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Growth-based Determination and Biochemical Confirmation of Genetic Requirements for Protein Degradation in <em>Saccharomyces cerevisiae</em>

Regulated protein degradation is crucial for virtually every cellular function. Much of what is known about the molecular mechanisms and genetic ...

cycloheximide-chase-analysis-protein-degradation-saccharomyces

Cycloheximide Chase Analysis of Protein Degradation in <em>Saccharomyces cerevisiae</em>

Regulation of protein abundance is crucial to virtually every cellular process. Protein abundance reflects the integration of the rates of protein ...

Ball State University

&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E0A;&#x6E38;&#x6FC0;&#x9176;&#x3001; Pak1&#x3001; Tos3 &#x548C; Elm1&#xFF0C;&#x5C31;&#x80FD;&#x591F;&#x6FC0;&#x6D3B; Snf1 &#x6FC0;&#x9176;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A; Snf1 &#x6FC0;&#x9176;&#x672C;&#x8EAB;&#x7EC4;&#x88C5;&#x6210;&#x5728;&#x5176; &beta; &#x4E9A;&#x57FA;&#x8EAB;&#x4EFD;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x5EFA;&#x7B51;&#x7FA4;&#xFF0C;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x4E0A;&#x6E38;&#x6FC0;&#x9176;&#x53EF;&#x80FD;&#x732E;&#x7ED9; Snf1 &#x6FC0;&#x9176;&#x5355;&#x4E00;&#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x5B58;&#x5728;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x6B64;&#x4E13;&#x7528;&#x6D3B;&#x5316;&#x5242;&#x5047;&#x8BF4;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x751F;&#x6210;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x4E0A;&#x6E38;&#x6FC0;&#x9176;&#x548C; &beta; &#x4E9A;&#x57FA;&#x7EC4;&#x5408;&#x7684;&#x9175;&#x6BCD;&#x83CC;&#x682A;&#x3002;&#x8868;&#x793A;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E0A;&#x6E38;&#x6FC0;&#x9176;&#x4E4B;&#x4E00;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x6FC0;&#x6D3B; Snf1&#xFF0C;&#x6839;&#x636E;&#x76EE;&#x524D;&#x590D;&#x6742;&#x7684; Snf1 &#x6FC0;&#x9176; &beta; &#x4E9A;&#x57FA;&#x548C;&#x5728;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E0A;&#x65BD;&#x52A0;&#x7684;&#x538B;&#x529B;&#x3002;&#x6700;&#x6DF7;&#x6742; Pak1 &#x548C; Gal83&#x3002;Pak1 &#x5F97;&#x4EE5;&#x6FC0;&#x6D3B; Snf1 &#x6FC0;&#x9176;&#x5728;&#x6240;&#x6709;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x7684;&#x5E94;&#x529B;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E9A;&#x578B;&#x3002;Snf1 Gal83 &#x9F3B;&#x606F;&#x8089;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7531;&#x4EFB;&#x4F55;&#x6709;&#x6C27;&#x589E;&#x957F;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E0A;&#x6E38;&#x6FC0;&#x9176;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4F46; Pak1 &#x503E;&#x5411;&#x4E8E;&#x5728;&#x68C9;&#x7C7D;&#x4E0A;&#x7684;&#x6210;&#x957F;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x4E09;&#x4E2A; Snf1 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x6FC0;&#x9176;&#x5E76;&#x4E0D;&#x4E13;&#x7528;&#x4E8E;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684; Snf1 &#x6FC0;&#x9176;&#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;Snf1 &#x6FC0;&#x9176;&#x4E0D;&#x540C;&#x4E9A;&#x578B;&#x663E;&#x793A; Pak1&#x3001; Tos3 &#x548C; Elm1 &#x6FC0;&#x9176;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x5E94;&#x529B;&#x7684;&#x9996;&#x9009;&#x9879;&#x3002;

&#x4E0D;&#x540C; &beta; &#x4E9A;&#x57FA; Snf1 &#x6FC0;&#x9176;&#x914D;&#x5408;&#x663E;&#x793A;&#x4E09;&#x4E2A; Snf1 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x6FC0;&#x9176;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x5E94;&#x529B;&#x7684;&#x9996;&#x9009;&#x9879;&#x3002;

Three upstream kinases, Pak1, Tos3 and Elm1, are able to activate the Snf1 kinase. Since the Snf1 kinase itself assembles into three complexes that differ in their beta subunit identity, the possibility exists that each upstream kinase might be dedicated to a single isoform of the Snf1 kinase. To test this dedicated activator hypothesis, we generated a series of yeast strains that lacked different combinations of upstream kinases and beta subunits. Cells expressing only one of the three upstream kinases exhibited distinct abilities to activate Snf1, depending on the beta subunit present in the Snf1 kinase complex and the stress imposed on the cells. Pak1 and Gal83 were the most promiscuous. Pak1 was able to activate all three isoforms of the Snf1 kinase under all stress conditions tested. The Gal83 isoform of Snf1 was able to be activated by any of the three upstream kinases under aerobic growth conditions but showed a preference for Pak1 during growth on raffinose. Our results indicate that the three Snf1-activating kinases are not dedicated to specific isoforms of the Snf1 kinase. Instead, the different isoforms of the Snf1 kinase display stress-dependent preferences for the Pak1, Tos3 and Elm1 kinases.

Snf1 kinase complexes with different beta subunits display stress-dependent preferences for the three Snf1-activating kinases.

Trois kinases en amont, Pak1, Tos3 et Elm1, sont capables d&#39;activer la kinase Snf1. &Eacute;tant donn&eacute; que la kinase Snf1 s&#39;assemble dans trois complexes qui diff&egrave;rent dans leur identit&eacute; de sous-unit&eacute; b&ecirc;ta, il est possible que chaque kinase en amont pourrait &ecirc;tre d&eacute;di&eacute; &agrave; une seule isoforme de la kinase Snf1. Pour tester cette hypoth&egrave;se activateur d&eacute;di&eacute;, nous avons g&eacute;n&eacute;r&eacute; une s&eacute;rie de souches de levures qui ne disposaient pas de diff&eacute;rentes combinaisons d&#39;amont kinases et sous-unit&eacute;s b&ecirc;ta. Cellules exprimant seulement un des trois en amont kinases pr&eacute;sentaient des capacit&eacute;s distinctes pour activer Snf1, selon la sous-unit&eacute; b&ecirc;ta pr&eacute;sente dans la complexe de kinase Snf1 et le stress impos&eacute; sur les cellules. Pak1 et Gal83 ont &eacute;t&eacute; les plus ubiquistes. Pak1 a &eacute;t&eacute; en mesure d&#39;activer tous les trois isoformes de la kinase Snf1 dans toutes les conditions de stress test&eacute;. L&#39;isoforme Gal83 de Snf1 a pu &ecirc;tre activ&eacute; par l&#39;un des trois kinases en amont dans des conditions de croissance a&eacute;robie, mais montre une pr&eacute;f&eacute;rence pour la Pak1 durant la croissance le raffinose. Nos r&eacute;sultats indiquent que les trois kinases Snf1 activation ne sont pas d&eacute;di&eacute;s aux isoformes sp&eacute;cifique de la kinase Snf1. Au lieu de cela, les isoformes de la kinase Snf1 affichent contrainte d&eacute;pendante des pr&eacute;f&eacute;rences pour les kinases Pak1, Tos3 et Elm1.

Snf1 complexes de kinase avec les sous-unit&eacute;s b&ecirc;ta diff&eacute;rents affichent contrainte d&eacute;pendante des pr&eacute;f&eacute;rences pour les trois kinases activation Snf1.

SNF1 Kinase-Komplexe mit unterschiedlichen beta-Untereinheiten zeigen Stress-abh&#xE4;ngige Pr&#xE4;ferenzen f&#xFC;r die drei SNF1-aktivierende Kinasen.

Tre chinasi a monte, Pak1, Tos3 ed Elm1, sono in grado di attivare la chinasi Snf1. Poich&eacute; la chinasi Snf1 si assembla in tre complessi che differiscono nella loro identit&agrave; di subunit&agrave; beta, esiste la possibilit&agrave; che ogni chinasi a Monte potrebbe essere dedicata a una singola isoforma della chinasi Snf1 di. Per verificare questa ipotesi attivatore dedicato, abbiamo generato una serie di ceppi di lievito che mancava di diverse combinazioni di chinasi a monte e subunit&agrave; beta. Le cellule che esprimono solo uno la chinasi a Monte tre esposte abilit&agrave; distinte per attivare Snf1, a seconda della subunit&agrave; beta presente nella chinasi Snf1 complessa e lo stress imposto sulle cellule. Pak1 e Gal83 erano i pi&ugrave; promiscui. Pak1 era in grado di attivare tutte le tre isoforme della chinasi Snf1 in tutte le condizioni di stress provato. L&#39;isoforma Gal83 della Snf1 &egrave; stato in grado di essere attivato da tutti i tre chinasi a monte in condizioni aerobiche crescita ma hanno mostrato una preferenza per Pak1 durante la crescita il raffinosio. I nostri risultati indicano che i tre chinasi Snf1-attivazione non sono dedicate a specifiche isoforme della chinasi Snf1 di. Invece, le diverse isoforme della chinasi Snf1 di visualizzare le preferenze di stress-dipendenti per la chinasi Pak1, Tos3 ed Elm1.

Complessi chinasi Snf1 con subunit&agrave; beta diversi display stress-dipendenti preferenze per i tre chinasi Snf1-attivazione.

Pak1&#x3001;Tos3&#x3001;Elm1&#x3001;3 &#x3064;&#x306E;&#x4E0A;&#x6D41;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; Snf1 &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Snf1 &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x81EA;&#x4F53;&#x3067;&#x81EA;&#x5206;&#x306E; &beta; &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308B; 3 &#x3064;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306B;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x307E;&#x3059;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x5404;&#x4E0A;&#x6D41;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; Snf1 &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E; 1 &#x3064;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x5C02;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5C02;&#x7528;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x4E0A;&#x6D41;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068; &beta; &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306B;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x306E;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x83CC;&#x682A;&#x306E;&#x30B7;&#x30EA;&#x30FC;&#x30BA;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;1 &#x3064;&#x3060;&#x3051; 3 &#x3064;&#x306E;&#x4E0A;&#x6D41;&#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x7D30;&#x80DE; Snf1&#x3001;&#x8907;&#x96D1;&#x306E; Snf1 &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306E; &beta; &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x8AB2;&#x305B;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x5C55;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Pak1 &#x3068; Gal83 &#x306F;&#x6700;&#x3082;&#x7121;&#x4F5C;&#x70BA;&#x691C;&#x51FA;.Pak1 &#x306F;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E; 3 &#x3064;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0; Snf1 &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x5316;&#x3067;&#x304D;&#x305F;&#x3002;Gal83 &#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0; Snf1 &#x306E;&#x597D;&#x6C17;&#x6027;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067; 3 &#x3064;&#x306E;&#x4E0A;&#x6D41;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x6210;&#x9577;&#x4E2D;&#x306E; Pak1 &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x597D;&#x307F;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;3 &#x3064;&#x306E; Snf1 &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; Snf1 &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x5C02;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x3001;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0; Snf1 &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x5FDC;&#x529B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x8A2D;&#x5B9A; Pak1&#x3001;Tos3&#x3001;Elm1 &#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Snf1 &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x932F;&#x4F53;&#x7570;&#x306A;&#x308B; &beta; &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x5FDC;&#x529B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x8A2D;&#x5B9A; 3 &#x3064; Snf1 &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

3 &#xC0C1;&#xB958; kinases, Pak1, Tos3, Elm1, Snf1 kinase &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Snf1 kinase &#xC790;&#xCCB4; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; id&#xC5D0; &#xB2E4;&#xB978; 3 &#xAC1C; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xC870;&#xB9BD;, &#xC774;&#xD6C4; &#xAC01; &#xC5C5;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xB2C8; Snf1 &#xD0A4;&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; isoform &#xC804;&#xC6A9; &#xC218;&#xB3C4; &#xC788;&#xB2E4;&#xB294; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xC874;&#xC7AC;. &#xC774; &#xC804;&#xC6A9;&#xB41C; &#xD65C;&#xC131; &#xC81C; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC870;&#xD569;&#xC744; &#xC5C5;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; kinases&#xC640; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704; &#xBD80;&#xC871; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC885;&#xC790;&#xC758; &#xC2DC;&#xB9AC;&#xC988;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC140; &#xC138; &#xC5C5;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; kinases &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xB9CC; &#xD45C;&#xD604; &#xC804;&#xC2DC; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; Snf1 &#xD0A4;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC140;&#xC5D0; &#xBD80;&#xACFC; &#xB418;&#xB294; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; Snf1, &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xB2A5;&#xB825;. Pak1 &#xBC0F; Gal83 &#xAC00;&#xC7A5; &#xBB34;&#xCC28;&#xBCC4; &#xD588;&#xB2E4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Pak1 &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; Snf1 &#xD0A4;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; 3 &#xAC1C;&#xC758; isoforms&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Snf1&#xC758; Gal83 isoform &#xC5D0;&#xC5B4;&#xB85C;&#xBE45; &#xC131;&#xC7A5; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xC5C5;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; kinases&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xC9C0;&#xB9CC; raffinose&#xC5D0; &#xC131;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; pak1&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC120;&#xD638;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC138; Snf1 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; kinases Snf1 &#xD0A4;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; isoforms&#xC5D0; &#xC804;&#xB150; &#xD558;&#xC9C0;&#xB294; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC2E0;, Snf1 &#xD0A4;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; isoforms Pak1, Tos3 &#xBC0F; Elm1 kinases &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC885;&#xC18D; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC124;&#xC815;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB2E4;&#xB978; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704;&#xC640; Snf1 kinase &#xB2E8;&#xC9C0; 3 Snf1 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; kinases &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC885;&#xC18D; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC124;&#xC815;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Tres aguas arriba quinasas, Pak1, Tos3 y Elm1, son capaces de activar la quinasa Snf1. Puesto que la quinasa Snf1 se monta en tres complejos que difieren en su identidad de subunidad beta, existe la posibilidad de que cada upstream quinasa podr&iacute;a ser dedicado a una sola isoforma de la quinasa Snf1. Para probar esta hip&oacute;tesis activador dedicado, generamos una serie de cepas de levadura que carec&iacute;a de diferentes combinaciones de quinasas aguas arriba y subunidades beta. Las c&eacute;lulas que expresan s&oacute;lo una de las tres aguas arriba quinasas exhiben distintas habilidades para activar Snf1, dependiendo de la subunidad beta presente en el compleja de quinasa Snf1 y la tensi&oacute;n impuesta a las c&eacute;lulas. Pak1 y Gal83 eran las m&aacute;s promiscuas. Pak1 fue capaz de activar todos tres isoformas de la quinasa Snf1 bajo todas las condiciones de estr&eacute;s probado. La isoforma Gal83 de Snf1 pudo activarse por cualquiera de las tres aguas arriba quinasas bajo condiciones de crecimiento aer&oacute;bico pero mostr&oacute; una preferencia por Pak1 durante el crecimiento en rafinosa. Nuestros resultados indican que las tres Snf1-activar quinasas no se dedican a isoformas espec&iacute;ficas de la quinasa Snf1. En cambio, las diferentes isoformas de la quinasa Snf1 Mostrar Preferencias de estr&eacute;s dependen de las quinasas Pak1, Tos3 y Elm1.

Complejos de quinasa Snf1 con subunidades beta diferentes Mostrar Preferencias dependiente de estr&eacute;s para las tres Snf1-activar quinasas.

&#x5728;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7531;&#x4EFB;&#x4F55;&#x4E00;&#x79CD;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E0A;&#x6E38;&#x6FC0;&#x9176;&#x3001; Sak1&#x3001; Tos3 &#x6216; Elm1 &#x6FC0;&#x6D3B; Snf1 &#x6FC0;&#x9176;&#x3002;&#x6240;&#x6709;&#x4E09;&#x4E2A; Snf1 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x6FC0;&#x9176;&#x5305;&#x542B;&#x5176; N &#x603B;&#x7AD9;&#x9644;&#x8FD1;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;/&#x82CF;&#x6C28;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176;&#x57DF;&#x548C;&#x5927;&#x578B; C &#x672B;&#x7AEF;&#x57DF;&#x4E0E;&#x5C0F;&#x5E8F;&#x517B;&#x62A4;&#x548C;&#x4EE5;&#x524D;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x3002;&#x5220;&#x9664; Sak1 &#x548C; Tos3 &#x7684; C &#x672B;&#x7AEF;&#x57DF;&#x6781;&#x5927;&#x5730;&#x964D;&#x4F4E;&#x4E86;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x6FC0;&#x6D3B; Snf1 &#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;Elm1 C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x57DF;&#x5220;&#x9664;&#x5BF9; Snf1 &#x4FE1;&#x53F7;&#x6CA1;&#x6709;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5E9F;&#x9664; Elm1 &#x7684;&#x5F62;&#x6001;&#x53D1;&#x751F;&#x68C0;&#x67E5;&#x70B9;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x53C2;&#x4E0E;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;Sak1&#xFF0C;Tos3&#xFF0C;&#x548C; Elm1 C &#x672B;&#x7AEF;&#x57DF;&#x5E2E;&#x52A9;&#x786E;&#x5B9A;&#x901A;&#x8DEF;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x3002;&#x989D;&#x5916;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; Sak1 &#x6FC0;&#x9176;&#x63ED;&#x793A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684; N &#x603B;&#x7AD9; Snf1 &#x4FE1;&#x53F7;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;43 &#x4E2D;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x7684; Sak1 N &#x603B;&#x7AD9;&#x5185;&#x5220;&#x9664; &#xFF08;&#x6B8B;&#x7559; 87 &#x81F3; 129) &#x5757; Snf1 &#x4FE1;&#x53F7;&#x5E76;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5B8C;&#x5168;&#x5FAA;&#x73AF;&#x4F53;&#x5185;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;&#xFF08;&#x7F3A;&#x4E4F; N &#x672B;&#x7AEF;&#x548C; C &#x672B;&#x7AEF;&#x57DF;&#xFF09; &#x7684; Sak1 &#x6FC0;&#x9176;&#x57DF;&#x662F;&#x5177;&#x6709;&#x9AD8;&#x50AC;&#x5316;&#x6D3B;&#x6027;&#x548C;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E;&#x4F53;&#x5916;&#x4F46;&#x662F;&#x4E0D;&#x80FD;&#x4FC3;&#x8FDB; Snf1 &#x4FE1;&#x53F7;&#x4F53;&#x5185;&#x65F6;&#x8868;&#x793A;&#x5728;&#x6B63;&#x5E38;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E; Snf1 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x6FC0;&#x9176;&#x6FC0;&#x9176;&#x57DF;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x591F;&#x81EA;&#x5DF1;&#x4E3A;&#x5176;&#x9002;&#x5F53;&#x7684;&#x51FD;&#x6570; nonconserved N &#x672B;&#x7AEF;&#x548C; C &#x672B;&#x7AEF;&#x57DF;&#x662F;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;

Snf1 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x6FC0;&#x9176;&#x8C03;&#x8282;&#x7ED3;&#x6784;&#x57DF;&#x786E;&#x5B9A;&#x901A;&#x8DEF;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x3002;

In Saccharomyces cerevisiae, the Snf1 kinase can be activated by any one of three upstream kinases, Sak1, Tos3, or Elm1. All three Snf1-activating kinases contain serine/threonine kinase domains near their N termini and large C-terminal domains with little sequence conservation and previously unknown function. Deletion of the C-terminal domains of Sak1 and Tos3 greatly reduces their ability to activate the Snf1 pathway. In contrast, deletion of the Elm1 C-terminal domain has no effect on Snf1 signaling but abrogates the ability of Elm1 to participate in the morphogenetic-checkpoint signaling pathway. Thus, the C-terminal domains of Sak1, Tos3, and Elm1 help to determine pathway specificity. Additional deletion mutants of the Sak1 kinase revealed that the N terminus of the protein is essential for Snf1 signaling. The deletion of 43 amino acids from within the N terminus of Sak1 (residues 87 to 129) completely blocks Snf1 signaling and activation loop phosphorylation in vivo. The Sak1 kinase domain (lacking both N-terminal and C-terminal domains) is catalytically active and specific in vitro but is unable to promote Snf1 signaling in vivo when expressed at normal levels. Our studies indicate that the kinase domains of the Snf1-activating kinases are not sufficient by themselves for their proper function and that the nonconserved N-terminal and C-terminal domains are critical for the biological activities of these kinases.

Regulatory domains of Snf1-activating kinases determine pathway specificity.

Chez Saccharomyces cerevisiae, la kinase Snf1 peut &ecirc;tre activ&eacute;e par l&#39;un des trois kinases en amont, Sak1, Tos3 ou Elm1. Tous les trois activation Snf1 kinases contiennent des s&eacute;rine/thr&eacute;onine kinase domaines pr&egrave;s de leurs extr&eacute;mit&eacute;s N et grands domaines de C-terminal avec peu de fonction jusque-l&agrave; inconnue et de conservation de s&eacute;quence. Suppression des domaines C-terminal de Sak1 et de Tos3 r&eacute;duit consid&eacute;rablement leur capacit&eacute; &agrave; activer la voie Snf1. En revanche, la suppression du domaine C-terminal de Elm1 n&#39;a aucun effet sur la signalisation Snf1 mais abroge la capacit&eacute; de Elm1 de participer dans la voie de signalisation de point de contr&ocirc;le de morphog&eacute;n&eacute;tique. Ainsi, les domaines C-terminal de Sak1, Tos3 et Elm1 aident &agrave; d&eacute;terminer la sp&eacute;cificit&eacute; de la voie. Des mutants de d&eacute;l&eacute;tion suppl&eacute;mentaire de la kinase de Sak1 a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que l&#39;extr&eacute;mit&eacute; N terminale de la prot&eacute;ine est essentielle pour la signalisation Snf1. La suppression de 43 acides amin&eacute;s &agrave; partir au sein de l&#39;extr&eacute;mit&eacute; N terminale de Sak1 (r&eacute;sidus 87 &agrave; 129) compl&egrave;tement les blocs Snf1 signalisation et activation bouclent phosphorylation in vivo. Le domaine kinase de Sak1 (manque de domaines aussi bien N-terminal et C-terminale) est catalytiquement actif et sp&eacute;cifique in vitro, mais ne parvient pas &agrave; promouvoir Snf1 signaling in vivo lorsqu&#39;elle est exprim&eacute;e &agrave; des niveaux normaux. Nos &eacute;tudes indiquent que les domaines de la kinase des kinases activation Snf1 ne suffisent pas par elles-m&ecirc;mes leur bon fonctionnement et que les domaines nonconserved de N-terminal et C-terminaux sont critiques pour l&#39;activit&eacute; biologique de ces kinases.

Domaines r&eacute;glementaires des kinases Snf1 activation d&eacute;terminent la sp&eacute;cificit&eacute; de la voie.

In Saccharomyces Cerevisiae kann das Snf1-Kinase durch eine der drei vorgelagerten Kinasen, Sak1, Tos3 oder Elm1 aktiviert werden. Alle drei Snf1-Aktivierung-Kinasen enthalten Serin/Threonin-Kinase nahe ihrer N-Termini und gro&szlig;e C-terminalen Dom&auml;nen mit kleinen Sequenz Erhaltung und bisher unbekannte Funktion. L&ouml;schung der C-terminalen Dom&auml;nen von Sak1 und Tos3 reduziert ihre F&auml;higkeit, den Snf1 Weg zu aktivieren. Im Gegensatz dazu L&ouml;schung der Elm1 C-terminalen Dom&auml;ne hat keine Auswirkung auf die Signalisierung von Snf1 aber hebt die F&auml;higkeit der Elm1 zur Teilnahme an der morphogenetischen Pr&uuml;fpunkt-Signalweg. Daher helfen die C-terminalen Dom&auml;nen von Sak1, Tos3 und Elm1 Stoffwechselweg Spezifit&auml;t bestimmt. Zus&auml;tzliche L&ouml;schung Mutanten von Sak1-Kinase ergab, dass das N-Terminus des Proteins f&uuml;r die Signalisierung der Snf1 wichtig. Die Streichung von 43 Aminos&auml;uren aus innerhalb der N-Terminus von Sak1 (R&uuml;ckst&auml;nde 87 bis 129) vollst&auml;ndig Bl&ouml;cke Snf1 Signalisierung und Aktivierung loop in-vivo Phosphorylierung. Die Sak1-Kinase-Dom&auml;ne (fehlt N-terminalen und der C-terminalen Dom&auml;nen) katalytisch aktiven und spezifische in-vitro-aber kann nicht zur F&ouml;rderung Snf1 Signalisierung in-vivo ausgedr&uuml;ckt auf normalem Niveau. Unsere Untersuchungen zeigen, dass die Kinase-Dom&auml;nen von der Snf1-Aktivierung-Kinasen nicht ausreichend f&uuml;r ihre ordnungsgem&auml;&szlig;e Funktion sind f&uuml;r sich genommen und die nonconserved N-terminalen und der C-terminalen Dom&auml;nen kritisch f&uuml;r die biologische T&auml;tigkeit von dieser Kinasen sind.

Regulatorische Bereiche der Aktivierung von Snf1 Kinasen bestimmen Stoffwechselweg Spezifit&auml;t.

In Saccharomyces cerevisiae, la chinasi Snf1 pu&ograve; essere attivata da uno qualsiasi dei tre chinasi a monte, Sak1, Tos3 o Elm1. Tutti i tre chinasi Snf1-attivazione contengono domini di serina/treonina chinasi vicino loro termini N e grandi C-terminale con poca conservazione di sequenza e funzione precedentemente sconosciuta. Eliminazione dei domini di Sak1 e Tos3 C-terminale riduce notevolmente la loro capacit&agrave; di attivare il pathway Snf1. Al contrario, eliminazione del dominio C-terminale di Elm1 non ha alcun effetto su segnalazione Snf1 ma abroga la possibilit&agrave; di Elm1 a partecipare alla via di segnalazione morfogenetica del checkpoint. Cos&igrave;, i domini C-terminale di Sak1, Tos3 ed Elm1 aiutano a determinare la specificit&agrave; del percorso. Mutanti di delezione supplementari della chinasi Sak1 di ha rivelato che il N-terminale della proteina &egrave; essenziale per Snf1 segnalazione. L&#39;eliminazione di 43 aminoacidi da entro il capolinea N di Sak1 (residui 87-129) completamente isolati Snf1 di segnalazione e attivazione ciclo fosforilazione in vivo. Il dominio della chinasi Sak1 (privo di domini sia N-terminale e C-terminale) &egrave; cataliticamente attivo e specifici in vitro, ma sono incapaci di promuovere Snf1 segnalazione in vivo quando espressa a livelli normali. I nostri studi indicano che i domini della chinasi della chinasi Snf1-attivazione non sono sufficienti da soli per il loro corretto funzionamento e che i nonconserved domini N-terminale e C-terminale sono critici per l&#39;attivit&agrave; biologica di queste chinasi.

Regolamentazione domini chinasi Snf1-attivazione determinano specificit&agrave; pathway.

&#x51FA;&#x82BD;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E; Snf1 &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; 3 &#x4E0A;&#x6D41;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3001;Sak1&#x3001;Tos3&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F; Elm1 &#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E; 3 &#x3064;&#x306E; Snf1 &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x5F7C;&#x3089; N &#x30C6;&#x30EB;&#x30DF;&#x30CB;&#x99C5;&#x8FD1;&#x304F;&#x306E;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;/&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3; &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x4FDD;&#x5168;&#x3068;&#x672A;&#x77E5;&#x95A2;&#x6570;&#x306E;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A; C &#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3081;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Sak1 &#x3068; Tos3 &#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x524A;&#x9664; Snf1 &#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;Elm1 &#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x524A;&#x9664; Snf1 &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C;&#x3001;&#x5F62;&#x614B;&#x5F62;&#x6210;&#x30C1;&#x30A7;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x53C2;&#x52A0;&#x3059;&#x308B; Elm1 &#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x8B70;&#x6C7A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;Sak1&#x3001;Tos3&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; Elm1 &#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x306E;&#x5224;&#x5B9A;&#x306B;&#x5F79;&#x7ACB;&#x3061;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x6B20;&#x5931;&#x5909;&#x7570; Sak1 &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x304C; Snf1 &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Sak1 &#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x5185; 43 &#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x524A;&#x9664; (&#x6B8B;&#x7559; 87 &#x306B; 129) &#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF; Snf1 &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x6D3B;&#x767A;&#x5316;&#x306E;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3002;&#xFF08;N &#x672B;&#x7AEF;&#x3068; C &#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x6B20;&#x304F;&#xFF09; Sak1 &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304C;&#x89E6;&#x5A92;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E; in vitro &#x306F;&#x3057;&#x304B;&#x3057; Snf1 &#x304C;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;Snf1 &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F7C;&#x3089;&#x81EA;&#x8EAB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x95A2;&#x6570;&#x304C;&#x4E0D;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x3001;nonconserved &#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x3068; C &#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304C;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E; Snf1 &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Saccharomyces cerevisiae&#xC5D0; &#xC138; &#xC5C5;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; kinases, Sak1, Tos3, &#xB610;&#xB294; Elm1 &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Snf1 kinase &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB4E0; 3 &#xAC1C;&#xC758; snf1&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; kinases &#xC790;&#xC2E0;&#xC758; N &#xD14C;&#xB974;&#xBBF8;&#xB2C8; &#xADFC;&#xCC98; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0;/&#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC; &#xB2C8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBC0F; &#xC791;&#xC740; &#xC21C;&#xC11C; &#xBCF4;&#xC874; &#xBC0F; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C0;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xD070; C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xD3EC;&#xD568;. Sak1 &#xBC0F; tos3&#xC758; C-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC0AD;&#xC81C;&#xB294; &#xB9E4;&#xC6B0; Snf1 &#xD1B5;&#xB85C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C; &#xC2DC;&#xD0A8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, Elm1 C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC0AD;&#xC81C; Snf1 &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB418;&#xC5B4;&#xC788;&#xB294; &#xC804;&#xCCB4;&#xC801; &#xAC80;&#xC0AC;&#xC810; &#xC2E0;&#xD638; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; elm1&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, Sak1, Tos3, &#xBC0F; elm1&#xC758; C-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xD1B5;&#xB85C; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774;. Sak1 &#xD0A4;&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xC0AD;&#xC81C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; N &#xB9D0;&#xB2E8; Snf1 &#xC2DC;&#xADF8;&#xB110;&#xB9C1;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xB77C;&#xACE0; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. Sak1&#xC758; N &#xB9D0;&#xB2E8; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; 43 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;&#xC758; &#xC0AD;&#xC81C; (&#xC794;&#xB958;&#xBB3C; 87 129) &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xBE14;&#xB85D; Snf1 &#xC2E0;&#xD638; &#xBC0F; &#xC815;&#xD488; &#xC778;&#xC99D; &#xB8E8;&#xD504; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;. (&#xBD80;&#xC871; &#xD55C; N &#xB2E8;&#xC790;&#xC640; C &#xB2E8;&#xC790; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;) Sak1 &#xD0A4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; catalytically &#xD65C;&#xC131; &#xC774;&#xBA70; &#xD2B9;&#xC815; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; Snf1 &#xC2E0;&#xD638; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xBA74; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xD64D;&#xBCF4;&#xD560; &#xC218; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; Snf1 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; kinases &#xB2C8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC2A4;&#xC2A4;&#xB85C; &#xC758;&#xD574; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACE0; nonconserved N &#xB2E8;&#xC790;&#xC640; C &#xB2E8;&#xC790; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC774; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; kinases&#xC758; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Snf1 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; kinases &#xADDC;&#xC81C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xD1B5;&#xB85C; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xACB0;&#xC815;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

En Saccharomyces cerevisiae, la quinasa Snf1 puede activarse por cualquiera de las tres aguas arriba quinasas, Sak1, Tos3 o Elm1. Todos tres Snf1-activar quinasas contienen dominios de cinasa de serina/treonina su Termini N y grandes dominios c-terminal con poca conservaci&oacute;n de secuencia y funci&oacute;n previamente desconocida. Eliminaci&oacute;n de los dominios c-terminal de Sak1 y Tos3 reduce en gran medida su capacidad para activar la v&iacute;a Snf1. En contraste, la eliminaci&oacute;n del dominio c-terminal Elm1 no tiene ning&uacute;n efecto sobre la se&ntilde;alizaci&oacute;n Snf1 pero anula la capacidad de Elm1 para participar en la v&iacute;a de se&ntilde;alizaci&oacute;n morfogen&eacute;ticas y puntos de comprobaci&oacute;n. As&iacute;, los dominios c-terminal de Sak1, Tos3 y Elm1 ayudan a determinar la especificidad de la v&iacute;a. Mutantes de deleci&oacute;n adicional de la quinasa Sak1 revelaron que el extremo N terminal de la prote&iacute;na es esencial para la se&ntilde;alizaci&oacute;n Snf1. La eliminaci&oacute;n de 43 amino&aacute;cidos dentro de la terminal N de Sak1 (residuos de 87 a 129) totalmente bloques Snf1 se&ntilde;alizaci&oacute;n y activaci&oacute;n del lazo fosforilaci&oacute;n in vivo. El dominio de la cinasa de Sak1 (falta de dominios tanto N-terminal y c-terminal) es catal&iacute;tico activo y espec&iacute;fico in vitro pero es incapaz de promover Snf1 se&ntilde;alizaci&oacute;n en vivo cuando se expresa en niveles normales. Nuestros estudios indican que los dominios de la quinasa de las quinasas Snf1-activaci&oacute;n no son suficientes por s&iacute; mismos para su correcto funcionamiento y que los dominios N-terminal y c-terminal nonconserved son esenciales para la actividad biol&oacute;gica de estas kinasas.

Dominios reguladores de Snf1-activar quinasas determinan la especificidad de la v&iacute;a.

Snf1 &#x6FC0;&#x9176;&#x548C;&#x5176;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7684; orthologue&#xFF0C;AMP &#x6D3B;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; (AMPK)&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A; heterotrimers &#x7684;&#x50AC;&#x5316; &alpha;-&#x4E9A;&#x57FA;&#x548C;&#x4E24;&#x4E2A;&#x975E;&#x50AC;&#x5316;&#x4E9A;&#x57FA;&#x3001; &beta; &#x548C; &gamma; &#x7EC4;&#x6210;&#x3002;&Beta;-&#x4E9A;&#x57FA;&#x662F;&#x60F3;&#x62B1;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x548C;&#x63A7;&#x5236;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B9A;&#x4F4D;&#xFF0C;&#x800C; &gamma;-&#x4E9A;&#x57FA;&#x7531;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x548C;&#x963B;&#x6B62;&#x81EA;&#x52A8;&#x6291;&#x5236;&#x57DF; &#xFF08;&#x63F4;&#x52A9;&#xFF09; &#x76EE;&#x524D;&#x5728; &alpha;-&#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x76D1;&#x7BA1;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x50AC;&#x5316;&#x6D3B;&#x6027;&#x9700;&#x8981;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x4E0A;&#x6E38;&#x6FC0;&#x9176;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;&#x5728;&#x9175;&#x6BCD;&#xFF0C;&#x4EFB;&#x4F55;&#x4E00;&#x79CD;&#x4E09; Snf1 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x6FC0;&#x9176;&#x3001; Sak1&#x3001; Tos3 &#x6216; Elm1&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5145;&#x5F53;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x89D2;&#x8272;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x6240;&#x793A; Sak1 &#x662F;&#x552F;&#x4E00;&#x5F62;&#x6210;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x4E0E; Snf1 &#x7684; Snf1 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x6FC0;&#x9176;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; Sak1.Snf1 &#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x9700;&#x8981;&#x4E9A; &beta;-&#x548C; &gamma;-&#x57FA;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x7684; Sak1.Snf1 &#x4E0D;&#x662F;&#x8C03;&#x8282;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; Snf1 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x5FAA;&#x73AF;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;Snf1 &#x6FC0;&#x9176;&#x51C0;&#x5316;&#x4ECE;&#x7F3A;&#x4E4F; &beta;-&#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E0D;&#x5305;&#x542B;&#x4EFB;&#x4F55; &gamma; &#x4E9A;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A; Snf1 &#x6FC0;&#x9176;&#x5E76;&#x4E0D;&#x6784;&#x6210;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684; alphagamma &#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x7EAF;&#x51C0;&#x7684;&#x5168;&#x957F;&#x548C;&#x622A;&#x65AD; Snf1 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6FC0;&#x9176;&#x4F53;&#x5916;&#x68C0;&#x6D4B;&#x8868;&#x660E;&#x6FC0;&#x9176;&#x7ED3;&#x6784;&#x57DF;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x7F3A;&#x5C11;&#x63F4;&#x52A9;&#xFF0C;&#x5927;&#x5927;&#x8D85;&#x8FC7;&#x5168;&#x957F; Snf1 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x66F4;&#x79EF;&#x6781;&#x3002;&#x52A0;&#x4E9A;&#x7684;&#x7EAF;&#x51C0; &beta;-&#x548C; &gamma;-&#x57FA;&#x53EF;&#x4EE5;&#x523A;&#x6FC0;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x5168;&#x957F; &alpha;-&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#xFF0C;&#x4F46;&#x53EA;&#x6709;&#x5F53;&#x6240;&#x6709;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E9A;&#x57FA;&#x4EBA;&#x5728;&#x573A;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x529F;&#x80FD;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F9D;&#x5B58;&#x5173;&#x7CFB;&#x3002;

&#x4E9A;&#x57FA; Snf1 &#x6FC0;&#x9176; heterotrimer &#x663E;&#x793A;&#x4E3A;&#x7ED3;&#x793E;&#x548C;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F9D;&#x5B58;&#x5173;&#x7CFB;&#x3002;

The Snf1 kinase and its mammalian orthologue, the AMP-activated protein kinase (AMPK), function as heterotrimers composed of a catalytic alpha-subunit and two non-catalytic subunits, beta and gamma. The beta-subunit is thought to hold the complex together and control subcellular localization whereas the gamma-subunit plays a regulatory role by binding to and blocking the function of an auto-inhibitory domain (AID) present in the alpha-subunit. In addition, catalytic activity requires phosphorylation by a distinct upstream kinase. In yeast, any one of three Snf1-activating kinases, Sak1, Tos3, or Elm1, can fulfill this role. We have previously shown that Sak1 is the only Snf1-activating kinase that forms a stable complex with Snf1. Here we show that the formation of the Sak1.Snf1 complex requires the beta- and gamma-subunits in vivo. However, formation of the Sak1.Snf1 complex is not necessary for glucose-regulated phosphorylation of the Snf1 activation loop. Snf1 kinase purified from cells lacking the beta-subunits do not contain any gamma-subunit, indicating that the Snf1 kinase does not form a stable alphagamma dimer in vivo. In vitro kinase assays using purified full-length and truncated Snf1 proteins demonstrate that the kinase domain, which lacks the AID, is significantly more active than the full-length Snf1 protein. Addition of purified beta- and gamma-subunits could stimulate the kinase activity of the full-length alpha-subunit but only when all three subunits were present, suggesting an interdependence of all three subunits for assembly of a functional complex.

Subunits of the Snf1 kinase heterotrimer show interdependence for association and activity.

La kinase Snf1 et ses mammif&egrave;res orthologue, l&#39;AMP-activated protein kinase (AMPK), servent de heterotrimers compos&eacute; d&#39;une sous-unit&eacute; alpha- et de deux sous-unit&eacute;s non catalytiques, b&ecirc;ta et gamma. On croit que la sous-unit&eacute; b&ecirc;ta joignent le complexe et contr&ocirc;ler la localisation sous-cellulaire tandis que la sous-unit&eacute; gamma joue un r&ocirc;le r&eacute;gulateur en liant &agrave; et bloquant la fonction d&#39;un domaine d&#39;auto-inhibiteur (aide) pr&eacute;sent dans la sous-unit&eacute; alpha. En outre, l&#39;activit&eacute; catalytique exige la phosphorylation par une kinase en amont distincte. Chez la levure, l&#39;un des trois kinases Snf1 activation, Sak1, Tos3 ou Elm1, peut s&#39;acquitter de ce r&ocirc;le. Nous avons d&eacute;j&agrave; montr&eacute; que Sak1 est le seul kinase activation Snf1 qui forme un complexe avec Snf1 stable. Ici, nous montrons que la formation du complexe Sak1.Snf1 exige la beta - et gamma-sous-unit&eacute;s in vivo. Cependant, formation de la Sak1.Snf1 complexe n&#39;est pas n&eacute;cessaire pour la phosphorylation de glucose r&eacute;gul&eacute;e de la boucle d&#39;activation Snf1. Snf1 kinase purifi&eacute;e &agrave; partir de cellules d&eacute;pourvues les sous-unit&eacute;s b&ecirc;ta ne contiennent pas toute sous-unit&eacute; gamma, indiquant que la kinase Snf1 ne forme pas un dim&egrave;re alphagamma stable in vivo. Essais de kinase in vitro en utilisant des prot&eacute;ines purifi&eacute;es de pleine longueur et tronqu&eacute;es Snf1 d&eacute;montrent que le domaine kinase, qui ne dispose pas de l&#39;aide, est beaucoup plus actif que la prot&eacute;ine pleine longueur de Snf1. Ajout de purifi&eacute;s beta - et gamma-sous-unit&eacute;s pourrait stimuler l&#39;activit&eacute; de la kinase de la sous-unit&eacute; alpha pleine longueur, mais seulement lorsque tous les trois sous-unit&eacute;s &eacute;taient pr&eacute;sentes, ce qui sugg&egrave;re une interd&eacute;pendance de tous les trois sous-unit&eacute;s pour l&#39;assemblage d&#39;un complexe fonctionnel.

Les sous-unit&eacute;s de la Snf1 kinase sous montrent interd&eacute;pendance pour l&#39;association et de l&#39;activit&eacute;.

Die Snf1-Kinase und seine S&auml;ugetier-Orthologue, die AMP-aktivierte Proteinkinase (AMPK), fungieren als Heterotrimers setzt sich aus einem katalytischen Alpha-Untereinheit und zwei nicht-katalytische Untereinheiten, Beta und Gamma. Die Beta-Untereinheit ist vermutlich den Komplex zusammenhalten und subzellulare Lokalisation zu steuern, w&auml;hrend die Gamma-Untereinheit eine regulatorische Rolle spielt durch Bindung an und blockieren die Funktion einer Auto-hemmenden Dom&auml;ne (AID) in der Alpha-Untereinheit vorhanden. Dar&uuml;ber hinaus erfordert die katalytische Aktivit&auml;t Phosphorylierung durch eine unterschiedliche upstream-Kinase. In der Hefe kann eine der drei Snf1-Aktivierung Kinasen, Sak1, Tos3 oder Elm1, diese Rolle erf&uuml;llen. Wir haben bereits gezeigt, dass Sak1 die einzige Snf1-Aktivierung-Kinase, die eine stabile Komplexe mit Snf1 bildet. Hier zeigen wir, dass die Bildung des Sak1.Snf1 Komplexes die Beta - und Gamma-Untereinheiten in-vivo erfordert. Allerdings ist die Bildung von der komplexen Sak1.Snf1 nicht notwendig f&uuml;r Glukose regulierte Phosphorylierung der Snf1 Aktivierung Schleife. Snf1 Kinase gereinigt aus Zellen fehlt die Beta-Untereinheiten enthalten keine Gamma-Untereinheit, darauf hinweist, dass das Snf1-Kinase keine stabile Alphagamma Dimer in-vivo bildet. In-vitro-Kinase-Assays, die mit gereinigtem in und abgeschnittene Snf1 Proteine zeigen, dass die Kinase-Dom&auml;ne, die die Hilfe fehlt, deutlich aktiver als die in Snf1-Protein. Zusatz von gereinigtem Beta und Gamma-Untereinheiten k&ouml;nnte beleben die Kinaseaktivit&auml;t in Alpha-Untereinheit, sondern nur dann, wenn alle drei Untereinheiten vorhanden, waren eine Interdependenz aller drei Untereinheiten f&uuml;r Montage von einem funktionalen Komplex vorgeschlagen.

Untereinheiten des die Snf1 Kinase Heterotrimer zeigen Interdependenz f&uuml;r Verb&auml;nde und Aktivit&auml;t.

La chinasi Snf1 e sua orthologue dei mammiferi, la chinasi di proteina attivata da AMP (AMPK), funzione come heterotrimers composto da una subunit&agrave; catalitica di alpha e due subunit&agrave; non catalitica, beta e gamma. La subunit&agrave; beta &egrave; pensata per tenere insieme il complesso e localizzazione subcellulare di controllo, mentre la subunit&agrave; gamma ricopre un ruolo normativo vincolante a e bloccando la funzione di un dominio di auto-inibitoria (aiuto) presente nella subunit&agrave; alfa. Inoltre, attivit&agrave; catalitica richiede la fosforilazione di una chinasi distinta a monte. In lievito, uno qualsiasi dei tre chinasi Snf1-attivazione, Sak1, Tos3 o Elm1, pu&ograve; adempiere questo ruolo. In precedenza abbiamo dimostrato che la Sak1 &egrave; l&#39;unica chinasi Snf1-attivazione che forma un complesso con Snf1 stabile. Qui vi mostriamo che la formazione del complesso Sak1.Snf1 richiede il beta - e gamma-subunit&agrave; in vivo. Tuttavia, non &egrave; necessario per la fosforilazione di glucosio regolata del ciclo di attivazione Snf1 formazione della Sak1.Snf1 complesso. Chinasi Snf1 purificata da cellule manca la subunit&agrave; beta non contengono alcun subunit&agrave; gamma, che indica che la chinasi Snf1 non forma un dimero alphagamma stabile in vivo. Saggi in vitro chinasi utilizzando proteine purificate full-length e troncate Snf1 dimostrano che il dominio della chinasi, che manca l&#39;aiuto, &egrave; significativamente pi&ugrave; attivo che la proteina Snf1 full-length. Aggiunta di purificato beta - e gamma-subunit&agrave; potrebbe stimolare l&#39;attivit&agrave; della chinasi della subunit&agrave; alfa full-length, ma solo quando tutte e tre le subunit&agrave; erano presenti, suggerendo un&#39;interdipendenza di tutti i tre subunit&agrave; per l&#39;assemblaggio di un complesso funzionale.

Subunit&agrave; della heterotrimer chinasi Snf1 Visualizza interdipendenza per associazione e attivit&agrave;.

Snf1 &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x9593;&#x76F4;&#x7CFB;&#x3001;AMP &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; (AMPK) &#x89E6;&#x5A92;&#x306E; &alpha; &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068; 2 &#x3064;&#x306E;&#x975E;&#x89E6;&#x5A92;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3001;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x3001;&#x30AC;&#x30F3;&#x30DE;&#x306E;&#x4F5C;&#x66F2;&#x306E; heterotrimers &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&Beta; &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x4FDD;&#x6301;&#x3057;&#x3001;&gamma; &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3078;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3068;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x81EA;&#x52D5;&#x6291;&#x5236;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; (AID) &alpha; &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5C40;&#x5728;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x89E6;&#x5A92;&#x6D3B;&#x6027;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x500B;&#x5225;&#x306E;&#x4E0A;&#x6D41;&#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B; 3 &#x3064;&#x306E; Snf1 &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3001;Sak1&#x3001;Tos3&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F; Elm1&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x4EE5;&#x524D; Sak1 &#x304C;&#x552F;&#x4E00;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F; Snf1 &#x3068;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0; Snf1 &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306E; Sak1.Snf1 &#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30AC;&#x30F3;&#x30DE;-&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; in vivo &#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x8907;&#x96D1;&#x306A; Sak1.Snf1 &#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306F; Snf1 &#x6D3B;&#x767A;&#x5316;&#x306E;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x898F;&#x5236;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;Snf1 &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &beta; &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x304C;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x30BB;&#x30EB;&#x304B;&#x3089;&#x6D44;&#x5316;&#x4EFB;&#x610F; Snf1 &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x304C; in vivo &#x3067;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F; alphagamma &#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059; &gamma; &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x542B;&#x3093;&#x3067;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;&#x3068;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x305F; Snf1 &#x306E;&#x6D44;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F; in vitro &#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x8A66;&#x91D1;&#x306F;&#x3001;&#x63F4;&#x52A9;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304C;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9; Snf1 &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3088;&#x308A;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x3082;&#x3063;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30AC;&#x30F3;&#x30DE;&#x306E;&#x7CBE;&#x88FD;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;&#x306E; &alpha; &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x304C;&#x306E;&#x307F;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E; 3 &#x3064;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E; 3 &#x3064;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F9D;&#x5B58;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x4F5C;&#x696D;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Snf1 &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; heterotrimer &#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F9D;&#x5B58;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306E;&#x5354;&#x4F1A;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Snf1 &#xD0A4;&#xC640; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; orthologue, AMP &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; (AMPK) heterotrimers &#xCD09;&#xB9E4; &#xC54C;&#xD30C; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC640; 2 &#xAC1C;&#xC758; &#xBE44; &#xCD09;&#xB9E4; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;, &#xBCA0;&#xD0C0;&#xC640; &#xAC10;&#xB9C8;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xB41C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xB3D9;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C;&#xC744; &#xD568;&#xAED8; &#xB204;&#xB978; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB85C; &#xAC10;&#xB9C8; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; &#xC54C;&#xD30C; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC5D0; &#xC790;&#xB3D9; &#xAE08;&#xC9C0; &#xB41C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (&#xC6D0;&#xC870;)&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558; &#xC5EC; &#xADDC;&#xC81C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; subcellular &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xB97C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0DD;&#xAC01; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xCD09;&#xB9E4; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBCC4;&#xAC1C; &#xC5C5;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xD544;&#xC694;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD6A8; &#xBAA8;, Sak1, Tos3, &#xB610;&#xB294; Elm1, 3 Snf1 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; kinases &#xC911; &#xC218;&#xC774; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xAE30;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; sak1&#xB294; &#xC720;&#xC77C;&#xD55C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; snf1&#xC640; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD615;&#xD0DC;&#xC758; Snf1 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD0A4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Sak1.Snf1 &#xBCF5;&#xD569;&#xCCB4;&#xC758; &#xD615;&#xC131; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCA0;&#xD0C0;-&#xBC0F; &#xAC10;&#xB9C8;-subunits vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; sak1.snf1&#xC758; &#xB300;&#xD615; Snf1 &#xC815;&#xD488; &#xC778;&#xC99D; &#xB8E8;&#xD504;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBD80;&#xC871; &#xD55C; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC815;&#xD654; Snf1 &#xD0A4; &#xC18C; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xAC10;&#xB9C8;-&#xB2E8;&#xC704;, Snf1 &#xD0A4; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; alphagamma dimer &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xD3EC;&#xD568; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC21C;&#xD654; &#xB41C; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; &#xBC0F; &#xC798;&#xB9B0; Snf1 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCCB4; &#xC678; &#xB2C8; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xB3C4;&#xC6C0; &#xBD80;&#xC871;, &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC740; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; Snf1 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB354; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD94;&#xAC00;&#xC758; &#xC815;&#xD654; &#xBCA0;&#xD0C0;-&#xBC0F; &#xAC10;&#xB9C8;-subunits &#xC218; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; &#xC54C;&#xD30C; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704; &#xCC38;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC758;&#xC874;&#xC131;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; &#xC790;&#xADF9; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;.

Snf1 &#xB2C8; heterotrimer&#xC758; &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704; &#xD611;&#xD68C; &#xBC0F; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC758;&#xC874;&#xC131; &#xD45C;&#xC2DC;.

La quinasa Snf1 y su orthologue mam&iacute;fero, el kinase de prote&iacute;na activada por AMP (AMPK), funcionan como heterotrimers compuesto por una subunidad catal&iacute;tica alfa y dos subunidades no catal&iacute;ticas, beta y gamma. La subunidad beta se piensa que sujetan el complejo y localizaci&oacute;n subcelular de control mientras que la subunidad gamma desempe&ntilde;a un papel regulador por atar a y la funci&oacute;n de un dominio de auto inhibitorio (ayuda) presente en la subunidad alfa de bloqueo. Adem&aacute;s, la actividad catal&iacute;tica requiere fosforilaci&oacute;n por una quinasa distinta aguas arriba. En la levadura, alguno de los tres Snf1-activar quinasas, Sak1, Tos3 o Elm1, puede cumplir este papel. Previamente hemos demostrado que la Sak1 es la &uacute;nica quinasa activadora de Snf1 que forma un complejo con Snf1 de establo. Aqu&iacute; mostramos que la formaci&oacute;n del complejo Sak1.Snf1 requiere la beta - y gamma-subunidades en vivo. Sin embargo, formaci&oacute;n de los complejos de Sak1.Snf1 no es necesaria para la fosforilaci&oacute;n de glucosa-regulado del lazo Snf1 activaci&oacute;n. Quinasa Snf1 purificada a partir de las c&eacute;lulas que carec&iacute;an de las subunidades beta no contienen cualquier subunidad gamma, indicando que la quinasa Snf1 no forma un d&iacute;mero estable alphagamma in vivo. Ensayos in vitro de la quinasa utilizando prote&iacute;nas de Snf1 integrales y truncadas purificadas demuestran que el dominio de la cinasa, que carece de la ayuda, es significativamente m&aacute;s activo que la prote&iacute;na Snf1 integral. Adem&aacute;s de purificada beta - y gamma-subunidades podr&iacute;an estimular la actividad de la quinasa de la subunidad alfa de cuerpo entero, pero s&oacute;lo cuando todos tres subunidades estaban presentes, lo que sugiere una interdependencia de todas las tres subunidades para el montaje de un complejo funcional.

Subunidades de la heterotrimer de quinasa Snf1 muestran interdependencia para la asociaci&oacute;n y de la actividad.

&#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

Mechanisms regulating the protein kinases of Saccharomyces cerevisiae.

M&eacute;canismes de r&eacute;gulation des prot&eacute;ine kinases de Saccharomyces cerevisiae.

Regulierungsmechanismen der Proteinkinasen von Saccharomyces Cerevisiae.

Meccanismi che regolano la chinasi di proteina di Saccharomyces cerevisiae.

&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3002;

&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; kinases Saccharomyces cerevisiae&#xC758; &#xC870;&#xC808; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Mecanismos de regulaci&oacute;n de las prote&iacute;nas quinasas de Saccharomyces cerevisiae.

&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD; Snf1 &#x6FC0;&#x9176;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5FAA;&#x73AF;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#xFF0C;&#x7531;&#x4E24;&#x4E2A;&#x53CD;&#x5E94;&#x7387;&#x7684;&#x4E00;&#x4F53;&#x5316;&#xFF1A; &#x7531;&#x4E0A;&#x6E38;&#x6FC0;&#x9176;&#x548C;&#x7387;&#x7684;&#x8131;&#x6C2E;&#x9664;&#x78F7;&#x7684; Glc7 &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x901F;&#x7387;&#x3002;Snf1 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4E0D;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x662F;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x8C03;&#x8282;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x4E0E;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x4E09; Snf1 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x6FC0;&#x9176;&#x514D;&#x75AB;&#x590D;&#x6742;&#x6FC0;&#x9176;&#x68C0;&#x6D4B;&#x663E;&#x793A;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x65F6;&#x51C6;&#x5907;&#x4ECE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x5728;&#x9AD8;&#x6216;&#x4F4E;&#x7684;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x5728; Snf1 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x5FAA;&#x73AF;&#x8131;&#x5F3A;&#x70C8;&#x53D7;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x3002;&#x5F53; Snf1 de novo &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x88AB;&#x6291;&#x5236;&#x65F6;&#xFF0C;Snf1 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x5FAA;&#x73AF;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5DF2;&#x627E;&#x5230;&#x7A33;&#x5B9A;&#x5728;&#x4F4E;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8FC5;&#x901F;&#x589E;&#x52A0;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x65F6;&#x5931;&#x53BB;&#x3002;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5927;&#x4E8E; Snf1 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x5FAA;&#x73AF;&#x8131;&#x78F7;&#x7387; 10 &#x500D;&#x5DEE;&#x5F02;&#x88AB;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;Glc7 Reg1 &#x78F7;&#x9178;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E0D;&#x672C;&#x8EAB;&#x76F4;&#x63A5;&#x53D7;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A; Glc7 Reg1 &#x9176;&#x662F;&#x6D3B;&#x8DC3;&#x5728;&#x8D70;&#x5411;&#x53E6;&#x4E00;&#x4E2A;&#x57FA;&#x677F;&#xFF0C;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50; Mig1 &#x4F4E;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x3002;Snf1 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x5FAA;&#x73AF;&#x8131;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x8C03;&#x8282;&#x7531;&#x66F4;&#x6539;&#x63A7;&#x5236;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x886C;&#x5E95;&#x4E3A; Glc7 Snf1 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x5FAA;&#x73AF;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;

&#x8BBF;&#x95EE;&#x88AB;&#x62D2;&#x7EDD;&#xFF1A; Snf1 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x5FAA;&#x73AF;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x82CF;&#x6C28;&#x9178; 210 &#x5230; PP1 &#x78F7;&#x9178;&#x9176;&#x7684;&#x53EF;&#x7528;&#x6027;&#x3002;

Phosphorylation of the Saccharomyces cerevisiae Snf1 kinase activation loop is determined by the integration of two reaction rates: the rate of phosphorylation by upstream kinases and the rate of dephosphorylation by Glc7. The activities of the Snf1-activating kinases do not appear to be glucose-regulated, since immune complex kinase assays with each of the three Snf1-activating kinases show similar levels of activity when prepared from cells grown in either high or low glucose. In contrast, the dephosphorylation of the Snf1 activation loop was strongly regulated by glucose. When de novo phosphorylation of Snf1 was inhibited, phosphorylation of the Snf1 activation loop was found to be stable in low glucose but rapidly lost upon the addition of glucose. A greater than 10-fold difference in the rates of Snf1 activation loop dephosphorylation was detected. However, the activity of the Glc7-Reg1 phosphatase may not itself be directly regulated by glucose, since the Glc7-Reg1 enzyme was active in low glucose toward another substrate, the transcription factor Mig1. Glucose-mediated regulation of Snf1 activation loop dephosphorylation is controlled by changes in the ability of the Snf1 activation loop to act as a substrate for Glc7.

Access denied: Snf1 activation loop phosphorylation is controlled by availability of the phosphorylated threonine 210 to the PP1 phosphatase.

La phosphorylation de la boucle d&#39;activation Saccharomyces cerevisiae Snf1 kinase est d&eacute;termin&eacute;e par l&#39;int&eacute;gration de deux vitesses de r&eacute;action : le taux de phosphorylation par les kinases en amont et le taux de d&eacute;phosphorylation de Glc7. Les activit&eacute;s de l&#39;activation Snf1 kinases ne semblent pas &ecirc;tre r&eacute;glement&eacute;s glucose, &eacute;tant donn&eacute; que les essais de kinase de complexes immuns avec chacun des trois kinases Snf1 activation montrent des niveaux similaires d&#39;activit&eacute; sont &eacute;labor&eacute;s &agrave; partir des cellules cultiv&eacute;es en glucose soit haute ou basse. En revanche, la d&eacute;phosphorylation de la boucle d&#39;activation Snf1 &eacute;tait fortement r&eacute;gul&eacute;e par le glucose. Lors de la phosphorylation de novo de Snf1 est inhib&eacute;e, la phosphorylation de la boucle d&#39;activation Snf1 s&#39;est av&eacute;r&eacute; stable &agrave; faible concentration de glucose mais rapidement perdu lors de l&#39;addition de glucose. A sup&eacute;rieure &agrave; 10 fois plus de diff&eacute;rence dans les taux de d&eacute;phosphorylation de Snf1 activation boucle a &eacute;t&eacute; d&eacute;tect&eacute;e. Toutefois, l&#39;activit&eacute; de la phosphatase Glc7-Reg1 ne peut pas elle-m&ecirc;me &ecirc;tre directement r&eacute;glement&eacute;e par le glucose, puisque l&#39;enzyme Glc7-Reg1 a &eacute;t&eacute; actif &agrave; faible concentration de glucose vers un autre substrat, le facteur de transcription Mig1. R&eacute;gulation glyc&eacute;mie de d&eacute;phosphorylation de boucle Snf1 activation est contr&ocirc;l&eacute;e par des changements dans la capacit&eacute; de la boucle d&#39;activation Snf1 d&#39;agir comme substrat pour Glc7.

Acc&egrave;s refus&eacute; : Snf1 la phosphorylation boucle d&#39;activation est contr&ocirc;l&eacute;e par la disponibilit&eacute; de la thr&eacute;onine phosphoryl&eacute;e 210 &agrave; la phosphatase PP1.

Phosphorylierung der Saccharomyces Cerevisiae Snf1 Kinase Aktivierung Schleife wird bestimmt durch die Integration der beiden Reaktion-Preise: die Rate der Phosphorylierung von upstream Kinasen und die Rate der Dephosphorylierung von Glc7. Die Aktivit&auml;ten von der Snf1-Aktivierung-Kinasen erscheinen nicht Glukose-geregelt sein, da immun Komplex Kinase-Assays mit jedem der drei Snf1-Aktivierung-Kinasen vergleichbarer T&auml;tigkeit bei der Vorbereitung von Zellen, die in entweder hoch oder niedrig Glukose zeigen. Im Gegensatz dazu war die Dephosphorylierung von der Snf1-Aktivierung-Schleife von Glukose stark reguliert. Als de-Novo-Phosphorylierung von Snf1 gehemmt wurde, Phosphorylierung der Snf1 Aktivierung Schleife wurde festgestellt, dass im niedrigen Blutzucker stabil aber rasch nach dem Zusatz von Glukose verloren. A gr&ouml;&szlig;er als 10fach verbesserter Unterschied in der Snf1 Aktivierung Schleife Dephosphorylierung erkannt wurde. Jedoch kann die Aktivit&auml;t des Glc7-Reg1-Phosphatase nicht selbst direkt von Glukose, geregelt werden, da das Enzym Glc7-Reg1 in niedrigen Glukose gegen&uuml;ber einem anderen Substrat, den Transkriptionsfaktor Mig1 t&auml;tig war. Glukose-vermittelte Regulierung der Snf1 Aktivierung Schleife Dephosphorylierung wird durch &Auml;nderungen in der Handlungsf&auml;higkeit der Snf1 Aktivierung Schleife als Substrat f&uuml;r Glc7 gesteuert.

Zugriff verweigert: Snf1 Aktivierung Schleife Phosphorylierung wird gesteuert durch die Verf&uuml;gbarkeit von den phosphoryliertes Threonin 210, PP1-Phosphatase.

La fosforilazione del ciclo di attivazione di Saccharomyces cerevisiae Snf1 chinasi &egrave; determinata dall&#39;integrazione di due tassi di reazione: il tasso di fosforilazione della chinasi a monte e il tasso di defosforilazione di Glc7. L&#39;attivit&agrave; della chinasi Snf1-attivazione non sembrano essere glucosio-regolato, poich&eacute; dosaggi chinasi complessi immuni con ciascuno la chinasi Snf1 attivando tre mostrano simili livelli di attivit&agrave; quando preparate da cellule coltivate in glucosio o ad alta o bassa. Al contrario, la defosforilazione del ciclo di attivazione Snf1 &egrave; stato fortemente regolamentata da glucosio. Quando de novo la fosforilazione di Snf1 era inibita, fosforilazione del ciclo di attivazione Snf1 &egrave; stato trovato per essere stabile in glucosio basso ma rapidamente perso sull&#39;aggiunta di glucosio. A maggiore di 10 volte differenza nei tassi di Snf1 defosforilazione di attivazione ciclo &egrave; stato rilevato. Tuttavia, l&#39;attivit&agrave; della fosfatasi della Glc7-Reg1 potrebbe non s&eacute; essere direttamente regolamentata dal glucosio, dal momento che l&#39;enzima Glc7-Reg1 era attivo in glucosio basso verso un altro substrato, il fattore di trascrizione Mig1. Regolamento glucosio-mediata di Snf1 defosforilazione di attivazione ciclo &egrave; controllato da cambiamenti nella capacit&agrave; di agire come substrato per Glc7 il ciclo di attivazione Snf1.

Accesso negato: la fosforilazione ciclo di attivazione Snf1 &egrave; controllata dalla disponibilit&agrave; della treonina fosforilata 210 per la fosfatasi PP1.

&#x30B5;&#x30C3;&#x30AB;&#x30ED; &#x30DF;&#x30BB;&#x30B9;&#x9175;&#x6BCD; Snf1 &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x53CD;&#x5FDC;&#x901F;&#x5EA6;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x7D71;&#x5408;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;: &#x4E0A;&#x6D41;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068; Glc7 &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8131;&#x71D0;&#x9178;&#x5316;&#x7387;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x7387;&#x3002;Snf1 &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x4EE5;&#x6765;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x8A66;&#x91D1;&#x5404; 3 Snf1 &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x9AD8;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4F4E;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x57F9;&#x990A;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x8ABF;&#x88FD;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;&#x8868;&#x793A;&#x306B;&#x306F;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;Snf1 &#x6D3B;&#x767A;&#x5316;&#x306E;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x8131;&#x71D0;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F37;&#x304F;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Snf1 &#x306E; de novo &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x304C;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x3001;Snf1 &#x6D3B;&#x767A;&#x5316;&#x306E;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x4F4E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x6DFB;&#x52A0;&#x6642;&#x306B;&#x5931;&#x308F;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Snf1 &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x8131;&#x71D0;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x306E; 10 &#x500D;&#x5DEE;&#x304C;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x3002;Glc7&#x3001;Reg1 &#x9175;&#x7D20;&#x304C;&#x5225;&#x57FA;&#x677F;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50; Mig1 &#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x4F4E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x306E;&#x3067;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;Glc7&#x3001;Reg1 &#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x81EA;&#x4F53;&#x76F4;&#x63A5;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x898F;&#x5236;&#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x898F;&#x5236; Snf1 &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x8131;&#x71D0;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x57FA;&#x677F;&#x3068;&#x3057;&#x3066; Glc7 &#x306E;&#x884C;&#x52D5;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x306E; Snf1 &#x6D3B;&#x767A;&#x5316;&#x306E;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3067;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x304C;&#x62D2;&#x5426;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;: Snf1 &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7; &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3; 210 PP1 &#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x53EF;&#x7528;&#x6027;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Saccharomyces cerevisiae Snf1 &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC18;&#xBCF5;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xB450; &#xBC18;&#xC751; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC758; &#xD1B5;&#xD569;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;: &#xC5C5;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; kinases&#xC640; glc7&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; dephosphorylation&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC758;&#xD574; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4;. Snf1 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; kinases &#xD65C;&#xB3D9; &#xAC01; 3 Snf1 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; kinases &#xBA74;&#xC5ED; &#xBCF5;&#xD569; &#xD0A4; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC1FC; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xB610;&#xB294; &#xB0AE;&#xC740; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC131;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC900;&#xBE44; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC774;&#xD6C4; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xD1B5;&#xC81C; &#xB418;&#xB3C4;&#xB85D; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, Snf1 &#xC815;&#xD488; &#xC778;&#xC99D; &#xB8E8;&#xD504; dephosphorylation &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xADDC;&#xC81C; &#xD588;&#xB2E4;. Snf1&#xC758; &#xB4DC; &#xB178; &#xBCF4; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xC800;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; Snf1 &#xC815;&#xD488; &#xC778;&#xC99D; &#xB8E8;&#xD504;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xB0AE;&#xC740; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9;&#xC5D0; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xAC83;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD3EC;&#xB3C4;&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xB530;&#xB77C; &#xBE60;&#xB974;&#xAC8C; &#xC190;&#xC2E4;. &#xD07C; &#xBCF4;&#xB2E4; Snf1 &#xC815;&#xD488; &#xC778;&#xC99D; &#xB8E8;&#xD504; dephosphorylation&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC9C4; &#xCC28;&#xC774;&#xAC00; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, Glc7 Reg1 &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0; &#xC790;&#xCCB4; &#xC9C1;&#xC811; &#xADDC;&#xC81C; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Glc7 Reg1 &#xD6A8;&#xC18C;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xAE30;&#xD310;, &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; Mig1 &#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xB0AE;&#xC740; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9;&#xC5D0; &#xC801;&#xADF9;&#xC801; &#xC774;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;. Snf1 &#xC815;&#xD488; &#xC778;&#xC99D; &#xB8E8;&#xD504; dephosphorylation&#xC758; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xC911;&#xC7AC; &#xADDC;&#xC815;&#xC744; Glc7 &#xAE30;&#xD310;&#xC73C;&#xB85C; Snf1 &#xC815;&#xD488; &#xC778;&#xC99D; &#xB8E8;&#xD504;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xC5B4; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC561;&#xC138;&#xC2A4; &#xAC70;&#xBD80;: Snf1 &#xC815;&#xD488; &#xC778;&#xC99D; &#xB8E8;&#xD504; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; phosphorylated &#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC; 210 PP1 &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xC5B4; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Fosforilaci&oacute;n del lazo de activaci&oacute;n de Saccharomyces cerevisiae Snf1 quinasa est&aacute; determinada por la integraci&oacute;n de dos tipos de reacci&oacute;n: la tasa de fosforilaci&oacute;n por kinasas aguas arriba y la velocidad de desfosforilaci&oacute;n por Glc7. Las actividades de las quinasas Snf1-activaci&oacute;n no parecen ser regulados por glucosa, como ensayos de cinasa complejos inmunes con cada una de las tres Snf1-activar quinasas muestran niveles similares de actividad cuando preparados a partir de las c&eacute;lulas cultivadas en glucosa alta o baja. En contraste, la desfosforilaci&oacute;n del lazo Snf1 activaci&oacute;n fue fuertemente regulado por glucosa. Cuando se inhibi&oacute; de novo fosforilaci&oacute;n de Snf1, fosforilaci&oacute;n del lazo Snf1 activaci&oacute;n fue encontrado para ser estable en glucosa baja pero perdi&oacute; r&aacute;pidamente sobre la adici&oacute;n de glucosa. A m&aacute;s de 10 veces de diferencia en las tasas de Snf1 desfosforilaci&oacute;n de bucle de activaci&oacute;n se detect&oacute;. Sin embargo, la actividad de la fosfatasa Glc7-Reg1 puede no s&iacute; mismo ser directamente regulada por glucosa, ya que la enzima Glc7-Reg1 era activa en glucosa baja hacia otro sustrato, el factor de transcripci&oacute;n Mig1. Regulaci&oacute;n mediada por glucosa de desfosforilaci&oacute;n de bucle de activaci&oacute;n Snf1 es controlado por cambios en la capacidad del lazo Snf1 activaci&oacute;n para actuar como un sustrato para Glc7.

Acceso denegado: fosforilaci&oacute;n de bucle de activaci&oacute;n Snf1 es controlada por la disponibilidad de la treonina fosforilada 210 a la fosfatasa PP1.

Many proteins are regulated by ubiquitin-dependent proteolysis. Substrate ubiquitylation can be stimulated by additional post-translational modifications, including small ubiquitin-like modifier (SUMO) conjugation. The recently discovered SUMO-targeted ubiquitin ligases (STUbLs) mediate the latter effect; however, no endogenous substrates of STUbLs that are degraded under normal conditions are known. From a targeted genomic screen, we now identify the yeast STUbL Slx5-Slx8, a heterodimeric RING protein complex, as a key ligase mediating degradation of the MATalpha2 (alpha2) repressor. The ubiquitin-conjugating enzyme Ubc4 was found in the same screen. Surprisingly, mutants with severe defects in SUMO-protein conjugation were not impaired for alpha2 turnover. Unmodified alpha2 also bound to and was ubiquitylated efficiently by Slx5-Slx8. Nevertheless, when we inactivated four SUMO-interacting motifs (SIMs) in Slx5 that together account for its noncovalent SUMO binding, both in vitro Slx5-Slx8-dependent ubiquitylation and in vivo degradation of alpha2 were inhibited. These data identify alpha2 as the first native substrate of the conserved STUbLs, and demonstrate that its STUbL-mediated ubiquitylation does not require SUMO. We suggest that alpha2, and presumably other proteins, have surface features that mimic SUMO, and therefore can directly recruit STUbLs without prior SUMO conjugation.

SUMO-independent in vivo activity of a SUMO-targeted ubiquitin ligase toward a short-lived transcription factor.

Le signal de la glyc&eacute;mie et m&eacute;tabolique lux p [H +].

Die Glukose-Signal und metabolische p [H +] Lux.

Il segnale di glucosio e metaboliche lux p [H +].

&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3068;&#x4EE3;&#x8B1D; p [H +] &#x30EB;&#x30AF;&#x30B9;&#x3002;

&#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xC2E0;&#xD638;&#xC640; &#xB300;&#xC0AC; p [H +] &#xB7ED; &#xC2A4;.

La se&ntilde;al de glucosa y metabolismo lux p [H +].

&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x4FE1;&#x53F7;&#x548C;&#x4EE3;&#x8C22; p [H +] lux&#x3002;

The glucose signal and metabolic p[H+]lux.

As central components of the intricate networks of eukaryotic gene regulation, transcription factors are frequent targets of ubiquitin-dependent proteolysis. A well-known example is the budding yeast MATα2 (α2) transcriptional repressor, which functions as a master regulator of cell-type determination. Degradation of α2 by the ubiquitin-proteasome system is necessary for a phenotypic switch from one cell type to another. A surprisingly complex set of ubiquitin-protein conjugation mechanisms are involved. One pathway utilizes an integral-membrane ubiquitin ligase (E3) that also functions in endoplasmic reticulum-associated degradation (ERAD). Recently, we showed that a second α2 ubiquitylation pathway uses a heterodimeric E3 that, while able to bind the ubiquitin-like protein SUMO, directly recognizes non-sumoylated α2. Other transcription factors are now also known to be ubiquitylated by multiple mechanisms; as many as a dozen E3s have been implicated in degradation of the human p53 tumor suppressor, for example. We discuss general issues of redundancy and mechanistic variation in protein modification by ubiquitin.

Redundancy and variation in the ubiquitin-mediated proteolytic targeting of a transcription factor.

Little is known about quality control of proteins that aberrantly or persistently engage the endoplasmic reticulum (ER)-localized translocon en route to membrane localization or the secretory pathway. Hrd1 and Doa10, the primary ubiquitin ligases that function in ER-associated degradation (ERAD) in yeast, target distinct subsets of misfolded or otherwise abnormal proteins based primarily on degradation signal (degron) location. We report the surprising observation that fusing Deg1, a cytoplasmic degron normally recognized by Doa10, to the Sec62 membrane protein rendered the protein a Hrd1 substrate. Hrd1-dependent degradation occurred when Deg1-Sec62 aberrantly engaged the Sec61 translocon channel and underwent topological rearrangement. Mutations that prevent translocon engagement caused a reversion to Doa10-dependent degradation. Similarly, a variant of apolipoprotein B, a protein known to be cotranslocationally targeted for proteasomal degradation, was also a Hrd1 substrate. Hrd1 therefore likely plays a general role in targeting proteins that persistently associate with and potentially obstruct the translocon.

Aberrant substrate engagement of the ER translocon triggers degradation by the Hrd1 ubiquitin ligase.

Two conserved ubiquitin ligases, Hrd1 and Doa10, mediate most endoplasmic reticulum-associated protein degradation (ERAD) in yeast. Degradation signals (degrons) recognized by these ubiquitin ligases remain poorly characterized. Doa10 recognizes the Deg1 degron from the MATα2 transcription factor. We previously found that deletion of the gene (NAT3) encoding the catalytic subunit of the NatB N-terminal acetyltransferase weakly stabilized a Deg1-fusion protein. By contrast, a recent analysis of several MATα2 derivatives suggested that N-terminal acetylation of these proteins by NatB was crucial for recognition by Doa10. We now analyze endogenous MATα2 degradation in cells lacking NatB and observe minimal perturbation relative to wild-type cells. However, NatB mutation strongly impairs degradation of ER-luminal Hrd1 substrates. This unexpected defect derives from a failure of Der1, a Hrd1 complex subunit, to be N-terminally acetylated in NatB mutant yeast. We retargeted Der1 to another acetyltransferase to show that it is the only ERAD factor requiring N-terminal acetylation. Preventing Der1 acetylation stimulates its proteolysis via the Hrd1 pathway, at least partially accounting for the ERAD defect observed in the absence of NatB. These results reveal an important role for N-terminal acetylation in controlling Hrd1 ligase activity toward a specific class of ERAD substrates.

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Eric M. Rubenstein

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