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Split-Ubiquitin Based Membrane Yeast Two-Hybrid (MYTH) System: A Powerful Tool For Identifying Protein-Protein Interactions

The fundamental biological and clinical importance of integral membrane proteins prompted the development of a yeast-based system for the high-throughput ...

University of Toronto

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&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x5047;&#x5355;&#x80DE;&#x83CC;&#x94DC;&#x7EFF; exoenzyme S &#x4F7F;&#x7528;&#x9175;&#x6BCD;&#x8868;&#x578B;&#x5C4F;&#x5E55;&#x7684;&#x6807;&#x8BC6;&#x3002;

Pseudomonas aeruginosa is an opportunistic human pathogen that is a key factor in the mortality of cystic fibrosis patients, and infection represents an increased threat for human health worldwide. Because resistance of Pseudomonas aeruginosa to antibiotics is increasing, new inhibitors of pharmacologically validated targets of this bacterium are needed. Here we demonstrate that a cell-based yeast phenotypic assay, combined with a large-scale inhibitor screen, identified small molecule inhibitors that can suppress the toxicity caused by heterologous expression of selected Pseudomonas aeruginosa ORFs. We identified the first small molecule inhibitor of Exoenzyme S (ExoS), a toxin involved in Type III secretion. We show that this inhibitor, exosin, modulates ExoS ADP-ribosyltransferase activity in vitro, suggesting the inhibition is direct. Moreover, exosin and two of its analogues display a significant protective effect against Pseudomonas infection in vivo. Furthermore, because the assay was performed in yeast, we were able to demonstrate that several yeast homologues of the known human ExoS targets are likely ADP-ribosylated by the toxin. For example, using an in vitro enzymatic assay, we demonstrate that yeast Ras2p is directly modified by ExoS. Lastly, by surveying a collection of yeast deletion mutants, we identified Bmh1p, a yeast homologue of the human FAS, as an ExoS cofactor, revealing that portions of the bacterial toxin mode of action are conserved from yeast to human. Taken together, our integrated cell-based, chemical-genetic approach demonstrates that such screens can augment traditional drug screening approaches and facilitate the discovery of new compounds against a broad range of human pathogens.

Identification of small molecule inhibitors of Pseudomonas aeruginosa exoenzyme S using a yeast phenotypic screen.

Pseudomonas aeruginosa est un pathog&#xE8;ne opportuniste humain qui est un facteur cl&#xE9; dans la mortalit&#xE9; des patients atteints de mucoviscidose, et l&#x26;#39;infection repr&#xE9;sente une menace croissante pour le monde entier pour la sant&#xE9; humaine. Parce que la r&#xE9;sistance de Pseudomonas aeruginosa aux antibiotiques est en augmentation, de nouveaux inhibiteurs de cibles valid&#xE9;es pharmacologiquement de cette bact&#xE9;rie sont n&#xE9;cessaires. Nous d&#xE9;montrons ici que un dosage de la levure &#xE0; base de cellules ph&#xE9;notypique, combin&#xE9; avec un inhibiteur de l&#x26;#39;&#xE9;cran &#xE0; grande &#xE9;chelle, a identifi&#xE9; des inhibiteurs de petites mol&#xE9;cules qui peuvent supprimer la toxicit&#xE9; caus&#xE9;e par l&#x26;#39;expression h&#xE9;t&#xE9;rologue de certains ORF Pseudomonas aeruginosa. Nous avons identifi&#xE9; l&#x26;#39;inhibiteur de la premi&#xE8;re petite mol&#xE9;cule exoenzyme S (ExoS), une toxine impliqu&#xE9;e dans la s&#xE9;cr&#xE9;tion de type III. Nous montrons que cet inhibiteur, exosin, module ExoS activit&#xE9; ADP-ribosyltransf&#xE9;rase in vitro, sugg&#xE9;rant l&#x26;#39;inhibition est directe. En outre, exosin et deux de ses analogues pr&#xE9;sentent un effet protecteur significatif contre l&#x26;#39;infection in vivo Pseudomonas. En outre, parce que le test a &#xE9;t&#xE9; effectu&#xE9; dans la levure, nous avons pu d&#xE9;montrer que des homologues de levure plusieurs des cibles connues de l&#x26;#39;homme sont susceptibles ExoS ADP-ribosyl&#xE9;e par la toxine. Par exemple, en utilisant un dosage enzymatique in vitro, nous d&#xE9;montrons que la levure est directement Ras2p modifi&#xE9; par ExoS. Enfin, en interrogeant une collection de mutants de d&#xE9;l&#xE9;tion de levure, nous avons identifi&#xE9; Bmh1p, un homologue de levure de la SAF humaine, comme un cofacteur ExoS, r&#xE9;v&#xE9;lant que des portions du mode de toxine bact&#xE9;rienne de l&#x26;#39;action sont conserv&#xE9;es de la levure &#xE0; l&#x26;#39;homme. Pris dans leur ensemble, notre int&#xE9;gr&#xE9;e &#xE0; base de cellules, produits chimiques g&#xE9;n&#xE9;tique approche d&#xE9;montre que de tels &#xE9;crans peuvent augmenter les approches traditionnelles de d&#xE9;pistage de drogues et de faciliter la d&#xE9;couverte de nouveaux compos&#xE9;s contre un large &#xE9;ventail d&#x26;#39;agents pathog&#xE8;nes humains.

Identification des petites mol&#xE9;cules inhibitrices de Pseudomonas aeruginosa exoenzyme S l&#x26;#39;aide d&#x26;#39;un &#xE9;cran de levure ph&#xE9;notypique

Pseudomonas Aeruginosa ist eine opportunistische menschlichen Krankheitserreger, die ein ma&szlig;geblicher Faktor f&uuml;r die Sterblichkeit von Mukoviszidose-Patienten und Infektion stellt eine erh&ouml;hte Gefahr f&uuml;r die menschliche Gesundheit weltweit. Da Widerstand von Pseudomonas Aeruginosa Antibiotika zunimmt, sind neue Inhibitoren von pharmakologisch validierten Zielen dieses Bakterium erforderlich. Hier zeigen wir, dass eine ph&auml;notypische zellbasierte Hefe-Assay, kombiniert mit einem gro&szlig; angelegten Inhibitor-Schirm, niedermolekularer Hemmer identifiziert, die die Toxizit&auml;t verursacht durch heterologe Expression von ausgew&auml;hlten Pseudomonas Aeruginosa ORFs unterdr&uuml;cken k&ouml;nnen. Wir identifizieren die erste niedermolekularer Inhibitor der Exoenzyme S (ExoS), ein Toxin Typ-III-Sekretion beteiligt. Wir zeigen, dass dieser Inhibitor, Exosin, moduliert ExoS ADP-Ribosyltransferase Aktivit&auml;t in vitro darauf hindeutet, dass die Hemmung direkte ist. Dar&uuml;ber hinaus zeigen Exosin und zwei der seine Analoga eine signifikante sch&uuml;tzende Wirkung gegen Pseudomonas-Infektion in-vivo. Dar&uuml;ber hinaus da die Probe in der Hefe durchgef&uuml;hrt wurde, konnten wir beweisen, dass mehrere Hefe Homologen der bekannten menschlichen ExoS Ziele wahrscheinlich ADP-Ribosylated durch das Toxin sind. Z. B. beweisen mithilfe eines in vitro enzymatischen Tests, wir, dass Hefe, die Ras2p direkt von ExoS ge&auml;ndert wird. Schlie&szlig;lich identifiziert Vermessung eine Auflistung von Hefe L&ouml;schung Mutanten, wir Bmh1p, eine Hefe-Homolog des menschlichen FAS, als ein Kofaktor ExoS offenbart, dass Teile der die bakterielle Toxin Wirkungsweise von Hefe zu Human konserviert werden. Zusammen genommen zeigt unser ganzheitlicher Ansatz f&uuml;r zellbasierte, Chemikalie-genetische, dass solche Bildschirme k&ouml;nnen traditionelle Drogen screening Ans&auml;tze erg&auml;nzen und erleichtern die Entdeckung neuer Verbindungen gegen zahlreiche Krankheitserreger beim Menschen.

Identifizierung von niedermolekularen Inhibitoren von Pseudomonas Aeruginosa Exoenzyme S mit einen ph&auml;notypischen Hefe-Bildschirm.

Pseudomonas aeruginosa &egrave; un patogeno opportunistico umano che &egrave; un fattore chiave per la mortalit&agrave; dei pazienti di fibrosi cistica, e infezione rappresenta una minaccia maggiore per la salute umana in tutto il mondo. Perch&eacute; sta aumentando la resistenza di Pseudomonas aeruginosa agli antibiotici, sono necessari nuovi inibitori di farmacologicamente convalidati obiettivi di questo batterio. Qui dimostriamo che un dosaggio fenotipica di lievito cell-based, combinato con uno schermo inibitore su larga scala, identificate piccole molecole inibitori che possono sopprimere la tossicit&agrave; causata dall&#39;espressione eterologa di selezionati Pseudomonas aeruginosa ORFs. Abbiamo identificato il primo inibitore di piccola molecola di Exoenzyme S (ExoS), una tossina coinvolta nella secrezione di tipo III. Ci mostrano che questo inibitore, exosin, modula ExoS ADP-ribosyltransferase attivit&agrave; in vitro, suggerendo l&#39;inibizione &egrave; diretto. Inoltre, exosin e due dei suoi analoghi visualizzare un significativo effetto protettivo contro l&#39;infezione da Pseudomonas in vivo. Inoltre, poich&eacute; l&#39;analisi &egrave; stata eseguita in lievito, siamo stati in grado di dimostrare che diversi cromosomi omologhi lievito degli obiettivi ExoS umani conosciuti sono probabilmente ADP-ribosylated dalla tossina. Ad esempio, mediante un&#39;analisi enzimatica in vitro, dimostrano che lievito che ras2p viene modificato direttamente da ExoS. Di misurazione una collezione di mutanti di delezione di lievito, &egrave; infine, abbiamo identificato Bmh1p, un omologo del lievito del FAS umano, come un cofattore ExoS, rivelando che porzioni della modalit&agrave; di azione di tossina batterica sono conservate dal lievito all&#39;uomo. Presi insieme, il nostro approccio integrato cell-based, chimica-genetica dimostra che tali schermi possono aumentare la droga tradizionale approcci di screening e facilitare la scoperta di nuovi composti contro una vasta gamma di agenti patogeni umani.

Identificazione delle piccole molecole inibitori di exoenzyme di Pseudomonas aeruginosa S utilizza uno schermo fenotipica di lievito.

&#x7DD1;&#x81BF;&#x83CC;&#x306F;&#x3001;&#x56A2;&#x80DE;&#x6027;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x75C7;&#x60A3;&#x8005;&#x306E;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7387;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8981;&#x56E0;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x65E5;&#x548C;&#x898B;&#x30D2;&#x30C8;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x611F;&#x67D3;&#x304C;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x5065;&#x5EB7;&#x3078;&#x306E;&#x4E16;&#x754C;&#x7684;&#x306A;&#x8105;&#x5A01;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6297;&#x751F;&#x7269;&#x8CEA;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x7DD1;&#x81BF;&#x83CC;&#x306E;&#x62B5;&#x6297;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x83CC;&#x306E;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x691C;&#x8A3C;&#x3057;&#x3001;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x9175;&#x6BCD;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;&#x9078;&#x629E;&#x3057;&#x305F;&#x7DD1;&#x81BF;&#x83CC;&#x306E;ORF&#x306E;&#x7570;&#x7A2E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x6BD2;&#x6027;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x9175;&#x7D20;S&#xFF08;EXOS&#xFF09;&#x3001;III&#x578B;&#x5206;&#x6CCC;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x6BD2;&#x7D20;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3001;exosin&#x306F;&#x3001;&#x6291;&#x5236;&#x304C;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3001;in vitro&#x3067;EXOS ADP-&#x30EA;&#x30DC;&#x30B7;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0;&#x306E;exosin&#x3068;2&#x306F;&#x3001;in vivo&#x3067;&#x30B7;&#x30E5;&#x30FC;&#x30C9;&#x30E2;&#x30CA;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x4FDD;&#x8B77;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x9175;&#x6BCD;&#x3067;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x305F;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;EXOS&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x9175;&#x6BCD;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x6BD2;&#x7D20;&#x306B;&#x3088;&#x308B;ADP-&#x30EA;&#x30DC;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D3;&#x30C8;&#x30ED;&#x9175;&#x7D20;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;Ras2p&#x76F4;&#x63A5;EXOS&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x6B20;&#x5931;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x30B3;&#x30EC;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x6BD2;&#x7D20;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x90E8;&#x5206;&#x306F;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;&#x304B;&#x3089;&#x30D2;&#x30C8;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;EXOS&#x306E;&#x88DC;&#x56E0;&#x5B50;&#x3068;&#x3057;&#x3066;Bmh1p&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;FAS&#x306E;&#x9175;&#x6BCD;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D71;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30BB;&#x30EB;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x3001;&#x5316;&#x5B66;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x7684;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x753B;&#x9762;&#x304C;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x85AC;&#x5264;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x306E;&#x5E83;&#x3044;&#x7BC4;&#x56F2;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x767A;&#x898B;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x9175;&#x6BCD;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x7DD1;&#x81BF;&#x83CC;&#x5916;&#x9175;&#x7D20;S&#x306E;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;

&#xB179; &#xB18D; &#xADE0;&#xC740; &#xB0AD; &#xC131; &#xC12C;&#xC720; &#xC99D; &#xD658;&#xC790;&#xC758; &#xC0AC;&#xB9DD;&#xB960;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC694;&#xC18C;&#xB294; &#xAE30;&#xD68C;&#xC8FC;&#xC758;&#xC801; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4; &#xC774;&#xBA70; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC804;&#xC138;&#xACC4; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xAC74;&#xAC15;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC99D;&#xAC00; &#xC704;&#xD611;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB179; &#xB18D; &#xADE0; &#xD56D;&#xC0DD;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC800;&#xD56D;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0;&#xC774; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC758; pharmacologically &#xAC80;&#xC99D;&#xB41C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xB300;&#xADDC;&#xBAA8; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xD654;&#xBA74;&#xACFC; &#xD568;&#xAED8; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xBC18; phenotypic &#xC2DC;&#xD5D8; &#xC120;&#xD0DD;&#xD55C; &#xB179; &#xB18D; &#xADE0; ORFs heterologous &#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778; &#xD55C; &#xB3C5;&#xC131;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB41C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Exoenzyme S (ExoS) &#xC720;&#xD615; III &#xBD84; &#xBE44;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xB3C5; &#xC18C;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBB3C; &#xD655;&#xC778;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294;&#xC774; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xBCF4;&#xAE30; exosin, &#xC2DC;&#xD5D8;&#xAD00;, &#xC9C1;&#xC811; &#xC800;&#xD574; &#xC81C;&#xC548; ExoS ADP-ribosyltransferase &#xD65C;&#xB3D9; &#xBCC0;&#xC870;. &#xB610;&#xD55C;, exosin&#xC640; &#xADF8; analogues&#xC758; &#xB450; &#xC288; &#xB3C4;&#xBAA8; &#xB098; &#xC2A4; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC608;&#xBC29; &#xD6A8;&#xACFC; &#xD45C;&#xC2DC;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xD6A8; &#xBAA8;&#xC5D0; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; ExoS &#xB300;&#xC0C1;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xD6A8; &#xBAA8; homologues&#xB294; &#xB3C5; &#xC18C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; ADP ribosylated &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC608;&#xB97C; &#xB4E4;&#xC5B4;, ras2p&#xB97C; &#xC9C1;&#xC811; ExoS &#xC218;&#xC815; &#xADF8; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xCCB4; &#xC678; &#xD6A8;&#xC18C; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC0AD;&#xC81C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xCEEC;&#xB809;&#xC158;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558; &#xC5EC; &#xD30C;&#xC545; Bmh1p, &#xC778;&#xAC04;&#xC758; FAS&#xC758; &#xD6A8; &#xBAA8; homologue ExoS cofactor&#xB85C; &#xB4DC;&#xB7EC;&#xB0B4;&#xB294; &#xD589;&#xB3D9; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xB3C5; &#xC18C; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80; &#xC778;&#xAC04;&#xC744; &#xB204; &#xB8E9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xC874; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xD1B5;&#xD569;&#xB41C; &#xC140; &#xAE30;&#xBC18;, &#xD654;&#xD559; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC811;&#xADFC; &#xAC19;&#xC740; &#xC2A4;&#xD06C;&#xB9B0; &#xC218; &#xC811;&#xADFC;&#xC744; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558;&#xB294; &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC778; &#xC57D;&#xBB3C;&#xC744; &#xBCF4;&#xAC15; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xBC1C;&#xACAC;&#xC744; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB179; &#xB18D; &#xADE0; exoenzyme &#xD6A8; &#xBAA8; phenotypic &#xD654;&#xBA74;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; S&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;.

Pseudomonas aeruginosa es un pat&#xF3;geno oportunista humano, que es un factor clave en la mortalidad de pacientes con fibrosis qu&#xED;stica e infecci&#xF3;n representa una amenaza creciente para todo el mundo para la salud humana. Debido a la resistencia de Pseudomonas aeruginosa a los antibi&#xF3;ticos est&#xE1; aumentando, nuevos inhibidores de los objetivos farmacol&#xF3;gicamente validados de esta bacteria son necesarios. Aqu&#xED; nos demuestran que un ensayo basado en c&#xE9;lulas de levadura fenot&#xED;pica, combinado con un inhibidor de la pantalla a gran escala, identificado inhibidores de mol&#xE9;culas peque&#xF1;as que pueden suprimir la toxicidad causada por la expresi&#xF3;n heter&#xF3;loga de seleccionados ORFs de Pseudomonas aeruginosa. Se identific&#xF3; el primer inhibidor de mol&#xE9;cula peque&#xF1;a de exoenzima S (Exos), una toxina involucrada en la secreci&#xF3;n de tipo III. Se demuestra que este inhibidor, exosin, modula Exos ADP-ribosiltransferasa actividad in vitro, sugiriendo que la inhibici&#xF3;n es directa. Por otra parte, exosin y dos de sus an&#xE1;logos de mostrar un efecto protector significativo contra la infecci&#xF3;n por Pseudomonas en vivo. Adem&#xE1;s, debido a que el ensayo se realiz&#xF3; en la levadura, hemos podido demostrar que varios hom&#xF3;logos de levadura de los objetivos conocidos Exos humanos es probable ADP-ribosilado por la toxina. Por ejemplo, utilizando un ensayo enzim&#xE1;tico in vitro, hemos demostrado que la levadura Ras2p est&#xE1; directamente modificada por Exos. Por &#xFA;ltimo, por la topograf&#xED;a de una colecci&#xF3;n de mutantes de deleci&#xF3;n de levadura, hemos identificado Bmh1p, un hom&#xF3;logo de levadura de la FAS humano, como un cofactor Exos, revelando que las porciones de la toxina bacteriana modo de acci&#xF3;n de la levadura se conservan a humano. Tomados en conjunto, nuestro sistema integrado basado en c&#xE9;lulas, qu&#xED;mico-gen&#xE9;tico enfoque demuestra que tales pantallas pueden aumentar los m&#xE9;todos tradicionales de selecci&#xF3;n de f&#xE1;rmacos y facilitar el descubrimiento de nuevos compuestos contra una amplia gama de pat&#xF3;genos humanos.

La identificaci&#xF3;n de inhibidores de mol&#xE9;culas peque&#xF1;as de Pseudomonas aeruginosa S exoenzima Con una pantalla de levadura fenot&#xED;pica

&#x8BB8;&#x591A;&#x7EC6;&#x83CC;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6548;&#x5E94;&#x86CB;&#x767D;&#x6270;&#x4E71;&#x5B88;&#x6052;&#x771F;&#x6838;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x3002;&#x5176;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x5B83;&#x4E00;&#x76F4;&#x96BE;&#x4EE5;&#x6F84;&#x6E05;&#x5176;&#x6A21;&#x5F0F;--&#x884C;&#x52A8;&#x4F7F;&#x7528;&#x6807;&#x51C6;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x4FE1;&#x606F;&#x5B66;&#x3001; &#x751F;&#x7269;&#x5316;&#x5B66;&#x3001; &#x6216;&#x9057;&#x4F20;&#x7684;&#x529E;&#x6CD5;&#x3002;&#x8FD1;&#x5E74;&#x6765;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x51FA;&#x82BD;&#x9175;&#x6BCD;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#x7684;&#x4EE3;&#x7406;&#x4E3B;&#x673A;&#x5DF2;&#x6210;&#x4E3A;&#x8D8A;&#x6765;&#x8D8A;&#x53D7;&#x6B22;&#x8FCE;&#xFF0C;&#x63F4;&#x52A9;&#x4EA7;&#x751F;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x624B;&#x6BB5;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x6548;&#x5E94;&#x5668;&#x5728;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x8868;&#x578B;&#x53EF;&#x80FD;&#x88AB;&#x5229;&#x7528;&#x6765;&#x6F84;&#x6E05;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x3001; &#x6D1E;&#x5BDF;&#x5176;&#x9176;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x548C;&#x4E86;&#x89E3;&#x76EE;&#x6807;&#x6548;&#x5E94;&#x5173;&#x7CFB;&#x7684;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5728;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5B66;&#x53EF;&#x80FD;&#x7528;&#x4E8E;&#x5F52;&#x4E8E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x627E;&#x51FA;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x6709;&#x76CA;&#x7684;&#x6297;&#x83CC;&#x7597;&#x6CD5;&#x7684;&#x94C5;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6700;&#x8FD1;&#x53D6;&#x5F97;&#x7684;&#x6210;&#x529F;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x5B83;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x7EC6;&#x83CC;&#x6548;&#x5E94;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x6807;&#x51C6;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;

&#x9175;&#x6BCD;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x5DE5;&#x5177;&#x6765;&#x7814;&#x7A76;&#x7EC6;&#x83CC;&#x4EA7;&#x751F;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x624B;&#x6BB5;&#x3002;

Many bacterial pathogens rely on effector proteins to disrupt conserved eukaryotic processes. Despite their fundamental biological importance, it has been difficult to elucidate their mode-of-action using standard bioinformatic, biochemical, or genetic approaches. In recent years, surrogate hosts including the budding yeast Saccharomyces cerevisiae have become increasingly popular to aid the study of effectors. Expression of effectors in yeast can result in phenotypes that may be exploited to elucidate the processes they target, gain insight into their enzymatic function, and understand target-effector relationships. Moreover, chemical genomic approaches in yeast may be used to ascribe functions to these proteins as well as identify lead compounds that may be useful for antimicrobial therapies. The recent successes of the yeast system establish it as a standard tool for the study of bacterial effector proteins.

Yeast as a tool to study bacterial effectors.

De nombreux agents pathog&#xE8;nes bact&#xE9;riens compter sur les prot&#xE9;ines effectrices de perturber les processus conserv&#xE9;es eucaryotes. Malgr&#xE9; leur importance fondamentale en biologie, il a &#xE9;t&#xE9; difficile d&#x26;#39;&#xE9;lucider leur mode de l&#x26;#39;action en utilisant la norme bioinformatique, biochimique, ou des approches g&#xE9;n&#xE9;tiques. Ces derni&#xE8;res ann&#xE9;es, les h&#xF4;tes de substitution, y compris la levure Saccharomyces cerevisiae en herbe sont devenus de plus en plus populaire &#xE0; l&#x26;#39;aide de l&#x26;#39;&#xE9;tude des effecteurs. Expression des effecteurs de la levure peut se traduire par des ph&#xE9;notypes qui peuvent &#xEA;tre exploit&#xE9;es afin d&#x26;#39;&#xE9;lucider les processus qu&#x26;#39;ils cibles, mieux comprendre leur fonction enzymatique, et de comprendre la cible effectrices relations. En outre, les approches g&#xE9;nomiques chimiques dans la levure peut &#xEA;tre utilis&#xE9;e pour attribuer les fonctions de ces prot&#xE9;ines ainsi que d&#x26;#39;identifier des compos&#xE9;s de plomb qui peuvent &#xEA;tre utiles pour les th&#xE9;rapies antimicrobiennes. Les r&#xE9;cents succ&#xE8;s du syst&#xE8;me de levure de l&#x26;#39;&#xE9;tablir comme un outil standard pour l&#x26;#39;&#xE9;tude des bact&#xE9;ries prot&#xE9;ines effectrices.

La levure comme un outil pour &#xE9;tudier effecteurs bact&#xE9;riens

Viele bakterielle Krankheitserreger beruhen auf Effektor Proteine konservierten eukaryotischen Prozesse zu st&ouml;ren. Trotz ihrer grundlegenden biologischen Bedeutung war es schwierig, ihre Modus-des-Aktion mit Norm Bioinformatic, biochemische, oder genetische Ans&auml;tze zu erhellen. In den letzten Jahren haben Ersatz-Hosts, einschlie&szlig;lich der Backhefe, die Studie von Effektoren helfen zunehmender Beliebtheit. Ausdruck der Effektoren in der Hefe kann Ph&auml;notypen f&uuml;hren, die ausgenutzt werden k&ouml;nnen, um die Prozesse zu erhellen, die Sie als Ziel, einen Einblick in ihre enzymatische Funktion und Ziel-Effektor Beziehungen verstehen. Dar&uuml;ber hinaus k&ouml;nnen chemische genomische Ans&auml;tze in der Hefe verwendet werden, f&uuml;hren Funktionen, auf die diese Proteine als auch Blei-Verbindungen, die m&ouml;glicherweise n&uuml;tzlich f&uuml;r antimikrobielle Therapien zu identifizieren. Die j&uuml;ngsten Erfolge von der Hefe-System, die diese als Standardtool f&uuml;r die Studie der bakteriellen Effektor Proteine einzurichten.

Hefe als Werkzeug um bakterielle Effektoren zu studieren.

Molti agenti patogeni batterici si basano sulle proteine effettrici a disturbare processi conservati negli eucarioti. Nonostante la loro fondamentale importanza biologica, &egrave; stato difficile delucidare la loro modalit&agrave; d&#39;azione utilizzando standard bioinformatica, biochimica, o approcci genetici. Negli ultimi anni, gli host surrogato compreso il lievito gemmante Saccharomyces cerevisiae sono diventati sempre pi&ugrave; popolari per aiutare lo studio di effettori. Espressione di effettori nel lievito pu&ograve; causare fenotipi che possono essere sfruttati per spiegare i processi di destinazione, comprendere nella loro funzione enzimatica e comprendere relazioni destinazione-effector. Inoltre, approcci genomici chimici nel lievito possono essere utilizzati per attribuire le funzioni di queste proteine, nonch&eacute; di identificare i composti del piombo che possono essere utili per le terapie antimicrobiche. I recenti successi del sistema lievito stabiliscono come uno strumento standard per lo studio delle proteine effettrici batterica.

Lievito come uno strumento per studiare effettori batteriche.

&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x6027;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x6DF7;&#x4E71;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x304C;&#x6A19;&#x6E96;&#x7684;&#x306A;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30DE;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3001;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x89E3;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x56F0;&#x96E3;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x8FD1;&#x5E74;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x51FA;&#x82BD;&#x9175;&#x6BCD;&#x30B5;&#x30C3;&#x30AB;&#x30ED;&#x30DF;&#x30BB;&#x30B9;&#xB7;&#x30BB;&#x30EC;&#x30D3;&#x30B7;&#x30A8;&#xFF08;Saccharomyces cerevisiae&#xFF09;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30B5;&#x30ED;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306F;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x652F;&#x63F4;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x307E;&#x3059;&#x307E;&#x3059;&#x4EBA;&#x6C17;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3078;&#x306E;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x60AA;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#xB7;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5E30;&#x3059;&#x308B;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x6297;&#x83CC;&#x85AC;&#x6CBB;&#x7642;&#x306B;&#x6709;&#x7528;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x925B;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;&#x7CFB;&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x6210;&#x529F;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6A19;&#x6E96;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x305D;&#x308C;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xB9CE;&#xC740; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xC9C4; &#xD575; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xBC29;&#xD574; &#xD558;&#xB294; effector &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874;. &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4DC;--&#xC561;&#xC158;&#xC758; &#xD45C;&#xC900; bioinformatic, &#xC0DD; &#xD654; &#xD559;&#xC801;, &#xB610;&#xB294; &#xC720;&#xC804; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6B4; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xADFC; &#xBA87; &#xB144; &#xB3D9;&#xC548;, &#xC2E0;&#xC9C4; &#xD6A8; &#xBAA8; Saccharomyces cerevisiae&#xB97C; &#xBE44;&#xB86F; &#xD55C; &#xB300;&#xB9AC; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xB3D5;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC810;&#xC810; &#xC778;&#xAE30; &#xB04C;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xD6A8; &#xBAA8;&#xC5D0;&#xB294; &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xC758; &#xC2DD; &#xACE0;&#xAE30; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD6A8;&#xC18C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB300;&#xC0C1;&#xACFC; &#xB300;&#xC0C1; &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xC545;&#xC6A9; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xD654;&#xD559; &#xAC8C;&#xB188; &#xC811;&#xADFC; &#xD6A8; &#xBAA8;&#xAC00;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAE30;&#xB2A5; &#xB3CC;&#xB9AC;&#xB2E4; &#xD558; &#xACE0; &#xD56D;&#xADE0; &#xC694;&#xBC95;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB9AC;&#xB4DC; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xCD5C;&#xADFC; &#xC131;&#xACF5; &#xC138;&#xADE0; effector &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xD45C;&#xC900; &#xACF5;&#xAD6C;&#xB85C; &#xADF8;&#xAC83;&#xC744; &#xC124;&#xC815;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD6A8; &#xBAA8; &#xC138;&#xADE0; &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xB97C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD558;&#xB294; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB85C; &#xC11C;.

Muchos pat&#xF3;genos bacterianos se basan en prote&#xED;nas efectoras para interrumpir conservadas procesos eucariotas. A pesar de su importancia biol&#xF3;gica fundamental, ha sido dif&#xED;cil de dilucidar su modo de acci&#xF3;n utilizando el est&#xE1;ndar bioinform&#xE1;tica, bioqu&#xED;mica, o enfoques gen&#xE9;ticos. En los &#xFA;ltimos a&#xF1;os, los hosts de sustituci&#xF3;n, incluidos la levadura de gemaci&#xF3;n Saccharomyces cerevisiae han vuelto cada vez m&#xE1;s popular para ayudar al estudio de los efectores. Expresi&#xF3;n de los efectores en la levadura puede dar lugar a fenotipos que pueden ser explotados para dilucidar los procesos que se dirigen, profundizar en su funci&#xF3;n enzim&#xE1;tica, y entender las relaciones entre efectores de destino. Adem&#xE1;s, los enfoques qu&#xED;micos gen&#xF3;micos en levadura se puede utilizar para atribuir funciones a estas prote&#xED;nas, as&#xED; como identificar los compuestos de plomo que pueden ser &#xFA;tiles para terapias antimicrobianas. Los recientes &#xE9;xitos del sistema de la levadura establecerlo como una herramienta est&#xE1;ndar para el estudio de las prote&#xED;nas efectoras bacterianas.

La levadura como una herramienta para estudiar los efectores bacterianos

&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50; (EGF) &#x4E0E;&#x5176;&#x53D7;&#x4F53;&#x7ED3;&#x5408;&#x5BFC;&#x81F4;&#x53D7;&#x4F53;&#x4E8C;&#x805A;&#xFF0C;&#x5927;&#x4F1A;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x548C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x63A7;&#x5236;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x7F51;&#x7EDC;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x4E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5F88;&#x5C11;&#x662F;&#x5DF2;&#x77E5;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x4E0E;&#x524D;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x523A;&#x6FC0;&#x7684;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53; (EGFR) &#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x751F;&#x7269;&#x4FE1;&#x606F;&#x5B66;&#x4E0E;&#x6539;&#x6027;&#x7684;&#x819C;&#x9175;&#x6BCD;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6765;&#x6807;&#x8BC6; 87 &#x5019;&#x9009;&#x86CB;&#x767D;&#x914D;&#x4F53;&#x7A7A;&#x7F6E;&#x7684;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x4E0E;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5F53;&#x4E2D;&#x6709;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x8D56;&#x6C28;&#x9178;&#x8131;&#x4E59;&#x9170;&#x9176;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x8D1F;&#x9762;&#x53D7;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684; EGFR &#x541E;&#x548C;&#x9000;&#x5316;&#x7684;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x4E59;&#x9170;&#x5316;&#x72B6;&#x6001;&#x7684; &alpha;-&#x5FAE;&#x7BA1;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x8D29;&#x8FD0;&#x6CBF;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x968F;&#x540E;&#xFF0C;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x53BB;&#x4E59;&#x9170; 6 (HDAC6)&#x3002;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684; HDAC6 Tyr(570) &#x7684; EGFR &#x4ECB;&#x5BFC;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x8D1F;&#x53CD;&#x9988;&#x5FAA;&#x73AF;&#x5BFC;&#x81F4;&#x51CF;&#x5C11;&#x8131;&#x4E59;&#x9170;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x548C; &alpha;-&#x5FAE;&#x7BA1;&#x86CB;&#x767D;&#x589E;&#x52A0;&#x4E59;&#x9170;&#x5316;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x8BF4;&#x660E;&#x4E86; EGFR &#x5173;&#x8054;&#x7684; interactome &#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x6027;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5C06;&#x86CB;&#x767D;&#x4E59;&#x9170;&#x5316;&#x6807;&#x8BC6;&#x4E3A;&#x4EE5;&#x524D;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x80DE;&#x541E;&#x548C;&#x9000;&#x5316;&#x8C03;&#x8282;&#x5668;&#x3002;

&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53;&#x8D29;&#x8FD0;&#x7684;&#x8D56;&#x6C28;&#x9178;&#x4E59;&#x9170; HDAC6 &#x89C4;&#x7BA1;&#x3002;

Binding of epidermal growth factor (EGF) to its receptor leads to receptor dimerization, assembly of protein complexes, and activation of signaling networks that control key cellular responses. Despite their fundamental role in cell biology, little is known about protein complexes associated with the EGF receptor (EGFR) before growth factor stimulation. We used a modified membrane yeast two-hybrid system together with bioinformatics to identify 87 candidate proteins interacting with the ligand-unoccupied EGFR. Among them was histone deacetylase 6 (HDAC6), a cytoplasmic lysine deacetylase, which we found negatively regulated EGFR endocytosis and degradation by controlling the acetylation status of alpha-tubulin and, subsequently, receptor trafficking along microtubules. A negative feedback loop consisting of EGFR-mediated phosphorylation of HDAC6 Tyr(570) resulted in reduced deacetylase activity and increased acetylation of alpha-tubulin. This study illustrates the complexity of the EGFR-associated interactome and identifies protein acetylation as a previously unknown regulator of receptor endocytosis and degradation.

Regulation of epidermal growth factor receptor trafficking by lysine deacetylase HDAC6.

La liaison de facteur de croissance &#xE9;pidermique (EGF) &#xE0; son r&#xE9;cepteur conduit &#xE0; la dim&#xE9;risation du r&#xE9;cepteur, l&#x26;#39;assemblage des complexes de prot&#xE9;ines, et l&#x26;#39;activation des r&#xE9;seaux de signalisation qui contr&#xF4;lent les r&#xE9;ponses cellulaires cl&#xE9;s. En d&#xE9;pit de leur r&#xF4;le fondamental dans la biologie cellulaire, peu est connu sur des complexes de prot&#xE9;ines associ&#xE9;es au r&#xE9;cepteur EGF (EGFR) avant la stimulation du facteur de croissance. Nous avons utilis&#xE9; une levure membrane modifi&#xE9;e syst&#xE8;me double-hybride en collaboration avec la bioinformatique pour identifier 87 prot&#xE9;ines candidates qui interagissent avec le ligand EGFR-inoccup&#xE9;e. Parmi eux se trouvait histone d&#xE9;ac&#xE9;tylase 6 (HDAC6), une d&#xE9;sac&#xE9;tylase cytoplasmique lysine, que nous avons trouv&#xE9; endocytose EGFR r&#xE9;gul&#xE9; n&#xE9;gativement et de la d&#xE9;gradation par le contr&#xF4;le de l&#x26;#39;&#xE9;tat d&#x26;#39;ac&#xE9;tylation de l&#x26;#39;alpha-tubuline et, par la suite, le trafic des r&#xE9;cepteurs le long des microtubules. Une boucle de r&#xE9;troaction n&#xE9;gative constitu&#xE9;e de l&#x26;#39;EGFR m&#xE9;di&#xE9;e par la phosphorylation de HDAC6 Tyr (570) a entra&#xEE;n&#xE9; une activit&#xE9; d&#xE9;ac&#xE9;tylase r&#xE9;duit et augment&#xE9; ac&#xE9;tylation de l&#x26;#39;alpha-tubuline. Cette &#xE9;tude illustre la complexit&#xE9; de l&#x26;#39;interactome EGFR-associ&#xE9; et identifie ac&#xE9;tylation des prot&#xE9;ines en tant que r&#xE9;gulateur jusqu&#x26;#39;alors inconnue de l&#x26;#39;endocytose des r&#xE9;cepteurs et de la d&#xE9;gradation.

R&#xE8;glement de la traite de croissance &#xE9;pidermique r&#xE9;cepteur du facteur de Lysine Deacetylase HDAC6

&#x53EF;&#x80FD;&#x7531;&#x9274;&#x5B9A;&#x53CA;&#x5176;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x4F19;&#x4F34;&#xFF0C;&#x9884;&#x6D4B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x540E;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x65F6;&#x4EE3;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x76EE;&#x6807;&#x4E4B;&#x4E00;&#x5C31;&#x662F;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7F51;&#x7EDC;&#x7684;&#x6620;&#x5C04;&#x3002;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x7279;&#x522B;&#x611F;&#x5174;&#x8DA3;&#x7684;&#x56E0;&#x5728;&#x75BE;&#x75C5;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5E76;&#x56E0;&#x5176;&#x6D41;&#x884C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5236;&#x836F;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x4E0D;&#x5E78;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x7531;&#x4E8E;&#x5176;&#x758F;&#x6C34;&#x6027;&#x7684;&#x6027;&#x8D28;&#xFF0C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x957F;&#x671F;&#x4EE5;&#x6765;&#x4E00;&#x76F4;&#x96BE;&#x5B66;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x7684;&#x683C;&#x5F0F;&#x3002;&#x5F3A;&#x5927;&#x7684;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x6700;&#x8FD1;&#x5236;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x662F;&#x819C;&#x9175;&#x6BCD;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4; (&#x795E;&#x8BDD;) &#x6D4B;&#x5B9A;&#x3002;&#x795E;&#x8BDD;&#x6539;&#x7F16;&#xFF0C;&#x62C6;&#x5206;&#x6CDB;&#x7D20;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6709;&#x529B;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x5927;&#x89C4;&#x6A21;&#x7B5B;&#x67E5;&#x975E;&#x540C;&#x5C0F;&#x53EF;&#x7684;&#x5168;&#x957F;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#xFF0C;&#x5229;&#x7528;&#x9175;&#x6BCD;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E3B;&#x673A;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x539F;&#x5219;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x6587;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x7684;&#x795E;&#x8BDD;&#x9975;&#x751F;&#x6210;&#x3001; &#x9A8C;&#x8BC1;&#x548C;&#x5E93;&#x7B5B;&#x9009;&#x4E00;&#x9879;&#x8BAE;&#x5B9A;&#x4E66;&#x3002;&#x901A;&#x5E38;&#x53EF;&#x5728; 4-6 &#x5468;&#x5185;&#x5B8C;&#x6210;&#x6574;&#x4E2A;&#x795E;&#x8BDD;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;

&#x4EA4;&#x4E92;&#x4E0E;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E00;&#x79CD;&#x819C;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8FDB;&#x884C;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;

The biological function of proteins may be predicted by identification of their interacting partners, and one of the major goals of the postgenomic era is the mapping of protein interaction networks. Membrane proteins are of particular interest because of their role in disease and because of their prevalence as major pharmaceutical targets. Unfortunately, because of their hydrophobic nature, they have long been difficult to study in a high-throughput format. A powerful technology recently developed to facilitate the characterization of membrane protein interactions is the membrane yeast two-hybrid (MYTH) assay. MYTH adapts the principle of split ubiquitin for use as a potent in vivo sensor of protein-protein interactions, allowing large-scale screening for interactors of full-length membrane proteins, from a range of organisms, using Saccharomyces cerevisiae as a host. In this article, we describe a protocol for MYTH bait generation, validation and library screening. The entire MYTH procedure can generally be completed in 4-6 weeks.

Detecting interactions with membrane proteins using a membrane two-hybrid assay in yeast.

La fonction biologique des prot&#xE9;ines peut &#xEA;tre pr&#xE9;dite par l&#x26;#39;identification de leurs partenaires d&#x26;#39;interaction, et l&#x26;#39;un des objectifs majeurs de l&#x26;#39;&#xE8;re post-g&#xE9;nomique est la cartographie des r&#xE9;seaux d&#x26;#39;interactions prot&#xE9;iques. Les prot&#xE9;ines membranaires sont d&#x26;#39;un int&#xE9;r&#xEA;t particulier en raison de leur r&#xF4;le dans la maladie et en raison de leur pr&#xE9;valence que les principaux objectifs pharmaceutiques. Malheureusement, en raison de leur caract&#xE8;re hydrophobe, ils ont longtemps &#xE9;t&#xE9; difficiles &#xE0; &#xE9;tudier dans un format &#xE0; haut d&#xE9;bit. Une technologie puissante r&#xE9;cemment mis au point pour faciliter la caract&#xE9;risation des interactions prot&#xE9;ine membranaire est la levure membrane double-hybride (MYTHE) dosage. MYTHE adapte le principe de la scission ubiquitine pour une utilisation comme un puissant capteur de in vivo de interactions prot&#xE9;ine-prot&#xE9;ine, permettant d&#xE9;pistage &#xE0; grande &#xE9;chelle pour les interacteurs des prot&#xE9;ines membranaires de longue dur&#xE9;e, &#xE0; partir d&#x26;#39;une gamme d&#x26;#39;organismes, en utilisant Saccharomyces cerevisiae comme un h&#xF4;te. Dans cet article, nous d&#xE9;crivons un protocole pour l&#x26;#39;app&#xE2;t MYTHE production, la validation et la biblioth&#xE8;que de d&#xE9;pistage. La proc&#xE9;dure MYTHE ensemble peuvent g&#xE9;n&#xE9;ralement &#xEA;tre compl&#xE9;t&#xE9; en 4-6 semaines.

D&#xE9;tection des interactions avec des prot&#xE9;ines membranaires en utilisant une membrane dosage &#xE0; deux hybrides chez la levure

Die biologische Funktion von Proteinen Identifikation ihrer interagierenden Partner vorhergesagt werden kann, und eines der Hauptziele von der postgenomic-&Auml;ra ist die Zuordnung von Protein Interaktionsnetzwerken. Membranproteine sind von besonderem Interesse aufgrund ihrer Rolle in der Krankheit und ihre Pr&auml;valenz als wichtigen pharmazeutischen Ziele. Leider sind aufgrund ihrer hydrophoben Natur sie schwierig, in einem Format mit hohem Durchsatz zu studieren seit langem. Eine leistungsstarke Technologie, die vor kurzem entwickelt, um die Charakterisierung von Membran-Protein-Interaktionen zu erleichtern ist die Membran Hefe zwei-Mischling (Mythos) Assay. Mythos passt sich an das Prinzip der geteilten Ubiquitin zur Verwendung als ein potenter in-vivo-Sensor von Protein-Protein Interaktionen, so dass gro&szlig;angelegte Screening f&uuml;r Interaktoren in Membrane Proteine, aus einer Reihe von Organismen, Saccharomyces Cerevisiae als Host verwenden. In diesem Artikel beschreiben wir ein Protokoll f&uuml;r Mythos K&ouml;der Erstellung, Validierung und Bibliothek-Screening. Das gesamte Mythos-Verfahren kann in der Regel in 4-6 Wochen abgeschlossen werden.

Erkennen von Wechselwirkungen mit Membranproteine mit einer Membran-zwei-Hybrid-Assay in Hefe.

La funzione biologica delle proteine pu&ograve; essere predetto dalla identificazione dei loro partners interagenti, e uno degli obiettivi principali dell&#39;epoca postgenomic &egrave; la mappatura delle reti di interazione della proteina. Le proteine di membrana sono di particolare interesse a causa del loro ruolo nella malattia e a causa della loro prevalenza come principali obiettivi farmaceutici. Purtroppo, a causa della loro natura idrofobica, essi sono stati a lungo difficili da studiare in un formato ad alta velocit&agrave;. Una potente tecnologia di recente sviluppata per agevolare la caratterizzazione delle interazioni della proteina di membrana &egrave; il membrana lievito due-ibrido (mito) test. MITO si adegua al principio di ubiquitin split per uso come un potente sensore in vivo delle interazioni della proteina-proteina, permettendo di screening su larga scala per gli Interactiani di proteine di membrana full-length, da una vasta gamma di organismi, utilizzando il Saccharomyces cerevisiae come host. In questo articolo, descriviamo un protocollo per la generazione esca mito, convalida e lo screening libreria. L&#39;intera procedura di mito in genere pu&ograve; essere completata in 4-6 settimane.

Rilevare le interazioni con le proteine di membrana utilizzando un dosaggio di due-ibrido membrana in lievito.

&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30DD;&#x30B9;&#x30C8;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x6642;&#x4EE3;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x76EE;&#x6A19;&#x306E;&#x4E00;&#x3064;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x95A2;&#x5FC3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x75BE;&#x60A3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5F79;&#x5272;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x5927;&#x624B;&#x88FD;&#x85AC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6709;&#x75C5;&#x7387;&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6B8B;&#x5FF5;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x306E;&#x6027;&#x8CEA;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x9577;&#x3044;&#x3001;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x5F62;&#x5F0F;&#x3067;&#x52C9;&#x5F37;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x56F0;&#x96E3;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x6280;&#x8853;&#x306F;&#x3001;&#x819C;&#x9175;&#x6BCD;&#x30C4;&#x30FC;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#xFF08;&#x795E;&#x8A71;&#xFF09;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x795E;&#x8A71;&#x306F;&#x3001;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30B5;&#x30C3;&#x30AB;&#x30ED;&#x30DF;&#x30BB;&#x30B9;&#xB7;&#x30BB;&#x30EC;&#x30D3;&#x30B7;&#x30A8;&#xFF08;Saccharomyces cerevisiae&#xFF09;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x5B8C;&#x5168;&#x9577;&#x306E;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; - &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;in vivo&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x306E;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x5206;&#x5272;&#x306E;&#x539F;&#x7406;&#x3092;&#x9069;&#x5FDC;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7A3F;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x795E;&#x8A71;&#x306E;&#x990C;&#x306E;&#x751F;&#x6210;&#x3001;&#x691C;&#x8A3C;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x3092;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5168;&#x4F53;&#x795E;&#x8A71;&#x306E;&#x624B;&#x9806;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;4-6&#x9031;&#x9593;&#x3067;&#x5B8C;&#x4E86;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC801; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC608;&#xCE21; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; postgenomic &#xC2DC;&#xB300;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xBAA9;&#xD45C; &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC758; &#xB9E4;&#xD551;. &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC8FC;&#xC694; &#xC81C;&#xC57D; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xBCF4;&#xAE09; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xAD00;&#xC2EC;&#xC774; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBD88;&#xD589;&#xD788;&#xB3C4;, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xD2B9;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xC624;&#xB7AB;&#xB3D9;&#xC548; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xD615;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;&#xAE30; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6B4;. &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD558;&#xC5EC; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB41C; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xAE30;&#xC220; &#xB9C9; &#xD6A8; &#xBAA8; 2 &#xC7A1;&#xC885; (&#xC2E0;&#xD654;) &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC2E0;&#xD654; Saccharomyces cerevisiae&#xB97C; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC778;&#xD130;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB300;&#xADDC;&#xBAA8; &#xC2A4;&#xD06C;&#xB9AC;&#xB2DD; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC13C;&#xC11C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xBD84;&#xD560; &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4;&#xC758; &#xC6D0;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC801;&#xC751;. &#xC774; &#xBB38;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC2E0;&#xD654; &#xBBF8;&#xB07C; &#xC0DD;&#xC131;, &#xC720;&#xD6A8;&#xC131; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC0F; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC; &#xC2EC;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC744; &#xC124;&#xBA85;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xCCB4; &#xC2E0;&#xD654; &#xC808;&#xCC28;&#xB294; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; 4-6 &#xC8FC;&#xC5D0; &#xC644;&#xB8CC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC0C1;&#xD638; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xB9C9; &#xB450; &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC80;&#xC0C9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La funci&#xF3;n biol&#xF3;gica de las prote&#xED;nas puede ser predicha por la identificaci&#xF3;n de sus socios que interact&#xFA;an, y uno de los principales objetivos de la era postgen&#xF3;mica es el mapeo de las redes de interacci&#xF3;n de prote&#xED;nas. Las prote&#xED;nas de membrana son de particular inter&#xE9;s debido a su papel en la enfermedad y debido a su prevalencia como los principales objetivos de farmac&#xE9;uticos. Desafortunadamente, debido a su naturaleza hidrof&#xF3;bica, que han sido durante mucho tiempo dif&#xED;ciles de estudiar en un formato de alto rendimiento. Una potente tecnolog&#xED;a recientemente desarrollada para facilitar la caracterizaci&#xF3;n de las interacciones prote&#xED;na de membrana es la levadura de la membrana de dos h&#xED;bridos (MITO) ensayo. MITO adapta el principio de divisi&#xF3;n de ubiquitina para su uso como un potente sensor in vivo de las interacciones prote&#xED;na-prote&#xED;na, lo que permite a gran escala de cribado para interactores de prote&#xED;nas de membrana de longitud completa, a partir de una variedad de organismos, utilizando Saccharomyces cerevisiae como un hu&#xE9;sped. En este art&#xED;culo se describe un protocolo para el cebo MITO generaci&#xF3;n, validaci&#xF3;n y control bibliotecario. El procedimiento MITO entero generalmente se puede completar en 4-6 semanas.

La detecci&#xF3;n de interacciones con prote&#xED;nas de membrana que utiliza una membrana de dos h&#xED;bridos de ensayo en la levadura

&#x6297;&#x6027;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E1D;&#x74DC;&#x7684;&#x836F;&#x7269;&#xFF0C;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x5BF9;&#x9EA6;&#x89D2;&#x753E;&#x9187;&#x751F;&#x7269;&#x5408;&#x6210;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x6C1F;&#x5EB7;&#x5511;&#xFF0C;&#x5A01;&#x80C1;&#x5230;&#x6570;&#x4EE5;&#x767E;&#x4E07;&#x8BA1;&#x7684;&#x53D7;&#x635F;&#x60A3;&#x8005;&#x6613;&#x53D7;&#x4FB5;&#x88AD;&#x6027;&#x771F;&#x83CC;&#x611F;&#x67D3;&#x3002;&#x5408;&#x6210;&#x81F4;&#x547D;&#x9057;&#x4F20;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5728;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x7684;&#x5BC6;&#x96C6;&#x7F51;&#x7EDC;&#x7ED3;&#x6784;&#x8868;&#x660E;&#x7EC4;&#x5408;&#x7F51;&#x7EDC;&#x6291;&#x5236;&#x53EF;&#x80FD;&#x8D1F;&#x62C5;&#x5F97;&#x8D77;&#xFF0C;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x836F;&#x7269;&#x7597;&#x6548;&#x548C;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E0E;&#x4E30;&#x5BCC;&#x7684;&#x975E;&#x4E13;&#x5229;&#x836F;&#x7269;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x67E5;&#x660E;-&#x6C1F;&#x5EB7;&#x5511;&#x884C;&#x52A8;&#x4E2D;&#x81F4;&#x75C5;&#x5FF5;&#x73E0;&#x83CC;&#x3001; &#x9690;&#x7403;&#x83CC;&#x83CC;&#x682A;&#x548C;&#x6A21;&#x578B;&#x9175;&#x6BCD;&#x917F;&#x9152;&#x7684;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x6D3B;&#x6027;&#x5E93;&#x8FDB;&#x884C;&#x6709;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x5C4F;&#x5E55;&#x3002;&#x8BB8;&#x591A;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x5C55;&#x51FA;&#x7269;&#x79CD;&#x6216;&#x5C5E;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x7684;&#x589E;&#x6548;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5E76;&#x7ECF;&#x5E38;&#x4F1A;&#x6539;&#x8FDB;&#x6C1F;&#x5EB7;&#x5511;&#x4ECE;&#x4E1D;&#x74DC;&#x7684;&#x6740;&#x83CC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x884C;&#x52A8;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x6A21;&#x5F0F;&#x663E;&#x793A;&#x534F;&#x540C;&#x7684;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x6444;&#x52A8;&#x819C;&#x6E17;&#x900F;&#x6216;&#x6291;&#x5236;&#x795E;&#x7ECF;&#x9187;&#x78F7;&#x8102;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x4E24;&#x7C7B;&#x3002;&#x534F;&#x540C;&#x836F;&#x7269;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x901A;&#x8FC7;&#x5168;&#x7403;&#x9057;&#x4F20;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7F51;&#x7EDC;&#x548C;&#x503C;&#x5F97;&#x6CE8;&#x610F;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x836F;&#x7269;&#x7EC4;&#x5408;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x5F3A;&#x5316;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x6C1F;&#x5EB7;&#x5511;&#x7684;&#x9AD8;&#x9636;&#x5408;&#x7406;&#x5316;&#x3002;&#x534F;&#x540C;&#x7EC4;&#x5408;&#x662F;&#x9488;&#x5BF9;&#x6C1F;&#x5EB7;&#x5511;&#x8010;&#x836F;&#x4E34;&#x5E8A;&#x5206;&#x79BB;&#x682A;&#x53CA;&#x4E00;&#x79CD;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x9690;&#x7403;&#x83CC;&#x611F;&#x67D3;&#x6A21;&#x578B;&#x5904;&#x4E8E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#x6838;&#x5B9A;&#x836F;&#x54C1;&#x5BF9;&#x9891;&#x8C31;&#x7684;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x6709;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5730;&#x91CD;&#x65B0;&#x8C03;&#x6574;&#x7528;&#x9014;&#x6807;&#x8BC6;&#x53EF;&#x80FD;&#x88AB;&#x5229;&#x7528;&#x6765;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x548C;&#x6297;&#x771F;&#x83CC;&#x836F;&#x7269;&#x7684;&#x6C47;&#x8F91; &#x300B; &#x7684;&#x7F51;&#x7EDC;&#x5B89;&#x5168;&#x6F0F;&#x6D1E;&#x3002;

-&#x6297;&#x771F;&#x83CC;&#x836F;&#x7269;&#x6C1F;&#x5EB7;&#x5511;&#x7684;&#x878D;&#x5408;&#x836F;&#x7269;&#x7EC4;&#x5408;&#x7684;&#x8DE8;&#x7269;&#x79CD;&#x53D1;&#x73B0;&#x3002;

Resistance to widely used fungistatic drugs, particularly to the ergosterol biosynthesis inhibitor fluconazole, threatens millions of immunocompromised patients susceptible to invasive fungal infections. The dense network structure of synthetic lethal genetic interactions in yeast suggests that combinatorial network inhibition may afford increased drug efficacy and specificity. We carried out systematic screens with a bioactive library enriched for off-patent drugs to identify compounds that potentiate fluconazole action in pathogenic Candida and Cryptococcus strains and the model yeast Saccharomyces. Many compounds exhibited species- or genus-specific synergism, and often improved fluconazole from fungistatic to fungicidal activity. Mode of action studies revealed two classes of synergistic compound, which either perturbed membrane permeability or inhibited sphingolipid biosynthesis. Synergistic drug interactions were rationalized by global genetic interaction networks and, notably, higher order drug combinations further potentiated the activity of fluconazole. Synergistic combinations were active against fluconazole-resistant clinical isolates and an in vivo model of Cryptococcus infection. The systematic repurposing of approved drugs against a spectrum of pathogens thus identifies network vulnerabilities that may be exploited to increase the activity and repertoire of antifungal agents.

Cross-species discovery of syncretic drug combinations that potentiate the antifungal fluconazole.

R&eacute;sistance au largement consomm&eacute; de la drogue fongistatique, particuli&egrave;rement &agrave; l&#39;ergost&eacute;rol biosynth&egrave;se inhibiteur fluconazole, menace des millions de patients immunod&eacute;prim&eacute;s sensibles aux infections fongiques invasives. La structure de r&eacute;seau dense de synth&eacute;tiques interactions g&eacute;n&eacute;tiques l&eacute;tales chez la levure sugg&egrave;re que l&#39;inhibition r&eacute;seau combinatoire peut-&ecirc;tre fournir la sp&eacute;cificit&eacute; et l&#39;efficacit&eacute; du m&eacute;dicament accrue. Nous avons effectu&eacute; des &eacute;crans syst&eacute;matiques avec une librairie bioactif enrichie pour les m&eacute;dicaments non brevet&eacute;s identifier des compos&eacute;s qui potentialisent l&#39;action de fluconazole dans les souches de Candida et Cryptococcus pathog&egrave;nes et la levure mod&egrave;le Saccharomyces. De nombreux compos&eacute;s pr&eacute;sentaient synergie sp&eacute;cifique de genre ou l&#39;esp&egrave;ce et souvent am&eacute;lior&eacute; fluconazole de fongistatique &agrave; activit&eacute; fongicide. Mode d&#39;&eacute;tudes de l&#39;action a r&eacute;v&eacute;l&eacute; deux classes du compos&eacute; synergique, qui a perturb&eacute; la perm&eacute;abilit&eacute; membranaire ou inhibe la biosynth&egrave;se des sphingolipides. Interactions m&eacute;dicamenteuses synergiques ont &eacute;t&eacute; rationalis&eacute;es par r&eacute;seaux d&#39;interactions g&eacute;n&eacute;tiques mondiales et, notamment, d&#39;ordre sup&eacute;rieur associations m&eacute;dicamenteuses plus potentialisent l&#39;activit&eacute; du fluconazole. Combinaisons synergiques &eacute;taient actifs contre les isolats cliniques r&eacute;sistants au fluconazole et un mod&egrave;le in vivo de l&#39;infection &agrave; Cryptococcus. La r&eacute;utilisation syst&eacute;matique des m&eacute;dicaments approuv&eacute;s contre un spectre d&#39;agents pathog&egrave;nes ainsi identifie les vuln&eacute;rabilit&eacute;s de r&eacute;seau qui peuvent &ecirc;tre exploit&eacute;es pour accro&icirc;tre l&#39;activit&eacute; et le r&eacute;pertoire des agents antifongiques.

D&eacute;couverte h&eacute;t&eacute;rosp&eacute;cifique de combinaisons de m&eacute;dicaments syncr&eacute;tique qui potentialisent l&#39;antifongique fluconazole.

Widerstand gegen weithin verwendet fungistatische Drogen, insbesondere an der Ergosterin-Biosynthese-Hemmer Fluconazol, bedroht Millionen von immungeschw&auml;chten Patienten anf&auml;llig f&uuml;r invasive Pilzinfektionen. Die dichten Netz-Struktur der synthetischen t&ouml;dliche genetische Interaktionen in der Hefe legt nahe, dass kombinatorische Netzwerk Hemmung Drogen Wirksamkeit und Spezifit&auml;t leisten kann. Wir durchgef&uuml;hrten systematischen Bildschirme mit einer bioaktiven Bibliothek bereichert-Patent Drogen Substanzen zu identifizieren, die Fluconazol-Aktion in pathogenen Candida und Cryptococcus St&auml;mmen und die Modell-Hefe Saccharomyces beigemischt. Viele chemische Verbindungen stellte spezielle Art oder Gattung Synergismus und oft verbessert Fluconazol aus fungistatische pilzt&ouml;tende T&auml;tigkeit. Modus Aktion Studien ergab zwei Klassen von synergistische Mischung, die Membrane Permeabilit&auml;t umwerfen oder Sphingolipid-Biosynthese gehemmt. Synergistische Wechselwirkungen wurden durch die globalen genetische Interaktion Netze und, insbesondere h&ouml;herer Ordnung, dass die Kombination weiter die Aktivit&auml;t von Fluconazol potenzierte rationalisiert. Synergistische Kombinationen waren aktiv gegen Fluconazol-resistenten klinischen Isolaten und ein in-vivo Modell der Cryptococcus-Infektion. Die systematische Wiederverwendung von zugelassenen Medikamente gegen ein Spektrum von Krankheitserregern identifiziert somit Netzwerk-Sicherheitsl&uuml;cken, die ausgenutzt werden k&ouml;nnen, um die Aktivit&auml;t und Repertoire der Antipilz-Agenten.

Cross-Spezies Entdeckung und andere Droge-Kombinationen, die das Antimykotikum Fluconazol beigemischt.

Resistenza a ampiamente utilizzato farmaci micostatico, particolarmente per l&#39;ergosterolo biosintesi inibitore fluconazole, minaccia milioni di pazienti immunocompromessi sensibili alle infezioni fungine invasive. La struttura di rete fitta di sintetiche interazioni genetiche letali in lievito suggerisce che l&#39;inibizione di rete combinatoria pu&ograve; permettersi specificit&agrave; ed efficacia del farmaco maggiore. Abbiamo effettuato sistematici schermi con una libreria bioattiva arricchita per i farmaci fuori brevetto identificare composti che potenziare l&#39;azione di fluconazolo in ceppi patogeni di Candida e Cryptococcus e il modello lievito Saccharomyces. Molti composti esposto sinergismo specifiche specie o genere e spesso migliorata fluconazolo da micostatico per attivit&agrave; fungicida. Modalit&agrave; di studi di azione ha rivelato due classi di composto sinergico, che turbato la permeabilit&agrave; della membrana o inibito sfingolipidi biosintesi. Interazioni farmacologiche sinergiche sono state razionalizzate da reti di interazione genetica globale e, in particolare, pi&ugrave; alto ordine di combinazioni di farmaci ulteriormente potenziate le attivit&agrave; di fluconazolo. Combinazioni sinergiche erano attivi contro gli isolati clinici resistenti agli fluconazolo e un modello in vivo di infezione da Cryptococcus. Cos&igrave; il riutilizzo sistematico di farmaci approvati contro uno spettro di patogeni identifica le vulnerabilit&agrave; di rete che possono essere sfruttate per aumentare l&#39;attivit&agrave; e il repertorio degli agenti antifungini.

Cross-specie scoperta di combinazioni di farmaci sincretica che potenziare il fluconazolo antimicotico.

&#x62B5;&#x6297;&#x306F;&#x5E83;&#x304F;&#x9759;&#x83CC;&#x85AC;&#x3001;&#x7279;&#x306B;&#x30A8;&#x30EB;&#x30B4;&#x30B9;&#x30C6; &#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x963B;&#x5BB3;&#x85AC;&#x30D5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30CA;&#x30BE;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x4E0D;&#x5168;&#x60A3;&#x8005;&#x4FB5;&#x8972;&#x6027;&#x771F;&#x83CC;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x3084;&#x3059;&#x3044;&#x306E;&#x6570;&#x767E;&#x4E07;&#x3092;&#x8105;&#x304B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5408;&#x6210;&#x81F4;&#x6B7B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x5BC6;&#x306A;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x69CB;&#x9020;&#x5897;&#x52A0;&#x85AC;&#x7269;&#x306E;&#x6709;&#x52B9;&#x6027;&#x3068;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x306B;&#x7D44;&#x5408;&#x305B;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x963B;&#x5BB3;&#x3092;&#x90FD;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30AA;&#x30D5;&#x7279;&#x8A31;&#x85AC;&#x30D5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30CA;&#x30BE;&#x30FC;&#x30EB; &#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30AB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30C0;&#x3084;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30B3;&#x30C3;&#x30AB;&#x30B9;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x7CFB;&#x7D71;&#x3068;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x9175;&#x6BCD;&#x9175;&#x6BCD;&#x3092;&#x5897;&#x5F37;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x751F;&#x7406;&#x6D3B;&#x6027;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x3068;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7684;&#x306A;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x904B;&#x3093;&#x3060;&#x3002;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306F;&#x3001;&#x7A2E;&#x3084;&#x5C5E;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x76F8;&#x4E57;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x51FA;&#x5C55;&#x3057;&#x3001;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x9759;&#x83CC;&#x304B;&#x3089;&#x30D5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30CA;&#x30BE;&#x30FC;&#x30EB;&#x6BBA;&#x83CC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9; &#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x819C;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x6442;&#x52D5;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B4;&#x8102;&#x8CEA;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x76F8;&#x4E57;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x76F8;&#x4E57;&#x7684;&#x85AC;&#x7269;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x7279;&#x306B;&#x3001;&#x9AD8;&#x6B21;&#x306E;&#x85AC;&#x5264;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x30D5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30CA;&#x30BE;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x5897;&#x5F37;&#x3057;&#x305F;&#x5408;&#x7406;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x76F8;&#x4E57;&#x7684;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306F;&#x30D5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30CA;&#x30BE;&#x30FC;&#x30EB;&#x8010;&#x6027;&#x81E8;&#x5E8A;&#x5206;&#x96E2;&#x682A;&#x3068;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30B3;&#x30C3;&#x30AB;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x306E; in vivo &#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x306E;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x627F;&#x8A8D;&#x85AC;&#x306E;&#x7CFB;&#x7D71;&#x7684;&#x8EE2;&#x7528;&#x3053;&#x3046;&#x3057;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x3068;&#x6297;&#x771F;&#x83CC;&#x5264;&#x306E;&#x30EC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x60AA;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x8106;&#x5F31;&#x6027;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xC800;&#xD56D;&#xC744; &#xB110;&#xB9AC; ergosterol &#xC0DD; &#xD569;&#xC131; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; fluconazole &#xD2B9;&#xD788; fungistatic &#xB9C8;&#xC57D; &#xC0AC;&#xC6A9;, &#xCE68; &#xC2B5; &#xACF0; &#xD321;&#xC774; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0; &#xCDE8;&#xC57D; immunocompromised &#xD658;&#xC790;&#xC758; &#xC218;&#xBC31;&#xB9CC; &#xC704;&#xD611; &#xD558;. &#xD6A8; &#xBAA8;&#xC5D0; &#xD569;&#xC131; &#xCE58;&#xBA85;&#xC801;&#xC778; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC870;&#xBC00;&#xD55C; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xAD6C;&#xC870; &#xC81C;&#xC548; &#xC870;&#xD569; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xC800;&#xD574; &#xC99D;&#xAC00; &#xC57D;&#xBB3C; &#xD6A8;&#xB2A5;&#xACFC; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xAC10;&#xB2F9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xCE78;&#xB514; &#xB2E4; &#xBC0F; Cryptococcus &#xAE34;&#xC7A5; &#xBC0F; &#xBAA8;&#xB378; &#xD6A8; &#xBAA8; Saccharomyces fluconazole &#xC561;&#xC158; &#xC57D;&#xD6A8; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xD2B9;&#xD5C8; &#xC758;&#xC57D;&#xD488;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xD65C;&#xC131; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xC640; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC801;&#xC778; &#xD654;&#xBA74;&#xC744; &#xC2E4;&#xC2DC;. &#xB9CE;&#xC740; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; &#xC885; &#xB610;&#xB294; &#xC18D; &#xD2B9;&#xC815; &#xC131;&#xBD84;, &#xC804;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xC790;&#xC8FC; &#xC0B4; &#xADE0; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0;&#xC11C; fungistatic fluconazole&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1;. &#xD589;&#xB3D9; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4DC; &#xB9C9; &#xD22C;&#xACFC;&#xC728;&#xC744; &#xAD50;&#xB780; &#xB610;&#xB294; sphingolipid &#xC0DD; &#xD569;&#xC131;&#xC744; &#xC800;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xC2DC;&#xB108;&#xC9C0; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xB450; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4;&#xB97C; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC2DC;&#xB108;&#xC9C0; &#xC57D;&#xBB3C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC640; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xB192;&#xC740; &#xC21C;&#xC11C; &#xC57D;&#xBB3C; &#xC870;&#xD569;&#xC744; &#xCD94;&#xAC00; potentiated fluconazole&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD569;&#xB9AC;&#xD654; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC2DC;&#xB108;&#xC9C0; &#xC870;&#xD569; fluconazole &#xB0B4;&#xC131; &#xC784;&#xC0C1; &#xACA9;&#xB9AC; &#xBC0F; Cryptococcus &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; in vivo &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD65C;&#xB3D9; &#xBC0F; &#xD56D;&#xC9C4;&#xADE0; &#xC694;&#xC6D0;&#xC758; &#xB808; &#xD37C; &#xD1A0;&#xB9AC; &#xC99D;&#xAC00; &#xC545;&#xC6A9; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xCDE8;&#xC57D;&#xC810; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xADE0;&#xC758; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2B9;&#xC778; &#xB41C; &#xC57D;&#xBB3C;&#xC758; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC801;&#xC778; &#xC7AC;&#xC0AC;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD56D;&#xC9C4;&#xADE0; fluconazole &#xC57D;&#xD6A8; &#xD615;&#xD0DC; &#xC57D;&#xBB3C; &#xC870;&#xD569; &#xAC04; &#xC885; &#xBC1C;&#xACAC;.

Resistencia al ampliamente usado drogas fungist&aacute;ticos, particularmente para el fluconazol de inhibidor de la bios&iacute;ntesis de ergosterol, amenaza a millones de pacientes inmunocomprometidos susceptibles a las infecciones mic&oacute;ticas invasivas. La estructura densa red de interacciones gen&eacute;ticas letales sint&eacute;ticas en levadura sugiere que la inhibici&oacute;n de la combinatoria de la red puede pagar especificidad y eficacia de los medicamentos mayor. Llevamos a cabo sistem&aacute;ticas pantallas con una biblioteca bioactiva enriquecida para que medicamentos fuera de patente identificar compuestos que potencian la acci&oacute;n de fluconazol en cepas pat&oacute;genas de la Candida y Cryptococcus y la levadura Saccharomyces de la modelo. Muchos compuestos exhiben sinergismo espec&iacute;ficas de la especie o g&eacute;nero y a menudo mejoraron fluconazol de fungist&aacute;ticos a actividad fungicida. Modo de acci&oacute;n revel&oacute; dos clases de compuestos sin&eacute;rgicos, que inhibe la bios&iacute;ntesis de esfingol&iacute;pidos o perturbado la permeabilidad de la membrana. Interacciones sin&eacute;rgicas se racionalizaron por redes de interacci&oacute;n gen&eacute;tica global y, en particular, una orden m&aacute;s alta combinaciones de medicamentos m&aacute;s potencia la actividad de fluconazol. Combinaciones sin&eacute;rgicas eran activos contra aislados cl&iacute;nicos resistentes a fluconazol y un modelo in vivo de la infecci&oacute;n por Cryptococcus. La sistem&aacute;tica reasignaci&oacute;n de medicamentos aprobados contra un espectro de pat&oacute;genos as&iacute; identifica las vulnerabilidades de la red que pueden ser explotadas para aumentar la actividad y el repertorio de antif&uacute;ngicos.

Article	Year
Identification of small molecule inhibitors of Pseudomonas aeruginosa exoenzyme S using a yeast phenotypic screen. PLoS genetics\| PubMed ID: 18454192	2008
Yeast as a tool to study bacterial effectors. Current opinion in microbiology\| PubMed ID: 19150254	2009
Regulation of epidermal growth factor receptor trafficking by lysine deacetylase HDAC6. Science signaling\| PubMed ID: 20029029	2009
Detecting interactions with membrane proteins using a membrane two-hybrid assay in yeast. Nature protocols\| PubMed ID: 20595957	2010
Cross-species discovery of syncretic drug combinations that potentiate the antifungal fluconazole. Molecular systems biology\| PubMed ID: 21694716	2011

Jasna Curak

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