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x7531;&#x6765;&#x5897;&#x6B96;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &beta; (PDGFR&beta;) &#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30BF;&#x30B9;&#x8840;&#x7BA1;&#x5468;&#x56F2;&#x304B;&#x3089;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53; (preFDC) &#x3067;&#x751F;&#x3058;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;PDGFR&beta; Cre &#x99C6;&#x52D5;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x3001;&#x4E00;&#x65B9;&#x304C;&#x6761;&#x4EF6;&#x4ED8;&#x304D;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306A; FDC &#x3067;&#x8D77;&#x56E0;&#x3057;&#x305F;&#x30A2;&#x30D6;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E; PDGFR&beta; (+)-&#x6D3E;&#x751F;&#x30BB;&#x30EB;&#x5EC3;&#x6B62; FDC&#x3001;FDC PDGFR&beta;(+) &#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x767A;&#x4FE1;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30EA;&#x30F3;&#x30DB;&#x30C8;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; &alpha; &#x904E;&#x5270;&#x30D7;&#x30EA;&#x30AA;&#x30F3;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; (PrP)(+) &#x814E;&#x81D3;&#x306E;&#x958B;&#x767A; PrP(+) &#x305D;&#x306E; preFDC &#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3059;&#x308B; FDC PrP(-) &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3078;&#x79FB;&#x690D;&#x5F8C;&#x5916;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x5668;&#x5B98;&#x304C;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8102;&#x80AA;&#x7D44;&#x7E54;&#x7531;&#x6765; PDGFR&beta;(+) &#x8840;&#x7BA1;&#x9593;&#x8CEA;&#x7D30;&#x80DE; FDC &#x6210;&#x719F;&#x8981;&#x56E0;&#x3068;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x30DB;&#x30C8;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; &beta; &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;LT&beta;R)(-) &#x814E;&#x81D3;&#x30AB;&#x30D7;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x304A;&#x3088;&#x3073; B &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x52DF;&#x96C6;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD; Mfge8(+)CD21/35(+)Fc&gamma;RII&beta;(+)PrP(+) FDC &#x306B;&#x5206;&#x5316;&#x3057;&#x305F;. &#x79FB;&#x690D;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x7B54;&#x3048;&#x305F;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x6B20;&#x640D;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x813E;&#x81D3;&#x306B;&#x306F;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7D44;&#x7E54;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B5; (LTi) &#x30BB;&#x30EB;&#x3068;&#x30EA;&#x30F3;&#x30DB;&#x30C8;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x62E1;&#x5927;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x8840;&#x7BA1;&#x5468;&#x56F2; PDGFR&beta;(+) FDC &#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;PreFDC &#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x6226;&#x7565;&#x7684;&#x306A;&#x5834;&#x6240;&#x3067;&#x8840;&#x7BA1;&#x306E;&#x666E;&#x53CA;&#x306F; de novo &#x4E16;&#x4EE3;&#x7D44;&#x7E54;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7D44;&#x7E54;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x6027;&#x708E;&#x75C7;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3067;&#x306E;&#x8AAC;&#x660E;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;PAPERFLICK:

&#x6FFE;&#x80DE;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30BF;&#x30B9;&#x8840;&#x7BA1;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x304B;&#x3089;&#x51FA;&#x3066;&#x304F;&#x308B;&#x3002;

&#xC18C; &#xB0AD; &#xBAA8;&#xC591; &#xBAA8; &#xC218;&#xC11D; &#xC138;&#xD3EC; (FDC)&#xC758; &#xBD84;&#xD654; &#xB9BC;&#xD504; &#xC5EC; &#xD3EC;&#xC758; &#xB180;&#xB77C;&#xC6B4; microanatomic &#xC18C;&#xC131;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; FDC &#xD608;&#xC18C;&#xD310; &#xC720;&#xB798; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &beta; (PDGFR&beta;)&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xBE44; &#xCFFC;&#xD130; &#xC2A4; perivascular &#xC120;&#xAD6C;&#xC790; (preFDC)&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB77C;&#xBCA8;, &#xBC18;&#xBA74; &#xC870;&#xAC74;&#xBD80; FDC &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4; PDGFR&beta; Cre &#xAD6C;&#xB3D9; &#xB9AC;&#xD3EC;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; PDGFR&beta; (+)&#xC758; &#xC808;&#xC81C;-&#xD30C;&#xC0DD;&#xB41C; &#xC140; &#xD3D0;&#xC9C0; FDC, &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; FDC PDGFR&beta;(+) &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Lymphotoxin &alpha; overexpressing &#xD504;&#xB9AC;&#xC628; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (PrP)(+) &#xC2E0;&#xC7A5; PrP(-) &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0; &#xC774;&#xC2DD; &#xD55C; &#xD6C4; &#xADF8; Prefdc&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xB41C; &#xB41C; PrP(+) FDC &#xB9BC;&#xD504; &#xAE30;&#xAD00; &#xBC16;&#xC5D0; &#xC11C; &#xC874;&#xC7AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xBC29; &#xC870;&#xC9C1; &#xC720;&#xB798; PDGFR&beta;(+) stromal &#xD608;&#xAD00; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC18;&#xC751; FDC &#xC131;&#xC219; &#xC694;&#xC778; &#xD558; &#xACE0;, lymphotoxin &beta; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (LT&beta;R)(-) &#xC2E0;&#xC7A5; &#xCEA1;&#xC290;, Mfge8(+)CD21/35(+)Fc&gamma;RII&beta;(+)PrP(+) FDC &#xBA74;&#xC5ED;&#xC131;&#xC774; &#xC788;&#xB294; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C;&#xC744; &#xD2B8;&#xB798;&#xD551; &#xD558; &#xACE0; &#xBAA8;&#xC9D1; B &#xC138;&#xD3EC;&#xB85C; &#xBD84;&#xD654;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC2DD; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0;. &#xB9BC;&#xD504; &#xAD6C; &#xACB0;&#xD54D; &#xC0DD;&#xC950;&#xC758; spleens &#xB204;&#xAD6C;&#xC758; &#xD655;&#xC7A5; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xB9BC;&#xD504; &#xC870;&#xC9C1; &#xC720;&#xB3C4; (LTi) &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; lymphotoxin perivascular PDGFR&beta;(+) FDC &#xC804;&#xC870; &#xD3EC;&#xD568;. Prefdc&#xACFC; &#xD608;&#xAD00;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC804;&#xB7B5;&#xC801; &#xC704;&#xCE58;&#xB294; &#xC720;&#xBE44; &#xB9BC;&#xD504;&#xBAA8;&#xAD6C; &#xC5FC;&#xC99D;&#xC758; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC870;&#xC9C1; &#xB41C; &#xB9BC;&#xD504; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xB4DC; &#xB178; &#xBCF4; &#xC138;&#xB300;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. PAPERFLICK:

&#xC18C; &#xB0AD; &#xBAA8;&#xC591; &#xBAA8; &#xC218;&#xC11D; &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xC720;&#xBE44; &#xCFFC;&#xD130; &#xC2A4; perivascular &#xC804;&#xC870;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB4F1;&#xC7A5;.

La diferenciaci&oacute;n de las c&eacute;lulas dendr&iacute;ticas foliculares (FDC) es esencial para la plasticidad microanatomic de fol&iacute;culos linfoides. Aqu&iacute; mostramos que FDC se derivan de precursores de la omnipresente perivascular (preFDC) expresar el factor de crecimiento derivado de plaquetas del receptor &beta; (PDGFR&beta;). Recombinaci&oacute;n de gen reportero PDGFR&beta;-Cre-conducido dio lugar a la FDC, etiquetado, mientras que el condicional ablaci&oacute;n de PDGFR&beta; (+)-c&eacute;lulas derivadas suprimido FDC, indicando que la FDC originan de las c&eacute;lulas PDGFR&beta;(+). Linfotoxina-&alpha;-overexpressing prote&iacute;na pri&oacute;nica (ri&ntilde;ones de PrP)(+) desarrollados FDC PrP(+) despu&eacute;s del trasplante en ratones PrP(-), confirmando que preFDC existir fuera de los &oacute;rganos linfoides. C&eacute;lulas de estromales vasculares PDGFR&beta;(+) derivadas del tejido adiposo respondieron a factores de maduraci&oacute;n del FDC y, cuando trasplant&oacute; en receptores &beta; de linfotoxina (c&aacute;psulas de ri&ntilde;&oacute;n LT&beta;R)(-), distinguidos en Mfge8(+)CD21/35(+)Fc&gamma;RII&beta;(+)PrP(+) FDC capaz de atrapar complejos inmunes y reclutamiento de c&eacute;lulas B. Bazo de los ratones deficientes en linfocitos contiene precursores de FDC PDGFR&beta;(+) perivascular cuya expansi&oacute;n necesaria linfotoxina tanto c&eacute;lulas de tejido linfoide inductor (LTi). La ubicuidad de preFDC y su ubicaci&oacute;n estrat&eacute;gica en los vasos sangu&iacute;neos puede explicar la generaci&oacute;n de novo de tejido linfoide organizado en sitios de inflamaci&oacute;n linfoc&iacute;tica. PAPERFLICK:

Las c&eacute;lulas dendr&iacute;ticas foliculares emergen de precursores perivascular omnipresente.

Zinco dito nucleases (ZFNs) consentono la modifica del genoma preciso in una variet&agrave; di organismi e di tipi di cellule. Commerciale ZFNs sono stati riportati migliorare gene targeting direttamente in zigoti mouse, considerando che un approccio simile usando pubblicamente le risorse disponibili non ancora &egrave; stata descritta. Qui riportiamo precisa mutagenesi mirata del genoma del mouse utilizzando OPEN ZFN ZFNs. Oligomerized Pool Engineering (aperto) pu&ograve; essere costruito usando le risorse pubblicamente disponibili e quindi fornire un&#39;alternativa interessante per i ricercatori accademici. Due coppie ZFN specifiche per la gt di locus genomico del mouse Sor (ROSA26) sono stati generati da selezioni aperte e utilizzati per la rottura del gene e sostituzione omologia-mediata del gene negli embrioni del mouse della singola cella. Una coppia specifica di ZFN agevolato non omologa fine unirsi (NHEJ)-mediata rottura gene quando espresso in zigoti del mouse. Abbiamo anche osservato un singolo ricombinazione omologa (HR)-evento di ricambio gene guidato quando questa coppia ZFN era utilizzano con un vettore targeting. Nostri esperimenti dimostrano la fattibilit&agrave; di realizzare entrambi ablazione gene attraverso sostituzione NHEJ e gene da HR utilizzando la tecnologia ZFN aperto direttamente in zigoti mouse.

Valutazione di aperto Zinc Finger Nucleases per Gene diretto di Targeting del Locus ROSA26 in embrioni del Mouse.

&#x950C;&#x6307;&#x6838;&#x9178;&#x9176; (ZFNs) &#x542F;&#x7528;&#x7CBE;&#x786E;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x6539;&#x9020;&#x4E2D;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x751F;&#x7269;&#x548C;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x578B;&#x3002;&#x5546;&#x4E1A; ZFNs &#x636E;&#x62A5;&#x63D0;&#x9AD8;&#x57FA;&#x56E0;&#x6253;&#x9776;&#x5C0F;&#x9F20;&#x53D7;&#x7CBE;&#x5375;&#x5728;&#x76F4;&#x63A5;&#x800C;&#x516C;&#x5F00;&#x4F7F;&#x7528;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x65B9;&#x6CD5;&#x53EF;&#x7528;&#x8D44;&#x6E90;&#x6CA1;&#x6709;&#x5C1A;&#x672A;&#x53D9;&#x8FF0;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528; ZFNs Oligomerized &#x6C60;&#x5DE5;&#x7A0B; &#xFF08;&#x6253;&#x5F00;&#xFF09; &#x6253;&#x5F00; ZFN &#x5C0F;&#x9F20;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7684;&#x7CBE;&#x786E;&#x5B9A;&#x5411;&#x7684;&#x8BF1;&#x53D8;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x6765;&#x6784;&#x9020;&#x4F7F;&#x7528;&#x516C;&#x5F00;&#x53EF;&#x7528;&#x7684;&#x8D44;&#x6E90;&#x548C;&#x62A5;&#x544A;&#x56E0;&#x6B64;&#x4E3A;&#x5B66;&#x672F;&#x7814;&#x7A76;&#x8005;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6709;&#x5438;&#x5F15;&#x529B;&#x7684;&#x66FF;&#x4EE3;&#x3002;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E;&#x5C0F;&#x9F20;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x8F68;&#x8FF9; gt &#x7684; ZFN &#x5BF9;&#x957F;&#x8FDC;&#x53D1;&#x5C55;&#x7B56;&#x7565;&#x7814;&#x7A76; (ROSA26) &#x662F;&#x7531;&#x6253;&#x5F00;&#x9009;&#x62E9;&#x751F;&#x6210;&#xFF0C;&#x7528;&#x4E8E;&#x57FA;&#x56E0;&#x4E2D;&#x65AD;&#x548C;&#x5355;&#x4E2A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x540C;&#x6E90;&#x57FA;&#x56E0;&#x66FF;&#x6362;&#x3002;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7279;&#x5B9A; ZFN &#x5BF9;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x975E;&#x540C;&#x6E90;&#x672B;&#x7AEF;&#x8FDE;&#x63A5; &#xFF08;NHEJ&#xFF09;-&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x4E2D;&#x65AD;&#x65F6;&#x8868;&#x793A;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x53D7;&#x7CBE;&#x5375;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x5355;&#x4E2A;&#x7684;&#x540C;&#x6E90;&#x91CD;&#x7EC4; (HR)-&#x9A71;&#x52A8;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7F6E;&#x6362;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x65F6;&#x6B64; ZFN &#x5BF9; co-injected &#x4E0E;&#x9776;&#x5411;&#x8F7D;&#x4F53;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8868;&#x660E;&#x5B9E;&#x73B0;&#x901A;&#x8FC7;&#x7531;&#x4EBA;&#x529B;&#x8D44;&#x6E90;&#x90E8; NHEJ &#x548C;&#x57FA;&#x56E0;&#x66FF;&#x6362;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#x6D88;&#x878D;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x53D7;&#x7CBE;&#x5375;&#x4E2D;&#x76F4;&#x63A5;&#x4F7F;&#x7528;&#x6253;&#x5F00; ZFN &#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x53EF;&#x884C;&#x6027;&#x3002;

&#x6253;&#x5F00;&#x950C;&#x6307;&#x6838;&#x9178;&#x9176;&#x57FA;&#x56E0;&#x76F4;&#x63A5;&#x8BC4;&#x4EF7; ROSA26 &#x8F68;&#x8FF9;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x4E2D;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;

Zinc finger nucleases (ZFNs) enable precise genome modification in a variety of organisms and cell types. Commercial ZFNs were reported to enhance gene targeting directly in mouse zygotes, whereas similar approaches using publicly available resources have not yet been described. Here we report precise targeted mutagenesis of the mouse genome using Oligomerized Pool Engineering (OPEN) ZFNs. OPEN ZFN can be constructed using publicly available resources and therefore provide an attractive alternative for academic researchers. Two ZFN pairs specific to the mouse genomic locus gt(ROSA26)Sor were generated by OPEN selections and used for gene disruption and homology-mediated gene replacement in single cell mouse embryos. One specific ZFN pair facilitated non-homologous end joining (NHEJ)-mediated gene disruption when expressed in mouse zygotes. We also observed a single homologous recombination (HR)-driven gene replacement event when this ZFN pair was co-injected with a targeting vector. Our experiments demonstrate the feasibility of achieving both gene ablation through NHEJ and gene replacement by HR by using the OPEN ZFN technology directly in mouse zygotes.

Evaluation of OPEN Zinc Finger Nucleases for Direct Gene Targeting of the ROSA26 Locus in Mouse Embryos.

Nucl&eacute;ases de doigt de zinc (ZFNs) permettent la modification du g&eacute;nome pr&eacute;cis dans une vari&eacute;t&eacute; d&#39;organismes et de types de cellules. ZFNs commerciales ont &eacute;t&eacute; signal&eacute;s afin d&#39;am&eacute;liorer le g&egrave;ne directement le ciblage des zygotes de souris, consid&eacute;rant que des approches similaires utilisant publiquement les ressources disponibles n&#39;ont pas encore &eacute;t&eacute; d&eacute;crites. Nous rapportons ici la mutagen&egrave;se cibl&eacute;e pr&eacute;cise du g&eacute;nome de la souris &agrave; l&#39;aide de Oligomerized piscine Engineering (ouvert) ZFNs. OPEN ZFN peuvent &ecirc;tre construits &agrave; l&#39;aide de ressources accessibles au public et donc de fournir une alternative attrayante pour les chercheurs universitaires. Deux paires ZFN sp&eacute;cifiques &agrave; la gt de locus g&eacute;nomiques de souris DORS (ROSA26) ont &eacute;t&eacute; g&eacute;n&eacute;r&eacute;s par une s&eacute;lection ouverte et est utilis&eacute; pour la perturbation du g&egrave;ne et le remplacement de g&egrave;nes homologie chez les embryons unicellulaires. Une paire ZFN sp&eacute;cifique facilit&eacute;es non homologue fin rejoindre (NHEJ)-m&eacute;di&eacute;e par la perturbation du g&egrave;ne lorsqu&#39;elle est exprim&eacute;e dans les zygotes de souris. Nous avons &eacute;galement observ&eacute; une recombinaison homologue unique (HR)-&eacute;v&eacute;nement de remplacement de g&egrave;ne conduit alors cette paire ZFN &eacute;tait co-inject&eacute;es avec un vecteur de ciblage. Nos exp&eacute;riences d&eacute;montrent la faisabilit&eacute; de r&eacute;aliser les deux ablation de g&egrave;ne par l&#39;interm&eacute;diaire de NHEJ et le g&egrave;ne de remplacement par les RH en utilisant la technologie de ZFN ouvert directement chez les zygotes de souris.

&Eacute;valuation des nucl&eacute;ases de doigt de Zinc ouverte pour Gene Direct ciblage du Locus ROSA26 dans des embryons de souris.

Zink-Finger-Nukleasen (ZFNs) erm&ouml;glichen pr&auml;zise Genom &Auml;nderung in einer Vielzahl von Organismen und Zelltypen. Kommerzielle ZFNs wurde berichtet, dass Gene targeting direkt im Maus Zygoten, zu erh&ouml;hen, w&auml;hrend &auml;hnliche Ans&auml;tze mit &ouml;ffentlich verf&uuml;gbare Ressourcen bislang nicht beschrieben haben. Hier berichten wir pr&auml;zise gezielte Mutagenese von der Maus-Genom mit Oligomerized Pool Engineering (offen) ZFNs. OPEN ZFN Werknorm mit &ouml;ffentlich verf&uuml;gbare Ressourcen erstellt werden k&ouml;nnen und somit eine attraktive Alternative f&uuml;r akademische Forscher. Zwei ZFN Werknorm-Paare, die spezifisch f&uuml;r die Maus genomischen Locus Gt (ROSA26) Sor waren offene Selektionen erm&uuml;dendes und eignet sich f&uuml;r gen-St&ouml;rung und Homologie-vermittelte gen Ersatz in einzelne Zelle Maus Embryonen. Einem bestimmten ZFN Werknorm paar erleichtert nicht-homologe Ende verbinden (NHEJ)-vermittelte gen St&ouml;rung wenn Maus Zygoten ausgedr&uuml;ckt. Wir beobachten auch eine einzelne homologe Rekombination (HR)-angetriebene gen Ersatz-Ereignis, wenn dieses Paar ZFN Werknorm Granulozyten mit einem zielenden Vektor wurde. Unsere Experimente zeigen die Machbarkeit der beiden gen-Ablation durch NHEJ und gen Ersatz von HR mit die offenen ZFN Werknorm-Technologie direkt in Maus-Zygoten zu erreichen.

Bewertung der offenen Zink-Finger-Nukleasen f&uuml;r direkte Gene Targeting der der ROSA26-Locus in Maus-Embryos.

&#x4E9C;&#x925B;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x30AC;&#x30FC;&#x6838;&#x9178;&#x5206;&#x89E3;&#x9175;&#x7D20; (ZFNs) &#x306B;&#x306F;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x751F;&#x7269;&#x3084;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x4FEE;&#x98FE;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5546;&#x696D; ZFNs &#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x516C;&#x958B;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30EA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x307E;&#x3060;&#x8A18;&#x8F09;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x53D7;&#x7CBE;&#x3067;&#x76F4;&#x63A5;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x6B63;&#x78BA;&#x306B;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x7D5E;&#x3063;&#x305F;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x5316;&#x30D7;&#x30FC;&#x30EB;&#x5DE5;&#x5B66; &#xFF08;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#xFF09; ZFNs&#x3002; &#x958B;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B; ZFN &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x516C;&#x306B;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30EA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x7814;&#x7A76;&#x8005;&#x306B;&#x3068;&#x3063;&#x3066;&#x306F;&#x9B45;&#x529B;&#x7684;&#x306A;&#x4EE3;&#x66FF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3002;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; genomic &#x4F4D;&#x7F6E; gt &#x306B;&#x56FA;&#x6709;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E; ZFN &#x30DA;&#x30A2; (ROSA26) Sor &#x3044;&#x305F;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3068;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7834;&#x58CA;&#x3084;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7F6E;&#x63DB;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80DA;&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;1 &#x3064;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E; ZFN &#x30DA;&#x30A2;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x975E;&#x76F8;&#x540C;&#x672B;&#x7AEF; &#xFF08;NHEJ&#xFF09; &#x306B;&#x53C2;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;-&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x53D7;&#x7CBE;&#x5375;&#x306B;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7834;&#x58CA;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x76F8;&#x540C;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048; (HR) &#x89B3;&#x5BDF;-&#x3053;&#x306E; ZFN &#x306E;&#x30DA;&#x30A2;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; &#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x3092; co &#x6CE8;&#x5165;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306E;&#x99C6;&#x52D5;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x4EA4;&#x63DB;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306F;&#x4E21;&#x65B9;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30A2;&#x30D6;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; hr NHEJ &#x3068;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x4EA4;&#x63DB;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x76F4;&#x63A5;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x53D7;&#x7CBE;&#x5375;&#x306B;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3; ZFN &#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x8A55;&#x4FA1;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3; &#x30B8;&#x30F3;&#x30AF;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x30AC;&#x30FC;&#x6838;&#x9178;&#x5206;&#x89E3;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x76F4;&#x63A5;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80DA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; ROSA26 &#x5EA7;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC544;&#xC5F0; &#xC190;&#xAC00;&#xB77D; nucleases (ZFNs) &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4; &#xBC0F; &#xC140; &#xD615;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xAC8C;&#xB188; &#xC218;&#xC815;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0C1;&#xC5C5; ZFNs &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACF5;&#xAC1C;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC2A4; &#xD558;&#xC9C0; &#xC544;&#xC9C1; &#xC124;&#xBA85; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC18;&#xBA74; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; zygotes&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C1;&#xC811; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC84C;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; Oligomerized &#xD480; &#xC5D4;&#xC9C0;&#xB2C8;&#xC5B4;&#xB9C1; (&#xC624;&#xD508;) ZFNs. &#xC624;&#xD508; ZFN&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xAC8C;&#xB188;&#xC758; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xB41C; mutagenesis &#xACF5;&#xAC1C;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC74;&#xC124; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xD559;&#xC220; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9E4;&#xB825;&#xC801;&#xC778; &#xB300;&#xC548;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD2B9;&#xC815; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xAC8C;&#xB188; &#xB85C;&#xCEE4; &#xC2A4; gt 2 ZFN &#xC30D; (ROSA26) &#xB300;&#xB2E8;&#xD788; &#xD588;&#xB2E4; &#xC5F4;&#xAE30; &#xC120;&#xD0DD; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0DD;&#xC131; &#xBC0F; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC7A5;&#xC560; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC140; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; homology &#xC911;&#xC7AC; &#xAD50;&#xCCB4; &#xC0AC;&#xC6A9;. &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; ZFN &#xC30D; &#xC6A9;&#xC774; &#xC544;&#xB2CC; &#xB3D9;&#xC885; &#xB05D; &#xACB0;&#xD569; (NHEJ)-&#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC7A5;&#xC560; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; zygotes&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xBA74; &#xC911;&#xC7AC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xB3D9;&#xC885; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; (HR)&#xC744; &#xAD00;&#xCC30;-&#xC81C;&#xC5B4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAD50;&#xCCB4; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; ZFN &#xC30D; &#xB300;&#xC0C1; &#xBCA1;&#xD130;&#xC640; co-injected &#xB54C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; zygotes&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C1;&#xC811; &#xC624;&#xD508; ZFN &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; NHEJ&#xC640; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAD50;&#xCCB4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC81C;&#xAC70; &#xB450; &#xB2EC;&#xC131;&#xC758; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC9C1;&#xC811; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC624;&#xD508; &#xC544;&#xC5F0; &#xC190;&#xAC00;&#xB77D; Nucleases&#xC758; &#xD3C9;&#xAC00; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; ROSA26 &#xB85C;&#xCEE4; &#xC2A4;&#xC758; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C;.

Zinc finger nucleasas (ZFNs) permitan la modificaci&oacute;n del genoma precisa en una variedad de organismos y tipos celulares. Se registraron ZFNs comerciales para mejorar gene targeting directamente en cigotos de rat&oacute;n, mientras que los enfoques similares usando p&uacute;blicamente los recursos disponibles no sin embargo se han descrito. Aqu&iacute; divulgamos precisa mutag&eacute;nesis dirigida del genoma del rat&oacute;n mediante ingenier&iacute;a de piscina Oligomerized (abierto) ZFNs. abierto ZFN puede construirse mediante recursos disponibles p&uacute;blicamente y por lo tanto, proporcionar una alternativa atractiva para los investigadores acad&eacute;micos. Dos pares ZFN espec&iacute;ficos al rat&oacute;n locus gen&oacute;mico gt Sor (ROSA26) fueron generados por selecciones abiertas y utilizado para la interrupci&oacute;n del gene y reemplazo de genes mediada por homolog&iacute;a en embriones de rat&oacute;n unicelular. Un par ZFN espec&iacute;fico facilitado no-hom&oacute;logas terminan uniendo (NHEJ)-mediado interrupci&oacute;n gene cuando se expresan en cigotos de rat&oacute;n. Tambi&eacute;n observamos una sola recombinaci&oacute;n hom&oacute;loga (HR)-evento de reemplazo de gene conducido cuando este par ZFN era coinyectado con un vector de segmentaci&oacute;n. Nuestros experimentos demuestran la viabilidad de alcanzar ambos ablaci&oacute;n del gen a trav&eacute;s del reemplazo de NHEJ y gene por HR usando la tecnolog&iacute;a de ZFN abierto directamente en cigotos de rat&oacute;n.

Evaluaci&oacute;n de abierto Zinc Finger nucleasas para directo del Gene Targeting del Locus ROSA26 en embriones de rat&oacute;n.

Conditional mutagenesis using Cre recombinase expressed from tissue specific promoters facilitates analyses of gene function and cell lineage tracing. Here, we describe two novel dual-promoter-driven conditional mutagenesis systems designed for greater accuracy and optimal efficiency of recombination. Co-Driver employs a recombinase cascade of Dre and Dre-respondent Cre, which processes loxP-flanked alleles only when both recombinases are expressed in a predetermined temporal sequence. This unique property makes Co-Driver ideal for sequential lineage tracing studies aimed at unraveling the relationships between cellular precursors and mature cell types. Co-InCre was designed for highly efficient intersectional conditional transgenesis. It relies on highly active trans-splicing inteins and promoters with simultaneous transcriptional activity to reconstitute Cre recombinase from two inactive precursor fragments. By generating native Cre, Co-InCre attains recombination rates that exceed all other binary SSR systems evaluated in this study. Both Co-Driver and Co-InCre significantly extend the utility of existing Cre-responsive alleles.

Article	Year
Follicular dendritic cells emerge from ubiquitous perivascular precursors. Cell\| PubMed ID: 22770220	2012
Evaluation of OPEN Zinc Finger Nucleases for Direct Gene Targeting of the ROSA26 Locus in Mouse Embryos. PloS one\| PubMed ID: 22970113	2012
Binary recombinase systems for high-resolution conditional mutagenesis. Nucleic acids research\| PubMed ID: 24413561	2014

Mario Hermann

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