immunodetection-outer-membrane-proteins-flow-cytometry-isolated

Immunodetection of Outer Membrane Proteins by Flow Cytometry of Isolated Mitochondria

Methods to detect and monitor mitochondrial outer membrane protein components in animal tissues are vital to study mitochondrial physiology and ...

Université de Montréal, CRCHUM

Dysferlin is a type II transmembrane protein implicated in Ca(2+)-dependent sarcolemmal membrane repair. Dysferlin has seven C2 domains, which are lipid and protein binding modules. In this study, we sought to characterize the lipid binding specificity of dysferlin's seven C2 domains. Dysferlin's C2A domain was able to bind to phosphatidylserine (PS), phosphatidylinositol 4-phosphate [PtdIns(4)P], and phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate [PtdIns(4,5)P(2)] in a Ca(2+)-dependent fashion. The remainder of the C2 domains exhibited weaker and Ca(2+)-independent binding to PS and no significant binding to phosphoinositides.

Characterization of lipid binding specificities of dysferlin C2 domains reveals novel interactions with phosphoinositides.

&#x7126;&#x6CB9;&#x8131;&#x6C27;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; 43 (TDP-43&#xFF09; &#x662F;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#xFF0C;pre-messenger &#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178; (mRNA) &#x62FC;&#x63A5;&#xFF0C;mRNA &#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x548C;&#x8FD0;&#x8F93;&#x4E2D;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#x3002;&#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6;&#x5F02;&#x6784;&#x6838; ribonucleoproteins (hnRNPs)&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x901A;&#x8FC7;&#x5176; C &#x603B;&#x7AD9; hnRNP A2&#xFF0C;TDP 43 &#x4EA4;&#x4E92;&#x548C;&#x51E0;&#x4E2A; hnRNP &#x5BB6;&#x65CF;&#x6210;&#x5458;&#x90FD;&#x53C2;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5E94;&#x6FC0;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5173;&#x7CFB;&#x4F7F;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684; TDP 43 &#x4E2D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5E94;&#x6FC0;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; TDP 43 &#x548C; hnRNP A2 &#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x5F3A;&#x8C03;&#x9897;&#x7C92; (SGs) &#x540E;&#x6C27;&#x5316;&#x5E94;&#x6FC0;&#x3001; &#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x548C;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E; thapsigargin&#x3002;TDP 43&#xFF0C;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x5927;&#x4F1A;&#x548C; SGs &#x5BF9;&#x6C27;&#x5316;&#x5E94;&#x6FC0;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E2D;&#x7684;&#x7EF4;&#x4FEE;&#x548C;&#x5DEE;&#x5F02;&#x8C03;&#x8282; SGs &#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x7EC4;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x77ED;&#x6682;&#x6027;&#x8111;&#x7F3A;&#x8840;&#x53D1;&#x4F5C;-1 &#x548C; G3BP&#x3002;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x805A;&#x5408;&#x7684;&#x77ED;&#x6682;&#x6027;&#x8111;&#x7F3A;&#x8840;&#x53D1;&#x4F5C; 1 TDP 43 &#x653E;&#x6162; SG &#x5F62;&#x6210;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6CA1;&#x6709;&#x4E2D;&#x65AD;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;TDP 43 &#x89C4;&#x7BA1; G3BP mRNA&#xFF0C;SG &#x6210;&#x6838;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x75BE;&#x75C5;&#x76F8;&#x5173;&#x7A81;&#x53D8; TDP-43(R361S) &#x662F;&#x6B63;&#x786E;&#x7684; SG &#x5F62;&#x6210;&#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x7A81;&#x53D8;&#x548C;&#x8D4B;&#x4E88;&#x7684; G3BP &#x548C;&#x77ED;&#x6682;&#x6027;&#x8111;&#x7F3A;&#x8840;&#x53D1;&#x4F5C;-1 &#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x6B21;&#x7A81;&#x53D8; TDP-43(D169G) &#x4E0D;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x6B64;&#x901A;&#x8DEF;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x5728; TDP 43 &#x7A81;&#x53D8;&#x662F;&#x673A;&#x68B0;&#x5316;&#x53D1;&#x6563;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x7684; TDP 43 &#x8D85;&#x51FA;&#x62FC;&#x63A5;&#x548C;&#x5730;&#x65B9; TDP 43 &#x4F5C;&#x4E3A; RNA &#x5B58;&#x50A8;&#x4E2D;&#x592E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53CD;&#x5E94;&#x53CA;&#x5E94;&#x529B;&#x548C;&#x79EF;&#x6781;&#x53C2;&#x4E0E;&#x8005;&#x3002;

&#x7126;&#x6CB9; DNA &#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; 43 (TDP-43) &#x89C4;&#x5B9A;&#x4E86;&#x901A;&#x8FC7; G3BP &#x548C;&#x77ED;&#x6682;&#x6027;&#x8111;&#x7F3A;&#x8840;&#x53D1;&#x4F5C;-1 &#x5FAE;&#x5206;&#x8C03;&#x8282;&#x538B;&#x529B;&#x9897;&#x7C92;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x3002;

TAR deoxyribonucleic acid-binding protein 43 (TDP-43) is a multifunctional protein with roles in transcription, pre-messenger ribonucleic acid (mRNA) splicing, mRNA stability and transport. TDP-43 interacts with other heterogeneous nuclear ribonucleoproteins (hnRNPs), including hnRNP A2, via its C-terminus and several hnRNP family members are involved in the cellular stress response. This relationship led us to investigate the role of TDP-43 in cellular stress. Our results demonstrate that TDP-43 and hnRNP A2 are localized to stress granules (SGs), following oxidative stress, heat shock and exposure to thapsigargin. TDP-43 contributes to both the assembly and maintenance of SGs in response to oxidative stress and differentially regulates key SGs components, including TIA-1 and G3BP. The controlled aggregation of TIA-1 is disrupted in the absence of TDP-43 resulting in slowed SG formation. In addition, TDP-43 regulates the levels of G3BP mRNA, a SG nucleating factor. The disease-associated mutation TDP-43(R361S) is a loss-of-function mutation with regards to SG formation and confers alterations in levels of G3BP and TIA-1. In contrast, a second mutation TDP-43(D169G) does not impact this pathway. Thus, mutations in TDP-43 are mechanistically divergent. Finally, the cellular function of TDP-43 extends beyond splicing and places TDP-43 as a participant of the central cellular response to stress and an active player in RNA storage.

TAR DNA-binding protein 43 (TDP-43) regulates stress granule dynamics via differential regulation of G3BP and TIA-1.

TAR acide d&#xE9;soxyribonucl&#xE9;ique-binding protein 43 (TDP-43) est une prot&#xE9;ine multifonctionnelle avec des r&#xF4;les dans la transcription, pr&#xE9;-acide ribonucl&#xE9;ique messager (ARNm) d&#x26;#39;&#xE9;pissage, stabilit&#xE9; de l&#x26;#39;ARNm et de transport. TDP-43 interagit avec d&#x26;#39;autres h&#xE9;t&#xE9;rog&#xE8;nes (hnRNP ribonucl&#xE9;oprot&#xE9;ines nucl&#xE9;aires), y compris les hnRNP A2, via son extr&#xE9;mit&#xE9; C-terminale et plusieurs membres de la famille hnRNP sont impliqu&#xE9;es dans la r&#xE9;ponse cellulaire au stress. Cette relation nous a conduit &#xE0; &#xE9;tudier le r&#xF4;le de TDP-43 dans le stress cellulaire. Nos r&#xE9;sultats d&#xE9;montrent que TDP-43 et hnRNP A2 sont localis&#xE9;s &#xE0; granules de stress (SGS), suite &#xE0; un stress oxydatif, le choc thermique et l&#x26;#39;exposition &#xE0; la thapsigargine. TDP-43 contribue &#xE0; la fois l&#x26;#39;assemblage et la maintenance de SG en r&#xE9;ponse au stress oxydatif et r&#xE9;glemente de mani&#xE8;re diff&#xE9;rentielle les principaux composants SGS, et notamment la norme TIA-1 et G3BP. L&#x26;#39;agr&#xE9;gation contr&#xF4;l&#xE9; de TIA-1 est perturb&#xE9; en l&#x26;#39;absence de TDP-43 r&#xE9;sultant en la formation SG ralenti. En outre, TDP-43 r&#xE9;gule les niveaux d&#x26;#39;ARNm de G3BP, un facteur de nucl&#xE9;ation SG. La mutation associ&#xE9;e &#xE0; la maladie TDP-43 (R361S) est une mutation perte de fonction en ce qui concerne la formation SG et conf&#xE8;re alt&#xE9;rations dans des niveaux de G3BP et TIA-1. En revanche, une seconde mutation TDP-43 (D169G) n&#x26;#39;a aucune incidence sur cette voie. Ainsi, des mutations dans TDP-43 sont m&#xE9;caniquement divergentes. Enfin, la fonction cellulaire de TDP-43 s&#x26;#39;&#xE9;tend au-del&#xE0; d&#x26;#39;&#xE9;pissage et les lieux de TDP-43 en tant que participant de la r&#xE9;ponse cellulaire au stress centrale et un acteur actif dans le stockage d&#x26;#39;ARN.

TAR DNA-binding protein 43 (TDP-43) R&#xE9;glemente Dynamics granules de stress Via r&#xE8;glement diff&#xE9;rentiel de G3BP et TIA-1

TAR Desoxyribonukleins&auml;ure-verbindliches Protein 43 (TDP-43) ist ein multifunktionales Protein mit Rollen in der Transkription, Eukaryoten Ribonukleins&auml;ure (mRNA), Splei&szlig;en, mRNA Stabilit&auml;t und Transport. TDP-43 interagiert mit anderen heterogenen nukleare Ribonucleoproteins (HnRNPs), einschlie&szlig;lich HnRNP A2, &uuml;ber seine C-Terminus und mehrere HnRNP Familienmitglieder sind die zellul&auml;ren Stressantwort beteiligt. Diese Beziehung f&uuml;hrten wir die Rolle der TDP-43 im zellul&auml;ren Stress zu untersuchen. Unsere Ergebnisse zeigen, dass die TDP-43 und HnRNP A2 lokalisiert werden Granulat (SGs), Stress nach oxidativer Stress, Hitzeschock und Exposition gegen&uuml;ber Thapsigargin. TDP-43 tr&auml;gt zur Montage und Wartung von SGs in Reaktion auf oxidativen Stress und differentiell reguliert wichtige SGs-Komponenten, einschlie&szlig;lich TIA-1 und G3BP. Die kontrollierte Aggregation von TIA-1 wird in Ermangelung TDP-43 was zu verlangsamte SG-Bildung gest&ouml;rt. Dar&uuml;ber hinaus regelt die TDP-43 die Ebenen der G3BP mRNA, ein nucleating SG-Faktor. Die Krankheit-assoziierten Mutation TDP-43(R361S) ist eine Loss of Function-Mutation im Hinblick auf die SG-Bildung und &uuml;bertr&auml;gt &Auml;nderungen im G3BP und TIA-1. Im Gegensatz dazu hat eine zweite Mutation TDP-43(D169G) diese Option keine Auswirkungen. Daher sind Mutationen im TDP-43 mechanistisch unterschiedlich. Schlie&szlig;lich die Zellfunktion der TDP-43 hinausgeht, Splei&szlig;en und TDP-43 als Teilnehmer der zentralen zellul&auml;re Reaktion auf Stress und aktiver Spieler in RNA-Speicher platziert.

TAR DNA-bindenden Protein 43 (TDP-43) regelt die Spannung Untermodul Dynamik &uuml;ber differenzielle Verordnung von G3BP und TIA-1.

TAR acido desossiribonucleico-binding protein 43 (TDP-43) &egrave; una proteina multifunzionale con ruoli nella trascrizione, pre-messenger acido ribonucleico (mRNA) lo splicing, stabilit&agrave; mRNA e trasporto. TDP-43 interagisce con altri eterogenei ribonucleoproteins nucleare (hnRNPs), tra cui hnRNP A2, tramite il C-terminale e diversi membri della famiglia hnRNP sono coinvolti nella risposta di stress cellulare. Questo rapporto ci ha portato a indagare il ruolo di TDP-43 in stress cellulare. I nostri risultati dimostrano che TDP-43 e hnRNP A2 sono localizzati a stress granuli (SGs), seguendo lo stress ossidativo, scossa di calore e l&#39;esposizione a thapsigargin. TDP-43 contribuisce al montaggio e manutenzione di SGs in risposta allo stress ossidativo e regola differenzialmente SGs componenti chiave, tra cui TIA-1 e G3BP. L&#39;aggregazione controllata di TIA-1 &egrave; perturbato in assenza di TDP-43, con conseguente formazione di SG rallentato. Inoltre, TDP-43 regola i livelli di mRNA G3BP, un fattore di nucleazione SG. La mutazione associata a malattia TDP-43(R361S) &egrave; una mutazione di perdita di funzione per quanto riguarda la formazione di SG e conferisce alterazioni nei livelli di G3BP e TIA-1. Al contrario, una seconda mutazione TDP-43(D169G) non l&#39;impatto di questo percorso. Cos&igrave;, le mutazioni TDP-43 sono meccanicistico divergenti. Infine, la funzione cellulare di TDP-43 si estende oltre lo splicing e luoghi TDP-43 come partecipante della centrale risposta cellulare allo stress e un giocatore attivo in memoria di RNA.

TAR DNA-binding protein 43 (TDP-43) regola lo stress granulo dinamica tramite regolamento differenziale di G3BP e TIA-1.

TAR&#x30C7;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EA;&#x30DC;&#x6838;&#x9178;&#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;43&#xFF08;TDP-43&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x3001;&#x30D7;&#x30EC;&#x30E1;&#x30C3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30E3;&#x30FC;&#x30EA;&#x30DC;&#x6838;&#x9178;&#xFF08;mRNA&#xFF09;&#x306E;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;mRNA&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3068;&#x8F38;&#x9001;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x591A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; TDP-43&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;C-&#x672B;&#x7AEF;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;hnRNP&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x306E;hnRNP A2&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x4ED6;&#x306E;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x6838;&#x30EA;&#x30DC;&#x6838;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;hnRNPs&#xFF09;&#x3068;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306F;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;TDP-43&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5C0E;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;TDP-43&#x3068;&#x306E;hnRNP A2&#x306F;&#x3001;&#x9178;&#x5316;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x3001;&#x71B1;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF;&#x53CA;&#x3073;&#x30BF;&#x30D7;&#x30B7;&#x30AC;&#x30EB;&#x30AE;&#x30F3;&#x3078;&#x306E;&#x66B4;&#x9732;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x9846;&#x7C92;&#xFF08;SGS&#xFF09;&#x306B;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; TDP-43&#x306F;&#x3001;&#x9178;&#x5316;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x3001;SG&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x3068;&#x4FDD;&#x5B88;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x3001;&#x5DEE;&#x52D5;TIA-1&#x3068;G3BP&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;SGS&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; TIA-1&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x51DD;&#x96C6;&#x304C;&#x9045;&#x304F;&#x306A;&#x3063;&#x3066;SG&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3059;TDP-43&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x4E2D;&#x65AD;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;TDP-43&#x306F;G3BP mRNA&#x304C;&#x3001;SG&#x306E;&#x6838;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x75BE;&#x60A3;&#x95A2;&#x9023;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;TDP-43&#xFF08;R361S&#xFF09;&#x306F;&#x3001;SG&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x55AA;&#x5931;&#x5909;&#x7570;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;G3BP&#x3068;TIA-1&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;TDP-43&#xFF08;D169G&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x306F;&#x5F71;&#x97FF;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;TDP-43&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x306B;&#x767A;&#x6563;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;TDP-43&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306E;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5FDC;&#x7B54;&#x304A;&#x3088;&#x3073;RNA&#x306E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B8;&#x5185;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x30D7;&#x30EC;&#x30A4;&#x30E4;&#x30FC;&#x306E;&#x53C2;&#x52A0;&#x8005;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x5834;&#x6240;TDP-43&#x3092;&#x8D85;&#x3048;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

TAR DNA&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;43&#xFF08;TDP-43&#xFF09;G3BP&#x3068;TIA-1&#x306E;&#x5DEE;&#x52D5;&#x898F;&#x5236;&#x7D4C;&#x7531;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x9846;&#x7C92;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;

&#xD0C0;&#xB974; deoxyribonucleic &#xC0B0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 43 (TDP-43)&#xB294; &#xC804;&#xC0AC;, &#xC811;&#xD569;, mRNA &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xACFC; &#xC804;&#xC1A1; pre-messenger ribonucleic &#xC0B0; (mRNA)&#xC5D0; &#xC5ED;&#xD560;&#xACFC; &#xB2E4;&#xAE30;&#xB2A5; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC774; &#xC774;&#xB2E4;. TDP-43 &#xB2E4;&#xB978; &#xC774;&#xC885; &#xD575; ribonucleoproteins (hnRNPs) Hnrnp&#xC758; C-&#xB9D0;&#xB2E8;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; a 2&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBC0F; &#xC5EC;&#xB7EC; hnRNP &#xAC00;&#xC871; &#xC138;&#xD3EC; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294;. &#xC774; &#xAD00;&#xACC4; &#xC138;&#xD3EC; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC5D0; TDP-43&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC774;&#xB04C;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; TDP-43 &#xBC0F; hnRNP a 2 &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB418;&#xC5B4;&#xACFC; &#xB9BD; (SGs) &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;, &#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; &#xBC0F; thapsigargin&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. TDP-43 &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; Sgs&#xC758; &#xC720;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558; &#xACE0; &#xCC28;&#xB3D9; &#xD2F0;&#xC544;-1 &#xBC0F; g3bp&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xD0A4; SGs &#xBD80;&#xD488;&#xC744; &#xC870;&#xC808;. &#xD2F0;&#xC544;-1&#xC758; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC9D1;&#xACC4;&#xB294; TDP 43 &#xB454;&#xD654; SG &#xD615;&#xC131;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xB2E8; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, TDP-43 G3BP mRNA, SG nucleating &#xC694;&#xC18C; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xC870;&#xC808;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9C8;&#xBCD1; &#xAD00;&#xB828; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; TDP-43(R361S) SG &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xAD00;&#xD574;&#xC11C;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC190;&#xC2E4; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC774;&#xBA70; &#xC218; &#xC5EC; g3bp&#xACFC; &#xD2F0;&#xC544; 1&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCC0;&#xACBD;. &#xBC18;&#xBA74;, &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; TDP-43(D169G)&#xC774;&#xC774; &#xD1B5;&#xB85C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, TDP-43&#xC5D0; &#xBCC0;&#xC774; mechanistically &#xBD84;&#xAE30;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, TDP-43&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC811;&#xD569;&#xC744; &#xB118;&#xC5B4; &#xD655;&#xC7A5; &#xBC0F; RNA &#xC2A4;&#xD1A0;&#xB9AC;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC640; &#xD604;&#xC5ED; &#xC120;&#xC218;&#xC5D0; &#xC911;&#xC559; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xC751;&#xB2F5;&#xC758; &#xCC38;&#xC5EC;&#xC790;&#xB85C; TDP 43 &#xC7A5;&#xC18C;.

&#xD0C0;&#xB974; DNA &#xC758;&#xBB34;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 43 (TDP-43) g3bp&#xC640; &#xD2F0;&#xC544; 1 &#xCC28;&#xB4F1; &#xADDC;&#xC81C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xACFC; &#xB9BD; &#xC5ED;&#xD559;&#xC744; &#xC870;&#xC808;.

TAR &#xE1;cido desoxirribonucleico-prote&#xED;na de uni&#xF3;n 43 (TDP-43) es una prote&#xED;na multifuncional con papeles en la transcripci&#xF3;n, pre-mensajero &#xE1;cido ribonucleico (ARNm) de empalme, la estabilidad del mRNA y el transporte. TDP-43 interact&#xFA;a con otras ribonucleoprote&#xED;nas heterog&#xE9;neas nucleares (hnRNPs), incluyendo hnRNP A2, a trav&#xE9;s de su C-terminal y varios miembros de la familia hnRNP est&#xE1;n involucrados en la respuesta al estr&#xE9;s celular. Esta relaci&#xF3;n nos llev&#xF3; a investigar el papel de la TDP-43 en el estr&#xE9;s celular. Nuestros resultados demuestran que la TDP-43 y A2 hnRNP est&#xE1;n localizados en los gr&#xE1;nulos de estr&#xE9;s (SGS), siguiendo el estr&#xE9;s oxidativo, choque t&#xE9;rmico y la exposici&#xF3;n a thapsigargin. TDP-43 contribuye tanto a la asamblea y el mantenimiento de la SGS, en respuesta al estr&#xE9;s oxidativo y regula diferencialmente SG componentes clave, como TIA-1 y G3BP. La agregaci&#xF3;n controlada de TIA-1 se interrumpe en la ausencia de TDP-43 que resulta en la formaci&#xF3;n de frenado SG. Adem&#xE1;s, TDP-43 regula los niveles de ARNm G3BP, un factor de nucleaci&#xF3;n SG. La mutaci&#xF3;n de la enfermedad asociada a TDP-43 (R361S) es una mutaci&#xF3;n de p&#xE9;rdida de la funci&#xF3;n con respecto a la formaci&#xF3;n de SG y confiere alteraciones en los niveles de G3BP y TIA 1-. En contraste, una segunda mutaci&#xF3;n TDP-43 (D169G) no influye en esta v&#xED;a. As&#xED;, las mutaciones en TDP-43 son mec&#xE1;nicamente divergente. Por &#xFA;ltimo, la funci&#xF3;n celular de TDP-43 se extiende m&#xE1;s all&#xE1; de empalme y los lugares de TDP-43 como participante de la Central de Respuesta celular al estr&#xE9;s y un actor activo en el almacenamiento de ARN.

TAR ADN-prote&#xED;na de uni&#xF3;n 43 (TDP-43) regula la din&#xE1;mica del estr&#xE9;s gr&#xE1;nulos Via regulaci&#xF3;n diferencial de G3BP y TIA-1

Mutations in SOD1, causative for a subset of familial ALS cases, are associated with the formation of non-normal SOD1 conformers. Recent studies have defined this pool of SOD1 as misfolded and new antibodies have been developed to selectively detect misfolded SOD1 in vivo and in vitro. We will review these new tools and expand on the evidence demonstrating mitochondria as a common intersecting point for misfolded SOD1.

Misfolded SOD1 and ALS: zeroing in on mitochondria.

Mutant superoxide dismutase 1 (SOD1) selectively associates with spinal cord mitochondria in rodent models of SOD1-mediated amyotrophic lateral sclerosis. A portion of mutant SOD1 exists in a non-native/misfolded conformation that is selectively recognized by conformational antibodies. Misfolded SOD1 is common to all mutant SOD1 models, is uniquely found in areas affected by the disease and is considered to mediate toxicity. We report that misfolded SOD1 recognized by the antibody B8H10 is present in greater abundance in mitochondrial fractions of SOD1(G93A) rat spinal cords compared with oxidized SOD1, as recognized by the C4F6 antibody. Using a novel flow cytometric assay, we detect an age-dependent deposition of B8H10-reactive SOD1 on spinal cord mitochondria from both SOD1(G93A) rats and SOD1(G37R) mice. Mitochondrial damage, including increased mitochondrial volume, excess superoxide production and increased exposure of the toxic BH3 domain of Bcl-2, tracks positively with the presence of misfolded SOD1. Lastly, B8H10 reactive misfolded SOD1 is present in the lysates and mitochondrial fractions of lymphoblasts derived from ALS patients carrying SOD1 mutations, but not in controls. Together, these results highlight misfolded SOD1 as common to two ALS rodent animal models and familial ALS patient lymphoblasts with four different SOD1 mutations. Studies in the animal models point to a role for misfolded SOD1 in mitochondrial dysfunction in ALS pathogenesis.

Mitochondrial damage revealed by immunoselection for ALS-linked misfolded SOD1.

Blood vessel-specific fluorescent transgenic mice are excellent tools to study the development of the vasculature and angiogenic processes. There is growing interest in the biological processes relevant to endothelial cells but limited tools exist to selectively evaluate subcellular functions of this cell type in vivo. Here, we report a novel transgenic animal model that expresses mitochondrially targeted enhanced green fluorescent protein (EGFP) via the Hb9 promoter, a homeobox transcription factor with limited known involvement in the vasculature. Random integration of the transgene, containing the entire mouse Hb9 promoter, was found to be expressed in a variety of vascularised tissues. Further inspection revealed that Mito-EGFP localizes to the endothelial cells (ECs) of a subset of microvascular blood vessels, especially in the central nervous system (CNS), heart, spleen, thymus, lymph nodes and skin. We demonstrate the utility of this novel transgenic mouse, named Endo-MitoEGFP, in the detection, imaging, and isolation of microvascular ECs and evaluation of EC mitochondrial function isolated from adult animals. These transgenic mice will be useful to studies of ECs in development, physiology, and pathology.

Article	Year
Characterization of lipid binding specificities of dysferlin C2 domains reveals novel interactions with phosphoinositides. Biochemistry\| PubMed ID: 19253956	2009
TAR DNA-binding protein 43 (TDP-43) regulates stress granule dynamics via differential regulation of G3BP and TIA-1. Human molecular genetics\| PubMed ID: 21257637	2011
Misfolded SOD1 and ALS: zeroing in on mitochondria. Amyotrophic lateral sclerosis : official publication of the World Federation of Neurology Research Group on Motor Neuron Diseases\| PubMed ID: 22471903	2012
Mitochondrial damage revealed by immunoselection for ALS-linked misfolded SOD1. Human molecular genetics\| PubMed ID: 23736301	2013
Endo-MitoEGFP mice: a novel transgenic mouse with fluorescently marked mitochondria in microvascular endothelial cells. PloS one\| PubMed ID: 24019971	2013

Sarah Pickles

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