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Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have great potential for studying human embryonic development, for modeling human diseases in the dish and as a ...

The Rockefeller University

Au cours de la primo-infection par le virus de l&#39;herp&egrave;s simplex 1 (HSV-1), les enfants avec des erreurs inn&eacute;es du toll-like receptor 3 (TLR3) immunit&eacute; sont sujettes &agrave; l&#39;enc&eacute;phalite (HSV-1 (HSE). Nous avons test&eacute; l&#39;hypoth&egrave;se que la pathog&eacute;nie de la HSE implique non h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tiques CNS-r&eacute;sident. Nous avons d&eacute;riv&eacute; des cellules souches pluripotentes induites (CISP) des fibroblastes dermiques de patients TLR3 - et UNC-93 b-d&eacute;ficientes et des contr&ocirc;les. Ces CISP se diff&eacute;rencient en populations hautement purifi&eacute;es de cellules souches neurales (CNS), les neurones, les astrocytes et les oligodendrocytes. L&#39;induction de l&#39;interf&eacute;ron (IFN-&beta;) &beta; et IFN-&lambda;1 en r&eacute;ponse &agrave; la stimulation par l&#39;acide polyinosinic:polycytidylic analogique de dsRNA (poly(I:C)) d&eacute;pendait TLR3 et UNC-93 b dans toutes les cellules test&eacute;es. Toutefois, l&#39;induction de l&#39;IFN-&beta; et IFN-&lambda;1 en r&eacute;ponse &agrave; l&#39;infection par HSV-1 a &eacute;t&eacute; alt&eacute;r&eacute;e s&eacute;lectivement dans les oligodendrocytes et les neurones de l&#39;UNC-93 b-deficient. Ces cellules sont aussi beaucoup plus vuln&eacute;rables &agrave; l&#39;infection par HSV-1 que les cellules contr&ocirc;les, alors que l&#39;UNC-93 b-deficient CNS et les astrocytes n&#39;&eacute;taient pas. Neurones d&eacute;ficients TLR3 trouv&eacute;es &eacute;galement susceptibles &agrave; l&#39;infection par HSV-1. Le sauvetage de l&#39;UNC-93 b - et TLR3 cellules d&eacute;ficientes en poss&eacute;dant l&#39;all&egrave;le sauvage correspondant a montr&eacute; que l&#39;anomalie g&eacute;n&eacute;tique a &eacute;t&eacute; la cause de la poly(I:C) et les ph&eacute;notypes de HSV-1. Le ph&eacute;notype de l&#39;infection virale a &eacute;t&eacute; secouru par le traitement par IFN-&alpha; exog&egrave;ne ou IFN-&beta; (IFN-&alpha;/&beta;) mais pas de IFN-&lambda;1. Ainsi, avec facult&eacute;s affaiblies d&#39;immunit&eacute; intrins&egrave;que de TLR3 UNC 93 b-d&eacute;pendante et IFN-&alpha;/&beta; &agrave; HSV-1 dans le syst&egrave;me nerveux central, dans les neurones et les oligodendrocytes, en particulier, pourrait expliquer la pathog&eacute;nie de la HSE chez les enfants atteints d&#39;une d&eacute;ficience TLR3-voie.

Avec facult&eacute;s affaiblies immunit&eacute; intrins&egrave;que au HSV-1 dans les cellules humaines d&eacute;riv&eacute;es iPSC CNS TLR3 d&eacute;ficient.

&#x5728;&#x539F;&#x53D1;&#x6027;&#x611F;&#x67D3;&#x5355;&#x7EAF;&#x75B1;&#x75B9;&#x75C5;&#x6BD2; 1 (&#x5355;&#x7EAF;&#x75B1;&#x75B9;&#x75C5;&#x6BD2;-1&#xFF09;&#xFF0C;&#x5148;&#x5929;&#x7684; toll &#x6837;&#x53D7;&#x4F53; 3 (TLR3) &#x513F;&#x7AE5;&#x514D;&#x75AB;&#x529B;&#x5F88;&#x5BB9;&#x6613;&#x5355;&#x7EAF;&#x75B1;&#x75B9;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x8111;&#x708E; (HSE)&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x7684; HSE &#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x6D89;&#x53CA;&#x975E;&#x9020;&#x8840;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684; CNS &#x9A7B;&#x5730;&#x7684;&#x5047;&#x8BF4;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECE; TLR3 &#x548C; UNC-93B-&#x7F3A;&#x60A3;&#x8005;&#x7684;&#x76AE;&#x80A4;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x4ECE;&#x63A7;&#x4EF6;&#x6D3E;&#x751F;&#x7684;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x9B54;&#x9B3C;)&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x9B54;&#x9B3C;&#x88AB;&#x5206;&#x5316;&#x4E3A;&#x795E;&#x7ECF;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x795E;&#x7ECF;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;)&#x3001; &#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x3001; &#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x5C11;&#x7A81;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x7EAF;&#x5316;&#x7684;&#x4EBA;&#x53E3;&#x3002;DsRNA &#x6A21;&#x62DF; polyinosinic:polycytidylic &#x9178;&#x523A;&#x6FC0;&#x53CD;&#x5E94;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &beta; (&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &beta;) &#x548C;/&#x6216;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &lambda;1 &#xFF08;poly(I:C)) &#x662F;&#x4F9D;&#x8D56; TLR3 &#x548C; UNC 93B &#x4E2D;&#x8FDB;&#x884C;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x54CD;&#x5E94; 1 &#x578B;&#x5355;&#x7EAF;&#x75B1;&#x75B9;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x4E0E;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &beta; &#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &lambda;1 &#x611F;&#x5E94;&#x662F; UNC 93B &#x7F3A;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x548C;&#x5C11;&#x7A81;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x53D7;&#x635F;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E5F;&#x6BD4;&#x63A7;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x66F4;&#x5BB9;&#x6613;&#x88AB;&#x611F;&#x67D3;&#x5355;&#x7EAF;&#x75B1;&#x75B9;&#x75C5;&#x6BD2; 1&#xFF0C;&#x800C; UNC 93B &#x7F3A;&#x795E;&#x7ECF;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x661F;&#x5F62;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0D;&#x662F;&#x3002;TLR3 &#x7F3A;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E5F;&#x53D1;&#x73B0;&#x6613;&#x53D7; 1 &#x578B;&#x5355;&#x7EAF;&#x75B1;&#x75B9;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x3002;UNC 93B &#x548C; TLR3 &#x7F3A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5E94;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x6551;&#x63F4;&#x8868;&#x660E;&#x9057;&#x4F20;&#x7F3A;&#x9677;&#x7684; poly(I:C) &#x548C;&#x5355;&#x7EAF;&#x75B1;&#x75B9;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x578B;&#x7684;&#x539F;&#x56E0;&#x3002;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x611F;&#x67D3;&#x578B;&#x6551;&#x51FA;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x5916;&#x6E90;&#x6027;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &alpha; &#x6216;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &beta; (&#x5E72;&#x6270;&#x7D20;-&alpha;/&beta;) &#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &lambda;1 &#x652F;&#x6301;&#x6CBB;&#x7597;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;TLR3 &#x548C; UNC-93B-&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20;-&alpha; &beta; &#x56FA;&#x6709;&#x514D;&#x75AB;&#x4E3A;&#x5355;&#x7EAF;&#x75B1;&#x75B9;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x53D7;&#x635F;&#xFF0C;&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#xFF0C;&#x5728;&#x5C11;&#x7A81;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x53EF;&#x80FD;&#x80CC;&#x540E; HSE TLR3 &#x901A;&#x8DEF;&#x7F3A;&#x9677;&#x60A3;&#x513F;&#x7684;&#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

&#x5355;&#x7EAF;&#x75B1;&#x75B9;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x4EBA;&#x7C7B;&#x673A;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD; TLR3 &#x7F3A;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x635F;&#x56FA;&#x6709;&#x514D;&#x75AB;&#x3002;

In the course of primary infection with herpes simplex virus 1 (HSV-1), children with inborn errors of toll-like receptor 3 (TLR3) immunity are prone to HSV-1 encephalitis (HSE). We tested the hypothesis that the pathogenesis of HSE involves non-haematopoietic CNS-resident cells. We derived induced pluripotent stem cells (iPSCs) from the dermal fibroblasts of TLR3- and UNC-93B-deficient patients and from controls. These iPSCs were differentiated into highly purified populations of neural stem cells (NSCs), neurons, astrocytes and oligodendrocytes. The induction of interferon-Î² (IFN-Î²) and/or IFN-Î»1 in response to stimulation by the dsRNA analogue polyinosinic:polycytidylic acid (poly(I:C)) was dependent on TLR3 and UNC-93B in all cells tested. However, the induction of IFN-Î² and IFN-Î»1 in response to HSV-1 infection was impaired selectively in UNC-93B-deficient neurons and oligodendrocytes. These cells were also much more susceptible to HSV-1 infection than control cells, whereas UNC-93B-deficient NSCs and astrocytes were not. TLR3-deficient neurons were also found to be susceptible to HSV-1 infection. The rescue of UNC-93B- and TLR3-deficient cells with the corresponding wild-type allele showed that the genetic defect was the cause of the poly(I:C) and HSV-1 phenotypes. The viral infection phenotype was rescued further by treatment with exogenous IFN-Î± or IFN-Î² ( IFN-Î±/Î²) but not IFN-Î»1. Thus, impaired TLR3- and UNC-93B-dependent IFN-Î±/Î² intrinsic immunity to HSV-1 in the CNS, in neurons and oligodendrocytes in particular, may underlie the pathogenesis of HSE in children with TLR3-pathway deficiencies.

Impaired intrinsic immunity to HSV-1 in human iPSC-derived TLR3-deficient CNS cells.

Im Zuge der prim&auml;ren Infektion mit Herpes-Simplex-Virus 1 (HSV-1), Kinder mit angeborene St&ouml;rungen des Toll-Like-Rezeptor 3 (TLR3) Immunit&auml;t sind anf&auml;llig f&uuml;r HSV-1 Enzephalitis (HSE). Wir testeten die Hypothese, dass die Pathogenese der HSE nicht h&auml;matopoetische CNS-Resident Zellen beinhaltet. Wir abgeleitet induzierten pluripotenten Stammzellen (iPSCs) aus der dermalen Fibroblasten von TLR3 und UNC-93B-defizienten Patienten und Kontrollen. Diese iPSCs wurden differenziert in hochreinem Populationen von neuralen Stammzellen (NSCs), Neuronen und Astrozyten, Oligodendrozyten. Die Induktion von Interferon-&beta; (IFN-&beta;) und/oder IFN-&lambda;1 als Antwort auf die Stimulation durch die sequenzspezifischen analogen Polyinosinic:polycytidylic S&auml;ure (poly(I:C)) war abh&auml;ngig von TLR3 und UNC-93B in allen Zellen getestet. Jedoch war die Induktion von IFN-&beta; und IFN-&lambda;1 als Reaktion auf HSV-1 Infektion selektiv in UNC-93B-defizienten Nervenzellen und Oligodendrozyten beeintr&auml;chtigt. Diese Zellen waren auch viel anf&auml;lliger f&uuml;r HSV-1 Infektion als Steuerelement Zellen, w&auml;hrend UNC-93B-defizienten NSCs und Astrozyten nicht waren. TLR3-defizienten Neuronen fanden sich auch HSV-1 Infektion anf&auml;llig sein. Die Rettung der UNC-93B - und TLR3-defizienten Zellen mit den entsprechenden Wildtyp-Allel zeigte, dass der genetische Defekt die Ursache f&uuml;r die poly(I:C) und HSV-1-Ph&auml;notypen war. Der Ph&auml;notyp der Virusinfektion wurde gerettet durch Behandlung mit exogenen IFN-&alpha; oder IFN-&beta; (IFN-&alpha;/&beta;) aber nicht IFN-&lambda;1 weiter. So beeintr&auml;chtigt TLR3 und UNC-93B-abh&auml;ngigen IFN-&alpha;/&beta; systeminterne Immunit&auml;t gegen HSV-1 im ZNS, insbesondere in Nervenzellen und Oligodendrozyten die Pathogenese von HSE bei Kindern mit TLR3-Stoffwechselweg M&auml;ngel unterliegen kann.

Systeminterne Immunit&auml;t zu HSV-1 in den menschlichen Zellen f&uuml;r iPSC abgeleitete TLR3-defizienten CNS.

Nel corso di infezione primaria da herpes simplex virus 1 (HSV-1), i bambini con errori congeniti del recettore toll-like 3 (TLR3) immunit&agrave; sono inclini a encefalite di HSV-1 (HSE). Abbiamo testato l&#39;ipotesi che la patogenesi dell&#39;HSE coinvolge cellule CNS-residente non ematopoietiche. Abbiamo derivato le cellule staminali pluripotenti indotte (iPSCs) dai fibroblasti dermici di TLR3 e UNC-93B-pazienti e da controlli. Questi iPSCs sono stati differenziati in popolazioni altamente purificate di cellule staminali neurali (NSCs), neuroni, astrociti e gli oligodendrociti. L&#39;induzione di interferone-&beta; (IFN-&beta;) e/o IFN-&lambda;1 in risposta alla stimolazione con l&#39;acido polyinosinic:polycytidylic analogico dsRNA (poly(I:C)) dipendeva TLR3 e UNC-93B in tutte le cellule testate. Tuttavia, l&#39;induzione di IFN-&beta; e IFN-&lambda;1 in risposta all&#39;infezione da HSV-1 &egrave; stato alterato in modo selettivo in oligodendrociti e neuroni UNC-93B-carenti. Queste cellule erano molto pi&ugrave; suscettibili all&#39;infezione da HSV-1 rispetto a cellule di controllo, anche considerando che UNC-93B-carenti NSCs e astrociti non erano. TLR3-carenti i neuroni sono stati trovati anche ad per essere suscettibili di infezione da HSV-1. Il salvataggio delle cellule carenti di UNC-93B e TLR3 con il corrispondente allele wild-type ha mostrato che il difetto genetico &egrave; stato la causa del poly(I:C) e fenotipi HSV-1. Il fenotipo di infezione virale &egrave; stato salvato dal trattamento con IFN-&alpha; esogeno o IFN-&beta; (IFN-&alpha;/&beta;) ma non IFN-&lambda;1 ulteriore. Cos&igrave;, alterata immunit&agrave; intrinseca TLR3 - e UNC-93B-dipendente IFN-&alpha;/&beta; a HSV-1 nel sistema nervoso centrale, in oligodendrociti e neuroni, in particolare, pu&ograve; essere alla base la patogenesi dell&#39;HSE in bambini con carenze TLR3-percorso.

Alterata immunit&agrave; intrinseca di HSV-1 nelle cellule umane del CNS TLR3-carenti di iPSC-derivato.

&#x4E00;&#x6B21;&#x611F;&#x67D3;&#x5358;&#x7D14;&#x30D8;&#x30EB;&#x30DA;&#x30B9; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; 1 &#xFF08;HSV-1&#xFF09;&#x3001;&#x5148;&#x5929;&#x6027; toll &#x69D8;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; 3 (TLR3) &#x5150;&#x306E;&#x904E;&#x7A0B;&#x3067;&#x514D;&#x75AB;&#x306F; HSV-1 &#x8133;&#x708E; &#xFF08;HSE&#xFF09; &#x50BE;&#x5411;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;HSE &#x306E;&#x75C5;&#x56E0;&#x975E;&#x9020;&#x8840;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F; CNS &#x5C45;&#x4F4F;&#x8005;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x8A98;&#x5C0E;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE; &#xFF08;ips &#x7D30;&#x80DE;&#xFF09; TLR3 &#x3068; UNC 93B &#x6B20;&#x640D;&#x60A3;&#x8005;&#x306E;&#x76AE;&#x819A;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E; ips &#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x795E;&#x7D4C;&#x306E;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE; &#xFF08;NSCs&#xFF09; &#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3001;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3001;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C9;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x9AD8;&#x7D14;&#x5EA6;&#x306E;&#x96C6;&#x56E3;&#x306B;&#x5206;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;DsRNA &#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0; polyinosinic:polycytidylic &#x9178;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x523A;&#x6FC0;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30F3;-&beta; (IFN &beta;) &#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F; IFN &lambda;1 &#x306E;&#x8A98;&#x5C0E; &#xFF08;poly(I:C)) TLR3 &#x3068; UNC-93B &#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;IFN &beta; &#x304A;&#x3088;&#x3073; IFN-&lambda;1 &#x306E;&#x8A98;&#x5C0E; HSV-1 &#x611F;&#x67D3;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x306F; UNC 93B &#x6B20;&#x640D;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3001;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C9;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;&#x963B;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x305F;.UNC 93B &#x6B20;&#x640D; NSCs &#x3068;&#x30A2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306F;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x7D30;&#x80DE;&#x3088;&#x308A;&#x3082; HSV-1 &#x611F;&#x67D3;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x3084;&#x3059;&#x3044;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;TLR3 &#x6B20;&#x640D;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;HSV-1 &#x611F;&#x67D3;&#x306B;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3082;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x5BFE;&#x7ACB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068; UNC 93B &#x3068; TLR3 &#x6B20;&#x640D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6551;&#x52A9;&#x306F;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x6B20;&#x9665; poly(I:C) &#x304A;&#x3088;&#x3073; HSV-1 &#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x539F;&#x56E0;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;.&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x304C;&#x6551;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x306E; IFN-&alpha; &#x307E;&#x305F;&#x306F; IFN &beta; (IFN-&alpha;/&beta;) &#x304C;&#x306A;&#x3044; IFN &lambda;1 &#x51E6;&#x7406;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x3055;&#x3089;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;TLR3 &#x3068; UNC 93B &#x4F9D;&#x5B58; IFN-&alpha;/&beta; &#x7D44;&#x307F;&#x8FBC;&#x307F;&#x514D;&#x75AB; HSV-1 &#x306F;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x3092;&#x969C;&#x5BB3;&#x8005;&#x3001;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3001;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C9;&#x30ED; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x7279;&#x306B;&#x3001;HSE &#x306E;&#x75C5;&#x56E0; TLR3 &#x7D4C;&#x8DEF;&#x6B20;&#x9665;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x5B50;&#x4F9B;&#x306E;&#x6839;&#x5E95;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7D44;&#x307F;&#x8FBC;&#x307F;&#x306E;&#x514D;&#x75AB; HSV-1 &#x4EBA;&#x9593; iPSC &#x7531;&#x6765; TLR3 &#x6B20;&#x640D;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x306F;&#x3002;

1 &#xCC28; &#xAC10;&#xC5FC; &#xD5E4; &#xB974; &#xD398; &#xC2A4;&#xC758; &#xB2E8;&#xC21C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; 1 (HSV-1) &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD1B5;&#xD589;&#xC138; &#xAC19;&#xC774; 3 (TLR3)&#xC758; &#xC120;&#xB41C; &#xC624;&#xB958;&#xAC00; &#xC788;&#xB294; &#xC5B4;&#xB9B0;&#xC774; &#xC911; &#xBA74;&#xC5ED; HSV-1 &#xB1CC;&#xC5FC; (HSE) &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xD5A5;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4;. &#xADF8; HSE&#xC758; pathogenesis &#xBE44; haematopoietic CNS &#xC0C1;&#xC8FC; &#xC140; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864; &#xBC0F; tlr3&#xC640; UNC-93B-&#xACB0;&#xD54D; &#xD658;&#xC790;&#xC758; &#xD53C;&#xBD80; &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (iPSCs) &#xD30C;&#xC0DD;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; iPSCs oligodendrocytes, &#xC774;&#xB2E4;, &#xB274;&#xB7F0;, &#xC2E0;&#xACBD; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (NSCs) &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC21C;&#xD654; &#xB41C; &#xC778;&#xAD6C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xBD84; &#xD588;&#xB2E4;. DsRNA &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8; polyinosinic:polycytidylic &#xC0B0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; IFN-&lambda;1 &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xB860;-&beta; (IFN-&beta;)&#xC758; &#xC720;&#xB3C4; (poly(i:c))&#xB294; tlr3&#xC640; UNC-93B &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC140; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, HSV-1 &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; IFN-&beta;&#xC640; IFN-&lambda;1&#xC758; &#xC720;&#xB3C4; UNC 93B &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; oligodendrocytes&#xC5D0; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC7A5;&#xC560;&#xC778;. &#xBC18;&#xBA74; UNC 93B &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; Nscs&#xC640; &#xC774;&#xB2E4;&#xAC00;&#xC774; &#xC138;&#xD3EC; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC140; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB354; HSV-1 &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0; &#xCDE8;&#xC57D;&#xB3C4; &#xD588;&#xB2E4;. TLR3-&#xACB0;&#xD54D; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC; &#xB610;&#xD55C; HSV-1 &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0; &#xCDE8;&#xC57D; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. UNC 93B &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD558; &#xACE0; TLR3 &#xD55C; &#xC140; &#xD574;&#xB2F9; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD615; &#xB300;&#xB9BD; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xACB0;&#xD568; &#xC6D0;&#xC778;&#xC744; poly(I:C) HSV-1 &#xACE0;&#xAE30;&#xB294; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xAC10;&#xC5FC; &#xD615; &#xAD6C;&#xCD9C; exogenous IFN-&alpha; &#xB610;&#xB294; IFN-&beta; (IFN-&alpha;/&beta;) &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; IFN-&lambda;1 &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCD94;&#xAC00;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, CNS&#xC5D0; HSV-1 TLR3-&#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; UNC-93B &#xC885;&#xC18D; IFN-&alpha;/&beta; &#xBCF8;&#xC9C8;&#xC801;&#xC778; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC7A5;&#xC560;, &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; oligodendrocytes &#xD2B9;&#xD788;, TLR3 &#xD1B5;&#xB85C; &#xACB0;&#xD568;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xC544;&#xC774; &#xB4E4;&#xC5D0;&#xC11C; HSE&#xC758; pathogenesis &#xAE30;&#xBC18;&#xC774; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; iPSC &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; TLR3 &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; CNS &#xC140;&#xC5D0; HSV-1&#xC5D0; &#xC7A5;&#xC560;&#xAC00; &#xC788;&#xB294; &#xBCF8;&#xC9C8;&#xC801;&#xC778; &#xBA74;&#xC5ED;.

En el curso de la infecci&oacute;n primaria con virus del herpes simple 1 (HSV-1), los ni&ntilde;os con defectos cong&eacute;nitos del toll-like receptor 3 (TLR3) inmunidad son propensos a la encefalitis de HSV-1 (HSE). Probamos la hip&oacute;tesis que la patogenesia de HSE consiste en c&eacute;lulas de CNS residentes no-hematopoy&eacute;ticas. Derivamos c&eacute;lulas pluripotentes inducidas (iPSCs) de los fibroblastos d&eacute;rmicos de pacientes TLR3 - y UNC-93B-deficientes y de controles. Estos iPSCs fueron distinguidos en poblaciones altamente purificadas de las c&eacute;lulas madre neurales (NSCs), neuronas, astrocitos y oligodendrocitos. La inducci&oacute;n de interfer&oacute;n-&beta; (IFN-&beta;) o IFN-&lambda;1 en respuesta a la estimulaci&oacute;n por el &aacute;cido polyinosinic:polycytidylic anal&oacute;gico de dsRNA (poly(I:C)) era dependiente en TLR3 y UNC-93B en todas las c&eacute;lulas probado. Sin embargo, la inducci&oacute;n de IFN-&beta; y del IFN-&lambda;1 en respuesta a la infecci&oacute;n por HSV-1 fue deteriorada selectivamente en oligodendrocitos y las neuronas de la UNC-93B-deficiente. Estas c&eacute;lulas tambi&eacute;n eran mucho m&aacute;s susceptibles a la infecci&oacute;n por HSV-1 que las c&eacute;lulas del control, mientras que el UNC-93B-deficient NSCs y astrocitos no eran. Deficiencia de TLR3 neuronas tambi&eacute;n fueron encontradas para ser susceptibles a la infecci&oacute;n por HSV-1. El rescate de c&eacute;lulas de la UNC-93B - y TLR3-deficientes con el alelo correspondiente demostr&oacute; que el defecto gen&eacute;tico fue la causa de la poly(I:C) y los fenotipos de HSV-1. El fenotipo de la infecci&oacute;n viral fue rescatado m&aacute;s por el tratamiento con IFN-&alpha; ex&oacute;geno o IFN-&beta; (IFN-&alpha;/&beta;) pero no IFN-&lambda;1. As&iacute;, personas con problemas de inmunidad intr&iacute;nseca TLR3 UNC 93B-dependientes y IFN-&alpha;/&beta; para HSV-1 en el SNC, en neuronas y oligodendrocitos en particular, pueden subyacer a la patogenesia de HSE en ni&ntilde;os con deficiencias de TLR3-camino.

Fabien G. Lafaille

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