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Split-Ubiquitin Based Membrane Yeast Two-Hybrid (MYTH) System: A Powerful Tool For Identifying Protein-Protein Interactions

The fundamental biological and clinical importance of integral membrane proteins prompted the development of a yeast-based system for the high-throughput ...

University of Toronto

&#x5E38;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x663E;&#x6027;&#x548C;&#x9690;&#x6027;&#x8FDC;&#x7AEF;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x9178;&#x4E2D;&#x6BD2; (dRTA) &#x53EF;&#x81F4;&#x9634;&#x79BB;&#x5B50;&#x4EA4;&#x6362;&#x5668; 1 (AE1 &#x6216; SLC4A1) &#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x5B83;&#x5C06;&#x7F16;&#x7801;&#x7CFB;&#x7956;&#x6C2F;/&#x78B3;&#x9178;&#x6C22;&#x94F5;&#x9634;&#x79BB;&#x5B50;&#x4EA4;&#x6362;&#x5668;&#x819C;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D; (eAE1) &#x548C;&#x622A;&#x65AD;&#x7684;&#x80BE;&#x5F02;&#x6784;&#x4F53; &#xFF08;kAE1&#xFF09;&#x3002;&#x751F;&#x7269;&#x5408;&#x6210;&#x548C;&#x8D29;&#x8FD0; kAE1 &#x5305;&#x542B;&#x65B0;&#x578B;&#x9690;&#x6027; dRTA &#x7A81;&#x53D8; (kAE1 S773P) &#x7814;&#x7A76;&#x4E86;&#x5728;&#x77ED;&#x6682;&#x8F6C;&#x67D3;&#x66FC;&#x6D66;&#x6C49;&#x514B; 293 &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5355;&#x72EC;&#x6216;&#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; kAE1 &#x6216;&#x53E6;&#x4E00;&#x79CD;&#x9690;&#x6027;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;kAE1 G701D &#x7ED3;&#x5408;&#x8868;&#x793A;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x3002;KAE1 S773P &#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x8868;&#x793A;&#x4E09;&#x500D;&#x6BD4;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7684;&#x8F83;&#x4F4E;&#x6C34;&#x5E73;&#xFF0C;&#x5176;&#x534A;&#x8870;&#x671F;&#x4E3A;&#x4E8C;&#x6298;&#x8DCC;&#x5E45;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x964D;&#x89E3;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x662F;&#x3002;&#x5B83;&#x65E0;&#x6CD5;&#x5728;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x5728;&#x4EBA;&#x80DA;&#x80BE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x5E76;&#x663E;&#x793A;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x4E3B;&#x8981;&#x5206;&#x5E03;&#x5728;&#x4EBA;&#x80DA;&#x80CE;&#x80BE;&#x548C; LLC PK1 &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x4F4E;&#x805A;&#x7CD6;&#x5BF9; kAE1 S773P N-&#x7CD6;&#x57FA;&#x5316;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; (N555) &#x672A;&#x5904;&#x7406;&#x5230;&#x590D;&#x6742;&#x7A97;&#x4F53;&#x4E2D;&#x6307;&#x793A;&#x4ECE;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x53D7;&#x635F;&#x7684;&#x9000;&#x51FA;&#x3002;KAE1 S773P &#x7A81;&#x53D8;&#x8868;&#x660E;&#x51CF;&#x5C11;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x4EB2;&#x548C;&#x6811;&#x8102;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x63D0;&#x9AD8;&#x7684;&#x7075;&#x654F;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x5B83;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x6B63;&#x786E;&#x7684;&#x6298;&#x53E0;&#x3002;&#x5176;&#x4ED6;&#x9690;&#x6027; dRTA &#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;kAE1 G701D&#xFF0C;&#x8FD8;&#x5C55;&#x51FA;&#x6709;&#x7F3A;&#x9677;&#x8D29;&#x8FD0;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x3002;&#x9690;&#x6027; kAE1 &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x50CF;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; AE1 &#x548C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5F02;&#x8D28;-oligomerize &#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; kAE1 &#x6216;&#x5F7C;&#x6B64;&#x3002;&#x5F02;&#x8D28;&#x9F50;&#x805A;&#x7269;&#x4E0E;&#x9690;&#x6027; kAE1 S773P &#x6216; G701D&#xFF0C;&#x4E0E;&#x4E3B;&#x5BFC; kAE1 R589H &#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; kAE1 &#x88AB;&#x4F20;&#x9012;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x3002;

&#x4EBA;&#x7C7B;&#x80BE;&#x9634;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x4EA4;&#x6362;&#x5668; (kAE1) &#x8D29;&#x5356;&#x65B0;&#x578B;&#x5E38;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x9690;&#x6027;&#x8FDC;&#x7AEF;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x9178;&#x4E2D;&#x6BD2;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; &#xFF08;S773P&#xFF09; &#x7684;&#x7F3A;&#x9677;&#x3002;

Autosomal dominant and recessive distal renal tubular acidosis (dRTA) can be caused by mutations in the anion exchanger 1 (AE1 or SLC4A1) gene, which encodes the erythroid chloride/bicarbonate anion exchanger membrane glycoprotein (eAE1) and a truncated kidney isoform (kAE1). The biosynthesis and trafficking of kAE1 containing a novel recessive missense dRTA mutation (kAE1 S773P) was studied in transiently transfected HEK-293 cells, expressing the mutant alone or in combination with wild-type kAE1 or another recessive mutant, kAE1 G701D. The kAE1 S773P mutant was expressed at a three times lower level than wild-type, had a 2-fold decrease in its half-life, and was targeted for degradation by the proteasome. It could not be detected at the plasma membrane in human embryonic kidney cells and showed predominant endoplasmic reticulum immunolocalization in both human embryonic kidney and LLC-PK1 cells. The oligosaccharide on a kAE1 S773P N-glycosylation mutant (N555) was not processed to the complex form indicating impaired exit from the endoplasmic reticulum. The kAE1 S773P mutant showed decreased binding to an inhibitor affinity resin and increased sensitivity to proteases, suggesting that it was not properly folded. The other recessive dRTA mutant, kAE1 G701D, also exhibited defective trafficking to the plasma membrane. The recessive kAE1 mutants formed dimers like wild-type AE1 and could hetero-oligomerize with wild-type kAE1 or with each other. Hetero-oligomers of wild-type kAE1 with recessive kAE1 S773P or G701D, in contrast to the dominant kAE1 R589H mutant, were delivered to the plasma membrane.

Trafficking defects of a novel autosomal recessive distal renal tubular acidosis mutant (S773P) of the human kidney anion exchanger (kAE1).

Autosomique dominant et r&eacute;cessif acidose tubulaire r&eacute;nale distale (dRTA) peut &ecirc;tre caus&eacute;e par des mutations dans l&#39;anion exchanger 1 (AE1 ou SLC4A1) g&egrave;ne qui code la glycoprot&eacute;ine membranaire &eacute;rythro&iuml;des chlorure/bicarbonate anion exchanger (eAE1) et une isoforme tronqu&eacute;e rein (kAE1). La biosynth&egrave;se et la traite des kAE1 contenant que mutation faux-sens r&eacute;cessif roman dRTA (kAE1 S773P) a &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute;e chez transitoirement transfected des cellules HEK-293, exprimant le mutant, seul ou en combinaison avec le kAE1 sauvage ou un autre mutant r&eacute;cessif, kAE1 G701D. Le mutant de S773P de kAE1 a &eacute;t&eacute; exprim&eacute; &agrave; trois fois inf&eacute;rieur &agrave; celui sauvage, a eu une diminution de 2 fois sa demi-vie et a &eacute;t&eacute; cibl&eacute; pour la d&eacute;gradation par le prot&eacute;asome. Il ne pourrait pas &ecirc;tre d&eacute;tect&eacute; &agrave; la membrane plasmique dans les cellules r&eacute;nales embryonnaires humaines et a montr&eacute; pr&eacute;dominante de r&eacute;ticulum endoplasmique immunolocalisation r&eacute;nales embryonnaires humaines et cellules LLC-PK1. L&#39;oligosaccharide sur un kAE1 S773P N-glycosylation mutant (N555) n&#39;a pas &eacute;t&eacute; trait&eacute; &agrave; la forme complexe indiquant une sortie du r&eacute;ticulum endoplasmique. Le mutant de S773P de kAE1 a montr&eacute; une diminution de la liaison &agrave; une r&eacute;sine inhibiteur et une sensibilit&eacute; accrue aux prot&eacute;ases, ce qui sugg&egrave;re qu&#39;il n&#39;&eacute;tait pas correctement pli&eacute;. L&#39;autre mutant r&eacute;cessif dRTA, kAE1 G701D, a &eacute;galement expos&eacute; traite d&eacute;fectueux &agrave; la membrane plasmique. Les mutants r&eacute;cessifs kAE1 forment des dim&egrave;res comme sauvage AE1 et pourraient h&eacute;t&eacute;ro-oligomerize avec kAE1 de type sauvage ou entre eux. H&eacute;t&eacute;ro-oligom&egrave;res de kAE1 sauvage avec r&eacute;cessive kAE1 S773P ou G701D, &agrave; la diff&eacute;rence du mutant R589H kAE1 dominante, ont &eacute;t&eacute; livr&eacute;s &agrave; la membrane plasmique.

Traite des d&eacute;fauts d&#39;un mutant de roman autosomique r&eacute;cessive acidose tubulaire r&eacute;nale distale (S773P) de l&#39;&eacute;changeur d&#39;anions de rein humain (kAE1).

Trafficking M&#xE4;ngel eines neuen autosomal-rezessive distale renale tubul&#xE4;re Acidose Mutante (S773P) der menschlichen Niere Anionenaustauscher (kAE1).

Autosomica dominante e recessiva acidosi renale tubulare distale (dRTA) pu&ograve; essere causato da mutazioni nell&#39;anione scambiatore 1 (AE1 o SLC4A1) gene, che codifica l&#39;eritroidi cloruro/bicarbonato anione scambiatore membrana glicoproteici (eAE1) e un&#39;isoforma di rene troncato (kAE1). La biosintesi e il traffico di kAE1 contenente che una romanzo recessiva dRTA mutazione (kAE1 S773P) &egrave; stata studiata in transitoriamente transfected le cellule HEK-293, esprimendo il mutante da solo o in combinazione con selvaggio-tipo kAE1 o un altro mutante recessivo, kAE1 G701D. KAE1 S773P mutante &egrave; stato espresso in un tre volte livello inferiore rispetto alla wild-type, ha avuto un calo nella sua Half-Life 2 volte e fu presa di mira per degradazione dal proteasoma. Potrebbe non essere rilevato alla membrana del plasma nelle cellule renali embrionali umane e ha mostrato immunolocalization reticolo endoplasmatico predominante nel rene embrionale umano sia le cellule di LLC-PK1. Oligosaccaride su un kAE1 S773P N-glicosilazione mutante (N555) non &egrave; stata elaborata a forma complessa che indica uscita compromessa dal reticolo endoplasmatico. Il mutante S773P kAE1 ha mostrato ridotto in associazione a un inibitore affinit&agrave; resina e maggiore sensibilit&agrave; alla proteasi, suggerendo che essa non era correttamente piegato. Altri mutante recessivo dRTA, kAE1 G701D, esposte anche traffico difettoso alla membrana del plasma. I mutanti kAE1 recessiva formano dimeri come wild-type AE1 e potrebbero etero-oligomerize con selvaggio-tipo kAE1 o con l&#39;altro. Etero-oligomeri del selvaggio-tipo kAE1 con recessiva kAE1 S773P o G701D, in contrasto con il mutante R589H kAE1 dominante, sono stati consegnati alla membrana del plasma.

Traffico difetti di un mutante di romanzo autosomica recessiva acidosi renale tubulare distale (S773P) dello scambiatore di anioni rene umano (kAE1).

&#x5E38;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x512A;&#x6027;&#x3068;&#x52A3;&#x6027;&#x9060;&#x4F4D;&#x814E;&#x5C3F;&#x7D30;&#x7BA1;&#x30A2;&#x30B7;&#x30C9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9; &#xFF08;dRTA&#xFF09; &#x306F;&#x8D64;&#x82BD;&#x7403;&#x7CFB;&#x5869;&#x5316;&#x7269;&#x30FB;&#x70AD;&#x9178;&#x6C34;&#x7D20;&#x5869;&#x30A2;&#x30CB;&#x30AA;&#x30F3;&#x4EA4;&#x63DB;&#x819C;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E; &#xFF08;eAE1&#xFF09; &#x3068;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x814E;&#x81D3;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0; (kAE1) &#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3001;&#x30A2;&#x30CB;&#x30AA;&#x30F3;&#x4EA4;&#x63DB;&#x5668; 1 AE1 (SLC4A1) &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x3001;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x3068;&#x65B0;&#x5947;&#x52A3;&#x6027;&#x30DF;&#x30B9;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9; dRTA &#x5909;&#x7570; (kAE1 S773P) &#x4E00;&#x904E;&#x6027;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F; kAE1 &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7; HEK 293 &#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x5358;&#x72EC;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; kAE1 &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5225;&#x306E;&#x52A3;&#x6027;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x3001;kAE1 G701D &#x3068;&#x3001;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;KAE1 S773P &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;3 &#x6642;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3057;&#x305F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3088;&#x308A;&#x4F4E;&#x3044;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x534A;&#x6E1B;&#x671F;&#x306E; 2 &#x500D;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x52A3;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x306A;&#x3044;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x840C;&#x82BD;&#x671F;&#x306E;&#x814E;&#x81D3;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x3067;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x840C;&#x82BD;&#x671F;&#x306E;&#x814E;&#x81D3;&#x3068; LLC PK1 &#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x512A;&#x52E2;&#x306A;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;KAE1 S773P N-&#x7CD6;&#x9396;&#x5909;&#x7570; (N555) &#x306B;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x7CD6;&#x3092;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x969C;&#x5BB3;&#x306E;&#x7D42;&#x4E86;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x51E6;&#x7406;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;KAE1 S773P &#x5909;&#x7570;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D2;&#x30D3;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x306E;&#x6A39;&#x8102;&#x3068;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x611F;&#x5EA6;&#x306E;&#x5411;&#x4E0A;&#x3078;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x6B63;&#x3057;&#x304F;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307E;&#x308C;&#x305F;&#x793A;&#x5506;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4ED6;&#x306E;&#x52A3;&#x6027; dRTA &#x5909;&#x7570;&#x3001;kAE1 G701D &#x306F;&#x6B20;&#x9665;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306B;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3082;&#x5C55;&#x793A;&#x3002;&#x52A3;&#x6027; kAE1 &#x5909;&#x7570;&#x682A;&#x306F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; AE1 &#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x3001;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x306F;-&#x91CE;&#x751F;&#x578B; kAE1 &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4E92;&#x3044;&#x3092; oligomerize &#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x52A3;&#x6027; kAE1 S773P &#x307E;&#x305F;&#x306F; G701D&#x3001;&#x652F;&#x914D;&#x7684;&#x306A; kAE1 R589H &#x5909;&#x7570;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; kAE1 &#x306E;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED; &#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x819C;&#x306B;&#x914D;&#x4FE1;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x5C0F;&#x8AAC;&#x5E38;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x52A3;&#x6027;&#x9060;&#x4F4D;&#x814E;&#x5C3F;&#x7D30;&#x7BA1;&#x30A2;&#x30B7;&#x30C9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x5909;&#x7570;&#x4F53; (S773P) &#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x306F;&#x30D2;&#x30C8;&#x814E;&#x9670;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x4EA4;&#x63DB;&#x4F53; &#xFF08;kAE1&#xFF09; &#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3002;

&#xC0C1; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC640; &#xC5F4;&#xC131; &#xC6D0;&#xC2EC; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xAD00; &#xC99D; (dRTA) &#xC74C;&#xC774;&#xC628; &#xAD50;&#xD658;&#xAE30; 1 (AE1 &#xB610;&#xB294; SLC4A1) &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0;, erythroid &#xC5FC;&#xD654; &#xBB3C;/&#xC911; &#xD0C4;&#xC0B0; &#xC74C;&#xC774;&#xC628; &#xAD50;&#xD658;&#xAE30; &#xB9C9; &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (eAE1) &#xBC0F; &#xC798;&#xB9B0;&#xB41C; &#xC2E0;&#xC7A5; isoform (kAE1)&#xC744; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD558;&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0DD; &#xD569;&#xC131; &#xBC0F; kAE1 &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC18C;&#xC124; &#xC5F4;&#xC131; missense dRTA &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; (kAE1 S773P) transiently&#xC5D0;&#xC11C; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;&#xB294; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4; &#xD558;&#xAC70;&#xB098; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; kAE1 &#xB610;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xC5F4;&#xC131; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;, kAE1 g701d&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD45C;&#xD604; HEK 293 &#xC138;&#xD3EC; &#xD398;. 3&#xC5D0;&#xC11C; kAE1 S773P &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD45C;&#xD604; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB0AE;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xBC88;&#xC758; &#xD558;&#xD504; &#xB77C;&#xC774;&#xD504; 2-fold &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4; &#xACE0; &#xC131;&#xB2A5; &#xC800;&#xD558;&#xB294; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880;&#xC758; &#xD45C;&#xC801;&#xC774; &#xB410;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xC778;&#xAC04; &#xBC30;&#xC544; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC6D0;&#xD615;&#xC9C8; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xAC80;&#xC0C9; &#xD558; &#xC778;&#xAC04; &#xBC30;&#xC544; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xBC0F; LLC PK1 &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC8FC;&#xB41C; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; immunolocalization&#xB97C; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. KAE1 S773P N glycosylation &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; (N555)&#xC5D0; &#xC62C;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB2F9; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC7A5;&#xC560;&#xC778;&#xB41C; &#xCD9C;&#xAD6C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD3FC;&#xC744; &#xCC98;&#xB9AC; &#xD558;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. KAE1 S773P &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC218; &#xC9C0; &#xBC0F; &#xC99D;&#xAC00; &#xAC10;&#xB3C4; &#xD504;&#xB85C; &#xD14C;&#xC544; &#xC81C;&#xB97C;, &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xD558;&#xC9C0; &#xC81C;&#xB300;&#xB85C; &#xC811;&#xD600; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xB978; &#xC5F4;&#xC131; dRTA &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;, kAE1 G701D, &#xB610;&#xD55C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC5D0; &#xACB0;&#xD568;&#xC774; &#xBC00;&#xB9E4; &#xC804;&#xC2DC;. &#xC5F4;&#xC131; kAE1 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; AE1 &#xAC19;&#xC740; &#xC774;&#xD569;&#xCCB4;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; &#xC218; hetero-oligomerize &#xB610;&#xB294; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; Kae1&#xC640;. Hetero-&#xC62C;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC5F4;&#xC131; kAE1 S773P &#xB610;&#xB294; G701D, &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; kAE1 R589H &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB2EC;&#xB9AC;&#xC640; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD615; Kae1&#xC758; &#xC6D0;&#xD615;&#xC9C8; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xC804;&#xB2EC; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC74C;&#xC774;&#xC628; &#xAD50;&#xD658;&#xAE30; (kAE1)&#xC758; &#xC18C;&#xC124; &#xC0C1; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xC5F4;&#xC131; &#xC6D0;&#xC2EC; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xAD00; &#xC99D; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; (S773P)&#xC758; &#xACB0;&#xD568;&#xC744; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;.

Autos&oacute;mica dominante y recesiva acidosis tubular renal distal (dRTA) puede ser causada por mutaciones en el ani&oacute;n intercambiador 1 (AE1 o SLC4A1) gene, que codifica a la glicoprote&iacute;na de la membrana del intercambiador eritroides bicarbonato/cloruro ani&oacute;n (eAE1) y una isoforma truncada del ri&ntilde;&oacute;n (kAE1). La bios&iacute;ntesis y el tr&aacute;fico de kAE1 que contiene que una mutaci&oacute;n sin sentido recesivo nuevo de dRTA (kAE1 S773P) fue estudiada en transitorio transfected las c&eacute;lulas HEK-293, expresando al mutante solo o en combinaci&oacute;n con kAE1 de tipo salvaje u otro mutante recesivo, kAE1 G701D. El mutante de S773P de kAE1 se expres&oacute; en un tres veces el nivel m&aacute;s bajo que el tipo salvaje, tuvo una disminuci&oacute;n de 2 veces en su vida media y fue objeto de degradaci&oacute;n por el proteasoma. No podr&iacute;a ser hab&iacute;a detectada en la membrana plasm&aacute;tica en las c&eacute;lulas de ri&ntilde;&oacute;n embrionario humano y demostr&oacute; predominante ret&iacute;culo endopl&aacute;smico inmunolocalizaci&oacute;n en ri&ntilde;&oacute;n embrionario humano y LLC-PK1 c&eacute;lulas. El oligosac&aacute;rido en un mutante de S773P N-glicosilaci&oacute;n de kAE1 (N555) no se ha procesado a la forma compleja que indica salida deteriorada desde el ret&iacute;culo endoplasm&aacute;tico. El mutante de S773P de kAE1 demostr&oacute; disminuci&oacute;n atar a un inhibidor de la afinidad resina y mayor sensibilidad a las proteasas, sugiriendo que no fue doblado correctamente. El otro mutante recesivo dRTA, kAE1 G701D, tambi&eacute;n exhibi&oacute; tr&aacute;fico defectuoso a la membrana plasm&aacute;tica. Los mutantes kAE1 recesivo forman d&iacute;meros como salvaje-tipo AE1 y podr&iacute;an hetero-oligomerize con kAE1 de tipo salvaje o entre s&iacute;. Hetero-olig&oacute;meros de tipo kAE1 con recesivo kAE1 S773P o G701D, en contraste con el mutante de R589H kAE1 dominante, fueron entregados a la membrana plasm&aacute;tica.

Tr&aacute;fico defectos de un mutante de la novela un autosoma recesivo acidosis tubular renal distal (S773P) del intercambiador de aniones de ri&ntilde;&oacute;n humano (kAE1).

Kanadaptin (&#x80BE;&#x9634;&#x79BB;&#x5B50;&#x4EA4;&#x6362;&#x5668;&#x9002;&#x914D;&#x5668;&#x86CB;&#x767D;) &#x662F;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x524D;&#x6240;&#x793A;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x9F20;&#x6807; Cl-&#x80DE;&#x6D46;&#x57DF;&#x7684;&#x4EA4;&#x4E92; / HCO3-&#x9634;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x4EA4;&#x6362;&#x5668; 1 (kAE1) &#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x7CFB;&#x7956; AE1 (eAE1) &#x9175;&#x6BCD;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4;&#x6CD5;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;Kanadaptin &#x662F; co-localized &#x4E0E; kAE1 &#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x819C;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x80FD;&#x5728; alpha &#x63D2;&#x5C42;&#x5154;&#x80BE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x3002;&#x6709;&#x4EBA;&#x5EFA;&#x8BAE;&#xFF0C;kanadaptin &#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x9002;&#x914D;&#x5668;&#x86CB;&#x767D;&#x6216;&#x4F34;&#x4FA3;&#x53C2;&#x4E0E;&#x9488;&#x5BF9; kAE1 &#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5047;&#x8BBE;&#xFF0C;&#x5728; co-transfected &#x4EBA;&#x80DA;&#x80CE;&#x80BE; 293 &#x7EC6;&#x80DE;&#x7814;&#x7A76;&#x4E0E;&#x4EBA;&#x7C7B; kAE1 &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B; kanadaptin&#x3002;&#x4EBA;&#x7C7B; kanadaptin &#x5305;&#x542B; 796 &#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#xFF0C;&#x662F;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D; 90 kDa &#x86CB;&#x767D;&#x514D;&#x75AB;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x3002;&#x8109;&#x51B2;&#x5927;&#x901A;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8868;&#x660E;&#x5B83;&#x5DF2; 7 h.&#x4EBA;&#x7C7B; kanadaptin &#x534A;&#x8870;&#x671F; &#xFF08;t1/2&#xFF09; &#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x4E3A;&#x4E3B;&#x5411;&#x6838;&#xFF0C;&#x800C; kAE1 &#x5728;&#x573A;&#xFF0C;&#x819C;&#x5C42;&#x548C;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x3002;&#x4ECE;&#x5176;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x5408;&#x6210; kAE1 &#x7684;&#x8D29;&#x8FD0;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x4E0D;&#x53D7;&#x4EBA;&#x7C7B; kanadaptin &#x7684;&#x5171;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x6CA1;&#x6709;&#x4EBA;&#x7C7B; kanadaptin &#x548C; kAE1 &#x6216; eAE1 &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5728; co-transfected &#x7EC6;&#x80DE;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7531; co &#x6C89;&#x6DC0;&#x6216; histidine6 &#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x63D0;&#x7EAF;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684; kanadaptin &#x4E0E; kAE1 &#x6CA1;&#x6709;&#x4E0D;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5BF9;&#x8D29;&#x8FD0;&#x5230;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C; kAE1 &#x5E76;&#x65E0;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;Kanadaptin &#x4E0D;&#x53EF;&#x80FD;&#x53C2;&#x4E0E;&#x751F;&#x7269;&#x5408;&#x6210;&#x548C; kAE1 &#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x4E3A;&#x6B64;&#xFF0C;&#x5728; kanadaptin &#x548C; kAE1 &#x4E0E;&#x4E92;&#x52A8;&#x4E2D;&#x7684;&#x7F3A;&#x9677;&#x5F88;&#x53EF;&#x80FD;&#x65E0;&#x6CD5;&#x53C2;&#x4E0E;&#x7EE7;&#x627F;&#x7684;&#x80BE;&#x810F;&#x75BE;&#x75C5;&#xFF0C;&#x8FDC;&#x7AEF;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x6027;&#x9178;&#x4E2D;&#x6BD2; (dRTA) &#x7684;&#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

&#x4EBA;&#x7C7B; kanadaptin &#x548C;&#x80BE;&#x9634;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x4EA4;&#x6362;&#x5668; 1 (kAE1) &#x5728;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7EC6;&#x80DE; 293 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0D;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;

Kanadaptin (kidney anion exchanger adaptor protein) is a widely expressed protein, shown previously to interact with the cytosolic domain of mouse Cl-/HCO3- anion exchanger 1 (kAE1) but not erythroid AE1 (eAE1) by a yeast-two hybrid assay. Kanadaptin was co-localized with kAE1 in intracellular membranes but not at the plasma membrane in alpha-intercalated cells of rabbit kidney. It was suggested that kanadaptin is an adaptor protein or chaperone involved in targeting kAE1 to the plasma membrane. To test this hypothesis, the interaction of human kanadaptin with human kAE1 was studied in co-transfected HEK293 cells. Human kanadaptin contains 796 amino acids and was immuno-detected as a 90 kDa protein in transfected cells. Pulse-chase experiments showed that it has a half-life (t1/2) of 7 h. Human kanadaptin was localized predominantly to the nucleus, whereas kAE1 was present intracellularly and at the plasma membrane. Trafficking of kAE1 from its site of synthesis in the endoplasmic reticulum to the plasma membrane was unaffected by co-expression of human kanadaptin. Moreover, we found that no interaction between human kanadaptin and kAE1 or eAE1 could be detected in co-transfected cells either by co-immunoprecipitation or by histidine6-tagged co-purification. Taken together, we found that human kanadaptin did not interact with kAE1 and had no effect on trafficking of kAE1 to the plasma membrane in transfected cells. Kanadaptin may not be involved in the biosynthesis and targeting of kAE1. As such, defects in kanadaptin and its interaction with kAE1 are unlikely to be involved in the pathogenesis of the inherited kidney disease, distal renal tubular acidosis (dRTA).

Human kanadaptin and kidney anion exchanger 1 (kAE1) do not interact in transfected HEK 293 cells.

Kanadaptin (prot&eacute;ine adaptatrice d&#39;&eacute;changeur d&#39;anions du rein) est une prot&eacute;ine largement exprim&eacute;e, d&eacute;crite pr&eacute;c&eacute;demment pour interagir avec le domaine cytosolique de souris Cl-/ &eacute;changeur d&#39;anions HCO3 1 (kAE1) mais pas &eacute;rythro&iuml;des AE1 (eAE1) par un dosage de levure-double hybride. Kanadaptin &eacute;tait co-localis&eacute;es avec kAE1 dans les membranes intracellulaires, mais pas &agrave; la membrane plasmique dans alpha-intercal&eacute; des cellules de rein de lapin. Il a &eacute;t&eacute; sugg&eacute;r&eacute; que kanadaptin est une prot&eacute;ine adaptatrice ou chaperon impliqu&eacute; dans le ciblage des kAE1 &agrave; la membrane plasmique. Pour tester cette hypoth&egrave;se, l&#39;interaction des humain kanadaptin avec kAE1 humaine a &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute;e dans les cellules HEK293 co-transfected. Kanadaptin humain contient des acides amin&eacute;s 796 et &eacute;tait immuno-d&eacute;tect&eacute; comme une prot&eacute;ine de 90 kDa dans les cellules transfect&eacute;es. Exp&eacute;riences de pulse-chase montrent qu&#39;il a une demi-vie (t1/2) de 7 h. kanadaptin humaine a &eacute;t&eacute; localis&eacute;s surtout vers le noyau, tandis que kAE1 &eacute;tait pr&eacute;sent dans les cellules et &agrave; la membrane plasmique. Traite des kAE1 partir de son site de synth&egrave;se dans le r&eacute;ticulum endoplasmique vers la membrane plasmique n&#39;est pas affect&eacute;e par la co-expression de kanadaptin humaine. En outre, nous avons constat&eacute; qu&#39;aucune interaction entre les humain kanadaptin et kAE1 ou eAE1 ne pourrait &ecirc;tre d&eacute;tect&eacute;e dans les cellules co-transfected soit par co-immunopr&eacute;cipitation copurification histidine6-tag. Ensemble, nous avons trouv&eacute; cette kanadaptin humaine n&#39;interagit pas avec kAE1 et n&#39;avait aucun effet sur le trafic de kAE1 &agrave; la membrane plasmique des cellules transfect&eacute;es. Kanadaptin ne peut pas &ecirc;tre impliqu&eacute;s dans la biosynth&egrave;se et ciblage de kAE1. Ainsi, les d&eacute;fauts de kanadaptin et de son interaction avec kAE1 sont peu susceptibles d&#39;&ecirc;tre impliqu&eacute;s dans la pathogen&egrave;se de la maladie r&eacute;nale h&eacute;r&eacute;ditaire, acidose tubulaire r&eacute;nale distale (ATR).

Humain kanadaptin et rein &eacute;changeur anionique 1 (kAE1) n&#39;interagissent pas dans les cellules HEK 293 transfect&eacute;es.

Menschliche Kanadaptin und Nieren Anionenaustauschers 1 (kAE1) nicht in transfizierten HEK 293-Zellen zu interagieren.

Kanadaptin (proteina dell&#39;adattatore Rene anione scambiatore) &egrave; una proteina ampiamente espressa, mostrata in precedenza per interagire con il dominio citosolico del mouse Cl-/ scambiatore di anioni HCO3 1 (kAE1) ma non eritroidi AE1 (eAE1) da un dosaggio di lievito-due ibridi. Kanadaptin era co-localized con kAE1 nelle membrane intracellulari, ma non alla membrana del plasma nelle cellule intercalate alfa del rene del coniglio. &Egrave; stato suggerito che kanadaptin &egrave; una proteina dell&#39;adattatore o chaperone coinvolti nel targeting kAE1 alla membrana del plasma. Per verificare questa ipotesi, l&#39;interazione del umano kanadaptin con kAE1 umana &egrave; stata studiata in cellule HEK293 transfected. Kanadaptin umano contiene 796 aminoacidi e fu immuno-rilevato come un 90 kDa proteina nelle celle transfected. Esperimenti di impulso-chase ha dimostrati che ha un&#39;emivita (t1/2) di h. 7 umana kanadaptin era localizzata prevalentemente nel nucleo, mentre kAE1 era presente intracellularly e alla membrana del plasma. Traffico di kAE1 dal suo sito di sintesi nel reticolo endoplasmatico alla membrana del plasma &egrave; stato influenzato da co-expression di kanadaptin umana. Inoltre, abbiamo trovato che nessuna interazione tra umani kanadaptin e kAE1 o eAE1 potrebbe essere rilevata nelle celle transfected co-immunoprecipitazione o messo histidine6 co-purification. Presi insieme, abbiamo trovato che kanadaptin umano non ha fatto interagire con kAE1 e ha avuto alcun effetto sul traffico di kAE1 a membrana del plasma in celle transfected. Kanadaptin non pu&ograve; essere coinvolta nella biosintesi e targeting di kAE1. Come tale, difetti di kanadaptin e la sua interazione con kAE1 sono improbabile che siano coinvolti nella patogenesi della malattia renale ereditaria, acidosi renale tubulare distale (dRTA).

Umano kanadaptin e rene scambiatore anionico 1 (kAE1) non interagiscono in celle transfected HEK 293.

Kanadaptin &#xFF08;&#x814E;&#x81D3;&#x9670;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x4EA4;&#x63DB;&#x5668;&#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#xFF09; &#x306F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E; Cl - &#x306E;&#x30BE;&#x30EB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3059;&#x308B;&#x524D;&#x306B;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x5E83;&#x304F;&#x767A;&#x73FE;&#x86CB;&#x767D;/HCO3 &#x9670;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x4EA4;&#x63DB;&#x4F53; 1 (kAE1) &#x306A;&#x3044;&#x8D64;&#x82BD;&#x7403; AE1 &#x304C; (eAE1) &#x9175;&#x6BCD; 2 &#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x8A66;&#x91D1;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3002;Kanadaptin kAE1 &#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x819C;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x3063;&#x3066;&#x3082;&#x30A6;&#x30B5;&#x30AE;&#x814E;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; &#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30AB; &#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x3068;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D3;&#x30DC;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x306E; kanadaptin &#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3; kAE1 &#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C;&#x3078;&#x306E;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x95A2;&#x308F;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;co-transfected HEK293 &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593; kAE1 &#x3068;&#x4EBA;&#x9593; kanadaptin &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;&#x4EBA;&#x9593; kanadaptin 796 &#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3057;&#x3001;transfected &#x30BB;&#x30EB;&#x3067; 90 kDa &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x514D;&#x75AB;&#x304C;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;7 H. &#x4EBA;&#x9593; kanadaptin &#x306E;&#x534A;&#x6E1B;&#x671F; (t1/2&#xFF09; &#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x30D1;&#x30EB;&#x30B9;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x3059;&#x308B;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x4E3B;&#x306B;&#x6838;&#x306B; kAE1 &#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3002;KAE1 &#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3067;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306B;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x306F;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; kanadaptin &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; kanadaptin &#x3068; kAE1 &#x307E;&#x305F;&#x306F; eAE1 &#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528; co-transfected &#x7D30;&#x80DE;&#x306E; co &#x514D;&#x75AB;&#x6C88;&#x964D;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30BF;&#x30B0;&#x4ED8;&#x304D;&#x306E; histidine6 co-purification &#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x53D6;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; kanadaptin &#x3068; kAE1 &#x3092;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3001;kAE1 transfected &#x30BB;&#x30EB;&#x8840;&#x3057;&#x3087;&#x3046;&#x819C;&#x3078;&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x306F;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Kanadaptin &#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E; kAE1 &#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3001;kanadaptin &#x304A;&#x3088;&#x3073; kAE1 &#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x306F;&#x9060;&#x4F4D;&#x814E;&#x5C3F;&#x7D30;&#x7BA1;&#x30A2;&#x30B7;&#x30C9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9; &#xFF08;dRTA&#xFF09; &#x7D99;&#x627F;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x814E;&#x81D3;&#x75C5;&#x306E;&#x75C5;&#x56E0;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x4EBA;&#x9593; kanadaptin &#x3068;&#x814E;&#x81D3;&#x9670;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x4EA4;&#x63DB; 1 (kAE1) transfected HEK 293 &#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x3092;&#x3084;&#x308A;&#x53D6;&#x308A;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

Kanadaptin (&#xC2E0;&#xC7A5; &#xC74C;&#xC774;&#xC628; &#xAD50;&#xD658;&#xAE30; &#xC5B4;&#xB311;&#xD130; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;)&#xC740; cytosolic &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; Cl-&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xB110;&#xB9AC; &#xD45C;&#xD604;&#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; / HCO3-&#xC74C;&#xC774;&#xC628; &#xAD50;&#xD658;&#xAE30; 1 (kAE1) erythroid &#xD558;&#xC9C0; AE1 &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; (eAE1) &#xD6A8; &#xBAA8; 2 &#xC7A1;&#xC885; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC758;&#xD574;. Kanadaptin&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xB9C9; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC54C;&#xD30C; &#xC5F4;&#xB9BC; &#xD1A0;&#xB07C; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC6D0;&#xD615;&#xC9C8; &#xB9C9;&#xC5D0; Kae1&#xC640; co-localized. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xADF8; kanadaptin&#xB294; &#xC5B4;&#xB311;&#xD130; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB610;&#xB294; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; kAE1 &#xB300;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; kAE1 &#xC778;&#xAC04;&#xC758; kanadaptin &#xC0C1;&#xD638; co-transfected HEK293 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC778;&#xAC04;&#xC758; kanadaptin 796 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;&#xC774; &#xD3EC;&#xD568; &#xB418;&#xC5B4; &#xBC0F; transfected &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; 90 kDa &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; &#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAC80;&#xCD9C; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD384;&#xC2A4;-&#xCCB4;&#xC774;&#xC2A4; &#xC2E4;&#xD5D8; 7 &#xD5E4; &#xC778;&#xAC04; kanadaptin&#xC758; &#xBC18;&#xAC10;&#xAE30; (t1/2) &#xB2E4;&#xB294; &#xAC83;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;&#xB294; Kae1&#xB294; &#xCE68;&#xACFC; &#xC6D0;&#xD615;&#xC9C8; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74;, &#xD575;&#xC5D0; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB41C;. &#xD569;&#xC131;&#xC758; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; Kae1&#xC758; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; kanadaptin&#xC758; co-expression&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xB294; &#xC77C;&#xC774; &#xC544;&#xB2C8;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; kanadaptin&#xC640; kAE1 &#xB610;&#xB294; eAE1 &#xAC04;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC5C6;&#xC774; &#xACF5;&#xB3D9;-immunoprecipitation &#xB610;&#xB294; histidine6 &#xD0DC;&#xADF8; co-purification co-transfected &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xC9C0; &#xC218; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740;, &#xADF8; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; kanadaptin Kae1&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; &#xACE0; &#xD588;&#xB2E4; transfected &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC6D0;&#xD615;&#xC9C8; &#xB9C9;&#xC5D0; Kae1&#xC758; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Kanadaptin&#xB294; &#xC0DD; &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC; &#xD558; &#xACE0; Kae1&#xC758; &#xB300;&#xC0C1; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC640; &#xAC19;&#xC774; kanadaptin&#xC640; Kae1&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xC18D; &#xB41C; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC9C8;&#xD658;, &#xB9D0; &#xCD08; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xAD00; &#xC99D; (dRTA)&#xC758; &#xBCD1;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xAC83; &#xAC19;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xAC04; kanadaptin &#xBC0F; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC74C;&#xC774;&#xC628; &#xAD50;&#xD658;&#xAE30; 1 (kAE1)&#xC5D0;&#xC11C; transfected HEK 293 &#xC138;&#xD3EC; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Kanadaptin (prote&iacute;na del adaptador del intercambiador del ani&oacute;n de ri&ntilde;&oacute;n) es una prote&iacute;na ampliamente expresada, se mostraron anteriormente para interactuar con el dominio citos&oacute;lico de rat&oacute;n Cl-/ intercambiador de aniones HCO3 1 (kAE1) pero no eritroides AE1 (eAE1) por un an&aacute;lisis de levadura y dos h&iacute;bridos. Kanadaptin era co-localized con kAE1 en las membranas intracelulares pero no en la membrana plasm&aacute;tica en las c&eacute;lulas alfa-intercalados de ri&ntilde;&oacute;n de conejo. Se sugiri&oacute; que kanadaptin es una prote&iacute;na adaptadora o un acompa&ntilde;ante implicado en la orientaci&oacute;n kAE1 a la membrana plasm&aacute;tica. Para probar esta hip&oacute;tesis, la interacci&oacute;n de kanadaptin humana con kAE1 humano fue estudiada en co-transfected c&eacute;lulas HEK293. Kanadaptin humano contiene 796 amino&aacute;cidos y fue detectada como 90 kDa prote&iacute;na en las c&eacute;lulas transfected inmuno. Pulso-persiga los experimentos demostraron que tiene una vida media (t1/2) de 7 h. kanadaptin humano fue localizada predominante al n&uacute;cleo, mientras que kAE1 estaba presente intracelular y en la membrana plasm&aacute;tica. Trata de kAE1 de su sitio de s&iacute;ntesis en el ret&iacute;culo endopl&aacute;smico a la membrana plasm&aacute;tica era inafectada por la coexpresi&oacute;n de kanadaptin humana. Por otra parte, encontramos que no se pod&iacute;a detectar ninguna interacci&oacute;n entre humano kanadaptin y kAE1 o eAE1 en c&eacute;lulas co-transfected co-inmunoprecipitaci&oacute;n o etiquetado como histidine6 co-purification. Tomados en conjunto, encontramos kanadaptin humana no interactuar con kAE1 y no tuvo ning&uacute;n efecto sobre la trata de kAE1 a la membrana plasm&aacute;tica en las c&eacute;lulas transfected. Kanadaptin no sean implicados en la bios&iacute;ntesis y segmentaci&oacute;n de kAE1. Como tal, defectos en la kanadaptin y su interacci&oacute;n con kAE1 son poco probable que est&eacute;n implicados en la patogenia de la enfermedad renal hereditaria, la acidosis tubular renal distal (dRTA).

Humano kanadaptin y ri&ntilde;&oacute;n intercambiador de aniones 1 (kAE1) no interact&uacute;an en c&eacute;lulas HEK 293 transfected.

&#x8FDC;&#x7AEF;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x9178;&#x4E2D;&#x6BD2; (dRTA)&#xFF0C;&#x5728;&#x6709;&#x7F3A;&#x9677;&#x7684;&#x5C3F;&#x9178;&#x5316;&#xFF0C;&#x9020;&#x6210;&#x80BE;&#x810F;&#x75BE;&#x75C5;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5F15;&#x8D77;&#x80BE; Cl-&#x663E;&#x6027;&#x6216;&#x9690;&#x6027;&#x7A81;&#x53D8; / HCO3-&#x9634;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x4EA4;&#x6362;&#x5668; (kAE1)&#xFF0C;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x5728; alpha &#x63D2;&#x5C42;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x57FA;&#x5E95;&#x5916;&#x4FA7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6BD4;&#x8F83;&#x4E86;&#x4E24;&#x79CD;&#x4E3B;&#x8981; &#xFF08;R589H &#x548C; S613F&#xFF09; &#x548C;&#x4E24;&#x4E2A;&#x9690;&#x6027; &#xFF08;S773P &#x548C; G701D&#xFF09; dRTA &#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x5BF9; kAE1 &#x8D29;&#x5356;&#x6885;&#x4E01;&#x8FBE;&#x6BD4;&#x72AC;&#x80BE; (&#x80BE;) &#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x4E0E;&#x88AB;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x4E3A;&#x57FA;&#x5E95;&#x5916;&#x4FA7;&#x819C;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; (WT) kAE1&#xFF0C;&#x5360;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x5730;&#x4F4D;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; (kAE1 R589H &#x548C; S613F) &#x88AB;&#x4FDD;&#x7559;&#x5728;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51; (ER) &#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x663E;&#x793A;&#x53E6;&#x5916;&#x4E00;&#x4E9B;&#x6839;&#x5C16;&#x7684;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x3002;&#x9690;&#x6027;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; kAE1 S773P misfolded &#x800C;&#x975E;&#x6781;&#x5316;&#x7684;&#x4E24;&#x79CD;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;ER &#x5728;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x4FDD;&#x7559;&#x4E86;&#x9488;&#x5BF9;&#x57FA;&#x5E95;&#x5916;&#x4FA7;&#x819C;&#x540E;&#x4E24;&#x6781;&#x5206;&#x5316;&#x3002;&#x5176;&#x4ED6;&#x9690;&#x6027;&#x7A81;&#x53D8;&#x3001; kAE1 G701D &#x548C;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x7684; G701E&#x3001; G701R &#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; G701A &#x6216; G701L &#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x79CD;&#xFF0C;&#x88AB;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x4E3A;&#x975E;&#x6781;&#x5316;&#x548C;&#x4E24;&#x6781;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x91C7;&#x7528;&#x6781;&#x6027;&#x7A81;&#x53D8;&#x6210;&#x8DE8;&#x819C;&#x7684;&#x7247;&#x6BB5;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x9690;&#x6027; G701D &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x4FDD;&#x7559;&#x3002;&#x5F53; coexpressed&#xFF0C;&#x5360;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x5730;&#x4F4D;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x4FDD;&#x7559; kAE1 WT &#x819C;&#x5C42;&#xFF0C;&#x800C;&#x9690;&#x6027;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x5374;&#x6CA1;&#x6709;&#x8FD9;&#x6837;&#x505A;&#x3002;&#x9690;&#x6027; G701D &#x548C; S773P &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x5728;&#x4E24;&#x6781;&#x5206;&#x5316;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x5171;&#x8868;&#x8FBE;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;&#x4F46;&#x53D1;&#x73B0;&#x6CA1;&#x6709; G701D &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x57FA;&#x5E95;&#x5916;&#x4FA7;&#x819C;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x590D;&#x5408;&#x8868;&#x793A;&#x7531;&#x4E8E;&#x57FA;&#x5E95;&#x5916;&#x4FA7;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x7684;&#x963F;&#x5C14;&#x6CD5;&#x63D2;&#x5C42;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD; kAE1 &#x7F3A;&#x4E4F;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x9690;&#x6027;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; &#xFF08;G701D/S773P&#xFF09; &#x53EF;&#x80FD;&#x53D1;&#x8FBE;&#x7684; dRTA &#x7684;&#x6742;&#x5408;&#x6027;&#x60A3;&#x8005;&#x3002;

&#x80BE;&#x9634;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x4EA4;&#x6362;&#x5668; 1 &#x663E;&#x6027;&#x548C;&#x9690;&#x6027;&#x7684;&#x8FDC;&#x7AEF;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x9178;&#x4E2D;&#x6BD2;&#x7A81;&#x53D8;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x4E0D;&#x540C;&#x8D29;&#x8FD0;&#x7F3A;&#x9677;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

Distal renal tubular acidosis (dRTA), a kidney disease resulting in defective urinary acidification, can be caused by dominant or recessive mutations in the kidney Cl-/HCO3- anion exchanger (kAE1), a glycoprotein expressed in the basolateral membrane of alpha-intercalated cells. We compared the effect of two dominant (R589H and S613F) and two recessive (S773P and G701D) dRTA point mutations on kAE1 trafficking in Madin-Darby canine kidney (MDCK) epithelial cells. In contrast to wild-type (WT) kAE1 that was localized to the basolateral membrane, the dominant mutants (kAE1 R589H and S613F) were retained in the endoplasmic reticulum (ER) in MDCK cells, with a few cells showing in addition some apical localization. The recessive mutant kAE1 S773P, while misfolded and largely retained in the ER in non-polarized MDCK cells, was targeted to the basolateral membrane after polarization. The other recessive mutants, kAE1 G701D and designed G701E, G701R but not G701A or G701L mutants, were localized to the Golgi in both non-polarized and polarized cells. The results suggest that introduction of a polar mutation into a transmembrane segment resulted in Golgi retention of the recessive G701D mutant. When coexpressed, the dominant mutants retained kAE1 WT intracellularly, while the recessive mutants did not. Coexpression of recessive G701D and S773P mutants in polarized cells showed that these proteins could interact, yet no G701D mutant was detected at the basolateral membrane. Therefore, compound heterozygous patients expressing both recessive mutants (G701D/S773P) likely developed dRTA due to the lack of a functional kAE1 at the basolateral surface of alpha-intercalated cells.

Dominant and recessive distal renal tubular acidosis mutations of kidney anion exchanger 1 induce distinct trafficking defects in MDCK cells.

Acidose tubulaire r&eacute;nale distale (ATR), une maladie r&eacute;nale, entra&icirc;nant une acidification urinaire d&eacute;fectueuse, peut &ecirc;tre caus&eacute;e par des mutations dans le rein Cl - dominantes ou r&eacute;cessives / &eacute;changeur d&#39;anions HCO3 (kAE1), une glycoprot&eacute;ine exprim&eacute;e dans la membrane basolat&eacute;rale des cellules alpha-intercal&eacute;. Nous avons compar&eacute; l&#39;effet de deux dominantes (R589H et S613F) et deux (S773P et G701D) dRTA point mutations r&eacute;cessives sur kAE1 traite des cellules &eacute;pith&eacute;liales de Madin-Darby canine kidney (MDCK). Contrairement au type sauvage (WT) kAE1 qui a &eacute;t&eacute; localis&eacute;e dans la membrane basolat&eacute;rale, les mutants dominants (kAE1 R589H et S613F) ont &eacute;t&eacute; retenus dans le r&eacute;ticulum endoplasmique (re) dans les cellules MDCK, avec quelques cellules montrant en outre certaines Localisation apicale. Le mutant r&eacute;cessif kAE1 S773P, pli&eacute;e et en grande partie conserv&eacute;es aux urgences dans les cellules MDCK non polaris&eacute;, visait &agrave; la membrane basolat&eacute;rale apr&egrave;s la polarisation. Les autres mutants r&eacute;cessifs, kAE1 G701D et G701E con&ccedil;u, G701R mais pas G701A ou G701L mutants, ont &eacute;t&eacute; localis&eacute;es &agrave; l&#39;appareil de Golgi dans les cellules non polaris&eacute;es et polaris&eacute;es. Les r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que l&#39;introduction d&#39;une mutation polaire dans un segment transmembranaire a abouti &agrave; la r&eacute;tention de Golgi du mutant r&eacute;cessif G701D. Lorsque coexpriment, les mutants dominantes retenu kAE1 WT intracellulaire, alors que les mutants r&eacute;cessifs n&#39;ont pas. Coexpression de mutants r&eacute;cessifs de G701D et S773P en cellules polaris&eacute;es ont montr&eacute; que ces prot&eacute;ines peuvent interagir, et pourtant aucun mutant G701D a &eacute;t&eacute; d&eacute;tect&eacute;e &agrave; la membrane baso-lat&eacute;rale. Par cons&eacute;quent, compos&eacute; de patients h&eacute;t&eacute;rozygotes exprimant les deux dRTA d&eacute;velopp&eacute;s susceptibles de mutants r&eacute;cessifs (G701D/S773P) en raison de l&#39;absence d&#39;une kAE1 fonctionnelle &agrave; la surface basolat&eacute;rale des cellules alpha-intercal&eacute;.

Les mutations d&#39;acidose tubulaire r&eacute;nale distale dominants et r&eacute;cessifs de l&#39;&eacute;changeur d&#39;anions rein 1 induisent des d&eacute;fauts trafic distinctes dans les cellules MDCK.

DRTA (dRTA), eine Nierenkrankheit f&uuml;hrt mangelhafte Harn Versauerung, kann verursacht werden, dominant oder rezessiv vererbte Mutationen in der Niere cl- / HCO3-Anionenaustauscher (kAE1), ein Glykoprotein ausgedr&uuml;ckt in der Basolateraler-Membran von Alpha-Stadtauswahl Zellen. Wir verglichen die Wirkung von zwei dominante (R589H und S613F) und zwei rezessive (S773P und G701D) dRTA Punktmutationen auf kAE1 Menschenhandel Madin Darby canine Kidney (MDCK) Epithelzellen. Im Gegensatz zum Wildtyp (WT) kAE1, die an der Basolateraler Membran lokalisiert wurde, wurden die dominierenden Mutanten (kAE1 R589H und S613F) in das Endoplasmatisches Reticulum (ER) in MDCK-Zellen, mit wenigen Zellen zeigen dar&uuml;ber hinaus einige apikale Lokalisierung beibehalten. Die rezessive Mutante kAE1 S773P, w&auml;hrend misfolded und weitgehend, in dem ER in nicht-polarisierten MDCK Zellen erhalten, zielte auf die Membrane Basolateraler nach Polarisation. Das andere rezessiv Mutanten, kAE1 G701D und gestalteten G701E, G701R aber nicht G701A oder G701L-Mutanten, wurden auf die Golgi in nicht-polarisierten und polarisierten Zellen lokalisiert. Die Ergebnisse legen nahe, dass Einf&uuml;hrung der polare Mutation in ein Transmembran-Segment resultierte in Golgi-Eigentumsvorbehalt die rezessive G701D Mutant. Beim coexpressed, behielt die dominanten Mutanten kAE1 WT intrazellul&auml;r, w&auml;hrend die rezessiven Mutanten nicht. Coexpression rezessive G701D und S773P-Mutanten in polarisierten Zellen zeigte, dass diese Proteine interagieren konnte, aber keine G701D-Mutant zur Basolateraler Membran erkannt wurde. Daher compound heterozygote Patienten beide rezessiven Mutanten (G701D/S773P) wahrscheinlich entwickelten dRTA aufgrund des Mangels an eine funktionelle kAE1 an der Oberfl&auml;che Basolateraler Alpha-Stadtauswahl Zellen zum Ausdruck zu bringen.

Dominant und rezessiv DRTA Mutationen der Niere Anionenaustauscher 1 induzieren unterschiedliche Menschenhandel M&auml;ngel in MDCK-Zellen.

Acidosi renale tubulare distale (dRTA), una malattia renale con conseguente acidificazione urinaria difettoso, pu&ograve; essere causato da mutazioni dominanti o recessive nel rene Cl- / scambiatore di anioni HCO3 (kAE1), una glicoproteina espressa membrana basolaterale delle cellule intercalate alfa. Abbiamo confrontato l&#39;effetto di due dominante (R589H e S613F) e due (S773P e G701D) dRTA punto mutazioni recessive su kAE1 traffico di cellule epiteliali Madin-Darby canine kidney (MDCK). In contrasto con il wild-type (WT) kAE1 che &egrave; stato localizzato nella membrana basolaterale, i mutanti dominanti (kAE1 R589H e S613F) sono stati mantenuti nel reticolo endoplasmatico (ER) nelle cellule MDCK, con poche cellule che presentano inoltre alcuni localizzazione apicale. Il mutante recessivo kAE1 S773P, mentre denatura e in gran parte conservato nel ER in cellule MDCK non polarizzato, &egrave; stato mirato alla membrana basolaterale dopo polarizzazione. Altri mutanti recessivi, kAE1 G701D e G701E progettato, G701R ma mutanti non G701A o G701L, erano localizzati di Golgi in cellule non polarizzato e polarizzate. I risultati suggeriscono quell&#39;introduzione di una mutazione in un segmento del transmembrane polare ha provocato ritenzione Golgi del mutante G701D recessiva. Quando coespressi, i mutanti dominanti mantenuti intracellularly, WT kAE1 mentre i mutanti recessivi non ha fatto. Coexpression recessiva mutanti G701D e S773P in cellule polarizzate hanno mostrato che queste proteine potrebbero interagire, eppure &egrave; stato rilevato nessun mutante G701D alla membrana basolaterale. Pertanto, compound pazienti eterozigoti che esprimono entrambe dRTA sviluppato probabilmente recessiva mutanti (G701D/S773P) a causa della mancanza di un kAE1 funzionale alla superficie basolaterale delle cellule intercalate alfa.

Mutazioni dominanti e recessivi acidosi renale tubulare distale dello scambiatore di anioni Rene 1 inducono difetti traffici distinti in cellule MDCK.

&#x9060;&#x4F4D;&#x306E;&#x814E;&#x5C3F;&#x7D30;&#x7BA1;&#x30A2;&#x30B7;&#x30C9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9; &#xFF08;dRTA&#xFF09; &#x4E0D;&#x826F;&#x5C3F;&#x306E;&#x9178;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x814E;&#x81D3;&#x75BE;&#x60A3;&#x3092;&#x814E;&#x81D3; Cl - &#x512A;&#x6027;&#x304B;&#x52A3;&#x6027;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x308B;/HCO3 &#x9670;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x4EA4;&#x63DB;&#x4F53; &#xFF08;kAE1&#xFF09;&#x3001;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8868;&#x73FE;&#x306B;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; &#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30AB; &#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x57FA;&#x5E95;&#x819C;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F; 2 &#x3064;&#x306E;&#x652F;&#x914D;&#x7684;&#x306A; &#xFF08;R589H &#x3068; S613F&#xFF09; &#x3068; 2 &#x3064;&#x52A3;&#x6027; (S773P &#x304A;&#x3088;&#x3073; G701D) dRTA &#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8; &#x30DE;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;-&#x30C0;&#x30FC;&#x30D3;&#x30FC;&#x72AC;&#x814E;&#x81D3; (MDCK) &#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306B;&#x5909;&#x7570; kAE1 &#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x57FA;&#x5E95;&#x819C;&#x306B;&#x9650;&#x5C40;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; &#xFF08;WT&#xFF09; kAE1 &#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x3001;&#x652F;&#x914D;&#x7684;&#x306A;&#x5909;&#x7570;&#x4F53; (kAE1 R589H &#x3068; S613F) MDCK &#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x6839;&#x5C16;&#x90E8;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53; (ER) &#x3067;&#x4FDD;&#x6301;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x52A3;&#x6027;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x4F53; kAE1 S773P &#x30DF;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x3057;&#x3001;&#x4E3B;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x975E;&#x504F;&#x5149; MDCK &#x7D30;&#x80DE;&#x3001;ER &#x3067;&#x4FDD;&#x6301;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x57FA;&#x5E95;&#x819C;&#x306B;&#x504F;&#x5149;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x4ED6;&#x52A3;&#x6027;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3001;kAE1 G701D &#x3068;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x305F; G701E&#x3001;G701R &#x304C;&#x306A;&#x3044; G701A &#x307E;&#x305F;&#x306F; G701L &#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x975E;&#x504F;&#x5149;&#x3068;&#x504F;&#x5149;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x306B;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x6975;&#x5730;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x5C0E;&#x5165;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x52A3;&#x6027; G701D &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x4FDD;&#x6301;&#x3067;&#x8D77;&#x56E0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#xFF09; &#x3068;&#x306F;&#x3001;&#x652F;&#x914D;&#x7684;&#x306A;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3001;kAE1 WT &#x3092;&#x4FDD;&#x6301;&#x52A3;&#x6027;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x304C;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3001;&#x307E;&#x3060; G701D &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x57FA;&#x5E95;&#x819C;&#x306B;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x52A3;&#x6027;&#x306E; G701D &#x304A;&#x3088;&#x3073; S773P &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x504F;&#x6975;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x52A3;&#x6027;&#x5909;&#x7570;&#x4F53; (G701D/S773P) &#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x5148;&#x9032; dRTA &#x6A5F;&#x80FD; kAE1 &#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; &#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30AB; &#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x57FA;&#x5E95;&#x9762;&#x306E;&#x6B20;&#x5982;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x60A3;&#x8005;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x512A;&#x6027;&#x3068;&#x52A3;&#x6027;&#x306E;&#x9060;&#x4F4D;&#x306E;&#x814E;&#x5C3F;&#x7D30;&#x7BA1;&#x30A2;&#x30B7;&#x30C9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x5909;&#x7570;&#x814E;&#x81D3;&#x9670;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x4EA4;&#x63DB;&#x4F53; 1 &#x306E;&#x660E;&#x77AD;&#x306A;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306E;&#x6B20;&#x9665; MDCK &#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC6D0;&#xC2EC; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xAD00; &#xC99D; (dRTA), &#xACB0;&#xD568;&#xC774; &#xC788;&#xB294; &#xC694; &#xC0B0;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xB530;&#xB978; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC9C8;&#xD658; &#xC2E0;&#xC7A5; Cl-&#xC758; &#xC9C0;&#xBC30; &#xB610;&#xB294; &#xC5F4;&#xC131; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; HCO3-&#xC74C;&#xC774;&#xC628; &#xAD50;&#xD658;&#xAE30; (kAE1)&#xB294; &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD45C;&#xD604; / &#xC54C;&#xD30C; &#xC911;&#xAC04; &#xC140;&#xC758; basolateral &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC9C0;&#xBC30; (R589H &#xBC0F; S613F) &#xBC0F; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC5F4;&#xC131; (S773P &#xBC0F; G701D) dRTA &#xC9C0;&#xC810;&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; kAE1 Madin-&#xB2E4; &#xBE44; &#xC1A1;&#xACF3; &#xB2C8; &#xC2E0;&#xC7A5; (MDCK) &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBE44;&#xAD50;. &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; (WT) kAE1 basolateral &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xB294;, &#xB300;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; (kAE1 R589H &#xBC0F; S613F) &#xB610;&#xD55C; &#xC77C;&#xBD80; &#xAF2D;&#xB300;&#xAE30; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC140; MDCK &#xC140;&#xC5D0; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; (&#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;)&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC9C0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5F4;&#xC131; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; kAE1 S773P misfolded &#xD06C;&#xAC8C; &#xBE44; &#xD3B8;&#xAD11; MDCK &#xC140;&#xC5D0; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xB300;&#xC0C1; basolateral &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC744; &#xD3B8;&#xAD11; &#xD6C4;. &#xB2E4;&#xB978; &#xC5F4;&#xC131; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;, kAE1 G701D &#xBC0F; &#xC124;&#xACC4; &#xB41C; G701E, g701r&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; G701A &#xB610;&#xB294; G701L &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;-&#xD3B8;&#xAD11;&#xACFC; &#xD3B8;&#xAD11; &#xC140;&#xC5D0; Golgi &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC; &#xC81C;&#xC548; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xD3F4;&#xB77C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xC18C;&#xAC1C; &#xC5F4;&#xC131; G701D &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; Golgi &#xBCF4;&#xC874; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC5F4;&#xC131; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; coexpressed, kAE1 WT &#xCE68;, &#xC720;&#xC9C0;. &#xD3B8;&#xAD11;&#xB41C; &#xC140;&#xC5D0; &#xC5F4;&#xC131; G701D &#xBC0F; S773P &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; coexpression&#xC774;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC544;&#xC9C1; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; G701D &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; basolateral &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC54C;&#xD30C; &#xC911;&#xAC04; &#xC140;&#xC758; basolateral &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC131; kAE1 &#xBD80;&#xC871;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5F4;&#xC131; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; (G701D/S773P) &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xB41C; dRTA &#xB450; &#xD45C;&#xD604; heterozygous &#xD658;&#xC790; &#xBCF5;&#xD569;.

&#xC2E0;&#xC7A5; &#xC74C;&#xC774;&#xC628; &#xAD50;&#xD658;&#xAE30; 1&#xC758; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC640; &#xC5F4;&#xC131; &#xC6D0;&#xC2EC; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xAD00; &#xC99D; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC720;&#xBC1C; MDCK &#xC140;&#xC5D0; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xBC00;&#xB9E4; &#xACB0;&#xD568;.

Acidosis tubular renal distal (dRTA), una enfermedad de ri&ntilde;&oacute;n, resultando en acidificaci&oacute;n urinaria defectuosa, puede ser causada por mutaciones dominantes o recesivas en el ri&ntilde;&oacute;n Cl- / intercambiador de HCO3-aniones (kAE1), una glicoprote&iacute;na expresada en la membrana basolateral de las c&eacute;lulas alfa-intercalados. Se compar&oacute; el efecto de dos dominante (R589H y S613F) y dos (S773P y G701D) dRTA punto mutaciones recesivas en kAE1 trata de c&eacute;lulas epiteliales del ri&ntilde;&oacute;n canino (MDCK) Madin-Darby. En contraste con wild-type (WT) kAE1 que fue localizada en la membrana basolateral, los mutantes dominantes (kAE1 R589H y S613F) se mantuvieron en el ret&iacute;culo endopl&aacute;smico (ER) en las c&eacute;lulas MDCK, con algunas c&eacute;lulas que muestran adem&aacute;s algunos localizaci&oacute;n apical. El mutante recesivo kAE1 S773P, mientras que el mal y conservado en gran parte en la sala de urgencias en sin polarizar las c&eacute;lulas MDCK, fue atacado a la membrana basolateral despu&eacute;s de polarizaci&oacute;n. Los otros mutantes recesivos, kAE1 G701D y G701E dise&ntilde;ado, G701R pero mutantes no G701A o G701L, fueron localizados en el Golgi en c&eacute;lulas no polarizados y polarizados. Los resultados sugieren que la introducci&oacute;n de una mutaci&oacute;n polar en un segmento transmembrana dio lugar a la retenci&oacute;n de Golgi del mutante recesivo G701D. Cuando coexpressed, los mutantes dominantes conservan kAE1 WT intracelular, mientras que los mutantes recesivos no. Coexpresi&oacute;n de mutantes recesivos de G701D y S773P en c&eacute;lulas polarizadas demostr&oacute; que estas prote&iacute;nas podr&iacute;an interactuar, pero no G701D mutante fue detectado en la membrana basolateral. Por lo tanto, compuesto de pacientes heterozig&oacute;ticos, expresando ambos dRTA desarrollados probablemente mutantes recesivos (G701D/S773P) debido a la falta de un kAE1 funcional en la superficie basolateral de las c&eacute;lulas alfa-intercalados.

Mutaciones dominantes y recesivas acidosis tubular renal distal del intercambiador de aniones de ri&ntilde;&oacute;n 1 producir defectos de tr&aacute;fico distintos en las c&eacute;lulas MDCK.

&#x80BE;&#x9634;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x4EA4;&#x6362;&#x5668; 1 (kAE1) &#x4ECB;&#x5BFC;&#x80BE; alpha &#x63D2;&#x5C42;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x57FA;&#x5E95;&#x5916;&#x4FA7;&#x819C;&#x6C2F;/&#x78B3;&#x9178;&#x6C22;&#x6839;&#x4EA4;&#x6D41;&#x4ECE;&#x800C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x78B3;&#x9178;&#x6C22;&#x91CD;&#x5438;&#x6536;&#x5230;&#x8840;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x3002;&#x4EBA;&#x7C7B; kAE1 N &#x7EC8;&#x7AEF;&#x7F3A;&#x4E4F; 65 &#x6B8B;&#x7559;&#x91CF;&#x7CFB;&#x7956;&#x5F62;&#x5F0F; (AE1&#xFF0C;&#x5E26; 3&#xFF09;&#xFF0C;&#x6240;&#x5FC5;&#x987B;&#x7684;&#x9AA8;&#x67B6;&#x548C;&#x80DE;&#x6D46;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4;&#x7B5B;&#x9009;&#x786E;&#x5B9A;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x8FDE;&#x63A5;&#x6FC0;&#x9176; (ILK)&#x3001; &#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;/&#x82CF;&#x6C28;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176;&#x548C;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x4F5C;&#x4E3A; kAE1 &#x7684; N-&#x672B;&#x7AEF;&#x57DF;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x5408;&#x4F5C;&#x4F19;&#x4F34;&#x3002;KAE1 &#x4E0E;&#x540C;&#x4F19;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#x5171;&#x8868;&#x8FBE;&#x66FC;&#x6D66;&#x6C49;&#x514B; 293 &#x7EC6;&#x80DE;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x4E2D;&#x8BC1;&#x5B9E;&#xFF0C;&#x4ECB;&#x5BFC; kAE1 N &#x7EC8;&#x7AEF;&#x5730;&#x533A;&#x4EE5;&#x524D;&#x4E0D;&#x660E;&#x808C;&#x9499;&#x86CB;&#x767D;&#x540C;&#x6E90;&#x6027;&#x57DF;&#x3002;KAE1 &#x808C;&#x9499;&#x86CB;&#x767D;&#x540C;&#x6E90;&#x6027;&#x57DF;&#x7ED1;&#x5B9A; C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x50AC;&#x5316;&#x57DF;&#x4E4B;&#x6D41;&#xFF0C;&#x52A0;&#x5F3A;&#x4E0E;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x7684; kAE1 &#x5173;&#x8054;&#x3002;ILK &#x589E;&#x52A0; kAE1 &#x8868;&#x8FBE;&#x5404;&#x7EA7;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x672F;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x7D20;&#x548C;&#x9634;&#x79BB;&#x5B50;&#x8FD0;&#x8F93;&#x6D3B;&#x52A8;&#x68C0;&#x5B9A;&#x6CD5;&#x6240;&#x793A;&#x3002;&#x8109;&#x51B2;&#x5927;&#x901A;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x63ED;&#x793A; ILK &#x5C06;&#x4E0E;&#x751F;&#x7269;&#x5408;&#x6210;&#xFF0C;&#x5728;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x4E2D;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x5728;&#x65E9;&#x671F; kAE1 &#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;ILK &#x6B63;&#x4E0E; kAE1 &#x5728;&#x57FA;&#x5E95;&#x5916;&#x4FA7;&#x819C;&#x7684;&#x6781;&#x5316;&#x6885;&#x4E01;&#x8FBE;&#x6BD4;&#x72AC;&#x80BE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C; alpha &#x63D2;&#x5C42;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x80BE;&#x810F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57FA;&#x4FA7;&#x819C;&#x4E00;&#x8D77;&#x4ECE;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x7684; ILK &#x548C; kAE1 &#x901A;&#x8BAF;&#x3002;ILK &#x53EF;&#x80FD;&#x63D0;&#x4F9B; kAE1 &#x4E0E;&#x5E95;&#x5C42;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x9AA8;&#x67B6;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x7A33;&#x5B9A;&#x5728;&#x57FA;&#x5E95;&#x5916;&#x4FA7;&#x819C;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x66F4;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x8FBE; kAE1 &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x8054;&#x7CFB;&#x3002;

&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x8FDE;&#x63A5;&#x6FC0;&#x9176;&#x4E0E;&#x80BE;&#x810F;&#x6C2F;/&#x78B3;&#x9178;&#x6C22;&#x76D0;&#x6362;&#x70ED;&#x5668;&#xFF0C;kAE1 &#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Kidney anion exchanger 1 (kAE1) mediates chloride/bicarbonate exchange at the basolateral membrane of kidney alpha-intercalated cells, thereby facilitating bicarbonate reabsorption into the blood. Human kAE1 lacks the N-terminal 65 residues of the erythroid form (AE1, band 3), which are essential for binding of cytoskeletal and cytosolic proteins. Yeast two-hybrid screening identified integrin-linked kinase (ILK), a serine/threonine kinase, and an actin-binding protein as an interacting partner with the N-terminal domain of kAE1. Interaction between kAE1 and ILK was confirmed in co-expression experiments in HEK 293 cells and is mediated by a previously unidentified calponin homology domain in the kAE1 N-terminal region. The calponin homology domain of kAE1 binds the C-terminal catalytic domain of ILK to enhance association of kAE1 with the actin cytoskeleton. Overexpression of ILK increased kAE1 levels at the cell surface as shown by flow cytometry, cell surface biotinylation, and anion transport activity assays. Pulse-chase experiments revealed that ILK associates with kAE1 early in biosynthesis, likely in the endoplasmic reticulum. ILK co-localized with kAE1 at the basolateral membrane of polarized Madin-Darby canine kidney cells and in alpha-intercalated cells of human kidneys. Taken together these results suggest that ILK and kAE1 traffic together from the endoplasmic reticulum to the basolateral membrane. ILK may provide a linkage between kAE1 and the underlying actin cytoskeleton to stabilize kAE1 at the basolateral membrane, resulting in higher levels of cell surface expression.

Interaction of integrin-linked kinase with the kidney chloride/bicarbonate exchanger, kAE1.

&Eacute;changeur d&#39;anions rein 1 (kAE1) n&eacute;gocie l&#39;&eacute;change chlorure/bicarbonate &agrave; la membrane basolat&eacute;rale des cellules de rein d&#39;intercalaire alpha, facilitant ainsi la r&eacute;absorption du bicarbonate dans le sang. KAE1 humaine manque le N-terminal 65 r&eacute;sidus du formulaire &eacute;rythro&iuml;des (AE1, bande 3), qui sont essentiels pour la liaison des prot&eacute;ines du cytosquelette et cytosoliques. Projection de deux-hybride de levure identifi&eacute; integrin-linked kinase (ILK), une s&eacute;rine/thr&eacute;onine kinase et une prot&eacute;ine de liaison de l&#39;actine en tant que partenaire qui interagissent avec le domaine N-terminal de kAE1. Interaction entre kAE1 et ILK a &eacute;t&eacute; confirm&eacute;e dans des exp&eacute;riences de co-expression dans les cellules HEK 293 et est v&eacute;hicul&eacute;e par un domaine d&#39;homologie calponine inconnus dans la r&eacute;gion N-terminale de kAE1. Le domaine d&#39;homologie calponine de kAE1 lie le domaine catalytique de C-terminal d&#39;ACABIT pour am&eacute;liorer la liaison des kAE1 avec le cytosquelette d&#39;actine. La surexpression de kAE1 ILK a augment&eacute; les niveaux &agrave; la surface cellulaire, tel qu&#39;illustr&eacute; par cytom&eacute;trie en flux, cell surface biotinylation et tests d&#39;activit&eacute; transport anionique. Pulse-chase exp&eacute;riences ont r&eacute;v&eacute;l&eacute; que ILK associe &agrave; kAE1 au d&eacute;but de la biosynth&egrave;se, probablement dans le r&eacute;ticulum endoplasmique. ILK co-localisaient avec kAE1 &agrave; la membrane basolat&eacute;rale des cellules de rein de chien Madin-Darby polaris&eacute;es et dans des cellules de reins humains intercalaire alpha. Pris ensemble ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que le trafic ILK et kAE1 ensemble du r&eacute;ticulum endoplasmique vers la membrane basolat&eacute;rale. ILK peut fournir un lien entre kAE1 et le cytosquelette d&#39;actine sous-jacent pour stabiliser les kAE1 &agrave; la membrane basolat&eacute;rale, aboutissant &agrave; des niveaux plus &eacute;lev&eacute;s d&#39;expression &agrave; la surface cellulaire.

Interaction de la kinase integrin-li&eacute; avec l&#39;&eacute;changeur de chlorure et de bicarbonate de rein, kAE1.

Niere Anionenaustauscher 1 (kAE1) vermittelt die Chlorid-Bikarbonat-Austausch auf der Basolateraler-Membran von Alpha-Stadtauswahl Nierenzellen und erleichtert so Bikarbonat Reabsorption ins Blut. Menschliche kAE1 fehlt der N-terminalen 65 R&uuml;ckst&auml;nde des Vordrucks Erythroid (AE1, Band 3), die wesentlich f&uuml;r die Bindung von Zytoskelett und Zytosolische Proteine sind. Hefe-zwei-Hybrid-Screening identifiziert Integrin-linked Kinase (ILK), eine Serin/Threonin-Kinase und ein Aktin-verbindliches Protein als interagierenden Partner mit der N-terminalen Dom&auml;ne des kAE1. Interaktion zwischen kAE1 und ILK Koexpression Experimente in HEK-293-Zellen best&auml;tigt wurde und wird von einer identifizierten Calponin Homologie-Dom&auml;ne in der kAE1 N-terminalen Region vermittelt. Die Calponin Homologie-Dom&auml;ne des kAE1 bindet die C-terminalen katalytische Dom&auml;ne des ILK zur Verbesserung der Assoziation der kAE1 mit dem Aktin-Zytoskelett. Eine &Uuml;berexpression von ILK erh&ouml;ht kAE1 Ebenen an der Zelloberfl&auml;che wie Durchflusszytometrie, Zelle Oberfl&auml;che Biotinylierung und Anion Transport Aktivit&auml;t Proben. Puls-Chase-Experimente zeigten, dass ILK kAE1 fr&uuml;h in Biosynthese, wahrscheinlich in dem Endoplasmatischen Retikulum zuordnet. ILK co-localized mit kAE1 bei Basolateraler Membran polarisierten Madin Darby canine Kidney Zellen und in Alpha-Stadtauswahl Zellen des menschlichen Nieren. Zusammengenommen deuten diese Ergebnisse, dass ILK und kAE1 der Verkehr zusammen aus dem Endoplasmatischen Retikulum an der Basolateraler-Membran. ILK kann vorsehen, dass eine Verbindung zwischen kAE1 und der zugrunde liegenden Aktin-Zytoskeletts, kAE1 bei der Basolateraler-Membran, was zu h&ouml;heren Ebenen der Zelle Oberfl&auml;che Ausdruck zu stabilisieren.

Zusammenspiel von Integrin-linked Kinase mit der Niere-Chlorid-Bikarbonat-Exchanger, kAE1.

Scambiatore di anioni Rene 1 (kAE1) media exchange cloruro/bicarbonato alla membrana basolaterale delle cellule renali intercalate alfa, facilitando il riassorbimento di bicarbonato nel sangue. KAE1 umana manca il N-terminale 65 residui della forma eritroidi (AE1, banda 3), che sono essenziali per l&#39;associazione di proteine citoscheletriche e citosoliche. Screening di due-ibrido del lievito identificato una serina/treonina chinasi chinasi integrina-collegato (ILK) e una proteina actina come un partner interagenti con il dominio N-terminale del kAE1. Interazione tra kAE1 e ILK &egrave; stata confermata negli esperimenti di co-expression in cellule HEK 293 ed &egrave; mediata da un dominio di omologia di calponin precedentemente non identificato nella regione N-terminale kAE1. Il dominio di omologia di calponin di kAE1 lega il dominio C-terminale catalitico di RISMA per migliorare l&#39;associazione di kAE1 con il citoscheletro di actina. Sovraespressione di kAE1 ILK aumentati livelli alla superficie delle cellule, come dimostrato da citometria a flusso, biotinylation superficie cellulare e dosaggi di attivit&agrave; trasporto anionico. Esperimenti di impulso-chase ha rivelato che ILK associa con kAE1 all&#39;inizio della biosintesi, probabilmente nel reticolo endoplasmatico. ILK co-ha localizzato con kAE1 alla membrana basolaterale delle cellule di rene canino Madin-Darby polarizzate e nelle cellule intercalate alfa di reni umani. Presi insieme questi risultati suggeriscono che traffico ILK e kAE1 insieme dal reticolo endoplasmatico alla membrana basolaterale. ILK pu&ograve; fornire un collegamento tra kAE1 e il citoscheletro di actina sottostante per stabilizzare kAE1 presso la membrana basolaterale, con conseguente livelli pi&ugrave; elevati di espressione di superficie delle cellule.

Interazione delle chinasi integrina-collegato con lo scambiatore cloruro/bicarbonato renale, kAE1.

&#x814E;&#x9670;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x4EA4;&#x63DB;&#x4F53; 1 (kAE1) &#x306F;&#x3001;&#x91CD;&#x70AD;&#x9178;&#x5869;&#x306E;&#x518D;&#x5438;&#x53CE;&#x306B;&#x8840;&#x6DB2;&#x3092;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x4FC3;&#x9032;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; &#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30AB; &#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x814E;&#x81D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x57FA;&#x5E95;&#x819C;&#x3067;&#x5869;&#x5316;&#x7269;&#x30FB;&#x70AD;&#x9178;&#x6C34;&#x7D20;&#x4EA4;&#x63DB;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306A;&#x4EBA;&#x9593; kAE1 &#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B; N &#x672B;&#x7AEF; 65 &#x306E;&#x6B8B;&#x7559;&#x8D64;&#x82BD;&#x7403;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0; (AE1&#x3001;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C9; 3&#xFF09;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;&#x30C4;&#x30FC;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x6CD5;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#xFF08;&#x540C;&#x985E;&#xFF09;&#x3001;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;/&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; kAE1 &#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;KAE1 &#x3068;&#x540C;&#x985E;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30E9;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; HEK 293 &#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3067;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x3001;kAE1 &#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x9818;&#x57DF;&#x3067;&#x4EE5;&#x524D;&#x306F;&#x672A;&#x78BA;&#x8A8D;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DD;&#x30CB;&#x30F3;&#x76F8;&#x540C;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DD;&#x30CB;&#x30F3;&#x76F8;&#x540C;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; kAE1 &#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x3068; kAE1 &#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x540C;&#x985E;&#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x540C;&#x985E;&#x306E;&#x5897;&#x52A0; kAE1 &#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x30D3;&#x30AA;&#x30C1;&#x30F3;&#x5316;&#x3068;&#x9670;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x8F38;&#x9001;&#x6D3B;&#x6027;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4; &#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D1;&#x30EB;&#x30B9;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x5B9F;&#x9A13;&#x540C;&#x985E; kAE1 &#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x3001;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x57FA;&#x5E95;&#x819C;&#x504F;&#x5149;&#x30DE;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;-&#x30C0;&#x30FC;&#x30D3;&#x30FC;&#x72AC;&#x814E;&#x81D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; &#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30AB; &#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3072;&#x3068;&#x814E;&#x81D3;&#x3067; kAE1 &#x3068; co-localized &#x306E;&#x540C;&#x985E;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x53D6;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x306E;&#x540C;&#x985E;&#x3068; kAE1 &#x30C8;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x304C;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x57FA;&#x5E95;&#x819C;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x540C;&#x985E;&#x306F;&#x3001;kAE1 &#x3068; kAE1 &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x306E;&#x57FA;&#x5E95;&#x819C;&#x3067;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x57FA;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x9593;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x814E;&#x81D3;&#x5869;&#x5316;&#x7269;&#x30FB;&#x70AD;&#x9178;&#x6C34;&#x7D20;&#x4EA4;&#x63DB;&#x3001;kAE1 &#x3068;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#xC2E0;&#xC7A5; &#xC74C;&#xC774;&#xC628; &#xAD50;&#xD658;&#xAE30; 1 (kAE1) &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD608;&#xC561;&#xC73C;&#xB85C; &#xC911; &#xD0C4;&#xC0B0;&#xC5FC; reabsorption &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC54C;&#xD30C; &#xC911;&#xAC04; &#xC140;&#xC758; basolateral &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5FC;&#xD654; &#xBB3C;/&#xC911; &#xD0C4;&#xC0B0;&#xC5FC; &#xAD50;&#xD658; &#xC911;&#xC7AC;. &#xC778;&#xAC04; kAE1 &#xBD80;&#xC871; N &#xB9E8;&#xB05D; 65 &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; erythroid &#xD615;&#xD0DC; (AE1, &#xBC34;&#xB4DC; 3)&#xC758; cytoskeletal&#xC640; cytosolic &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778;. &#xD6A8; &#xBAA8; 2 &#xC7A1;&#xC885; &#xC2EC;&#xC0AC; integrin &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xD0A4; (ILK), &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0;/&#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC; &#xD0A4;&#xC640; &#xB9D0;&#xB77C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Kae1&#xC758; N &#xB9E8;&#xB05D; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. KAE1 ILK&#xB294; &#xC0C1;&#xD638;&#xC791;&#xC6A9; co-expression HEK 293 &#xC138;&#xD3EC; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD655;&#xC778; &#xB410;&#xB2E4; &#xACE0; kAE1 N &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC815;&#xCCB4; &#xBD88;&#xBA85;&#xB41C; calponin homology &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Kae1&#xC758; calponin homology &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xB9D0;&#xB77C; cytoskeleton kAE1 &#xC5F0;&#xAD00; &#xD5A5;&#xC0C1; ILK&#xC758; C-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xCD09;&#xB9E4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. ILK &#xC99D;&#xAC00; kAE1 overexpression cytometry, &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; biotinylation &#xBC0F; &#xC74C;&#xC774;&#xC628; &#xC804;&#xC1A1; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xB300;&#xB85C; &#xC140; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB808;&#xBCA8;. &#xD384;&#xC2A4; &#xCD94;&#xC801; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xACF5;&#xAC1C; ILK &#xC0DD; &#xD569;&#xC131;, endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD08;&#xAE30;&#xC5D0; Kae1&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0;. ILK &#xD3B8;&#xAD11;&#xB41C; Madin-&#xB2E4; &#xBE44; &#xAC1C; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC2E0;&#xC7A5;&#xC758; &#xC54C;&#xD30C; &#xC911;&#xAC04; &#xC140;&#xC5D0; basolateral &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC5D0; Kae1&#xC640; co-localized. &#xD568;&#xAED8; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xADF8; ILK&#xC640; kAE1 basolateral &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD568;&#xAED8; &#xD2B8;&#xB798;&#xD53D;&#xC744; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. ILK&#xB294; kAE1 &#xBC0F; kAE1 &#xC140; &#xD45C;&#xBA74; &#xC2DD;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xB530;&#xB978; basolateral &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC5D0; &#xC548;&#xC815;&#xD654; &#xAE30;&#xBCF8; &#xB9D0;&#xB77C; cytoskeleton &#xAC04;&#xC758; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

KAE1 &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC5FC;&#xD654; &#xBB3C;/&#xC911; &#xD0C4;&#xC0B0;&#xC5FC; &#xAD50;&#xD658;&#xAE30;&#xC640; integrin &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xD0A4;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;.

Intercambiador de aniones de ri&ntilde;&oacute;n 1 (kAE1) media cambio cloruro/bicarbonato en la membrana basolateral de las c&eacute;lulas del ri&ntilde;&oacute;n alfa-intercalados, facilitando la reabsorci&oacute;n de bicarbonato en la sangre. KAE1 humano carece el N-terminal 65 residuos de la forma de eritroides (AE1, banda 3), que son esenciales para la Uni&oacute;n de prote&iacute;nas citoesquel&eacute;ticas y citos&oacute;licas. Proyecci&oacute;n de dos h&iacute;bridos de levadura hab&iacute;a identificado integrina-ligado quinasa (estirpe), una serina/treonina quinasa y una prote&iacute;na de uni&oacute;n a actina como socio interactuando con el dominio N-terminal de kAE1. Interacci&oacute;n entre kAE1 y CALA&Ntilde;A fue confirmada en experimentos de coexpresi&oacute;n en c&eacute;lulas HEK 293 y est&aacute; mediada por un dominio de homolog&iacute;a calponin previamente no identificado en la regi&oacute;n N-terminal de kAE1. El dominio de homolog&iacute;a de calponin de kAE1 une el dominio catal&iacute;tico del c-terminal de &iacute;ndole para mejorar la Asociaci&oacute;n de kAE1 con el citoesqueleto de actina. Sobreexpresi&oacute;n de kAE1 ILK aumentada los niveles en la superficie de la c&eacute;lula como se muestra por citometr&iacute;a de flujo, biotinilaci&oacute;n superficial de la c&eacute;lula y ensayos de actividad de transporte de ani&oacute;n. Pulso-persiga los experimentos revelaron que CALA&Ntilde;A se asocia con kAE1 principios de bios&iacute;ntesis, probablemente en el ret&iacute;culo endoplasm&aacute;tico. ILK co-localized con kAE1 en la membrana basolateral de c&eacute;lulas de ri&ntilde;&oacute;n canino Madin-Darby polarizadas y en c&eacute;lulas alfa-intercalados de ri&ntilde;ones humanos. En conjunto estos resultados sugieren que CALA&Ntilde;A y kAE1 tr&aacute;fico juntos el ret&iacute;culo endopl&aacute;smico a la membrana basolateral. ILK puede proporcionar un v&iacute;nculo entre kAE1 y el citoesqueleto de actina subyacente para estabilizar el kAE1 en la membrana basolateral, dando por resultado niveles m&aacute;s altos de la expresi&oacute;n superficial de la c&eacute;lula.

Interacci&oacute;n de la cinasa de la integrina-ligado con el intercambiador bicarbonato/cloruro de ri&ntilde;&oacute;n, kAE1.

&#x4EBA;&#x7C7B;&#x6C2F;/&#x78B3;&#x9178;&#x6C22;&#x94A0; AE1 &#xFF08;&#x9634;&#x79BB;&#x5B50;&#xFF09; &#x662F;&#x4E8C;&#x805A;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8868;&#x793A;&#x968F;&#x7740; N &#x7EC8;&#x7AEF; (Delta1-65&#xFF09; &#x622A;&#x65AD;&#x7A97;&#x4F53;&#xFF0C;kAE1(kidney AE1)&#xFF0C;&#x5728;&#x57FA;&#x5E95;&#x5916;&#x4FA7;&#x819C;&#x7684; alpha &#x63D2;&#x5C42;&#x8FDC;&#x7AEF;&#x80BE;&#x5355;&#x4F4D;&#x4E2D;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;AE1 &#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5723;&#x591A;&#x7F8E; (&#x4E1C;&#x5357;&#x4E9A; ovalocytosis&#xFF09; &#x6216; dRTA &#xFF08;&#x8FDC;&#x7AEF;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x9178;&#x4E2D;&#x6BD2;&#xFF09;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x53D7;&#x635F;&#x80C3;&#x9178;&#x5206;&#x6CCC;&#x7EE7;&#x627F;&#x7684;&#x80BE;&#x810F;&#x75BE;&#x75C5;&#x3002;&#x5360;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x5730;&#x4F4D;&#x7684;&#x5723;&#x591A;&#x7F8E;&#x7A81;&#x53D8; &#xFF08;Delta400-408&#xFF09;&#xFF0C;&#x7ED3;&#x679C;&#x5728;&#x5904;&#x4E8E;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x519C;&#x7528;&#x8FD0;&#x8F93;&#x8F66;&#x548C;&#x6539;&#x53D8;&#x7684;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x6001;&#x53D1;&#x751F;&#x5728; manydRTA &#x7684;&#x5BB6;&#x5EAD;&#xFF0C;&#x4F46;&#x672C;&#x8EAB;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4; dRTA&#x3002;&#x56DB;&#x4E2A; dRTA &#x7A81;&#x53D8; &#xFF08;R602H&#x3001; G701D&#x3001; DeltaV850 &#x548C; A858D&#xFF09; &#x7684;&#x5723;&#x591A;&#x7F8E;&#x590D;&#x5408;&#x6742;&#x5408;&#x5B50;&#x5C55;&#x73B0; dRTA &#x548C;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F02;&#x5E38;&#x5C5E;&#x6027;&#x3002;KAE1 &#x548C; kAE1 &#x5723;&#x591A;&#x7F8E;&#x4E0E; dRTAmutantswas &#x7684;&#x5171;&#x8868;&#x8FBE;&#x7814;&#x7A76;&#x6781;&#x5316;&#x4E0A;&#x76AE; (&#x6885;&#x4E01; Darbycanine &#x80BE;) &#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x50CF;&#x5723;&#x591A;&#x7F8E;&#xFF0C;G701D &#x548C; DeltaV850 &#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x4E3B;&#x8981;&#x88AB;&#x4FDD;&#x7559;&#x4E86;&#x819C;&#x5C42;&#xFF0C;&#x800C; R602H &#x548C; A858D &#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x53EF;&#x80FD;&#x4EA4;&#x901A;&#x5230;&#x57FA;&#x5E95;&#x5916;&#x4FA7;&#x819C;&#x3002;&#x5F53; co-expressed &#x5728;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;kAE1 WT (&#x91CE;&#x751F;&#x578B;) &#x548C; kAE1 &#x5723;&#x591A;&#x7F8E;&#x53EF;&#x4E0E;&#x4EA4;&#x4E92; dRTA &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x3002;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x83CC; kAE1 &#x5723;&#x591A;&#x7F8E;&#x4E0E; kAE1 WT&#xFF0C;kAE1 R602Hor kAE1 A858D &#x4E0B;&#x964D;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x591A;&#x53D1;&#x6027;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x7624;&#x3002;&#x5F53; co-expressed&#xFF0C;kAE1 WT colocalized &#x4E0E; kAE1 R602H&#xFF0C;kAE1 G701D kAE1 DeltaV850 &#x548C; kAE1 A858D &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x5728;&#x57FA;&#x5E95;&#x5916;&#x4FA7;&#x819C;&#x3001; whereaskAE1 &#x5723;&#x591A;&#x7F8E;&#x6B63;&#x4E0E; kAE1 WT&#x3001; kAE1 R602H&#x3001; kAE1 G701D&#x3001; kAE1 DeltaV850 kAE1 A858D &#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;KAE1 &#x5723;&#x591A;&#x7F8E;&#x4E0E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x540E; dRTAmutants &#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x51CF;&#x5C11;&#x5C06;&#x5360;&#x53D7;&#x635F;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x5728;&#x57FA;&#x5E95;&#x5916;&#x4FA7;&#x819C;&#x7684; alpha &#x63D2;&#x5C42;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x590D;&#x5408;&#x6742;&#x5408;&#x6027;&#x60A3;&#x8005; dRTA kAE1&#x3002;

&#x9634;&#x79BB;&#x5B50;&#x4E1C;&#x5357;&#x4E9A; ovalocytosis 1 &#x590D;&#x5408;&#x6742;&#x5408;&#x6027;&#x8FDC;&#x7AEF;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x9178;&#x4E2D;&#x6BD2;&#x7684;&#x663E;&#x6027;&#x8D1F;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

The human chloride/bicarbonate AE1 (anion exchanger) is a dimeric glycoprotein expressed in the red blood cell membrane,and expressed as an N-terminal (Delta1-65) truncated form, kAE1(kidney AE1), in the basolateral membrane of alpha-intercalated cells in the distal nephron. Mutations in AE1 can cause SAO (Southeast Asian ovalocytosis) or dRTA (distal renal tubular acidosis), an inherited kidney disease resulting in impaired acid secretion. The dominant SAO mutation (Delta400-408) that results in an inactive transporter and altered erythrocyte shape occurs in manydRTA families, but does not itself result in dRTA. Compound heterozygotes of four dRTA mutations (R602H, G701D, DeltaV850 and A858D) with SAO exhibit dRTA and abnormal red blood cell properties. Co-expression of kAE1 and kAE1 SAO with the dRTAmutantswas studied in polarized epithelial MDCK(Madin-Darbycanine kidney) cells. Like SAO, the G701D and DeltaV850 mutants were predominantly retained intracellularly, whereas the R602H and A858D mutants could traffic to the basolateral membrane. When co-expressed in transfected cells, kAE1 WT (wild-type)and kAE1 SAO could interact with the dRTA mutants. MDCK cells co-expressing kAE1 SAO with kAE1 WT, kAE1 R602Hor kAE1 A858D showed a decrease in cell-surface expression of the co-expressed proteins. When co-expressed, kAE1 WT colocalized with the kAE1 R602H, kAE1 G701D, kAE1 DeltaV850 and kAE1 A858D mutants at the basolateral membrane, whereaskAE1 SAO co-localized with kAE1 WT, kAE1 R602H, kAE1 G701D, kAE1 DeltaV850 and kAE1 A858D in MDCK cells. The decrease in cell-surface expression of the dRTAmutants as a result of the interaction with kAE1 SAO would account for the impaired expression of functional kAE1 at the basolateral membrane of alpha-intercalated cells, resulting in dRTA in compound heterozygous patients.

Dominant-negative effect of Southeast Asian ovalocytosis anion exchanger 1 in compound heterozygous distal renal tubular acidosis.

Le chlorure/bicarbonate humain AE1 (&eacute;changeur d&#39;anions) est une glycoprot&eacute;ine dim&eacute;rique exprim&eacute;e dans la membrane des globules rouges et a exprim&eacute; comme un N-terminal (Delta1-65) tronqu&eacute; forme, kAE1(kidney AE1), dans la membrane basolat&eacute;rale des cellules alpha-intercal&eacute; dans le n&eacute;phron distal. Mutations AE1 peuvent entra&icirc;ner SAO (Asie du sud-est ovalocytose) ou dRTA (acidose tubulaire r&eacute;nale distale), une maladie r&eacute;nale h&eacute;r&eacute;ditaire entra&icirc;nant la s&eacute;cr&eacute;tion d&#39;acide avec facult&eacute;s affaiblies. La mutation dominante SAO (Delta400-408) qui se traduit par un transporteur inactif et la forme de l&#39;alt&eacute;ration &eacute;rythrocytaire se produit dans les familles manydRTA, mais pas en soi aboutit-elle &agrave; dRTA. H&eacute;t&eacute;rozygotes compos&eacute;s de quatre mutations dRTA (R602H, G701D, DeltaV850 et A858D) avec SAO pi&egrave;ce dRTA et propri&eacute;t&eacute;s anormale de globules rouges. Co-expression de SAO kAE1 avec la dRTAmutantswas et de kAE1 a &eacute;tudi&eacute; dans les cellules MDCK (Madin-Darbycanine rein) &eacute;pith&eacute;liales polaris&eacute;es. Comme SAO, les mutants G701D et DeltaV850 ont &eacute;t&eacute; conserv&eacute;s principalement dans les cellules, alors que les mutants R602H et A858D pourraient trafic vers la membrane basolat&eacute;rale. Lorsque co-exprim&eacute;e dans les cellules transfect&eacute;es, kAE1 WT (type sauvage) et SAO kAE1 pourraient interagir avec les mutants dRTA. Cellules MDCK co-expressing SAO kAE1 avec kAE1 WT, kAE1 R602Hor kAE1 A858D a montr&eacute; une diminution de l&#39;expression de la surface cellulaire des prot&eacute;ines co-exprim&eacute;s. Lorsque co-exprim&eacute;e, kAE1 WT colocalis&eacute; avec le kAE1 R602H, kAE1 G701D, kAE1 DeltaV850 et kAE1 A858D des mutants &agrave; la membrane basolat&eacute;rale, SAO whereaskAE1 co-localisaient avec kAE1 WT, kAE1 R602H, kAE1 G701D, kAE1 DeltaV850 et kAE1 A858D dans les cellules MDCK. La diminution de l&#39;expression de la surface cellulaire de la dRTAmutants &agrave; la suite de l&#39;interaction avec kAE1 SAO expliquerait l&#39;expression alt&eacute;r&eacute;e de kAE1 fonctionnelle &agrave; la membrane basolat&eacute;rale des cellules alpha-intercal&eacute;, entra&icirc;nant dRTA chez les patients h&eacute;t&eacute;rozygotes compos&eacute;s.

Effet dominant n&eacute;gatif de l&#39;&eacute;changeur d&#39;anions ovalocytose Asie du sud-est 1 en compos&eacute;s h&eacute;t&eacute;rozygote acidose tubulaire r&eacute;nale distale.

Die menschliche Chlorid-Bikarbonat AE1 (Anionenaustauscher) ist ein dimeren Glykoprotein, ausgedr&uuml;ckt in der Membran der roten Blutk&ouml;rperchen und ausgedr&uuml;ckt als eine N-terminale (Delta1-65) Form, kAE1(kidney AE1), in der Basolateraler-Membran von Alpha-Stadtauswahl Zellen in den distalen Nephron abgeschnitten. Mutationen im AE1 k&ouml;nnen SAO (Ovalozytose, s&uuml;dostasiatische) oder dRTA (DRTA), eine vererbte Nierenkrankheit f&uuml;hrt gest&ouml;rter S&auml;ureerzeugung f&uuml;hren. Die dominante SAO-Mutation (Delta400-408), die Ergebnisse in eine inaktive Transporter und ver&auml;nderte Erythrozyten Form tritt in ManydRTA Familien, sondern f&uuml;hrt selbst keine im dRTA. Compound heterozygot von vier dRTA-Mutationen (R602H, G701D, DeltaV850 und A858D) mit SAO weisen dRTA und abnorme rote Blutk&ouml;rperchen Eigenschaften. Koexpression von kAE1 und kAE1-SAO mit der dRTAmutantswas studierte in polarisierten Epithelzellen MDCK (Madin-Darbycanine Niere). Wie SAO wurden die G701D und DeltaV850-Mutanten &uuml;berwiegend intrazellul&auml;r, beibehalten, w&auml;hrend die R602H und A858D-Mutanten auf der Membrane Basolateraler Verkehr k&ouml;nnte. Beim co-expressed in transfected Zellen, kAE1 WT (Wildtyp) und kAE1-SAO k&ouml;nnte mit der dRTA-Mutanten interagieren. MDCK Zellen kAE1 SAO mit kAE1 WT co-expressing, zeigten kAE1 R602Hor kAE1 A858D einen R&uuml;ckgang der Zelloberfl&auml;che Expression der co-expressed Proteine. Wenn co-expressed, kAE1 WT colocalized mit der kAE1 R602H, kAE1 G701D, kAE1 DeltaV850 und kAE1-A858D-Mutanten auf der Basolateraler Membran, whereaskAE1 SAO co-localized mit kAE1, WT, kAE1 R602H, kAE1 G701D, kAE1 DeltaV850 und kAE1 A858D in MDCK-Zellen. Der R&uuml;ckgang der Zelloberfl&auml;che Ausdruck des dRTAmutants durch die Interaktion mit kAE1 SAO w&uuml;rden beeintr&auml;chtigt Ausdruck des funktionalen kAE1 in der Basolateraler-Membran von Alpha-Stadtauswahl Zellen, was zu dRTA bei compound heterozygoten Patienten ausmachen.

Dominant-negativer Effekt des Ovalozytose, s&uuml;dostasiatische Anionenaustauscher 1 in zusammengesetzten heterozygote DRTA.

L&#39;umano cloruro/bicarbonato AE1 (scambiatore anionico) &egrave; una glicoproteina dimerica espresse nella membrana del globulo rosso e come un N-terminale (Delta1-65) troncato forma, kAE1(kidney AE1), nella membrana basolaterale delle cellule alfa-intercalato nel nefrone distale. Mutazioni in AE1 possono causare SAO (ovalocytosis sud-est asiatico) o dRTA (acidosi renale tubulare distale), una malattia renale ereditaria con conseguente ridotta secrezione acida. La mutazione dominante SAO (Delta400-408) che si traduce in un teletrasporto inattivo e forma degli eritrociti alterati si verifica nelle famiglie di manydRTA, ma non si comporta in dRTA. Gli eterozigoti composti di quattro mutazioni dRTA (R602H, G701D, DeltaV850 e A858D) con SAO esibiscono Propriet&agrave; anormale delle cellule del sangue rosso e dRTA. Co-Expression di kAE1 e SAO kAE1 con il dRTAmutantswas studiato nelle cellule epiteliali polarizzate MDCK (Madin-Darbycanine renale). Come SAO, i mutanti G701D e DeltaV850 erano prevalentemente conservati intracellularly, considerando che i mutanti R602H e A858D potrebbero traffico verso la membrana basolaterale. Quando co-expressed in celle transfected, kAE1 WT (wild-type) e kAE1 SAO potrebbe interagire con i mutanti di dRTA. Le celle MDCK co-expressing kAE1 SAO con WT kAE1, kAE1 R602Hor kAE1 A858D ha mostrato una diminuzione della superficie cellulare espressione delle proteine espressi. Quando co-expressed, kAE1 WT colocalized con il kAE1 R602H, kAE1 G701D, kAE1 DeltaV850 e kAE1 A858D mutanti alla membrana basolaterale, SAO whereaskAE1 co-ha localizzato con kAE1 WT, kAE1 R602H, kAE1 G701D, kAE1 DeltaV850 e kAE1 A858D in cellule MDCK. La diminuzione della superficie cellulare espressione di dRTAmutants a seguito dell&#39;interazione con kAE1 SAO rappresenterebbe per l&#39;alterata espressione di kAE1 funzionale alla membrana basolaterale delle cellule intercalate alfa, con conseguente dRTA nei pazienti eterozigoti composti.

Effetto dominante negativo di sud-est asiatico ovalocytosis scambiatore anionico 1 in composto eterozigote acidosi renale tubulare distale.

&#x4EBA;&#x9593;&#x5869;&#x5316;/&#x70AD;&#x9178; AE1 &#xFF08;&#x9670;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x4EA4;&#x63DB;&#x4F53;) &#x306F;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x819C;&#x3067;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x3001;N &#x30BF;&#x30FC;&#x30DF;&#x30CA;&#x30EB; &#xFF08;Delta1-65) &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3001;kAE1(kidney AE1)&#x3001;&#x9060;&#x4F4D;&#x30CD;&#x30D5;&#x30ED;&#x30F3; &#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; &#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30AB; &#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x57FA;&#x5E95;&#x819C;&#x306E;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3068;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;AE1 &#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D1;&#x30A6;&#x30ED; &#xFF08;&#x6771;&#x5357;&#x30A2;&#x30B8;&#x30A2; ovalocytosis&#xFF09; &#x3084; dRTA (&#x9060;&#x4F4D;&#x814E;&#x5C3F;&#x7D30;&#x7BA1;&#x30A2;&#x30B7;&#x30C9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#xFF09;&#x3001;&#x9178;&#x306E;&#x5206;&#x6CCC;&#x306B;&#x969C;&#x5BB3;&#x3092;&#x751F;&#x3058;&#x308B;&#x7D99;&#x627F;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x814E;&#x81D3;&#x75C5;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#x304C;&#x3001;&#x975E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x3067;&#x652F;&#x914D;&#x7684;&#x306A;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D1;&#x30A6;&#x30ED;&#x5909;&#x7570; &#xFF08;Delta400-408) manydRTA &#x5BB6;&#x65CF;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x306A;&#x3044;&#x81EA;&#x4F53; dRTA &#x3067;&#x306F;&#x3002;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D1;&#x30A6;&#x30ED;&#x3067;&#x306E; 4 &#x3064;&#x306E; dRTA &#x5909;&#x7570; (R602H&#x3001;G701D&#x3001;DeltaV850 &#x304A;&#x3088;&#x3073; A858D) &#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x30A2;&#x30EC;&#x30EB; dRTA &#x3068;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x5C55;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;KAE1 &#x3068; kAE1 &#x30B5;&#x30F3;&#x30D1;&#x30A6;&#x30ED;&#x3001;dRTAmutantswas &#x3068;&#x306E;&#x5171;&#x504F;&#x5149;&#x4E0A;&#x76AE; MDCK (&#x30DE;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3; Darbycanine &#x814E;&#x81D3;) &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;R602H &#x304A;&#x3088;&#x3073; A858D &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x57FA;&#x5E95;&#x819C;&#x306B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D1;&#x30A6;&#x30ED;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A; G701D &#x3068; DeltaV850 &#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x4E3B;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3001;&#x4FDD;&#x6301;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3068;&#x304D; transfected &#x30BB;&#x30EB;&#x3067;&#x5171;&#x540C;&#x3001;kAE1 WT &#xFF08;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#xFF09; &#x3068; kAE1 &#x30B5;&#x30F3;&#x30D1;&#x30A6;&#x30ED; dRTA &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3068;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;MDCK &#x7D30;&#x80DE;&#x3001;kAE1 SAO kAE1 WT &#x304C; co-expressing kAE1 R602Hor kAE1 A858D &#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5171;&#x540C;&#x3001;kAE1 WT &#x7D50;&#x679C;&#x3068; kAE1 R602H kAE1 G701D kAE1 DeltaV850 &#x3068; kAE1 A858D &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x57FA;&#x5E95;&#x819C;&#x3001;whereaskAE1 &#x30B5;&#x30F3;&#x30D1;&#x30A6;&#x30ED;&#x3067; kAE1 &#x4ED8;&#x304D; WT kAE1 R602H&#x3001;kAE1 G701D&#x3001;kAE1 DeltaV850&#x3001;kAE1 A858D MDCK &#x7D30;&#x80DE;&#x3067; co-localized&#x3002;KAE1 &#x30B5;&#x30F3;&#x30D1;&#x30A6;&#x30ED;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x3057;&#x3066; dRTAmutants &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x6A5F;&#x80FD; kAE1 &#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; &#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30AB; &#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E; dRTA &#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x63A5;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x60A3;&#x8005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x57FA;&#x5E95;&#x819C;&#x3067;&#x306E;&#x969C;&#x5BB3;&#x8005;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x30A2;&#x30AB;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6771;&#x5357;&#x30A2;&#x30B8;&#x30A2; ovalocytosis &#x9670;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x4EA4;&#x63DB;&#x4F53; 1 &#x8907;&#x5408;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x9060;&#x4F4D;&#x814E;&#x5C3F;&#x7D30;&#x7BA1;&#x30A2;&#x30B7;&#x30C9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3067;&#x306E;&#x30C9;&#x30DF;&#x30CA;&#x30F3;&#x30C8; &#x30CD;&#x30AC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x52B9;&#x679C;&#x3002;

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC5FC;&#xD654; &#xBB3C;/&#xD0C4;&#xC0B0;&#xC5FC; AE1 (&#xC74C;&#xC774;&#xC628; &#xAD50;&#xD658;&#xAE30;) dimeric &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBD89;&#xC740; &#xD608;&#xC561; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xB418; &#xACE0; N &#xB9E8;&#xB05D; (Delta1-65) &#xC798;&#xB9B0; &#xD615;&#xD0DC;, kAE1(kidney AE1), basolateral &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xC6D0;&#xC2EC; nephron&#xC5D0;&#xC11C; &#xC54C;&#xD30C; &#xC911;&#xAC04; &#xC140;&#xC758; &#xD45C;&#xD604; &#xC774;&#xB2E4;. Ae1&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC0C1; (&#xB3D9;&#xB0A8; &#xC544;&#xC2DC;&#xC544; ovalocytosis) &#xB610;&#xB294; dRTA (&#xC6D0;&#xC2EC; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xAD00; &#xC99D;), &#xC7A5;&#xC560;&#xC778;&#xB41C; &#xC0B0; &#xBD84; &#xBE44;&#xC5D0; &#xB530;&#xB978; &#xC0C1;&#xC18D; &#xB41C; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC9C8;&#xD658;&#xC744; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0AC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; &#xC804;&#xC1A1; &#xBC0F; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; &#xC801;&#xD608;&#xAD6C; &#xBAA8;&#xC591; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xC0C1; &#xBCC0;&#xC774; (Delta400-408) manydRTA &#xAC00;&#xC871;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC790;&#xCCB4; Drta&#xC5D0; &#xACB0;&#xACFC; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; 4 &#xAC1C;&#xC758; dRTA &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; (R602H, G701D, DeltaV850 &#xBC0F; A858D)&#xC758; &#xBCF5;&#xD569; heterozygotes &#xC804;&#xC2DC; dRTA &#xBC0F; &#xBE44;&#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC801;&#xD608;&#xAD6C; &#xC18D;&#xC131;. KAE1 &#xBC0F; kAE1 &#xC0AC;&#xC624;&#xB294; Drtamutantswas&#xC640; co-expression &#xD3B8;&#xAD11;&#xB41C; &#xC0C1;&#xD53C; MDCK (Madin-Darbycanine &#xC2E0;&#xC7A5;) &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACF5;&#xBD80; &#xD588;&#xB2E4;. &#xCC98;&#xB7FC; &#xC0C1;, G701D &#xBC0F; DeltaV850 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC720;&#xC9C0; &#xD588;&#xB2E4; &#xCE68;, R602H &#xBC0F; A858D &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; basolateral &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xD2B8;&#xB798;&#xD53D;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74;. &#xB54C; transfected &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; co-expressed kAE1 WT (&#xC57C;&#xC0DD; &#xD615;)&#xACFC; kAE1 &#xC0C1; dRTA &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. MDCK &#xC140; kAE1 WT&#xC640; &#xC0C1; kAE1 co-expressing, kAE1 R602Hor kAE1 A858D co-expressed &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB54C; co-expressed, kAE1 WT colocalized&#xB294; Kae1&#xC640; R602H, kAE1 G701D, kAE1 Deltav850&#xC640; WT, kAE1 R602H, kAE1 G701D, kAE1 DeltaV850 &#xBC0F; MDCK &#xC140;&#xC5D0; kAE1 A858D kAE1 A858D basolateral, whereaskAE1 &#xC0C1; &#xB9C9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; Kae1&#xC640; co-localized. KAE1 &#xC0C1; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; Drtamutants&#xC758; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xAC10;&#xC18C;&#xB294; &#xC7A5;&#xC560;&#xC778;&#xB41C; &#xAE30;&#xB2A5; kAE1 &#xBCF5;&#xD569; heterozygous &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; Drta&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;&#xB85C; &#xC54C;&#xD30C; &#xC911;&#xAC04; &#xC140; basolateral &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xACC4;&#xC815;&#xC744; &#xAC83; &#xC774;&#xB2E4;.

&#xB3D9;&#xB0A8; &#xC544;&#xC2DC;&#xC544; ovalocytosis &#xC74C;&#xC774;&#xC628; &#xAD50;&#xD658;&#xAE30; 1 &#xBCF5;&#xD569; heterozygous &#xC6D0;&#xC2EC; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xAD00; &#xC99D;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xD6A8;&#xACFC;.

El cloruro/bicarbonato humano AE1 (intercambiador de aniones) es una glicoprote&iacute;na dim&eacute;rica expresados en la membrana de los gl&oacute;bulos rojos y expresado como un N-terminal (Delta1-65) truncado forma, kAE1(kidney AE1), en la membrana basolateral de las c&eacute;lulas alfa-intercalados en la nefrona distal. Pueden causar mutaciones en AE1 SAO (Ovalocitosis del sudeste asi&aacute;tico) o dRTA (acidosis tubular renal distal), una enfermedad renal hereditaria dando lugar a la secreci&oacute;n &aacute;cida deteriorada. La mutaci&oacute;n dominante de SAO (Delta400-408) que resulta en un transportador inactivo y forma alterada del eritrocito ocurre en familias de manydRTA, pero no implica dRTA. Heterocigotos compuestos de cuatro mutaciones dRTA (R602H, G701D, DeltaV850 y A858D) con SAO exhiben dRTA y propiedades anormales de gl&oacute;bulos rojos. Coexpresi&oacute;n de kAE1 y San kAE1 con el dRTAmutantswas estudi&oacute; en c&eacute;lulas epiteliales polarizadas de MDCK (ri&ntilde;&oacute;n de Madin-Darbycanine). Como SAO, los mutantes G701D y DeltaV850 predominante se conservaron intracelular, mientras que los mutantes R602H y A858D podr&iacute;an tr&aacute;fico a la membrana basolateral. Cuando co-expressed en las c&eacute;lulas transfected, kAE1 WT (tipo salvaje) y SAO kAE1 podr&iacute;an interactuar con los mutantes dRTA. C&eacute;lulas MDCK SAO kAE1 con el peso de kAE1 de co-expressing, kAE1 R602Hor kAE1 A858D mostr&oacute; una disminuci&oacute;n en la expresi&oacute;n de la superficie celular de las prote&iacute;nas co-expressed. Cuando co-expressed, kAE1 WT colocalized con el kAE1 R602H, kAE1 G701D, kAE1 DeltaV850 y kAE1 A858D mutantes en la membrana basolateral, SAO whereaskAE1 co-localized con kAE1 WT, kAE1 R602H, kAE1 G701D, kAE1 DeltaV850 y kAE1 A858D en las c&eacute;lulas MDCK. La disminuci&oacute;n en la expresi&oacute;n de la superficie celular de la dRTAmutants como resultado de la interacci&oacute;n con kAE1 SAO explicar&iacute;a la expresi&oacute;n deteriorada de kAE1 funcional en la membrana basolateral de las c&eacute;lulas alfa-intercalados, dando por resultado dRTA en pacientes heterozig&oacute;ticos compuestos.

Efecto negativo dominante del intercambiador de aniones Ovalocitosis del sudeste asi&aacute;tico 1 en acidosis tubular renal distal heterozig&oacute;tica compuesta.

PDZ &#x7ED1;&#x5B9A;&#x56FE;&#x6848;&#x901A;&#x8FC7;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x5305;&#x542B; PDZ &#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x90A3;&#x91CC;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x8C03;&#x89E3;&#x7279;&#x5B9A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x65E0;&#x6570;&#x79EF;&#x5206;&#x819C;&#x86CB;&#x767D; C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x5C3E;&#x5DF4;&#x4E2D;&#x627E;&#x5230;&#x3002;&#x5E38;&#x89C4;&#x7684;&#x9175;&#x6BCD;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4;&#x5C4F;&#x5E55;&#x5DF2;&#x7528;&#x4E8E;&#x63A2;&#x6D4B;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; C &#x603B;&#x7AD9;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5230;&#x76EE;&#x524D;&#x4E3A;&#x6B62;&#x6CA1;&#x6709;&#x4EFB;&#x4F55;&#x4F53;&#x5185;&#x6280;&#x672F;&#x4E00;&#x76F4;&#x53EF;&#x7528;&#x6765;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x5168;&#x957F;&#x79EF;&#x5206;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x53CA;&#x5176;&#x540C;&#x6E90; PDZ &#x4EA4;&#x4E92;&#x4F19;&#x4F34;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x5F00;&#x53D1;&#x62C6;&#x5206;&#x6CDB;&#x7D20;&#x819C;&#x9175;&#x6BCD;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4; (&#x795E;&#x8BDD;) &#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5288;&#x88C2;&#x819C;&#x63D2;&#x5165;&#x9975;&#x7684; C &#x603B;&#x7AD9;&#x4ECE;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8F93;&#x51FA;&#x8FD9;&#x79CD;&#x79EF;&#x5206;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x4FEE;&#x6539;&#x795E;&#x8BDD;&#x5141;&#x8BB8;&#x68C0;&#x6D4B; C &#x7EC8;&#x7AEF; PDZ &#x57DF;&#x7684;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x91CD;&#x5B9A;&#x5411;&#x5230;&#x7ED9;&#x5B9A;&#x79EF;&#x5206;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x4ECE;&#x800C;&#x89E3;&#x653E;&#x5176;&#x672C;&#x673A; C &#x603B;&#x7AD9;&#x7684; N &#x603B;&#x7AD9;&#x4ECE; C &#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6210;&#x529F;&#x5730;&#x5E94;&#x7528;&#x8FD9;&quot;&#x795E;&#x8BDD; 2.0&quot;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E94;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x5168;&#x957F;&#x80BE;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x786E;&#x5B9A;&#x65B0;&#x578B; PDZ &#x57DF;&#x5305;&#x542B;&#x4F19;&#x4F34;&#x7684;&#x78F7;&#x9178; (NaPi IIa) &#x548C;&#x786B;&#x9178; (NaS1) &#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x5426;&#x5219;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x53D6;&#x5F97;&#x63A2;&#x6D4B;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x88AB;&#x7528;&#x4E8E;&#x5B9A;&#x4F4D; NaS1 &#x86CB;&#x767D; PDZ &#x7ED1;&#x5B9A;&#x57DF;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x5173;&#x4E8E; NaS1 PDZK1 &#x7684; PDZ &#x7ED1;&#x5B9A;&#x57DF;&#x662F;&#x4E0A;&#x6E38;&#x7684;&#x5176; C &#x603B;&#x7AD9;&#xFF0C;&#x800C;&#x5728; NaS1 N &#x603B;&#x7AD9;&#x7684;&#x63A5;&#x8FD1;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4E24;&#x4E2A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;NHERF-1 &#x548C; NHERF-2&#x3002;NHERF-1 &#x548C; NHERF-2 &#x6B64;&#x5916;&#x589E;&#x52A0;&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x786B;&#x9178;&#x5438;&#x6536;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x65F6;&#x4E0E; NaS1 co-expressed&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x795E;&#x8BDD; 2.0 &#x6765;&#x8BC1;&#x660E;&#x901A;&#x8FC7;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5185;&#x8102;&#x53CC;&#x5C42;&#x7684; NaPi IIa &#x519C;&#x7528;&#x8FD0;&#x8F93;&#x8F66; homodimerizes&#x3002;&#x603B;&#x4E4B;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x795E;&#x8BDD; 2.0 &#x7CFB;&#x7EDF;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4EA4;&#x4E92;&#x5F0F;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x4F53;&#x7684;&#x65B0;&#x578B;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;

&#x76D1;&#x6D4B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x79EF;&#x5206;&#x819C;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x4F7F;&#x7528;&#x4FEE;&#x6539;&#x7684;&#x62C6;&#x5206;&#x6CDB;&#x819C;&#x9175;&#x6BCD;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528; PDZ &#x4F19;&#x4F34;&#x3002;

PDZ-binding motifs are found in the C-terminal tails of numerous integral membrane proteins where they mediate specific protein-protein interactions by binding to PDZ-containing proteins. Conventional yeast two-hybrid screens have been used to probe protein-protein interactions of these soluble C termini. However, to date no in vivo technology has been available to study interactions between the full-length integral membrane proteins and their cognate PDZ-interacting partners. We previously developed a split-ubiquitin membrane yeast two-hybrid (MYTH) system to test interactions between such integral membrane proteins by using a transcriptional output based on cleavage of a transcription factor from the C terminus of membrane-inserted baits. Here we modified MYTH to permit detection of C-terminal PDZ domain interactions by redirecting the transcription factor moiety from the C to the N terminus of a given integral membrane protein thus liberating their native C termini. We successfully applied this "MYTH 2.0" system to five different mammalian full-length renal transporters and identified novel PDZ domain-containing partners of the phosphate (NaPi-IIa) and sulfate (NaS1) transporters that would have otherwise not been detectable. Furthermore this assay was applied to locate the PDZ-binding domain on the NaS1 protein. We showed that the PDZ-binding domain for PDZK1 on NaS1 is upstream of its C terminus, whereas the two interacting proteins, NHERF-1 and NHERF-2, bind at a location closer to the N terminus of NaS1. Moreover NHERF-1 and NHERF-2 increased functional sulfate uptake in Xenopus oocytes when co-expressed with NaS1. Finally we used MYTH 2.0 to demonstrate that the NaPi-IIa transporter homodimerizes via protein-protein interactions within the lipid bilayer. In summary, our study establishes the MYTH 2.0 system as a novel tool for interactive proteomics studies of membrane protein complexes.

Monitoring protein-protein interactions between the mammalian integral membrane transporters and PDZ-interacting partners using a modified split-ubiquitin membrane yeast two-hybrid system.

PDZ motifs de liaison se trouvent dans les queues C-terminales de nombreuses prot&#xE9;ines membranaires int&#xE9;grales o&#xF9; ils interviennent dans certains interactions prot&#xE9;ine-prot&#xE9;ine en se liant &#xE0; des prot&#xE9;ines contenant PDZ. Conventionnelles deux hybrides de levure &#xE9;crans ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;s pour sonder interactions prot&#xE9;ine-prot&#xE9;ine de ces terminaisons C solubles. Toutefois, &#xE0; ce jour aucun dans la technologie in vivo a &#xE9;t&#xE9; disponible pour &#xE9;tudier les interactions entre les prot&#xE9;ines pleine longueur membranaires int&#xE9;grales et leurs apparent&#xE9;s PDZ-partenaires d&#x26;#39;interaction. On pr&#xE9;c&#xE9;demment d&#xE9;velopp&#xE9;e une levure membrane scission-ubiquitine &#xE0; deux hybrides (MYTHE) du syst&#xE8;me &#xE0; tester les interactions entre ces prot&#xE9;ines membranaires int&#xE9;grales en utilisant une sortie sur la base de la transcription de clivage d&#x26;#39;un facteur de transcription de l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; C-terminale d&#x26;#39;une membrane ins&#xE9;r&#xE9;es app&#xE2;ts. Ici nous avons modifi&#xE9; MYTHE pour permettre la d&#xE9;tection de la C-terminales des interactions de domaine PDZ en redirigeant la fraction facteur de transcription de la C &#xE0; l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; N-terminale d&#x26;#39;une prot&#xE9;ine membranaire int&#xE9;grale donn&#xE9;e lib&#xE9;rant ainsi leurs extr&#xE9;mit&#xE9;s C indig&#xE8;nes. Nous avons r&#xE9;ussi &#xE0; appliquer ce &#xAB;mythe 2.0&#x26;quot; syst&#xE8;me &#xE0; cinq diff&#xE9;rents mammif&#xE8;res sur toute la longueur des transporteurs r&#xE9;naux et identifi&#xE9; roman domaine PDZ-contenant des partenaires du phosphate (NaPi-IIa) et de sulfate (NAS1), les transporteurs qui auraient autrement pas &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;tectable. En outre, ce test a &#xE9;t&#xE9; appliqu&#xE9; pour localiser le domaine PDZ de liaison sur la prot&#xE9;ine NAS1. Nous avons montr&#xE9; que le domaine PDZ de liaison pour PDZK1 sur NAS1 se situe en amont de son extr&#xE9;mit&#xE9; C-terminale, tandis que les deux prot&#xE9;ines qui interagissent, NHERF-1 et NHERF-2, se lient &#xE0; un emplacement plus proche de l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; N-terminale de la NAS1. En outre NHERF-1 et NHERF-2 a augment&#xE9; la captation de sulfate fonctionnelle dans les ovocytes de Xenopus en cas de co-exprim&#xE9; avec NAS1. Enfin, nous avons utilis&#xE9; 2,0 MYTHE de d&#xE9;montrer que le transporteur NaPi-IIa homodimerizes via interactions prot&#xE9;ine-prot&#xE9;ine au sein de la bicouche lipidique. En r&#xE9;sum&#xE9;, notre &#xE9;tude &#xE9;tablit le MYTHE syst&#xE8;me 2.0 comme un nouvel outil pour les &#xE9;tudes de prot&#xE9;omique interactifs complexes de prot&#xE9;ines membranaires.

Suivi interactions prot&#xE9;ine-prot&#xE9;ine entre les transporteurs membranaires int&#xE9;grales de mammif&#xE8;res et PDZ-partenaires d&#x26;#39;interaction utilisant une levure membrane modifi&#xE9;e Split-ubiquitine syst&#xE8;me double-hybride

PDZ-Bindung Motive finden sich in der C-terminalen Schw&auml;nze von zahlreichen integralen Membranproteinen, wo sie spezifische Protein-Protein Interaktionen vermitteln, durch Bindung an PDZ-haltige Proteine. Konventionelle Hefe-zwei-Hybrid-Bildschirme sind benutzt worden, um Protein-Protein Interaktionen dieser l&ouml;slichen C-Termini zu untersuchen. Jedoch ist bisher keine in-vivo-Technologie, Interaktionen zwischen den in integralen Membranproteine und ihren Verwandten PDZ-Interaktion zu studieren verf&uuml;gbar. Entwickelten wir zuvor eine Split-Ubiquitin Membran Hefe zwei-Mischling (Mythos) um Interaktionen zwischen solche integrale Membranproteine mit eine transkriptionelle Ausgabe basierend auf Spaltung der Transkriptionsfaktor C Rehalp Membran eingef&uuml;gt-K&ouml;dern zu testen. Hier ge&auml;ndert wir Mythos um Nachweis von C-terminalen PDZ-Dom&auml;nen-Interaktionen zu erm&ouml;glichen, durch Umleiten der Transkription Faktor angegebenen Substanz aus der C auf das N-Terminus von einem bestimmten integrale Membranprotein somit Befreiung ihre systemeigenen C-Termini. Wir erfolgreich angewendet dies &quot;Mythos 2.0&quot; System an f&uuml;nf verschiedene S&auml;ugetier-in renalen Transporter und identifizierten Roman PDZ-Gebietsenthalten Partner von Phosphat (NaPi-IIa) und Sulfat (NaS1)-Transporter, die sonst nicht nachweisbar gewesen. Au&szlig;erdem wurde diese Probe angewendet, um die PDZ-bindende Dom&auml;ne auf dem NaS1-Protein zu finden. Wir zeigten, dass die PDZ-bindende Dom&auml;ne f&uuml;r PDZK1 auf NaS1 upstream von seiner C-Terminus, w&auml;hrend die zwei interagierenden Proteine, NHERF-1 und NHERF-2, an einem Ort n&auml;her zu den N-Terminus NaS1 binden. Au&szlig;erdem NHERF-1 und NHERF-2 erh&ouml;ht funktionelle Sulfat Aufnahme in Xenopus Oocytes beim co-expressed mit NaS1. Schlie&szlig;lich haben wir Mythos 2.0 zu zeigen, dass die NaPi-IIa-Transporter-Homodimerizes &uuml;ber Protein-Protein Interaktionen innerhalb der Lipid-Bilayer. Zusammenfassend l&auml;sst sich sagen wird unserer Studie das Mythos 2.0-System als ein neuartiges Tool f&uuml;r interaktive Proteomics Studien der Membran-Protein-komplexen.

&Uuml;berwachung von Protein-Protein Interaktionen zwischen der S&auml;ugetier-integrale Membrane-Transporter und PDZ-Interaktion-Partnern, die mit einem modifizierten Teilen-Ubiquitin Membran Hefe Two-Hybrid System.

PDZ-associazione motivi si trovano nelle code di numerose proteine integrali di membrana dove essi mediano interazioni specifiche proteina-proteina C-terminale dal legame con le proteine contenenti PDZ. Schermi due-ibrido convenzionale lievito sono stati usati per sondare le interazioni della proteina-proteina di questi termini C solubile. Tuttavia, ad non oggi nessuna tecnologia in vivo &egrave; stato disponibile per studiare le interazioni tra le proteine integrali di membrana full-length e i loro partner di PDZ-interacting affine. Precedentemente abbiamo sviluppato un sistema split-ubiquitina membrana lievito due-ibrido (mito) per testare le interazioni tra tali proteine integrali di membrana utilizzando un output transcriptional basato sulla scissione di un fattore di trascrizione dal capolinea C della membrana inserita esche. Qui abbiamo modificato il mito per consentire il rilevamento delle interazioni dominio C-terminale PDZ reindirizzando il moiety fattore di trascrizione dal C per il N-terminale di una proteina integrale di membrana dato cos&igrave; liberatorio loro termini C nativi. Abbiamo applicato con successo questo &quot;Mito 2.0&quot; sistema a cinque diversi mammiferi full-length renali trasportatori e identificato romanzo PDZ contenente dominio partner del fosfato (NaPi-IIa) e solfato di trasportatori (NaS1) che altrimenti non sarebbero rilevabili. Inoltre questo test &egrave; stato applicato per individuare il dominio PDZ-associazione sulla proteina NaS1. Abbiamo dimostrato che il dominio PDZ-associazione per PDZK1 su NaS1 &egrave; a monte del suo capolinea C, mentre le due proteine interagenti, NHERF-1 e NHERF-2, legano in una posizione pi&ugrave; vicina al capolinea N di NaS1. Inoltre NHERF-1 e NHERF-2 aumentato assorbimento del solfato funzionale in Xenopus oocytes quando co-expressed con NaS1. Infine abbiamo usato mito 2.0 per dimostrare che il homodimerizes transporter NaPi-IIa tramite interazioni proteina-proteina all&#39;interno del doppio strato lipidico. In sintesi, il nostro studio istituisce il sistema mito 2.0 come strumento di romanzo per studi di proteomica interattiva dei complessi della proteina di membrana.

Monitoraggio interazioni proteina-proteina tra i trasportatori di membrana integrale dei mammiferi e partner PDZ-interagire utilizzando un sistema di due-ibrido lievito membrana modificata split-ubiquitina.

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NAS1&#x3068;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x6642;&#x306B;&#x307E;&#x305F;NHERF-1&#x3068;NHERF-2&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x306E;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x786B;&#x9178;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;NAPI-IIA&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x304C;&#x8102;&#x8CEA;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5C64;&#x5185;&#x3067;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; - &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;homodimerizes&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3059;&#x308B;MYTH 2.0&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8981;&#x7D04;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x795E;&#x8A71;2.0&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B9;&#x30D7;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C8;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x819C;&#x9175;&#x6BCD;&#x30C4;&#x30FC;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x5185;&#x5728;&#x6027;&#x819C;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;PDZ&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; - &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;

PDZ-&#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; PDZ &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC774; &#xD2B9;&#xC815; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC911;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xC218;&#xB9CE;&#xC740; &#xD1B5;&#xD569; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; C-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xAF2C;&#xB9AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCC3E;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xD6A8; &#xBAA8; 2 &#xC7A1;&#xC885; &#xC2A4;&#xD06C;&#xB9B0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; C &#xD14C;&#xB974;&#xBBF8;&#xB2C8; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC544;&#xB2C8; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xC220;&#xC740; &#xD604;&#xC7AC;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xACFC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB3D9;&#xC871; PDZ &#xC791;&#xC6A9; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108; &#xAC04;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xB9C9; &#xC0BD;&#xC785; baits&#xC758; C &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xCABC;&#xAC1C; &#xC9D0;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; transcriptional &#xCD9C;&#xB825;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC815;&#xC218; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xBD84;&#xD560; &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xB9C9; &#xD6A8; &#xBAA8; 2 &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; (&#xC2E0;&#xD654;) &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; C &#xD14C;&#xB974;&#xBBF8;&#xB2C8; &#xC790;&#xC720;&#xB86D;&#xAC8C; &#xC8FC;&#xC5B4;&#xC9C4;&#xB41C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; N &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0;&#xB294; C&#xC5D0;&#xC11C; &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778; moiety&#xB97C; &#xB9AC;&#xB514;&#xB809;&#xC158;&#xD558;&#xC5EC; &#xAC80;&#xCD9C; &#xB2E8;&#xC790; PDZ &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC2E0;&#xD654;&#xB97C; &#xC218;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xAC83;&#xC744; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC801;&#xC6A9; &#xB41C; &quot;5 &#xB2E4;&#xB978; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xB41C; &#xC18C;&#xC124; PDZ &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108; (NaPi IIa) &#xC778;&#xC0B0; &#xC5FC;&#xC758; &#xC2E0;&#xD654; 2.0&quot; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xAC83; &#xC774;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB807;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC73C;&#xBA74; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xAC10;&#xC9C0; (NaS1) &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30; &#xD669;&#xC0B0; &#xBC0F;. &#xB610;&#xD55C;&#xC774; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; PDZ-&#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; NaS1 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Nas1&#xC5D0; pdzk1&#xC758; PDZ-&#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC740; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; C &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC758; &#xC5C5;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xBC18;&#xBA74; &#xB450; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, NHERF 1, NHERF-2 &#xB144; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC774; Nas1&#xC758; N &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C; NHERF-1 NHERF-2 Xenopus oocytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD669;&#xC0B0; &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xB54C; Nas1&#xC640; co-expressed. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC2E0;&#xD654; 2.0&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC9C0;&#xC9C8; bilayer &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; NaPi IIa &#xC6B4;&#xC1A1;&#xC5C5; &#xC790; homodimerizes. &#xC694;&#xC57D; &#xD558;&#xC790;&#xBA74;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xB300;&#xD654;&#xD615; proteomics &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB85C; &#xC2E0;&#xD654; 2.0 &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC124;&#xC815;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC815;&#xC218; &#xB9C9; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30;&#xC640; PDZ &#xC791;&#xC6A9; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108; &#xC218;&#xC815;&#xB41C; &#xBD84;&#xD560; &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xB9C9; &#xB204; &#xB8E9; 2-&#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC04;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

PDZ vinculante motivos se encuentran en las colas de C-terminales de numerosas prote&#xED;nas integrales de membrana donde median espec&#xED;ficas interacciones prote&#xED;na-prote&#xED;na de uni&#xF3;n a PDZ que contienen prote&#xED;nas. Convencionales levadura h&#xED;brido de dos pantallas se han utilizado para sondear interacciones prote&#xED;na-prote&#xED;na de estos terminales solubles C. Sin embargo, hasta la fecha no vivo en la tecnolog&#xED;a ha estado disponible para estudiar las interacciones entre las prote&#xED;nas de la membrana de larga duraci&#xF3;n integrales y sus socios afines PDZ-que interact&#xFA;an. Hemos desarrollado previamente una levadura membrana dividida ubiquitina dos h&#xED;bridos (MITO) sistema para probar las interacciones entre dichas prote&#xED;nas integrales de membrana mediante el uso de una salida transcripcional basa en la escisi&#xF3;n de un factor de transcripci&#xF3;n a partir del extremo C de la membrana de la insertados cebos. Aqu&#xED; modificada MITO para permitir la detecci&#xF3;n de C-terminales interacciones de dominio PDZ por redirigir el resto factor de transcripci&#xF3;n a partir del C al N terminal de una prote&#xED;na de membrana integral dada liberando as&#xED; sus extremos C nativas. Hemos aplicado con &#xE9;xito este &#x26;quot;mito de 2,0&#x26;quot; del sistema para cinco diferentes mam&#xED;feros de larga duraci&#xF3;n en los transportadores renales e identific&#xF3; la novela de PDZ de dominio que contienen los socios del fosfato (NaPi-IIa) y sulfato (nas1) los transportistas que hubieran sido de otro modo no detectable. Adem&#xE1;s, este ensayo se aplica para localizar el dominio PDZ vinculante sobre la prote&#xED;na nas1. Hemos demostrado que el dominio PDZ vinculante para el PDZK1 nas1 est&#xE1; aguas arriba de la terminal C, mientras que las dos prote&#xED;nas interact&#xFA;an, NHERF-1 y NHERF 2-, se unen en un punto cercano a la terminal N de nas1. Por otra parte NHERF-1 y NHERF 2-aumento de la captaci&#xF3;n de sulfato funcional en ovocitos de Xenopus cuando se co-expresada con nas1. Por &#xFA;ltimo se utiliz&#xF3; 2,0 MITO para demostrar que el transportador NaPi-IIa homodimerizes a trav&#xE9;s de interacciones prote&#xED;na-prote&#xED;na dentro de la bicapa lip&#xED;dica. En resumen, nuestro estudio establece la MITO 2.0 del sistema como una nueva herramienta para los estudios de prote&#xF3;mica interactivas de los complejos de prote&#xED;nas de membrana.

Monitoreo interacciones prote&#xED;na-prote&#xED;na entre los transportadores de membrana de mam&#xED;feros Integral y PDZ-que interact&#xFA;an los socios que utilizan una versi&#xF3;n modificada de Split-ubiquitina levadura membrana sistema h&#xED;brido de dos

&#x94DC;&#x7EFF;&#x5047;&#x5355;&#x80DE;&#x83CC;&#x662F;&#x673A;&#x4F1A;&#x4E3B;&#x4E49;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x662F;&#x56CA;&#x6027;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5316;&#x60A3;&#x8005;&#x7684;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7387;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x56E0;&#x7D20;&#x548C;&#x611F;&#x67D3;&#x8868;&#x793A;&#x5168;&#x7403;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x5065;&#x5EB7;&#x7684;&#x5A01;&#x80C1;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x94DC;&#x7EFF;&#x5047;&#x5355;&#x80DE;&#x83CC;&#x5BF9;&#x6297;&#x83CC;&#x836F;&#x7269;&#x7684;&#x8010;&#x836F;&#x6027;&#x4E0D;&#x65AD;&#x589E;&#x52A0;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x9700;&#x8981;&#x65B0;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x5728;&#x836F;&#x7406;&#x5B66;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x76EE;&#x6807;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x7EC6;&#x83CC;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x6F14;&#x793A;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x9175;&#x6BCD;&#x8868;&#x578B;&#x6D4B;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x7ED3;&#x5408;&#x5927;&#x578B;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x5C4F;&#x5E55;&#xFF0C;&#x786E;&#x5B9A;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6291;&#x5236;&#x6BD2;&#x6027;&#x7684;&#x94DC;&#x7EFF;&#x5047;&#x5355;&#x80DE;&#x83CC;&#x9009;&#x5B9A; ORFs &#x7684;&#x5F02;&#x6E90;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x6291;&#x5236;&#x5242; Exoenzyme S (ExoS) &#x53C2;&#x4E0E; III &#x578B;&#x5206;&#x6CCC;&#x4E00;&#x79CD;&#x6BD2;&#x7D20;&#x3002;Exosin&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#xFF0C;&#x8C03;&#x8282; ExoS ADP ribosyltransferase &#x4F53;&#x5916;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;exosin &#x548C;&#x53CA;&#x5176;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7269;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x663E;&#x793A;&#x6297;&#x5047;&#x5355;&#x80DE;&#x83CC;&#x611F;&#x67D3;&#x4F53;&#x5185;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4FDD;&#x62A4;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x6267;&#x884C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x90FD;&#x80FD;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x51E0;&#x4E2A;&#x9175;&#x6BCD;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x7684;&#x5DF2;&#x77E5;&#x4EBA;&#x7C7B; ExoS &#x76EE;&#x6807;&#x662F;&#x7531;&#x6BD2;&#x7D20;&#x53EF;&#x80FD; ADP-ribosylated&#x3002;&#x4F8B;&#x5982;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x4F53;&#x5916;&#x9176;&#x6CD5;&#x6D4B;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E; Ras2p &#x7531; ExoS &#x76F4;&#x63A5;&#x4FEE;&#x6539;&#x8BE5;&#x9175;&#x6BCD;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7684;&#x9175;&#x6BCD;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x96C6;&#x5408;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BA4;&#x5B9A; Bmh1p&#xFF0C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684; FAS&#xFF0C;&#x9175;&#x6BCD;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269; ExoS &#x8F85;&#x9176;&#x63ED;&#x793A;&#x90E8;&#x5206;&#x7EC6;&#x83CC;&#x6BD2;&#x7D20;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7684;&#x884C;&#x52A8;&#x4ECE;&#x9175;&#x6BCD;&#x4FDD;&#x5B88;&#x5230;&#x4EBA;&#x6743;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x5316;&#x5B66;&#x9057;&#x4F20;&#x7684;&#x7EFC;&#x5408;&#x6F14;&#x793A;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5C4F;&#x5E55;&#x53EF;&#x4EE5;&#x589E;&#x52A0;&#x4F20;&#x7EDF;&#x836F;&#x7269;&#x7B5B;&#x9009;&#x65B9;&#x6CD5;&#x548C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x65B0;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x5BF9;&#x8303;&#x56F4;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x7684;&#x53D1;&#x73B0;&#x3002;

&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x5047;&#x5355;&#x80DE;&#x83CC;&#x94DC;&#x7EFF; exoenzyme S &#x4F7F;&#x7528;&#x9175;&#x6BCD;&#x8868;&#x578B;&#x5C4F;&#x5E55;&#x7684;&#x6807;&#x8BC6;&#x3002;

Pseudomonas aeruginosa is an opportunistic human pathogen that is a key factor in the mortality of cystic fibrosis patients, and infection represents an increased threat for human health worldwide. Because resistance of Pseudomonas aeruginosa to antibiotics is increasing, new inhibitors of pharmacologically validated targets of this bacterium are needed. Here we demonstrate that a cell-based yeast phenotypic assay, combined with a large-scale inhibitor screen, identified small molecule inhibitors that can suppress the toxicity caused by heterologous expression of selected Pseudomonas aeruginosa ORFs. We identified the first small molecule inhibitor of Exoenzyme S (ExoS), a toxin involved in Type III secretion. We show that this inhibitor, exosin, modulates ExoS ADP-ribosyltransferase activity in vitro, suggesting the inhibition is direct. Moreover, exosin and two of its analogues display a significant protective effect against Pseudomonas infection in vivo. Furthermore, because the assay was performed in yeast, we were able to demonstrate that several yeast homologues of the known human ExoS targets are likely ADP-ribosylated by the toxin. For example, using an in vitro enzymatic assay, we demonstrate that yeast Ras2p is directly modified by ExoS. Lastly, by surveying a collection of yeast deletion mutants, we identified Bmh1p, a yeast homologue of the human FAS, as an ExoS cofactor, revealing that portions of the bacterial toxin mode of action are conserved from yeast to human. Taken together, our integrated cell-based, chemical-genetic approach demonstrates that such screens can augment traditional drug screening approaches and facilitate the discovery of new compounds against a broad range of human pathogens.

Identification of small molecule inhibitors of Pseudomonas aeruginosa exoenzyme S using a yeast phenotypic screen.

Pseudomonas aeruginosa est un pathog&#xE8;ne opportuniste humain qui est un facteur cl&#xE9; dans la mortalit&#xE9; des patients atteints de mucoviscidose, et l&#x26;#39;infection repr&#xE9;sente une menace croissante pour le monde entier pour la sant&#xE9; humaine. Parce que la r&#xE9;sistance de Pseudomonas aeruginosa aux antibiotiques est en augmentation, de nouveaux inhibiteurs de cibles valid&#xE9;es pharmacologiquement de cette bact&#xE9;rie sont n&#xE9;cessaires. Nous d&#xE9;montrons ici que un dosage de la levure &#xE0; base de cellules ph&#xE9;notypique, combin&#xE9; avec un inhibiteur de l&#x26;#39;&#xE9;cran &#xE0; grande &#xE9;chelle, a identifi&#xE9; des inhibiteurs de petites mol&#xE9;cules qui peuvent supprimer la toxicit&#xE9; caus&#xE9;e par l&#x26;#39;expression h&#xE9;t&#xE9;rologue de certains ORF Pseudomonas aeruginosa. Nous avons identifi&#xE9; l&#x26;#39;inhibiteur de la premi&#xE8;re petite mol&#xE9;cule exoenzyme S (ExoS), une toxine impliqu&#xE9;e dans la s&#xE9;cr&#xE9;tion de type III. Nous montrons que cet inhibiteur, exosin, module ExoS activit&#xE9; ADP-ribosyltransf&#xE9;rase in vitro, sugg&#xE9;rant l&#x26;#39;inhibition est directe. En outre, exosin et deux de ses analogues pr&#xE9;sentent un effet protecteur significatif contre l&#x26;#39;infection in vivo Pseudomonas. En outre, parce que le test a &#xE9;t&#xE9; effectu&#xE9; dans la levure, nous avons pu d&#xE9;montrer que des homologues de levure plusieurs des cibles connues de l&#x26;#39;homme sont susceptibles ExoS ADP-ribosyl&#xE9;e par la toxine. Par exemple, en utilisant un dosage enzymatique in vitro, nous d&#xE9;montrons que la levure est directement Ras2p modifi&#xE9; par ExoS. Enfin, en interrogeant une collection de mutants de d&#xE9;l&#xE9;tion de levure, nous avons identifi&#xE9; Bmh1p, un homologue de levure de la SAF humaine, comme un cofacteur ExoS, r&#xE9;v&#xE9;lant que des portions du mode de toxine bact&#xE9;rienne de l&#x26;#39;action sont conserv&#xE9;es de la levure &#xE0; l&#x26;#39;homme. Pris dans leur ensemble, notre int&#xE9;gr&#xE9;e &#xE0; base de cellules, produits chimiques g&#xE9;n&#xE9;tique approche d&#xE9;montre que de tels &#xE9;crans peuvent augmenter les approches traditionnelles de d&#xE9;pistage de drogues et de faciliter la d&#xE9;couverte de nouveaux compos&#xE9;s contre un large &#xE9;ventail d&#x26;#39;agents pathog&#xE8;nes humains.

Identification des petites mol&#xE9;cules inhibitrices de Pseudomonas aeruginosa exoenzyme S l&#x26;#39;aide d&#x26;#39;un &#xE9;cran de levure ph&#xE9;notypique

Pseudomonas Aeruginosa ist eine opportunistische menschlichen Krankheitserreger, die ein ma&szlig;geblicher Faktor f&uuml;r die Sterblichkeit von Mukoviszidose-Patienten und Infektion stellt eine erh&ouml;hte Gefahr f&uuml;r die menschliche Gesundheit weltweit. Da Widerstand von Pseudomonas Aeruginosa Antibiotika zunimmt, sind neue Inhibitoren von pharmakologisch validierten Zielen dieses Bakterium erforderlich. Hier zeigen wir, dass eine ph&auml;notypische zellbasierte Hefe-Assay, kombiniert mit einem gro&szlig; angelegten Inhibitor-Schirm, niedermolekularer Hemmer identifiziert, die die Toxizit&auml;t verursacht durch heterologe Expression von ausgew&auml;hlten Pseudomonas Aeruginosa ORFs unterdr&uuml;cken k&ouml;nnen. Wir identifizieren die erste niedermolekularer Inhibitor der Exoenzyme S (ExoS), ein Toxin Typ-III-Sekretion beteiligt. Wir zeigen, dass dieser Inhibitor, Exosin, moduliert ExoS ADP-Ribosyltransferase Aktivit&auml;t in vitro darauf hindeutet, dass die Hemmung direkte ist. Dar&uuml;ber hinaus zeigen Exosin und zwei der seine Analoga eine signifikante sch&uuml;tzende Wirkung gegen Pseudomonas-Infektion in-vivo. Dar&uuml;ber hinaus da die Probe in der Hefe durchgef&uuml;hrt wurde, konnten wir beweisen, dass mehrere Hefe Homologen der bekannten menschlichen ExoS Ziele wahrscheinlich ADP-Ribosylated durch das Toxin sind. Z. B. beweisen mithilfe eines in vitro enzymatischen Tests, wir, dass Hefe, die Ras2p direkt von ExoS ge&auml;ndert wird. Schlie&szlig;lich identifiziert Vermessung eine Auflistung von Hefe L&ouml;schung Mutanten, wir Bmh1p, eine Hefe-Homolog des menschlichen FAS, als ein Kofaktor ExoS offenbart, dass Teile der die bakterielle Toxin Wirkungsweise von Hefe zu Human konserviert werden. Zusammen genommen zeigt unser ganzheitlicher Ansatz f&uuml;r zellbasierte, Chemikalie-genetische, dass solche Bildschirme k&ouml;nnen traditionelle Drogen screening Ans&auml;tze erg&auml;nzen und erleichtern die Entdeckung neuer Verbindungen gegen zahlreiche Krankheitserreger beim Menschen.

Identifizierung von niedermolekularen Inhibitoren von Pseudomonas Aeruginosa Exoenzyme S mit einen ph&auml;notypischen Hefe-Bildschirm.

Pseudomonas aeruginosa &egrave; un patogeno opportunistico umano che &egrave; un fattore chiave per la mortalit&agrave; dei pazienti di fibrosi cistica, e infezione rappresenta una minaccia maggiore per la salute umana in tutto il mondo. Perch&eacute; sta aumentando la resistenza di Pseudomonas aeruginosa agli antibiotici, sono necessari nuovi inibitori di farmacologicamente convalidati obiettivi di questo batterio. Qui dimostriamo che un dosaggio fenotipica di lievito cell-based, combinato con uno schermo inibitore su larga scala, identificate piccole molecole inibitori che possono sopprimere la tossicit&agrave; causata dall&#39;espressione eterologa di selezionati Pseudomonas aeruginosa ORFs. Abbiamo identificato il primo inibitore di piccola molecola di Exoenzyme S (ExoS), una tossina coinvolta nella secrezione di tipo III. Ci mostrano che questo inibitore, exosin, modula ExoS ADP-ribosyltransferase attivit&agrave; in vitro, suggerendo l&#39;inibizione &egrave; diretto. Inoltre, exosin e due dei suoi analoghi visualizzare un significativo effetto protettivo contro l&#39;infezione da Pseudomonas in vivo. Inoltre, poich&eacute; l&#39;analisi &egrave; stata eseguita in lievito, siamo stati in grado di dimostrare che diversi cromosomi omologhi lievito degli obiettivi ExoS umani conosciuti sono probabilmente ADP-ribosylated dalla tossina. Ad esempio, mediante un&#39;analisi enzimatica in vitro, dimostrano che lievito che ras2p viene modificato direttamente da ExoS. Di misurazione una collezione di mutanti di delezione di lievito, &egrave; infine, abbiamo identificato Bmh1p, un omologo del lievito del FAS umano, come un cofattore ExoS, rivelando che porzioni della modalit&agrave; di azione di tossina batterica sono conservate dal lievito all&#39;uomo. Presi insieme, il nostro approccio integrato cell-based, chimica-genetica dimostra che tali schermi possono aumentare la droga tradizionale approcci di screening e facilitare la scoperta di nuovi composti contro una vasta gamma di agenti patogeni umani.

Identificazione delle piccole molecole inibitori di exoenzyme di Pseudomonas aeruginosa S utilizza uno schermo fenotipica di lievito.

&#x7DD1;&#x81BF;&#x83CC;&#x306F;&#x3001;&#x56A2;&#x80DE;&#x6027;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x75C7;&#x60A3;&#x8005;&#x306E;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7387;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8981;&#x56E0;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x65E5;&#x548C;&#x898B;&#x30D2;&#x30C8;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x611F;&#x67D3;&#x304C;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x5065;&#x5EB7;&#x3078;&#x306E;&#x4E16;&#x754C;&#x7684;&#x306A;&#x8105;&#x5A01;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6297;&#x751F;&#x7269;&#x8CEA;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x7DD1;&#x81BF;&#x83CC;&#x306E;&#x62B5;&#x6297;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x83CC;&#x306E;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x691C;&#x8A3C;&#x3057;&#x3001;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x9175;&#x6BCD;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;&#x9078;&#x629E;&#x3057;&#x305F;&#x7DD1;&#x81BF;&#x83CC;&#x306E;ORF&#x306E;&#x7570;&#x7A2E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x6BD2;&#x6027;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x9175;&#x7D20;S&#xFF08;EXOS&#xFF09;&#x3001;III&#x578B;&#x5206;&#x6CCC;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x6BD2;&#x7D20;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3001;exosin&#x306F;&#x3001;&#x6291;&#x5236;&#x304C;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3001;in vitro&#x3067;EXOS ADP-&#x30EA;&#x30DC;&#x30B7;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0;&#x306E;exosin&#x3068;2&#x306F;&#x3001;in vivo&#x3067;&#x30B7;&#x30E5;&#x30FC;&#x30C9;&#x30E2;&#x30CA;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x4FDD;&#x8B77;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x9175;&#x6BCD;&#x3067;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x305F;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;EXOS&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x9175;&#x6BCD;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x6BD2;&#x7D20;&#x306B;&#x3088;&#x308B;ADP-&#x30EA;&#x30DC;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D3;&#x30C8;&#x30ED;&#x9175;&#x7D20;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;Ras2p&#x76F4;&#x63A5;EXOS&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x6B20;&#x5931;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x30B3;&#x30EC;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x6BD2;&#x7D20;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x90E8;&#x5206;&#x306F;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;&#x304B;&#x3089;&#x30D2;&#x30C8;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;EXOS&#x306E;&#x88DC;&#x56E0;&#x5B50;&#x3068;&#x3057;&#x3066;Bmh1p&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;FAS&#x306E;&#x9175;&#x6BCD;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D71;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30BB;&#x30EB;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x3001;&#x5316;&#x5B66;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x7684;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x753B;&#x9762;&#x304C;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x85AC;&#x5264;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x306E;&#x5E83;&#x3044;&#x7BC4;&#x56F2;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x767A;&#x898B;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x9175;&#x6BCD;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x7DD1;&#x81BF;&#x83CC;&#x5916;&#x9175;&#x7D20;S&#x306E;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;

&#xB179; &#xB18D; &#xADE0;&#xC740; &#xB0AD; &#xC131; &#xC12C;&#xC720; &#xC99D; &#xD658;&#xC790;&#xC758; &#xC0AC;&#xB9DD;&#xB960;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC694;&#xC18C;&#xB294; &#xAE30;&#xD68C;&#xC8FC;&#xC758;&#xC801; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4; &#xC774;&#xBA70; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC804;&#xC138;&#xACC4; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xAC74;&#xAC15;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC99D;&#xAC00; &#xC704;&#xD611;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB179; &#xB18D; &#xADE0; &#xD56D;&#xC0DD;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC800;&#xD56D;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0;&#xC774; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC758; pharmacologically &#xAC80;&#xC99D;&#xB41C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xB300;&#xADDC;&#xBAA8; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xD654;&#xBA74;&#xACFC; &#xD568;&#xAED8; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xBC18; phenotypic &#xC2DC;&#xD5D8; &#xC120;&#xD0DD;&#xD55C; &#xB179; &#xB18D; &#xADE0; ORFs heterologous &#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778; &#xD55C; &#xB3C5;&#xC131;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB41C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Exoenzyme S (ExoS) &#xC720;&#xD615; III &#xBD84; &#xBE44;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xB3C5; &#xC18C;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBB3C; &#xD655;&#xC778;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294;&#xC774; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xBCF4;&#xAE30; exosin, &#xC2DC;&#xD5D8;&#xAD00;, &#xC9C1;&#xC811; &#xC800;&#xD574; &#xC81C;&#xC548; ExoS ADP-ribosyltransferase &#xD65C;&#xB3D9; &#xBCC0;&#xC870;. &#xB610;&#xD55C;, exosin&#xC640; &#xADF8; analogues&#xC758; &#xB450; &#xC288; &#xB3C4;&#xBAA8; &#xB098; &#xC2A4; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC608;&#xBC29; &#xD6A8;&#xACFC; &#xD45C;&#xC2DC;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xD6A8; &#xBAA8;&#xC5D0; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; ExoS &#xB300;&#xC0C1;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xD6A8; &#xBAA8; homologues&#xB294; &#xB3C5; &#xC18C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; ADP ribosylated &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC608;&#xB97C; &#xB4E4;&#xC5B4;, ras2p&#xB97C; &#xC9C1;&#xC811; ExoS &#xC218;&#xC815; &#xADF8; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xCCB4; &#xC678; &#xD6A8;&#xC18C; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC0AD;&#xC81C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xCEEC;&#xB809;&#xC158;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558; &#xC5EC; &#xD30C;&#xC545; Bmh1p, &#xC778;&#xAC04;&#xC758; FAS&#xC758; &#xD6A8; &#xBAA8; homologue ExoS cofactor&#xB85C; &#xB4DC;&#xB7EC;&#xB0B4;&#xB294; &#xD589;&#xB3D9; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xB3C5; &#xC18C; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80; &#xC778;&#xAC04;&#xC744; &#xB204; &#xB8E9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xC874; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xD1B5;&#xD569;&#xB41C; &#xC140; &#xAE30;&#xBC18;, &#xD654;&#xD559; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC811;&#xADFC; &#xAC19;&#xC740; &#xC2A4;&#xD06C;&#xB9B0; &#xC218; &#xC811;&#xADFC;&#xC744; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558;&#xB294; &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC778; &#xC57D;&#xBB3C;&#xC744; &#xBCF4;&#xAC15; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xBC1C;&#xACAC;&#xC744; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB179; &#xB18D; &#xADE0; exoenzyme &#xD6A8; &#xBAA8; phenotypic &#xD654;&#xBA74;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; S&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;.

Pseudomonas aeruginosa es un pat&#xF3;geno oportunista humano, que es un factor clave en la mortalidad de pacientes con fibrosis qu&#xED;stica e infecci&#xF3;n representa una amenaza creciente para todo el mundo para la salud humana. Debido a la resistencia de Pseudomonas aeruginosa a los antibi&#xF3;ticos est&#xE1; aumentando, nuevos inhibidores de los objetivos farmacol&#xF3;gicamente validados de esta bacteria son necesarios. Aqu&#xED; nos demuestran que un ensayo basado en c&#xE9;lulas de levadura fenot&#xED;pica, combinado con un inhibidor de la pantalla a gran escala, identificado inhibidores de mol&#xE9;culas peque&#xF1;as que pueden suprimir la toxicidad causada por la expresi&#xF3;n heter&#xF3;loga de seleccionados ORFs de Pseudomonas aeruginosa. Se identific&#xF3; el primer inhibidor de mol&#xE9;cula peque&#xF1;a de exoenzima S (Exos), una toxina involucrada en la secreci&#xF3;n de tipo III. Se demuestra que este inhibidor, exosin, modula Exos ADP-ribosiltransferasa actividad in vitro, sugiriendo que la inhibici&#xF3;n es directa. Por otra parte, exosin y dos de sus an&#xE1;logos de mostrar un efecto protector significativo contra la infecci&#xF3;n por Pseudomonas en vivo. Adem&#xE1;s, debido a que el ensayo se realiz&#xF3; en la levadura, hemos podido demostrar que varios hom&#xF3;logos de levadura de los objetivos conocidos Exos humanos es probable ADP-ribosilado por la toxina. Por ejemplo, utilizando un ensayo enzim&#xE1;tico in vitro, hemos demostrado que la levadura Ras2p est&#xE1; directamente modificada por Exos. Por &#xFA;ltimo, por la topograf&#xED;a de una colecci&#xF3;n de mutantes de deleci&#xF3;n de levadura, hemos identificado Bmh1p, un hom&#xF3;logo de levadura de la FAS humano, como un cofactor Exos, revelando que las porciones de la toxina bacteriana modo de acci&#xF3;n de la levadura se conservan a humano. Tomados en conjunto, nuestro sistema integrado basado en c&#xE9;lulas, qu&#xED;mico-gen&#xE9;tico enfoque demuestra que tales pantallas pueden aumentar los m&#xE9;todos tradicionales de selecci&#xF3;n de f&#xE1;rmacos y facilitar el descubrimiento de nuevos compuestos contra una amplia gama de pat&#xF3;genos humanos.

La identificaci&#xF3;n de inhibidores de mol&#xE9;culas peque&#xF1;as de Pseudomonas aeruginosa S exoenzima Con una pantalla de levadura fenot&#xED;pica

&#x4EA4;&#x4E92;&#x5F0F;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x6D89;&#x53CA;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x7269;&#x7406;&#x534F;&#x4F1A;&#x548C;&#x786E;&#x7ACB;&#x4E86;&#x5168;&#x7403;&#xFF0C;&#x75BE;&#x75C5;-&#x548C;&#x901A;&#x8DEF;-&#x7279;&#x5B9A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7F51;&#x7EDC;&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x3001; &#x5B83;&#x4EEC;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#xFF0C;&#x548C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x7D20;&#x56FA;&#x6709;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x548C;&#x7ED3;&#x6784;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#x5E26;&#x6765;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x6311;&#x6218;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7F51;&#x7EDC;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x9700;&#x8981;&#x4F7F;&#x7528;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x521B;&#x65B0;&#x548C;&#x5DE7;&#x5999;&#x7684;&#x529E;&#x6CD5;&#x7684;&#x63A2;&#x7D22;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x8FD1;&#x5E74;&#x6765;&#x76EE;&#x7779;&#x4E86;&#x4EE4;&#x4EBA;&#x632F;&#x594B;&#x7684;&#x4E8B;&#x6001;&#x53D1;&#x5C55;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x6620;&#x5C04;&#x548C;&#x975E;&#x5E38;&#x5927;&#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#x7F51;&#x7EDC;&#xFF0C;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x5728;&#x6A21;&#x5F0F;&#x751F;&#x7269;&#x4F53;&#x7684;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x3002;&#x5728;&#x4E0D;&#x4E45;&#x7684;&#x5C06;&#x6765;&#xFF0C;&#x6CE8;&#x610F;&#x5C06;&#x8F6C;&#x5411;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#x7F51;&#x7EDC;&#x548C;&#x5176;&#x5728;&#x836F;&#x7269;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E2D;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x548C;&#x5BF9;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x7406;&#x89E3;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x6B21;&#x5BA1;&#x67E5;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x51FA;&#x4E86;&#x4EE4;&#x4EBA;&#x5370;&#x8C61;&#x6DF1;&#x523B;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#x7BB1;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x9884;&#x8BA1;&#x5728;&#x4ECA;&#x540E;&#x51E0;&#x5E74;&#x662F;&#x4EA4;&#x4E92;&#x5F0F;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;

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Interactive proteomics addresses the physical associations among proteins and establishes global, disease-, and pathway-specific protein interaction networks. The inherent chemical and structural diversity of proteins, their different expression levels, and their distinct subcellular localizations pose unique challenges for the exploration of these networks, necessitating the use of a variety of innovative and ingenious approaches. Consequently, recent years have seen exciting developments in protein interaction mapping and the establishment of very large interaction networks, especially in model organisms. In the near future, attention will shift to the establishment of interaction networks in humans and their application in drug discovery and understanding of diseases. In this review, we present an impressive toolbox of different technologies that we expect to be crucial for interactive proteomics in the coming years.

Interactive proteomics: what lies ahead?

Prot&#xE9;omique Interactive r&#xE9;pond aux associations physiques entre les prot&#xE9;ines et &#xE9;tablit mondiaux, la maladie, et la voie de r&#xE9;seaux sp&#xE9;cifiques d&#x26;#39;interactions prot&#xE9;iques. Le produit chimique inh&#xE9;rente et de la diversit&#xE9; structurale des prot&#xE9;ines, leurs niveaux d&#x26;#39;expression diff&#xE9;rents, et leurs localisations subcellulaires distinctes posent des d&#xE9;fis uniques pour l&#x26;#39;exploration de ces r&#xE9;seaux, ce qui n&#xE9;cessite l&#x26;#39;utilisation d&#x26;#39;une vari&#xE9;t&#xE9; d&#x26;#39;approches novatrices et ing&#xE9;nieuses. Par cons&#xE9;quent, ces derni&#xE8;res ann&#xE9;es ont connu des d&#xE9;veloppements passionnants dans la cartographie des interactions prot&#xE9;ine-prot&#xE9;ine et la mise en place des r&#xE9;seaux d&#x26;#39;interactions tr&#xE8;s grandes, surtout dans des organismes mod&#xE8;les. Dans un proche avenir, la priorit&#xE9; sera la mise en place des r&#xE9;seaux d&#x26;#39;interactions chez les &#xEA;tres humains et leur application dans la d&#xE9;couverte de m&#xE9;dicaments et de la compr&#xE9;hension des maladies. Dans cette revue, nous pr&#xE9;sentons une bo&#xEE;te &#xE0; outils impressionnant de technologies diff&#xE9;rentes que nous attendons d&#x26;#39;&#xEA;tre cruciale pour la prot&#xE9;omique interactifs dans les ann&#xE9;es &#xE0; venir.

Prot&#xE9;omique Interactive: Quel avenir?

Interaktive Proteomics befasst sich die physischen Zuordnungen zwischen Proteinen und stellt global, Krankheit- und Weg-spezifische Protein Interaktion Netzwerke. Die inh&auml;rente chemische und strukturelle Vielfalt der Proteine, ihre verschiedenen Stufen und ihre unterschiedliche subzellul&auml;re Lokalisierung stellen einzigartige Herausforderungen f&uuml;r die Erforschung dieser Netze erfordern die Verwendung einer Vielzahl von innovativen und genialen Ans&auml;tze. Folglich haben den letzten Jahren spannende Entwicklungen in Protein-Interaktion-Mapping und die Einrichtung von Interaktionsnetzwerken sehr gro&szlig;e, vor allem in Modellorganismen gesehen. In naher Zukunft, verschiebt sich die Aufmerksamkeit bei der Errichtung von Interaktionsnetzwerken beim Menschen und ihre Anwendung in der Drogeentdeckung und Verst&auml;ndnis der Krankheiten. In diesem Bericht stellen wir eine beeindruckende Toolbox verschiedener Technologien, die wir erwarten, dass in den kommenden Jahren f&uuml;r interaktive Proteomics von entscheidender Bedeutung sein.

Interaktive Proteomics: was vor uns liegt?

Proteomica interattiva affronta le associazioni fisiche tra proteine e stabilisce globale, malattia- e reti di interazione di proteine specifiche del percorso. La diversit&agrave; intrinseca chimica e strutturale delle proteine, i livelli di espressione diversa e loro localizzazione sottocellulare distinti pongono sfide uniche per l&#39;esplorazione di queste reti, che richiede l&#39;uso di una variet&agrave; di approcci innovativi e geniale. Di conseguenza, anni recenti hanno visto interessanti sviluppi nella mappatura di interazione della proteina e la creazione di reti di interazione molto grandi, soprattutto in organismi modello. Nel prossimo futuro, la attenzione si sposter&agrave; alla comprensione delle malattie e la creazione di reti di interazione in esseri umani e la loro applicazione nella scoperta della droga. In questa recensione, presentiamo un&#39;impressionante toolbox di differenti tecnologie che ci aspettiamo di essere cruciale per la proteomica interattivo nei prossimi anni.

Proteomica interattivo: che cosa ci attende?

&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x9593;&#x306E;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x306A;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3092;&#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30B9;&#x3068;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x3001;&#x75BE;&#x60A3;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x767A;&#x73FE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5C40;&#x5728;&#x306E;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x9769;&#x65B0;&#x7684;&#x304B;&#x3064;&#x72EC;&#x5275;&#x7684;&#x306A;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x63A2;&#x67FB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x8AB2;&#x984C;&#x3092;&#x63D0;&#x8D77;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&#x8FD1;&#x5E74;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x306B;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x751F;&#x7269;&#x3067;&#x3001;&#x30A8;&#x30AD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3068;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x8A2D;&#x7ACB;&#x3092;&#x898B;&#x3066;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8FD1;&#x3044;&#x5C06;&#x6765;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6CE8;&#x610F;&#x304C;&#x4EBA;&#x9593;&#x3068;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x5275;&#x85AC;&#x3068;&#x7406;&#x89E3;&#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7528;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x69CB;&#x7BC9;&#x306B;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7DCF;&#x8AAC;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4ECA;&#x5F8C;&#x6570;&#x5E74;&#x9593;&#x3067;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x671F;&#x5F85;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x6280;&#x8853;&#x306E;&#x5370;&#x8C61;&#x7684;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xB300;&#xD654;&#xD615; proteomics &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAC04;&#xC758; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xD574;&#xACB0; &#xD558; &#xACE0; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xC124;&#xC815; &#xACBD;&#xB85C; &#xD2B9;&#xC815; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xBC0F; &#xC9C8;&#xBCD1;-. &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xC2DD; &#xC218;&#xC900;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xACE0;&#xC720;&#xD55C; subcellular &#xAD6D;&#xBD80;&#xC758; &#xACE0;&#xC720;&#xD55C; &#xD654;&#xD559;&#xC801; &#xBC0F; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD601;&#xC2E0;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xB3C5;&#xCC3D;&#xC801;&#xC778; &#xC811;&#xADFC;&#xBC95;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xD544;&#xC694;&#xB85C; &#xD558;&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC758; &#xD0D0;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xB3C4;&#xC804; &#xD3EC;&#xC988;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xCD5C;&#xADFC; &#xBA87; &#xB144; &#xB3D9;&#xC548; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB9E4;&#xD551; &#xD765;&#xBBF8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBC0F; &#xBAA8;&#xD615; &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xD788; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xD070; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC758; &#xC124;&#xB9BD;&#xC744; &#xBCF4;&#xC558;&#xB2E4;. &#xAC00;&#xAE4C;&#xC6B4; &#xC7A5;&#xB798;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC2EC; &#xC778;&#xAC04;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC640; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;-&#xAC04;&#xC5FC; &#xC57D;&#xBB3C; &#xBC1C;&#xACAC;&#xC5D0; &#xC124;&#xB9BD; &#xD558; &#xACE0; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC758; &#xC774;&#xD574;&#xB85C; &#xC774;&#xB3D9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xAC80;&#xD1A0;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD5A5;&#xD6C4; &#xBA87; &#xB144; &#xB3D9;&#xC548;&#xC5D0; &#xB300;&#xD654;&#xD615; proteomics&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xB300; &#xD55C; &#xAD00;&#xAC74;&#xC774; &#xB420; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xAE30;&#xB300; &#xD558;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xAE30;&#xC220;&#xC758; &#xC778;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xB3C4;&#xAD6C; &#xC0C1;&#xC790; &#xC18C;&#xAC1C;.

&#xB300;&#xD654;&#xD615; proteomics: &#xBB34;&#xC2A8; &#xAEC0; &#xAC00;&#xC694;?

Prote&#xF3;mica interactivos se ocupa de las asociaciones f&#xED;sicas entre prote&#xED;nas y establece globales, la enfermedad, y la v&#xED;a de redes espec&#xED;ficas de interacci&#xF3;n de prote&#xED;nas. La qu&#xED;mica intr&#xED;nseca y su diversidad estructural de las prote&#xED;nas, sus niveles de expresi&#xF3;n diferentes, y sus localizaciones subcelulares distintas plantean dificultades singulares para la exploraci&#xF3;n de estas redes, lo que exige el uso de una variedad de enfoques innovadores e ingeniosos. En consecuencia, durante los &#xFA;ltimos a&#xF1;os han visto desarrollos interesantes en la cartograf&#xED;a de interacci&#xF3;n de prote&#xED;nas y el establecimiento de redes de interacci&#xF3;n muy grandes, especialmente en organismos modelo. En un futuro pr&#xF3;ximo, la atenci&#xF3;n se desplazar&#xE1; hacia la creaci&#xF3;n de redes de interacci&#xF3;n en los seres humanos y su aplicaci&#xF3;n en el descubrimiento de f&#xE1;rmacos y la comprensi&#xF3;n de las enfermedades. En esta revisi&#xF3;n, se presenta una caja de herramientas impresionante de diferentes tecnolog&#xED;as que esperamos que ser&#xE1; crucial para la prote&#xF3;mica interactivos en los pr&#xF3;ximos a&#xF1;os.

Prote&#xF3;mica interactivos: &#xBF;Qu&#xE9; depara el futuro?

&#x8003;&#x8651;&#x5230;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528; &#xFF08;&#x751F;&#x4EA7;&#x8005;&#x4EF7;&#x683C;&#x6307;&#x6570;) &#x89C4;&#x8303;&#x51E0;&#x4E4E;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x751F;&#x6D3B;&#x8FC7;&#x7A0B; &#xFF1B;&#x63A2;&#x7D22;&#x5168;&#x7403;&#x548C;&#x901A;&#x8DEF;&#x7279;&#x5B9A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7F51;&#x7EDC;&#x9884;&#x8BA1;&#x5C06;&#x4EA7;&#x751F;&#x91CD;&#x5927;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x75BE;&#x75C5;&#x548C;&#x836F;&#x7269;&#x53D1;&#x73B0;&#x7684;&#x7406;&#x89E3;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x53D1;&#x5C55;&#x548C;&#x5E94;&#x7528;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E4B;&#x95F4;&#x5730;&#x5740;&#x7269;&#x7406;&#x534F;&#x4F1A;&#x662F;&#x5177;&#x6709;&#x91CD;&#x8981;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x4ECA;&#x5929;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x6700;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x548C;&#x6700;&#x6210;&#x529F;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x6765;&#x8BC4;&#x4F30;&#x751F;&#x4EA7;&#x8005;&#x4EF7;&#x683C;&#x6307;&#x6570;&#x662F;&#x9175;&#x6BCD;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4;&#x7CFB;&#x7EDF; &#xFF08;&#x4E91;&#x5929;)&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x6982;&#x8FF0;&#x4E91;&#x5929;&#x548C;&#x53D8;&#x578B;&#x6280;&#x672F;&#x5728;&#x9175;&#x6BCD;&#x548C;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x5F53;&#x524D;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x4E0A;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6DF7;&#x5408;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5C06;&#x4E0D;&#x4EC5;&#x7EE7;&#x7EED;&#x5728;&#x86CB;&#x767D; interactomes &#x7684;&#x8BC4;&#x4F30;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5C06;&#x4E5F;&#x6210;&#x4E3A;&#x5C0F;&#x8BF4;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x91CD;&#x8981;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x5E72;&#x9884;&#x6CBB;&#x7597;&#x8BE5;&#x76EE;&#x6807;&#x86CB;&#x767D;&#x4EA4;&#x4E92;&#x63A5;&#x53E3;&#x3002;

&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4;&#x6280;&#x672F;&#x5728;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

Given that protein-protein interactions (PPIs) regulate nearly every living process; the exploration of global and pathway-specific protein interaction networks is expected to have major implications in the understanding of diseases and for drug discovery. Consequently, the development and application of methodologies that address physical associations among proteins is of major importance in today's proteomics research. The most widely and successfully used methodology to assess PPIs is the yeast two-hybrid system (YTH). Here we present an overview on the current applications of YTH and variant technologies in yeast and mammalian systems. Two-hybrid-based methods will not only continue to have a dominant role in the assessment of protein interactomes but will also become important in the development of novel compounds that target protein interaction interfaces for therapeutic intervention.

Two-hybrid technologies in proteomics research.

&#xC9;tant donn&#xE9; que les interactions entre prot&#xE9;ines (IPP) de r&#xE9;glementer presque tous les processus de vie, l&#x26;#39;exploration de la voie mondiaux et sp&#xE9;cifique r&#xE9;seaux d&#x26;#39;interactions prot&#xE9;iques devrait avoir des implications majeures dans la compr&#xE9;hension des maladies et la d&#xE9;couverte de m&#xE9;dicaments. Par cons&#xE9;quent, le d&#xE9;veloppement et l&#x26;#39;application des m&#xE9;thodologies qui r&#xE9;pondent associations physiques entre les prot&#xE9;ines est d&#x26;#39;une importance majeure dans la recherche d&#x26;#39;aujourd&#x26;#39;hui la prot&#xE9;omique. La m&#xE9;thode la plus largement utilis&#xE9;e avec succ&#xE8;s pour &#xE9;valuer les IPP est la levure syst&#xE8;me double-hybride (YTH). Nous pr&#xE9;sentons ici un aper&#xE7;u sur les applications actuelles des technologies de YTH et la variante de la levure et les mammif&#xE8;res. Double-hybride &#xE0; base de m&#xE9;thodes permettra non seulement de continuer &#xE0; avoir un r&#xF4;le dominant dans l&#x26;#39;&#xE9;valuation des interactomes prot&#xE9;ines, mais deviendra &#xE9;galement important dans le d&#xE9;veloppement de nouveaux compos&#xE9;s que les interfaces d&#x26;#39;interaction prot&#xE9;ine cible d&#x26;#39;intervention th&#xE9;rapeutique.

Deux hybrides Technologies de la recherche en prot&#xE9;omique

Da die Protein-Protein Interaktionen (PPIs) fast jeder lebendiger Prozess regulieren; die Erforschung des globalen und Weg-spezifische Protein Interaktion Netze d&uuml;rfte Hauptimplikationen im Verst&auml;ndnis von Krankheiten und f&uuml;r Drogeentdeckung haben. Folglich, Forschung, Entwicklung und Anwendung von Methoden, dass physische Adresse-Zuordnungen zwischen Proteinen ist von gro&szlig;er Bedeutung in der heutigen Proteomics. Die am meisten weit und erfolgreich verwendete Methodik EPI zu beurteilen ist das Hefe-zwei-Hybrid-System (YTH). Hier pr&auml;sentieren wir eine &Uuml;bersicht &uuml;ber die aktuellen Antr&auml;ge von YTH und variant Technologien in Hefe und S&auml;ugetier-Systeme. Zwei-Hybrid-basierten Methoden werden nicht nur weiterhin eine dominierende Rolle bei der Beurteilung der Protein-Interactomes haben, sondern wird auch wichtig f&uuml;r die Entwicklung neuartiger Verbindungen dieser Ziel-Protein-Interaktion-Interfaces f&uuml;r therapeutische Intervention.

Zwei-Hybrid-Technologien in der Proteomics-Forschung.

Dato che le interazioni proteina-proteina (PPI) regolano quasi ogni processo vivente; l&#39;esplorazione di reti di interazione della proteina globali e specifici del percorso dovrebbe avere importanti implicazioni nella comprensione delle malattie e per la scoperta della droga. Di conseguenza, lo sviluppo e l&#39;applicazione di metodologie che indirizzo fisico associazioni tra le proteine &egrave; di grande importanza in proteomics odierno di ricerca. La metodologia pi&ugrave; ampiamente e correttamente utilizzata per valutare il ppi &egrave; il sistema di due-ibrido del lievito (YTH). Qui vi presentiamo una panoramica sulle applicazioni attuali di YTH e variante tecnologie nei sistemi dei mammiferi e lievito. Metodi basati su due-ibrido saranno non solo continuare ad avere un ruolo dominante nella valutazione della proteina interactomes, ma sar&agrave; anche diventare importante nello sviluppo del romanzo di composti che interfacce di interazione proteina bersaglio per un intervento terapeutico.

Two-hybrid technologies in ricerca proteomica.

&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; - &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x85AC;&#xFF08;PPI&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x307B;&#x307C;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x751F;&#x547D;&#x904E;&#x7A0B;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x8003;&#x3048;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x3068;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x63A2;&#x67FB;&#x306F;&#x3001;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x3084;&#x5275;&#x85AC;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x671F;&#x5F85;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x9593;&#x306E;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x306A;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3092;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8AD6;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3068;&#x5FDC;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x4ECA;&#x65E5;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x6700;&#x3082;&#x5E83;&#x304F;&#x3001;&#x6B63;&#x5E38;&#x306B;PPI&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8AD6;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x9175;&#x6BCD;&#x30C4;&#x30FC;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#xFF08;YTH&#xFF09;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7CFB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;YTH&#x3068;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x6280;&#x8853;&#x306E;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x6982;&#x8981;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; two-hybrid&#x6CD5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;interactomes&#x306E;&#x8A55;&#x4FA1;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x7D9A;&#x884C;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x6CBB;&#x7642;&#x7684;&#x4ECB;&#x5165;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30B9;&#x304C;&#x65B0;&#x898F;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x3002;

&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x30C4;&#x30FC;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#xB7;&#x30C6;&#x30AF;&#x30CE;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC;&#x30BA;

&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; (PPIs) &#xADDC;&#xC81C; &#xAC70;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC0DD;&#xD65C; &#xACFC;&#xC815;; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xBC0F; &#xD1B5;&#xB85C; &#xAD00;&#xB828; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC758; &#xD0D0;&#xC0AC; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xC57D;&#xBB3C; &#xBC1C;&#xACAC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xD574;&#xC5D0; &#xD070; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE60; &#xC804;&#xB9DD; &#xC774;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAC04;&#xC758; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801; &#xC5F0;&#xACB0; &#xC8FC;&#xC18C;&#xB294; &#xC624;&#xB298;&#xB0A0;&#xC758; proteomics&#xC5D0; &#xC8FC;&#xC694; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xB860;&#xC758; &#xC801;&#xC6A9; &#xC5F0;&#xAD6C;. Ppis&#xB97C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xAC00;&#xC7A5; &#xB110;&#xB9AC; &#xD558; &#xACE0; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xB860;&#xC740; &#xD6A8; &#xBAA8; 2 &#xC7A1;&#xC885; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; (YTH). &#xC5EC;&#xAE30; &#xC120;&#xBB3C;&#xC774; YTH &#xBC0F; &#xD6A8; &#xBAA8;&#xC640; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xBCC0;&#xD615; &#xAE30;&#xC220;&#xC758; &#xD604;&#xC7AC; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC1C;&#xC694;. 2 &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xAE30;&#xBC18; &#xBC29;&#xBC95; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; interactomes&#xC758; &#xD3C9;&#xAC00;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xACC4;&#xC18D; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xAC83;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB610;&#xD55C; &#xB420; &#xC18C;&#xC124; &#xBC1C;&#xC804;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC801; &#xAC1C;&#xC785;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB300;&#xC0C1; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638;&#xC791;&#xC6A9; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4; &#xD558; &#xAC83; &#xC774;&#xB2E4;.

&#xB2E8;&#xBC31;&#xCCB4;&#xD559; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; 2-&#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xAE30;&#xC220;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Teniendo en cuenta que las interacciones prote&#xED;na-prote&#xED;na (IBP) regulan casi todos los procesos vivos, la exploraci&#xF3;n de las redes de interacci&#xF3;n global y espec&#xED;fica de la v&#xED;a en prote&#xED;nas se espera que tenga importantes implicaciones en la comprensi&#xF3;n de las enfermedades y el descubrimiento de f&#xE1;rmacos. En consecuencia, el desarrollo y aplicaci&#xF3;n de metodolog&#xED;as que se ocupan de las asociaciones f&#xED;sicas entre las prote&#xED;nas es de gran importancia en la investigaci&#xF3;n de hoy en d&#xED;a la prote&#xF3;mica. La metodolog&#xED;a m&#xE1;s ampliamente y con &#xE9;xito para evaluar los IBP es la levadura sistema h&#xED;brido de dos (YTH). Aqu&#xED; presentamos una visi&#xF3;n general de las aplicaciones actuales de las tecnolog&#xED;as de YTH y la variante de la levadura y los sistemas de mam&#xED;feros. Dos h&#xED;bridos basados &#x200B;&#x200B;en m&#xE9;todos no s&#xF3;lo seguir&#xE1; teniendo un papel dominante en la evaluaci&#xF3;n de interactomes prote&#xED;nas, pero tambi&#xE9;n ser&#xE1; importante en el desarrollo de nuevos compuestos que se dirigen a las interfaces de interacci&#xF3;n de prote&#xED;nas para la intervenci&#xF3;n terap&#xE9;utica.

De dos h&#xED;bridos de Tecnolog&#xED;as en la investigaci&#xF3;n prote&#xF3;mica

&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x5DF2;&#x5F00;&#x59CB;&#x9610;&#x660E;&#x5168;&#x7403;&#x7F51;&#x7EDC;&#x7684;&#x6E38;&#x79BB;&#x548C;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x7531;&#x6B64;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684; interactome &#x5730;&#x56FE;&#x65B9;&#x4FBF;&#x8BB8;&#x591A;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3001; &#x86CB;&#x767D;&#x8D29;&#x8FD0;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x8C03;&#x8282;&#x3002;&#x7531;&#x4E8E;&#x758F;&#x6C34;&#x6027;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176;&#x7B49;&#xFF0C;G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x53D7;&#x4F53;&#x3001; &#x819C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x78F7;&#x9178;&#x9176;&#x548C;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x4F17;&#x6240;&#x5468;&#x77E5;&#x7684;&#x56F0;&#x96BE;&#xFF0C;&#x7814;&#x7A76;&#x5B83;&#x4EEC;&#x4E0E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x5206;&#x5B50;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x6216;&#x4EFB;&#x4F55;&#x5176;&#x4ED6;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x4F19;&#x4F34;&#x5173;&#x7CFB;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x5E38;&#x89C4;&#x7684;&#x9175;&#x6BCD;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4;&#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x7B80;&#x5355;&#x548C;&#x53EF;&#x9760;&#x7684;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x786E;&#x5B9A;&#x7279;&#x5B9A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x5B83;&#x88AB;&#x9650;&#x5236;&#x5176;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x62C6;&#x5206;&#x6CDB;&#x7D20;&#x819C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7684;&#x9175;&#x6BCD;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4;&#x6D4B;&#x5B9A; &#xFF08;&#x795E;&#x8BDD;&#xFF09; &#x5DF2;&#x88AB;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x5DE5;&#x5177;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x4EBA;&#x4EEC;&#x5F97;&#x4EE5;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x795E;&#x8BDD;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6CDB;&#x7D20;&#x88AB;&#x5206;&#x5272;&#x6210;&#x4E86;&#x4E24;&#x90E8;&#x5206;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x81F3;&#x5C11;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x4E4B;&#x4E00;&#x5C31;&#x662F;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x819C;&#x3002;&#x540E;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6CDB;&#x7D20;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x534A;&#x6708;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4;&#xFF0C;&#x800C;&#x878D;&#x5408;&#x5230;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x88AB;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x8FDB;&#x5165;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x8BB0;&#x8005;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x3002;&#x76EE;&#x524D;&#xFF0C;&#x5927;&#x578B;&#x795E;&#x8BDD;&#x5C4F;&#x5E55;&#x4F7F;&#x7528; cDNA &#x6216; gDNA &#x5E93;&#x6267;&#x884C;&#x6765;&#x6807;&#x8BC6;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6620;&#x5C04;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4F19;&#x4F34;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x8BC1;&#x660E;&#x795E;&#x8BDD;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x51FA;&#x5DE8;&#x5927;&#x8D21;&#x732E;&#x7684;&#x819C;&#x86CB;&#x767D; interactome &#x6620;&#x5C04;&#x5230;&#x6F84;&#x6E05;&#x7684;&#x6709;&#x529B;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;

&#x4F7F;&#x7528;&#x62C6;&#x5206;&#x6CDB;&#x7D20;&#x819C;&#x9175;&#x6BCD;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4; (&#x795E;&#x8BDD;) &#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x4F53;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

Recent research has begun to elucidate the global network of cytosolic and membrane protein interactions. The resulting interactome map facilitates numerous biological studies, including those for cell signalling, protein trafficking and protein regulation. Due to the hydrophobic nature of membrane proteins such as tyrosine kinases, G-protein coupled receptors, membrane bound phosphatases and transporters it is notoriously difficult to study their relationship to signaling molecules, the cytoskeleton, or any other interacting partners. Although conventional yeast-two hybrid is a simple and robust technique that is effective in the identification of specific protein-protein interactions, it is limited in its use for membrane proteins. However, the split-ubiquitin membrane based yeast two-hybrid assay (MYTH) has been described as a tool that allows for the identification of membrane protein interactions. In the MYTH system, ubiquitin has been split into two halves, each of which is fused to a protein, at least one of which is membrane bound. Upon interaction of these two proteins, the two halves of ubiquitin are reconstituted and a transcription factor that is fused to the membrane protein is released. The transcription factor then enters the nucleus and activates transcription of reporter genes. Currently, large-scale MYTH screens using cDNA or gDNA libraries are performed to identify and map the binding partners of various membrane proteins. Thus, the MYTH system is proving to be a powerful tool for the elucidation of specific protein-protein interactions, contributing greatly to the mapping of the membrane protein interactome.

Analysis of membrane protein complexes using the split-ubiquitin membrane yeast two-hybrid (MYTH) system.

Des recherches r&#xE9;centes ont commenc&#xE9; &#xE0; &#xE9;lucider le r&#xE9;seau mondial des interactions entre prot&#xE9;ines cytosoliques et membranaires. La carte qui en r&#xE9;sulte facilite interactome de nombreuses &#xE9;tudes biologiques, y compris ceux pour la signalisation cellulaire, le trafic des prot&#xE9;ines et des prot&#xE9;ines. En raison de la nature hydrophobe des prot&#xE9;ines membranaires tels que tyrosine kinases, r&#xE9;cepteurs coupl&#xE9;s aux prot&#xE9;ines G, des phosphatases li&#xE9;es &#xE0; la membrane et les transporteurs, il est notoirement difficile &#xE0; &#xE9;tudier leur relation avec les mol&#xE9;cules de signalisation, le cytosquelette, ou des autres partenaires qui interagissent. Bien que classique levure double hybride est une technique simple et robuste qui est efficace dans l&#x26;#39;identification de certaines interactions prot&#xE9;ine-prot&#xE9;ine, elle est limit&#xE9;e dans son utilisation pour des prot&#xE9;ines membranaires. Toutefois, la levure membrane split-ubiquitine base dosage &#xE0; deux hybrides (MYTHE) a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;crit comme un outil qui permet l&#x26;#39;identification des interactions entre prot&#xE9;ines membranaires. Dans le syst&#xE8;me MYTHE, ubiquitine a &#xE9;t&#xE9; divis&#xE9; en deux moiti&#xE9;s, dont chacune est fusionn&#xE9; &#xE0; une prot&#xE9;ine, au moins un de ce qui est li&#xE9; &#xE0; la membrane. Lors de l&#x26;#39;interaction de ces deux prot&#xE9;ines, les deux moiti&#xE9;s de l&#x26;#39;ubiquitine sont reconstitu&#xE9;s et un facteur de transcription qui est fusionn&#xE9; &#xE0; la prot&#xE9;ine membranaire est lib&#xE9;r&#xE9;. Le facteur de transcription p&#xE9;n&#xE8;tre ensuite dans le noyau et active la transcription de g&#xE8;nes rapporteurs. Actuellement, les &#xE9;crans MYTHE &#xE0; grande &#xE9;chelle en utilisant des banques d&#x26;#39;ADNc ou ADNg sont effectu&#xE9;es pour identifier et cartographier les partenaires de liaison de diff&#xE9;rentes prot&#xE9;ines membranaires. Ainsi, le syst&#xE8;me MYTHE se r&#xE9;v&#xE8;le &#xEA;tre un outil puissant pour l&#x26;#39;&#xE9;lucidation de certaines interactions prot&#xE9;ine-prot&#xE9;ine, ce qui contribue grandement &#xE0; la cartographie de l&#x26;#39;interactome prot&#xE9;ine de la membrane.

Analyse des complexes prot&#xE9;iques membranaires utilisant la levure membrane Split-ubiquitine double-hybride (MYTHE) Syst&#xE8;me

J&uuml;ngste Forschungen hat damit begonnen, das globale Netzwerk der Zytosolische zu erhellen und Membran-Protein-Interaktionen. Die resultierende Interaktom-Karte erm&ouml;glicht zahlreiche biologische Studien, u. a. f&uuml;r Zelle signalisieren, Handel mit Protein und Protein-Verordnung. Aufgrund des hydrophoben Charakters von Membranproteinen wie Tyrosinkinasen G-Protein-gekoppelte Rezeptoren, Membran gebunden Phosphatasen und Transporter ist es bekanntlich schwer, ihre Beziehung zur Signalisierung von Molek&uuml;len, das Zytoskelett oder irgendwelche anderen interagierenden Partner zu studieren. Zwar konventionelle Hefe-zwei-Hybrid eine einfache und robuste Technik, die bei der Identifizierung von spezifischen Protein-Protein Interaktionen wirksam ist, ist es in seinem Gebrauch f&uuml;r Membranproteine begrenzt. Doch basiert die Split-Ubiquitin-Membran Hefe, die zwei-Hybrid-Assay (Mythos) als Werkzeug beschrieben wurde, die f&uuml;r die Identifizierung von Membran-Protein-Interaktionen erm&ouml;glicht. Im Mythos-System wurde Ubiquitin in zwei H&auml;lften, von die jede mindestens zu einem Protein verschmolzen wird aufgeteilt, von denen Membran gebunden ist. Bei der Interaktion dieser beiden Proteine sind die beiden H&auml;lften des Ubiquitin rekonstituiert und ein Transkriptionsfaktor, der an die Membranprotein verschmolzen wird freigegeben. Transkriptionsfaktors dann betritt den Zellkern und Transkription der Reporter Gene aktiviert. Derzeit werden umfangreiche Mythos-Bildschirme mit cDNA oder gDNA Bibliotheken durchgef&uuml;hrt, um identifizieren und Zuordnen der Bindung-Partner von verschiedenen Membranproteinen. So erweist das Mythos-System sich ein leistungsf&auml;higes Werkzeug f&uuml;r die Aufkl&auml;rung der spezifischen Protein-Protein Interaktionen, stark auf die Zuordnung von der Membrane Protein Interaktom beitragen.

Analyse der Membran-Protein-komplexen, die mit der Split-Ubiquitin Membransystem Hefe zwei-Mischling (Mythos).

La ricerca recente ha iniziato a delucidare la rete globale di citosolico e le interazioni della proteina di membrana. La mappa risultante interactome facilita numerosi studi biologici, compresi quelli per la segnalazione delle cellule, proteine traffico e regolazione della proteina. A causa della natura idrofobica di proteine di membrana come chinasi della tirosina, G-protein coupled recettori, membrana associata fosfatasi e trasportatori &egrave; notoriamente difficile da studiare il loro rapporto per segnalazione di molecole, il citoscheletro o qualsiasi altro partner interagenti. Sebbene convenzionale lievito-due ibrido sono una tecnica semplice e robusta che &egrave; efficacia per l&#39;identificazione delle interazioni specifiche proteina-proteina, &egrave; limitato nel suo utilizzo per le proteine di membrana. Tuttavia, la membrana di Spalato-ubiquitin basate lievito two-hybrid assay (mito) &egrave; stata descritta come uno strumento che consente l&#39;identificazione delle interazioni della proteina di membrana. Nel sistema di mito, ubiquitina &egrave; stata divisa in due met&agrave;, ognuna delle quali &egrave; fusa ad una proteina, almeno uno dei quali &egrave; associata di membrana. All&#39;interazione di queste due proteine, le due met&agrave; di ubiquitin sono ricostituite e un fattore di trascrizione che si fonde alla proteina di membrana viene rilasciato. Il fattore di trascrizione, poi entra nel nucleo e attiva la trascrizione dei geni reporter. Attualmente, gli schermi di mito su larga scala utilizzando librerie di cDNA o gDNA vengono eseguiti per identificare e mappare i soci di associazione di varie proteine di membrana. Cos&igrave;, il sistema di mito sta dimostrando di essere un potente strumento per la delucidazione di interazioni specifiche proteina-proteina, contribuendo notevolmente al mapping di interactome di proteine della membrana.

Analisi dei complessi della proteina di membrana utilizzando il sistema split-ubiquitina membrana lievito due-ibrido (mito).

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&#x30B9;&#x30D7;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C8;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x819C;&#x9175;&#x6BCD;&#x30C4;&#x30FC;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#xFF08;&#x795E;&#x8A71;&#xFF09;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;

&#xCD5C;&#xADFC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; cytosolic&#xC758; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xB97C; &#xBA85;&#xB8CC; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558;&#xAE30; &#xC2DC;&#xC791; &#xD588;&#xB2E4; &#xACE0; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;. &#xACB0;&#xACFC; &#xC704;&#xD558;&#xC5EC; &#xC9C0;&#xB3C4; &#xC138;&#xD3EC; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xADDC;&#xC81C;&#xB97C; &#xBE44;&#xB86F; &#xC218;&#xB9CE;&#xC740; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Tyrosine kinases &#xAC19;&#xC740; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xD2B9;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD558; &#xACE0; &#xB9C9; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30; &#xC545;&#xBA85; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6B4; &#xC2E0;&#xD638; &#xBD84;&#xC790;, cytoskeleton, &#xB610;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108;&#xC758; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;&#xB294;. &#xAE30;&#xC874; &#xD6A8; &#xBAA8; 2 &#xC7A1;&#xC885; &#xD2B9;&#xC815; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC5D0; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC04;&#xB2E8; &#xD558; &#xACE0; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xAE30;&#xC220; &#xC774;&#xC9C0;&#xB9CC;, &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC81C;&#xD55C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xBD84;&#xD560; &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xAE30;&#xBC18; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xB450; &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; (&#xC2E0;&#xD654;) &#xC218; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C; &#xC124;&#xBA85; &#xD588;&#xB2E4; &#xD6A8; &#xBAA8;. &#xC2E0;&#xD654; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4;&#xC740; 2 &#xAC1C; &#xBC18;, &#xAC01;&#xAC01;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, &#xC735;&#xD569;&#xC740; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xB294; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD84;&#xD560; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB450; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4;&#xC758; &#xB450; &#xBC18;&#xCABD; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC735;&#xD569; &#xD55C; &#xC804;&#xC0AC; &#xC694;&#xC18C; &#xD574;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790;&#xB294; &#xB2E4;&#xC74C; &#xD575;&#xC744; &#xC785;&#xB825; &#xD558; &#xACE0; &#xB9AC;&#xD3EC;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC804;&#xC0AC;&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;. &#xD604;&#xC7AC;, &#xB300;&#xADDC;&#xBAA8; &#xC2E0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD06C;&#xB9B0; gDNA &#xB610;&#xB294; cDNA &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108; &#xC9C0;&#xB3C4; &#xC218;&#xD589; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC2E0;&#xD654; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC740; &#xD2B9;&#xC815; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;, &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC704;&#xD558;&#xC5EC; &#xB9E4;&#xD551;&#xC5D0; &#xD06C;&#xAC8C; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558; &#xACE0; &#xD574;&#xBA85;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xAC00; &#xB420; &#xC218; &#xC99D;&#xBA85; &#xD558;&#xB294;.

&#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xC9C0; &#xBD84;&#xD560; &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xB9C9; &#xD6A8; &#xBAA8; 2 &#xC7A1;&#xC885; (&#xC2E0;&#xD654;) &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD84;&#xC11D; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Las investigaciones recientes han comenzado a dilucidar la red global de las interacciones prote&#xED;na citos&#xF3;lica y de membrana. El mapa resultante facilita interactoma numerosos estudios biol&#xF3;gicos, incluidos los de la se&#xF1;alizaci&#xF3;n celular, el tr&#xE1;fico de prote&#xED;nas y la regulaci&#xF3;n de prote&#xED;nas. Debido a la naturaleza hidrof&#xF3;bica de las prote&#xED;nas de membrana como la tirosina quinasas, el G-receptores acoplados a prote&#xED;nas, fosfatasas unidas a la membrana y los transportistas es muy dif&#xED;cil de estudiar su relaci&#xF3;n con las mol&#xE9;culas de se&#xF1;alizaci&#xF3;n, el citoesqueleto, o cualquier otros socios que interact&#xFA;an. Aunque convencional levadura-dos h&#xED;brido es una t&#xE9;cnica simple y robusto que es eficaz en la identificaci&#xF3;n de espec&#xED;ficas interacciones prote&#xED;na-prote&#xED;na, que est&#xE1; limitado en su uso para las prote&#xED;nas de membrana. Sin embargo, la levadura membrana dividida ubiquitina basado en dos h&#xED;bridos de ensayo (MITO) ha sido descrito como una herramienta que permite la identificaci&#xF3;n de las interacciones prote&#xED;na de membrana. En el sistema MITO, la ubiquitina se ha dividido en dos mitades, cada una de las cuales est&#xE1; fusionado a una prote&#xED;na, por lo menos uno de los cuales es unido a la membrana. Luego de la interacci&#xF3;n de estas dos prote&#xED;nas, las dos mitades de la ubiquitina se reconstituyen y un factor de transcripci&#xF3;n que est&#xE1; fusionado a la prote&#xED;na de membrana se libera. El factor de transcripci&#xF3;n a continuaci&#xF3;n, entra en el n&#xFA;cleo y activa la transcripci&#xF3;n de genes indicadores. En la actualidad, las grandes pantallas MITO utilizando bibliotecas de ADNc o ADNg se llevan a cabo para identificar y mapear las parejas de uni&#xF3;n de prote&#xED;nas de membrana diferentes. As&#xED;, el sistema MITO est&#xE1; demostrando ser una herramienta poderosa para el esclarecimiento de determinadas interacciones prote&#xED;na-prote&#xED;na, lo que contribuye en gran medida a la cartograf&#xED;a de la interactome prote&#xED;na de la membrana.

El an&#xE1;lisis de complejos de prote&#xED;nas de membrana utilizando la levadura de la membrana de Split-ubiquitina de dos h&#xED;bridos (MITO) Sistema de

SLC4A1 &#x7A81;&#x53D8; (AE1) &#x7F16;&#x7801;&#x80BE;&#x9634;&#x9633; (Cl(-)/HCO(3) (-)&#xFF09; &#x79BB;&#x5B50;&#x4EA4;&#x6362;&#x5668; 1 &#xFF08;kAE1 &#x6216;&#x5E26; 3&#xFF09; &#x53EF;&#x4EE5;&#x4EA7;&#x751F;&#x663E;&#x6027; (AD) &#x6216;&#x5E38;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x9690;&#x6027; &#xFF08;AR&#xFF09; &#x8FDC;&#x7AEF;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x9178;&#x4E2D;&#x6BD2; (dRTA)&#x3002;&#x73B0;&#x5728;&#x662F;&#x4F7F;&#x7528;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6B63;&#x5728;&#x4EAE;&#x76F8; SLC4A1 &#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4E0D;&#x540C;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7684;&#x7EE7;&#x627F;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x663E;&#x6027;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8; kAE1 R589H&#x3001; R901X &#x548C; S613F&#xFF0C;&#x6709;&#x8D1F;&#x79BB;&#x5B50;&#x8FD0;&#x8F93;&#x529F;&#x80FD;&#x6B63;&#x5E38;&#x6216;&#x5FAE;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x9053;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;&#x5448;&#x73B0;&#x4E0E;&#x57F9;&#x517B;&#x975E;&#x6781;&#x5316;&#x548C;&#x4E24;&#x6781;&#x5206;&#x5316;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51; &#xFF08;ER&#xFF09; &#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x80DE;&#x5185;&#x4FDD;&#x7559;&#x800C;&#x5360;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x5730;&#x4F4D;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; kAE1 R901X &#x548C; G609R &#x7684; mis-targeted &#x5230;&#x9876;&#x7AEF;&#x819C;&#x9664;&#x4E24;&#x6781;&#x5206;&#x5316;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x57FA;&#x5E95;&#x5916;&#x4FA7;&#x819C;&#x3002;&#x663E;&#x6027;&#x8D1F;&#x5F71;&#x54CD;&#x5F88;&#x53EF;&#x80FD;&#x8D1F;&#x8D23;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x7684;&#x75BE;&#x75C5;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x819C;&#x5C42;&#x4FDD;&#x7559;&#x4E86; heterodimers &#x7684; kAE1 &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x9690;&#x6027;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8; kAE1 G701D &#x548C; S773P &#x4F46;&#x662F;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x622A;&#x7136;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x8D29;&#x8FD0;&#x7F3A;&#x9677;&#x3002;KAE1 G701D &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x4FDD;&#x7559;&#x5728;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x7EA0;&#x7F20; kAE1 S773P&#xFF0C;&#x8FD9;&#x6709;&#x635F;&#x4E8E; ER &#x9000;&#x51FA;&#xFF0C;&#x800C;&#x53EA;&#x662F;&#x90E8;&#x5206;&#xFF0C;&#x7531; proteosome &#x964D;&#x7EA7;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4EA4;&#x7ED9;&#x4E24;&#x6781;&#x5206;&#x5316;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x57FA;&#x5E95;&#x5916;&#x4FA7;&#x819C;&#x3002;&#x4E0E;&#x663E;&#x6027;&#x7A81;&#x53D8; kAE1&#xFF0C;&#x9690;&#x6027;&#x7A81;&#x53D8; kAE1 &#x548C;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; kAE1 heterodimers &#x90FD;&#x65E0;&#x6CD5;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x7684;&#x4EA4;&#x901A;&#x3002;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; kAE1 &#x56E0;&#x6B64;&#x76F8;&#x5BF9;&#x9690;&#x6027;&#x7A81;&#x53D8; kAE1 &#x5C55;&#x54C1;&#x4F18;&#x52BF;&#x79EF;&#x6781;&#x6548;&#x5E94;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5B83;&#x53EF;&#x4EE5;&#x62EF;&#x6551;&#x4ECE;&#x80DE;&#x5185;&#x4FDD;&#x7559;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x9700;&#x8981;&#x4E3A;&#x6F14;&#x793A;&#x6587;&#x7A3F;&#x7684;&#x75BE;&#x75C5;&#x8868;&#x578B;&#x7684;&#x5408;&#x5B50;&#x6216;&#x590D;&#x5408;&#x6742;&#x5408;&#x6027;&#x9690;&#x6027;&#x7A81;&#x53D8;&#x3002;&#x4ECA;&#x540E;&#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#xFF0C;&#x5229;&#x7528;&#x52A8;&#x7269;&#x6A21;&#x578B;&#x7684; dRTA &#x5C06;&#x63D0;&#x4F9B;&#x66F4;&#x591A;&#x6DF1;&#x5165;&#x4E86;&#x89E3;&#x8FD9;&#x79CD;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x75C5;&#x7406;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x3002;

&#x5E38;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x663E;&#x6027;&#x548C;&#x9690;&#x6027;&#x8FDC;&#x7AEF;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x9178;&#x4E2D;&#x6BD2;&#x81F4; SLC4A1 &#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236; (AE1) &#x7A81;&#x53D8;&#x3002;

Mutations of SLC4A1 (AE1) encoding the kidney anion (Cl(-)/HCO(3) (-)) exchanger 1 (kAE1 or band 3) can result in either autosomal dominant (AD) or autosomal recessive (AR) distal renal tubular acidosis (dRTA). The molecular mechanisms associated with SLC4A1 mutations resulting in these different modes of inheritance are now being unveiled using transfected cell systems. The dominant mutants kAE1 R589H, R901X and S613F, which have normal or insignificant changes in anion transport function, exhibit intracellular retention with endoplasmic reticulum (ER) localization in cultured non-polarized and polarized cells, while the dominant mutants kAE1 R901X and G609R are mis-targeted to apical membrane in addition to the basolateral membrane in cultured polarized cells. A dominant-negative effect is likely responsible for the dominant disease because heterodimers of kAE1 mutants and the wild-type protein are intracellularly retained. The recessive mutants kAE1 G701D and S773P however exhibit distinct trafficking defects. The kAE1 G701D mutant is retained in the Golgi apparatus, while the misfolded kAE1 S773P, which is impaired in ER exit and is degraded by proteosome, can only partially be delivered to the basolateral membrane of the polarized cells. In contrast to the dominant mutant kAE1, heterodimers of the recessive mutant kAE1 and wild-type kAE1 are able to traffic to the plasma membrane. The wild-type kAE1 thus exhibits a 'dominant-positive effect' relative to the recessive mutant kAE1 because it can rescue the mutant proteins from intracellular retention to be expressed at the cell surface. Consequently, homozygous or compound heterozygous recessive mutations are required for presentation of the disease phenotype. Future work using animal models of dRTA will provide additional insight into the pathophysiology of this disease.

Molecular mechanisms of autosomal dominant and recessive distal renal tubular acidosis caused by SLC4A1 (AE1) mutations.

Les mutations du SLC4A1 (AE1) codant l&#39;&eacute;changeur d&#39;anions (Cl(-)/HCO(3) (-)) de rein 1 (kAE1 ou bande 3) peut entra&icirc;ner soit autosomique dominante (AD) ou autosomique r&eacute;cessive (AR) acidose tubulaire r&eacute;nale distale (ATR). Les m&eacute;canismes mol&eacute;culaires associ&eacute;s &agrave; SLC4A1 des mutations aboutissant &agrave; ces diff&eacute;rents modes de transmission sont maintenant &ecirc;tre d&eacute;voil&eacute;s &agrave; l&#39;aide de syst&egrave;mes de cellules transfect&eacute;es. Les mutants dominantes kAE1 R589H, R901X et S613F, qui ont des changements normaux ou insignifiantes dans la fonction de transport anionique, pi&egrave;ce r&eacute;tention intracellulaire avec le r&eacute;ticulum endoplasmique (re) localisation en cellules non polaris&eacute;es et polaris&eacute;s, alors que les mutants dominantes kAE1 R901X et G609R sont m&#39;&agrave; la membrane apicale en plus de la membrane basolat&eacute;rale dans des cellules cultiv&eacute;es polaris&eacute;s. Un effet dominant n&eacute;gatif est probablement responsable de la maladie dominante car h&eacute;t&eacute;rodim&egrave;res des mutants de la kAE1 et la prot&eacute;ine de type sauvage sont conserv&eacute;s dans les cellules. Les mutants r&eacute;cessifs kAE1 G701D et S773P pr&eacute;sentent toutefois des d&eacute;fauts trafic distinctes. Le mutant de G701D de kAE1 est conserv&eacute; dans l&#39;appareil de Golgi, tandis que la forme anormale kAE1 S773P, qui est alt&eacute;r&eacute;e chez les ER sortie et est d&eacute;grad&eacute; par proteosome, peut &ecirc;tre livr&eacute;e que partiellement &agrave; la membrane basolat&eacute;rale des cellules polaris&eacute;es. Contrairement &agrave; la kAE1 mutant dominant, h&eacute;t&eacute;rodim&egrave;res des kAE1 mutant r&eacute;cessif et kAE1 de type sauvage sont capables de trafic vers la membrane plasmique. Le kAE1 sauvage pr&eacute;sente ainsi un &laquo; effet positif dominant &raquo; par rapport &agrave; la kAE1 mutant r&eacute;cessif parce qu&#39;elle peut sauver les prot&eacute;ines mutantes de r&eacute;tention intracellulaire &ecirc;tre exprim&eacute;e &agrave; la surface des cellules. Par cons&eacute;quent, des mutations r&eacute;cessives homozygotes ou h&eacute;t&eacute;rozygotes sont requises pour la pr&eacute;sentation du ph&eacute;notype de la maladie. Travaux futurs en utilisant des mod&egrave;les animaux de dRTA fournira un aper&ccedil;u suppl&eacute;mentaire dans la physiopathologie de cette maladie.

M&eacute;canismes mol&eacute;culaires d&#39;autosomique dominant et r&eacute;cessif acidose tubulaire r&eacute;nale distale caus&eacute;e par SLC4A1 des mutations (AE1).

Mutationen des SLC4A1 (AE1) Codierung der Niere (Cl(-)/HCO(3) (-)) Anionenaustauscher 1 (kAE1 oder Band 3) (autosomal-Dominant (AD) oder autosomal rezessiv (AR) DRTA (dRTA) f&uuml;hren kann. Die molekularen Mechanismen, die zugeordnete SLC4A1-Mutationen, die zu diesen verschiedenen Betriebsmodi Vererbung sind jetzt mit transfizierte Zellsysteme vorgestellt wird. Die dominanten Mutanten, kAE1 R589H, R901X und S613F, die normale oder unwesentliche &Auml;nderungen im Anion Transport-Funktion haben, weisen intrazellul&auml;re Speicherung mit Endoplasmatisches Reticulum (ER) Lokalisierung in kultivierten nicht-polarisierten und polarisierten Zellen, w&auml;hrend die dominanten Mutanten kAE1 R901X und G609R fehlgeleitete, apikale Membran neben der Basolateraler-Membran in kultivierten polarisierten Zellen sind. Ein Dominant-negativer Effekt ist wahrscheinlich verantwortlich f&uuml;r die Krankheit, dominant, weil Heterodimere kAE1 Mutanten und Wildtyp-Protein intrazellul&auml;r beibehalten werden. Die rezessiven Mutanten kAE1 G701D und S773P weisen jedoch unterschiedliche Menschenhandel M&auml;ngel. Der kAE1-G701D-Mutant wird beibehalten, im Golgi-Apparat, w&auml;hrend die misfolded kAE1 S773P, die in ER beeintr&auml;chtigt ist verlassen und ist vom Proteosome abgebaut werden, k&ouml;nnen nur teilweise an die Basolateraler Membran der polarisierten Zellen geliefert werden. Im Gegensatz zu den dominanten mutant kAE1 k&ouml;nnen Heterodimere der rezessive Mutante kAE1 und Wildtyp kAE1 Verkehr auf der Plasmamembran. Der Wildtyp-kAE1 Exponate einen Dominant-positiven Effekt damit relativ die rezessive Mutante kAE1, weil es die mutierten Proteine aus intrazellul&auml;ren Aufbewahrung in der Zelloberfl&auml;che ausgedr&uuml;ckt werden retten kann. Folglich sind homozygote oder zusammengesetzte heterozygote rezessive Mutationen f&uuml;r die Pr&auml;sentation des Ph&auml;notyps Krankheit erforderlich. Zuk&uuml;nftige Arbeit mit Tiermodellen f&uuml;r dRTA bieten zus&auml;tzlichen Einblick in die Pathophysiologie dieser Krankheit.

Molekulare Mechanismen der autosomal dominant und rezessiv DRTA durch SLC4A1 verursacht (AE1) Mutationen.

Mutazioni di SLC4A1 (AE1) codifica lo scambiatore di anioni (Cl(-)/HCO(3) (-)) Rene 1 (kAE1 o banda 3) pu&ograve; provocare o autosomica dominante (AD) o autosomica recessiva (AR) acidosi renale tubulare distale (dRTA). Meccanismi molecolari associati a mutazioni SLC4A1 risultanti in queste diverse modalit&agrave; di ereditariet&agrave; sono ora essere svelati mediante sistemi a celle transfected. I mutanti dominanti kAE1 R589H, R901X e S613F, che hanno normali o insignificanti variazioni in funzione di trasporto di anioni, esibiscono ritenzione intracellulare con reticolo endoplasmatico (ER) localizzazione in cellule in coltura non polarizzato e polarizzate, mentre i mutanti dominanti kAE1 R901X e G609R sono mis-targeted a membrana apicale oltre la membrana basolaterale in cultured cells polarizzata. Un effetto dominante negativo &egrave; probabile responsabile della malattia dominante perch&eacute; eterodimeri della proteina wild-type e mutanti kAE1 sono intracellularly mantenuti. I mutanti recessivi kAE1 G701D e S773P presentano tuttavia distinti difetti traffici. Il mutante G701D kAE1 &egrave; mantenuto nell&#39;apparato del Golgi, mentre il kAE1 malpiegate S773P, che &egrave; compromessa in ER uscire ed &egrave; degradato da proteosome, possono essere consegnati solo parzialmente alla membrana basolaterale delle cellule polarizzate. In contrasto con la dominante mutante kAE1, eterodimeri della kAE1 mutante recessivo e selvaggio-tipo kAE1 sono in grado di traffico verso la membrana plasmatica. Il selvaggio-tipo kAE1 esibisce cos&igrave; un effetto positivo dominante rispetto la kAE1 mutante recessivo perch&eacute; possono salvare le proteine mutanti da ritenzione intracellulare espresso alla superficie delle cellule. Di conseguenza, composte o omozigoti recessivi eterozigoti sono necessari per la presentazione del fenotipo della malattia. Lavoro futuro utilizzando modelli animali di dRTA fornir&agrave; ulteriore spaccato la fisiopatologia di questa malattia.

Meccanismi molecolari della trasmissione autosomica dominante e recessiva acidosi renale tubulare distale causata da SLC4A1 (AE1) mutazioni.

SLC4A1 &#x306E;&#x5909;&#x7570; (AE1&#xFF09; &#x814E;&#x81D3;&#x9670;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3; (Cl(-)/HCO(3) (-)) &#x4EA4;&#x63DB;&#x4F53; 1 (kAE1 &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C9; 3) &#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x7D50;&#x679C;&#x512A;&#x6027; &#xFF08;AD&#xFF09; &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5E38;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x52A3;&#x6027; (AR) &#x9060;&#x4F4D;&#x306E;&#x814E;&#x5C3F;&#x7D30;&#x7BA1;&#x30A2;&#x30B7;&#x30C9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9; &#xFF08;dRTA&#xFF09; &#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3067;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D99;&#x627F;&#x306E;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x3067;&#x751F;&#x3058;&#x308B; SLC4A1 &#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x69CB;&#x4ECA; transfected &#x30BB;&#x30EB; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x512A;&#x6027;&#x5909;&#x7570;&#x4F53; kAE1 R901X &#x3068; G609R &#x306F;&#x57F9;&#x990A;&#x504F;&#x6975;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x57FA;&#x5E95;&#x819C;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x30A2;&#x30D4;&#x30AB;&#x30EB;&#x819C;&#x306B; mis-targeted &#x3044;&#x308B;&#x9593;&#x3001;&#x652F;&#x914D;&#x7684;&#x306A;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x6B63;&#x5E38;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4E9B;&#x7D30;&#x306A;&#x5909;&#x66F4;&#x3067;&#x9670;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x8F38;&#x9001;&#x6A5F;&#x80FD;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3001;kAE1 R589H&#x3001;R901X&#x3001;S613F&#x3001;&#x57F9;&#x990A;&#x306E;&#x975E;&#x504F;&#x5149;&#x3068;&#x504F;&#x5149;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53; (ER) &#x5C40;&#x5728;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x4FDD;&#x6301;&#x3092;&#x5C55;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C9;&#x30DF;&#x30CA;&#x30F3;&#x30C8; &#x30CD;&#x30AC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x672C;&#x5F53;&#x3089;&#x3057;&#x3044;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x5909;&#x7570;&#x4F53; kAE1 &#x3068;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306B;&#x4FDD;&#x6301;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x652F;&#x914D;&#x7684;&#x306A;&#x75C5;&#x6C17;&#x3092;&#x62C5;&#x5F53;&#x3002;KAE1 G701D &#x3068; S773P &#x306E;&#x52A3;&#x6027;&#x5909;&#x7570;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x500B;&#x5225;&#x8F38;&#x9001;&#x6B20;&#x9665;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;KAE1 G701D &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x969C;&#x5BB3;&#x8005; S773P &#x7D42;&#x4E86;&#x3057;&#x3001;&#x3067;&#x3059;&#x8AA4;&#x3063;&#x3066;&#x6298;&#x308A;&#x305F;&#x305F;&#x307E;&#x308C;&#x305F; kAE1 &#x4E2D;&#x3067;&#x4FDD;&#x6301;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x52A3;&#x5316;&#x3001;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x3057;&#x304B;&#x3001;&#x504F;&#x6975;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x57FA;&#x5E95;&#x819C;&#x306B;&#x914D;&#x4FE1;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x652F;&#x914D;&#x7684;&#x306A;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x4F53; kAE1 &#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x3001;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x306E;&#x52A3;&#x6027;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x4F53; kAE1 &#x3068;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; kAE1 &#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C;&#x3078;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x3092;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5909;&#x7570;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x4FDD;&#x6301;&#x304B;&#x3089;&#x3092;&#x6551;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x306E;&#x3067;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; kAE1 &#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x52A3;&#x6027;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x4F53; kAE1 &#39;&#x306E;&#x652F;&#x914D;&#x7684;&#x306A;&#x6B63;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x5C55;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x8907;&#x5408;&#x30DB;&#x30E2;&#x306E;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x63A5;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x52A3;&#x6027;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x75BE;&#x60A3;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x30D7;&#x30EC;&#x30BC;&#x30F3;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;DRTA &#x52D5;&#x7269;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x5C06;&#x6765;&#x306E;&#x4ED5;&#x4E8B;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x75C5;&#x614B;&#x751F;&#x7406;&#x306B;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x529B;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

SLC4A1 &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5E38;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x512A;&#x6027;&#x3068;&#x52A3;&#x6027;&#x9060;&#x4F4D;&#x814E;&#x5C3F;&#x7D30;&#x7BA1;&#x30A2;&#x30B7;&#x30C9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x69CB; (AE1&#xFF09; &#x5909;&#x7570;&#x3002;

Slc4a1&#xC758; &#xBCC0;&#xC774; (AE1) &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xC2E0;&#xC7A5; (Cl(-)/HCO(3) (-)) &#xC74C;&#xC774;&#xC628; &#xAD50;&#xD658;&#xAE30; (kAE1 &#xB610;&#xB294; &#xBC34;&#xB4DC; 3) 1 &#xC0C1; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xC9C0;&#xBC30; (&#xAD11;&#xACE0;) &#xB610;&#xB294; &#xC0C1; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xC5F4;&#xC131; (&#xC544;&#xCE78;&#xC18C; &#xC8FC;) &#xC6D0;&#xC2EC; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xAD00; &#xC99D; (dRTA) &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. SLC4A1 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC0C1;&#xC18D;&#xC758; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC740; &#xC9C0;&#xAE08; transfected &#xC138;&#xD3EC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACF5;&#xAC1C; &#xB418; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; kAE1 R901X &#xBC0F; g609r&#xB294; mis-targeted &#xAD50;&#xC591;&#xB41C; &#xD3B8;&#xAD11;&#xB41C; &#xC140;&#xC5D0; basolateral &#xB9C9; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xD600;&#xB05D; &#xB9C9; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; kAE1 R589H, R901X &#xBC0F; S613F, &#xC74C;&#xC774;&#xC628; &#xC804;&#xC1A1; &#xD568;&#xC218;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC815;&#xC0C1; &#xB610;&#xB294; &#xD558; &#xCC2E;&#xC740; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xAD50;&#xC591;&#xB41C;-&#xD3B8;&#xAD11;&#xACFC; &#xD3B8;&#xAD11; &#xC140;&#xC5D0; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; (&#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;) &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xC640; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xBCF4;&#xC874; &#xC804;&#xC2DC;. &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xD6A8;&#xACFC; &#xB192;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; kAE1 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD615; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; heterodimers &#xC720;&#xC9C0; &#xCE68; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xC5F4;&#xC131; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; kAE1 g701d&#xC640; s773p&#xB294; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xBC00;&#xB9E4; &#xACB0;&#xD568; &#xC804;&#xC2DC;. KAE1 G701D &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; Golgi &#xAE30;&#xAD6C; misfolded kAE1 ER&#xC5D0; &#xC7A5;&#xC560; S773P &#xC885;&#xB8CC; &#xD558; &#xACE0;&#xB294; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC874; &#xB418;&#xB294; proteosome&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD0C0;&#xB77D; &#xD3B8;&#xAD11; &#xC140; basolateral &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801; &#xC73C;&#xB85C;&#xB9CC; &#xC804;&#xB2EC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; Kae1&#xB294; &#xB2EC;&#xB9AC; &#xC5F4;&#xC131; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; kAE1 &#xBC0F; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; kAE1 heterodimers &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD2B8;&#xB798;&#xD53D;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; kAE1 &#xC5F4;&#xC131; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; Kae1&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC778; &#39;&#xC9C0;&#xBC30;-&#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xD6A8;&#xACFC;&#39;&#xB97C; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC804;&#xC2DC; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xBCF4;&#xC874;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xAD6C;&#xC870; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; homozygous &#xB610;&#xB294; &#xBCF5;&#xD569; heterozygous &#xC5F4;&#xC131; &#xBCC0;&#xC774; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xD615;&#xC758; &#xD504;&#xB808; &#xC820; &#xD14C;&#xC774; &#xC158;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Drta&#xC758; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBBF8;&#xB798;&#xC758; &#xC77C;&#xC774;&#xC774; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC758; &#xC774;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCD94;&#xAC00;&#xC801;&#xC778; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC0C1; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC640; &#xC5F4;&#xC131; &#xC6D0;&#xC2EC; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xAD00; &#xC99D; slc4a1&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; (AE1) &#xBCC0;&#xC774;.

Las mutaciones de SLC4A1 (AE1) codificaci&oacute;n del intercambiador de aniones (Cl(-)/HCO(3) (-)) de ri&ntilde;&oacute;n 1 (kAE1 o banda 3) puede resultar en autos&oacute;mica dominante (AD) o autos&oacute;mica recesiva (AR) acidosis tubular renal distal (dRTA). Los mecanismos moleculares asociados a mutaciones SLC4A1 resultando en estos modos diferentes de herencia son ahora se dio a conocer mediante sistemas celulares transfected. Los mutantes dominantes kAE1 R589H, R901X y S613F, que tienen cambios normales o insignificantes en funci&oacute;n de transporte del ani&oacute;n, exhiben retenci&oacute;n intracelular con localizaci&oacute;n del ret&iacute;culo endopl&aacute;smico (ER) en c&eacute;lulas cultivadas de polarizados y no polarizados, mientras que los mutantes dominantes kAE1 R901X y G609R son mis-targeted a la membrana apical, adem&aacute;s de la membrana basolateral en c&eacute;lulas cultivadas de polarizado. Un efecto negativo dominante es probable responsable de la enfermedad dominante porque heterod&iacute;meros de kAE1 mutantes y el salvaje-tipo prote&iacute;na intracelular se conservan. Los mutantes recesivos kAE1 G701D y S773P sin embargo presentan defectos de tr&aacute;fico distintos. El mutante de G701D de kAE1 se mantiene en el aparato de Golgi, mientras el mal plegadas kAE1 S773P, que se deterior&oacute; en ER salir y es degradada por el proteosoma, s&oacute;lo parcialmente puede ser entregado a la membrana basolateral de las c&eacute;lulas polarizadas. En contraste con la kAE1 mutante dominante, heterod&iacute;meros del kAE1 mutante recesivo y kAE1 de tipo salvaje son capaces de tr&aacute;fico a la membrana plasm&aacute;tica. El kAE1 de tipo salvaje as&iacute; exhibe un efecto dominante-positiva en relaci&oacute;n con el kAE1 mutante recesivo porque pueden rescatar las prote&iacute;nas mutantes de retenci&oacute;n intracelular a expresarse en la superficie celular. En consecuencia, mutaciones recesivas heterozig&oacute;ticas homocig&oacute;ticas o compuestas son necesarias para la presentaci&oacute;n del fenotipo de la enfermedad. Trabajo futuro utilizando modelos animales de dRTA proporcionar&aacute; informaci&oacute;n adicional sobre la fisiopatolog&iacute;a de esta enfermedad.

Mecanismos moleculares de un autosoma dominante y recesiva acidosis tubular renal distal causada por SLC4A1 mutaciones (AE1).

&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50; (EGF) &#x4E0E;&#x5176;&#x53D7;&#x4F53;&#x7ED3;&#x5408;&#x5BFC;&#x81F4;&#x53D7;&#x4F53;&#x4E8C;&#x805A;&#xFF0C;&#x5927;&#x4F1A;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x548C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x63A7;&#x5236;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x7F51;&#x7EDC;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x4E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5F88;&#x5C11;&#x662F;&#x5DF2;&#x77E5;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x4E0E;&#x524D;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x523A;&#x6FC0;&#x7684;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53; (EGFR) &#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x751F;&#x7269;&#x4FE1;&#x606F;&#x5B66;&#x4E0E;&#x6539;&#x6027;&#x7684;&#x819C;&#x9175;&#x6BCD;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6765;&#x6807;&#x8BC6; 87 &#x5019;&#x9009;&#x86CB;&#x767D;&#x914D;&#x4F53;&#x7A7A;&#x7F6E;&#x7684;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x4E0E;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5F53;&#x4E2D;&#x6709;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x8D56;&#x6C28;&#x9178;&#x8131;&#x4E59;&#x9170;&#x9176;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x8D1F;&#x9762;&#x53D7;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684; EGFR &#x541E;&#x548C;&#x9000;&#x5316;&#x7684;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x4E59;&#x9170;&#x5316;&#x72B6;&#x6001;&#x7684; &alpha;-&#x5FAE;&#x7BA1;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x8D29;&#x8FD0;&#x6CBF;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x968F;&#x540E;&#xFF0C;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x53BB;&#x4E59;&#x9170; 6 (HDAC6)&#x3002;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684; HDAC6 Tyr(570) &#x7684; EGFR &#x4ECB;&#x5BFC;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x8D1F;&#x53CD;&#x9988;&#x5FAA;&#x73AF;&#x5BFC;&#x81F4;&#x51CF;&#x5C11;&#x8131;&#x4E59;&#x9170;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x548C; &alpha;-&#x5FAE;&#x7BA1;&#x86CB;&#x767D;&#x589E;&#x52A0;&#x4E59;&#x9170;&#x5316;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x8BF4;&#x660E;&#x4E86; EGFR &#x5173;&#x8054;&#x7684; interactome &#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x6027;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5C06;&#x86CB;&#x767D;&#x4E59;&#x9170;&#x5316;&#x6807;&#x8BC6;&#x4E3A;&#x4EE5;&#x524D;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x80DE;&#x541E;&#x548C;&#x9000;&#x5316;&#x8C03;&#x8282;&#x5668;&#x3002;

&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53;&#x8D29;&#x8FD0;&#x7684;&#x8D56;&#x6C28;&#x9178;&#x4E59;&#x9170; HDAC6 &#x89C4;&#x7BA1;&#x3002;

Binding of epidermal growth factor (EGF) to its receptor leads to receptor dimerization, assembly of protein complexes, and activation of signaling networks that control key cellular responses. Despite their fundamental role in cell biology, little is known about protein complexes associated with the EGF receptor (EGFR) before growth factor stimulation. We used a modified membrane yeast two-hybrid system together with bioinformatics to identify 87 candidate proteins interacting with the ligand-unoccupied EGFR. Among them was histone deacetylase 6 (HDAC6), a cytoplasmic lysine deacetylase, which we found negatively regulated EGFR endocytosis and degradation by controlling the acetylation status of alpha-tubulin and, subsequently, receptor trafficking along microtubules. A negative feedback loop consisting of EGFR-mediated phosphorylation of HDAC6 Tyr(570) resulted in reduced deacetylase activity and increased acetylation of alpha-tubulin. This study illustrates the complexity of the EGFR-associated interactome and identifies protein acetylation as a previously unknown regulator of receptor endocytosis and degradation.

Regulation of epidermal growth factor receptor trafficking by lysine deacetylase HDAC6.

La liaison de facteur de croissance &#xE9;pidermique (EGF) &#xE0; son r&#xE9;cepteur conduit &#xE0; la dim&#xE9;risation du r&#xE9;cepteur, l&#x26;#39;assemblage des complexes de prot&#xE9;ines, et l&#x26;#39;activation des r&#xE9;seaux de signalisation qui contr&#xF4;lent les r&#xE9;ponses cellulaires cl&#xE9;s. En d&#xE9;pit de leur r&#xF4;le fondamental dans la biologie cellulaire, peu est connu sur des complexes de prot&#xE9;ines associ&#xE9;es au r&#xE9;cepteur EGF (EGFR) avant la stimulation du facteur de croissance. Nous avons utilis&#xE9; une levure membrane modifi&#xE9;e syst&#xE8;me double-hybride en collaboration avec la bioinformatique pour identifier 87 prot&#xE9;ines candidates qui interagissent avec le ligand EGFR-inoccup&#xE9;e. Parmi eux se trouvait histone d&#xE9;ac&#xE9;tylase 6 (HDAC6), une d&#xE9;sac&#xE9;tylase cytoplasmique lysine, que nous avons trouv&#xE9; endocytose EGFR r&#xE9;gul&#xE9; n&#xE9;gativement et de la d&#xE9;gradation par le contr&#xF4;le de l&#x26;#39;&#xE9;tat d&#x26;#39;ac&#xE9;tylation de l&#x26;#39;alpha-tubuline et, par la suite, le trafic des r&#xE9;cepteurs le long des microtubules. Une boucle de r&#xE9;troaction n&#xE9;gative constitu&#xE9;e de l&#x26;#39;EGFR m&#xE9;di&#xE9;e par la phosphorylation de HDAC6 Tyr (570) a entra&#xEE;n&#xE9; une activit&#xE9; d&#xE9;ac&#xE9;tylase r&#xE9;duit et augment&#xE9; ac&#xE9;tylation de l&#x26;#39;alpha-tubuline. Cette &#xE9;tude illustre la complexit&#xE9; de l&#x26;#39;interactome EGFR-associ&#xE9; et identifie ac&#xE9;tylation des prot&#xE9;ines en tant que r&#xE9;gulateur jusqu&#x26;#39;alors inconnue de l&#x26;#39;endocytose des r&#xE9;cepteurs et de la d&#xE9;gradation.

R&#xE8;glement de la traite de croissance &#xE9;pidermique r&#xE9;cepteur du facteur de Lysine Deacetylase HDAC6

&#x963F;&#x7247;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x836F;&#x7269;&#x4EA7;&#x751F;&#x9547;&#x75DB;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x957F;&#x671F;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E;&#x963F;&#x7247;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x53EF;&#x80FD;&#x5BFC;&#x81F4;&#x963F;&#x7247;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x3002;&#x963F;&#x7247;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x836F;&#x7269;&#x7684;&#x9547;&#x75DB;&#x548C;&#x6210;&#x763E;&#x5C5E;&#x6027;&#x662F;&#x4E3B;&#x8981;&#x901A;&#x8FC7; (&#x94C1;&#x9053;&#x90E8;) mu &#x963F;&#x7247;&#x53D7;&#x4F53;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x3002;&#x963F;&#x7247;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x5377;&#x5165;&#x963F;&#x7247;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x8111;&#x533A;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x5F62;&#x6001;&#x6539;&#x53D8;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5728;&#x53D1;&#x5C55;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x6539;&#x5EFA;&#x7684;&#x94C1;&#x9053;&#x90E8;&#x7684;&#x786E;&#x5207;&#x4F5C;&#x7528;&#x4ECD;&#x7136;&#x662F;&#x53EF;&#x671B;&#x800C;&#x4E0D;&#x53EF;&#x53CA;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63A8;&#x6D4B;&#xFF0C;&#x67E5;&#x660E;&#x548C;&#x8868;&#x5F81;&#x65B0;&#x578B; MOR &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28; &#xFF08;MORIPs&#xFF09; &#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x6F84;&#x6E05;&#x53C2;&#x4E0E;&#x963F;&#x7247;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

&#x4E0E; GPR177 &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684; mu &#x963F;&#x7247;&#x53D7;&#x4F53; (Wntless) &#x6291;&#x5236; Wnt &#x5206;&#x6CCC;&#xFF1A; &#x963F;&#x7247;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x5BF9;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

Opioid agonist drugs produce analgesia. However, long-term exposure to opioid agonists may lead to opioid dependence. The analgesic and addictive properties of opioid agonist drugs are mediated primarily via the mu-opioid receptor (MOR). Opioid agonists appear to alter neuronal morphology in key brain regions implicated in the development of opioid dependence. However, the precise role of the MOR in the development of these neuronal alterations remains elusive. We hypothesize that identifying and characterizing novel MOR interacting proteins (MORIPs) may help to elucidate the underlying mechanisms involved in the development of opioid dependence.

Interaction of the mu-opioid receptor with GPR177 (Wntless) inhibits Wnt secretion: potential implications for opioid dependence.

M&#xE9;dicaments agonistes des opio&#xEF;des produire une analg&#xE9;sie. Toutefois, &#xE0; long terme l&#x26;#39;exposition aux agonistes opio&#xEF;des peut conduire &#xE0; la d&#xE9;pendance aux opiac&#xE9;s. Les propri&#xE9;t&#xE9;s analg&#xE9;siques et addictif des m&#xE9;dicaments agonistes opio&#xEF;des sont essentiellement m&#xE9;di&#xE9; par le r&#xE9;cepteur mu-opio&#xEF;de (MOR). Agonistes opio&#xEF;des semble pas modifier la morphologie des neurones dans des r&#xE9;gions cl&#xE9;s du cerveau impliqu&#xE9;es dans le d&#xE9;veloppement de la d&#xE9;pendance aux opiac&#xE9;s. Cependant, le r&#xF4;le pr&#xE9;cis de la MOR dans le d&#xE9;veloppement de ces alt&#xE9;rations neuronales reste insaisissable. Nous &#xE9;mettons l&#x26;#39;hypoth&#xE8;se que l&#x26;#39;identification et la caract&#xE9;risation de nouvelles prot&#xE9;ines qui interagissent MOR (MORIPs) peut aider &#xE0; &#xE9;lucider les m&#xE9;canismes sous-jacents impliqu&#xE9;s dans le d&#xE9;veloppement de la d&#xE9;pendance aux opiac&#xE9;s.

Interaction du r&#xE9;cepteur mu-opio&#xEF;de avec GPR177 (Wntless) inhibe la s&#xE9;cr&#xE9;tion de Wnt: Implications potentielles pour la d&#xE9;pendance aux opiac&#xE9;s

Opioid-Agonisten Medikamente herzustellen Analgesie. Jedoch kann die langfristiger Exposition gegen&uuml;ber opioid-Agonisten zu opioid-Abh&auml;ngigkeit f&uuml;hren. Die analgetischen und s&uuml;chtig machenden Eigenschaften der opioid-Agonisten Medikamente werden vor allem &uuml;ber den Mu-Opioid-Rezeptor (MOR) vermittelt. Opioid-Agonisten erscheinen, neuronale Morphologie in wichtigen Hirnregionen beteiligt bei der Entwicklung von opioid-Abh&auml;ngigkeit zu &auml;ndern. Die genaue Rolle der MOR in der Entwicklung dieser neuronalen-&Auml;nderungen bleibt jedoch tr&uuml;gerisch. Wir vermuten, dass Identifizierung und Charakterisierung neuartiger MOR interagierenden Proteine (MORIPs) kann helfen, um die zugrunde liegenden Mechanismen, die an der Entwicklung von opioid-Abh&auml;ngigkeit zu erhellen.

Wechselwirkung von der Mu-Opioid-Rezeptor mit GPR177 (Wntless) hemmt Wnt-Sekretion: m&ouml;gliche Implikationen f&uuml;r opioid-Abh&auml;ngigkeit.

Farmaci agonisti oppioidi producono analgesia. Tuttavia, l&#39;esposizione a lungo termine di oppioidi agonisti possa portare alla dipendenza da oppioidi. Le propriet&agrave; analgesiche e coinvolgente di farmaci oppioidi agonisti sono mediate principalmente tramite il recettore mu-oppioide (MOR). Oppioidi agonisti sembrano alterare la morfologia neuronale nelle regioni chiave del cervello implicato nello sviluppo della dipendenza da oppioidi. Tuttavia, il ruolo preciso di MOR nello sviluppo di queste alterazioni neuronali rimane sfuggente. Ipotizziamo che identificare e caratterizzare proteine interagenti MOR romanzo (MORIPs) pu&ograve; contribuire a delucidare i meccanismi sottostanti coinvolti nello sviluppo della dipendenza da oppioidi.

Interazione del recettore mu-oppioide con GPR177 (Wntless) inibisce la secrezione di Wnt: potenziali implicazioni per la dipendenza da oppioidi.

&#x30AA;&#x30D4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30C9;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x85AC;&#x306F;&#x3001;&#x93AE;&#x75DB;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x30AA;&#x30D4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30C9;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x3078;&#x306E;&#x9577;&#x671F;&#x66B4;&#x9732;&#x306F;&#x3001;&#x30AA;&#x30D4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30C9;&#x4F9D;&#x5B58;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AA;&#x30D4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30C9;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x85AC;&#x306E;&#x93AE;&#x75DB;&#x5264;&#x3068;&#x4E2D;&#x6BD2;&#x6027;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x3BC;-&#x30AA;&#x30D4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;MOR&#xFF09;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x30AA;&#x30D4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30C9;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x30AA;&#x30D4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30C9;&#x4F9D;&#x5B58;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8133;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x5F62;&#x614B;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x767A;&#x5C55;&#x306B;MOR&#x306E;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x3001;&#x3068;&#x3089;&#x3048;&#x3069;&#x3053;&#x308D;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x307E;&#x307E;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x3001;&#x5C0F;&#x8AAC;MOR&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;MORIPs&#xFF09;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x30AA;&#x30D4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30C9;&#x4F9D;&#x5B58;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x89E3;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x52A9;&#x3051;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x4EEE;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30AA;&#x30D4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30C9;&#x4F9D;&#x5B58;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x5F71;&#x97FF;&#xFF1A;GPR177&#x306E;&#x3BC;-&#x30AA;&#x30D4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;Wntless&#xFF09;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;Wnt&#x5206;&#x6CCC;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;

&#xC774;&#xB4DC; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xC57D;&#xBB3C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC9C4;&#xD1B5;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, opioid agonists&#xC5D0; &#xC7A5;&#xAE30; &#xB178;&#xCD9C; opioid &#xC758;&#xC874;&#xB3C4; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB4DC; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xC57D;&#xBB3C;&#xC758; &#xC9C4;&#xD1B5; &#xBC0F; &#xC2B5; &#xAD00;&#xC131; &#xC18D;&#xC131; &#xC8FC;&#xB85C; mu opioid &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (MOR)&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Opioid agonists opioid &#xC758;&#xC874;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xB41C; &#xC8FC;&#xC694; &#xB450;&#xB1CC; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD615;&#xD0DC; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB4EF;&#xD558;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; MOR&#xC758; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xC5ED;&#xD560; &#xC560;&#xB9E4; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xADF8; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xAC00;&#xC124; &#xD558; &#xACE0; opioid &#xC758;&#xC874;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xADFC;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xBA85;&#xB8CC; &#xD558; &#xAC8C; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; &#xC18C;&#xC124; MOR &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (MORIPs).

GPR177 mu opioid &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC0C1;&#xD638; Wnt &#xBD84; &#xBE44;&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; (Wntless): opioid &#xC758;&#xC874;&#xB3C4; &#xB300; &#xD55C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC601;&#xD5A5;.

Los medicamentos opi&#xE1;ceos agonistas producen analgesia. Sin embargo, a largo plazo la exposici&#xF3;n a los agonistas opi&#xE1;ceos puede conducir a la dependencia de opi&#xE1;ceos. Las propiedades analg&#xE9;sicas y adictivo de f&#xE1;rmacos agonistas opi&#xE1;ceos est&#xE1;n mediados principalmente a trav&#xE9;s del receptor mu-opioide (MOR). Los agonistas opioides parece alterar la morfolog&#xED;a neuronal en las regiones clave del cerebro implicadas en el desarrollo de la dependencia de opi&#xE1;ceos. Sin embargo, el papel preciso de la MOR en el desarrollo de estas alteraciones neuronales sigue siendo dif&#xED;cil de alcanzar. Nuestra hip&#xF3;tesis es que la identificaci&#xF3;n y caracterizaci&#xF3;n de nuevas prote&#xED;nas que interaccionan con MOR (MORIPs) pueden ayudar a dilucidar los mecanismos subyacentes implicados en el desarrollo de la dependencia de opi&#xE1;ceos.

La interacci&#xF3;n del receptor mu-opioide con GPR177 (Wntless) Inhibe la secreci&#xF3;n de Wnt: implicaciones potenciales para la dependencia a opioides

&#x53EF;&#x80FD;&#x7531;&#x9274;&#x5B9A;&#x53CA;&#x5176;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x4F19;&#x4F34;&#xFF0C;&#x9884;&#x6D4B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x540E;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x65F6;&#x4EE3;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x76EE;&#x6807;&#x4E4B;&#x4E00;&#x5C31;&#x662F;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7F51;&#x7EDC;&#x7684;&#x6620;&#x5C04;&#x3002;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x7279;&#x522B;&#x611F;&#x5174;&#x8DA3;&#x7684;&#x56E0;&#x5728;&#x75BE;&#x75C5;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5E76;&#x56E0;&#x5176;&#x6D41;&#x884C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5236;&#x836F;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x4E0D;&#x5E78;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x7531;&#x4E8E;&#x5176;&#x758F;&#x6C34;&#x6027;&#x7684;&#x6027;&#x8D28;&#xFF0C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x957F;&#x671F;&#x4EE5;&#x6765;&#x4E00;&#x76F4;&#x96BE;&#x5B66;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x7684;&#x683C;&#x5F0F;&#x3002;&#x5F3A;&#x5927;&#x7684;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x6700;&#x8FD1;&#x5236;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x662F;&#x819C;&#x9175;&#x6BCD;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4; (&#x795E;&#x8BDD;) &#x6D4B;&#x5B9A;&#x3002;&#x795E;&#x8BDD;&#x6539;&#x7F16;&#xFF0C;&#x62C6;&#x5206;&#x6CDB;&#x7D20;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6709;&#x529B;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x5927;&#x89C4;&#x6A21;&#x7B5B;&#x67E5;&#x975E;&#x540C;&#x5C0F;&#x53EF;&#x7684;&#x5168;&#x957F;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#xFF0C;&#x5229;&#x7528;&#x9175;&#x6BCD;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E3B;&#x673A;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x539F;&#x5219;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x6587;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x7684;&#x795E;&#x8BDD;&#x9975;&#x751F;&#x6210;&#x3001; &#x9A8C;&#x8BC1;&#x548C;&#x5E93;&#x7B5B;&#x9009;&#x4E00;&#x9879;&#x8BAE;&#x5B9A;&#x4E66;&#x3002;&#x901A;&#x5E38;&#x53EF;&#x5728; 4-6 &#x5468;&#x5185;&#x5B8C;&#x6210;&#x6574;&#x4E2A;&#x795E;&#x8BDD;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;

&#x4EA4;&#x4E92;&#x4E0E;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E00;&#x79CD;&#x819C;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8FDB;&#x884C;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;

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Saranya Kittanakom

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