time-lapse-imaging-of-mitosis-after-sirna-transfection

Time-lapse Imaging of Mitosis After siRNA Transfection

Changes in cellular organization and chromosome dynamics that occur during mitosis are tightly coordinated to ensure accurate inheritance of genomic and ...

University of Utah

&#x751F;&#x6D3B;&#x7A81;&#x89E6;&#x56CA;&#x6CE1;&#x6807;&#x8BB0;&#xFF1A; &#x7A81;&#x89E6; GFP&#x3002;

Living synaptic vesicle marker: synaptotagmin-GFP.

Vivre marqueur des v&#xE9;sicules synaptiques: synaptotagmine-GFP

Wohnen synaptischen Vesikel-Markers: Synaptotagmin-GFP.

Marcatore della vescicola sinaptica vivente: SHP2-GFP.

&#x751F;&#x304D;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#xFF1A;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30BF;&#x30B0;&#x30DF;&#x30F3;-GFP

&#xC0DD;&#xD65C; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC18C;&#xD3EC; &#xB9C8;&#xCEE4;: synaptotagmin GFP.

Marcador de las ves&#xED;culas sin&#xE1;pticas Vivir: sinaptotagmina-GFP

&#x591A;&#x8272;&#x6574;&#x4E2A;&#x88C5;&#x8F7D;&#x539F;&#x4F4D;&#x6742;&#x4EA4;&#x662F;&#x5F3A;&#x5927;&#x7684;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x7528;&#x4E8E;&#x6BD4;&#x8F83;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6216;&#x591A;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#x5728;&#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x5C55;&#x7A7A;&#x95F4;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#x653E;&#x5927;&#x7684;&#x4E09;&#x6807;&#x7B7E;&#x6574;&#x4E2A;&#x88C5;&#x8F7D;&#x8367;&#x5149;&#x539F;&#x4F4D;&#x6742;&#x4EA4;&#x6280;&#x672F; (FISH) &#x534F;&#x8BAE;&#xFF0C;&#x5141;&#x8BB8;&#x5728;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5355;&#x4E00;&#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x534F;&#x8BAE;&#x4F7F;&#x7528; haptenylated riboprobes&#xFF0C;&#x5176;&#x6B21;&#x662F;&#x4F7F;&#x7528; anti-hapten &#x6297;&#x4F53;&#x5171;&#x8F6D;&#x8FA3;&#x6839;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x7269;&#x9176;&#x548C; tyramide &#x4FE1;&#x53F7;&#x653E;&#x5927; (TSA) &#x8367;&#x5149;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x5E8F;&#x8D2F;&#x6297;&#x4F53;&#x68C0;&#x6D4B;&#x540C;&#x65F6;&#x539F;&#x4F4D;&#x7684;&#x6742;&#x4EA4;&#x3002;&#x4F20;&#x7EDF;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x6807;&#x8BC6;&#x91CD;&#x53E0;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5728;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E00;&#x7EA7;&#xFF0C;&#x800C;&#x5171;&#x7126;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x5141;&#x8BB8;&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x89E3;&#x6790;&#x548C;&#x533A;&#x5206;&#x4E13;&#x95E8;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x578B;&#x5728;&#x7ED9;&#x5B9A;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x7684;&#x5730;&#x533A;&#x3002;&#x672C;&#x8BAE;&#x5B9A;&#x4E66;&#x5C06;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7814;&#x7A76;&#x4EBA;&#x5458;&#x4ECE;&#x4E8B;&#x9C7C;&#x7C7B;&#x9002;&#x5E94;&#x81EA;&#x5DF1;&#x7684;&#x539F;&#x4F4D;&#x6742;&#x4EA4;&#x6280;&#x672F;&#x534F;&#x8BAE;&#xFF0C;&#x5355;&#x72EC;&#x6216;&#x7ED3;&#x5408;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5316;&#x5B66;&#x6216;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x5171;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x7528;&#x56FA;&#x4F53;&#x7684;&#x8D77;&#x59CB;&#x70B9;&#x3002;

&#x9E21;&#x57FA;&#x56E0;&#x6355;&#x9C7C;&#xFF1A; &#x4E09;&#x6807;&#x7B7E;&#x6574;&#x4E2A;&#x88C5;&#x8F7D;&#x8367;&#x5149;&#x539F;&#x4F4D;&#x6742;&#x4EA4;&#x6280;&#x672F;&#x68C0;&#x6D4B;&#x79BD;&#x80DA;&#x80CE;&#x4E2D;&#x7684;&#x540C;&#x65F6;&#x548C;&#x91CD;&#x53E0;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;

Multi-color whole-mount in situ hybridization is a powerful technique for comparing the spatial expression patterns of two or more genes in developing embryos. We have developed an amplified triple-label whole-mount fluorescence in situ hybridization (FISH) protocol that permits detection of three different mRNAs in a single embryo. Our protocol uses simultaneous in situ hybridization to haptenylated riboprobes, followed by sequential antibody detection using anti-hapten antibodies conjugated to horseradish peroxidase, and the tyramide signal amplification (TSA) fluorescence detection system. Conventional fluorescence microscopy identifies areas of overlapping gene expression at the tissue level, whereas confocal fluorescence microscopy permits single-cell resolution and differentiates specialized cell types within a given tissue. This protocol will provide researchers engaged in the use of FISH with a solid starting point for adapting their own in situ hybridization protocols, either alone or in combination with immunohistochemistry or green fluorescence protein colocalization.

FISHing for chick genes: Triple-label whole-mount fluorescence in situ hybridization detects simultaneous and overlapping gene expression in avian embryos.

Multi-couleur d&#x26;#39;ensemble de montage hybridation in situ est une technique puissante pour comparer les profils d&#x26;#39;expression spatiale de deux ou plusieurs g&#xE8;nes dans les embryons en d&#xE9;veloppement. Nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; un triple label amplifi&#xE9; toute monture hybridation fluorescente in situ (FISH) qui permet la d&#xE9;tection de trois ARNm diff&#xE9;rents dans un seul embryon. Le protocole utilise simultan&#xE9;ment l&#x26;#39;hybridation in situ &#xE0; ribosondes haptenylated, suivie par la d&#xE9;tection d&#x26;#39;anticorps s&#xE9;quentielle en utilisant des anticorps anti-hapt&#xE8;ne conjugu&#xE9; &#xE0; la peroxydase de raifort, et l&#x26;#39;amplification du signal tyramide (CST) du syst&#xE8;me de d&#xE9;tection de fluorescence. Microscopie &#xE0; fluorescence conventionnelle identifie les domaines de l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes qui se chevauchent au niveau des tissus, tandis que la microscopie confocale de fluorescence permet une seule cellule de r&#xE9;solution et diff&#xE9;rencie les types de cellules sp&#xE9;cialis&#xE9;es au sein d&#x26;#39;un tissu donn&#xE9;. Ce protocole permettra aux chercheurs engag&#xE9;s dans l&#x26;#39;utilisation de la FISH avec un solide point de d&#xE9;part pour adapter leur propre dans les protocoles d&#x26;#39;hybridation in situ, que ce soit seuls ou en combinaison avec l&#x26;#39;immunohistochimie ou vert colocalisation prot&#xE9;ine de fluorescence.

P&#xEA;che pour les g&#xE8;nes Chick: Triple-label entier montage hybridation in situ fluorescente D&#xE9;tecte expression g&#xE9;nique simultan&#xE9;it&#xE9; et le chevauchement dans les embryons d&#x26;#39;oiseaux

Angeln f&#xFC;r K&#xFC;ken Gene: Triple-Label whole-mount Fluoreszenz in situ Hybridisierung erkennt gleichzeitige und &#xFC;berlappende Genexpression in Vogelembryonen.

Multi-Color intero-monta l&#39;ibridazione in situ &egrave; una potente tecnica per confrontare i modelli di espressione territoriale di due o pi&ugrave; geni nello sviluppo di embrioni. Abbiamo sviluppato un&#39;amplificato triple-etichetta intero-monta fluorescenza in situ protocollo di ibridazione (pesce) che consente la rilevazione di tre differenti mRNAs in un singolo embrione. Il nostro protocollo utilizza simultanea ibridazione in situ a haptenylated riboprobes, seguita dall&#39;individuazione di anticorpi sequenziale utilizzando anti-hapten anticorpi coniugati alla perossidasi di rafano e il sistema di rilevamento fluorescenza tyramide segnale amplificazione (TSA). Microscopia di fluorescenza convenzionale identifica le aree di sovrapposizione di espressione genica a livello di tessuto, mentre la microscopia di fluorescenza confocale consente a cella singola risoluzione e differenzia i tipi di cellule specializzate all&#39;interno di un determinato tessuto. Questo protocollo fornir&agrave; i ricercatori impegnati nell&#39;uso di pesce con un solido punto di partenza per adeguare i propri protocolli di ibridazione in situ, da soli o in combinazione con presenza di proteina di fluorescenza immunoistochimica o verde.

Pesca per geni pulcino: fluorescenza intero-monta Triple-etichetta l&#39;ibridazione in situ rileva espressione genica simultanea e sovrapposti in embrioni aviari.

in situ&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;&#x30AB;&#x30E9;&#x30FC;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x767A;&#x5C55;&#x9014;&#x4E0A;&#x80DA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;2&#x3064;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x767A;&#x73FE;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x624B;&#x6CD5;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x80DA;&#x306E;3&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;mRNA&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;in situ&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#xFF08;FISH&#xFF09;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x3067;&#x5897;&#x5E45;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EB;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C8;&#x86CD;&#x5149;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x897F;&#x6D0B;&#x30EF;&#x30B5;&#x30D3;&#x30DA;&#x30EB;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x305F;&#x6297;&#x30CF;&#x30D7;&#x30C6;&#x30F3;&#x6297;&#x4F53;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B7;&#x30E3;&#x30EB;&#x6297;&#x4F53;&#x691C;&#x51FA;&#x304C;&#x7D9A;&#x3044;haptenylated&#x30EA;&#x30DC;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30C1;&#x30E9;&#x30DF;&#x30C9;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5897;&#x5E45;&#xFF08;TSA&#xFF09;&#x86CD;&#x5149;&#x691C;&#x51FA;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3078;&#x306E;in situ&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x540C;&#x6642;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x86CD;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x4E0E;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x7D44;&#x7E54;&#x5185;&#x306E;&#x7279;&#x6B8A;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306F;&#x3001;&#x7D44;&#x7E54;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x91CD;&#x8907;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x72EC;&#x3067;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x514D;&#x75AB;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x5B66;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x3068;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3067;&#x3001;in situ&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x3067;&#x3001;&#x81EA;&#x5206;&#x3092;&#x9069;&#x5FDC;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5F37;&#x56FA;&#x306A;&#x51FA;&#x767A;&#x70B9;&#x3068;FISH&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306B;&#x5F93;&#x4E8B;&#x3059;&#x308B;&#x7814;&#x7A76;&#x8005;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30C1;&#x30C3;&#x30AF;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x91E3;&#x308A;&#xFF1A;in situ&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EB;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x30DB;&#x30FC;&#x30EB;&#x30DE;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C8;&#x86CD;&#x5149;&#x306F;&#x9CE5;&#x985E;&#x80DA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x540C;&#x6642;&#x91CD;&#x8907;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;

&#xBA40;&#xD2F0; &#xCEEC;&#xB7EC; &#xC804;&#xCCB4; &#xB9C8;&#xC6B4;&#xD2B8; &#xC81C;&#xC790;&#xB9AC; &#xAD50; &#xC7A1; &#xBC30;&#xC544; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xB450; &#xAC1C; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xACF5;&#xAC04; &#xC2DD; &#xD328;&#xD134;&#xC744; &#xBE44;&#xAD50; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xAE30;&#xC220; &#xC774;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xC77C; &#xBC30;&#xC544;&#xC758; 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; Mrnas&#xC758; &#xAC80;&#xCD9C;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC81C;&#xC790;&#xB9AC; &#xAD50; &#xC7A1; (&#xBB3C;&#xACE0;&#xAE30;) &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC99D;&#xD3ED;&#xB41C; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xD50C; &#xB808;&#xC774;&#xBE14; &#xC804;&#xCCB4; &#xB9C8;&#xC6B4;&#xD2B8; &#xD615;&#xAD11;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C; &#xC0AC;&#xC6A9; haptenylated riboprobes, &#xB4A4;&#xC5D0; &#xC591; &#xACE0;&#xCD94;&#xB0C9;&#xC774; &#xACFC;&#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC640; tyramide &#xC2E0;&#xD638; &#xC99D;&#xD3ED; (TSA) &#xD615;&#xAD11; &#xD0D0;&#xC9C0; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xD65C;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; anti-hapten &#xD56D; &#xCCB4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC21C;&#xCC28; &#xD56D; &#xCCB4; &#xAC80;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xB3D9;&#xC2DC; &#xC81C;&#xC790;&#xB9AC; &#xAD50; &#xC7A1;. &#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xD615;&#xAD11; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; confocal &#xD615;&#xAD11; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC140; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xD2B9;&#xC815;&#xB41C; &#xC870;&#xC9C1; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xC218; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xD615; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xC870;&#xC9C1; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC744; &#xACB9;&#xCE58;&#xB294; &#xC601;&#xC5ED;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC740; &#xBB3C;&#xACE0;&#xAE30;&#xB97C; &#xB2E8;&#xB3C5;&#xC73C;&#xB85C; &#xB610;&#xB294; &#xAE30;&#xC220; &#xB610;&#xB294; &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; colocalization&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC790;&#xC2E0;&#xC758; &#xC81C;&#xC790;&#xB9AC; &#xAD50; &#xC7A1; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC744; &#xCC44;&#xD0DD; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACE0;&#xCCB4; &#xC2DC;&#xC791; &#xC9C0;&#xC810;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC885;&#xC0AC; &#xD558;&#xB294; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC790;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xAC83;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBCD1;&#xC544;&#xB9AC; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB09A;&#xC2DC;: &#xD2B8;&#xB9AC;&#xD50C; &#xB808;&#xC774;&#xBE14; &#xC804;&#xCCB4; &#xB9C8;&#xC6B4;&#xD2B8; &#xD615;&#xAD11; &#xC81C;&#xC790;&#xB9AC; &#xAD50; &#xC7A1;&#xC5D0; &#xC870;&#xB958; &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC640; &#xC911;&#xBCF5; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604; &#xAC80;&#xC0C9;.

Multi-color todo el montaje de hibridaci&#xF3;n in situ es una potente t&#xE9;cnica para comparar los patrones de expresi&#xF3;n espacial de dos o m&#xE1;s genes en embriones en desarrollo. Hemos desarrollado un amplificado de triple sello todo el montaje hibridaci&#xF3;n in situ fluorescente (FISH), protocolo que permite la detecci&#xF3;n de tres diferentes mRNAs en un solo embri&#xF3;n. Nuestro protocolo utiliza simult&#xE1;nea de hibridaci&#xF3;n in situ a ribosondas haptenylated, seguido por la detecci&#xF3;n de anticuerpos secuencial utilizando anti-hapteno anticuerpos conjugados con peroxidasa de r&#xE1;bano picante, y la amplificaci&#xF3;n de la se&#xF1;al tyramide (TSA) sistema de detecci&#xF3;n de fluorescencia. Microscop&#xED;a de fluorescencia convencional identifica las &#xE1;reas de superposici&#xF3;n de la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica a nivel de los tejidos, mientras que la microscop&#xED;a de fluorescencia confocal permite una sola c&#xE9;lula de resoluci&#xF3;n y diferencia los tipos de c&#xE9;lulas especializadas en un determinado tejido. Este protocolo proporcionar&#xE1; a los investigadores que participan en el uso de pescado con un s&#xF3;lido punto de partida para la adaptaci&#xF3;n de sus propios protocolos de hibridaci&#xF3;n in situ, ya sea solos o en combinaci&#xF3;n con t&#xE9;cnicas de inmunohistoqu&#xED;mica o colocalizaci&#xF3;n prote&#xED;na de fluorescencia verde.

La pesca de los genes del polluelo: Triple-etiqueta de todo el montaje hibridaci&#xF3;n in situ fluorescente Detecta la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica simult&#xE1;nea y la superposici&#xF3;n de embriones de aves

&#x679C;&#x8747;&#xFF0C;&#x8F6C;&#x53D1;&#x4E86;&#x6709;&#x7F3A;&#x9677;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x7A81;&#x89E6;&#x53D1;&#x80B2;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x5C4F;&#x5E55;&#x786E;&#x5B9A;&#x574F;&#x63A5;&#x5F85; (brec)&#x3002;&#x7EAF;&#x5408; brec &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x662F;&#x80DA;&#x80CE;&#x81F4;&#x547D;&#x3001; &#x762B;&#x75EA;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5728;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x80FD;&#x795E;&#x7ECF;&#x808C;&#x8089;&#x63A5;&#x5934; &#xFF08;NMJ&#xFF09; &#x663E;&#x793A;&#x6CA1;&#x6709;&#x53EF;&#x63A2;&#x6D4B;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x4F20;&#x9012;&#x3002;&#x9057;&#x4F20;&#x56FE;&#x8C31;&#x3001; &#x4E92;&#x8865;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x548C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x6D4B;&#x5E8F;&#x663E;&#x793A; brec &#x7A81;&#x53D8;&#x7834;&#x574F;&#x4EE5;&#x524D;&#x65E0;&#x7684;&#x79BB;&#x5B50;&#x578B;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x53D7;&#x4F53;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#xFF0C;&#x6B64;&#x5904;&#x547D;&#x540D;&quot;GluRIID&quot;&#x3002;GluRIID &#x8868;&#x793A;&#x5728;&#x6574;&#x4E2A;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6; neuropil NMJ&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x540E;&#x57DF;&#x4E2D;&#x3002;&#x5728;&#x7A7A; brec &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; NMJ&#xFF0C;&#x6240;&#x6709;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x53D7;&#x4F53;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x662F;&#x65E0;&#x6CD5;&#x63A2;&#x6D4B;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5316;&#x5B66;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6D88;&#x9664;&#x4E86;&#x6240;&#x6709;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x53D7;&#x4F53;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7ED3;&#x8BBA; GluRIID &#x662F;&#x5FC5;&#x4E0D;&#x53EF;&#x5C11;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x548C;/&#x6216;&#x5728; NMJ &#x4E2D;&#x7684;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x3002;&#x7A7A; brec &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x80DA;&#x80CE;&#xFF0C;&#x5B9A;&#x671F;&#x8FD0;&#x52A8;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x5174;&#x594B;&#x6027;&#x7535;&#x6D41;&#x7684;&#x9891;&#x7387;&#x662F;&#x5927;&#x5927;&#x51CF;&#x5C11;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x8FD0;&#x52A8;&#x6A21;&#x5F0F;&#x6D3B;&#x52A8;&#x53D7; GluRIID&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x795E;&#x7ECF;&#x7A81;&#x89E6;&#x53D1;&#x80B2;&#x548C;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x5426;&#x5219;&#x51FA;&#x73B0; null &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x6CF0;&#x7136;&#x81EA;&#x82E5;&#xFF0C;&#x53EF;&#x884C; hypomorphic brec &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x663E;&#x793A;&#x663E;&#x8457;&#x4E0D;&#x826F; NMJs &#x5E74;&#x5E95;&#x5E7C;&#x866B;&#x53D1;&#x80B2;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A; GluRIID &#x4F9D;&#x8D56;&#x4E2D;&#x592E;&#x6A21;&#x5F0F;&#x6D3B;&#x52A8;&#x8C03;&#x8282;&#x5916;&#x5468;&#x7A81;&#x89E6;&#x751F;&#x957F;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x662F;&#x5916;&#x56F4; NMJ &#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x53D7;&#x4F53;&#x5927;&#x4F1A;/&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x548C;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x6B63;&#x786E;&#x56FE;&#x6848;&#x7535;&#x673A;&#x8F93;&#x51FA;&#x5728;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x7684;&#x65B0;&#x53D1;&#x73B0;&#x7684;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x53D7;&#x4F53;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D; GluRIID&#x3002;

&#x57FA;&#x672C;&#x679C;&#x8747;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x53D7;&#x4F53;&#x4E9A;&#xFF0C;&#x4E2D;&#x592E; neuropil &#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x808C;&#x8089;&#x63A5;&#x5934;&#x4E2D;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x3002;

A Drosophila forward genetic screen for mutants with defective synaptic development identified bad reception (brec). Homozygous brec mutants are embryonic lethal, paralyzed, and show no detectable synaptic transmission at the glutamatergic neuromuscular junction (NMJ). Genetic mapping, complementation tests, and genomic sequencing show that brec mutations disrupt a previously uncharacterized ionotropic glutamate receptor subunit, named here "GluRIID." GluRIID is expressed in the postsynaptic domain of the NMJ, as well as widely throughout the synaptic neuropil of the CNS. In the NMJ of null brec mutants, all known glutamate receptor subunits are undetectable by immunocytochemistry, and all functional glutamate receptors are eliminated. Thus, we conclude that GluRIID is essential for the assembly and/or stabilization of glutamate receptors in the NMJ. In null brec mutant embryos, the frequency of periodic excitatory currents in motor neurons is significantly reduced, demonstrating that CNS motor pattern activity is regulated by GluRIID. Although synaptic development and molecular differentiation appear otherwise unperturbed in null mutants, viable hypomorphic brec mutants display dramatically undergrown NMJs by the end of larval development, suggesting that GluRIID-dependent central pattern activity regulates peripheral synaptic growth. These studies reveal GluRIID as a newly identified glutamate receptor subunit that is essential for glutamate receptor assembly/stabilization in the peripheral NMJ and required for properly patterned motor output in the CNS.

An essential Drosophila glutamate receptor subunit that functions in both central neuropil and neuromuscular junction.

Un &#xE9;cran en avant chez la drosophile g&#xE9;n&#xE9;tique des mutants avec un d&#xE9;faut de d&#xE9;veloppement synaptique identifi&#xE9;e mauvaise r&#xE9;ception (BREC). Homozygotes mutants Brec sont embryonnaires l&#xE9;tales, paralys&#xE9;, et ne montrent aucune transmission d&#xE9;tectable synaptique &#xE0; la jonction glutamatergique neuromusculaire (JNM). La cartographie g&#xE9;n&#xE9;tique, des tests de compl&#xE9;mentation, et de la g&#xE9;nomique spectacle s&#xE9;quen&#xE7;age que les mutations Brec de perturber une sous-unit&#xE9; ionotropiques non caract&#xE9;ris&#xE9;e r&#xE9;cepteur de glutamate, nomm&#xE9;e ici &#x26;quot;GluRIID.&#x26;quot; GluRIID est exprim&#xE9; dans le domaine post-synaptique de la jonction neuromusculaire, ainsi que largement dans le neuropile synaptique du syst&#xE8;me nerveux central. Dans le NMJ de mutants nuls Brec, tous les sous-unit&#xE9;s connues des r&#xE9;cepteurs de glutamate sont ind&#xE9;tectables par immunocytochimie, et tous les r&#xE9;cepteurs du glutamate fonctionnels sont &#xE9;limin&#xE9;s. Ainsi, nous concluons que GluRIID est essentielle pour l&#x26;#39;assemblage et / ou la stabilisation des r&#xE9;cepteurs du glutamate dans la jonction neuromusculaire. Dans les embryons Brec mutant nul, la fr&#xE9;quence des p&#xE9;riodiques courants excitateurs dans les neurones du moteur est consid&#xE9;rablement r&#xE9;duite, ce qui d&#xE9;montre que l&#x26;#39;activit&#xE9; du SNC sch&#xE9;ma moteur est r&#xE9;gul&#xE9;e par GluRIID. Bien que le d&#xE9;veloppement synaptique et la diff&#xE9;renciation mol&#xE9;culaire apparaissent autrement perturb&#xE9; dans les mutants nuls, viables hypomorphic mutants Brec afficher NMJs consid&#xE9;rablement sous-bois de la fin du d&#xE9;veloppement larvaire, ce qui sugg&#xE8;re que l&#x26;#39;activit&#xE9;-d&#xE9;pendante GluRIID motif central r&#xE9;glemente p&#xE9;riph&#xE9;rique croissance synaptique. Ces &#xE9;tudes r&#xE9;v&#xE8;lent que GluRIID une sous-unit&#xE9; du r&#xE9;cepteur du glutamate nouvellement identifi&#xE9; qui est essentielle pour l&#x26;#39;assemblage des r&#xE9;cepteurs du glutamate / stabilisation de la JNM p&#xE9;riph&#xE9;rique et n&#xE9;cessaire pour la sortie du moteur correctement configur&#xE9;e dans le SNC.

Une sous-unit&#xE9; du r&#xE9;cepteur du glutamate chez la drosophile Essential qui fonctionne dans les deux neuropile centrale et la jonction neuromusculaire

Ein wesentlicher Drosophila Glutamat-Rezeptor-Untereinheit, dass die Funktionen sowohl im zentralen Neuropil und neuromuskul&#xE4;ren Synapse.

Uno schermo di genetico drosofila avanti per mutanti con sviluppo di synaptic difettoso identificato cattiva ricezione (brec). Brec omozigoti mutanti sono embrionali letali, paralizzato e non mostrare alcuna trasmissione sinaptica rilevabile al glutamatergico giunzione neuromuscolare (NMJ). Mappatura genetica, test di complementazione e visualizza Sequenziamento genomico che mutazioni brec disturbare una subunit&agrave; di recettore del glutammato ionotropici precedentemente atipici, qui denominato &quot;GluRIID.&quot; GluRIID &egrave; espresso nel dominio della postsinaptico delle NMJ, cos&igrave; come ampiamente in tutto il neuropilo sinaptica del sistema nervoso centrale. Nella NMJ di mutanti brec null, tutte le subunit&agrave; del recettore glutammato noto sono rilevabili da immunocytochemistry e vengono eliminati tutti i recettori del glutammato funzionali. Cos&igrave;, concludiamo che GluRIID &egrave; essenziale per il montaggio e/o stabilizzazione dei recettori del glutammato nelle NMJ. Negli embrioni mutanti brec null, la frequenza di periodiche correnti eccitatorie in neuroni motori &egrave; significativamente ridotta, dimostrando che CNS motore modello attivit&agrave; &egrave; regolata da GluRIID. Sebbene sinaptico sviluppo e differenziazione molecolare altrimenti appaiono imperturbate null mutanti, mutanti brec vitali hypomorphic visualizzare drammaticamente undergrown NMJs entro la fine dello sviluppo larvale, suggerendo che attivit&agrave; centrale modello GluRIID-dipendente regola la crescita sinaptica periferica. Questi studi rivelano GluRIID come una subunit&agrave; del recettore glutammato recentemente identificata che &egrave; essenziale per il glutammato recettore assembly/stabilizzazione nelle NMJ periferici e richiesto per uscita motore correttamente modellato nel SNC.

Un essenziale della drosofila glutammato recettore subunit&agrave; che funzioni in entrambi neuropilo centrale e giunzione neuromuscolare.

&#x60AA;&#x3044;&#x53D7;&#x4FE1;&#xFF08;brec&#xFF09;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x6B20;&#x9665;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3068;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x907A;&#x4F1D;&#x524D;&#x65B9;&#x306B;&#x753B;&#x9762;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DB;&#x30E2;&#x63A5;&#x5408;brec&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x80DA;&#x6027;&#x81F4;&#x6B7B;&#x3001;&#x9EBB;&#x75FA;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;&#x795E;&#x7D4C;&#x7B4B;&#x63A5;&#x5408;&#x90E8;&#xFF08;NMJ&#xFF09;&#x3067;&#x691C;&#x51FA;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x793A;&#x3055;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x76F8;&#x88DC;&#x6027;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;brec&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x540D;&#x524D;&#x306E;&#x524D;&#x306B;&#x672A;&#x77E5;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x578B;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x6DF7;&#x4E71;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B7;&#x30E7;&#x30FC; &#x26;quot;GluRIID&#x3002;&#x26;quot; GluRIID&#x306F;&#x3001;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7DB2;&#x3092;&#x901A;&#x3057;&#x3066;&#x5E83;&#x304F;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;NMJ&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x3067;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30CC;&#x30EB;brec&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;NMJ&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x7D30;&#x80DE;&#x5316;&#x5B66;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x304C;&#x6392;&#x9664;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;GluRIID&#x3001;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F;NMJ&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x7D50;&#x8AD6;&#x4ED8;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30CC;&#x30EB;brec&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x80DA;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x904B;&#x52D5;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x5468;&#x671F;&#x7684;&#x306A;&#x8208;&#x596E;&#x6027;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306E;&#x904B;&#x52D5;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x304C;GluRIID&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x3001;&#x4F4E;&#x6E1B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3068;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x304C;&#x305D;&#x3046;&#x3067;&#x306A;&#x3044;&#x5834;&#x5408;&#x306F;null&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3067;&#x306F;&#x52D5;&#x3058;&#x306A;&#x3044;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x5B9F;&#x884C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;hypomorphic brec&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;GluRIID&#x4F9D;&#x5B58;&#x4E2D;&#x67A2;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x672B;&#x68A2;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;&#x5E7C;&#x866B;&#x306E;&#x767A;&#x80B2;&#x306E;&#x7D42;&#x308F;&#x308A;&#x307E;&#x3067;&#x306B;&#x5287;&#x7684;&#x306B;&#x767A;&#x80B2;&#x4E0D;&#x5341;&#x5206;&#x306A;NMJs&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x672B;&#x68A2;NMJ&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;/&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3068;CNS&#x3067;&#x9069;&#x5207;&#x306B;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x51FA;&#x529B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x65B0;&#x305F;&#x306B;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;GluRIID&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x4E2D;&#x592E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7DB2;&#x3068;&#x795E;&#x7D4C;&#x7B4B;&#x63A5;&#x5408;&#x90E8;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3067;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;

Drosophila &#xC55E;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD654;&#xBA74; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xACB0;&#xD568;&#xC774; &#xC788;&#xB294; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB098;&#xC05C; &#xB9AC;&#xC149;&#xC158; (brec)&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Brec homozygous &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBC30;&#xC544;&#xB294; &#xCE58;&#xBA85;&#xC801;&#xC778;, &#xB9C8;&#xBE44;, glutamatergic &#xC2E0;&#xACBD; &#xADFC;&#xC721; &#xD559; &#xAD50;&#xCC28;&#xB85C; (NMJ)&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xC9C0;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC804;&#xC1A1; &#xD45C;&#xC2DC;. &#xC720;&#xC804; &#xB9E4;&#xD551; &#xBCF4;&#xC644;&#xC131; &#xC2DC;&#xD5D8;&#xACFC; &#xAC8C;&#xB188; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1; &#xC1FC; brec &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC911;&#xB2E8; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB86D;&#xAC70;&#xB098; ionotropic glutamate &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xB77C;&#xB294; &#xC5EC;&#xAE30; &quot;GluRIID.&quot; GluRIID CNS&#xC758; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; neuropil &#xC804;&#xCCB4; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C;&#xB294; &#xBB3C;&#xB860;, NMJ&#xC758; postsynaptic &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Null brec &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; NMJ&#xC5D0;&#xC11C; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; glutamate &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xB294; immunocytochemistry&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD0D0;&#xC9C0; &#xBC0F; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xAE30;&#xB2A5; glutamate &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC81C;&#xAC70; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC; GluRIID &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xB610;&#xB294; glutamate &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB294; NMJ&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC548;&#xC815;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;&#xB294; &#xACB0;&#xB860;. Null brec &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCCB4; &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0; &#xBAA8;&#xD130; &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC801;&#xC778; &#xD765;&#xBD84; &#xC131;&#xC758; &#xC804;&#xB958; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218;&#xB294; &#xD06C;&#xAC8C; &#xAC10;&#xC18C;, CNS &#xBAA8;&#xD130; &#xD328;&#xD134; &#xD65C;&#xB3D9; Gluriid&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC2DC;&#xC5F0;. &#xBE44;&#xB85D; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBC0F; &#xBD84;&#xC790; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; null &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC5D0; &#xAD50;&#xB780; &#xADF8;&#xB807;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC73C;&#xBA74; &#xD45C;&#xC2DC; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; hypomorphic brec &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; undergrown NMJs &#xC560;&#xBC8C;&#xB808;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB05D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558; GluRIID &#xC885;&#xC18D; &#xC911;&#xC559; &#xD328;&#xD134; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC8FC;&#xBCC0; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xC790;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; glutamate &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;/&#xC8FC;&#xBCC0; NMJ&#xC5D0;&#xC11C; &#xC548;&#xC815;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xBA70; CNS&#xC5D0;&#xC11C; &#xC81C;&#xB300;&#xB85C; &#xAF43;&#xBB34;&#xB2AC; &#xBAA8;&#xD130; &#xCD9C;&#xB825;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C; &#xD655;&#xC778;&#xB41C; &#xB41C; glutamate &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; Gluriid&#xB97C; &#xACF5;&#xAC1C;.

&#xC18C;&#xB294; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; Drosophila glutamate &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xB2E8;&#xC704; &#xC911;&#xC559; neuropil &#xBC0F; &#xC2E0;&#xACBD; &#xADFC;&#xC721; &#xD559; &#xAD50;&#xCC28;&#xB85C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC791;&#xB3D9; &#xD558;&#xB294;.

Una pantalla de Drosophila hacia adelante gen&#xE9;tica para mutantes con defectos en el desarrollo sin&#xE1;ptico identific&#xF3; mala recepci&#xF3;n (BREC). Homocigotos mutantes BREC son embriones paralizado letal, y no muestran la transmisi&#xF3;n sin&#xE1;ptica glutamat&#xE9;rgica detectable en la uni&#xF3;n neuromuscular (UNM). Mapeo gen&#xE9;tico, pruebas de complementaci&#xF3;n, y muestran la secuencia gen&#xF3;mica de que las mutaciones BREC interrumpir un glutamato ionotr&#xF3;picos previamente no subunidad del receptor, llamado aqu&#xED; &#x26;quot;GluRIID&#x26;quot;. GluRIID se expresa en el dominio de la NMJ postsin&#xE1;ptica, as&#xED; como ampliamente en todo el neuropilo sin&#xE1;ptica del SNC. En la NMJ de mutantes nulos BREC, todas las subunidades de los receptores de glutamato conocidos son indetectables por inmunocitoqu&#xED;mica, y todos los receptores de glutamato funcionales son eliminados. Por lo tanto, llegamos a la conclusi&#xF3;n de que GluRIID es esencial para el montaje y / o estabilizaci&#xF3;n de los receptores de glutamato en la uni&#xF3;n neuromuscular. En nulo embriones BREC mutantes, la frecuencia de peri&#xF3;dicos corrientes excitadoras en las neuronas motoras se reduce significativamente, lo que demuestra que el motor del SNC actividad patr&#xF3;n est&#xE1; regulada por GluRIID. Aunque el desarrollo sin&#xE1;ptico y la diferenciaci&#xF3;n molecular de parecer lo contrario sin inmutarse en los mutantes nulos, viables mutantes BREC hypomorphic mostrar NMJs undergrown dr&#xE1;sticamente a finales de desarrollo de las larvas, lo que sugiere que GluRIID dependen de la actividad central de patrones regula el crecimiento sin&#xE1;ptica perif&#xE9;rica. Estos estudios revelan GluRIID como una subunidad del receptor de glutamato reci&#xE9;n identificado que es esencial para el ensamblaje del receptor de glutamato y / o estabilizaci&#xF3;n en la NMJ perif&#xE9;rica y necesaria para la salida del motor correctamente modelada en el SNC.

Un esencial Drosophila subunidad del receptor glutamato que funciona tanto en Neur&#xF3;pilo Central y uni&#xF3;n neuromuscular

TSG101 &#x548C; ALIX &#x51FD;&#x6570;&#x5728;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x840C;&#x82BD;&#x548C;&#x56CA;&#x6CE1;&#x5F62;&#x6210;&#x6CE1;&#x4F53; &#xFF08;MVB&#xFF09;&#xFF0C;&#x5728;&#x90A3;&#x91CC;&#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6; Endosomal &#x6392;&#x5E8F;&#x590D;&#x6742;&#x9700;&#x8981;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x548C;&#x56CA;&#x6CE1;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x8FD0;&#x8F93; (ESCRT) &#x901A;&#x8DEF;&#x56E0;&#x7D20;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#x63ED;&#x793A; ALIX &#x548C; TSG101/ESCRT-&#x6211;&#x8FD8;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x53C2;&#x4E0E;&#x80DE;&#x8D28;&#x5206;&#x88C2;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC; CEP55&#x3001; CD2AP&#x3001; ROCK1&#x3001; IQGAP1 &#x86CB;&#x767D;&#x3002;ALIX &#x548C; TSG101 &#x96C6;&#x4E2D;&#x5728;&#x4E2D;&#x5FC3;&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x88AB;&#x5F81;&#x8058;&#x5230; midbodies &#x7684;&#x5212;&#x5206;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x901A;&#x8FC7; CEP55 &#x94F0;&#x94FE;&#x4E2D;&#x90E8;&#x4E0E;&#x57FA;&#x4E8E; GPP &#x7684;&#x56FE;&#x6848;&#x5185; TSG101 &#x548C; ALIX &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x4E92;&#x52A8;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#x62DB;&#x52DF;&#x4E86; ESCRT &#x4E09;&#x548C; VPS4 &#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A; ESCRT &#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x8BB8;&#x591A;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x5230; midbody&#x3002;&#x67AF;&#x7AED; ALIX &#x548C; TSG101/ESCRT-&#x6211;&#x6291;&#x5236;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x80DE;&#x8D28;&#x5206;&#x88C2;&#xFF0C;&#x8131;&#x843D;&#x6B65;&#x4E00;&#x6837; VPS4 &#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x786E;&#x8BA4;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;ALIX &#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x5757; CEP55 &#x548C; CHMP4/ESCRT-III &#x7ED1;&#x5B9A;&#x8FD8;&#x6291;&#x5236;&#x8131;&#x843D;&#xFF0C;&#x8BE5;&#x503C;&#x6307;&#x793A;&#x4E24;&#x4E2A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8868;&#x660E;&#x53EF;&#x5F81;&#x8058; ESCRT &#x901A;&#x8DEF;&#xFF0C;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x840C;&#x82BD;&#x3001; MVB &#x6CE1;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x53CA;&#x8131;&#x843D;&#x7684;&#x80DE;&#x8D28;&#x5206;&#x88C2;&#x9636;&#x6BB5;&#x671F;&#x95F4;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x4FBF;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x819C;&#x88C2;&#x53D8;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x3002;

&#x4EBA;&#x7C7B; ESCRT &#x548C; ALIX &#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x86CB;&#x767D; midbody &#x548C;&#x80DE;&#x8D28;&#x5206;&#x88C2;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;

TSG101 and ALIX both function in HIV budding and in vesicle formation at the multivesicular body (MVB), where they interact with other Endosomal Sorting Complex Required for Transport (ESCRT) pathway factors required for release of viruses and vesicles. Proteomic analyses revealed that ALIX and TSG101/ESCRT-I also bind a series of proteins involved in cytokinesis, including CEP55, CD2AP, ROCK1, and IQGAP1. ALIX and TSG101 concentrate at centrosomes and are then recruited to the midbodies of dividing cells through direct interactions between the central CEP55 'hinge' region and GPP-based motifs within TSG101 and ALIX. ESCRT-III and VPS4 proteins are also recruited, indicating that much of the ESCRT pathway localizes to the midbody. Depletion of ALIX and TSG101/ESCRT-I inhibits the abscission step of HeLa cell cytokinesis, as does VPS4 overexpression, confirming a requirement for these proteins in cell division. Furthermore, ALIX point mutants that block CEP55 and CHMP4/ESCRT-III binding also inhibit abscission, indicating that both interactions are essential. These experiments suggest that the ESCRT pathway may be recruited to facilitate analogous membrane fission events during HIV budding, MVB vesicle formation, and the abscission stage of cytokinesis.

Human ESCRT and ALIX proteins interact with proteins of the midbody and function in cytokinesis.

TSG101 et ALIX &#xE0; la fois la fonction en mati&#xE8;re de VIH en herbe et dans la formation de v&#xE9;sicules au niveau du corps multiv&#xE9;siculaires (MVB), o&#xF9; ils interagissent avec d&#x26;#39;autres complexes de tri endosomal requis pour les facteurs de transport de la voie (ESCRT) n&#xE9;cessaires pour la lib&#xE9;ration des virus et des v&#xE9;sicules. Analyses prot&#xE9;omiques ont r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que ALIX et TSG101/ESCRT-I &#xE9;galement lier une s&#xE9;rie de prot&#xE9;ines impliqu&#xE9;es dans la cytocin&#xE8;se, y compris CEP55, CD2AP, ROCK1, et IQGAP1. ALIX et TSG101 concentrer &#xE0; centrosomes et sont ensuite recrut&#xE9;s pour les midbodies de la division des cellules par des interactions directes entre la r&#xE9;gion &#xAB;charni&#xE8;re&#xBB; de la centrale CEP55 et GPP bas&#xE9;es sur des motifs au sein de TSG101 et ALIX. ESCRT-III et VPS4 prot&#xE9;ines sont &#xE9;galement recrut&#xE9;s, ce qui indique qu&#x26;#39;une grande partie de la voie ESCRT se localise dans le milieu du corps. L&#x26;#39;appauvrissement de ALIX et TSG101/ESCRT-I inhibe l&#x26;#39;&#xE9;tape d&#x26;#39;abscission de la cytokin&#xE8;se des cellules HeLa, comme le fait la surexpression VPS4, confirmant une exigence pour ces prot&#xE9;ines dans la division cellulaire. En outre, mutants ponctuels ALIX ce bloc CEP55 et CHMP4/ESCRT-III contraignant aussi inhiber l&#x26;#39;abscission, indiquant que les deux interactions sont indispensables. Ces exp&#xE9;riences sugg&#xE8;rent que la voie ESCRT peuvent &#xEA;tre recrut&#xE9;s pour faciliter analogues des &#xE9;v&#xE9;nements de fission membranaires au cours du VIH en herbe, la formation des v&#xE9;sicules MVB, et le stade d&#x26;#39;abscission de la cytokin&#xE8;se.

Human ESCRT et Prot&#xE9;ines ALIX interagir avec des prot&#xE9;ines de la coque centrale et de la fonction dans la cytocin&#xE8;se

Sowohl TSG101 als auch ALIX funktionieren in HIV Knospen und in Vesikel-Formation bei den multivesicular K&ouml;rper (MVB), wo Interaktion mit anderen Endosomen Sortierung komplexer erforderlichen Transport (ESCRT)-Weg-Faktoren, die f&uuml;r die Ver&ouml;ffentlichung von Viren und Bl&auml;schen. Proteomic Analysen ergaben, dass ALIX und TSG101/ESCRT-I auch eine Reihe von Zellteilung, einschlie&szlig;lich CEP55, CD2AP, ROCK1 und IQGAP1-Proteine binden. ALIX und TSG101 bei Centrosomes konzentrieren und werden dann an die Midbodies teilende Zellen durch direkte Wechselwirkungen zwischen der zentralen CEP55 &quot;Scharnier&quot; Region und GPP-basierte Motive innerhalb TSG101 und ALIX angeworben. ESCRT-III und VPS4 Proteine sind auch rekrutiert, darauf hinweist, dass ein Gro&szlig;teil der ESCRT Weg zu den Midbody lokalisiert. Depletion von ALIX und TSG101/ESCRT-I hemmt den Abszission Schritt der HeLa-Zelle Zellteilung, wie VPS4 eine &Uuml;berexpression, best&auml;tigt eine Voraussetzung f&uuml;r diese Proteine in Zellteilung. Dar&uuml;ber hinaus zeigen ALIX Mutanten, dass Block CEP55 und CHMP4/ESCRT-III-Bindung auch hemmen Abszission, darauf hinweist, dass beide Interaktionen notwendig sind. Diese Experimente deuten darauf hin, dass der ESCRT Weg eingestellt werden kann, um Analog Membran Kernspaltung Ereignisse w&auml;hrend der HIV-Knospen, MVB Vesikel Bildung und die Abszission-Phase der Zellteilung zu erleichtern.

Menschliche ESCRT und ALIX Proteine interagieren mit Proteinen des Midbody und Funktion in der Zellteilung.

TSG101 e ALIX sia funzione di gemmazione dell&#39;HIV e nella formazione della vescicola al corpo multivesicular (MVB), dove interagiscono con altri Endosomal ordinamento complessi richiesti per trasporto (ESCRT) pathway fattori necessari per il rilascio del virus e vescicole. Analisi proteomic ha rivelato che ALIX e TSG101/ESCRT-ho anche associare una serie di proteine coinvolte nella Citocinesi in, tra cui CEP55, CD2AP, ROCK1 e IQGAP1. ALIX e TSG101 concentrarsi a cntrosome e poi sono reclutati per la midbodies di divisione delle cellule attraverso l&#39;interazione dirette tra la regione centrale di &#39;cerniera&#39; CEP55 e motivi GPP-based all&#39;interno TSG101 e ALIX. ESCRT-III e VPS4 le proteine sono anche reclutate, che indica che gran parte del percorso ESCRT localizza alla midbody. Deplezione di ALIX e TSG101/ESCRT inibisce il passaggio di abscissione di Citocinesi in cellule HeLa, come fa la sovraespressione di VPS4, confermando un requisito per queste proteine nella divisione cellulare. Inoltre, ALIX punto mutanti che blocco CEP55 e associazione CHMP4/ESCRT-III anche inibire abscissione, che indica che entrambe le interazioni sono essenziali. Questi esperimenti suggeriscono che il percorso ESCRT pu&ograve; essere reclutato per facilitare gli eventi di fissione membrana analoga durante la gemmazione dell&#39;HIV, formazione di vescicola MVB e la fase di abscissione della Citocinesi in.

Proteine umane ESCRT e ALIX interagiscano con proteine del midbody e Citocinesi in funzione.

TSG101&#x3068;ALIX HIV&#x51FA;&#x82BD;&#x3067;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3084;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#xFF08;ESCRT&#xFF09;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x4ED6;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x9078;&#x5225;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x591A;&#x80DE;&#x4F53;&#x30DC;&#x30C7;&#x30A3;&#xFF08;MVB&#xFF09;&#x3067;&#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3002;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30FC;&#x30E0;&#x89E3;&#x6790;&#x306F;&#x3001;ALIX&#x3068;TSG101/ESCRT-I&#x3082;CEP55&#x3001;CD2AP&#x3001;ROCK1&#x3068;&#x3001;IQGAP1&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x5206;&#x88C2;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3001;&#x4E00;&#x9023;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002; ALIX&#x3068;TSG101&#x306F;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x4F53;&#x306B;&#x96C6;&#x4E2D;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x4E2D;&#x592E;&#x306E;CEP55 &#x26;quot;&#x30D2;&#x30F3;&#x30B8;&#x26;quot;&#x5730;&#x57DF;&#x3068;TSG101&#x3068;ALIX&#x5185;GPP&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;midbodies&#x306B;&#x52D5;&#x54E1;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; ESCRT-III&#x3068;VPS4&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;ESCRT&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306F;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x4F53;&#x306B;&#x5C40;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;&#x52DF;&#x96C6;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; VPS4&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x304C;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;ALIX&#x3068;TSG101/ESCRT-I&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8981;&#x4EF6;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x3001;HeLa&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x96E2;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;ALIX&#x70B9;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;CEP55&#x3068;CHMP4/ESCRT-III&#x7D50;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;&#x96E2;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306F;&#x3001;ESCRT&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306F;&#x3001;HIV&#x51FA;&#x82BD;&#x3001;MVB&#x5C0F;&#x80DE;&#x5F62;&#x6210;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x96E2;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x985E;&#x4F3C;&#x3057;&#x305F;&#x819C;&#x5206;&#x88C2;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x63A1;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;

&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;ESCRT&#x3068;ALIX&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x5206;&#x88C2;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x4F53;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;

TSG101 &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; ALIX &#xC791;&#xB3D9; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988; &#xC2E0;&#xC9C4; &#xBC0F; multivesicular &#xBC14;&#xB514; (MVB)&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30; &#xD615;&#xC131; &#xB2E4;&#xB978; Endosomal &#xC815;&#xB82C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; vesicles&#xC758; &#xCD9C;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC804;&#xC1A1; (ESCRT) &#xD1B5;&#xB85C; &#xC694;&#xC778;&#xC774; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xACF3;. Proteomic &#xBD84;&#xC11D; &#xACF5;&#xAC1C; ALIX&#xC640; TSG101/ESCRT-&#xB098;&#xB3C4; cytokinesis, CEP55, CD2AP, ROCK1, &#xBC0F; iqgap1&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC2DC;&#xB9AC;&#xC988; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. ALIX&#xC640; TSG101 centrosomes&#xC5D0; &#xC9D1;&#xC911; &#xD558; &#xACE0; &#xC911;&#xC559; CEP55 &#39;&#xACBD;&#xCCA9;&#39; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xBC0F; TSG101 &#xBC0F; ALIX &#xB0B4; GPP &#xAE30;&#xBC18; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xD504; &#xAC04;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xBD84;&#xD560;&#xC758; midbodies&#xB97C; &#xCC44;&#xC6A9;. ESCRT III&#xC640; VPS4 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xB3C4;, &#xB9CE;&#xC740; ESCRT &#xD1B5;&#xB85C; midbody&#xC5D0; localizes &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. ALIX&#xC640; TSG101/ESCRT-&#xB098;&#xC758; &#xACE0;&#xAC08; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC694;&#xAD6C; &#xC0AC;&#xD56D;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xB294; VPS4 overexpression&#xC640; &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C; &#xD5EC;&#xB7EC; &#xC138;&#xD3EC; cytokinesis&#xC758; &#xC808;&#xB2E8; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, ALIX &#xC810; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBE14;&#xB85D; cep55&#xC640; CHMP4/ESCRT-III &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB610;&#xD55C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC808;&#xB2E8;, &#xB450; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC2E4;&#xD5D8; ESCRT &#xD1B5;&#xB85C; HIV &#xC2E0;&#xC9C4;, MVB &#xAE30; &#xD615;&#xC131;&#xACFC; cytokinesis&#xC758; &#xC808;&#xB2E8; &#xB2E8;&#xACC4; &#xB3D9;&#xC548; &#xC720;&#xC0AC; &#xB9C9; &#xBD84;&#xC5F4; &#xD589;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xCC44;&#xC6A9; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xAC04; ESCRT &#xBC0F; ALIX &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; midbody &#xBC0F; cytokinesis &#xAE30;&#xB2A5; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;.

TSG101 y Alix tanto la funci&#xF3;n de VIH en ciernes y en la formaci&#xF3;n de ves&#xED;culas en el cuerpo multivesicular (MVB), donde interact&#xFA;an con otro complejo endosomal clasificaci&#xF3;n requerida para los factores de transporte de v&#xED;a (ESCRT) necesarios para la liberaci&#xF3;n de los virus y las ves&#xED;culas. An&#xE1;lisis prote&#xF3;micos revelaron que Alix y TSG101/ESCRT-I tambi&#xE9;n se unen una serie de prote&#xED;nas implicadas en la citocinesis, incluyendo CEP55, CD2AP, Rock1 y IQGAP1. Alix y TSG101 se concentran en los centrosomas y luego reclutado a las midbodies de c&#xE9;lulas que se dividen a trav&#xE9;s de interacciones directas entre la regi&#xF3;n &#x26;quot;bisagra&#x26;quot; de la central de CEP55 y GPP a base de motivos dentro de TSG101 y Alix. ESCRT-III y prote&#xED;nas VPS4 tambi&#xE9;n son reclutados, lo que indica que gran parte de la v&#xED;a ESCRT se localiza en el cuerpo central. El agotamiento de Alix y TSG101/ESCRT-I inhibe el paso de la abscisi&#xF3;n de la citocinesis de c&#xE9;lulas HeLa, al igual que la sobreexpresi&#xF3;n VPS4, lo que confirma el requisito de que estas prote&#xED;nas en la divisi&#xF3;n celular. Por otra parte, los mutantes puntuales que ALIX bloque CEP55 y vinculante CHMP4/ESCRT-III tambi&#xE9;n inhibir la abscisi&#xF3;n, que indica que ambas interacciones son esenciales. Estos experimentos sugieren que la v&#xED;a ESCRT pueden ser reclutados para facilitar an&#xE1;logos eventos de fisi&#xF3;n de membranas durante el VIH en ciernes, la formaci&#xF3;n de ves&#xED;culas MVB, y la fase de desprendimiento de la citocinesis.

Humanos ESCRT y Prote&#xED;nas ALIX interactuar con las prote&#xED;nas de la mitad del cuerpo y la funci&#xF3;n en la citocinesis

&#x55DC;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x662F;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x4E13;&#x4E1A;&#x5316;&#x7684;&#x5148;&#x5929;&#x6548;&#x5E94;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EA7;&#x751F;&#x6740;&#x5BB3;&#x7684;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x3002;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684;&#x65B0;&#x751F;&#x513F;&#x6709;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x5931;&#x8C03;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x4E0D;&#x5B8C;&#x5168;&#xFF0C;&#x52A9;&#x957F;&#x8113;&#x6BD2;&#x75C7;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x4E25;&#x91CD;&#x7684;&#x4F20;&#x67D3;&#x6027;&#x5E76;&#x53D1;&#x75C7;&#x5E38;&#x89C1;&#x7EFC;&#x5408;&#x5F81;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x65B0;&#x751F;&#x513F;&#x6297;&#x83CC;&#x9632;&#x5FA1;&#x4E2D;&#x7684;&#x65B0;&#x578B;&#x7F3A;&#x9677;&#xFF1A; &#x65E0;&#x6CD5;&#x5F62;&#x6210;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x80DE;&#x5916;&#x9677;&#x9631; &#xFF08;&#x82F1;&#x8BED;&#x6559;&#x5E08;&#xFF09;&#x3002;&#x868A;&#x5E10;&#x662F;&#x683C;&#x5B50;&#x7684;&#x80DE;&#x5916; DNA&#x3001; &#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x548C;&#x8C03;&#x89E3;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x80DE;&#x5916;&#x7684;&#x6740;&#x5BB3;&#x548C;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x5411;&#x7A97;&#x4F53;&#x7531;&#x70DF;&#x9170;&#x80FA;&#x817A;&#x560C;&#x5464;&#x4E8C;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x78F7;&#x9178; &#xFF08;NADPH&#xFF09; &#x751F;&#x6210;&#x6C27;&#x5316;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x6C27; (ROS) &#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x552F;&#x4E00;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x6297;&#x83CC;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x55DC;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECE;&#x65B0;&#x751F;&#x513F;&#x548C;&#x65E9;&#x4EA7;&#x513F;&#x5931;&#x8D25;&#x5230;&#x7F51;&#x4ECE;&#x5065;&#x5EB7;&#x6210;&#x4EBA;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5230;&#x708E;&#x75C7;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x5728;&#x5BF9;&#x6BD4;&#x5EA6;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x65F6;&#x7A97;&#x4F53;&#x3002;&#x51C0;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x7F3A;&#x9677;&#x88AB;&#x4F34;&#x968F;&#x7EC6;&#x83CC;&#x80DE;&#x5916;&#x6740;&#x5BB3;&#x4EE5;&#x524D;&#x65E0;&#x6CD5;&#x8BC6;&#x522B;&#x51FA;&#x73B0;&#x8D64;&#x5B57;&#x3002;&#x7F57;&#x65AF;&#x7684;&#x4E00;&#x4EE3;&#x4E0D;&#x505A;&#x65B0;&#x751F;&#x513F;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x8865;&#x5145;&#x51C0;&#x5F62;&#x6210;&#x7F3A;&#x9677;&#x6210;&#x4EBA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x706D;&#x6D3B; NADPH &#x6C27;&#x5316;&#x9176;&#x3001; &#x8BC1;&#x660E;&#x7F57;&#x65AF;&#x5FC5;&#x8981;&#x7684;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x8DB3;&#x591F;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4E2D;&#x4ECB;&#x548C;&#x786E;&#x5B9A;&#x65B0;&#x751F;&#x513F;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x94FE;&#x63A5;&#x6216;&#x4E0B;&#x6E38;&#x901A;&#x8DEF;&#x4E0A;&#x7684;&#x7F3A;&#x9677;&#x4E00;&#x6837;&#x3002;&#x53D7;&#x635F;&#x7684;&#x51C0;&#x5F62;&#x6210;&#x53EF;&#x80FD;&#x5171;&#x540C;&#x611F;&#x67D3;&#x7F6A;&#x9B41;&#x7978;&#x9996;&#x65B0;&#x751F;&#x513F;&#x53D1;&#x80B2;&#x514D;&#x75AB;&#x673A;&#x80FD;&#x7684;&#x4E27;&#x5931;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5173;&#x952E;&#x65B9;&#x9762;&#x3002;

&#x53D7;&#x635F;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x80DE;&#x5916;&#x9677;&#x9631; &#xFF08;&#x51C0;&#x989D;&#xFF09; &#x5F62;&#x6210;&#xFF1A; &#x65B0;&#x578B;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x65B0;&#x751F;&#x513F;&#x7684;&#x5148;&#x5929;&#x514D;&#x75AB;&#x7F3A;&#x9677;&#x3002;

Neutrophils are highly specialized innate effector cells that have evolved for killing of pathogens. Human neonates have a common multifactorial syndrome of neutrophil dysfunction that is incompletely characterized and contributes to sepsis and other severe infectious complications. We identified a novel defect in the antibacterial defenses of neonates: inability to form neutrophil extracellular traps (NETs). NETs are lattices of extracellular DNA, chromatin, and antibacterial proteins that mediate extracellular killing of microorganisms and are thought to form via a unique death pathway signaled by nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) oxidase-generated reactive oxygen species (ROS). We found that neutrophils from term and preterm infants fail to form NETs when activated by inflammatory agonists-in contrast to leukocytes from healthy adults. The deficiency in NET formation is paralleled by a previously unrecognized deficit in extracellular bacterial killing. Generation of ROSs did not complement the defect in NET formation by neonatal neutrophils, as it did in adult cells with inactivated NADPH oxidase, demonstrating that ROSs are necessary but not sufficient signaling intermediaries and identifying a deficiency in linked or downstream pathways in neonatal leukocytes. Impaired NET formation may be a critical facet of a common developmental immunodeficiency that predisposes newborn infants to infection.

Impaired neutrophil extracellular trap (NET) formation: a novel innate immune deficiency of human neonates.

Les neutrophiles sont hautement sp&#xE9;cialis&#xE9;es inn&#xE9;es cellules effectrices qui ont &#xE9;volu&#xE9; pour tuer des agents pathog&#xE8;nes. Nouveau-n&#xE9;s humains ont un syndrome multifactoriel commune de la dysfonction des neutrophiles qui est incompl&#xE8;tement caract&#xE9;ris&#xE9;e et contribue &#xE0; une septic&#xE9;mie et d&#x26;#39;autres complications infectieuses graves. Nous avons identifi&#xE9; un d&#xE9;faut roman dans les d&#xE9;fenses antibact&#xE9;riennes de nouveau-n&#xE9;s: l&#x26;#39;incapacit&#xE9; &#xE0; former des neutrophiles pi&#xE8;ges extracellulaires (filets). NET sont des r&#xE9;seaux de l&#x26;#39;ADN extracellulaire, la chromatine, et des prot&#xE9;ines antibact&#xE9;riennes qui interviennent meurtre extracellulaire de micro-organismes et sont pens&#xE9;es pour former par l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire d&#x26;#39;une voie de mort unique, signal&#xE9;e par la nicotinamide ad&#xE9;nine dinucl&#xE9;otide phosphate (NADPH) oxydase g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9;s par les esp&#xE8;ces r&#xE9;actives de l&#x26;#39;oxyg&#xE8;ne (ROS). Nous avons constat&#xE9; que les neutrophiles des enfants n&#xE9;s &#xE0; terme et les pr&#xE9;matur&#xE9;s ne parviennent pas &#xE0; former NET lorsqu&#x26;#39;il est activ&#xE9; par les agonistes-in inflammatoires contrairement &#xE0; leucocytes et des adultes en bonne sant&#xE9;. Le d&#xE9;ficit dans la formation NET va de pair avec un d&#xE9;ficit non comptabilis&#xE9; ant&#xE9;rieurement dans le meurtre bact&#xE9;rienne extracellulaire. G&#xE9;n&#xE9;ration de Ross ne se compl&#xE8;tent pas le d&#xE9;faut dans la formation de NET par les neutrophiles n&#xE9;onatales, comme il l&#x26;#39;a fait dans les cellules adultes avec la NADPH oxydase inactiv&#xE9;, ce qui d&#xE9;montre que Ross sont n&#xE9;cessaires mais pas suffisantes interm&#xE9;diaires de signalisation et l&#x26;#39;identification d&#x26;#39;un d&#xE9;ficit dans les voies li&#xE9;es ou en aval dans les leucocytes n&#xE9;onatales. Avec facult&#xE9;s affaiblies formation NET peut &#xEA;tre un aspect essentiel d&#x26;#39;une immunod&#xE9;ficience commune de d&#xE9;veloppement qui pr&#xE9;dispose les nouveau-n&#xE9;s &#xE0; l&#x26;#39;infection.

Avec facult&#xE9;s affaiblies Pi&#xE8;ge neutrophiles extracellulaire (NET) Formation: un roman d&#xE9;ficit immunitaire inn&#xE9; des nouveau-n&#xE9;s de l&#x26;#39;homme

Neutrophile sind hochspezialisierte angeborenen Effektorzellen, die T&ouml;tung von Erregern entwickelt haben. Menschliche Neugeborenen haben eine gemeinsame multifaktorielle Syndrom der neutrophile Funktionsst&ouml;rung, die zeichnet sich unvollst&auml;ndig und tr&auml;gt zur Sepsis und andere schweren infekti&ouml;sen Komplikationen. Wir ermittelten einen neuartigen Defekt in die antibakterielle Abwehr des Neugeborenen: Unf&auml;higkeit neutrophil extrazellul&auml;re Traps (NETs) zu bilden. Netze sind Verb&auml;nde von extrazellul&auml;rer DNA und Chromatin antibakterielle Proteine, die extrazellul&auml;re T&ouml;tung von Mikroorganismen zu vermitteln und werden gedacht, um Form &uuml;ber einen einzigartigen Tod Weg durch Nicotinamid-adenin-dinucleotid-phosphat (NADPH) Oxydase erzeugte reaktive Sauerstoffspezies (ROS) signalisiert. Wir fanden, dass Neutrophile von Begriff und Fr&uuml;hgeburten S&auml;uglingen zu bilden Netze durch entz&uuml;ndliche Agonisten-im Gegensatz zu Leukozyten von gesunden Erwachsenen Aktivierung fehlschlagen. Der Mangel in NET-Formation ist durch ein vorher unbekanntes extrazellul&auml;re bakteriellen T&ouml;tung parallel. Generation von ROSs nicht den Mangel in NET-Formation von Neugeborenen Neutrophilen, erg&auml;nzen, wie es unter Erwachsenen Zellen mit inaktivierten NADPH Oxydase, verdeutlichen, dass ROSs sind notwendig, aber nicht ausreichend Signalisierung Vermittler und identifizieren einen Mangel in verkn&uuml;pften oder nachgeschalteten Bahnen in neonatale Leukozyten. Gest&ouml;rter NET Bildung m&ouml;glicherweise eine wichtige Facette der eine gemeinsame Entwicklungsst&ouml;rungen Immundefizienz, die Neugeborenen zu Infektionen pr&auml;disponiert.

Beeintr&auml;chtigte neutrophil extrazellul&auml;re Trap (NET) Bildung: eine neuartige angeborenen Immunschw&auml;che des menschlichen Neugeborenen.

I neutrofili sono cellule effettrici innata altamente specializzati che si sono evoluti per l&#39;abbattimento di agenti patogeni. I neonati umani hanno una comune sindrome multifattoriale della disfunzione del neutrofilo &egrave; caratterizzata in modo incompleto e contribuisce alla sepsi ed altre gravi complicazioni infettive. Abbiamo identificato un difetto romanzo le difese antibatteriche dei neonati: incapacit&agrave; di formare trappole extracellulari del neutrofilo (reti). Le reti sono reticoli di DNA extracellulare, cromatina e proteine antibatteriche che mediano extracellulare uccisione dei microrganismi e si pensiero alla forma attraverso un percorso di morte unico segnalato da nicotinammide adenina dinucleotide fosfato (NADPH) ossidasi-generato specie reattive dell&#39;ossigeno (ROS). Abbiamo trovato che i neutrofili da neonati a termine e pretermine non riescono a formare le reti quando attivato da infiammatoria agonisti in contrasto a leucociti da adulti sani. Il deficit di formazione NET &egrave; parallelo da un deficit precedentemente non riconosciuto nell&#39;uccisione di batteri extracellulari. Generazione di ROSs ha fatto non completare il difetto nella formazione NET neutrofili neonatali, come ha fatto in cellule adulte con inattivato NADPH ossidasi, dimostrando che ROSs sono necessari ma non sufficienti intermediari di segnalazione e identificazione di un deficit di percorsi collegati o a valle dei leucociti neonatale. Alterata formazione netto pu&ograve; essere un aspetto critico di un&#39;immunodeficienza comune dello sviluppo che predispone i neonati all&#39;infezione.

Ridotta formazione di neutrofili trappola extracellulare (NET): un romanzo deficit immunitario innato di neonati umani.

&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306F;&#x3001;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x3092;&#x6BBA;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9032;&#x5316;&#x3057;&#x3066;&#x304D;&#x305F;&#x5C02;&#x9580;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x751F;&#x5F97;&#x7684;&#x306A;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x65B0;&#x751F;&#x5150;&#x306F;&#x4E0D;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x6A5F;&#x80FD;&#x4E0D;&#x5168;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x591A;&#x56E0;&#x5B50;&#x75C7;&#x5019;&#x7FA4;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x6557;&#x8840;&#x75C7;&#x3084;&#x305D;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x91CD;&#x7BE4;&#x306A;&#x611F;&#x67D3;&#x6027;&#x5408;&#x4F75;&#x75C7;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#xFF08;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#xFF09;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x3044;&#xFF1A;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x3001;&#x65B0;&#x751F;&#x5150;&#x306E;&#x6297;&#x83CC;&#x9632;&#x5FA1;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x65B0;&#x898F;&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;DNA&#x3001;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x3001;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x306E;&#x6BBA;&#x5BB3;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x6297;&#x83CC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x683C;&#x5B50;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#xFF08;NADPH&#xFF09;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#x3067;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6D3B;&#x6027;&#x9178;&#x7D20;&#x7A2E;&#xFF08;ROS&#xFF09;&#x30CB;&#x30B3;&#x30C1;&#x30F3;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5408;&#x56F3;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x6B7B;&#x306E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x5065;&#x5EB7;&#x306A;&#x6210;&#x4EBA;&#x304B;&#x3089;&#x767D;&#x8840;&#x7403;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x3067;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x7528;&#x8A9E;&#x3068;&#x65E9;&#x7523;&#x5150;&#x306E;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306F;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5931;&#x6557;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002; NET&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x6B20;&#x640D;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x7D30;&#x83CC;&#x3092;&#x6BBA;&#x3059;&#x306B;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x8D64;&#x5B57;&#x3067;&#x4E26;&#x5217;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x30ED;&#x30B9;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x5341;&#x5206;&#x306A;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x8005;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x3001;&#x65B0;&#x751F;&#x5150;&#x306E;&#x767D;&#x8840;&#x7403;&#x5185;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4E0B;&#x6D41;&#x306E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x3001;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x5316;NADPH&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x6210;&#x4EBA;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x30ED;&#x30B9;&#x306E;&#x4E16;&#x4EE3;&#x306F;&#x3001;&#x65B0;&#x751F;&#x5150;&#x306E;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;NET&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x6B20;&#x9665;&#x3092;&#x88DC;&#x5B8C;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x969C;&#x5BB3;NET&#x5F62;&#x6210;&#x306F;&#x3001;&#x611F;&#x67D3;&#x306B;&#x65B0;&#x751F;&#x5150;&#x3092;&#x7D20;&#x56E0;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x767A;&#x9054;&#x4E0D;&#x5168;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x9762;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

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&#xD638; &#xC911;&#xAD6C;&#xB294; &#xACE0;&#xB3C4;&#xB85C; &#xC804;&#xBB38;&#xD654; &#xB41C; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xC140; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4;&#xC758; &#xC0B4;&#xC778;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC9C4;&#xD654;. &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC544; &#xD328; &#xD608; &#xC99D;&#xACFC; &#xB2E4;&#xB978; &#xC2EC;&#xAC01;&#xD55C; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC131; &#xD569;&#xBCD1;&#xC99D;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558; &#xACE0; &#xBD88;&#xC644;&#xC804; &#xD558; &#xAC8C; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC744; &#xD638; &#xBD80;&#xC804;&#xC758; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; multifactorial &#xC99D;&#xD6C4;&#xAD70;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC544;&#xC758; &#xD56D;&#xADE0; &#xBC29;&#xC5B4;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xACB0;&#xD568; &#xC2DD;&#xBCC4;: &#xD638; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xD2B8;&#xB7A9; (&#xADF8;&#xBB3C;)&#xC744; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xBB34; &#xB2A5;&#xB825;. &#xADF8;&#xBB3C; &#xACA9;&#xC790; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; DNA, chromatin &#xC77C; &#xBC0F; &#xD56D;&#xADE0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xBBF8;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC744; &#xC8FD;&#xC774; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC7AC; &#xD558; &#xACE0; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xB2C8;&#xCF54;&#xD2F4;&#xC544;&#xBBF8;&#xB4DC; &#xC544;&#xB370;&#xB2CC; &#xB514;&#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xC778;&#xC0B0; (NADPH) &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xBC18;&#xC751;&#xC131; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC885; (ROS)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xC8FD;&#xC74C; &#xD1B5;&#xB85C; &#xD1B5;&#xD574; &#xD3FC;&#xC744; &#xC0DD;&#xAC01; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6A9;&#xC5B4; &#xBC0F; preterm &#xC720;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911; &#xC131;&#xAD6C; &#xC591;&#xC2DD; &#xADF8;&#xBB3C; &#xAC74;&#xAC15; &#xD55C; &#xC131;&#xC778;&#xC5D0; &#xAC8C; &#xC11C; &#xBC31;&#xD608;&#xAD6C; &#xC5FC;&#xC99D; agonists &#xB300;&#xC870;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB420; &#xB54C; &#xC2E4;&#xD328;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xBB3C; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACB0;&#xD54D; &#xC138;&#xADE0; &#xC8FD;&#xC774; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678;&#xC5D0; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC778;&#xC2DD;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xC801;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; paralleled &#xC788;&#xB2E4;. &#xB85C;&#xC2A4;&#xC758; &#xB85C;&#xC2A4;&#xB294; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xC2E0;&#xD638; &#xC911; &#xAC1C;&#xC778; &#xD558; &#xACE0; &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC544; &#xBC31;&#xD608;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xB610;&#xB294; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xACBD;&#xB85C; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xC0AC; NADPH &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC640; &#xC131;&#xC778; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC640; &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC544; &#xD638; &#xC911;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADF8;&#xBB3C; &#xD615;&#xC131;&#xC758; &#xACB0;&#xD568;&#xC744; &#xBCF4;&#xC644; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xC7A5;&#xC560;&#xC778;&#xB41C; &#xADF8;&#xBB3C; &#xD615;&#xC131; &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC544; &#xC720;&#xC544; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0; &#xAC78;&#xB9AC;&#xAE30;&#xB294; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xBA74;&#xC5ED; &#xACB0;&#xD54D;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC77C; &#xBA74; &#xC788;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC190;&#xC0C1; &#xD638; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xD2B8;&#xB7A9; (NET) &#xD615;&#xC131;: &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC544;&#xC758; &#xC18C;&#xC124; &#xC120; &#xCC9C; &#xC801; &#xBA74;&#xC5ED; &#xACB0;&#xD54D;.

Los neutr&#xF3;filos son c&#xE9;lulas altamente especializadas innatas efectoras que se han desarrollado para la matanza de los agentes pat&#xF3;genos. Los reci&#xE9;n nacidos humanos tienen un s&#xED;ndrome com&#xFA;n multifactorial de la disfunci&#xF3;n de los neutr&#xF3;filos que no est&#xE1; completamente caracterizada y contribuye a la sepsis y otras complicaciones infecciosas graves. Se identificaron un defecto de la novela en las defensas antibacterianas de los reci&#xE9;n nacidos: la incapacidad para formar neutr&#xF3;filos trampas extracelulares (TNE). NET son celos&#xED;as de ADN extracelular, la cromatina y prote&#xED;nas antibacterianas que median la muerte de los microorganismos extracelulares y se cree que se forman a trav&#xE9;s de una &#xFA;nica v&#xED;a de la muerte se&#xF1;alada por nicotinamida adenina dinucle&#xF3;tido fosfato (NADPH) oxidasa generados por las especies reactivas del ox&#xED;geno (ROS). Se encontr&#xF3; que los neutr&#xF3;filos de los reci&#xE9;n nacidos a t&#xE9;rmino y prematuros no forman redes cuando son activadas por agonistas, en contraste con los leucocitos inflamatorios de los adultos sanos. La deficiencia en la formaci&#xF3;n de NET es paralela a un d&#xE9;ficit reconocido previamente en la muerte de las bacterias extracelulares. La generaci&#xF3;n de ROS no complementar el defecto en la formaci&#xF3;n de NET por los neutr&#xF3;filos neonatales, como lo hizo en las c&#xE9;lulas adultas con la NADPH oxidasa inactivada, lo que demuestra que Ross son necesarias pero no suficientes intermediarios de se&#xF1;alizaci&#xF3;n y la identificaci&#xF3;n de una deficiencia en las v&#xED;as vinculadas o aguas abajo en los leucocitos neonatales. Deterioro de la formaci&#xF3;n neta puede ser un aspecto cr&#xED;tico de una inmunodeficiencia com&#xFA;n de desarrollo que predispone a los beb&#xE9;s reci&#xE9;n nacidos a la infecci&#xF3;n.

Deterioro trampa de neutr&#xF3;filos extracelular (NET) Formaci&#xF3;n: una novela deficiencia inmune innato de los ni&#xF1;os reci&#xE9;n nacidos

&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x662F;&#x4EBA;&#x53C2;&#x7684;&#x786E;&#x5B9A;&#x662F;&#x5426;&#x4E34;&#x5E8A;&#x76F8;&#x5173;&#x6D53;&#x5EA6;&#x70DF; (CSE) &#x6A21;&#x62DF;&#x7F3A;&#x8840;&#x65F6;, &#x6709;&#x5BF9;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F4;&#x63A5;&#x9020;&#x6210;&#x7684;&#x6709;&#x5BB3;&#x5F71;&#x54CD;&#x548C;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x8C03;&#x67E5;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

&#x76F4;&#x63A5;&#x6C34;&#x63D0;&#x53D6;&#x7269;&#x7684;&#x9999;&#x70DF;&#x70DF;&#x96FE;&#x5BF9;&#x6BD2;&#x6027;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x4E34;&#x5E8A;&#x4F7F;&#x7528;&#x6D53;&#x5EA6;&#x3002;

Our goal was to determine if clinically relevant concentrations of aqueous extract of cigarette smoke (CSE) have direct deleterious effects on ventricular myocytes during simulated ischemia, and to investigate the mechanisms involved.

Direct toxic effects of aqueous extract of cigarette smoke on cardiac myocytes at clinically relevant concentrations.

Notre objectif &#xE9;tait de d&#xE9;terminer si les concentrations cliniquement pertinentes de l&#x26;#39;extrait aqueux de fum&#xE9;e de cigarette (CST) ont des effets directs d&#xE9;l&#xE9;t&#xE8;res sur les myocytes ventriculaires pendant l&#x26;#39;isch&#xE9;mie simul&#xE9;e, et d&#x26;#39;&#xE9;tudier les m&#xE9;canismes impliqu&#xE9;s.

Les effets toxiques directs de l&#x26;#39;extrait aqueux de fum&#xE9;e de cigarette sur les myocytes cardiaques &#xE0; des concentrations cliniquement pertinentes

Unser Ziel war es, festzustellen, wenn klinisch relevante Konzentrationen von w&auml;ssriger Auszug von Zigarettenrauch (CSE) direkte sch&auml;dliche Auswirkungen auf ventrikul&auml;ren Myozyten w&auml;hrend des simulierten Ischemia haben und untersuchen die Mechanismen beteiligt.

Direkte toxische Wirkungen von w&auml;ssriger Auszug von Zigarettenrauch auf kardiale Myozyten bei klinisch relevante Konzentrationen.

Il nostro obiettivo era quello di determinare se clinicamente rilevanti concentrazioni di estratto acquoso di fumo di sigaretta (CSE) hanno effetti deleteri diretti nei miociti ventricolari durante l&#39;ischemia simulata, e di indagare i meccanismi coinvolti.

Effetti tossici diretti dell&#39;estratto acquoso di fumo di sigaretta su miociti cardiaci a concentrazioni clinicamente rilevanti.

&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x76EE;&#x6A19;&#x306F;&#x3001;&#x305F;&#x3070;&#x3053;&#x306E;&#x7159;&#xFF08;CSE&#xFF09;&#x306E;&#x6C34;&#x6027;&#x62BD;&#x51FA;&#x7269;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x7684;&#x306B;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30DF;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x865A;&#x8840;&#x6642;&#x306E;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x60AA;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x5224;&#x65AD;&#x3057;&#x3001;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x304C;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x81E8;&#x5E8A;&#x7684;&#x306B;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x30BF;&#x30D0;&#x30B3;&#x306E;&#x7159;&#x306E;&#x6C34;&#x6027;&#x62BD;&#x51FA;&#x7269;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x6BD2;&#x6027;&#x4F5C;&#x7528;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB294; &#xC784;&#xC0C1; &#xAD00;&#xB828; &#xB18D;&#xB3C4; &#xB2F4;&#xBC30; &#xC5F0;&#xAE30;&#xC758; &#xC218;&#xC131; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C; (CSE) &#xC2DC;&#xBBAC;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xB41C; &#xAD6D; &#xC18C; &#xBE48; &#xD608; &#xB3D9;&#xC548; &#xC2EC; &#xC2E4; myocytes&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xD574;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE60; &#xD655;&#xC778; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xC784;&#xC0C1;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2EC;&#xC7A5; myocytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2F4;&#xBC30; &#xC5F0;&#xAE30;&#xC758; &#xC218;&#xC131; &#xCD94;&#xCD9C;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xB3C5;&#xC131; &#xD6A8;&#xACFC;.

Nuestro objetivo fue determinar si las concentraciones cl&#xED;nicamente relevantes de extracto acuoso de humo de cigarrillo (CSE) tienen efectos nocivos directos sobre los miocitos ventriculares durante la isquemia simulada, y para investigar los mecanismos involucrados.

Los efectos t&#xF3;xicos directos de extracto acuoso de humo del cigarrillo en miocitos cardiacos a concentraciones cl&#xED;nicamente relevantes

ESCRT &#x9014;&#x5F84;&#x5E2E;&#x52A9;&#x8C03;&#x89E3;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x548C;&#x53E4;&#x751F;&#x83CC;&#x80DE;&#x8D28;&#x5206;&#x88C2;&#x7684;&#x6700;&#x540E;&#x8131;&#x843D;&#x4E00;&#x6B65;&#x3002;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#xFF0C;&#x4E24;&#x4E2A;&#x65E9;&#x671F;&#x4EE3;&#x7406;&#x86CB;&#x767D;&#x7684; ESCRT &#x901A;&#x8DEF;&#xFF0C;ALIX &#x548C; TSG101&#xFF0C;&#x62DB;&#x52DF;&#x5230;&#x901A;&#x8FC7;&#x76F4;&#x63A5;&#x4E92;&#x52A8;&#x4E0E;&#x78F7; CEP55 midbody&#x3002;CEP55 &#x4F4D;&#x4E8E;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x4F53;&#x901A;&#x8FC7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x7684;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#xFF0C;&#x4F46;&#x7136;&#x540E;&#x5C06;&#x8FC1;&#x79FB;&#x5230;&#x5F00;&#x5934;&#x7684;&#x80DE;&#x8D28;&#x5206;&#x88C2;&#xFF0C;midbody &#x6697;&#x793A; ESCRT &#x901A;&#x8DEF;&#x4E5F;&#x53EF;&#x80FD; centrosomal &#x7684;&#x94FE;&#x63A5;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6709;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5730;&#x5206;&#x6790;&#x540E;&#x671F;&#x4EE3;&#x7406;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269; ESCRT &#x4E09;&#x548C; VPS4 &#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x8981;&#x6C42;&#x5728;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x9636;&#x6BB5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;&#x6D88;&#x8017;&#x7684; VPS4A&#x3001; VPS4B&#xFF0C;&#x6216;&#x4EFB;&#x4F55; 11 &#x4E0D;&#x540C;&#x4EBA;&#x7C7B; ESCRT III (CHMP) &#x86CB;&#x767D;&#x6291;&#x5236;&#x8131;&#x843D;&#x3002;&#x5F15;&#x4EBA;&#x6CE8;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x4E2A;&#x522B; ESCRT &#x4E09;&#x548C; VPS4 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x6D88;&#x8017;&#x4E5F;&#x6539;&#x53D8;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x4F53;&#x548C;&#x4E3B;&#x8F74;&#x6746;&#x53F7;&#xFF0C;&#x751F;&#x4EA7;&#x591A;&#x6781;&#x5FC3;&#x8F74; (&#x5927;&#x591A;&#x6570; ESCRT-III/VPS4 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF09; &#x6216;&#x5355;&#x6781;&#x5FC3;&#x8F74; &#xFF08;CHMP2A &#x6216; CHMP5&#xFF09; &#x548C;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x5206;&#x79BB;&#x53CA;&#x6838;&#x5F62;&#x6001;&#x9020;&#x6210;&#x7F3A;&#x9677;&#x3002;VPS4 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x96C6;&#x4E2D;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x671F;&#x95F4;&#x4E3B;&#x8F74;&#x4E24;&#x6781;&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x5728; midbodies &#x671F;&#x95F4;&#x80DE;&#x8D28;&#x5206;&#x88C2;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x610F;&#x5473;&#x7740;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x529F;&#x80FD;&#x76F4;&#x63A5;&#x5728;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA;&#xFF0C;ESCRT-III/VPS4 &#x86CB;&#x767D;&#x529F;&#x80FD;&#x6765;&#x5E2E;&#x52A9;&#x8C03;&#x8282;&#x5176;&#x7EF4;&#x4FEE;&#x6216;&#x6269;&#x6563;&#x7684;&#x4E2D;&#x5FC3;&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x5728; midbodies &#x671F;&#x95F4;&#x8131;&#x843D;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x5E2E;&#x52A9;&#x786E;&#x4FDD;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E0D;&#x540C;&#x9636;&#x6BB5;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x7684;&#x6709;&#x5E8F;&#x7684;&#x8FDB;&#x5C55;&#x3002;

&#x4EBA;&#x7C7B; ESCRT &#x4E09;&#x548C; VPS4 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x4F53;&#x548C;&#x4E3B;&#x8F74;&#x7684;&#x7EF4;&#x4FEE;&#x3002;

The ESCRT pathway helps mediate the final abscission step of cytokinesis in mammals and archaea. In mammals, two early acting proteins of the ESCRT pathway, ALIX and TSG101, are recruited to the midbody through direct interactions with the phosphoprotein CEP55. CEP55 resides at the centrosome through most of the cell cycle but then migrates to the midbody at the start of cytokinesis, suggesting that the ESCRT pathway may also have centrosomal links. Here, we have systematically analyzed the requirements for late-acting mammalian ESCRT-III and VPS4 proteins at different stages of mitosis and cell division. We found that depletion of VPS4A, VPS4B, or any of the 11 different human ESCRT-III (CHMP) proteins inhibited abscission. Remarkably, depletion of individual ESCRT-III and VPS4 proteins also altered centrosome and spindle pole numbers, producing multipolar spindles (most ESCRT-III/VPS4 proteins) or monopolar spindles (CHMP2A or CHMP5) and causing defects in chromosome segregation and nuclear morphology. VPS4 proteins concentrated at spindle poles during mitosis and then at midbodies during cytokinesis, implying that these proteins function directly at both sites. We conclude that ESCRT-III/VPS4 proteins function at centrosomes to help regulate their maintenance or proliferation and then at midbodies during abscission, thereby helping ensure the ordered progression through the different stages of cell division.

Human ESCRT-III and VPS4 proteins are required for centrosome and spindle maintenance.

La voie ESCRT aide &#xE0; la transmission de l&#x26;#39;&#xE9;tape finale d&#x26;#39;abscission de la cytokin&#xE8;se chez les mammif&#xE8;res et les arch&#xE9;es. Chez les mammif&#xE8;res, deux prot&#xE9;ines tr&#xE8;s pr&#xE9;coces agissant de la voie ESCRT, Alix et TSG101, sont recrut&#xE9;s &#xE0; la coque centrale par le biais d&#x26;#39;interactions directes avec la phosphoprot&#xE9;ine CEP55. CEP55 r&#xE9;side au centrosome pendant la majeure partie du cycle cellulaire, mais migre ensuite vers la coque centrale au d&#xE9;but de la cytokin&#xE8;se, sugg&#xE9;rant que la voie ESCRT peut &#xE9;galement avoir des liens centrosomales. Ici, nous avons syst&#xE9;matiquement analys&#xE9; les exigences en mati&#xE8;re de fin d&#x26;#39;action des mammif&#xE8;res ESCRT-III et VPS4 prot&#xE9;ines &#xE0; diff&#xE9;rentes &#xE9;tapes de la mitose et la division cellulaire. Nous avons trouv&#xE9; que l&#x26;#39;appauvrissement de VPS4A, VPS4B, ou l&#x26;#39;un des 11 diff&#xE9;rents de l&#x26;#39;homme ESCRT-III (CHMP) a inhib&#xE9; prot&#xE9;ines abscission. Remarquablement, l&#x26;#39;&#xE9;puisement de la personne ESCRT-III et VPS4 prot&#xE9;ines a &#xE9;galement modifi&#xE9; le centrosome et nombre de p&#xF4;les du fuseau, la production multipolaire broches (la plupart des ESCRT-III/VPS4 prot&#xE9;ines) ou des fuseaux monopolaires (CHMP2A ou CHMP5) et provoquer des d&#xE9;fauts dans la s&#xE9;gr&#xE9;gation des chromosomes et de la morphologie nucl&#xE9;aire. VPS4 prot&#xE9;ines concentr&#xE9;es &#xE0; p&#xF4;les du fuseau durant la mitose et puis &#xE0; midbodies pendant la cytocin&#xE8;se, ce qui implique que ces prot&#xE9;ines fonctionnent directement sur les deux sites. Nous concluons que ESCRT-III/VPS4 prot&#xE9;ines de fonction &#xE0; centrosomes pour aider &#xE0; r&#xE9;guler leur entretien ou la prolif&#xE9;ration et puis &#xE0; midbodies cours abscission, contribuant ainsi &#xE0; assurer la progression ordonn&#xE9;e travers les diff&#xE9;rentes &#xE9;tapes de la division cellulaire.

Human ESCRT-III et VPS4 prot&#xE9;ines sont n&#xE9;cessaires pour Centrosome et d&#x26;#39;entretien de la broche

Die ESCRT-Pathway hilft den endg&uuml;ltigen Abszission Schritt der Zellteilung bei S&auml;ugern und Archaeen zu vermitteln. Bei S&auml;ugetieren sind zwei fr&uuml;he wirkenden Proteine des ESCRT Weges, ALIX und TSG101, f&uuml;r die Midbody durch direkte Interaktionen mit dem Phosphoprotein CEP55 angeworben. CEP55 befindet sich auf der Zentrosom durch die meisten des Zellzyklus aber dann migriert auf die Midbody zu Beginn der Zellteilung, was darauf hindeutet, dass die ESCRT-Pathway centrosomal Links auch haben kann. Hier haben wir die Anforderungen f&uuml;r die sp&auml;ten wirkende S&auml;ugetierproteine ESCRT-III und VPS4 in verschiedenen Phasen der Mitose und Zellteilung systematisch analysiert. Wir fanden die Ersch&ouml;pfung der VPS4A, VPS4B, oder eines der 11 verschiedenen menschlichen ESCRT-III (CHMP) Proteine gehemmt Abszission. Bemerkenswert ist, Ersch&ouml;pfung der einzelnen ESCRT-III und VPS4 Proteine ver&auml;ndert auch Zentrosom und Spindel Polzahlen, Produktion von multipolaren Spindeln (die meisten ESCRT-III/VPS4 Proteine) oder Monopolare Spindeln (CHMP2A oder CHMP5) und verursacht Fehler im Chromosome Segregation und nukleare Morphologie. VPS4 Proteine konzentriert an Spindel Polen w&auml;hrend der Mitose und dann bei Midbodies w&auml;hrend der Zellteilung, was bedeutet, dass diese Proteine direkt an beiden Standorten funktionieren. Wir schlussfolgern, dass ESCRT-III/VPS4-Proteine-Funktion Centrosomes zu helfen, die Verbreitung oder deren Wartung zu regulieren und auf Midbodies w&auml;hrend Abszission, und tr&auml;gt damit die bestellte Progression durch die verschiedenen Phasen der Zellteilung zu gew&auml;hrleisten.

Menschliche ESCRT-III und VPS4 Proteine sind f&uuml;r Zentrosom und Spindel Wartung erforderlich.

Il percorso ESCRT aiuta a mediare il passaggio finale abscissione di Citocinesi in mammiferi e archaea. Nei mammiferi, due proteine recitazione precoce del percorso ESCRT, ALIX e TSG101, sono reclutate per il midbody attraverso l&#39;interazione dirette con la fosfoproteina CEP55. CEP55 risiede presso il centrosoma attraverso la maggior parte del ciclo cellulare, ma poi migra verso il midbody all&#39;inizio della Citocinesi in, suggerendo che il pathway ESCRT pu&ograve; anche avere collegamenti centrosomal. Qui, abbiamo analizzato sistematicamente i requisiti per le proteine ESCRT-III e VPS4 dei mammiferi tardo-agire in diverse fasi della mitosi e la divisione cellulare. Abbiamo trovato che deplezione di VPS4A, VPS4B o qualsiasi dell&#39;11 diversi umani ESCRT-III (CHMP) proteine inibite abscissione. Notevolmente, deplezione delle singole proteine ESCRT-III e VPS4 alterato anche numeri di poli Centrosoma e mandrino, produce mandrini multipolari (la maggior parte delle proteine ESCRT-III/VPS4) o monopolari mandrini (CHMP2A o CHMP5) e che causano difetti nel cromosoma segregazione e morfologia nucleare. VPS4 proteine concentrano a poli del fuso durante la mitosi e quindi a midbodies durante la Citocinesi in, implicando che queste proteine funzionano direttamente in entrambi i siti. Concludiamo che funzione di proteine ESCRT-III/VPS4 a cntrosome per aiutare a regolare la loro manutenzione o proliferazione e quindi a midbodies durante l&#39;abscissione, contribuendo cos&igrave; a garantire la progressione ordinata attraverso i diversi stadi della divisione cellulare.

Proteine umane ESCRT-III e VPS4 sono necessarie per la manutenzione centrosoma e mandrino.

ESCRT&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306F;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x3084;&#x53E4;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x96E2;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x3067;&#x306F;&#x3001;ESCRT&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;2&#x3064;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x4F5C;&#x7528;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3001;ALIX&#x3068;TSG101&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;CEP55&#x3068;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x4F53;&#x306B;&#x88DC;&#x5145;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; CEP55&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x306E;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x3092;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x4F53;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x958B;&#x59CB;&#x6642;&#x306B;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x4F53;&#x306B;&#x79FB;&#x884C;&#x3057;&#x3001;ESCRT&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x4F53;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7684;&#x306B;&#x5F8C;&#x671F;&#x306B;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;ESCRT-III&#x3068;&#x6709;&#x7CF8;&#x5206;&#x88C2;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;VPS4&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x8981;&#x4EF6;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;VPS4A&#x3001;VPS4B&#x306E;&#x305D;&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;11&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30D2;&#x30C8;ESCRT-III&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#xFF08;CHMP&#xFF09;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x8131;&#x96E2;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9A5A;&#x304F;&#x3079;&#x304D;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x500B;&#x3005;&#x306E;ESCRT-III&#x3068;VPS4&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x3082;&#x591A;&#x30B9;&#x30D4;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#xFF08;&#x6700;&#x3082;ESCRT-III/VPS4&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF09;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5358;&#x6975;&#x30B9;&#x30D4;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#xFF08;CHMP2A&#x307E;&#x305F;&#x306F;CHMP5&#xFF09;&#x306E;&#x88FD;&#x9020;&#x3068;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x3068;&#x6838;&#x5F62;&#x614B;&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x3001;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x4F53;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D21;&#x9318;&#x4F53;&#x6975;&#x306E;&#x756A;&#x53F7;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; VPS4&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x6709;&#x7CF8;&#x5206;&#x88C2;&#x6642;&#x306E;&#x7D21;&#x9318;&#x4F53;&#x6975;&#x3067;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x5206;&#x88C2;&#x6642;&#x306E;midbodies&#x3067;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x76F4;&#x63A5;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x610F;&#x5473;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;ESCRT-III/VPS4&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x6BB5;&#x968E;&#x3092;&#x7D4C;&#x3066;&#x6CE8;&#x6587;&#x3057;&#x305F;&#x9032;&#x884C;&#x3092;&#x78BA;&#x4FDD;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x8131;&#x96E2;&#x6642;&#x306B;midbodies&#x3067;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C6;&#x30CA;&#x30F3;&#x30B9;&#x3084;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x4F53;&#x3067;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x7D50;&#x8AD6;&#x4ED8;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;ESCRT-III&#x3068;VPS4&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x4F53;&#x3001;&#x30B9;&#x30D4;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30CA;&#x30F3;&#x30B9;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;

ESCRT &#xD1B5;&#xB85C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958;&#xC640; &#xACE0;&#xC138;&#xADE0;&#xC5D0; cytokinesis&#xC758; &#xCD5C;&#xC885; &#xC808;&#xB2E8; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD3EC;&#xC720;&#xB958;, ALIX&#xC640; TSG101, ESCRT &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xB450; &#xCD08;&#xAE30; &#xD589;&#xB3D9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; phosphoprotein cep55&#xC640; &#xC9C1;&#xC811; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; midbody&#xB97C; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. CEP55 &#xC140; &#xC0AC;&#xC774;&#xD074;&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; centrosome&#xC5D0; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB2E4;&#xC74C; &#xC2DC;&#xC791; cytokinesis, midbody ESCRT &#xD1B5;&#xB85C; &#xB610;&#xD55C; centrosomal &#xB9C1;&#xD06C;&#xB97C; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xC0AC; &#xBD84;&#xC5F4; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2A6;&#xC740; &#xD589;&#xB3D9; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; ESCRT III&#xC640; VPS4 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC694;&#xAD6C; &#xC0AC;&#xD56D; &#xBD84;&#xC11D;. VPS4A, VPS4B, &#xB610;&#xB294; 11 &#xB2E4;&#xB978; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; ESCRT III (CHMP) &#xC800;&#xD574; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC808;&#xB2E8; &#xADF8; &#xC18C;&#xBAA8;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C;, &#xAC1C;&#xBCC4; ESCRT III&#xC640; VPS4 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xACE0;&#xAC08;&#xB3C4; &#xB2E4; &#xADF9; &#xC2A4;&#xD540; &#xB4E4; (&#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; ESCRT-III/VPS4 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;) monopolar &#xC2A4;&#xD540; &#xB4E4; (CHMP2A &#xB610;&#xB294; CHMP5)&#xB97C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558; &#xACE0; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xBD84;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xD575; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559;&#xC5D0; &#xACB0;&#xD568;&#xC744; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0A4;&#xB294; centrosome &#xBC0F; &#xC2A4;&#xD540; &#xB4E4; &#xADF9; &#xBC88;&#xD638; &#xBCC0;&#xACBD;. VPS4 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2A4;&#xD540; &#xB4E4; &#xADF9; &#xC720;&#xC0AC; &#xBD84;&#xC5F4; &#xC911;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; midbodies cytokinesis,&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC774; &#xB450; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C1;&#xC811; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC554;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548;&#xC5D0; &#xC9D1;&#xC911;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC808;&#xB2E8;, &#xC911; &#xD568;&#xC73C;&#xB85C;&#xC368; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC815;&#xB82C; &#xB41C; &#xC9C4;&#xD589; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xD55C; &#xB2E4;&#xC74C; midbodies&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC720;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xC218; &#xB610;&#xB294; &#xD655;&#xC0B0;&#xC744; &#xADDC;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xB370;&#xB294; centrosomes&#xC5D0;&#xC11C; ESCRT-III/VPS4 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAE30;&#xB2A5; &#xADF8; &#xACB0;&#xB860;.

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; ESCRT III&#xC640; VPS4 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC774; centrosome &#xBC0F; &#xC2A4;&#xD540; &#xB4E4; &#xC720;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xC218;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La v&#xED;a ESCRT ayuda a mediar en la etapa final de la abscisi&#xF3;n de la citocinesis en los mam&#xED;feros y las arqueas. En los mam&#xED;feros, dos prote&#xED;nas que act&#xFA;an los primeros de la v&#xED;a ESCRT, Alix y TSG101, son reclutados a la mitad del cuerpo a trav&#xE9;s de interacciones directas con la fosfoprote&#xED;na CEP55. CEP55 reside en el centrosoma a trav&#xE9;s de la mayor parte del ciclo celular, pero luego migra a la mitad del cuerpo en el inicio de la citocinesis, lo que sugiere que la v&#xED;a ESCRT tambi&#xE9;n pueden tener enlaces centrosomales. En este sentido, se han analizado sistem&#xE1;ticamente los requisitos para fines de acci&#xF3;n de mam&#xED;feros ESCRT-III y prote&#xED;nas VPS4 en diferentes etapas de la mitosis y la divisi&#xF3;n celular. Hemos encontrado que el agotamiento de VPS4A, VPS4B, o cualquiera de los 11 diferentes ESCRT humanos-III (CHMP) de prote&#xED;nas inhibe la abscisi&#xF3;n. Sorprendentemente, el agotamiento del individuo ESCRT-III y las prote&#xED;nas tambi&#xE9;n alter&#xF3; VPS4 centrosoma y el n&#xFA;mero de polos del huso, la producci&#xF3;n de husos multipolares (la mayor&#xED;a de los ESCRT-III/VPS4 prote&#xED;nas) o monopolar husillos (CHMP2A o CHMP5) y provoca defectos en la segregaci&#xF3;n cromos&#xF3;mica y la morfolog&#xED;a nuclear. VPS4 prote&#xED;nas concentradas en los polos del huso durante la mitosis y luego en midbodies durante la citocinesis, lo que implica que estas prote&#xED;nas funcionan directamente en los dos sitios. Llegamos a la conclusi&#xF3;n de que ESCRT-III/VPS4 prote&#xED;nas de funci&#xF3;n en el centrosomas para ayudar a regular su mantenimiento o la proliferaci&#xF3;n y luego en midbodies durante la abscisi&#xF3;n, ayudando as&#xED; a asegurar la progresi&#xF3;n ordenada a trav&#xE9;s de las diferentes etapas de la divisi&#xF3;n celular.

Humanos ESCRT-III y prote&#xED;nas VPS4 Son necesarios para centrosoma y mantenimiento del eje

&#x7531;&#x4E8E;&#x4E0D;&#x65AD;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x8010;&#x836F;&#x514B;&#x9686;&#x548C;&#x91CD;&#x65B0;&#x586B;&#x5145;&#x80BF;&#x7624;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7ECF;&#x5E38;&#x590D;&#x53D1;&#x764C;&#x75C7;&#x5E78;&#x5B58;&#x8005;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x4E34;&#x5E8A;&#x524D;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x665A;&#x671F;&#x764C;&#x75C7;&#x75C5;&#x4EBA;&#x7684;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8F6C;&#x5316;&#x6709;&#x6548;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027; T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6740;&#x6B7B;&#x75C5;&#x4EBA;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x542B;&#x8010;&#x836F;&#x514B;&#x9686;&#x548C;&#x80BF;&#x7624;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x4ECE;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x5BB9;&#x9519;&#x65C1;&#x89C2;&#x8005;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x7684;&#x4E34;&#x5E8A;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x4E0E;&#x4F0A;&#x9A6C;&#x66FF;&#x5C3C;&#x6CBB;&#x7597;&#x9636;&#x6BB5; III/IV &#x80C3;&#x80A0;&#x9053;&#x95F4;&#x8D28;&#x7624; (&#x5927;&#x610F;) &#x4E0E;&#x7406;&#x6027;&#x76F8;&#x7ED3;&#x5408; peginterferon &alpha;-2b peginterferon &alpha;-2b &#x7528;&#x4F5C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x6297;&#x80BF;&#x7624;&#x514D;&#x75AB;&#x7684;&#x5371;&#x9669;&#x4FE1;&#x53F7;&#x867D;&#x7136;&#x4F0A;&#x9A6C;&#x66FF;&#x5C3C;&#x7684;&#x6709;&#x6548;&#x6740;&#x706D;&#x80BF;&#x7624;&#x7834;&#x574F;&#x80BF;&#x7624;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x5BB9;&#x5FCD;&#x548C;&#x4F9B;&#x5E94;&#x80BF;&#x7624;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x6297;&#x539F;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CF;&#x5C11;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x9002;&#x5F53;&#x7684;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2; T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x8D70;&#x5411; Th1 &#x53CD;&#x5E94;&#x4E0D;&#x3002;&#x516B;&#x540D;&#x75C5;&#x4EBA;&#x7684;&#x4E34;&#x65F6;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x91CD;&#x5927;&#x611F;&#x5E94;&#x7684; IFN-&gamma;-producing-CD8(+)&#x3001; CD4(+)&#x3001;-NK &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x548C; IFN-&gamma;-producing-tumor-infiltrating-lymphocytes&#xFF0C;&#x8868;&#x793A;&#x91CD;&#x5927;&#x7684; Th1 &#x53CD;&#x5E94;&#x548C; NK &#x7EC6;&#x80DE;&#x6D3B;&#x5316;&#x3002;&#x540E; 3.6 &#x5E74;&#x4E2D;&#x4F4D;&#x6570;&#x91C7;&#x53D6;&#x540E;&#x7EED;&#x884C;&#x52A8;&#xFF0C;&#x5B8C;&#x6210;&#x54CD;&#x5E94; (CR) + &#x90E8;&#x5206;&#x54CD;&#x5E94; (PR) = 100%&#xFF0C;&#x603B;&#x751F;&#x5B58;&#x7387; = 100%&#xFF0C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x75C5;&#x4EBA;&#x65E0;&#x5173;&#x75C5;&#x901D;&#x5728;&#x51CF;&#x514D;&#x65F6;&#xFF0C;&#x516D;&#x4E2A;&#x4E03;&#x4E2A;&#x91CF;&#x5316;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x75C5;&#x4EBA;&#x5747;&#x5904;&#x4E8E;&#x7EE7;&#x7EED; PR/CR (5 &#x4F8B;) &#x6216;&#x6709;&#x65E0;&#x8FDB;&#x5C55;&#x751F;&#x5B58; &#xFF08;PFS&#xFF0C;1 &#x75C5;&#x4EBA;) &#x8D85;&#x8FC7; 95%&#x7684;&#x7F6E;&#x4FE1;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x578B;&#x7279;&#x5B9A; PFS &#x9636;&#x6BB5;&#x4E09;&#x4F0A;&#x9A6C;&#x66FF;&#x5C3C;&#x5355;&#x836F;&#x6CBB;&#x7597; &#xFF08;CALGB150105/SWOGS0033) &#x7684;&#x4E0A;&#x9650;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x4EE4;&#x4EBA;&#x5341;&#x5206;&#x53EF;&#x559C;&#x7684;&#x4E34;&#x5E8A;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;&#x5728;&#x8F83;&#x5927;&#x7684;&#x672A;&#x6765;&#x5BA1;&#x5224;&#x51C6;&#x5907;&#x5173;&#x95ED;&#x5F53;&#x524D;&#x5BA1;&#x5224;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x7EC4;&#x5408;&#x7684;&#x9776;&#x5411;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x548C;&#x514D;&#x75AB;&#x6CBB;&#x7597;&#x662F;&#x5B89;&#x5168;&#x548C;&#x8BF1;&#x53D1;&#x91CD;&#x5927; Th1 &#x53CD;&#x5E94;&#x548C; NK &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x8981;&#x70B9;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x503C;&#x5F97;&#x5728;&#x5176;&#x4ED6;&#x80BF;&#x7624;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x6781;&#x6709;&#x5E0C;&#x671B;&#x4E34;&#x5E8A;&#x7597;&#x6548;&#x3002;

&#x5F00;&#x53D1;&#x6297;&#x80BF;&#x7624;&#x514D;&#x75AB;&#x529B;&#xFF0C;&#x514B;&#x670D;&#x590D;&#x53D1;&#x548C;&#x63D0;&#x9AD8;&#x51CF;&#x514D;&#x671F;&#x9650;&#x3002;

Cancer survivors often relapse due to evolving drug-resistant clones and repopulating tumor stem cells. Our preclinical study demonstrated that terminal cancer patient's lymphocytes can be converted from tolerant bystanders in vivo into effective cytotoxic T-lymphocytes in vitro killing patient's own tumor cells containing drug-resistant clones and tumor stem cells. We designed a clinical trial combining peginterferon Î±-2b with imatinib for treatment of stage III/IV gastrointestinal stromal tumor (GIST) with the rational that peginterferon Î±-2b serves as danger signals to promote antitumor immunity while imatinib's effective tumor killing undermines tumor-induced tolerance and supply tumor-specific antigens in vivo without leukopenia, thus allowing for proper dendritic cell and cytotoxic T-lymphocyte differentiation toward Th1 response. Interim analysis of eight patients demonstrated significant induction of IFN-Î³-producing-CD8(+), -CD4(+), -NK cell, and IFN-Î³-producing-tumor-infiltrating-lymphocytes, signifying significant Th1 response and NK cell activation. After a median follow-up of 3.6Â years, complete response (CR)Â +Â partial response (PR)Â =Â 100%, overall survivalÂ =Â 100%, one patient died of unrelated illness while in remission, six of seven evaluable patients are either in continuing PR/CR (5 patients) or have progression-free survival (PFS, 1 patient) exceeding the upper limit of the 95% confidence level of the genotype-specific-PFS of the phase III imatinib-monotherapy (CALGB150105/SWOGS0033), demonstrating highly promising clinical outcomes. The current trial is closed in preparation for a larger future trial. We conclude that combination of targeted therapy and immunotherapy is safe and induced significant Th1 response and NK cell activation and demonstrated highly promising clinical efficacy in GIST, thus warranting development in other tumor types.

Exploiting antitumor immunity to overcome relapse and improve remission duration.

Les survivants du cancer font souvent des rechutes dues &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;volution des m&#xE9;dicaments clones r&#xE9;sistants et de repeupler les cellules souches tumorales. Notre &#xE9;tude pr&#xE9;clinique a d&#xE9;montr&#xE9; que les lymphocytes de patients canc&#xE9;reux en phase terminale peut &#xEA;tre converti &#xE0; partir spectateurs tol&#xE9;rantes in vivo dans efficaces les lymphocytes T cytotoxiques in vitro tuant propres du patient les cellules tumorales contenant la drogue clones r&#xE9;sistants et les cellules souches tumorales. Nous avons con&#xE7;u un essai clinique combinant le peginterf&#xE9;ron &#x3B1;-2b avec l&#x26;#39;imatinib pour le traitement de stade III / IV tumeurs stromales gastro-intestinales (GIST) avec le rationnel qui peginterf&#xE9;ron &#x3B1;-2b sert en tant que signaux de danger &#xE0; promouvoir l&#x26;#39;immunit&#xE9; antitumorale tout en tuant l&#x26;#39;imatinib de la tumeur efficace sape induite par des tumeurs tol&#xE9;rance et d&#x26;#39;approvisionnement antig&#xE8;nes sp&#xE9;cifiques de tumeurs in vivo, sans leucop&#xE9;nie, permettant ainsi des cellules dendritiques et bonne lymphocytes T cytotoxiques diff&#xE9;renciation vers la r&#xE9;ponse Th1. L&#x26;#39;analyse interm&#xE9;diaire de huit patients ont montr&#xE9; une induction significative de l&#x26;#39;IFN-&#x3B3;-producteur-CD8 (+),-CD4 (+),-des cellules NK, et l&#x26;#39;IFN-&#x3B3;-producteur-infiltrant les tumeurs des lymphocytes, ce qui signifie r&#xE9;ponse Th1 importante et NK l&#x26;#39;activation. Apr&#xE8;s un suivi m&#xE9;dian de 3,6 ans, de r&#xE9;ponse compl&#xE8;te (CR) + r&#xE9;ponse partielle (RP) = 100%, la survie globale = 100%, un patient est d&#xE9;c&#xE9;d&#xE9; de la maladie sans rapport avec tout en r&#xE9;mission, six des sept patients &#xE9;valuables sont soit dans la poursuite de PR / CR (5 patients) ou qui ont une survie sans progression (PFS, 1 patient) d&#xE9;passant la limite sup&#xE9;rieure du niveau de confiance de 95% du g&#xE9;notype sp&#xE9;cifique-PFS de la phase III &#xE0; l&#x26;#39;imatinib en monoth&#xE9;rapie (CALGB150105/SWOGS0033), ce qui d&#xE9;montre tr&#xE8;s prometteurs les r&#xE9;sultats cliniques. Le proc&#xE8;s en cours est ferm&#xE9;e &#xE0; la pr&#xE9;paration d&#x26;#39;un proc&#xE8;s plus l&#x26;#39;avenir. Nous concluons que la combinaison de la th&#xE9;rapie cibl&#xE9;e et de l&#x26;#39;immunoth&#xE9;rapie est s&#xFB;r et induit la r&#xE9;ponse Th1 importante et l&#x26;#39;activation des cellules NK et a d&#xE9;montr&#xE9; une efficacit&#xE9; clinique tr&#xE8;s prometteur dans les GIST, ce qui justifie le d&#xE9;veloppement dans d&#x26;#39;autres types de tumeurs.

Exploiter l&#x26;#39;immunit&#xE9; antitumorale du refus de la rechute et &#xE0; am&#xE9;liorer la dur&#xE9;e de r&#xE9;mission

Krebs &Uuml;berlebenden R&uuml;ckfall oft aufgrund der sich entwickelnden medikamentenresistente Klone und repopulating Tumor-Stammzellen. Unsere pr&auml;klinischen Studie gezeigt, dass Krebs im Endstadium des Patienten Lymphozyten aus in-vivo tolerant Zuschauer in wirksamen zytotoxischen T-Lymphozyten in Vitro t&ouml;ten des Patienten Tumorzellen mit Medikamenten-resistenten Klone und Tumor-Stammzellen umgewandelt werden k&ouml;nnen. Wir entwarfen eine klinische Studie die Kombination von Peginterferon &alpha;-2 b mit Imatinib zur Behandlung der Stufe III/IV Gastrointestinaler Stromatumor (GIST) mit der rationalen, dass Peginterferon &alpha;-2 b dient als Gefahr Signale zur F&ouml;rderung der antitumor Immunit&auml;t Imatinib wirksam ausgel&ouml;sten Tumor T&ouml;tung untergr&auml;bt, Tumor-induzierte Toleranz und Versorgung tumorspezifische Antigene in-vivo ohne Leukopenie, wodurch f&uuml;r ordnungsgem&auml;&szlig;e dendritischen Zellen und zytotoxischen T-Lymphozyten-Differenzierung zu Th1-Reaktion. Zwischenauswertung von acht Patienten zeigte signifikante Induktion von IFN-&gamma;-producing-CD8(+), - CD4(+), - NK-Zelle, und IFN-&gamma;-producing-tumor-infiltrating-lymphocytes, sinnstiftenden signifikante Th1-Antwort und NK-ZELLAKTIVIERUNG. Nach einem medianen Follow-up von 3,6 Jahre, komplette Reaktion (CR) + partielle Remission (PR) = 100 %, die Gesamt&uuml;berlebenszeit = 100 %, ein Patient starb an unabh&auml;ngigen Krankheit in der Remission, sechs der sieben auswertbaren Patienten sind entweder weiterhin PR/CR (5 Patienten) oder progressionsfreie &Uuml;berleben (PFS, 1 Patient) haben mehr als die Obergrenze f&uuml;r das 95 %-Konfidenzintervall des Genotyp-spezifische-PFS der Phase III Imatinib-Monotherapie (CALGB150105/SWOGS0033), sehr vielversprechende klinische Ergebnisse demonstrieren. Die aktuelle Testversion ist in Vorbereitung f&uuml;r einen gr&ouml;&szlig;eren zuk&uuml;nftigen Versuch geschlossen. Wir schlie&szlig;en, dass die Kombination von gezielten Therapie und Immuntherapie sicher und induzierte signifikante Th1-Antwort und NK-ZELLAKTIVIERUNG und demonstrierte vielversprechende klinische Wirksamkeit bei GIST, Entwicklung in andere Tumorarten damit zu rechtfertigen ist.

Ausnutzung der antitumor Immunit&auml;t zur &Uuml;berwindung von Rezidiv und Verbesserung der Vergebung Dauer.

Sopravvissuti al cancro spesso recidivano a causa della evoluzione cloni resistenti ai farmaci e ripopolare le cellule staminali tumorali. Nostri studi preclinici hanno dimostrato che linfociti del paziente di cancro terminale possono essere convertite da tolleranti astanti in vivo in linfociti T citotossici efficaci in vitro uccidendo cellule tumorali del paziente contenente cloni resistenti ai farmaci e le cellule staminali tumorali. Abbiamo progettato un clinical trial combinazione Interferon &alpha;-2b con imatinib per il trattamento della fase III/IV tumore stromale gastrointestinale (GIST) con il razionale che Interferon &alpha;-2b serve come segnali di pericolo per promuovere l&#39;immunit&agrave; antitumorale mentre imatinib efficacia uccisione tumore Mina tolleranza indotta da tumore e fornitura antigeni tumore-specifici in vivo senza leucopenia, consentendo in tal modo corretta delle cellule dendritiche e differenziazione dei linfociti T citotossici verso la risposta Th1. Analisi ad interim di otto pazienti ha dimostrato significativa induzione di IFN-&gamma;-producing-CD8(+), - CD4(+), cellula - NK e IFN-&gamma;-producing-tumor-infiltrating-lymphocytes, significante significativa risposta Th1 e attivazione delle cellule NK. Dopo un follow-up mediano di 3,6 anni, completi di risposta (CR) + risposta parziale (PR) = 100%, sopravvivenza globale = 100%, un paziente mor&igrave; di malattia correlata, mentre in fase di remissione, sei dei sette pazienti valutabili sono in continua PR/CR (5 pazienti) o hanno sopravvivenza libera da progressione (PFS, 1 paziente) supera il limite superiore del livello di confidenza del 95% di genotipo-specifici-PFS della fase III imatinib-monoterapia (CALGB150105/SWOGS0033), dimostrando molto promettenti risultati clinici. Il processo corrente viene chiuso in preparazione per una prova pi&ugrave; grande futura. Possiamo concludere che la combinazione di terapia mirata e l&#39;immunoterapia &egrave; sicura e indotta significativa risposta Th1 e attivazione delle cellule NK e dimostrata efficacia clinica altamente promettente nei GIST, cos&igrave; che giustificano lo sviluppo di altri tipi di tumore.

Sfruttando l&#39;immunit&agrave; antitumorale a superare le ricadute e migliorare la durata della remissione.

&#x85AC;&#x5264;&#x8010;&#x6027;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x9032;&#x5316;&#x3068;&#x816B;&#x760D;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x518D;&#x5897;&#x6B96;&#x306B;&#x983B;&#x7E41;&#x306B;&#x518D;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x764C;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x8005;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x672B;&#x671F;&#x764C;&#x60A3;&#x8005;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x306F;&#x85AC;&#x5264;&#x8010;&#x6027;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x3068;&#x816B;&#x760D;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x60A3;&#x8005;&#x81EA;&#x8EAB;&#x306E;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x6BBA;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;in vitro&#x3067;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x50B7;&#x5BB3;&#x6027;T&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x306B;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x5BDB;&#x5BB9;&#x306A;&#x508D;&#x89B3;&#x8005;&#x304B;&#x3089;&#x5909;&#x63DB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30DE;&#x30C1;&#x30CB;&#x30D6;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x6BBA;&#x5BB3;&#x306F;&#x3001;&#x816B;&#x760D;&#x8A98;&#x767A;&#x6027;&#x304C;&#x640D;&#x306A;&#x308F;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x6297;&#x816B;&#x760D;&#x514D;&#x75AB;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30DA;&#x30B0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30F3;&#x3B1;-2b&#x306F;&#x5371;&#x967A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5408;&#x7406;&#x7684;&#x3068;&#x30B9;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B8;III / IV&#x6D88;&#x5316;&#x7BA1;&#x9593;&#x8CEA;&#x816B;&#x760D;&#xFF08;GIST&#xFF09;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30A4;&#x30DE;&#x30C1;&#x30CB;&#x30D6;&#x3068;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30F3;&#x3B1;-2b&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x81E8;&#x5E8A;&#x8A66;&#x9A13;&#x3092;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x516C;&#x5DEE;&#x305D;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;Th1&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x50B7;&#x5BB3;&#x6027;T&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x767D;&#x8840;&#x7403;&#x6E1B;&#x5C11;&#x305B;&#x305A;&#x3001;in vivo&#x3067;&#x816B;&#x760D;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; 8&#x60A3;&#x8005;&#x306E;&#x4E2D;&#x9593;&#x89E3;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;IFN-&#x3B3;&#x7523;&#x751F;-CD8&#xFF08;+&#xFF09;&#x3001;&#x6297;CD4&#xFF08;+&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;-NK&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;IFN-&#x3B3;&#x7523;&#x751F;&#x816B;&#x760D;-&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x6D78;&#x6F64;&#x3001;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;Th1&#x7D30;&#x80DE;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x610F;&#x5473;&#x3059;&#x308B;&#x3068;NK&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6709;&#x610F;&#x306A;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3002; 3.6&#x5E74;&#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30ED;&#x30FC;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x4E2D;&#x592E;&#x5024;&#x306E;&#x5F8C;&#x3001;&#x5B8C;&#x5168;&#x5BDB;&#x89E3;&#xFF08;CR&#xFF09;+&#x90E8;&#x5206;&#x594F;&#x52B9;&#xFF08;PR&#xFF09;= 100&#xFF05;&#x3001;&#x5168;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;= 100&#xFF05;&#x3001;&#x4E00;&#x4EBA;&#x306E;&#x60A3;&#x8005;&#x304C;&#x5BDB;&#x89E3;&#x4E2D;&#x306B;&#x7121;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306E;&#x75C5;&#x6C17;&#x3067;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x3001;7&#x4EBA;&#x306E;&#x8A55;&#x4FA1;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x60A3;&#x8005;&#x306E;6&#x4EBA;&#x304C;&#x7D99;&#x7D9A;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304B;&#x3001; PR / CR&#xFF08;5&#x4F8B;&#xFF09;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7121;&#x5897;&#x60AA;&#x751F;&#x5B58;&#x671F;&#x9593;&#xFF08;PFS&#x3001;1&#x4EBA;&#x306E;&#x60A3;&#x8005;&#xFF09;&#x304C;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x305F;&#x7B2C;III&#x76F8;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x578B;&#x7279;&#x7570;-PFS&#x30A4;&#x30DE;&#x30C1;&#x30CB;&#x30D6;&#x5358;&#x72EC;&#x7642;&#x6CD5;&#xFF08;CALGB150105/SWOGS0033&#xFF09;&#x306E;95&#xFF05;&#x306E;&#x4FE1;&#x983C;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x4E0A;&#x9650;&#x3092;&#x8D85;&#x3048;&#x308B;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306A;&#x81E8;&#x5E8A;&#x8EE2;&#x5E30;&#x3092;&#x7D04;&#x675F;&#x3002;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x88C1;&#x5224;&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x5C06;&#x6765;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x8A66;&#x9A13;&#x306E;&#x6E96;&#x5099;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9589;&#x3058;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x6A19;&#x7684;&#x7642;&#x6CD5;&#x3068;&#x514D;&#x75AB;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306F;&#x3001;&#x5B89;&#x5168;&#x304B;&#x3064;&#x8A98;&#x5C0E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;Th1&#x7D30;&#x80DE;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3068;NK&#x7D30;&#x80DE;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x816B;&#x760D;&#x578B;&#x3067;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x6B63;&#x5F53;&#x5316;&#x3057;&#x3001;GIST&#x306B;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x6709;&#x671B;&#x306A;&#x81E8;&#x5E8A;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x518D;&#x767A;&#x3092;&#x514B;&#x670D;&#x3057;&#x3001;&#x5BDB;&#x89E3;&#x671F;&#x9593;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x60AA;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x6297;&#x816B;&#x760D;&#x514D;&#x75AB;

&#xC554; &#xC0DD;&#xC874;&#xC790;&#xB294; &#xC885;&#xC885; &#xC57D;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC800;&#xD56D;&#xB825;&#xC774; &#xD074;&#xB860; &#xC9C4;&#xD654; &#xBC0F; &#xC885;&#xC591; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xCC44;&#xC6B0;&#xAE30; &#xC7AC;&#xBC1C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC804; &#xC784;&#xC0C1; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC57D;&#xBB3C; &#xB0B4;&#xC131; &#xD074;&#xB860; &#xBC0F; &#xC885;&#xC591; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xD658;&#xC790; &#xC790;&#xC2E0;&#xC758; &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC8FD;&#xC774; &#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; cytotoxic T &#xC138;&#xD3EC;&#xB85C; &#xB9D0;&#xAE30; &#xC554; &#xD658;&#xC790;&#xC758; &#xB9BC;&#xD504; &#xD1A8; &#xAD00;&#xC6A9; &#xAD6C;&#xACBD;&#xAFBC; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xD658; &#xB420; &#xC218;&#xC744; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC124;&#xACC4;&#xB294; &#xC784;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD5D8;&#xC73C;&#xB85C; &#xD569;&#xB9AC;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xACC4; III/IV &#xC704;&#xC7A5; stromal &#xC885;&#xC591; (GIST)&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; imatinib peginterferon &alpha;-2b &#xACB0;&#xD569; &#xADF8; peginterferon &alpha;-2b &#xC5ED;&#xD560; antitumor &#xBA74;&#xC5ED; &#xCD09;&#xC9C4; &#xC704;&#xD5D8; &#xC2E0;&#xD638; &#xC885;&#xC591; &#xC0B4;&#xD574; &#xC704;&#xD0DC;&#xB86D;&#xAC8C; &#xACF5;&#xAE09; &#xC885;&#xC591; &#xAD00;&#xB828; &#xD56D; &#xC6D0; leukopenia, &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; Th1 &#xC751;&#xB2F5; &#xD5A5;&#xD574; cytotoxic T-&#xB9BC;&#xD504; &#xAD6C; &#xBD84;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC885;&#xC591; &#xC720;&#xBC1C; &#xACF5;&#xCC28; imatinib &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xD558;&#xBA74;&#xC11C;. 8 &#xD658;&#xC790;&#xC758; &#xC911;&#xAC04; &#xBD84;&#xC11D; IFN-&gamma;-producing-CD8(+),-CD4(+),-NK &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; IFN-&gamma;-producing-tumor-infiltrating-lymphocytes, &#xAE30;&#xC5B5;&#xC744; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; Th1 &#xBC18;&#xC751; &#xBC0F; NK &#xC138;&#xD3EC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC720;&#xB3C4; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. 3.6 &#xB144; &#xBA54;&#xB514;&#xC544; &#xD6C4;&#xC18D; &#xD6C4; &#xC644;&#xB8CC; &#xC751;&#xB2F5; (CR) + &#xBD80;&#xBD84; &#xC751;&#xB2F5; (&#xD64D;&#xBCF4;) = 100%, &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC0DD;&#xC874; = 100%, &#xD55C; &#xD658;&#xC790;&#xB294; &#xC8C4; &#xC0AC; &#xD568;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828;&#xC774; &#xC5C6;&#xB294; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xB9DD;, 6 7 evaluable &#xD658;&#xC790;&#xB294; &#xACC4;&#xC18D; &#xD64D;&#xBCF4;/CR&#xC5D0; (5 &#xD658;&#xC790;) &#xC9C4;&#xD589; &#xC5C6;&#xB294; &#xC0DD;&#xC874; (1 &#xD658;&#xC790; PFS) &#xB610;&#xB294; &#xB2E8;&#xACC4; III imatinib monotherapy (CALGB150105/SWOGS0033)&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD615; &#xAD00;&#xB828; PFS&#xC758; 95% &#xC2E0;&#xB8B0; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC0C1;&#xD55C;&#xC120;&#xC744; &#xCD08;&#xACFC;&#xB9E4;&#xC6B0; &#xC720;&#xB9DD;&#xD55C; &#xC784;&#xC0C1; &#xACB0;&#xACFC; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC; &#xC7AC;&#xD310;&#xC740; &#xB354; &#xD070; &#xBBF8;&#xB798;&#xC758; &#xC2DC;&#xD5D8;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC900;&#xBE44;&#xC5D0; &#xB2EB;&#xD799;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC870;&#xD569;&#xC758; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xB41C; &#xCE58;&#xB8CC; immunotherapy &#xC548;&#xC804; &#xD558; &#xACE0; &#xC720;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; Th1 &#xBC18;&#xC751; &#xBC0F; NK &#xC138;&#xD3EC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; GIST, &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC885;&#xC591; &#xC885;&#xB958;&#xC5D0;&#xB294; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xBCF4;&#xC99D;&#xC5D0; &#xAC80;&#xC99D; &#xB41C; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC720;&#xB9DD;&#xD55C; &#xC784;&#xC0C1; &#xD6A8;&#xB2A5; &#xACB0;&#xB860;.

&#xC7AC;&#xBC1C;&#xC744; &#xADF9;&#xBCF5; &#xD558; &#xACE0; &#xC8C4; &#xC0AC; &#xD568; &#xAE30;&#xAC04; &#xAC1C;&#xC120; antitumor &#xBA74;&#xCC45; &#xC545;&#xC6A9;.

Cancerosas a menudo la reca&#xED;da debido a la evoluci&#xF3;n de los clones resistentes a los medicamentos y la repoblaci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas madre tumorales supervivientes. Nuestro estudio precl&#xED;nico demostr&#xF3; que los linfocitos de pacientes con c&#xE1;ncer terminal se puede convertir de los transe&#xFA;ntes tolerantes en vivo en eficaces linfocitos T citot&#xF3;xicos in vitro matando a las c&#xE9;lulas del propio paciente de tumores resistentes a los f&#xE1;rmacos que contienen los clones y c&#xE9;lulas madre tumorales. Se dise&#xF1;&#xF3; un ensayo cl&#xED;nico de la combinaci&#xF3;n de peginterfer&#xF3;n &#x3B1;-2b con imatinib para el tratamiento de la fase III / IV de tumor del estroma gastrointestinal (GIST) con el racional de que el peginterfer&#xF3;n &#x3B1;-2b sirve como se&#xF1;ales de peligro para promover la inmunidad antitumoral, mientras que la eliminaci&#xF3;n del tumor efectiva imatinib socava inducida por tumor tolerancia y de suministro de ant&#xED;genos espec&#xED;ficos del tumor in vivo sin leucopenia, permitiendo as&#xED; una adecuada de c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas y los linfocitos T citot&#xF3;xicos diferenciaci&#xF3;n hacia Th1 respuesta. El an&#xE1;lisis provisional de los ocho pacientes mostraron una importante inducci&#xF3;n de IFN-&#x3B3;-productoras de c&#xE9;lulas CD8 (+),-CD4 (+),-de las c&#xE9;lulas NK y de IFN-&#x3B3;-productora-de infiltraci&#xF3;n tumoral de los linfocitos NK, lo que significa la respuesta Th1 significativo y activaci&#xF3;n. Despu&#xE9;s de una mediana de seguimiento de 3,6 a&#xF1;os, la respuesta completa (CR) + respuesta parcial (RP) = 100%, la supervivencia global = 100%, un paciente muri&#xF3; de una enfermedad no relacionada, mientras que en la remisi&#xF3;n, seis de los siete pacientes evaluables, se encuentren en continua PR / CR (5 pacientes) o con supervivencia libre de progresi&#xF3;n (PFS, 1 paciente) superior al l&#xED;mite superior del nivel de confianza del 95% del genotipo-espec&#xED;fica-PFS de la fase III de imatinib monoterapia (CALGB150105/SWOGS0033), lo que demuestra muy prometedores resultados cl&#xED;nicos. El ensayo actual est&#xE1; cerrado en preparaci&#xF3;n para un ensayo futuro m&#xE1;s grande. Se concluye que la combinaci&#xF3;n de la terapia dirigida y la inmunoterapia es segura y respuesta Th1 inducida significativa y activaci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas NK y demostrado una eficacia cl&#xED;nica muy prometedor en el GIST, lo que justifica el desarrollo de otros tipos de tumores.

La explotaci&#xF3;n de la inmunidad antitumoral para superar la reca&#xED;da y mejorar la duraci&#xF3;n de la remisi&#xF3;n

&#x8C03;&#x67E5;&#x4E3B;&#x8981;&#x975E;&#x86CB;&#x767D;&#x5DEF;&#x57FA;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x5E73;&#x8861;&#xFF0C;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD; &#xFF08;GSH&#xFF09;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x91C7;&#x7528;&#x8865;&#x5145;&#x7684;&#x836F;&#x7406;&#x548C;&#x9057;&#x4F20;&#x6218;&#x7565;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x786E;&#x5B9A;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4F53;&#x5916;&#x7684;&#x635F;&#x5931;-&#x548C;&#x589E;&#x76CA;&#x7684;-&#x529F;&#x80FD;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;&#x542B;&#x91CF;&#x7684;&#x540E;&#x679C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x76D1;&#x6D4B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x548C;&#x4F7F;&#x7528;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x654F;&#x611F;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (roGFP) &#x63A2;&#x9488;&#x548C;&#x76F8;&#x5173;&#x6027;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x51CF;&#x5C11;&#x6C27;&#x5316;&#x8FDB;&#x5C55; &#xFF08;Trxs&#xFF09; &#x7EA7;&#x522B;&#x7684;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x7684;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x3002;H(2)O(2) &#x6216; Trx &#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242; 1 &#x6C2F;-2&#xFF0C;4-&#x785D;&#x57FA; (DNCB) &#x5728;&#x5927;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x5FC3;&#x810F; (H9c2) &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x8BF1;&#x53D1;&#x66F4;&#x5206;&#x522B;&#x6C27;&#x5316;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x7535;&#x52BF;&#xFF0C;E(hc) (GSSG/2GSH&#xFF09;&#xFF0C;8 &#x4E2A;&#x6216; 50 mV&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x5728; H9c2 &#x7EC6;&#x80DE;&#x6216;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x8FDE;&#x63A5; &#xFF08;&#x534F;&#x946B;) &#x9176;&#x50AC;&#x5316;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D; (GCLC) &#x6216;&#x4FDD;&#x5229;&#x534F;&#x946B;&#x4FEE;&#x9970;&#x7B26;&#x4E9A;&#x57FA; (GCLM) &#x5728;&#x4EBA;&#x80DA;&#x80BE; 293 &#xFF08;HEK293T&#xFF09; T &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4; 3 &#x5230; 4 &#x500D;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;&#x548C;&#x9020;&#x6210;&#x66F4;&#x591A;&#x7684; 7 &#x6216; 12 mV &#x4E2D;&#x7684; N-&#x4E59;&#x9170;-l-&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178; (NAC) &#x6CBB;&#x7597;&#x5206;&#x522B;&#x51CF;&#x5C11; E(hc)&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x6761;&#x4EF6;&#x77DB;&#x76FE;&#x7684;&#x662F;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x6C27;&#x5316;&#xFF0C;&#x6700;&#x540E;&#x8BC1;&#x660E;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x8F6C;&#x53D8;&#x4E2D;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53; roGFP &#x548C; Trx2&#x3002;&#x3001; NAC &#x6CBB;&#x7597; (EC(50) 4 &#x6BEB;&#x7C73;) &#x6216; GCLC &#x6216; GCLM &#x7684;&#x9AD8;&#x6548;&#x8868;&#x8FBE;&#x5C55;&#x793A;&#x66F4;&#x591A;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027;&#x548C;&#x6D3B;&#x6027;&#x6C27;&#x6C34;&#x5E73;&#x4E0B;&#x964D;&#x8FBE;&#x6210;&#x4E86;&#x66F4;&#x591A;&#x51CF;&#x5C11;&#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#x6613;&#x611F;&#x6027;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x63ED;&#x793A;&#x65B0;&#x673A;&#x5236;&#x6240;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;&#x7684;&#x8FD8;&#x539F;&#x5E94;&#x529B;&#x89E6;&#x53D1;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x6C27;&#x5316;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027;&#x3002;-&#x5F20;&#xFF0C;H.&#xFF0C;Limphong&#xFF0C;&#x4F53;&#x80B2;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x6B64;&#x540C;&#x65F6;&#xFF0C;J.&#x3001; &#x5218;&#xFF0C;&#x95EE;&#xFF1A;&#x3001; Rodesch&#x3001; C.K.&#x3001; &#x57FA;&#x7763;&#x6559;&#x5F92;&#xFF0C;E.&#x3001; &#x672C;&#x6770;&#x660E;&#x3001; I.J.&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;&#x4F9D;&#x8D56;&#x8FD8;&#x539F;&#x5E94;&#x529B;&#x89E6;&#x53D1;&#x5668;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x6C27;&#x5316;&#x53CA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027;&#x3002;

&#x4F9D;&#x8D56;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;&#x7684;&#x8FD8;&#x539F;&#x5E94;&#x529B;&#x89E6;&#x53D1;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x6C27;&#x5316;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

To investigate the effects of the predominant nonprotein thiol, glutathione (GSH), on redox homeostasis, we employed complementary pharmacological and genetic strategies to determine the consequences of both loss- and gain-of-function GSH content in vitro. We monitored the redox events in the cytosol and mitochondria using reduction-oxidation sensitive green fluorescent protein (roGFP) probes and the level of reduced/oxidized thioredoxins (Trxs). Either H(2)O(2) or the Trx reductase inhibitor 1-chloro-2,4-dinitrobenzene (DNCB), in embryonic rat heart (H9c2) cells, evoked 8 or 50 mV more oxidizing glutathione redox potential, E(hc) (GSSG/2GSH), respectively. In contrast, N-acetyl-l-cysteine (NAC) treatment in H9c2 cells, or overexpression of either the glutamate cysteine ligase (GCL) catalytic subunit (GCLC) or GCL modifier subunit (GCLM) in human embryonic kidney 293 T (HEK293T) cells, led to 3- to 4-fold increase of GSH and caused 7 or 12 mV more reducing E(hc), respectively. This condition paradoxically increased the level of mitochondrial oxidation, as demonstrated by redox shifts in mitochondrial roGFP and Trx2. Lastly, either NAC treatment (EC(50) 4 mM) or either GCLC or GCLM overexpression exhibited increased cytotoxicity and the susceptibility to the more reducing milieu was achieved at decreased levels of ROS. Taken together, our findings reveal a novel mechanism by which GSH-dependent reductive stress triggers mitochondrial oxidation and cytotoxicity.-Zhang, H., Limphong, P., Pieper, J., Liu, Q., Rodesch, C. K., Christians, E., Benjamin, I. J. Glutathione-dependent reductive stress triggers mitochondrial oxidation and cytotoxicity.

Glutathione-dependent reductive stress triggers mitochondrial oxidation and cytotoxicity.

Pour &#xE9;tudier les effets de la pr&#xE9;dominance thiol non prot&#xE9;ique, le glutathion (GSH), sur l&#x26;#39;hom&#xE9;ostasie redox, nous avons utilis&#xE9; des strat&#xE9;gies compl&#xE9;mentaires pharmacologiques et g&#xE9;n&#xE9;tiques afin de d&#xE9;terminer les cons&#xE9;quences &#xE0; la fois de contenu en GSH perte et le gain de fonction in vitro. Nous avons suivi les &#xE9;v&#xE9;nements d&#x26;#39;oxydo-r&#xE9;duction dans le cytosol et les mitochondries en utilisant la r&#xE9;duction-oxydation sensibles prot&#xE9;ine fluorescente verte (roGFP) sondes et le niveau de r&#xE9;duction des thior&#xE9;doxines / oxyd&#xE9; (TRXs). Soit H (2) O (2) ou l&#x26;#39;inhibiteur de r&#xE9;ductase Trx 1-chloro-2 ,4-dinitrobenz&#xE8;ne (DNCB), dans le c&#x153;ur de rat embryonnaire (H9c2) des cellules, a &#xE9;voqu&#xE9; 8 ou 50 mV plus oxydant glutathion potentiel redox, E (hc ) (GSSG/2GSH), respectivement. En revanche, la N-ac&#xE9;tyl-L-cyst&#xE9;ine (NAC) de traitement dans H9c2 cellules, ou la surexpression de la ligase soit cyst&#xE9;ine glutamate (GCL) sous-unit&#xE9; catalytique (GCLC) ou sous-unit&#xE9; modificateur de GCL (GCLM) dans embryonnaires humaines de rein 293 T (HEK293T) cellules, a conduit &#xE0; 3 - &#xE0; 4 fois plus de GSH et caus&#xE9; 7 ou 12 mV plus la r&#xE9;duction de E (hc), respectivement. Cette condition, paradoxalement, a augment&#xE9; le niveau de l&#x26;#39;oxydation mitochondriale, comme l&#x26;#39;a d&#xE9;montr&#xE9; par des changements d&#x26;#39;oxydo-r&#xE9;duction dans mitochondriale roGFP et TRX2. Enfin, soit de la NAC traitement (CE (50) 4 mM) ou soit une surexpression de GCLC ou GCLM expos&#xE9; cytotoxicit&#xE9; accrue et la susceptibilit&#xE9; au milieu plus r&#xE9;ducteur a &#xE9;t&#xE9; atteint &#xE0; une baisse des niveaux de ROS. Pris dans leur ensemble, nos r&#xE9;sultats r&#xE9;v&#xE8;lent un nouveau m&#xE9;canisme par lequel la GSH-d&#xE9;pendante du stress r&#xE9;ductrice d&#xE9;clenche l&#x26;#39;oxydation mitochondriale et cytotoxicity.-Zhang, H., Limphong, P., Pieper, J., Liu, Q., Rodesch, CK, chr&#xE9;tiens, E ., Benjamin, IJ glutathion-d&#xE9;pendante du stress r&#xE9;ductrice d&#xE9;clenche l&#x26;#39;oxydation mitochondriale et la cytotoxicit&#xE9;.

Glutathion-d&#xE9;pendant stress r&#xE9;ductrice d&#xE9;clencheurs oxydation mitochondriale et cytotoxicit&#xE9;

Um die Auswirkungen der vorherrschende Nonprotein Thiol untersuchen, Glutathion (GSH), auf Redox-Hom&ouml;ostase, wir erg&auml;nzende pharmakologische und genetische Strategien, um zu bestimmen, die Folgen von Verlust und Gewinn-of Function-GSH-Content in-vitro-besch&auml;ftigt. Wir &uuml;berwachten die Redox-Ereignisse im Zytosol und Mitochondrien mit Reduktion-Oxidation empfindlich gr&uuml;n fluoreszierendes Protein (RoGFP)-Sonden und das Niveau der reduziert/oxidiert Thioredoxins (Trxs). Entweder H(2)O(2) oder die Trx-Reduktase Inhibitor 1-Chlor-2,4-dinitrobenzol (DNCB), in den embryonalen Ratte, Herzzellen (H9c2), evoziert 8 oder 50 mV mehr oxidieren Glutathion Redoxpotentials, E(hc) (GSSG/2GSH), beziehungsweise. Im Gegensatz dazu Verringerung N-Acetyl-l-Cystein (NAC) Behandlung in H9c2-Zellen oder eine &Uuml;berexpression von Glutamat-Cystein-Ligase (GCL) katalytische Untereinheit (GCLC) oder die GCL Modifizierer Untereinheit (GCLM) in den menschlichen embryonalen Niere 293 T (HEK293T) Zellen, f&uuml;hrte zu 3 und 4 8-fach Erh&ouml;hung der GSH und verursacht 7 oder 12 mV weitere der E(hc), bzw.. Diese Bedingung hat die H&ouml;he der mitochondriale Oxidation, paradoxerweise gesteigert, wie Redox Verschiebung mitochondriale RoGFP und Trx2. schlie&szlig;lich beweist, NAC-Behandlung (EC(50) 4 mM) oder entweder GCLC oder GCLM eine &Uuml;berexpression ausgestellt erh&ouml;hte Zytotoxizit&auml;t und die Anf&auml;lligkeit f&uuml;r mehr Verringerung Milieu erzielt auf verringerte Niveaus der ROS. Zusammen genommen, unsere Ergebnisse zeigen einen neuen Mechanismus mit der GSH-abh&auml;ngige reduktiven Stress, mitochondriale Oxidation und Zytotoxizit&auml;t ausl&ouml;st.-Zhang, H., Limphong, P., Pieper, J., Liu, f., Rodesch, C. K., Christen, E., Benjamin, I. J. Glutathion-abh&auml;ngige reduktiven stress Ausl&ouml;ser mitochondriale Oxidation und Zytotoxizit&auml;t.

Glutathion-abh&auml;ngige reduktiven Stress l&ouml;st mitochondriale Oxidation und Zytotoxizit&auml;t.

Per studiare gli effetti del tiolo nonprotein predominante, glutatione (GSH), sull&#39;omeostasi redox, abbiamo impiegato complementari strategie farmacologiche e genetiche per determinare le conseguenze di entrambi contenuti GSH perdita e guadagno-di-funzione in vitro. Abbiamo monitorato gli eventi redox nel citosol e mitocondri mediante riduzione-ossidazione verde sensibili sonde proteina fluorescente (roGFP) e il livello di thioredoxins ridotto/ossidato (Trxs). H(2)O(2) o il Trx reduttasi inibitore 1-cloro-2,4-dinitrobenzene (DNCB), nelle cellule del cuore (H9c2) embrionali di topo, evocato 8 o 50 mV pi&ugrave; ossidante glutatione redox potenziali, E(hc) (GSSG/2GSH), rispettivamente. In contrasto, trattamento di N-acetil-l-cisteina (NAC) in cellule H9c2 o sovraespressione della subunit&agrave; catalitica glutammato cisteina ligasi (GCL) (GCLC) o della subunit&agrave; di modificatore GCL (GCLM) in cellule T (HEK293T) 293 Rene embrionale umano, ha portato all&#39;aumento di 3 a 4 volte di GSH e causato 7 o 12 mV pi&ugrave; riducendo E(hc), rispettivamente. Questa condizione paradossalmente aumentato il livello di ossidazione mitocondriale, come dimostrato da turni di redox in roGFP mitocondriale e Trx2. Infine, trattamento NAC (EC(50) 4 mM) o iperespressione o GCLC o GCLM esposta maggiore citotossicit&agrave; e la predisposizione per il milieu pi&ugrave; riducente &egrave; stato raggiunto alla diminuzione dei livelli di ROS. Presi insieme, i nostri risultati rivelano un nuovo meccanismo da cui GSH-dipendente riduttivo stress innesca ossidazione mitocondriale e citotossicit&agrave;.-Zhang, H., Limphong, P., Pieper, J., Liu, Q., Rodesch, C. K., i cristiani, E., Benjamin, I. J. glutatione-dipendente riduttivo stress trigger ossidazione mitocondriale e citotossicit&agrave;.

Glutatione-dipendente riduttivo stress innesca ossidazione mitocondriale e citotossicit&agrave;.

&#x512A;&#x52E2;&#x306A;&#x975E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x30C1;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB;&#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;&#xFF08;GSH&#xFF09;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x9178;&#x5316;&#x9084;&#x5143;&#x30DB;&#x30E1;&#x30AA;&#x30B9;&#x30BF;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;in vitro&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3067;&#x640D;&#x5931;&#x3068;&#x5229;&#x5F97;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;GSH&#x542B;&#x91CF;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x88DC;&#x5B8C;&#x7684;&#x306A;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x6226;&#x7565;&#x3092;&#x63A1;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x9178;&#x5316;&#x9084;&#x5143;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x306A;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;roGFP&#xFF09;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x9084;&#x5143;/&#x9178;&#x5316;&#x30C1;&#x30AA;&#x30EC;&#x30C9;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#xFF08;Trxs&#xFF09;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30BE;&#x30EB;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x9178;&#x5316;&#x9084;&#x5143;&#x306E;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x30E2;&#x30CB;&#x30BF;&#x30FC;&#x3057;&#x305F;&#x3002; H&#xFF08;2&#xFF09;O&#xFF08;2&#xFF09;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306F;&#x3001;1  - &#x30AF;&#x30ED;&#x30ED;-2,4  - &#x30B8;&#x30CB;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D9;&#x30F3;&#x30BC;&#x30F3;&#xFF08;DNCB&#xFF09;&#x3001;&#x80DA;&#x6027;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x5FC3;&#x81D3;&#xFF08;H9C2&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x304B;&#x306F;&#x3001;8&#x307E;&#x305F;&#x306F;50 mV&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x9084;&#x5143;&#x96FB;&#x4F4D;&#x3001;E&#xFF08;HC&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#xFF08;&#xFF09;GSSG/2GSH&#xFF09;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x80DA;&#x6027;&#x814E;&#x81D3;293 T&#xFF08;HEK293T&#xFF09;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;GCL&#xFF09;&#x89E6;&#x5A92;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#xFF08;GCLC&#xFF09;&#x307E;&#x305F;&#x306F;GCL&#x4FEE;&#x98FE;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#xFF08;GCLM&#xFF09;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306E;N-&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;-L-&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#xFF08;NAC&#xFF09;H9c2&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;GSH&#x306E;4&#x500D;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;E&#xFF08;HC&#xFF09;&#x3092;&#x4F4E;&#x6E1B;&#x3059;&#x308B;7&#x307E;&#x305F;&#x306F;12 mV&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x539F;&#x56E0; - &#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;3&#x3064;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;roGFP&#x3068;Trx2&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x9178;&#x5316;&#x9084;&#x5143;&#x306E;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x306F;&#x3001;&#x9006;&#x8AAC;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x9084;&#x5143;&#x74B0;&#x5883;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027;&#x3068;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;NAC&#x6CBB;&#x7642;&#xFF08;EC&#xFF08;50&#xFF09;4 mm&#xFF09;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x3069;&#x3061;&#x3089;GCLC&#x307E;&#x305F;&#x306F;GCLM&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x304B;&#x304C;ROS&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;GSH-&#x4F9D;&#x5B58;&#x9084;&#x5143;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306F;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x3068;cytotoxicity.&#xB7;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x3001;H.&#x3001;Limphong&#x3001;P.&#x3001;&#x30D4;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x3001;J.&#x3001;&#x5289;&#x3001;Q.&#x3001;Rodesch&#x3001;CK&#x3001;&#x30AD;&#x30EA;&#x30B9;&#x30C8;&#x6559;&#x5F92;&#x3001;E&#x3092;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3001;&#x30D9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30E3;&#x30DF;&#x30F3;&#x3001;IJ&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x9084;&#x5143;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306F;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027;&#x3092;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x9084;&#x5143;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306F;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x9178;&#x5316;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027;&#x3092;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;

&#xC8FC;&#xB41C; nonprotein thiol&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC870;&#xC0AC;, glutathione (GSH) redox &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB450; &#xC190;&#xC2E4; &#xBC0F; &#xC774;&#xB4DD;-&#xC758;-&#xAE30;&#xB2A5; GSH &#xCF58;&#xD150;&#xCE20; &#xCCB4; &#xC678;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0C1;&#xD638; &#xBCF4;&#xC644;&#xC801;&#xC778; &#xC57D;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xC720;&#xC804; &#xC804;&#xB7B5; &#xACE0;&#xC6A9;. &#xC6B0;&#xB9AC; cytosol &#xAC10;&#xC18C; &#xC0B0;&#xD654; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (roGFP) &#xC870;&#xC0AC; &#xBC0F; &#xAC10;&#xC18C;/&#xC0B0;&#xD654; thioredoxins (Trxs)&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0B0;&#xD654; &#xD658; &#xC6D0; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. H(2)O(2) &#xB098;&#xB294; Trx reductase &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; 1-&#xD074;&#xB85C;-2, 4-dinitrobenzene (DNCB) &#xBC30;&#xC544; &#xC950; &#xC2EC;&#xC7A5; (H9c2) &#xC140;&#xC5D0; 8 &#xAC1C; &#xB610;&#xB294; 50 Mv&#xB97C; &#xB354; glutathione redox &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778;, E(hc) (GSSG/2GSH)&#xB97C; &#xAC01;&#xAC01; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xBD88;&#xB7EC; &#xC77C;&#xC73C;&#xCF30;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, H9c2 &#xC140; &#xB610;&#xB294; glutamate &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; &#xB9AC;&#xAC00; (GCL) &#xCD09;&#xB9E4; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; (GCLC) &#xB610;&#xB294; GCL &#xD55C;&#xC815;&#xC790; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; (GCLM) &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBC30;&#xC544; &#xC2E0;&#xC7A5; 293 T (HEK293T) &#xC140;, GSH&#xC758; 3-&#xC5D0; 4 &#xBC30; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; &#xB354; &#xB9CE;&#xC740; 7 &#xB610;&#xB294; 12 mV &#xBC1C;&#xC0DD;&#xC5D0;&#xC11C; overexpression&#xC5D0; N-&#xC544; &#xC138; &#xD2F8;-l-&#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; (NAC) &#xCE58;&#xB8CC;&#xB294; &#xAC01;&#xAC01; E(hc), &#xAC10;&#xC18C;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C; redox &#xBCC0;&#xD654; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; Rogfp&#xC640; trx2&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xB300;&#xB85C;&#xC774; &#xC870;&#xAC74;&#xC744; &#xC5ED;&#xC124;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC; &#xB9AC;&#xC544; &#xC0B0;&#xD654; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00;, NAC &#xCE58;&#xB8CC; (EC(50) 4 m m) &#xB610;&#xB294; GCLC &#xB610;&#xB294; GCLM overexpression &#xC99D;&#xAC00; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC; &#xB3C5;&#xC131;&#xC744; &#xC804;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xB354; &#xC904;&#xC774;&#xB294; &#xC8FC;&#xC704;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xC131;&#xC744; &#xC120;&#xC0DD;&#xB2D8;&#xC758; &#xAC10;&#xC18C; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2EC;&#xC131; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xACF5;&#xAC1C;&#xB294; GSH &#xC758;&#xC874; reductive &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70;&#xD558; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC; &#xB9AC;&#xC544; &#xC0B0;&#xD654; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xB3C5;&#xC131;. &#xC18C;&#xC124; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;-&#xC7A5;, &#xBC18;&#xC7A5; &#xB2D8;, Limphong, &#xD53C;, Pieper, &#xC81C;&#xC774;, &#xB9AC; &#xC6B0;, &#xC9C8;&#xBB38;, Rodesch, C. K., &#xAE30;&#xB3C5;&#xAD50;&#xC778;, E., &#xBCA4;&#xC790;&#xBBFC;, I. J. Glutathione-&#xC885;&#xC18D; reductive &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC; &#xB9AC;&#xC544; &#xC0B0;&#xD654; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xB3C5;&#xC131;.

Glutathione &#xC885;&#xC18D; reductive &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC; &#xB9AC;&#xC544; &#xC0B0;&#xD654; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xB3C5;&#xC131;&#xC744; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Para investigar los efectos de la predominante tiol no proteico, el glutati&#xF3;n (GSH), en la homeostasis redox, se emplearon complementarios estrategias farmacol&#xF3;gicas y gen&#xE9;ticas para determinar las consecuencias de tanto contenido de GSH p&#xE9;rdida y la ganancia de la funci&#xF3;n-in vitro. Hicimos un seguimiento de los eventos redox en el citosol y las mitocondrias mediante oxidaci&#xF3;n-reducci&#xF3;n sensible prote&#xED;na verde fluorescente (roGFP) las sondas y el nivel de reducci&#xF3;n de tiorredoxinas / oxidado (TRXs). Cualquiera de H (2) O (2) o el inhibidor de la reductasa Trx 1-cloro-2 ,4-dinitrobenceno (DNCB), en el coraz&#xF3;n de rata embrionaria (H9c2) c&#xE9;lulas, evocada 8 o 50 mV m&#xE1;s oxidante potencial redox del glutati&#xF3;n, E (HC ) (GSSG/2GSH), respectivamente. En contraste, la N-acetil-L-ciste&#xED;na (NAC) tratamiento en H9c2 c&#xE9;lulas, o sobreexpresi&#xF3;n de cualquiera de la ligasa ciste&#xED;na glutamato (GCL) subunidad catal&#xED;tica (GCLC) o subunidad modificador GCL (GCLM) en ri&#xF1;&#xF3;n embrionario humano 293 T (HEK293T) c&#xE9;lulas, llev&#xF3; a 3 - a 4 veces el aumento de GSH y caus&#xF3; 7 o 12 mV m&#xE1;s la reducci&#xF3;n de E (HC), respectivamente. Esta condici&#xF3;n, parad&#xF3;jicamente, aument&#xF3; el nivel de la oxidaci&#xF3;n mitocondrial, como se demuestra por los cambios redox en las mitocondrias y roGFP Trx2. Por &#xFA;ltimo, ya sea el tratamiento NAC (CE (50) de 4 mm) o sobreexpresi&#xF3;n de GCLC o GCLM exhibi&#xF3; aumento de la citotoxicidad y la susceptibilidad a la reducci&#xF3;n de m&#xE1;s del medio se logr&#xF3; a disminuci&#xF3;n de los niveles de ROS. En conjunto, nuestros resultados ponen de manifiesto un nuevo mecanismo por el cual GSH-dependiente de la tensi&#xF3;n reductora provoca la oxidaci&#xF3;n mitocondrial y cytotoxicity.-Zhang, H., Limphong, P., Pieper, J. Liu, P., Rodesch, CK, los cristianos, E ., Benjam&#xED;n, IJ glutati&#xF3;n dependiente de la tensi&#xF3;n reductora provoca la oxidaci&#xF3;n mitocondrial y la citotoxicidad.

El glutati&#xF3;n dependiente de estr&#xE9;s reductivo desencadenantes oxidaci&#xF3;n mitocondrial y la citotoxicidad

&#x76EE;&#x7684;&#xFF1A; &#x5047;&#x80A5;&#x5927;&#x578B;&#x808C;&#x8425;&#x517B;&#x4E0D;&#x826F;&#x75C7; (DMD) &#x662F;&#x901A;&#x5E38;&#x6CA1;&#x6709;&#x6216;&#x51E0;&#x4E4E;&#x6CA1;&#x6709;&#x6297;&#x808C;&#x840E;&#x7F29;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x7684;&#x819C;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x91CF;&#x5316;&#x7684;&#x808C;&#x8089;&#x6D3B;&#x68C0;&#x5207;&#x7247;&#x514D;&#x75AB;&#x8367;&#x5149;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x7684;&#x6297;&#x808C;&#x840E;&#x7F29;&#x86CB;&#x767D;&#x4FE1;&#x53F7;&#x6C34;&#x5E73;&#x975E;&#x5E38;&#x4F4E;&#x7684;&#x6280;&#x672F;&#x6311;&#x6218;&#x3002;&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#x5728;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x7684;&#x8BC1;&#x660E;&#x7684;&#x539F;&#x5219;&#x836F;&#x7269;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x5728;&#x68C0;&#x6D4B;&#x548C;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x4EC0;&#x4E48;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x5176;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x91CD;&#x5927;&#x53D8;&#x5316;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x5373;&#x4F7F;&#x7EDD;&#x5BF9;&#x6297;&#x808C;&#x840E;&#x7F29;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x5E73;&#x4ECD;&#x7136;&#x5F88;&#x4F4E;&#x3002;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF1A; &#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#x4E00;&#x79CD;&#x5141;&#x8BB8;&#x5728; co-stained &#x7684;&#x8840;&#x5F71;&#x8282;&#x4E2D;&#x4F4E;&#x7EA7;&#x6297;&#x808C;&#x840E;&#x7F29;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x53EF;&#x9760;&#x548C;&#x534A;&#x81EA;&#x52A8;&#x5316;&#x514D;&#x75AB;&#x8367;&#x5149;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x56FE;&#x50CF;&#x5206;&#x6790;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x6784;&#x9020;&#x81EA;&#x5B9A;&#x4E49;&#x811A;&#x672C;&#x6765;&#x521B;&#x5EFA;&#x4E00;&#x4E2A;&#x8FDE;&#x7EED;&#x533A;&#x57DF;&#x8840;&#x5F71;&#x63A9;&#x7801;&#xFF0C;&#x91CF;&#x5316;&#x53EA;&#x5728;&#x50CF;&#x7D20;&#x5185;&#x7684;&#x8840;&#x5F71;&#x63A9;&#x7801;&#x8868;&#x793A;&#x5927;&#x6982;&#x662F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x7684;&#x819C;&#x7684;&#x6297;&#x808C;&#x840E;&#x7F29;&#x86CB;&#x767D;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x6B64;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x4ECE;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x7684; DMD&#x3001; &#x8D1D;&#x514B;&#x5C14;&#x808C;&#x8425;&#x517B;&#x4E0D;&#x826F;&#x75C7; (BMD)&#x3001; &#x4E2D;&#x7EA7;&#x808C;&#x8425;&#x517B;&#x4E0D;&#x826F;&#x75C7; (IMD) &#x548C;&#x6B63;&#x5E38;&#x63A7;&#x5236;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x60A3;&#x8005;&#x7684;&#x808C;&#x8089;&#x6D3B;&#x68C0;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF1A; &#x4E32;&#x884C;&#x8282;&#x4E0A;&#x591A;&#x5929;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x53EF;&#x91CD;&#x590D;&#x6027;&#x548C;&#x5F52;&#x4E00;&#x5316;&#x7684; dystrophin:spectrin &#x5F3A;&#x5EA6;&#x4E0E;&#x6297;&#x808C;&#x840E;&#x7F29;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x5370;&#x8FF9;&#x5206;&#x6790;&#x5173;&#x8054; &#xFF08;&#x6B63;&#x5E38;&#x63A7;&#x5236;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x7684;&#x767E;&#x5206;&#x6BD4;&#x8868;&#x793A;&#xFF09; &#x7684;&#x6BD4;&#x7387;&#x3002;&#x7ED3;&#x8BBA;&#xFF1A; &#x6B64;&#x65B9;&#x6CD5;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x751F;&#x7269;&#x6807;&#x5FD7;&#x7269;&#x68C0;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x9A8C; DMD &#x7597;&#x6CD5;&#x7684;&#x5F3A;&#x5927;&#x548C;&#x53EF;&#x9760;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&copy; 2012&#x5E74;&#x4F5C;&#x8005;&#x3002;&#x795E;&#x7ECF;&#x75C5;&#x7406;&#x5B66;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x75C5;&#x7406;&#x5B66;&#x5E94;&#x7528;&#x795E;&#x7ECF;&#x751F;&#x7269;&#x5B66; &copy; 2012&#x5E74;&#x82F1;&#x56FD;&#x793E;&#x4F1A;&#x3002;

Dystrophinopathy &#x808C;&#x8089;&#x6807;&#x672C;&#x4E2D;&#x7684;&#x6297;&#x808C;&#x840E;&#x7F29;&#x86CB;&#x767D;&#x514D;&#x75AB;&#x8367;&#x5149;&#x7684;&#x91CF;&#x5316;&#x3002;

Aims: Duchenne muscular dystrophy (DMD) is usually associated with absent or nearly absent dystrophin expression at the sarcolemmal membrane. Quantification of very low levels of dystrophin signal in immunofluorescent studies of muscle biopsy sections presents a technical challenge. This is particularly true in the setting of proof-of-principle drug trials, in which the detection and quantification of what may be significant changes in levels of expression is important, even if absolute dystrophin levels remain low. Methods: We have developed a method of image analysis that allows reliable and semi-automated immunofluorescent quantification of low-level dystrophin expression in sections co-stained for spectrin. Using a custom Metamorph script to create a contiguous region spectrin mask, we quantify dystrophin signal intensity only at pixels within the spectrin mask that presumably represent the sarcolemmal membrane. Using this method, we analyzed muscle biopsy tissue from a series of patients with DMD, Becker muscular dystrophy (BMD), intermediate muscular dystrophy (IMD), and normal control tissue. Results: Analysis of serial sections on multiple days confirms reproducibility, and normalized dystrophin:spectrin intensity ratios (expressed as a percentage of normal control tissue) correlate well with the dystrophin expression levels as determined by Western blot analysis. Conclusions: This method offers a robust and reliable method of biomarker detection for trials of DMD therapies. Â© 2012 The Authors. Neuropathology and Applied Neurobiology Â© 2012 British Neuropathological Society.

Quantification of Dystrophin Immunofluorescence in Dystrophinopathy Muscle Specimens.

Buts: dystrophie musculaire de Duchenne (DMD) est g&#xE9;n&#xE9;ralement associ&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;expression de dystrophine absente ou presque absente au sarcolemme. Quantification des niveaux tr&#xE8;s faibles de signal de la dystrophine dans les &#xE9;tudes par immunofluorescence de biopsies musculaires sections pr&#xE9;sente un d&#xE9;fi technique. Cela est particuli&#xE8;rement vrai dans le cadre d&#x26;#39;essais de m&#xE9;dicaments la preuve de principe, dans lequel la d&#xE9;tection et la quantification de ce qui peut avoir des changements importants dans les niveaux d&#x26;#39;expression est importante, m&#xEA;me si les niveaux absolus de dystrophine reste faible. M&#xE9;thodes: Nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; une m&#xE9;thode d&#x26;#39;analyse d&#x26;#39;image qui permet fiable et semi-automatis&#xE9;e de quantification par immunofluorescence de l&#x26;#39;expression de dystrophine de bas niveau dans les sections co-marqu&#xE9;es pour la spectrine. L&#x26;#39;utilisation d&#x26;#39;un script personnalis&#xE9; Metamorph pour cr&#xE9;er un masque r&#xE9;gion contigu&#xEB; de la spectrine, nous quantifions l&#x26;#39;intensit&#xE9; du signal dystrophine seulement au niveau des pixels dans le masque de la spectrine qui, vraisemblablement, repr&#xE9;sentent le sarcolemme. En utilisant cette m&#xE9;thode, nous avons analys&#xE9; la biopsie musculaire tissus d&#x26;#39;une s&#xE9;rie de patients atteints de DMD, dystrophie musculaire de Becker (BMD), interm&#xE9;diaire dystrophie musculaire (IMD), et le tissu de contr&#xF4;le normal. R&#xE9;sultats: L&#x26;#39;analyse de coupes s&#xE9;ri&#xE9;es sur plusieurs jours confirme la reproductibilit&#xE9;, et de la dystrophine normalis&#xE9;e: rapports d&#x26;#39;intensit&#xE9; de la spectrine (exprim&#xE9;e en pourcentage de tissu de contr&#xF4;le normale) sont bien corr&#xE9;l&#xE9;s avec les niveaux d&#x26;#39;expression de dystrophine tel que d&#xE9;termin&#xE9; par analyse par Western blot. Conclusions: Cette m&#xE9;thode offre une m&#xE9;thode robuste et fiable de d&#xE9;tection de biomarqueurs pour les essais de th&#xE9;rapies DMD. &#xA9; 2012 Les Auteurs. Neuropathologie et appliqu&#xE9;e Neurobiologie &#xA9; 2012 Soci&#xE9;t&#xE9; britannique neuropathologique.

Quantification de la Dystrophine immunofluorescence dans des &#xE9;chantillons de Muscle dystrophinopathie

Ziele: Duchenne-Muskeldystrophie (DMD) ist in der Regel verbunden mit abwesenden oder fast fehlende Dystrophin Ausdruck bei der sarcolemmal Membran. Quantifizierung von sehr geringen Dystrophin Signal in Immunfluoreszenz Studien der Muskel Biopsie Abschnitte stellt eine technische Herausforderung. Dies gilt insbesondere bei der Festlegung der Beweis-des-Prinzip Medikamentenstudien, in die die Erkennung und Quantifizierung von dem, was sein k&ouml;nnen signifikante Ver&auml;nderungen in Ebenen des Ausdrucks ist wichtig, auch wenn absolute Dystrophin Ebenen niedrig bleiben. Methoden: Wir haben eine Methode der Bildanalyse entwickelt, die zuverl&auml;ssig und halbautomatische Immunfluoreszenz Quantifizierung der Low-Level Dystrophin Ausdruck in den Abschnitten co-stained f&uuml;r Spektrin erlaubt. Verwenden ein benutzerdefiniertes Metamorph-Skript um eine zusammenh&auml;ngenden Bereich Spektrin-Maske zu erstellen, zu quantifizieren wir Dystrophin Signalintensit&auml;t nur bei Pixel innerhalb der Spektrin-Maske, die vermutlich die sarcolemmal Membran darstellen. Mit dieser Methode, analysierte wir Biopsie Muskelgewebe aus einer Reihe von Patienten mit DMD, Becker-Muskeldystrophie (BMD), fortgeschrittene Muskeldystrophie (IMD) und normalen Steuerung Gewebe. Ergebnisse: Analyse der seriellen Abschnitte &uuml;ber mehrere Tage best&auml;tigt die Reproduzierbarkeit und normalisierte Dystrophin:spectrin Intensit&auml;t, die Verh&auml;ltnisse (ausgedr&uuml;ckt als Prozentsatz der normalen Steuerung Gewebe) korrelieren gut mit der Dystrophin Ausdruck Niveaus von Western-Blot-Analyse bestimmt. Schlussfolgerungen: Diese Methode bietet eine robuste und zuverl&auml;ssige Methode der Biomarker-Erkennung f&uuml;r Studien der DMD-Therapien. &copy; 2012 Die Autoren. Neuropathologie und angewandte Neurobiologie &copy; 2012 British Neuropathologische Gesellschaft.

Quantifizierung von Dystrophin Immunofluoreszenz in Dystrophinopathy Muskel-Proben.

Obiettivi: Distrofia muscolare di Duchenne (DMD) &egrave; associata solitamente con assente o quasi assente espressione di distrofina alla membrana sarcolemmal. Quantificazione dei livelli molto bassi di segnale distrofina negli studi di immunofluorescenza delle sezioni di biopsia muscolare presenta una sfida tecnica. Questo &egrave; particolarmente vero nell&#39;impostazione di studi clinici di principio di prova, in cui il rilevamento e la quantificazione di ci&ograve; che pu&ograve; essere significativi cambiamenti nei livelli di espressione &egrave; importante, anche se i livelli assoluti di distrofina rimangano Bassi. Metodi: Abbiamo sviluppato un metodo di analisi di immagine che permette la quantificazione immunofluorescenza semiautomatica e affidabile di basso livello dystrophin expression in sezioni co-stained per spettrina. Utilizzando uno script personalizzato Metamorph per creare una maschera di spettrina regione contigua, noi quantificare intensit&agrave; segnale distrofina solo a pixel all&#39;interno della maschera di spectrina che presumibilmente rappresentano la membrana sarcolemmal. Utilizzando questo metodo, abbiamo analizzato tessuto biopsia muscolare da una serie di pazienti con DMD, Becker (BMD), la distrofia muscolare, distrofia muscolare intermedia (IMD) e tessuto normale controllo. Risultati: Analisi delle sezioni seriali su pi&ugrave; giorni conferma riproducibilit&agrave; e intensit&agrave; normalizzata dystrophin:spectrin rapporti (espressi come percentuale del tessuto normale controllo) correlano bene con i livelli di espressione di distrofina come determinato dall&#39;analisi Western blot. Conclusioni: Questo metodo offre un metodo robusto e affidabile di rilevamento biomarcatore per le sperimentazioni di terapie DMD. &copy; 2012 Gli autori. Neuropatologia e neurobiologia applicata &copy; 2012 British Society neuropatologiche.

Quantificazione dell&#39;immunofluorescenza di distrofina nel muscolo Dystrophinopathy esemplari.

&#x76EE;&#x7684;&#xFF1A;&#x30C7;&#x30E5;&#x30B7;&#x30A7;&#x30F3;&#x30CC;&#x578B;&#x7B4B;&#x30B8;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#xFF08;DMD&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x7B4B;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x819C;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x304B;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306A;&#x3044;&#x30B8;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7B4B;&#x751F;&#x691C;&#x5207;&#x7247;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B8;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x4F4E;&#x3044;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x306F;&#x6280;&#x8853;&#x7684;&#x306A;&#x8AB2;&#x984C;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x767A;&#x73FE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x6709;&#x610F;&#x306A;&#x5909;&#x5316;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3082;&#x306E;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5B9A;&#x91CF;&#x306F;&#x7D76;&#x5BFE;&#x30B8;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306F;&#x4F4E;&#x3044;&#x307E;&#x307E;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x3066;&#x3082;&#x3001;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x8A3C;&#x660E;&#x306E;&#x539F;&#x7406;&#x85AC;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x8A66;&#x9A13;&#x306E;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x306B;&#x7279;&#x306B;&#x5F53;&#x3066;&#x306F;&#x307E;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF1A;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30BB;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x7528;Co-&#x67D3;&#x8272;&#x3067;&#x4F4E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x30B8;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x4FE1;&#x983C;&#x6027;&#x3068;&#x534A;&#x81EA;&#x52D5;&#x514D;&#x75AB;&#x86CD;&#x5149;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x753B;&#x50CF;&#x89E3;&#x6790;&#x306E;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9023;&#x7D9A;&#x3057;&#x305F;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30DE;&#x30B9;&#x30AF;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30B9;&#x30BF;&#x30E0;Metamorph&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x3001;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x7B4B;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x819C;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30DE;&#x30B9;&#x30AF;&#x5185;&#x306E;&#x30D4;&#x30AF;&#x30BB;&#x30EB;&#x3067;&#x30B8;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5F37;&#x5EA6;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;DMD&#x3001;&#x30D9;&#x30C3;&#x30AB;&#x30FC;&#x578B;&#x7B4B;&#x30B8;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#xFF08;BMD&#xFF09;&#x3001;&#x4E2D;&#x9593;&#x578B;&#x7B4B;&#x30B8;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#xFF08;IMD&#xFF09;&#x3001;&#x6B63;&#x5E38;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x60A3;&#x8005;&#x306E;&#x30B7;&#x30EA;&#x30FC;&#x30BA;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x7B4B;&#x751F;&#x691C;&#x7D44;&#x7E54;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#xFF1A;&#x30B7;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BB;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x65E5;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x518D;&#x73FE;&#x6027;&#x3001;&#x6B63;&#x898F;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B8;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#xFF1A;&#x30A6;&#x30A7;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x5F37;&#x5EA6;&#x6BD4;&#xFF08;&#x6B63;&#x5E38;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BB;&#x30F3;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#xFF09;&#x30B8;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3068;&#x3088;&#x304F;&#x76F8;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x7D50;&#x8AD6;&#xFF1A;&#x3053;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x306F;&#x3001;DMD&#x6CBB;&#x7642;&#x85AC;&#x306E;&#x8A66;&#x9A13;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x306E;&#x5805;&#x7262;&#x3067;&#x4FE1;&#x983C;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; &#xA9;2012&#x4F5C;&#x6210;&#x8005;&#x3002;&#x795E;&#x7D4C;&#x75C5;&#x7406;&#x5B66;&#x3001;&#x5FDC;&#x7528;&#x795E;&#x7D4C;&#xA9;2012&#x82F1;&#x56FD;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x75C5;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

Dystrophinopathy&#x7B4B;&#x6A19;&#x672C;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B8;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x514D;&#x75AB;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;

&#xBAA9;&#xD45C;: Duchenne &#xADFC; &#xC704;&#xCD95; &#xC99D; (DMD)&#xC740; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xACB0; &#xC11D; &#xB610;&#xB294; &#xAC70;&#xC758; dystrophin &#xC2DD; sarcolemmal &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC5D0; &#xACB0; &#xC11D;. &#xADFC;&#xC721; &#xC0DD; &#xAC80; &#xC139;&#xC158;&#xC758; immunofluorescent &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; dystrophin &#xC2E0;&#xD638;&#xB294; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB0AE;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC815;&#xB7C9;&#xD654; &#xAE30;&#xC220; &#xB3C4;&#xC804;&#xC744; &#xC120;&#xBB3C; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD2B9;&#xD788; &#xC6D0;&#xB9AC; &#xC99D;&#xBA85; &#xC57D;&#xBB3C; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC124;&#xC815;&#xC5D0;&#xB294; &#xD0D0;&#xC9C0; &#xBC0F; &#xC815;&#xB7C9;&#xD654; &#xBB34;&#xC2A8; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC2DD;&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xBCC0;&#xD654;&#xAC00; &#xC911;&#xC694;, &#xC808;&#xB300; dystrophin &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xB0AE;&#xAC8C; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0;. &#xBC29;&#xBC95;: spectrin&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; co-stained &#xC139;&#xC158;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB0AE;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; dystrophin &#xC2DD;&#xC758; &#xBBFF;&#xC744; &#xD558; &#xACE0; &#xBC18;&#xC790;&#xB3D9; immunofluorescent &#xBD80; &#xB7C9; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; sarcolemmal &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC744; &#xC544;&#xB9C8;&#xB3C4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; spectrin &#xB9C8;&#xC2A4;&#xD06C; &#xB0B4;&#xC758; &#xD53D;&#xC140;&#xC5D0;&#xB9CC; dystrophin &#xC2E0;&#xD638; &#xAC15;&#xB3C4; &#xACC4;&#xB7C9; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC790; &#xC9C0;&#xC815; Metamorph &#xC2A4;&#xD06C;&#xB9BD;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC5F0;&#xC18D; &#xC601;&#xC5ED; spectrin &#xB9C8;&#xC2A4;&#xD06C;&#xB97C; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xC218;. &#xC774; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC; DMD, &#xBCA0; &#xCEE4; &#xADFC; &#xC704;&#xCD95; &#xC99D; (BMD), &#xC911;&#xAC04; &#xADFC; &#xC704;&#xCD95; &#xC99D; (IMD)&#xACFC; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC870;&#xC9C1; &#xD658;&#xC790; &#xC2DC;&#xB9AC;&#xC988;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADFC;&#xC721; &#xC0DD; &#xAC80; &#xC870;&#xC9C1;&#xC744; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC;: &#xBD84;&#xC11D; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB0A0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC9C1;&#xB82C; &#xC139;&#xC158;&#xC758; &#xC7AC;&#xD604;&#xC131;, &#xBC0F; &#xC815;&#xADDC;&#xD654; &#xB41C; dystrophin:spectrin &#xAC15;&#xB3C4; &#xBE44;&#xC728; (&#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xBC31;&#xBD84;&#xC728;&#xB85C; &#xD45C;&#xC2DC;) &#xC11C;&#xCABD; &#xC624; &#xC810; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815; &#xB41C; &#xB300;&#xB85C; dystrophin &#xC2DD; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xC798; &#xC5F0;&#xAD00; &#xD655;&#xC778; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xB860;:&#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; DMD &#xC694;&#xBC95;&#xC758; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; biomarker &#xD0D0;&#xC9C0;&#xC758; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xACE0; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &copy; 2012 &#xC800;&#xC790;. Neuropathology &#xBC0F; &#xC751;&#xC6A9;&#xB41C; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; &copy; 2012 &#xC601;&#xAD6D; Neuropathological &#xC0AC;&#xD68C;.

Dystrophinopathy &#xADFC;&#xC721; &#xD45C;&#xBCF8;&#xC5D0;&#xC11C; Dystrophin &#xBA74;&#xC5ED; &#xD615;&#xAD11; &#xAC80;&#xC0AC;&#xC758; &#xC815;&#xB7C9;&#xD654;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Objetivos: La distrofia muscular de Duchenne (DMD) se asocia generalmente con la expresi&#xF3;n de distrofina ausente o ausentes casi en la membrana del sarcolema. La cuantificaci&#xF3;n de los niveles muy bajos de la se&#xF1;al de la distrofina en los estudios de inmunofluorescencia de secciones musculares biopsia representa un reto t&#xE9;cnico. Esto es particularmente cierto en el contexto de los ensayos de medicamentos de prueba de principio, en los que la detecci&#xF3;n y cuantificaci&#xF3;n de lo que puede haber cambios significativos en los niveles de expresi&#xF3;n es importante, incluso si los niveles absolutos siguen siendo bajos de distrofina. Material y m&#xE9;todos: Hemos desarrollado un m&#xE9;todo de an&#xE1;lisis de im&#xE1;genes que permite la cuantificaci&#xF3;n de inmunofluorescencia fiable y semi-automatizado de la expresi&#xF3;n de distrofina de bajo nivel en las secciones co-te&#xF1;idos de espectrina. Utilizando un script Metamorph para crear una m&#xE1;scara espectrina regi&#xF3;n contigua, se cuantifica la intensidad de la se&#xF1;al de la distrofina s&#xF3;lo en p&#xED;xeles dentro de la m&#xE1;scara de espectrina que presumiblemente representan a la membrana del sarcolema. Usando este m&#xE9;todo, se analizaron tejido muscular biopsia de una serie de pacientes con DMD, la distrofia muscular de Becker (DMB), la distrofia muscular, intermedia (IMD), y el tejido normal de control. Resultados: El an&#xE1;lisis de secciones seriadas en varios d&#xED;as confirma la reproducibilidad y la distrofina normalizado: proporciones spectrin intensidad (expresada como un porcentaje de tejido normal de control) se correlacionan bien con los niveles de expresi&#xF3;n de distrofina como se determina por an&#xE1;lisis de Western blot. Conclusiones: Este m&#xE9;todo ofrece un m&#xE9;todo robusto y fiable de detecci&#xF3;n de biomarcadores para los ensayos de terapias con DMD. &#xA9; 2012 Los Autores. Neuropatolog&#xED;a y Neurobiolog&#xED;a Aplicada &#xA9; 2012 Sociedad Brit&#xE1;nica neuropatol&#xF3;gico.

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Christopher K. Rodesch

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