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Super-resolution Imaging of Neuronal Dense-core Vesicles

Detection of fluorescence provides the foundation for many widely utilized and rapidly advancing microscopy techniques employed in modern biological and ...

Lewis & Clark College

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&#x6E05;&#x626B; dynamin &#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;&#x80DE;&#x4E0E;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x500F;&#x901D;&#x6CE2;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x4E0B;&#x7684;&#x541E;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x8026;&#x5408;&#x7684;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x3002;

Vesicle recycling through exocytosis and endocytosis is mediated by a coordinated cascade of protein-protein interactions. Previously, exocytosis and endocytosis were studied separately so that the coupling between them was understood only indirectly. We focused on the coupling of these processes by observing the secretory vesicle marker synaptobrevin and the endocytotic vesicle marker dynamin I tagged with green and red fluorescent proteins under an evanescent wave microscope in pheochromocytoma cells. In control cells, many synaptobrevin-expressing vesicles were found as fluorescent spots near the plasma membrane. Upon electrical stimulation, many of these vesicles showed an exocytotic response as a transient increase in fluorescence intensity followed by their disappearance. In contrast, fluorescent dynamin appeared as clusters increasing slowly in number upon stimulation. The clusters of fluorescent dynamin moved around beneath the plasma membrane for a significant distance. Simultaneous observations of green fluorescent dynamin and red fluorescent synaptobrevin indicated that more than 70% of the exocytotic responses of synaptobrevin had no immediate dynamin counterpart at the same site. From these findings it was concluded that dynamin-mediated recycling is not directly coupled to exocytosis but rather completed by a scanning movement of dynamin for the sites of invaginating membrane destined to endocytosis.

Sweeping model of dynamin activity. Visualization of coupling between exocytosis and endocytosis under an evanescent wave microscope with green fluorescent proteins.

V&eacute;sicule recyclage par le biais de l&#39;exocytose et l&#39;endocytose est m&eacute;di&eacute; par une cascade coordonn&eacute;e d&#39;interactions prot&eacute;ine-prot&eacute;ine. Auparavant, l&#39;exocytose et l&#39;endocytose ont &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute;s s&eacute;par&eacute;ment afin que le couplage entre eux &eacute;tait entendu qu&#39;indirectement. Nous nous sommes concentr&eacute;s sur le couplage de ces processus en observant la synaptobr&eacute;vine marqueur de v&eacute;sicules s&eacute;cr&eacute;trices et la dynamine de marqueur de v&eacute;sicule endocytose que je tag prot&eacute;ines fluorescentes vertes et rouges sous un microscope &agrave; onde &eacute;vanescente dans les cellules de ph&eacute;ochromocytome. Dans les cellules t&eacute;moins, nombreuses v&eacute;sicules exprimant synaptobr&eacute;vine trouv&eacute;es sous forme de taches fluorescentes pr&egrave;s de la membrane plasmique. Lors de la stimulation &eacute;lectrique, beaucoup de ces v&eacute;sicules ont montr&eacute; une r&eacute;ponse exocytotique comme une augmentation transitoire dans l&#39;intensit&eacute; de la fluorescence suivis de leur disparition. En revanche, la dynamine fluorescent semblait comme des grappes augmente lentement en nombre lors de la stimulation. Les grappes de la dynamine fluorescent se d&eacute;pla&ccedil;ait sous la membrane plasmique, sur une distance consid&eacute;rable. Des observations simultan&eacute;es de la dynamine fluorescent vert et rouge synaptobr&eacute;vine fluorescent a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que plus de 70 % des r&eacute;ponses exocytotique de synaptobr&eacute;vine aucune contrepartie imm&eacute;diate dynamine sur le m&ecirc;me site. D&#39;apr&egrave;s ces r&eacute;sultats, il a &eacute;t&eacute; conclu que dynamine-mediated recyclage n&#39;est pas directement coupl&eacute; &agrave; l&#39;exocytose mais plut&ocirc;t remplir par un mouvement de balayage de la dynamine pour les sites de membrane augmentation destin&eacute;e &agrave; l&#39;endocytose.

Mod&egrave;le d&#39;activit&eacute; de la dynamine de balayage. Visualisation du couplage entre l&#39;exocytose et l&#39;endocytose sous le microscope avec des prot&eacute;ines fluorescentes vertes onde &eacute;vanescente.

Kehr-Modell von Dynamin Aktivit&#xE4;t. Visualisierung der Kopplung zwischen Exozytose und Endozytose unter einer abklingenden Welle Mikroskop mit gr&#xFC;n fluoreszierenden Proteine.

Vescicola riciclaggio attraverso esocitosi ed endocitosi &egrave; mediata da una cascata coordinata di interazioni proteina-proteina. In precedenza, esocitosi ed endocitosi sono stati studiati separatamente cos&igrave; che l&#39;accoppiamento tra di loro &egrave; stato capito solo indirettamente. Ci siamo concentrati sull&#39;accoppiamento di questi processi osservando la sinaptobrevina marcatore vescicola secretoria e le vescicole endocitotiche marcatore dynamin che sono contrassegnati con le proteine fluorescenti verde e rosse sotto un microscopio onda evanescente in cellule di feocromocitoma. Nelle cellule di controllo, sono state trovate molte vescicole sinaptobrevina esprimendo come macchie fluorescenti vicino alla membrana del plasma. Dopo stimolazione elettrica, molte di queste vescicole hanno mostrate una risposta di questo come un aumento transitorio dell&#39;intensit&agrave; di fluorescenza seguita dalla loro scomparsa. In contrasto, dynamin fluorescente apparve come cluster aumentando lentamente nel numero dopo stimolazione. I cluster di fluorescente dynamin spostati sotto la membrana plasmatica per una distanza significativa. Osservazioni simultanee di dynamin fluorescente verde e rosso fluorescente sinaptobrevina indicavano che oltre il 70% delle risposte questo della sinaptobrevina non aveva nessuna contropartita immediata dynamin nello stesso sito. Da questi risultati si &egrave; concluso che dynamin-mediata di riciclaggio &egrave; non direttamente accoppiato alla esocitosi ma piuttosto completato da un movimento di scansione di dynamin per i siti della membrana invaginating destinata per endocitosi.

Modello di attivit&agrave; dynamin di spazzare. Visualizzazione di accoppiamento tra esocitosi ed endocitosi sotto un microscopio onda evanescente con le proteine verdi fluorescenti.

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&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30F3;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x629C;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3002;&#x958B;&#x53E3;&#x5206;&#x6CCC;&#x3068;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x30A8;&#x30D0;&#x30CD;&#x30C3; &#x30BB;&#x30F3;&#x30C8;&#x6CE2;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3002;

&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC870;&#xC728; &#xB41C; &#xCE90;&#xC2A4;&#xCF00;&#xC774;&#xB4DC; endocytosis &#xBC0F; exocytosis&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xAE30; &#xC911;&#xC7AC;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC804;&#xC5D0;, endocytosis &#xBC0F; exocytosis &#xACF5;&#xBD80; &#xD588;&#xB2E4; &#xBCC4;&#xB3C4;&#xB85C; &#xADF8;&#xB4E4; &#xAC04;&#xC758; &#xACB0;&#xD569;&#xB9CC; &#xC9C1;&#xC811; &#xC774;&#xD574; &#xB418;&#xB3C4;&#xB85D;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBD84; &#xAE30; &#xB9C8;&#xCEE4; synaptobrevin &#xBC0F; endocytotic &#xAE30; &#xD45C;&#xC2DD; dynamin pheochromocytoma &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AC;&#xB77C;&#xC838;&#xAC00; &#xC6E8;&#xC774;&#xBE0C; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xB179;&#xC0C9;&#xACFC; &#xC801;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD0DC;&#xADF8;&#xB85C; &#xAD00;&#xCC30; &#xD558; &#xC5EC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACFC;&#xC815;&#xC758; &#xACB0;&#xD569;&#xC5D0; &#xCD08;&#xC810;&#xC744;. &#xC81C;&#xC5B4; &#xC140; &#xB9CE;&#xC740; synaptobrevin &#xD45C;&#xD604; vesicles &#xD615;&#xAD11; &#xAD00;&#xAD11; &#xBA85;&#xC18C; &#xADFC;&#xCC98;&#xC5D0; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC804;&#xAE30; &#xC790;&#xADF9; &#xC2DC; &#xD615;&#xAD11; &#xAC15;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xC77C;&#xC2DC;&#xC801;&#xC778; &#xC99D;&#xAC00; exocytotic &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; vesicles&#xC758; &#xB9CE;&#xC740; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC2E4;&#xC885; &#xC635;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74;&#xC5D0; &#xD615;&#xAD11; dynamin &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC218;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCC9C;&#xCC9C;&#xD788; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xB85C; &#xB4F1;&#xC7A5;. &#xD615;&#xAD11; dynamin &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xAC70;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6D0;&#xD615;&#xC9C8; &#xB9C9; &#xC544;&#xB798; &#xC774;&#xB3D9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; dynamin &#xBE68;&#xAC04;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; synaptobrevin&#xC758; &#xB3D9;&#xC2DC; &#xAD00;&#xCE21; &#xD45C;&#xC2DC; synaptobrevin&#xC758; exocytotic &#xBC18;&#xC751;&#xC758; 70% &#xC774;&#xC0C1;&#xC774; &#xAC19;&#xC740; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC544;&#xBB34; &#xC989;&#xAC01;&#xC801;&#xC778; dynamin &#xB300;&#xC751;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8; exocytosis&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xACB0;&#xD569; &#xB41C; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; dynamin &#xC911;&#xC7AC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC624;&#xD788;&#xB824; &#xC2A4;&#xCE94; dynamin endocytosis &#xC6B4;&#xBA85; invaginating &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC758; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC644;&#xC131; &#xC885;&#xACB0; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;.

Dynamin &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC5F0;&#xC18C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD568;&#xAED8; &#xC0AC;&#xB77C;&#xC838;&#xAC00; &#xC6E8;&#xC774;&#xBE0C; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; endocytosis &#xBC0F; exocytosis &#xAC04;&#xC758; &#xACB0;&#xD569;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654;.

Ves&iacute;cula de reciclaje a trav&eacute;s de exocitosis y endocitosis est&aacute; mediada por una serie coordinada de interacciones prote&iacute;na-prote&iacute;na. Previamente, exocitosis y endocitosis estudiaron por separado para que el acoplamiento entre ellos era entendido s&oacute;lo indirectamente. Nos centramos en el acoplamiento de estos procesos mediante la observaci&oacute;n de la ves&iacute;cula secretora marcador synaptobrevin y la ves&iacute;cula endocytotic marcador Dinamina que yo etiquetado verdes y rojas prote&iacute;nas fluorescentes bajo un microscopio de onda evanescente en c&eacute;lulas de feocromocitoma. En las c&eacute;lulas control, muchas ves&iacute;culas synaptobrevin-expresi&oacute;n fueron encontradas como manchas fluorescentes cerca de la membrana plasm&aacute;tica. Sobre estimulaci&oacute;n el&eacute;ctrica, muchas de estas ves&iacute;culas demostradas una respuesta exocit&oacute;tico como un aumento transitorio en la intensidad de fluorescencia seguido por su desaparici&oacute;n. Por el contrario, fluorescente Dinamina apareci&oacute; como racimos aumentando lentamente en n&uacute;mero sobre el est&iacute;mulo. Los racimos de fluorescente Dinamina movido alrededor debajo de la membrana plasm&aacute;tica por una gran distancia. Observaciones simult&aacute;neas de Dinamina fluorescente verde y rojo fluorescente synaptobrevin indicaron que m&aacute;s del 70% de las respuestas exocit&oacute;ticas de synaptobrevin no ten&iacute;a ninguna contraparte Dinamina inmediata en el mismo sitio. De estos resultados se concluy&oacute; que Dinamina-mediada reciclaje es no directamente acoplado a la exocitosis pero bastante completa por un movimiento de barrido de Dinamina para los sitios de membrana invaginante destinado a la endocitosis.

Barriendo el modelo de la actividad de la Dinamina. Visualizaci&oacute;n de acoplamiento entre la exocitosis y endocitosis bajo un microscopio de onda evanescente con prote&iacute;nas fluorescentes verdes.

&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x9499;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;-1 &#xFF08;NCS-1&#xFF09; &#x548C;&#x5176;&#x975E;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#xFF0C;frequenin&#xFF0C;&#x6709;&#x7275;&#x8FDE;&#x8C31;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FDB;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x62EC;&#x523A;&#x6FC0;&#x80DE;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x5C0F;&#x6CE1;&#x548C;&#x5206;&#x6CCC;&#x9897;&#x7C92; (SGs) &#x8C03;&#x8282;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x7684;&#x78F7;&#x8102;&#x9170;&#x808C;&#x9187; 4 &#x6FC0;&#x9176; &beta; &#x6D3B;&#x6027;&#x8C03;&#x8282;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x9664;&#x4E86;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x5047;&#x5B9A;&#x51FD;&#x6570;&#xFF0C;NCS-1 &#x548C; frequenin &#x76F8;&#x5BF9;&#x8F83;&#x4E86;&#x89E3;&#x5F97;&#x5F88;&#x5C11;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x5206;&#x914D;&#x3001; &#x52A8;&#x6001;&#x548C;&#x975E;&#x534E;&#x8BED;-1 &#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x7814;&#x7A76;&#x4F7F;&#x7528; PC12 &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x8868;&#x8FBE;&#x975E;&#x534E;&#x8BED;-1-EYFP &#xFF08;NCS 1 &#x5230;&#x589E;&#x5F3A;&#x578B;&#x9EC4;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x878D;&#x5408;&#xFF09; &#x6216;&#xFF0C;&#x7A33;&#x5B9A;&#x5730;&#x53BB;&#x975E;&#x534E;&#x8BED; 1&#x3002;&#x8367;&#x5149;&#x548C;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x975E;&#x534E;&#x8BED;-1-EYFP &#x662F; SGs &#x79BB;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5C0F;&#x660E;&#x786E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5668;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x4E00;&#x4E9B;&#x6B63;&#x4E0B;&#x65B9;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x4E0A;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x5168;&#x5185;&#x53CD;&#x5C04;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x663E;&#x793A;&#x975E;&#x534E;&#x8BED;-1-EYFP &#x662F;&#x5728;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x6CE1; (SLMVs) &#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x9AD8;&#x6548;&#x8868;&#x8FBE;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E; NCS 1 &#x589E;&#x5F3A;&#x80DE;&#x7A81;&#x89E6;&#x6807;&#x8BB0;&#x4E3A;&#x53D7;&#x89C4;&#x7BA1;&#x5206;&#x6CCC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5668; (&#x5B66;&#x5386;) &#x57FA;&#x5E95;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x548C;&#x671F;&#x95F4;&#x7684; utp &#x7F06;&#x7EBF;&#x7684;&#x523A;&#x6FC0;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x5728;&#x52A0;&#x5F3A;&#x7684;&#x8001;&#x5E08;&#x5085; PC12 &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x57FA;&#x5E95;&#x548C;&#x523A;&#x6FC0;&#x78F7;&#x9178;&#x808C;&#x9187;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x80DE;&#x6307;&#x8BC1; NCS 1 &#x548C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x6218;&#x7565;&#x6027;&#x5730;&#x5206;&#x53D1;&#x975E;&#x534E;&#x8BED; 1 &#x4E0E;&#x5047;&#x5B9A;&#x76EE;&#x6807;&#x5173;&#x4E8E;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x548C; SLMVs &#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x8FD8;&#x63ED;&#x793A; SLMVs &#x7ECF;&#x8FC7;&#x5FEB;&#x901F;&#x5B9A;&#x5411;&#x7684;&#x8FD0;&#x52A8;&#x548C;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x53D7;&#x963B;&#x6269;&#x6563;&#x8FD0;&#x52A8;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x6210;&#x5206;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x548C;&#x963B;&#x788D; SLMV &#x8BAE;&#x6848;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x4E5F;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x76F8;&#x4F3C;&#x4E4B;&#x5904;&#x548C;&#x8FD0;&#x8F93;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5668;&#x4E2D;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;

&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x9499;&#x4F20;&#x611F;&#x5668; 1 &#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x53D7;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684;&#x5206;&#x6CCC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5668;&#x548C; PC12 &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x57FA;&#x5E95;&#x548C;&#x523A;&#x6FC0;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x3002;

Neuronal calcium sensor-1 (NCS-1) and its non-mammalian homologue, frequenin, have been implicated in a spectrum of cellular processes, including regulation of stimulated exocytosis of synaptic vesicles and secretory granules (SGs) in neurons and neuroendocrine cells and regulation of phosphatidylinositol 4-kinase beta activity in yeast. However, apart from these intriguing putative functions, NCS-1 and frequenin are relatively poorly understood. Here, the distribution, dynamics and function of NCS-1 were studied using PC12 cells that stably express NCS-1-EYFP (NCS-1 fused to enhanced yellow fluorescent protein) or that stably overexpress NCS-1. Fluorescence and electron microscopies show that NCS-1-EYFP is absent from SGs but is present on small clear organelles, some of which are just below the plasma membrane. Total internal reflection fluorescence microscopy shows that NCS-1-EYFP is associated with synaptic-like microvesicles (SLMVs) in growth cones. Overexpression studies show that NCS-1 enhances exocytosis of synaptotagmin-labeled regulated secretory organelles (RSOs) under basal conditions and during stimulation by UTP. Significantly, these studies implicate NCS-1 in the enhancement of both basal and stimulated phosphoinositide-dependent exocytosis of RSOs in PC12 cells, and they show that NCS-1 is distributed strategically to interact with putative targets on the plasma membrane and on SLMVs. These studies also reveal that SLMVs undergo both fast directed motion and highly hindered diffusive motion in growth cones, suggesting that cytoskeletal constituents can both facilitate and hinder SLMV motion. These results also reveal interesting similarities and differences between transport organelles in differentiated neuroendocrine cells and neurons.

Neuronal calcium sensor-1 binds to regulated secretory organelles and functions in basal and stimulated exocytosis in PC12 cells.

Sensor de calcio neuronal-1 (NCS-1) y su hom&oacute;logo de animales no mam&iacute;feros, frequenin, han sido implicados en una variedad de procesos celulares, incluyendo la regulaci&oacute;n de estimulado exocitosis de ves&iacute;culas sin&aacute;pticas y gr&aacute;nulos secretores (SGs) en las neuronas y las c&eacute;lulas neuroendocrinas y regulaci&oacute;n del Fosfatidilinositol 4-quinasa beta actividad en levadura. Sin embargo, aparte de estas funciones supuestas intrigantes, NCS-1 y frequenin son relativamente mal entendidas. Aqu&iacute;, la distribuci&oacute;n, din&aacute;mica y funci&oacute;n de NCS-1 se estudiaron utilizando c&eacute;lulas PC12 estable que expresar NCS-1-EYFP (NCS-1 fusionado a la prote&iacute;na fluorescente amarilla mejorada) o estable que sobreexpresan NCS-1. Fluorescencia y electr&oacute;n microscop&iacute;as Mostrar lo NCS-1-EYFP ausente de SGs pero est&aacute; presentes en peque&ntilde;os organelos claros, algunas de las cuales est&aacute;n justo debajo de la membrana plasm&aacute;tica. Microscop&iacute;a de fluorescencia de reflexi&oacute;n interna total muestra que NCS-1-EYFP se asocia con microves&iacute;culas sin&aacute;ptica-como (SLMVs) en los conos de crecimiento. Sobreexpresi&oacute;n estudios demuestran que NCS-1 aumenta la exocitosis de marcado synaptotagmin regulados secretores organelos (RSOs) bajo condiciones basales y durante el est&iacute;mulo por UTP. Significativamente, estos estudios implican NCS-1 en la mejora de la exocitosis de Fosfoinositol dependiente tanto basal como estimulada de RSOs en c&eacute;lulas PC12, y muestran que el NCS-1 es distribuidos estrat&eacute;gicamente para interactuar con posibles dianas en la membrana plasm&aacute;tica y en SLMVs. Estos estudios tambi&eacute;n revelan que SLMVs pasar r&aacute;pido movimiento dirigido tanto movimiento difusivo muy obstaculizada en los conos de crecimiento, sugiriendo que componentes del citoesqueleto pueden facilitar y dificultar el movimiento SLMV. Estos resultados tambi&eacute;n revelan interesantes similitudes y diferencias entre transporte org&aacute;nulos en c&eacute;lulas neuroendocrinas diferenciadas y las neuronas.

Sensor de calcio neuronal-1 se une a organelos secretores regulados y funciones en exocitosis basal y estimulada en c&eacute;lulas PC12.

Neuronal calcium capteur-1 (NCS-1) et son homologue non mammif&egrave;res, frequenin, ont &eacute;t&eacute; impliqu&eacute;s dans un &eacute;ventail de processus cellulaires, y compris la r&eacute;glementation des stimul&eacute;e par exocytose des v&eacute;sicules synaptiques et des granules de s&eacute;cr&eacute;tion (SGs) dans les neurones et les cellules neuroendocrines et r&eacute;gulation de l&#39;activit&eacute; de la phosphatidylinositol kinase 4 b&ecirc;ta chez la levure. Toutefois, en dehors de ces fonctions pr&eacute;sum&eacute;es intrigantes, NCS-1 et frequenin sont relativement mal connus. Ici, la distribution, la dynamique et la fonction du NCS-1 ont &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute;s en utilisant des cellules PC12 qui expriment stablement NCS-1-EYFP (NCS-1 fondue &agrave; la prot&eacute;ine fluorescente jaune am&eacute;lior&eacute;) ou qui surexpriment stablement NCS-1. Fluorescence et microscopie &eacute;lectronique montrent que NCS-1-EYFP est absente du SGs, mais est pr&eacute;sentes sur petits organites clairs, dont certains sont juste en dessous de la membrane plasmique. Microscopie de fluorescence de r&eacute;flexion interne totale montre que NCS-1-EYFP est associ&eacute; de type synaptique microv&eacute;sicules (SLMVs) dans les c&ocirc;nes de croissance. La surexpression indiquent que NCS-1 am&eacute;liore l&#39;exocytose des synaptotagmine marqu&eacute;s r&eacute;glement&eacute;s s&eacute;cr&eacute;toires organites (RSO) en conditions basales et durant la stimulation par l&#39;UTP. Significativement, ces &eacute;tudes mettent en cause NCS-1 dans le renforcement de la basale et stimul&eacute;e exocytose phosphoinositide d&eacute;pendant des ARS dans les cellules PC12, et ils montrent que NCS-1 est strat&eacute;giquement distribu&eacute;s pour interagir avec des cibles pr&eacute;sum&eacute;es sur la membrane plasmique et sur SLMVs. Ces &eacute;tudes r&eacute;v&egrave;lent aussi que les SLMVs subissent acc&eacute;l&eacute;r&eacute; dirig&eacute;e et fortement emp&ecirc;ch&eacute;e motion par diffusion dans les c&ocirc;nes de croissance, sugg&eacute;rant que les constituants du cytosquelette pouvant faciliter et entraver le mouvement SLMV. Ces r&eacute;sultats r&eacute;v&egrave;lent aussi int&eacute;ressant des similarit&eacute;s et des diff&eacute;rences entre les organites de transport dans les cellules neuroendocrines diff&eacute;renci&eacute;es et les neurones.

Neuronal calcium capteur-1 se lie aux organites s&eacute;cr&eacute;toires r&eacute;glement&eacute;s et fonctions dans l&#39;exocytose basale et stimul&eacute;e dans les cellules PC12.

Neuronalen Calcium-Sensor-1 bindet an sekretorischen Organellen und Funktionen in basale und stimulierte Exozytose in PC12-Zellen.

Calcio neuronale sensore-1 (NCS-1) e il suo omologo di mammiferi, frequenin, sono stati implicati in uno spettro di processi cellulari, tra cui il regolamento di stimolata esocitosi delle vescicole sinaptiche e granuli secretori (SGs) in neuroni e cellule neuroendocrine e regolamentazione dell&#39;attivit&agrave; della chinasi 4 beta fosfatidilinositolo in lievito. Tuttavia, oltre a queste funzioni putative intrigante, NCS-1 e frequenin sono relativamente poco conosciute. Qui, la distribuzione, la dinamica e la funzione di NCS-1 sono stati studiati usando le cellule PC12 che esprimono stabilmente NCS-1-EYFP (NCS-1 fusa ad una maggiore proteina fluorescente gialla) o stabile che iperesprimono NCS-1. Fluorescenza e visualizza allevamento elettrone che NCS-1-EYFP &egrave; assente dalla SGs ma &egrave; presente su piccoli organuli chiari, alcuni dei quali sono appena sotto la membrana plasmatica. Microscopia di fluorescenza di riflessione interna totale dimostra che NCS-1-EYFP &egrave; associato con synaptic-come microvesicles (SLMVs) nei coni di crescita. Sovraespressione studi mostrano che NCS-1 migliora la esocitosi di marcato SHP2 regolamentati secretivi organelli (RSO) in condizioni basali e durante la stimolazione da UTP. Significativamente, questi studi coinvolgono NCS-1 nella valorizzazione della esocitosi di phosphoinositide-dipendente basale e stimolata di RSO in cellule PC12, e mostrano che NCS-1 &egrave; distribuita strategicamente per interagire con bersagli putativi sulla membrana del plasma e su SLMVs. Questi studi rivelano anche che SLMVs subiscono sia veloce moto diretto e altamente intralciata movimento diffusivo nei coni di crescita, suggerendo che i costituenti del citoscheletro possono sia facilitare e ostacolare il movimento SLMV. Questi risultati rivelano anche interessanti analogie e differenze tra trasporto organelli in cellule neuroendocrine differenziate e neuroni.

Calcio neuronale sensore-1 si lega a organuli secretori regolamentati e funzioni nella esocitosi basale e stimolata in cellule PC12.

&#x795E;&#x7D4C;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;-1 &#xFF08;NCS-1) &#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x975E;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x76F8;&#x540C;&#x3001;frequenin&#x3001;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE;&#x3068;&#x5206;&#x6CCC;&#x9846;&#x7C92; &#xFF08;SGs&#xFF09; &#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3084;&#x795E;&#x7D4C;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB; 4 &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x6D3B;&#x6027;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x8208;&#x5473;&#x3092;&#x305D;&#x305D;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x304B;&#x3089;&#x96E2;&#x308C;&#x3066;&#x3001;NCS 1 &#x3068; frequenin &#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x3088;&#x304F;&#x7406;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5206;&#x5E03;&#x3001;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3068; NCS 1 &#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x3001;&#x5B89;&#x5B9A; NCS-1-EYFP (NCS 1&#xFF09; &#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x9EC4;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306B;&#x6EB6;&#x3051;&#x308B;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3057;&#x305F;&#x308A;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A; NCS 1 &#x30CE;&#x30B6;&#x30F3; PC12 &#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;&#x86CD;&#x5149;&#x3068; NCS 1 EYFP &#x3067;&#x3059;&#x96FB;&#x5B50;&#x4F3C;&#x308B;&#x30B7;&#x30E7;&#x30FC; SGs &#x304B;&#x3089;&#x6B20;&#x5E2D;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C;&#x306E;&#x4E0B;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30AF;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x5C0F;&#x5668;&#x5B98;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5168;&#x5185;&#x90E8;&#x53CD;&#x5C04;&#x86CD;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306F;&#x3001;NCS 1 EYFP &#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178; (SLMVs) &#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x7814;&#x7A76; NCS 1 &#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30BF;&#x30B0;&#x30DF;&#x30F3; &#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x898F;&#x5236;&#x5206;&#x6CCC;&#x5668;&#x5B98; (RSOs) &#x57FA;&#x5E95;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x304A;&#x3088;&#x3073; UTP &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x523A;&#x6FC0;&#x6642;&#x306E;&#x958B;&#x53E3;&#x5206;&#x6CCC;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;, &#x57FA;&#x5E95;&#x3068;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C1;&#x30C9;&#x4F9D;&#x5B58;&#x578B;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9; RSOs PC12 &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F37;&#x5316;&#x306E; NCS 1 &#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x5DFB;&#x304D;&#x8FBC;&#x3080;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089; NCS 1 &#x63A8;&#x5B9A;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; &#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C;&#x4E0A;&#x306B; SLMVs &#x3068;&#x306E;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3092;&#x6226;&#x7565;&#x7684;&#x306B;&#x5206;&#x6563;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x307E;&#x305F; SLMVs &#x65B9;&#x5411;&#x306E;&#x904B;&#x52D5;&#x3092;&#x9AD8;&#x901F;&#x3068;&#x9AD8;&#x963B;&#x5BB3;&#x306E;&#x62E1;&#x6563;&#x904B;&#x52D5;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x6210;&#x5206;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x3057;&#x3001;SLMV &#x30E2;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x59A8;&#x3052;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x985E;&#x4F3C;&#x70B9;&#x3068;&#x8F38;&#x9001;&#x5668;&#x5B98;&#x5206;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x795E;&#x7D4C;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x9593;&#x306E;&#x76F8;&#x9055;&#x70B9;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3002;

&#x795E;&#x7D4C;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC; 1 &#x898F;&#x5236;&#x5206;&#x6CCC;&#x7D30;&#x80DE;&#x5C0F;&#x5668;&#x5B98;&#x3068;&#x57FA;&#x5E95;&#x3068;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9; PC12 &#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5185;&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC2E0;&#xACBD; &#xCE7C;&#xC298; &#xC13C;&#xC11C; 1 (NCS-1) &#xBC0F; &#xADF8; &#xBE44; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; homologue, frequenin, &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; neuroendocrine &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xD6A8; &#xBAA8;&#xC5D0; phosphatidylinositol 4 &#xB2C8; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C; &#xC790;&#xADF9;&#xB41C; exocytosis synaptic vesicles&#xC640; &#xBD84;&#xACFC; &#xB9BD; (SGs)&#xC758; &#xADDC;&#xC815;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC758; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xB418;&#xC5B4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD765;&#xBBF8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC0C1; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC678;&#xC5D0;&#xB3C4; NCS 1&#xACFC; frequenin&#xB294; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC800;&#xC870;&#xD55C; &#xC774;&#xD574;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC720;&#xD1B5;, &#xC5ED;&#xD559; &#xBC0F; NCS 1&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; PC12 &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; NCS-1-EYFP (NCS-1 &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xB178;&#xB780;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC735;&#xD569;) &#xB610;&#xB294; &#xADF8; &#xC548;&#xC815;&#xC801; NCS-1 overexpress&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACF5;&#xBD80; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD615;&#xAD11; &#xBC0F; &#xC804;&#xC790; microscopies &#xC1FC; NCS-1-EYFP&#xC740; Sgs&#xC5D0;&#xC11C; &#xACB0; &#xC11D; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC77C;&#xBD80; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xB9C9; &#xBC14;&#xB85C; &#xC544;&#xB798;&#xC5D0; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xBA85; organelles&#xC5D0;. &#xCD1D; &#xB0B4;&#xBD80; &#xBC18;&#xC0AC; &#xD615;&#xAD11; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; NCS-1-EYFP &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4;&#xC640; &#xAC19;&#xC740; microvesicles (SLMVs)&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Overexpression &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; NCS 1 synaptotagmin &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xADDC;&#xC81C; &#xBD84; organelles (RSOs) &#xAE30;&#xC800; &#xC870;&#xAC74; &#xBC0F; UTP&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC790;&#xADF9; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; exocytosis &#xD5A5;&#xC0C1; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD06C;&#xAC8C;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; RSOs PC12 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xAE30;&#xC800; &#xBC0F; &#xC790;&#xADF9; phosphoinositide &#xC885;&#xC18D; exocytosis &#xD5A5;&#xC0C1;&#xC5D0; NCS 1 &#xC5F0;&#xB8E8;&#xACFC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC774; NCS 1 &#xC0C1; &#xB300;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xBC0F; Slmvs&#xC5D0; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC804;&#xB7B5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC30;&#xD3EC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xADF8; SLMVs &#xBC1B;&#xC544;&#xC57C; &#xBE60;&#xB978; &#xC9C0;&#xC2DC; &#xB3D9;&#xC791; &#xBC0F; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xBC29;&#xD574; &#xD37C;&#xC9C0;&#xB294; &#xBAA8;&#xC158; &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4;, cytoskeletal &#xC131;&#xBD84; &#xCD09;&#xC9C4; &#xC218; &#xBC0F; SLMV &#xBAA8;&#xC158;&#xC744; &#xBC29;&#xD574; &#xD558;&#xC790; &#xACF5;&#xAC1C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xB610;&#xD55C; &#xD765;&#xBBF8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC720;&#xC0AC;&#xC810;&#xACFC; &#xCC28;&#xC774;&#xC810; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xB41C; neuroendocrine &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xC1A1; organelles &#xB274;&#xB7F0; &#xC0AC;&#xC774; &#xACF5;&#xAC1C;.

&#xC2E0;&#xACBD; &#xCE7C;&#xC298; &#xC13C;&#xC11C;-1 &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB41C; &#xBD84; organelles &#xAE30;&#xC800; &#xBC0F; &#xC790;&#xADF9; exocytosis PC12 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xD568;&#xC218;&#xB97C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

The difficulty of deriving binding ligands to targets identified by genomic sequencing has led to a bottleneck in genomic research. By inserting diverse antibody binding loops into four of the exposed loops at one end of green fluorescent protein (GFP), we have mimicked the natural antibody binding footprint to create robust binding ligands that combine the advantages of antibodies (high affinity and specificity) with those of GFP (intrinsic fluorescence, high stability, expression and solubility). These 'fluorobodies' have been used effectively in enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs), flow cytometry, immuno-fluorescence, arrays and gel shift assays, and show affinities as high as antibodies. Furthermore, the intrinsic fluorescence of fluorobodies correlates with binding activity, allowing the rapid determination of functionality, concentration and affinity. These properties render them especially suitable for the high-throughput genomic scale selections required in proteomics, as well as in diagnostics, target validation and drug development.

Fluorobodies combine GFP fluorescence with the binding characteristics of antibodies.

Retraction. Fluorobodies combine GFP fluorescence with the binding characteristics of antibodies.

&#x81F4;&#x5BC6;&#x6838;&#x5FC3;&#x9897;&#x7C92; (DCGs) &#x662F;&#x5728;&#x4E13;&#x95E8;&#x7684;&#x5206;&#x6CCC;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x627E;&#x5230;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5668;&#x3002;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143; DCGs &#x4FBF;&#x5229;&#x8BB8;&#x591A;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x8FD0;&#x8F93;&#x548C;&#x5206;&#x6CCC;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x53C2;&#x4E0E;&#x5B66;&#x4E60;&#xFF0C;&#x548C;&#x5C1A;&#x672A;&#x5176;&#x8FD0;&#x8F93;&#x548C;&#x80DE;&#x5374;&#x4E0D;&#x751A;&#x4E86;&#x89E3;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x5BBD;&#x89C6;&#x573A;&#x548C;&#x5168;&#x5185;&#x53CD;&#x5C04;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x672F;&#xFF0C;&#x5728;&#x8FD0;&#x8F93;&#x7406;&#x8BBA;&#x4E0A;&#xFF0C;&#x82E5;&#x8981;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x7684;&#x8FD0;&#x8F93;&#x548C;&#x80DE; DCGs &#x5305;&#x542B;&#x5728;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x673A;&#x6784;&#x3001; neurites &#x548C;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x7684;&#x57F9;&#x517B;&#x6D77;&#x9A6C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x5E76;&#x91CF;&#x5316;&#x89D2;&#x8272;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x578B;&#x7EA4;&#x6EB6;&#x9176;&#x539F;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5242;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x6DF7;&#x5408;&#x6269;&#x6563;&#xFF0C;&#x7ED3;&#x5408;&#x5B9A;&#x5411;&#x8FD0;&#x52A8;&#x548C;&#x9759;&#x6B62;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; DCGs &#x9644;&#x8FD1;&#x7AD9;&#x70B9;&#x5728;&#x6D77;&#x9A6C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x80DE;&#x77ED;&#x4E0D;&#x7B49;&#x8FD0;&#x8F93;&#x6709;&#x7740;&#x663E;&#x8457;&#x7684;&#x533A;&#x522B;&#x3002;&#x5177;&#x4F53;&#x800C;&#x8A00;&#xFF0C;DCGs &#x4E0D;&#x52A8;&#x5C0F;&#x90E8;&#x5206;&#x751F;&#x957F;&#x9525;&#x5185;&#x548C;&#x9644;&#x8FD1;&#x7684;&#x6D77;&#x9A6C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x4E0D;&#x5C0F;&#xFF0C;&#x76F8;&#x5BF9;&#x6539;&#x53D8;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7834;&#x574F;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x57DF;&#x7684;&#x6D77;&#x9A6C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E2D; DCGs &#x8FD0;&#x8F93;&#x662F;&#x5F02;&#x5E38;&#x5F02;&#x7C7B;&#xFF0C;&#x5927;&#x5927;&#x6B63;&#x5728;&#x8FC5;&#x901F;&#x548C;&#x5B9A;&#x5411;&#x4EE5;&#x53CA;&#x7F13;&#x6162;&#x548C;&#x6269;&#x6563;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8FD8;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x80DE;&#x7684;&#x524D;&#x9762;&#x6709;&#x5927;&#x91CF;&#x8FD0;&#x52A8;&#x548C;&#x5F02;&#x6784;&#x7684;&#x8FD0;&#x8F93; &#xFF1B;&#x8FD9;&#x4E00;&#x8FD0;&#x52A8;&#x53EF;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x6D77;&#x9A6C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#xFF0C;&#x9274;&#x4E8E;&#x76F8;&#x5BF9;&#x8F83;&#x4F4E;&#x4E30;&#x5EA6;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143; DCGs DCG &#x8D27;&#x7269;&#x4EA4;&#x4ED8;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;DCGs &#x6D77;&#x9A6C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x8C03;&#x52A8;&#x5F3A;&#x70C8;&#x53CD;&#x9A73;&#xFF0C;&#x76AE;&#x5C42;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x819C;&#x8FD1;&#x7AEF; DCGs &#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x969C;&#x788D;&#x7684;&#x5047;&#x8BF4;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x7F13;&#x91CA;&#x7684; DCG &#x8D27;&#x7269;&#x4ECE;&#x6D77;&#x9A6C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4EA7;&#x751F;&#x975E;&#x5747;&#x8D28;&#x6027; DCG &#x6D41;&#x52A8;&#x6027;&#x3002;

&#x8FD0;&#x8F93;&#x548C;&#x80DE;&#x5305;&#x542B;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7EA4;&#x6EB6;&#x9176;&#x539F;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5242;&#x5728;&#x57F9;&#x517B;&#x6D77;&#x9A6C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x81F4;&#x5BC6;&#x6838;&#x5FC3;&#x9897;&#x7C92;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

Dense-core granules (DCGs) are organelles found in specialized secretory cells, including neuroendocrine cells and neurons. Neuronal DCGs facilitate many critical processes, including the transport and secretion of proteins involved in learning, and yet their transport and exocytosis are poorly understood. We have used wide-field and total internal reflection fluorescence microscopy, in conjunction with transport theory, to visualize the transport and exocytosis of DCGs containing a tissue plasminogen activator-green fluorescent protein hybrid in cell bodies, neurites, and growth cones of developing hippocampal neurons and to quantify the roles that diffusion, directed motion, and immobility play in these processes. Our results demonstrate that shorter-ranged transport of DCGs near sites of exocytosis in hippocampal neurons and neuroendocrine cells differs markedly. Specifically, the immobile fraction of DCGs within growth cones and near the plasma membrane of hippocampal neurons is small and relatively unaltered by actin disruption, unlike in neuroendocrine cells. Moreover, transport of DCGs in these domains of hippocampal neurons is unusually heterogeneous, being significantly rapid and directed as well as slow and diffusive. Our results also demonstrate that exocytosis is preceded by substantial movement and heterogeneous transport; this movement may facilitate delivery of DCG cargo in hippocampal neurons, given the relatively low abundance of neuronal DCGs. In addition, the extensive mobility of DCGs in hippocampal neurons argues strongly against the hypothesis that cortical actin is a major barrier to membrane-proximal DCGs in these cells. Instead, our results suggest that extended release of DCG cargo from hippocampal neurons arises from heterogeneity in DCG mobility.

Mechanisms of transport and exocytosis of dense-core granules containing tissue plasminogen activator in developing hippocampal neurons.

Dense-core granul&#xE9;s (DCG) sont des organites pr&#xE9;sents dans les cellules s&#xE9;cr&#xE9;trices sp&#xE9;cialis&#xE9;es, y compris les cellules neuroendocrines et des neurones. DCG neuronaux de faciliter de nombreux processus critiques, y compris le transport et la s&#xE9;cr&#xE9;tion de prot&#xE9;ines impliqu&#xE9;es dans l&#x26;#39;apprentissage, et pourtant leur transport et l&#x26;#39;exocytose sont mal comprises. Nous avons utilis&#xE9; &#xE0; large champ et le total de microscopie par fluorescence interne de r&#xE9;flexion, en liaison avec la th&#xE9;orie du transport, de visualiser le transport et l&#x26;#39;exocytose de DCG contenant un activateur tissulaire du plasminog&#xE8;ne-vert hybride prot&#xE9;ine fluorescente dans les corps cellulaires, des neurites et des c&#xF4;nes de croissance des pays en d&#xE9;veloppement neurones de l&#x26;#39;hippocampe et de quantifier les r&#xF4;les que jouent la diffusion, le mouvement dirig&#xE9;, et l&#x26;#39;immobilit&#xE9; de ces processus. Nos r&#xE9;sultats d&#xE9;montrent que plus court variait transport de DCG &#xE0; proximit&#xE9; des sites de l&#x26;#39;exocytose dans les neurones hippocampiques et des cellules neuroendocrines diff&#xE8;re nettement. Plus pr&#xE9;cis&#xE9;ment, la fraction immobile de DCG dans les c&#xF4;nes de croissance et &#xE0; proximit&#xE9; de la membrane plasmique des neurones de l&#x26;#39;hippocampe est petite et relativement inchang&#xE9; par la rupture d&#x26;#39;actine, contrairement &#xE0; dans les cellules neuroendocrines. En outre, le transport des DCG dans ces domaines de neurones de l&#x26;#39;hippocampe est particuli&#xE8;rement h&#xE9;t&#xE9;rog&#xE8;ne, &#xE9;tant significativement rapide et dirig&#xE9; ainsi que lente et de diffusion. Nos r&#xE9;sultats montrent &#xE9;galement que l&#x26;#39;exocytose est pr&#xE9;c&#xE9;d&#xE9;e par un mouvement substantiel et de transport h&#xE9;t&#xE9;rog&#xE8;ne; ce mouvement peut faciliter la livraison de marchandises en DCG neurones de l&#x26;#39;hippocampe, &#xE9;tant donn&#xE9; l&#x26;#39;abondance relativement faible de DCG neuronales. En outre, la grande mobilit&#xE9; de la DCG dans les neurones hippocampiques milite fortement contre l&#x26;#39;hypoth&#xE8;se que l&#x26;#39;actine corticale est un obstacle majeur &#xE0; la membrane-proximales DCG dans ces cellules. Au lieu de cela, nos r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que la lib&#xE9;ration prolong&#xE9;e de DCG cargaison de neurones de l&#x26;#39;hippocampe se pose d&#x26;#39;une h&#xE9;t&#xE9;rog&#xE9;n&#xE9;it&#xE9; dans la mobilit&#xE9; DCG.

M&#xE9;canismes de transport et l&#x26;#39;exocytose des granules &#xE0; noyau dense contenant des tissus activateur du plasminog&#xE8;ne dans le d&#xE9;veloppement des neurones d&#x26;#39;hippocampe

Mechanismen der Transport-und Exozytose von Dense-Core-Granulaten, die Gewebe-Plasminogen-Aktivator bei der Entwicklung von Neuronen im Hippocampus.

Granuli dense-core (DCG) sono organelli trovati in cellule secretorie specializzate, tra cui i neuroni e cellule neuroendocrine. DCG neuronale facilitare molti processi critici, compreso il trasporto e la secrezione di proteine coinvolte nell&#39;apprendimento, e ancora il loro trasporto ed esocitosi sono capiti male. Abbiamo usato wide-field e microscopia di fluorescenza di riflessione interna totale, in concomitanza con la teoria di trasporto, di visualizzare il trasporto e l&#39;esocitosi di DCG contenente un ibrido di proteina fluorescente verde-attivatore tissutale del plasminogeno in corpi cellulari, neuriti e coni di crescita, di sviluppo di neuroni ippocampali e quantificare i ruoli che diffusione, diretto, movimento e immobilit&agrave; giocare in questi processi. I nostri risultati dimostrano che i trasporti pi&ugrave; brevi variava di DCG vicino a siti di esocitosi in neuroni ippocampali e cellule neuroendocrine differisce marcatamente. Specificamente, la frazione immobile di DCG all&#39;interno dei coni di crescita e vicino la membrana plasmatica dei neuroni ippocampali &egrave; piccolo e relativamente inalterata da perturbazioni di actina, a differenza di in cellule neuroendocrine. Inoltre, trasporto di DCG in questi domini di neuroni ippocampali &egrave; insolitamente eterogeneo, essendo significativamente rapido e diretto cos&igrave; come lenta e diffusivo. Anche i nostri risultati dimostrano che esocitosi sono preceduta dal movimento sostanza e trasporto eterogeneo; Questo movimento pu&ograve; facilitare la consegna di merci DCG in neuroni ippocampali, data l&#39;abbondanza relativamente bassa di DCG neuronale. Inoltre, la mobilit&agrave; estesa di DCG nei neuroni hippocampal sostiene fortemente contro l&#39;ipotesi che actina corticale &egrave; dei principali ostacoli alla membrana prossimale DCG in queste cellule. Invece, i nostri risultati suggeriscono che il rilascio prolungato di carico DCG da neuroni hippocampal nasce dalla eterogeneit&agrave; in mobilit&agrave; DCG.

Meccanismi di trasporto e di esocitosi dei granuli di nucleo denso contenente l&#39;attivatore tissutale del plasminogeno nello sviluppare i neuroni ippocampali.

&#x9AD8;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x30B3;&#x30A2;&#x9846;&#x7C92;&#xFF08;DCGs&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x7279;&#x6B8A;&#x306A;&#x5206;&#x6CCC;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x30AA;&#x30EB;&#x30AC;&#x30CD;&#x30E9;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x795E;&#x7D4C;DCGs&#x306F;&#x5B66;&#x7FD2;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x3068;&#x5206;&#x6CCC;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x3001;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x3001;&#x307E;&#x3060;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x3068;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306F;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x4F53;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6D77;&#x99AC;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7D44;&#x7E54;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50;&#x3001;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x542B;&#x3080;DCGs&#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x3068;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x8F38;&#x9001;&#x7406;&#x8AD6;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x3001;&#x5E83;&#x3044;&#x8996;&#x91CE;&#x3068;&#x5168;&#x5185;&#x90E8;&#x53CD;&#x5C04;&#x86CD;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x62E1;&#x6563;&#x3001;&#x76E3;&#x7763;&#x30E2;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3001;&#x4E0D;&#x52D5;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x6D77;&#x99AC;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x795E;&#x7D4C;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x306E;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306B;&#x8FD1;&#x3044;DCGs&#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x3092;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x77ED;&#x3044;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6210;&#x9577;&#x5186;&#x9310;&#x5185;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6D77;&#x99AC;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;DCGs&#x306E;&#x4E0D;&#x52D5;&#x306E;&#x5272;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x4E2D;&#x65AD;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x6D77;&#x99AC;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;DCGs&#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x8FC5;&#x901F;&#x304B;&#x3064;&#x6307;&#x793A;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3086;&#x3063;&#x304F;&#x308A;&#x3068;&#x62E1;&#x6563;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x4E0D;&#x5747;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x5B9F;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x52D5;&#x304D;&#x3068;&#x7570;&#x7A2E;&#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x304C;&#x5148;&#x884C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x904B;&#x52D5;&#x306F;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;DCGs&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x4F4E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x4E0E;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x6D77;&#x99AC;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3067;DCG&#x306E;&#x8CA8;&#x7269;&#x306E;&#x914D;&#x9054;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6D77;&#x99AC;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;DCGs&#x306E;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x30E2;&#x30D3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x306F;&#x3001;&#x76AE;&#x8CEA;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x819C;&#x8FD1;&#x4F4D;DCGs&#x3078;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x969C;&#x58C1;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x5F37;&#x304F;&#x4E3B;&#x5F35;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x6D77;&#x99AC;&#x306E;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x8CA8;&#x7269;&#x3092;DCG&#x306E;&#x62E1;&#x5F35;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x30E2;&#x30D3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;DCG&#x306E;&#x4E0D;&#x5747;&#x4E00;&#x304B;&#x3089;&#x751F;&#x3058;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x6D77;&#x99AC;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x7D44;&#x7E54;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x9AD8;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x30B3;&#x30A2;&#x9846;&#x7C92;&#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x3068;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x6A5F;&#x69CB;

&#xACFC; &#xB9BD; &#xC870;&#xBC00; &#xCF54;&#xC5B4; (DCGs) organelles neuroendocrine &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xD2B9;&#xC218; &#xBD84; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2E0;&#xACBD; DCGs &#xC804;&#xC1A1; &#xBC0F; &#xD559;&#xC2B5;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBD84; &#xBE44;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xB9CE;&#xC740; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558; &#xACE0; &#xC544;&#xC9C1; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC804;&#xC1A1; &#xBC0F; exocytosis&#xB294; &#xC81C;&#xB300;&#xB85C; &#xC774;&#xD574;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB113;&#xC740; &#xD544;&#xB4DC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xBC0F; &#xCD1D; &#xB0B4;&#xBD80; &#xBC18;&#xC0AC; &#xD615;&#xAD11; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;, &#xC804;&#xC1A1; &#xC774;&#xB860;, &#xADF8; &#xD655;&#xC0B0; &#xC804;&#xC1A1; &#xBC0F; exocytosis DCGs &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC140; &#xC2DC;&#xCCB4;, neurites, &#xBC0F; &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xBFD4; hippocampal &#xB274;&#xB7F0;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558; &#xACE0; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xACC4;&#xB7C9; &#xC870;&#xC9C1; plasminogen activator &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654;&#xC640; &#xD568;&#xAED8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784;&#xACFC; &#xBD80;&#xB3D9;&#xC131;&#xC774;&#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC785;&#xC99D; hippocampal &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xC140; neuroendocrine exocytosis &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xADFC;&#xCC98; Dcgs&#xC758; &#xC9E7;&#xC740; &#xC6D0;&#xAC70;&#xB9AC; &#xC804;&#xC1A1; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xB2E4;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD2B9;&#xD788;, &#xC131;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xCD94; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; hippocampal &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC6D0;&#xD615;&#xC9C8; &#xB9C9; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC774; Dcgs&#xC758; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC774;&#xAE30; &#xD798; &#xB4DC;&#xB294; &#xBD84;&#xC218;&#xB294; &#xC791;&#xACE0; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD88;&#xBCC0; &#xB9D0;&#xB77C; &#xC911;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB2EC;&#xB9AC; neuroendocrine &#xC140;&#xC5D0;. &#xB610;&#xD55C;, DCGs hippocampal &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xC804;&#xC1A1; &#xBE44;&#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xBE60;&#xB974;&#xACE0; &#xB290;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD37C;&#xC9C0;&#xB294; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xAC10;&#xB3C5; &#xB418; &#xACE0; &#xB2E4;&#xB978; &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xB610;&#xD55C; &#xADF8; exocytosis &#xC2E4;&#xC9C8;&#xC801;&#xC778; &#xC6B4;&#xB3D9;&#xACFC; &#xB2E4;&#xB978; &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xC804;&#xC1A1;; &#xC55E; &#xC785;&#xC99D; &#xC774; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC2E0;&#xACBD; Dcgs&#xC758; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB0AE;&#xC740; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xBD80;&#xC5EC; hippocampal &#xB274;&#xB7F0; DCG &#xD654;&#xBB3C;&#xC758; &#xBC30;&#xB2EC;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, Dcgs&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xC774;&#xB3D9;&#xC131; hippocampal &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0; &#xADF8; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB294;&#xC774; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9; &#xADFC; DCGs &#xC8FC;&#xC694; &#xC7A5;&#xBCBD;&#xC774; &#xAC00;&#xC124;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xC8FC;&#xC7A5;. &#xB300;&#xC2E0;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; hippocampal &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0;&#xC11C; DCG &#xD654;&#xBB3C;&#xC758; &#xD655;&#xC7A5;&#xB41C; &#xCD9C;&#xC2DC; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xC774; &#xC9C8;&#xC5D0;&#xC11C; DCG &#xC774;&#xB3D9;&#xC131;&#xC5D0; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC804;&#xC1A1; &#xBC0F; exocytosis &#xC870;&#xBC00; &#xCF54;&#xC5B4;&#xACFC; &#xB9BD; &#xC870;&#xC9C1; plasminogen activator hippocampal &#xB274;&#xB7F0; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;.

Denso n&#xFA;cleo gr&#xE1;nulos (DCGs) son organelos que se encuentran en las c&#xE9;lulas secretoras especializadas, incluyendo las c&#xE9;lulas neuroendocrinas y las neuronas. DCGs neuronales facilitar muchos procesos cr&#xED;ticos, incluido el transporte y la secreci&#xF3;n de las prote&#xED;nas implicadas en el aprendizaje, y sin embargo, su transporte y exocitosis son poco conocidos. Hemos utilizado de campo amplio y total microscop&#xED;a de fluorescencia interna reflexi&#xF3;n, en conjunci&#xF3;n con la teor&#xED;a de transporte, para visualizar el transporte y exocitosis de DCGs que contienen un activador tisular del plasmin&#xF3;geno-verde h&#xED;brido prote&#xED;na fluorescente en los cuerpos celulares, neuritas y conos de crecimiento de las neuronas del hipocampo en desarrollo y cuantificar los papeles que desempe&#xF1;an la difusi&#xF3;n, el movimiento dirigido, y la inmovilidad en estos procesos. Nuestros resultados demuestran que a corto vari&#xF3; transporte de DCGs cerca de los sitios de la exocitosis en las neuronas del hipocampo y las c&#xE9;lulas neuroendocrinas difiere notablemente. Espec&#xED;ficamente, la fracci&#xF3;n inm&#xF3;vil de DCGs dentro de los conos de crecimiento y cerca de la membrana plasm&#xE1;tica de las neuronas del hipocampo es peque&#xF1;o y relativamente inalterada por la interrupci&#xF3;n de actina, a diferencia de las c&#xE9;lulas neuroendocrinas. Por otra parte, el transporte de DCGs en estos dominios de las neuronas del hipocampo es extraordinariamente heterog&#xE9;nea, siendo significativamente r&#xE1;pida y dirigida, as&#xED; como lento y difuso. Nuestros resultados tambi&#xE9;n demuestran que exocitosis est&#xE1; precedida por un movimiento sustancial y transporte heterog&#xE9;nea; este movimiento puede facilitar la entrega de DCG de carga en las neuronas del hipocampo, dada la abundancia relativamente baja de DCGs neuronales. Adem&#xE1;s, la gran movilidad de DCGs en las neuronas del hipocampo argumenta fuertemente en contra de la hip&#xF3;tesis de que la actina cortical es una barrera importante para proximales a la membrana DCGs en estas c&#xE9;lulas. En cambio, nuestros resultados sugieren que la liberaci&#xF3;n prolongada de DCG de carga de las neuronas del hipocampo se deriva de la heterogeneidad en la movilidad de la DCG.

Los mecanismos de transporte y exocitosis de gr&#xE1;nulos densos n&#xFA;cleos que contienen activador tisular del plasmin&#xF3;geno en el desarrollo de las neuronas del hipocampo

Neurons and related cell types often contain two major classes of neurosecretory vesicles, synaptic vesicles (SVs) and dense-core granules (DCGs), which store and release distinct cargo. SVs store and release classic neurotransmitters, which facilitate propagation of action potentials across the synaptic cleft, whereas DCGs transport, store, and release hormones, proteins, and neuropeptides, which facilitate neuronal survival, synaptic transmission, and learning. Over the past few years, there has been a major surge in our understanding of many of the key molecular mechanisms underlying cargo release from SVs and DCGs. This surge has been driven largely by the use of fluorescence microscopy (especially total internal reflection fluorescence microscopy) to visualize SVs or DCGs in living cells. This review highlights some of the recent insights into cargo release from neurosecretory vesicles provided by fluorescence microscopy, with emphasis on DCGs.

How neurosecretory vesicles release their cargo.

&#x7EC4;&#x7EC7;&#x578B;&#x7EA4;&#x6EB6;&#x9176;&#x539F;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5242; (tPA) &#x4E00;&#x76F4;&#x5728;&#x53C2;&#x4E0E;&#x5404;&#x79CD;&#x91CD;&#x8981;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x4E0E;&#x5B66;&#x4E60;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x548C;&#x589E;&#x6548; N-&#x7532;&#x57FA;-D-&#x5929;&#x51AC;&#x6C28;&#x9178; (NMDA) &#x53D7;&#x4F53;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; tPA &#x53EF;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x548C;&#x63A5;&#x53D7;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x5206;&#x6CCC;&#x7269;&#xFF0C;&#x7A81;&#x89E6; &#xFF1B;&#x4E0D;&#x8FC7;&#xFF0C;&#x6709;&#x8BF4;&#x670D;&#x529B;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#xFF0C;&#x652F;&#x6301;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5047;&#x8BBE;&#x4ECD;&#x7136;&#x96BE;&#x4EE5;&#x6349;&#x6478;&#x3002;&#x8981;&#x6F84;&#x6E05;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x95EE;&#x9898;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7814;&#x7A76;&#x5206;&#x5E03;&#x3001; &#x52A8;&#x6001;&#x548C;&#x53BB;&#x6781;&#x5316;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x4E2D; tPA &#x5206;&#x6CCC;&#x7684;&#x6D77;&#x9A6C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528; tPA &#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x5D4C;&#x5408;&#x4F53;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; tPA &#x9A7B;&#x7559;&#x5728;&#x7A81;&#x89E6;&#x540E;&#x6811;&#x7A81;&#x68D8;&#x4E0E;&#x4EA4;&#x901A;&#x53EF;&#x4EE5;&#x957F;&#x65F6;&#x95F4;&#x7559;&#x5728;&#x523A;&#x7684;&#x81F4;&#x5BC6;&#x6838;&#x5FC3;&#x9897;&#x7C92; (DCGs)&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x53D1;&#x73B0;&#x8BE5;&#x53BB;&#x6781;&#x5316;&#x6548;&#x5E94;&#x9AD8;&#x94BE;&#x8BF1;&#x53D1;&#x6162;&#x3001; &#x90E8;&#x5206;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA; tPA &#x4ECE;&#x91CA;&#x653E; DCGs &#x4E2D;&#x523A;&#x80DE;&#x5916; Ca(+2) &#x6D53;&#x5EA6;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x3002;&#x6B64;&#x901F;&#x5EA6;&#x6162;&#x3001; &#x90E8;&#x5206;&#x7248;&#x672C;&#x6F14;&#x793A;&#x8BE5;&#x80DE;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E00;&#x79CD;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x5982;&#x53D1;&#x751F;&#x4FDD;&#x9669;&#x4E1D;&#x5939;&#x70B9;&#x5F98;&#x5F8A;&#xFF0C;&#x5141;&#x8BB8;&#x90E8;&#x5206;&#x91CA;&#x653E;&#x548C;&#x91CD;&#x7528;&#x7684; DCG &#x8D27;&#x7269;&#x548C;&#x8868;&#x660E;&#x6D77;&#x9A6C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4EE5;&#x907F;&#x514D;&#x6D88;&#x8017; tPA &#x5728;&#x79EF;&#x6781;&#x7A81;&#x89E6;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x4E5F;&#x8868;&#x660E; tPA &#x4FBF;&#x5229; NMDA &#x578B;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x4E92;&#x52A8;&#x7684;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4E0A;&#x53D1;&#x5E03;&#x548C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x6709;&#x5173; tPA &#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x548C;&#x91CA;&#x653E;&#x627F;&#x62C5;&#x5BF9;&#x5176; neuromodulatory &#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x4F8B;&#x5982;&#xFF0C;&#x5728;&#x5B66;&#x4E60;&#x548C;&#x8BB0;&#x5FC6;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x5047;&#x8BBE;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x786E;&#x8BA4;&#x3002;

&#x4ECE;&#x63ED;&#x793A;&#x7684;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x6D77;&#x9A6C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x6811;&#x7A81;&#x68D8;&#x6D3B;&#x6027;&#x4F9D;&#x8D56;&#x91CA;&#x653E;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x578B;&#x7EA4;&#x6EB6;&#x9176;&#x539F;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5242;&#x3002;

Tissue plasminogen activator (tPA) has been implicated in a variety of important cellular functions, including learning-related synaptic plasticity and potentiating N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptor-dependent signaling. These findings suggest that tPA may localize to, and undergo activity-dependent secretion from, synapses; however, conclusive data supporting these hypotheses have remained elusive. To elucidate these issues, we studied the distribution, dynamics, and depolarization-induced secretion of tPA in hippocampal neurons, using fluorescent chimeras of tPA. We found that tPA resides in dense-core granules (DCGs) that traffic to postsynaptic dendritic spines and that can remain in spines for extended periods. We also found that depolarization induced by high potassium levels elicits a slow, partial exocytotic release of tPA from DCGs in spines that is dependent on extracellular Ca(+2) concentrations. This slow, partial release demonstrates that exocytosis occurs via a mechanism, such as fuse-pinch-linger, that allows partial release and reuse of DCG cargo and suggests a mechanism that hippocampal neurons may rely upon to avoid depleting tPA at active synapses. Our results also demonstrate release of tPA at a site that facilitates interaction with NMDA-type glutamate receptors, and they provide direct confirmation of fundamental hypotheses about tPA localization and release that bear on its neuromodulatory functions, for example, in learning and memory.

Activity-dependent release of tissue plasminogen activator from the dendritic spines of hippocampal neurons revealed by live-cell imaging.

Activateur tissulaire du plasminog&#xE8;ne (tPA) a &#xE9;t&#xE9; impliqu&#xE9; dans une vari&#xE9;t&#xE9; de fonctions cellulaires importantes, y compris li&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;apprentissage plasticit&#xE9; synaptique et en potentialisant la N-m&#xE9;thyl-D-aspartate (NMDA) la signalisation d&#xE9;pendante. Ces r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que le tPA peut se localiser au niveau, et faire l&#x26;#39;objet d&#xE9;pendant de l&#x26;#39;activit&#xE9; s&#xE9;cr&#xE9;tions provenant des synapses; toutefois, les donn&#xE9;es probantes qui appuient ces hypoth&#xE8;ses sont rest&#xE9;s hors de port&#xE9;e. Pour &#xE9;lucider ces questions, nous avons &#xE9;tudi&#xE9; la distribution, la dynamique, et induit par la d&#xE9;polarisation de la s&#xE9;cr&#xE9;tion de tPA dans les neurones de l&#x26;#39;hippocampe, en utilisant des chim&#xE8;res fluorescentes de tPA. Nous avons trouv&#xE9; que le tPA r&#xE9;side dans noyau dense granules (DCG) que le trafic vers postsynaptiques &#xE9;pines dendritiques et qui peut rester dans les &#xE9;pines pendant des p&#xE9;riodes prolong&#xE9;es. Nous avons &#xE9;galement constat&#xE9; que la d&#xE9;polarisation induite par des taux de potassium &#xE9;lev&#xE9; provoque une lib&#xE9;ration lente et partielle exocytose du tPA &#xE0; partir DCG en &#xE9;pines qui d&#xE9;pend extracellulaires de Ca (+2) des concentrations. Cette lib&#xE9;ration lente et partielle montre que l&#x26;#39;exocytose se fait par un m&#xE9;canisme, tel qu&#x26;#39;un fusible-pincement s&#x26;#39;attarder, qui permet une lib&#xE9;ration partielle et la r&#xE9;utilisation des DCG du fret et propose un m&#xE9;canisme qui neurones de l&#x26;#39;hippocampe peut compter sur d&#x26;#39;&#xE9;viter l&#x26;#39;&#xE9;puisement du tPA au niveau des synapses actives. Nos r&#xE9;sultats montrent &#xE9;galement la lib&#xE9;ration du tPA &#xE0; un site qui facilite l&#x26;#39;interaction avec les r&#xE9;cepteurs du glutamate de type NMDA, et ils fournissent une confirmation directe des hypoth&#xE8;ses fondamentales sur la localisation et la lib&#xE9;ration du tPA qui portent sur ses fonctions de neuromodulation, par exemple, dans l&#x26;#39;apprentissage et la m&#xE9;moire.

D&#xE9;pendant de l&#x26;#39;activit&#xE9; de sortie activateur tissulaire du plasminog&#xE8;ne dans les &#xE9;pines dendritiques des neurones hippocampiques R&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; par imagerie des cellules vivantes

Tissue Plasminogen Activator (tPA) hat in einer Vielzahl von wichtigen Zellfunktionen, einschlie&szlig;lich synaptische Plastizit&auml;t im Zusammenhang mit lernen und potentiating N-Methyl-D-Aspartat (NMDA)-Rezeptor-abh&auml;ngige Signalisierung verwickelt. Diese Forschungsergebnisse legen nahe, dass tPA lokalisieren zu kann, und leistungsabh&auml;ngige Sekretion von Synapsen zu unterziehen; schl&uuml;ssige Daten unterst&uuml;tzen diese Hypothesen sind jedoch schwer fassbaren geblieben. Um diese Fragen zu kl&auml;ren, untersucht wir die Verteilung, die Dynamik und die Depolarisierung induziert Sekretion von tPA in Neuronen, mit fluoreszierende Chim&auml;ren der tPA. Wir fanden, dass tPA im dichten Kern Granulat (DCGs) befindet, die Datenverkehr postsynaptisches dendritische Dornen und Stacheln, &uuml;ber einen l&auml;ngeren Zeitraum bleiben kann. Wir fanden auch die Depolarisierung induziert durch hohe Kalium Ebenen eine langsame, teilweise exocytotic Freisetzung von tPA aus DCGs in Stacheln hervorruft, die extrazellul&auml;re Ca(+2) Konzentrationen abh&auml;ngig ist. Dieser langsame, teilweise Version veranschaulicht die Exozytose erfolgt &uuml;ber einen Mechanismus, wie z. B. Sicherung-Prise-verweilen, die partielle Freigabe und Wiederverwendung von DCG-Ladung erm&ouml;glicht und schl&auml;gt einen Mechanismus, der Neuronen berufen k&ouml;nnen, um zu vermeiden, abbauende tPA bei aktiven Synapsen. Unsere Ergebnisse zeigen auch die Freisetzung von tPA an einem Standort, der Interaktion mit NMDA-Typ Glutamatrezeptoren erleichtert, und sie bieten direkte Best&auml;tigung der grundlegenden Hypothesen &uuml;ber die tPA-Lokalisierung und Ver&ouml;ffentlichung, die auf seinen Neuromodulatory Funktionen, z. B. in lernen und Ged&auml;chtnis zu tragen.

T&auml;tigkeit-abh&auml;ngige Freisetzung von Tissue Plasminogen Activator aus dendritischen Dornen von Neuronen, die von Leben-Zelle Darstellung offenbart.

Attivatore tissutale del plasminogeno (tPA) &egrave; stato implicato in una variet&agrave; di importanti funzioni cellulari, tra cui apprendimento correlati plasticit&agrave; sinaptica e POTENZIANTI N-metil-D-aspartato (NMDA) segnalazione del recettore-dipendente. Questi risultati suggeriscono che tPA pu&ograve; localizzare a e sottoporsi ad attivit&agrave;-dipendente la secrezione da, sinapsi; Tuttavia, dati conclusivi a sostegno di queste ipotesi sono rimasti sfuggenti. Per chiarire questi aspetti, abbiamo studiato la distribuzione, la dinamica e la secrezione indotta depolarizzazione di tPA nei neuroni dell&#39;ippocampo, utilizzando chimere fluorescenti di tPA. Abbiamo trovato che il tPA risiede nel nucleo denso granuli (DCG) che traffico postsinaptiche spine dendritiche e che pu&ograve; rimanere in spine per lunghi periodi. Abbiamo anche trovato che depolarizzazione indotta da livelli elevati di potassio induce un lento e parziale questo rilascio di tPA da DCG nelle spine che dipende dalla concentrazione extracellulare di Ca(+2). Questo rilascio lento, parziale dimostra che esocitosi avviene tramite un meccanismo, come fusibile-pizzico-linger, che permette di rilascio parziale e riutilizzo di carico DCG e suggerisce un meccanismo che neuroni hippocampal possono valere per evitare che impoveriscono lo strato di tPA a sinapsi attive. Anche i nostri risultati dimostrano rilascio di tPA presso un sito che facilita l&#39;interazione con i recettori glutammato tipo NMDA, e forniscono una conferma diretta di fondamentali ipotesi sulla localizzazione tPA e rilascio che portano sulle sue funzioni neuromodulatory, ad esempio, nell&#39;apprendimento e memoria.

Rilascio attivit&agrave;-dipendente dell&#39;attivatore tissutale del plasminogeno dalle spine dendritiche dei neuroni hippocampal rivelati da live cell imaging.

&#x7D44;&#x7E54;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#xFF08;tPA&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x5B66;&#x7FD2;&#x95A2;&#x9023;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x3068;N-&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;-D-&#x30A2;&#x30B9;&#x30D1;&#x30E9;&#x30AE;&#x30F3;&#x9178;&#xFF08;NMDA&#xFF09;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x5897;&#x5F37;&#x3059;&#x308B;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x69D8;&#x3005;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;tPA&#x306F;&#x306B;&#x5C40;&#x5728;&#x3057;&#x3001;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x306A;&#x5206;&#x6CCC;&#x3092;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x652F;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x3068;&#x3089;&#x3048;&#x3069;&#x3053;&#x308D;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x6B8B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x3092;&#x89E3;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;tPA&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3001;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3001;&#x6D77;&#x99AC;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;tPA&#x306E;&#x8131;&#x5206;&#x6975;&#x8A98;&#x767A;&#x6027;&#x5206;&#x6CCC;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;tPA&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x30B3;&#x30A2;&#x9846;&#x7C92;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#xFF08;DCGs&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x6A39;&#x72B6;&#x7A81;&#x8D77;&#x68D8;&#x3078;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x304C;&#x9577;&#x6642;&#x9593;&#x68D8;&#x306B;&#x6B8B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x9AD8;&#x30AB;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x8131;&#x5206;&#x6975;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x306E;Ca&#xFF08;2&#xFF09;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x68D8;&#x306E;DCGs&#x304B;&#x3089;tPA&#x306E;&#x304C;&#x9045;&#x3044;&#x3001;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306A;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3086;&#x3063;&#x304F;&#x308A;&#x3068;&#x3001;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306A;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x8CA8;&#x7269;&#x3092;DCG&#x306E;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x89E3;&#x653E;&#x3068;&#x518D;&#x5229;&#x7528;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x3068;&#x3057;&#x3001;&#x6D77;&#x99AC;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x304C;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x3067;tPA&#x3092;&#x67AF;&#x6E07;&#x3092;&#x907F;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x983C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30D2;&#x30E5;&#x30FC;&#x30BA;&#x30D4;&#x30F3;&#x30C1;&#x6B8B;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;NMDA&#x578B;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;tPA&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x3001;&#x5B66;&#x7FD2;&#x3068;&#x8A18;&#x61B6;&#x718A;&#x305D;&#x306E;tPA&#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x3068;&#x30EA;&#x200B;&#x200B;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#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&#xC870;&#xC9C1; plasminogen activator (tPA) &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xB2A5; &#xB4F1; &#xD559;&#xC2B5;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4;&#xAC00; &#xC18C;&#xC131; &#xBC0F; N-&#xBA54; &#xD2F8;-D-aspartate (NMDA) &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D; &#xC2E0;&#xD638; potentiating&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xB418;&#xC5B4;&#xC788;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBC1C;&#xACAC;&#xC740; &#xAC74;&#xC758; tPA, &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xB0C5;;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC885;&#xC18D; &#xBD84; &#xBE44;&#xB97C; &#xBC1B; &#xB2E4; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xC9C0; &#xC6D0;&#xD558;&#xB294; &#xACB0;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC560;&#xB9E4; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBB38;&#xC81C;&#xB97C; &#xBA85;&#xB8CC; &#xD558; &#xAC8C;, &#xD558; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xACF5;&#xBD80; &#xBC30;&#xD3EC;, &#xC5ED;&#xD559;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; hippocampal &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; Tpa&#xC758; depolarization &#xC720;&#xB3C4; &#xBD84; &#xBE44; Tpa&#xC758; &#xD615;&#xAD11; &#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. TPA &#xC5F0;&#xC7A5;&#xB41C; &#xAE30;&#xAC04;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD2B8;&#xB798;&#xD53D;&#xC744; postsynaptic &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xCABD;&#xC774; &#xACE0; &#xADF8; &#xCABD;&#xC774;&#xC5D0; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC870;&#xBC00; &#xCF54;&#xC5B4; &#xB9BD; (DCGs)&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xAC83;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xB192;&#xC740; &#xCE7C;&#xB968; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xBC1C; &#xB41C; &#xADF8; depolarization elicits &#xB290;&#xB9B0;, exocytotic&#xC5D0;&#xC11C; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD558;&#xB294; Tpa&#xC758; DCGs &#xCABD;&#xC774;&#xC5D0; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; Ca(+2) &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC774; &#xB290;&#xB9AC;&#xACE0;, &#xC77C;&#xBD80; &#xCD9C;&#xC2DC; &#xADF8; exocytosis&#xC640; &#xAC19;&#xC740; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBD80;&#xBD84; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xBC0F; DCG &#xD654;&#xBB3C;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD4E8;&#xC988; &#xD540;&#xCE58; &#xB9C1;&#xAC70;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; hippocampal &#xB274;&#xB7F0; &#xD65C;&#xC131; &#xB0C5;&#xC5D0; Tpa&#xB97C; &#xC5C6;&#xC560;&#xACE0; &#xD53C;&#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC758;&#xC874; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xB610;&#xD55C; tPA NMDA &#xD615; glutamate &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558;&#xB294; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xCD9C;&#xC2DC;&#xB97C; &#xC785;&#xC99D; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xC608;&#xB97C; &#xB4E4;&#xC5B4;, &#xD559;&#xC2B5; &#xBC0F; &#xBA54;&#xBAA8;&#xB9AC;&#xC758; neuromodulatory &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xACF0; tPA &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xBC0F; &#xC790;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xADFC;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xAC00;&#xC124;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xD655;&#xC778; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1D;&#xD600; hippocampal &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xCABD;&#xC774;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC870;&#xC9C1; plasminogen activator&#xC758; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Activador del plasmin&#xF3;geno tisular (tPA) ha sido implicado en una variedad de funciones celulares importantes, incluyendo el aprendizaje relacionado con la plasticidad sin&#xE1;ptica y potenciador de N-metil-D-aspartato (NMDA)-dependiente de se&#xF1;alizaci&#xF3;n. Estos hallazgos sugieren que el tPA puede localizar a, y se someten a la actividad dependiente de la secreci&#xF3;n de, las sinapsis, sin embargo, datos concluyentes que apoyan estas hip&#xF3;tesis se han mantenido esquiva. Para dilucidar estas cuestiones, se estudi&#xF3; la distribuci&#xF3;n, la din&#xE1;mica y la despolarizaci&#xF3;n inducida por la secreci&#xF3;n de tPA en las neuronas del hipocampo, con quimeras fluorescentes de tPA. Hemos encontrado que el tPA reside en n&#xFA;cleos densos gr&#xE1;nulos (DCGs) que el tr&#xE1;fico a postsin&#xE1;pticos espinas dendr&#xED;ticas y que pueden permanecer en las espinas durante per&#xED;odos prolongados. Tambi&#xE9;n se encontr&#xF3; que la despolarizaci&#xF3;n inducida por altos niveles de potasio provoca una liberaci&#xF3;n lenta, parcial exocitosis de tPA en DCGs de espinas que es dependiente de calcio extracelular (2) las concentraciones. Esta liberaci&#xF3;n lenta, parcial demuestra que la exocitosis se produce a trav&#xE9;s de un mecanismo, como por ejemplo, fusibles pizca quedarse, que permite la liberaci&#xF3;n parcial y la reutilizaci&#xF3;n de DCG de carga y sugiere un mecanismo que las neuronas del hipocampo puede confiar para evitar el agotamiento de tPA en las sinapsis activas. Nuestros resultados tambi&#xE9;n demuestran la liberaci&#xF3;n de tPA en un sitio que facilita la interacci&#xF3;n con los receptores de glutamato NMDA-tipo, y que proporcionan una confirmaci&#xF3;n directa de las hip&#xF3;tesis fundamentales sobre la localizaci&#xF3;n y liberaci&#xF3;n de tPA que le confieren sus funciones de neuromoduladores, por ejemplo, en el aprendizaje y la memoria.

Actividad dependiente de la liberaci&#xF3;n de activador tisular del plasmin&#xF3;geno de las espinas dendr&#xED;ticas de neuronas del hipocampo revelado por im&#xE1;genes en vivo de las c&#xE9;lulas

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Bethe A. Scalettar

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