electron-cryotomography-of-bacterial-cells

Electron Cryotomography of Bacterial Cells

While much is already known about the basic metabolism of bacterial cells, many fundamental questions are still surprisingly unanswered, including for ...

California Institute of Technology - Caltech

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&#x5728;&#x80C3;&#x58C1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x7F51;&#x7EDC;&#x4E09;&#x7EF4;&#x91CD;&#x5EFA;&#x3002;

There is general agreement that stimulation and consequent secretion of gastric parietal cells result in a great expansion of the apical canalicular membrane at the expense of an extensive intracellular network of membranes rich in the gastric proton pump (H,K-ATPase). However, there is ongoing controversy as to the precise nature of the intracellular membrane network, conventionally called tubulovesicles. At the heart of this controversy lies the question of whether tubulovesicles are a distinct membrane compartment or whether they are continuous with the apical plasma membrane. To address this controversy we used high-pressure, rapid freezing techniques to fix non-stimulated (resting) rabbit gastric glands for electron microscopy. Ultra-thin (60-70 nm) serial sections were used for conventional TEM; 400-500 nm sections were used for tomography. Images were digitized and models constructed using Midas and Imod software (http://bio3d.colorado.edu ). Images were aligned and contours drawn on specific cellular structures. The contours from a stack of serial sections were arranged into objects and meshed into 3D structures. For resting parietal cells our findings are as follows: (1) The apical canaliculus is a microvilli-decorated, branching membrane network that extends into and throughout the parietal cell. This agrees well with a host of previous studies. (2) The plentiful mitochondria form an extensive reticular network throughout the cytoplasm. This has not previously been reported for the parietal cell, and the significance of this observation and the dynamics of the mitochondrial network remain unknown. (3) H,K-ATPase-rich membranes do include membrane tubules and vesicles; however, the tubulovesicular compartment is chiefly comprised of small stacks of cisternae. Thus a designation of tubulocisternae seems appropriate; however, in the resting cell there are no continuities between the apical canaliculus and the tubulocisternae or between tubulocisternae. These data support the recruitment-recycling model of parietal cell stimulation.

Three-dimensional reconstruction of cytoplasmic membrane networks in parietal cells.

Il est g&eacute;n&eacute;ralement admis que la stimulation et par cons&eacute;quent la s&eacute;cr&eacute;tion des cellules pari&eacute;tales gastriques entra&icirc;nent une grande expansion de la membrane apicale canaliculaire au d&eacute;triment d&#39;un vaste r&eacute;seau intracellulaire de membranes riches dans la pompe &agrave; protons gastrique (H, K-ATPase). Cependant, il y a controverse en cours quant &agrave; la nature pr&eacute;cise du r&eacute;seau membranaire intracellulaire, classiquement appel&eacute;e tubulov&eacute;sicules. Au coeur de cette controverse se trouve la question de savoir si tubulov&eacute;sicules sont un compartiment membranaires distincts ou si ils sont en continuit&eacute; avec la membrane plasmatique apicale. Pour r&eacute;soudre cette controverse, nous avons utilis&eacute; des techniques de cong&eacute;lation &agrave; haute pression, rapides pour corriger lapin (au repos) non stimul&eacute;e par les glandes gastriques pour la microscopie &eacute;lectronique. Ultra minces s&eacute;ri&eacute;es (60-70 nm) ont &eacute;t&eacute; utilis&eacute;es pour TEM conventionnelle ; 400-500 nm sections ont &eacute;t&eacute; utilis&eacute;es pour la tomographie. Des images ont &eacute;t&eacute; num&eacute;ris&eacute;es et mod&egrave;les construits &agrave; l&#39;aide du logiciel Midas et Imod (http://bio3d.colorado.edu). Les images ont &eacute;t&eacute; align&eacute;s et contours dessin&eacute;s sur des structures cellulaires sp&eacute;cifiques. Les contours d&#39;une pile de coupes s&eacute;ri&eacute;es &eacute;taient dispos&eacute;es dans des objets et &agrave; mailles en structures 3D. Pour le repos des cellules pari&eacute;tales, nos conclusions sont les suivantes: (1) le canalicule apical est un d&eacute;cor&eacute; &agrave; microvillosit&eacute;s, branchement r&eacute;seau de membrane qui s&#39;&eacute;tend dans et &agrave; travers la cellule pari&eacute;tale. Cela s&#39;accorde bien avec une foule d&#39;&eacute;tudes ant&eacute;rieures. (2) Les mitochondries abondantes forment un vaste r&eacute;seau r&eacute;ticulaire dans tout le cytoplasme. Cela n&#39;a pas d&eacute;j&agrave; &eacute;t&eacute; signal&eacute; de la cellule pari&eacute;tale et l&#39;importance de cette observation et la dynamique du r&eacute;seau mitochondrial demeure inconnue. (3) H, membranes riches en K-ATPase comportent-ils des tubules de la membrane et les v&eacute;sicules ; Cependant, le compartiment tubulov&eacute;siculaire est principalement compos&eacute; de petites piles de saccules. Appellation de tubulocisternae semble donc appropri&eacute;e ; Toutefois, dans la cellule au repos, il n&#39;y a aucune continuit&eacute; entre le canalicule apical et le tubulocisternae ou entre tubulocisternae. Ces donn&eacute;es prennent en charge le mod&egrave;le de recrutement-recyclage de stimulation de la cellule pari&eacute;tale.

Reconstruction tridimensionnelle des r&eacute;seaux de la membrane cytoplasmique dans les cellules pari&eacute;tales.

Dreidimensionale Rekonstruktion der Cytoplasmamembran Netzwerke in Parietalzellen.

Non c&#39;&egrave; accordo generale che la stimolazione e la conseguente secrezione delle cellule parietali gastriche risultato in una grande espansione della membrana canalicolare apicale a scapito di un&#39;estesa rete intracellulare delle membrane ricche nella pompa protonica gastrica (H, K-ATPasi). Tuttavia, ci &egrave; polemica in corso per quanto riguarda la natura precisa della rete di membrane intracellulari, convenzionalmente chiamato tubulovesicles. Al centro di questa polemica si trova la questione del se tubulovesicles sono un vano membrana distinti o se essi sono continui con la membrana plasmatica apicale. Per risolvere questa controversia abbiamo utilizzato tecniche di congelamento rapide, ad alta pressione per difficolt&agrave; non stimolato (riposo) coniglio ghiandole gastriche per microscopia elettronica. Ultra-sottili sezioni seriali (60-70 nm) sono stati utilizzati per TEM convenzionali; sezioni di 400-500 nm sono stati utilizzati per la tomografia. Immagini sono state digitalizzate e modelli costruiti utilizzando software Midas e Imod (http://bio3d.colorado.edu). Le immagini sono state allineate e contorni disegnate su specifiche strutture cellulari. I contorni da una pila di sezioni seriali sono state disposte in oggetti e a maglie in strutture 3D. Per cellule parietali di riposo i nostri risultati sono come segue: (1) il canalicolo apicale &egrave; un microvilli-decorato, ramificazione rete di membrana che si estende in e per tutta la cellula parietale. Questo concorda bene con una serie di studi precedenti. (2) I mitocondri abbondanti formano un&#39;estesa rete reticolare in tutto il citoplasma. Questo non &egrave; gi&agrave; stato segnalato per la cellula parietale e il significato di questa osservazione e le dinamiche della rete mitocondriale rimangono sconosciute. (3) H, membrane ricchi di K-ATPasi includono membrana tubuli e vescicole; Tuttavia, il vano tubulovesicular &egrave; composto principalmente da piccole pile di destino. Cos&igrave; un&#39;indicazione di tubulocisternae sembra appropriata; Tuttavia, nella cella di riposo non ci sono alcuna continuit&agrave; tra il canalicolo apicale e la tubulocisternae o tra tubulocisternae. Questi dati supportano il modello di reclutamento-riciclaggio di stimolazione delle cellule parietali.

Ricostruzione tridimensionale di reti di membrana citoplasmatica di cellule parietali.

&#x305D;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x3068;&#x5E30;&#x7D50;&#x5206;&#x6CCC;&#x306E;&#x6BDB;&#x7D30;&#x819C;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x3092;&#x72A0;&#x7272;&#x306B;&#x3057;&#x3066;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x5C55;&#x958B;&#x819C;&#x3001;&#x80C3;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30F3; &#x30DD;&#x30F3;&#x30D7; (H, K-atpase) &#x30EA;&#x30C3;&#x30C1;&#x306E;&#x80C3;&#x306E;&#x982D;&#x9802;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x5951;&#x7D04;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x306E; tubulovesicles &#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x819C;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x6027;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x7D99;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x8AD6;&#x4E89;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x8AD6;&#x4E89;&#x306E;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x306B; tubulovesicles &#x304C;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x819C;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30A2;&#x30D4;&#x30AB;&#x30EB;&#x819C;&#x3068;&#x9023;&#x7D9A;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x306E;&#x8CEA;&#x554F;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x8AD6;&#x4E89;&#x306B;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306E;&#x80C3;&#x817A;&#x975E;&#x523A;&#x6FC0; (&#x4F11;&#x61A9;) &#x306E;&#x30A6;&#x30B5;&#x30AE;&#x3092;&#x4FEE;&#x6B63;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9AD8;&#x5727;&#x6025;&#x901F;&#x51CD;&#x7D50;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6975;&#x8584; (60-70 nm) &#x306E;&#x9023;&#x7D9A;&#x5207;&#x7247;&#x306F;&#x5F93;&#x6765; TEM &#x7528;; &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;400-500 nm &#x306E;&#x30BB;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x7528; ct &#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x304C;&#x30C7;&#x30B8;&#x30BF;&#x30EB;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30C0;&#x30B9;&#x3068; Imod &#x30BD;&#x30D5;&#x30C8;&#x30A6;&#x30A7;&#x30A2; (http://bio3d.colorado.edu) &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x753B;&#x50CF;&#x306F;&#x3001;&#x6574;&#x5217;&#x3057;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x63CF;&#x753B;&#x3057;&#x305F;&#x8F2A;&#x90ED;&#x3002;&#x9023;&#x7D9A;&#x5207;&#x7247;&#x306E;&#x30B9;&#x30BF;&#x30C3;&#x30AF;&#x304B;&#x3089;&#x8F2A;&#x90ED;&#x306B;&#x30AA;&#x30D6;&#x30B8;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x3092;&#x914D;&#x7F6E;&#x3001;3 D &#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x30E1;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x80C3;&#x58C1;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4F11;&#x61A9;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x3068;&#x304A;&#x308A;&#x3067;&#x3059;: (1) &#x5C16;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x7D68;&#x6BDB;&#x98FE;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3067;&#x3059;&#x3068;&#x982D;&#x9802;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5168;&#x4F53;&#x306B;&#x62E1;&#x5F35;&#x3059;&#x308B;&#x5206;&#x5C90;&#x306E;&#x819C;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x3068;&#x3082;&#x540C;&#x610F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#xFF08;2&#xFF09; &#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x7DB2;&#x72B6;&#x306E;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x4EE5;&#x524D;&#x65C1;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x3053;&#x306E;&#x89B3;&#x5BDF;&#x306E;&#x610F;&#x7FA9;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x3002;(3) H, K atp &#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; &#x30EA;&#x30C3;&#x30C1;&#x819C;&#x819C;&#x7D30;&#x7BA1;&#x3068;&#x30D9;&#x30B7;&#x30AF;&#x30EB;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;tubulovesicular &#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x4E3B;&#x306B;&#x89AA;&#x682A;&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30B9;&#x30BF;&#x30C3;&#x30AF;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066; tubulocisternae &#x306E;&#x6307;&#x5B9A;&#x306F;&#x9069;&#x5207;&#x3068;&#x601D;&#x308F;&#x308C;&#x308B;;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x9759;&#x6B62;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x7D99;&#x7D9A;&#x9802;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x3068;&#x3001;tubulocisternae &#x307E;&#x305F;&#x306F; tubulocisternae &#x9593;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x52DF;&#x96C6;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB; &#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x982D;&#x9802;&#x7D30;&#x80DE;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x80C3;&#x58C1;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x819C;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x3002;

&#xC77C;&#xBC18; &#xACC4;&#xC57D; &#xC704; &#xC591;&#xC131;&#xC790; &#xD38C;&#xD504; (H, K ATPase)&#xC774; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xBE44;&#xC6A9; &#xAF2D;&#xB300;&#xAE30; canalicular &#xB9C9;&#xC758; &#xD070; &#xD655;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xC704; &#xC815;&#xC218; &#xB9AC; &#xC138;&#xD3EC; &#xACB0;&#xACFC; &#xADF8; &#xC790;&#xADF9;&#xACFC; &#xACB0;&#xACFC; &#xBD84; &#xBE44;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; tubulovesicles &#xB77C;&#xACE0; &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xB9C9; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC758; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xBCF8;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xB17C;&#xC7C1;&#xC774;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB17C;&#xB780;&#xC758; &#xC911;&#xC2EC;&#xC5D0; &#xB2E4; tubulovesicles&#xB294; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xB9C9; &#xAD6C;&#xD68D; &#xB610;&#xB294; &#xAF2D;&#xB300;&#xAE30; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5F0;&#xC18D; &#xC778;&#xC9C0; &#xC5EC;&#xBD80;&#xC758; &#xC9C8;&#xBB38;&#xC744; &#xC18D; &#xC778; &#xB2E4;. &#xC774; &#xB17C;&#xC7C1;&#xC744; &#xD574;&#xACB0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC704; &#xC0D8; &#xBE44; &#xC790;&#xADF9; (&#xD734;&#xC2DD;) &#xD1A0;&#xB07C;&#xB97C; &#xD574;&#xACB0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xACE0;&#xC555;, &#xAE09;&#xC18D; &#xB3D9;&#xACB0; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD08;&#xBC15;&#xD615; (60-70 nm) &#xC9C1;&#xB82C; &#xC139;&#xC158;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xD3B8;; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB41C; 400-500 nm &#xC139;&#xC158; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xB514;&#xC9C0;&#xD138;&#xD654; &#xD588;&#xB2E4; &#xACE0; &#xBAA8;&#xB378; Midas Imod &#xC18C;&#xD504;&#xD2B8;&#xC6E8;&#xC5B4; (http://bio3d.colorado.edu)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAD6C;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xC815;&#xB82C; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC0F; &#xD2B9;&#xC815; &#xC138;&#xD3EC; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB824;&#xC9C4; &#xC724;&#xACFD;. &#xC9C1;&#xB82C; &#xC139;&#xC158;&#xC758; &#xC2A4;&#xD0DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC724;&#xACFD;&#xC120; &#xAC1C;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xC815;&#xB82C; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; 3D &#xAD6C;&#xC870;&#xB85C; &#xBA54;&#xC26C;. &#xC815;&#xC218; &#xB9AC; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xD734;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xB2E4;&#xC74C;&#xACFC; &#xAC19;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;: (1) &#xAF2D;&#xB300;&#xAE30; canaliculus&#xC740; microvilli &#xC7A5;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558; &#xACE0; &#xC815;&#xC218; &#xB9AC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xD655;&#xC7A5; &#xBD84;&#xAE30; &#xB9C9; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;. &#xC774; &#xC774;&#xC804; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC798; &#xB3D9;&#xC758;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. (2) &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xAC78;&#xCCD0; &#xB9DD;&#xC0C1; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xB97C; &#xD615;&#xC131;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740;&#xC774; &#xAD00;&#xCC30;&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC815;&#xC218; &#xB9AC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC758; &#xC5ED;&#xD559; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xB0A8;&#xC544;. (3) H, K ATPase &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9; &#xD560; &#xD3EC;&#xD568; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; tubules &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC18C;&#xD3EC;; &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, tubulovesicular &#xAD6C;&#xD68D; &#xC8FC;&#xB85C; cisternae&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xC2A4;&#xD0DD; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; tubulocisternae&#xC758; &#xC9C0;&#xC815; &#xAC83; &#xC801;&#xC808; &#xD55C;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xD734;&#xC2DD; &#xC140;&#xC5D0;&#xB294; &#xC544;&#xBB34; &#x9023; &#xAF2D;&#xB300;&#xAE30; canaliculus&#xC640;&#xB294; tubulocisternae &#xB610;&#xB294; tubulocisternae&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC815;&#xC218; &#xB9AC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC790;&#xADF9;&#xC758; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC815;&#xC218; &#xB9AC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xB9C9; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC758; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131;.

Hay acuerdo general en la estimulaci&oacute;n y la consiguiente secreci&oacute;n de las c&eacute;lulas parietales g&aacute;stricas resultado en una gran expansi&oacute;n de la membrana apical con canal&iacute;culos a expensas de una extensa red intracelular de membranas ricas en la bomba de protones g&aacute;strico (H, K-ATPasa). Sin embargo, hay una continua controversia en cuanto a la naturaleza precisa de la red intracelular de la membrana, convencionalmente llamado tubulovesicles. En el coraz&oacute;n de esta controversia se encuentra la cuesti&oacute;n de si tubulovesicles es un compartimento de membrana distintas o si son continuos con la membrana apical. Para resolver esta controversia utilizamos t&eacute;cnicas de congelaci&oacute;n r&aacute;pidas, alta presi&oacute;n para fijar conejo (descanso) no estimula las gl&aacute;ndulas g&aacute;stricas para microscop&iacute;a electr&oacute;nica. Ultrafino secciones seriadas (60-70 nm) se utilizaron para TEM convencional; 400-500 nm secciones se utilizan para tomograf&iacute;a. Im&aacute;genes fueron digitalizadas y modelos construcci&oacute;n usando software de Midas y Imod (http://bio3d.colorado.edu). Las im&aacute;genes fueron alineados y los contornos dibujadas en las estructuras celulares espec&iacute;ficas. Los contornos de una pila de secciones seriadas fueron arreglados en objetos y malla en estructuras tridimensionales. Para el descanso de las c&eacute;lulas parietales nuestros resultados son los siguientes: (1) el peque&ntilde;o canal apical es un decorado de microvellosidades, ramificada red de membrana que se extiende en y a trav&eacute;s de la c&eacute;lula parietal. Esto coincide con una serie de estudios previos. (2) Las mitocondrias abundantes forman una extensa red reticular por todo el citoplasma. Esto no ha sido divulgado previamente para la c&eacute;lula parietal y la importancia de esta observaci&oacute;n y la din&aacute;mica de la red mitocondrial siguen siendo desconocida. (3) H, membranas de ricos en K-ATPasa incluyen membrana t&uacute;bulos y ves&iacute;culas; sin embargo, el compartimento tubulovesicular est&aacute; compuesto principalmente por peque&ntilde;as pilas de cisternas. As&iacute; la denominaci&oacute;n de tubulocisternae parece apropiada; sin embargo, en la celda de descanso no hay continuidades entre el peque&ntilde;o canal apical y el tubulocisternae o entre tubulocisternae. Estos datos apoyan el modelo de contrataci&oacute;n-reciclaje de la estimulaci&oacute;n de c&eacute;lulas parietales.

Reconstrucci&oacute;n tridimensional de las redes de la membrana citoplasm&aacute;tica en las c&eacute;lulas parietales.

&#x5B75;&#x5316;&#x5728;&#x6444;&#x6C0F; 20 &#x5EA6;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5757;&#x4ECE;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x7684;&#x8FD0;&#x8F93;&#x548C;&#x653E;&#x5927;&#xFF0C;&#x9000;&#x51FA;&#x8F66;&#x53A2;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528; 20 &#x5EA6; C &#x5757;&#xFF0C;&#x5176;&#x6B21;&#x662F;&#x7535;&#x78C1;&#x5C42;&#x6790;&#x6210;&#x50CF;&#x548C;&#x4E32;&#x884C;&#x8282;&#x91CD;&#x5EFA;&#xFF0C;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x9000;&#x51FA; NRK &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x7AD9;&#x70B9;&#x3002;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x5728;&#x6E29;&#x5EA6;&#x963B;&#x6B62;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x7279;&#x5F81;&#x662F;&#x4E0A;&#x4E09;&#x8DE8;&#x5927;&#x90E8;&#x5206; cisternae &#x5927;&#x80C0;&#x57DF;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x57DF;&#x4ECE;&#x5806;&#x6808;&#x6A2A;&#x5411;&#x6269;&#x5C55;&#xFF0C;&#x8FDE;&#x7EED;&#x4E0E;&#x7EF4;&#x6301;&#x6B63;&#x5E38;&#x539A;&#x5EA6;&#x548C;&#x5BF9;&#x9F50;&#x65B9;&#x5F0F;&#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6;&#x5806;&#x79EF;&#x7684;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA; cisternae &#x7684;&quot;&#x6C60;&quot;&#x57DF;&#x3002;&#x9F13;&#x9F13;&#x7684;&#x57DF;&#x4E5F;&#x4E0D;&#x50CF;&#x662F;&#x5173;&#x8054;&#x8DE8;-cisternae &#x63A7;&#x5236;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x5782;&#x76F4;&#x6269;&#x5C55;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x662F;&#x5B8C;&#x5168;&#x4E0D;&#x5B58;&#x5728;&#x6E29;&#x5EA6;&#x963B;&#x6B62;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;&#x4E0E;&#x80C0;&#x57DF;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A; cisternae &#x53EF;&#x4EE5;&#x5217;&#x4E3A;&#x8DE8;&#xFF0C;&#x7531;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x534F;&#x4F1A;&#x4E0E;&#x4E13;&#x95E8; ER &#x548C;&#x7F51;&#x683C;&#x86CB;&#x767D;&#x6D82;&#x5C42;&#x5473;&#x857E;&#x4E0A;&#x53EA;&#x662F;&#x8DE8;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x5C0F;&#x8111;&#x5EF6;&#x9AD3;&#x6C60;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x80F6;&#x4F53;&#x91D1;&#x6807;&#x8BB0;&#x548C; immunoblots &#x4E0E;&#x4E3A;&#x5176;&#x91CD;&#x65B0;&#x5206;&#x914D;&#x6216;&#x5411;&#x5176;&#x4ED6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5668;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x5185;&#x6CA1;&#x6709;&#x8BC1;&#x636E;&#x663E;&#x793A;&#x91CD;&#x5927;&#x9000;&#x5316;&#x7684;&#x5185;&#x4FA7;&#x548C;&#x8DE8;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x7684;&#x6807;&#x8BB0;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x4ECE;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x7684; exit &#x4E8B;&#x4EF6;&#x53D1;&#x751F;&#x76F4;&#x63A5;&#x4ECE;&#x4E09;&#x8DE8; cisternae &#x548C;&#x8BE5;&#x4E13;&#x95E8;&#x7684; ER &#x8DE8;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x51FD;&#x6570;&#x4E2D;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x5206;&#x5E03;&#x7684;&#x8BB0;&#x8005;&#x5206;&#x5B50;&#x5728; 20 &#x5EA6; C &#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x9000;&#x51FA;&#x8F66;&#x53A2;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x6027;&#x3002;

Incubating cells at 20 degrees C blocks transport out of the Golgi complex and amplifies the exit compartments. We have used the 20 degrees C block, followed by EM tomography and serial section reconstruction, to study the structure of Golgi exit sites in NRK cells. The dominant feature of Golgi structure in temperature-blocked cells is the presence of large bulging domains on the three trans-most cisternae. These domains extend laterally from the stack and are continuous with "cisternal" domains that maintain normal thickness and alignment with the other stacked Golgi cisternae. The bulging domains do not resemble the perpendicularly extending tubules associated with the trans-cisternae of control cells. Such tubules are completely absent in temperature-blocked cells. The three cisternae with bulging domains can be identified as trans by their association with specialized ER and the presence of clathrin-coated buds on the trans-most cisterna only. Immunogold labeling and immunoblots show a significant degradation of a medial- and a trans-Golgi marker with no evidence for their redistribution within the Golgi or to other organelles. These data suggest that exit from the Golgi occurs directly from three trans-cisternae and that specialized ER plays a significant role in trans-Golgi function.

Structure of the Golgi and distribution of reporter molecules at 20 degrees C reveals the complexity of the exit compartments.

Incubation des cellules &agrave; 20 degr&eacute;s C bloque le transport &agrave; l&#39;ext&eacute;rieur du complexe de Golgi et amplifie les compartiments de sortie. Nous avons utilis&eacute; le bloc de 20 degr&eacute;s C, suivi par tomographie par EM et reconstruction de sections s&eacute;ri&eacute;es, pour &eacute;tudier la structure de l&#39;appareil de Golgi sortie sites dans les cellules de la NRK. La caract&eacute;ristique dominante de la structure de Golgi dans les cellules bloqu&eacute;es &agrave; la temp&eacute;rature est la pr&eacute;sence de vastes domaines bomb&eacute;s sur les trois citernes trans plus. Ces domaines s&#39;&eacute;tendent lat&eacute;ralement de la pile et sont en continuit&eacute; avec des domaines &laquo; saccules &raquo; maintiennent l&#39;&eacute;paisseur normale et l&#39;alignement avec les autres citernes de Golgi empil&eacute;s. Les domaines bomb&eacute;s ne ressemblent pas &agrave; des tubules qui s&#39;&eacute;tend verticalement associ&eacute;es aux trans-cisternes des cellules contr&ocirc;les. Ces tubules sont compl&egrave;tement absents dans les cellules bloqu&eacute;es &agrave; la temp&eacute;rature. Les trois citernes avec bombement de domaines peuvent &ecirc;tre identifi&eacute;s comme trans par leur association avec ER sp&eacute;cialis&eacute; et la pr&eacute;sence de boutons recouverts de clathrine sur la cisterna trans plus seulement. Immunomarquage et immuno-blot montre une d&eacute;gradation significative d&#39;une m&eacute;diane et un marqueur de trans-Golgi avec aucun &eacute;l&eacute;ment de preuve pour leur redistribution au sein de l&#39;appareil de Golgi ou d&#39;autres organites. Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que la sortie de l&#39;appareil de Golgi se produit directement &agrave; partir de trois trans-citernes et que ER sp&eacute;cialis&eacute;e joue un r&ocirc;le important dans la fonction de trans-Golgi.

Structure de l&#39;appareil de Golgi et la r&eacute;partition des mol&eacute;cules de reporter &agrave; 20 degr&eacute;s C r&eacute;v&egrave;lent la complexit&eacute; des compartiments de sortie.

Struktur des Golgi und Verteilung der Reportermolek&#xFC;le bei 20 &#xB0; C zeigt die Komplexit&#xE4;t der Austrittskammern.

Incubando le cellule a 20 gradi C blocca il trasporto fuori del complesso di Golgi e amplifica gli scomparti di uscita. Abbiamo utilizzato il blocco di 20 gradi C, seguito da tomografia EM e ricostruzione sezione seriale, per studiare la struttura del Golgi uscita siti nelle cellule NRK. La caratteristica dominante della struttura di Golgi in cellule di temperatura bloccata &egrave; la presenza di grandi domini sporgenti sul destino di trans pi&ugrave; tre. Questi domini si estendono lateralmente dalla pila e sono continui con &quot;intracisternale&quot; domini che mantengono lo spessore normale e l&#39;allineamento con il destino di Golgi altri accatastati. I domini sporgenti non assomigliano i tubuli perpendicolarmente estensione associati con la trans-destino delle cellule di controllo. Questi tubuli sono completamente assenti nelle cellule temperatura bloccata. Il destino di tre con domini sporgenti pu&ograve; essere identificati come trans dalla loro associazione con ER specializzati e la presenza di boccioli rivestite da Clatrina su cisterna trans pi&ugrave; solo. Immunogold etichettatura e immunoblots mostrano un notevole degrado di un mediale - e un marcatore di trans-Golgi con nessuna prova per la loro ridistribuzione all&#39;interno del Golgi o di altri organelli. Questi dati suggeriscono che uscita dal Golgi avviene direttamente da tre trans-destino e che ER specializzata svolge un ruolo significativo nella funzione trans-Golgi.

Struttura del Golgi e la distribuzione delle molecole reporter a 20 gradi C rivela la complessit&agrave; dei compartimenti uscita.

20 &#x2103; &#x3067;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30C8; &#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3057;&#x3001;&#x51FA;&#x53E3;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x5897;&#x5E45;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;EM &#x30C8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;20 &#x5EA6; C &#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x88C5;&#x7F6E;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB; &#x30BB;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5FA9;&#x8208;&#x7D42;&#x4E86; NRK &#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3002;&#x6E29;&#x5EA6;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x652F;&#x914D;&#x7684;&#x306A;&#x7279;&#x5FB4;&#x306F;&#x3001;3 &#x3064;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x89AA;&#x682A;&#x3067;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x81A8;&#x3089;&#x3093;&#x3060;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x6A2A;&#x65B9;&#x5411;&#x304B;&#x3089;&#x30B9;&#x30BF;&#x30C3;&#x30AF;&#x3092;&#x62E1;&#x5F35;&#x3057;&#x3066;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x539A;&#x307F;&#x3068;&#x4ED6;&#x306E;&#x7A4D;&#x307F;&#x4E0A;&#x3052;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x3068;&#x30A2;&#x30E9;&#x30A4;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x300C;&#x8133;&#x69FD;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30FC;&#x30B8;&#x300D;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x9023;&#x7D9A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x81A8;&#x3089;&#x3093;&#x3060;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; &#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x7D30;&#x80DE;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x89AA;&#x682A;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x5782;&#x76F4;&#x62E1;&#x5F35;&#x7D30;&#x7BA1;&#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x7D30;&#x7BA1;&#x304C;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30BB;&#x30EB;&#x6E29;&#x5EA6;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x81A8;&#x3089;&#x3093;&#x3060;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x6301;&#x3064; 3 &#x3064;&#x306E;&#x89AA;&#x682A;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x5C02;&#x9580; ER &#x3068;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3068;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x88AB;&#x8986;&#x82BD;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x5927;&#x69FD;&#x306E;&#x307F;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6A19;&#x8B58;&#x3068; immunoblots &#x5185;&#x5074; - &#x3068;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8; &#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x6DF1;&#x523B;&#x306A;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x306F;&#x3001;&#x518D;&#x914D;&#x5E03;&#x3001;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x5185;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4ED6;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5668;&#x5B98;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x3068;. &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x76F4;&#x63A5; 3 &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x89AA;&#x682A;&#x304B;&#x3089;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x4F53;&#x304B;&#x3089;&#x7D42;&#x4E86;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5C02;&#x9580;&#x306E; ER &#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x95A2;&#x6570;&#x3067;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

20 &#x2103; &#x3067;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x88C5;&#x7F6E;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x5206;&#x5E03;&#x51FA;&#x53E3;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x3055;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3002;

&#xC12D;&#xC528; 20&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC140; &#xC7A0;&#xBCF5;&#xAE30; Golgi &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xC1A1; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558; &#xACE0; &#xCD9C;&#xAD6C; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC744; &#xC99D;&#xD3ED;. &#xC6B0;&#xB9AC; EM &#xB2E8;&#xCE35; &#xC774;&#xC5B4;&#xC11C; 20&#xB3C4; C &#xBE14;&#xB85D;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; Golgi&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC9C1;&#xB82C; &#xC139;&#xC158; &#xC7AC;&#xAC74; NRK &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC885;&#xB8CC;. &#xC628;&#xB3C4; &#xCC28;&#xB2E8; &#xC140;&#xC5D0; Golgi &#xAD6C;&#xC870; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC740; 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; cisternae&#xC5D0; &#xD070; &#xBD88; &#xB8E9; &#xD55C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC2A4;&#xD0DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC606;&#xC73C;&#xB85C; &#xD655;&#xC7A5; &#xD558; &#xACE0; &#xC77C;&#xBC18; &#xB450;&#xAED8; &#xB2E4;&#xB978; &#xB204;&#xC801;&#xB41C; Golgi cisternae&#xC640;&#xC758; &#xC5F0;&#xD569;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &quot;cisternal&quot; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC5F0;&#xC18D;. &#xBD88; &#xB8E9; &#xD55C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864; &#xC140;&#xC758; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; cisternae&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC218;&#xC9C1; &#xD655;&#xC7A5; tubules &#xC720;&#xC0AC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; tubules&#xB294; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xACB0; &#xC11D; &#xC140; &#xC628;&#xB3C4; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBD88; &#xB8E9; &#xD55C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xACFC; &#xC138; cisternae &#xC804;&#xBB38;&#xB41C; &#xC5B4;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD611;&#xD68C;&#xC640; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; cisterna&#xB9CC;&#xC5D0; &#xC2F9;&#xC774; clathrin &#xCF54;&#xD305;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4;&#xB85C; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Immunogold &#xB77C;&#xBCA8; &#xBC0F; immunoblots &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; Golgi &#xB9C8;&#xCEE4; &#xBC0F; &#xC911;&#xAC04;-&#xD06C;&#xAC8C; &#xC800;&#xD558;&#xB294; Golgi &#xB0B4; &#xB610;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; organelles &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC7AC;&#xBD84;&#xBC30;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC99D;&#xAC70;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; Golgi&#xC758; &#xC885;&#xB8CC; 3 &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; cisternae&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C1;&#xC811; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8; &#xC804;&#xBB38;&#xB41C; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; Golgi &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Golgi&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; 20&#xB3C4; c &#xAE30;&#xC790; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xCD9C;&#xAD6C; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;.

Incubar las c&eacute;lulas a 20 grados C bloquea transporte fuera del complejo de Golgi y amplifica los compartimientos de salida. Hemos utilizado el bloque de 20 grados C, seguido de la tomograf&iacute;a de la EM y reconstrucci&oacute;n de la secci&oacute;n serial, para estudiar la estructura de Golgi salir sitios en las c&eacute;lulas de la NRK. La caracter&iacute;stica dominante de la estructura de Golgi en c&eacute;lulas de temperatura-bloqueado es la presencia de grandes dominios abultadas en las cisternas de transporte m&aacute;s tres. Estos dominios se extienden lateralmente de la pila y son continuos con dominios &quot;cisternal&quot; que mantienen grueso normal y alineaci&oacute;n con las otras cisternas de Golgi apiladas. Los dominios abultados no se asemejan a los t&uacute;bulos perpendicular extensibles asociados a las trans-cisternas de las c&eacute;lulas del control. Estos t&uacute;bulos est&aacute;n completamente ausentes en c&eacute;lulas de temperatura-bloqueado. Las tres cisternas con abultada dominios pueden identificarse como trans por su asociaci&oacute;n con ER especializada y la presencia de cogollos recubiertos de clatrina en la cisterna de transporte m&aacute;s solamente. El etiquetado de Immunogold y immunoblots muestran una degradaci&oacute;n significativa de un intermedio y un marcador de trans-Golgi sin pruebas de su redistribuci&oacute;n en el Golgi o a otros organelos. Estos datos sugieren que la salida del Golgi ocurre directamente tres trans-cisternas y eso ER especializada juega un papel importante en la funci&oacute;n de trans-Golgi.

Estructura del Golgi y distribuci&oacute;n de las mol&eacute;culas de reportero a 20 grados C revela la complejidad de los compartimientos de salida.

3D &#x7535;&#x5B50;&#x5C42;&#x6790;&#x6210;&#x50CF;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x590D;&#x5408;&#x4F53;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4E86;&#x56DB;&#x4E2A;&#x529F;&#x80FD;&#x9884;&#x6D4B; (1)&#x3002;&#x4ECE;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x7684;&#x6392;&#x5E8F;&#x548C;&#x9000;&#x51FA;&#x7F51;&#x7AD9;&#x5305;&#x62EC;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6216;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x8DE8;-cisternae (2)&#x3002;&#x505C;&#x9760;&#x5728;&#x72EC;&#x8054;&#x4F53;&#x8138;&#x548C;&#x5206;&#x6563;&#x7684;&#x8DE8; cisternae &#x6C34;&#x6CE1;&#x94A2;&#x7BA1;&#x96C6;&#x7FA4;&#x7684;&#x534F;&#x8C03; &#xFF08;3&#xFF09;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#xFF0C;&#x8FD0;&#x8F93;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x548C;&#x9000;&#x51FA;&#xFF0C;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x4E0D;&#x540C;&#x751F;&#x7406;&#x72B6;&#x6001;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5728;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x7EC4;&#x7EC7; &#xFF08;4&#xFF09;&#x3002;&#x4E13;&#x95E8;&#x7684;&#x8DE8; ER &#x4E2D;&#x795E;&#x7ECF;&#x9170;&#x80FA;&#x8FD0;&#x9001;&#x5230;&#x9798;&#x78F7;&#x8102;&#x5408;&#x6210;&#x9176;&#x5728;&#x8DE8;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x819C;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x795E;&#x7ECF;&#x9187;&#x78F7;&#x8102;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x5BCC;&#x57DF;&#x7684;&#x53D7;&#x89C4;&#x7BA1;&#x6392;&#x5E8F;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x3002;&#x73B0;&#x5728;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F7F;&#x7528;&#x5404;&#x79CD;&#x529F;&#x80FD;&#x5F3A;&#x5927;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x5206;&#x5B50;&#x5DE5;&#x5177;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x9884;&#x6D4B;&#x3002;

&#x9884;&#x6D4B;&#x4ECE;&#x7ED3;&#x6784;&#x529F;&#x80FD;&#xFF1A; &#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x590D;&#x5408;&#x4F53;&#x7684;&#x4E09;&#x7EF4;&#x7ED3;&#x6784;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

3D electron tomography studies of the structure of the mammalian Golgi complex have led to four functional predictions (1). The sorting and exit site from the Golgi comprises two or three distinct trans-cisternae (2). The docking of vesicular-tubular clusters at the cis-face and the fragmentation of trans-cisternae are coordinated (3). The mechanisms of transport through, and exit from, the Golgi vary with physiological state, and in different cells and tissues (4). Specialized trans-ER functions in the delivery of ceramide to sphingomyelin synthase in the trans-Golgi membrane, for the regulated sorting via sphingolipid-cholesterol-rich domains. These structure-based predictions can now be tested using a variety of powerful cell and molecular tools.

Predicting function from structure: 3D structure studies of the mammalian Golgi complex.

Les &eacute;tudes de tomographie &eacute;lectronique 3D de la structure de l&#39;appareil de Golgi mammif&egrave;res ont conduit &agrave; quatre pr&eacute;dictions fonctionnelles (1). Le site de tri et de la sortie de l&#39;appareil de Golgi est compos&eacute; de deux ou trois distinctes trans-cisternes (2). L&#39;amarrage de grappes tubulaires-v&eacute;siculaires &agrave; la face cis et la fragmentation de trans-saccules sont coordonn&eacute;s (3). Les m&eacute;canismes de transport &agrave; travers et sortie de, l&#39;appareil de Golgi changent avec l&#39;&eacute;tat physiologique et dans diff&eacute;rentes cellules et de tissus (4). Fonctions trans-ER sp&eacute;cialis&eacute;e dans la livraison du c&eacute;ramide synthase de sphingomy&eacute;line dans la membrane de la trans-Golgi, pour le tri r&eacute;glement&eacute; par domaines de sphingolipides-riches en cholest&eacute;rol. Ces pr&eacute;dictions bas&eacute;e sur la structure peuvent maintenant &ecirc;tre test&eacute;es &agrave; l&#39;aide d&#39;une vari&eacute;t&eacute; de cellule puissant et outils mol&eacute;culaires.

Pr&eacute;dire la fonction de structure : &eacute;tudes sur la structure 3D de l&#39;appareil de Golgi chez les mammif&egrave;res.

Die Vorhersage von Struktur-Funktion: 3D-Struktur Studium der S&#xE4;ugetier-Golgi-Komplex.

Studi tomografia 3D elettrone della struttura del complesso di Golgi dei mammiferi hanno portato a quattro previsioni funzionali (1). Il sito di ordinamento e di uscita dal Golgi comprende due o tre distinte trans-destino (2). L&#39;attracco di ammassi vescicolari tubolare presso il cis-viso e la frammentazione del trans-destino sono coordinati (3). I meccanismi di trasporto attraverso e uscita dal, il Golgi variano con stato fisiologico e in diverse cellule e tessuti (4). Funzioni trans-ER specializzata nella consegna di ceramide di sfingomielina sintasi nella membrana trans-Golgi, per l&#39;ordinamento regolato tramite domini ricchi di sfingolipidi-colesterolo. Queste previsioni basate su struttura ora possono essere testate utilizzando una variet&agrave; di strumenti molecolari e potente cella.

Predire la funzione di struttura: gli studi della struttura 3D del complesso di Golgi dei mammiferi.

3 D &#x96FB;&#x5B50;&#x30C8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x7814;&#x7A76;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x3001;4 &#x3064;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x4E88;&#x6E2C; (1) &#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E26;&#x3079;&#x66FF;&#x3048;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x51FA;&#x53E3;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;, &#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x4F53;&#x304B;&#x3089; 2 &#x3064;&#x307E;&#x305F;&#x306F; 3 &#x3064;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;-&#x89AA;&#x682A; (2) &#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5C0F;&#x80DE;&#x6027;&#x7BA1;&#x72B6;&#x306E;&#x96C6;&#x308A; cis &#x9854;&#x3068;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x89AA;&#x682A;&#x306E;&#x65AD;&#x7247;&#x5316;&#x306E;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x3044;&#x308B;&#x5354;&#x8ABF; (3)&#x3002;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x3001;&#x8F38;&#x9001;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3068;&#x51FA;&#x53E3;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x4F53;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x72B6;&#x614B;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3084;&#x7D44;&#x7E54; (4)&#x3002;&#x30BB;&#x30E9;&#x30DF;&#x30C9;&#x306E;&#x914D;&#x4FE1;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B4;&#x8102;&#x8CEA;-&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;-&#x30EA;&#x30C3;&#x30C1; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30BD;&#x30FC;&#x30C8; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9; &#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x819C;, &#x30B9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B4;&#x30DF;&#x30A8;&#x30EA;&#x30F3;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306B;&#x7279;&#x6B8A;&#x306A;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9; ER &#x6A5F;&#x80FD;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x4E88;&#x6E2C;&#x306F;&#x4ECA;&#x3001;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x3084;&#x5206;&#x5B50;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x95A2;&#x6570;&#x69CB;&#x9020;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x4E88;&#x6E2C;: &#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x7ACB;&#x4F53;&#x69CB;&#x9020;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

&#xD3EC;&#xC720;&#xB958; Golgi &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601; &#xC5F0;&#xAD6C; 4 &#xAE30;&#xB2A5; &#xC608;&#xCE21; (1)&#xC744; &#xC774;&#xB04C;&#xC5B4; &#xB0C8;&#xB2E4;. &#xACE0; Golgi&#xC5D0;&#xC11C; &#xC815;&#xB82C; &#xBC0F; &#xCD9C;&#xAD6C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xB450;&#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4;-cisternae (2) &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Cis &#xC5BC;&#xAD74;&#xACFC; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; cisternae&#xC758; &#xC870;&#xAC01;&#xD654;&#xC5D0; &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; &#xAD00; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xC758; &#xB3C4;&#xD0B9;&#xC740; &#xC870;&#xC815; (3). &#xD1B5;&#xD574;, &#xC804;&#xC1A1; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xBC0F; &#xCD9C;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; Golgi&#xB294; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xC0C1;&#xD0DC;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB2E4;&#xB978; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC870;&#xC9C1; (4) &#xB2E4;. &#xC138; &#xB77C;&#xB9C8; &#xC774;&#xB4DC; sphingomyelin synthase &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; Golgi &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; sphingolipid &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB41C; &#xC815;&#xB82C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC30;&#xB2EC; &#xC804;&#xBB38;&#xB41C; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4; &#xAE30;&#xB2A5;. &#xC774; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xB454; &#xC608;&#xCE21; &#xC774;&#xC81C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xBD84;&#xC790; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC608;&#xCE21; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xB2A5;: &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; Golgi &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xAD6C;&#xC870; &#xC5F0;&#xAD6C;.

Estudios de tomograf&iacute;a electr&oacute;nica 3D de la estructura del complejo de Golgi mam&iacute;feros han provocado cuatro predicciones funcionales (1). El sitio de la clasificaci&oacute;n y salida desde el Golgi compone de dos o tres distintos trans-cisternas (2). El acoplamiento de racimos vesiculares-tubulares en la cara cis y la fragmentaci&oacute;n de trans-cisternas se coordinan (3). Los mecanismos de transporte a trav&eacute;s de y salida de, el Golgi var&iacute;an con el estado fisiol&oacute;gico y en diferentes c&eacute;lulas y tejidos (4). Funciones especializadas trans-ER en la entrega de la ceramida sintasa de esfingomielina en la membrana de trans-Golgi, para la clasificaci&oacute;n regulada mediante dominios ricos en colesterol y esfingol&iacute;pidos. Ahora pueden probar estas predicciones basadas en la estructura usando una variedad de c&eacute;lula potente y herramientas moleculares.

Predicci&oacute;n de la funci&oacute;n de la estructura: estudios de la estructura 3D de los mam&iacute;fero de Golgi.

&#x8DE8;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x77E9;&#x9635;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x4E00;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x52A8;&#x6001;&#x5173;&#x8054;&#x8DE8;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x548C;&#x60F3;&#x8981;&#x53C2;&#x4E0E;&#x987A;&#x884C;&#x548C;&#x9006;&#x884C;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x4EA4;&#x901A;&#x3001; &#x4EE5;&#x53CA;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x548C;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x7ED3;&#x6784;&#x7EF4;&#x62A4;&#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#x3002;GMx33 &#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x8DE8;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x9762;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x662F;&#x76EE;&#x524D;&#x8F83;&#x5927;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6C60;&#x4E2D;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E; GMx33 &#x662F;&#x52A8;&#x6001;&#x5173;&#x8054;&#x8DE8;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x77E9;&#x9635;&#xFF0C;&#x5C06;&#x5173;&#x8054;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5728;&#x6570;&#x79D2;&#x5185;&#x4E0E;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x907F;&#x514D;&#x8BEF;&#x5165;&#x6B67;&#x9014;&#x3002;GMx33 &#x53EF;&#x4EE5;&#x8DE8;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x57FA;&#x8D28;&#x4E0A;&#x7684; GTPgammaS&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x5176;&#x534F;&#x4F1A;&#x8C03;&#x8282;&#x50CF;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5176;&#x4ED6;&#x57FA;&#x8D28;&#x86CB;&#x767D;&#x7684; GTP &#x4F9D;&#x8D56;&#x65B9;&#x5F0F;&#x9501;&#x5B9A;&#x3002;&#x7528;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x50CF;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; GMx33 &#x9000;&#x51FA;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x4F34;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x548C; GMx33 &#x8FD9;&#x4E9B;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x5185;&#x8DE8;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x4ECE;&#x9694;&#x79BB;&#x6210;&#x8F83;&#x5C0F;&#x7684;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x53CA;&#x6C34;&#x6CE1;&#x8DDF;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x7684;&#x788E;&#x7247;&#x3002;&#x5185;&#x56CA;&#x6CE1;&#x4F53;&#x5916;&#x840C;&#x82BD;&#x53CD;&#x5E94;&#x751F;&#x6210;&#xFF0C;GMx33 &#x4ECD;&#x7136;&#x9694;&#x79BB;&#x6709;&#x65F6;&#x5305;&#x542B; Golgin 245 matrixlike &#x5C3E;&#x5730;&#x533A;&#x3002;&#x6B64;&#x8DE8;&#x77E9;&#x9635;&#x5F80;&#x5F80;&#x94FE;&#x63A5;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#xFF0C;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5C0F;&#x6CE1;&#x3002;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E; GMx33 &#x662F;&#x8DE8;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x77E9;&#x9635;&#x7684;&#x6210;&#x5458;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7EBF;&#x7D22;&#x5173;&#x4E8E;&#x8DE8;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x77E9;&#x9635;&#x5728;&#x6392;&#x5E8F;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x9000;&#x51FA;&#x3002;

GMx33 &#x5C06;&#x4E0E;&#x8DE8;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x77E9;&#x9635;&#x4EE5;&#x52A8;&#x6001;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5728;&#x9000;&#x51FA;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x7684;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x5185;&#x8FDB;&#x884C;&#x6392;&#x5E8F;&#x3002;

The trans-Golgi matrix consists of a group of proteins dynamically associated with the trans-Golgi and thought to be involved in anterograde and retrograde Golgi traffic, as well as interactions with the cytoskeleton and maintenance of the Golgi structure. GMx33 is localized to the cytoplasmic face of the trans-Golgi and is also present in a large cytoplasmic pool. Here we demonstrate that GMx33 is dynamically associated with the trans-Golgi matrix, associating and dissociating with the Golgi in seconds. GMx33 can be locked onto the trans-Golgi matrix by GTPgammaS, indicating that its association is regulated in a GTP-dependent manner like several other Golgi matrix proteins. Using live-cell imaging we show that GMx33 exits the Golgi associated with tubules and within these tubules GMx33 segregates from transmembrane proteins followed by fragmentation of the tubules into smaller tubules and vesicles. Within vesicles produced by an in vitro budding reaction, GMx33 remains segregated in a matrixlike tail region that sometimes contains Golgin-245. This trans-matrix often links a few vesicles together. Together these data suggest that GMx33 is a member of the trans-Golgi matrix and offer clues regarding the role of the trans-Golgi matrix in sorting and exit from the Golgi.

GMx33 associates with the trans-Golgi matrix in a dynamic manner and sorts within tubules exiting the Golgi.

La matrice de trans-Golgi se compose d&#39;un groupe de prot&eacute;ines dynamiquement li&eacute; avec le trans-Golgi et seraient impliqu&eacute;s dans ant&eacute;rograde et r&eacute;trograde trafic de Golgi, ainsi que les interactions avec le cytosquelette et la maintenance de la structure de l&#39;appareil de Golgi. GMx33 est localis&eacute; sur la face cytoplasmique de la trans-Golgi et est &eacute;galement pr&eacute;sent dans une grande piscine cytoplasmique. Nous d&eacute;montrons que GMx33 est dynamiquement li&eacute;e &agrave; la matrice de la trans-Golgi, associer et dissocier avec l&#39;appareil de Golgi en quelques secondes. GMx33 peut &ecirc;tre verrouill&eacute; sur la matrice de trans-Golgi par GTPS, indiquant que son association est r&eacute;glement&eacute;e de mani&egrave;re GTP-d&eacute;pendante, comme plusieurs autres prot&eacute;ines de la matrice Golgi. En utilisant l&#39;imagerie de cellules vivantes, nous montrons que GMx33 sorties le Golgi associ&eacute; de tubules et au sein de ces tubules GMx33 s&eacute;pare de prot&eacute;ines transmembranaires suivie de fragmentation des tubules en plus petits tubules et v&eacute;sicules. Dans les v&eacute;sicules produites par une r&eacute;action in vitro en herbe, GMx33 reste s&eacute;par&eacute; dans une r&eacute;gion matrixlike queue qui contient parfois Golgin-245. Cette trans-matrice relie souvent quelques v&eacute;sicules. Ensemble, ces donn&eacute;es semblent indiquer que GMx33 est un membre de la matrice de trans-Golgi et offrent des indices concernant le r&ocirc;le de la matrice de trans-Golgi dans le tri et la sortie de l&#39;appareil de Golgi.

GMx33 associe la matrice trans-Golgi de fa&ccedil;on dynamique et trie dans les tubules de sortie de l&#39;appareil de Golgi.

Die Trans-Golgi-Matrix besteht aus einer Gruppe von Proteinen, die dynamisch mit der Trans-Golgi und dachte in Anterograde und retrograde Golgi-Verkehr, sowie Interaktionen mit dem Zytoskelett und Wartung der Golgi-Struktur eingebunden. GMx33 ist der zytoplasmatischen Gesicht der Trans-Golgi lokalisiert und ist auch in einem gro&szlig;en zytoplasmatischen Pool. Hier zeigen wir, dass GMx33 der Trans-Golgi-Matrix, dynamisch zugeordnet ist, zuordnen und man mit der Golgi in Sekunden distanziert. GMx33 kann auf der Trans-Golgi-Matrix gesperrt werden, indem GTPgammaS, darauf hinweist, dass seine Verbindung GTP-abh&auml;ngigen wie mehrere andere Golgi-Matrix-Proteine geregelt ist. Mit Leben-Zelle Darstellung, die wir zeigen, dass GMx33 Ausg&auml;nge der Golgi Tubuli zugeordnete und innerhalb dieser Tubuli GMx33 abgrenzt von Transmembranproteine wird gefolgt von Fragmentierung der Tubuli in kleineren Tubuli und Bl&auml;schen. Innerhalb Bl&auml;schen, die von einer in-vitro-Knospen-Reaktion hergestellt bleibt GMx33 in einer matrixlike Schwanz-Region, die manchmal Golgin-245 enth&auml;lt getrennt. Diese Trans-Matrix verbindet oft ein paar Bl&auml;schen. Gemeinsam empfehlen diese Daten GMx33 ist Mitglied der Trans-Golgi-Matrix und bieten Hinweise auf die Rolle der Trans-Golgi-Matrix bei der Sortierung und Ausfahrt aus dem Golgi.

GMx33 ordnet die Trans-Golgi-Matrix auf dynamische Weise und innerhalb der Tubuli beenden die Golgi sortiert.

La matrice di trans-Golgi &egrave; costituito da un gruppo di proteine associate con la trans-Golgi e pensato per essere coinvolti in anterograda e retrograda Golgi traffico, cos&igrave; come le interazioni con il citoscheletro e la manutenzione della struttura Golgi dinamicamente. GMx33 &egrave; localizzato alla faccia citoplasmatica della trans-Golgi ed &egrave; presente anche in una grande piscina citoplasmatica. Qui dimostriamo che GMx33 associato dinamicamente la matrice trans-Golgi, associazione e dissociazione con il Golgi in pochi secondi. GMx33 pu&ograve; essere bloccato sulla matrice trans-Golgi da GTPgammaS, che indica che l&#39;associazione &egrave; regolata in maniera GTP-dipendenti come diverse altre proteine della matrice Golgi. Usando live cell imaging che mostriamo che GMx33 uscite il Golgi associato a tubuli e all&#39;interno di questi tubuli GMx33 segrega da proteine transmembrana seguita dalla frammentazione dei tubuli in piccoli tubuli e vescicole. All&#39;interno di vescicole prodotte da una reazione in vitro in erba, GMx33 rimane segregata in una regione matrixlike coda che a volte contiene Golgin-245. Questa trans-matrice spesso vescicole qualche collega. Insieme, questi dati suggeriscono che GMx33 &egrave; un membro della matrice trans-Golgi e offrire indizi riguardanti il ruolo della matrice trans-Golgi nell&#39;ordinamento e uscire dal Golgi.

GMx33 associa la matrice trans-Golgi in modo dinamico e ordina all&#39;interno dei tubuli uscendo il Golgi.

&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8; &#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AF;&#x30B9;&#x52D5;&#x7684;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x524D;&#x5411;&#x6027;&#x3068;&#x9006;&#x884C;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8; &#x30C8;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x3068;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C6;&#x30CA;&#x30F3;&#x30B9;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;GMx33 &#x306F;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9; &#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x88C5;&#x7F6E;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x9854;&#x306B;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x5927;&#x578B;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30D7;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F; GMx33 &#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x3068;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x79D2;&#x3067;&#x89E3;&#x96E2;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8; &#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x52D5;&#x7684;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;GMx33 &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8; &#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x4E0A;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x5354;&#x4F1A;&#x305D;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8; &#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A; GTP &#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x306B;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059; GTPgammaS &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x9054;&#x306F; GMx33 &#x51FA;&#x53E3;&#x3001;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x7D30;&#x7BA1;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x7BA1;&#x5185; GMx33 &#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x96E2;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x4F4F;&#x30BB;&#x30EB;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x6295;&#x5C04;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x7D30;&#x7BA1;&#x306E;&#x65AD;&#x7247;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x7D30;&#x7BA1;&#x3068;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306B;&#x7D9A;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;In vitro &#x3067;&#x306E;&#x51FA;&#x82BD;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x751F;&#x6210;&#x30D9;&#x30B7;&#x30AF;&#x30EB;&#x5185; GMx33 &#x6642;&#x3005; &#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x30F3; 245 &#x3092;&#x542B;&#x3080; matrixlike &#x30C6;&#x30FC;&#x30EB;&#x9818;&#x57DF;&#x3067;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x307E;&#x307E;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9; &#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x3092;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F; GMx33 &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x884C;&#x5217;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x4E26;&#x3079;&#x66FF;&#x3048;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8; &#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306E;&#x624B;&#x304C;&#x304B;&#x308A;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x304B;&#x3089;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x4F53;&#x3092;&#x7D42;&#x4E86;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

GMx33&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x884C;&#x5217;&#x306B;&#x52D5;&#x7684;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3001;, &#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x4F53;&#x7D42;&#x4E86;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x7BA1;&#x5185;&#x3092;&#x4E26;&#x3079;&#x66FF;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; Golgi &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB3D9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; Golgi&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xD558; &#xACE0; &#xCC38;&#xAC00;&#xC790;&#xC640; &#xC5ED;&#xD589; Golgi &#xAD50;&#xD1B5;&#xC73C;&#xB85C; cytoskeleton &#xBC0F; Golgi &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; &#xC720;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xC218;&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC0DD;&#xAC01;&#xC758; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. GMx33 &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; Golgi&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xC5BC;&#xAD74;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xBC0F; &#xB300;&#xD615; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xC218;&#xC601;&#xC7A5;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xC788;&#xB294;&#xC9C0;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC11C; Gmx33&#xC740; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; Golgi &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4;&#xC640; &#xB3D9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD558; &#xACE0; &#xCD08;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; Golgi&#xC640; dissociating &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Gmx33&#xC758; &#xC5F0;&#xACB0; &#xCC98;&#xB7FC; &#xB2E4;&#xB978; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; Golgi &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; GTP&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xADDC;&#xC81C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; Gtpgammas&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; Golgi &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC7A0;&#xAE00; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC870;&#xAC01;&#xD654;&#xB294; tubules&#xC758; tubules &#xC791;&#xACE0; vesicles&#xB85C; &#xB4A4; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC6B0;&#xB9AC; GMx33 &#xCD9C;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; Golgi tubules&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; tubules &#xB0B4; GMx33 &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD45C;&#xC2DC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xCCB4; &#xC678; &#xC2E0;&#xC9C4; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xB294; &#xC18C;&#xD3EC; &#xB0B4; GMx33 &#xAC00;&#xB054; &#xD3EC;&#xD568; Golgin-245 matrixlike &#xAF2C;&#xB9AC; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCC28;&#xBCC4; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xC885;&#xC885; &#xBA87; &#xC18C;&#xD3EC;&#xB97C; &#xD568;&#xAED8; &#xB9C1;&#xD06C;. &#xD568;&#xAED8; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; GMx33 &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; Golgi &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0; &#xC815;&#xB82C;&#xC5D0; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; Golgi &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0; &#xAD00;&#xD55C; &#xB2E8;&#xC11C;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xACE0;&#xB294; Golgi&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Gmx33&#xC640; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; Golgi &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xB3D9;&#xC801; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD558;&#xB294; tubules&#xB97C; Golgi &#xC885;&#xB8CC; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC815;&#xB82C;.

La matriz de trans-Golgi consiste en un grupo de prote&iacute;nas din&aacute;micamente asociados con el trans-Golgi y probablemente implicados en anter&oacute;grada y retr&oacute;grada tr&aacute;fico de Golgi, as&iacute; como las interacciones con el citoesqueleto y el mantenimiento de la estructura de Golgi. GMx33 se localiza en la cara citoplasm&aacute;tica de la trans-Golgi y tambi&eacute;n est&aacute; presente en una gran piscina citopl&aacute;smica. Aqu&iacute; demostramos que GMx33 est&aacute; din&aacute;micamente relacionada con la matriz de trans-Golgi, asociar y disociar con el Golgi en segundos. GMx33 se puede bloquear en la matriz de trans-Golgi GTP&gamma;S, indicando que su asociaci&oacute;n est&aacute; regulada de forma GTP-dependiente como varias otras prote&iacute;nas de la matriz de Golgi. Utilizando im&aacute;genes de c&eacute;lulas vivas, que demostramos que GMx33 salidas el Golgi asociada a los t&uacute;bulos y dentro de estos t&uacute;bulos GMx33 segrega de prote&iacute;nas de transmembrana seguida por fragmentaci&oacute;n de los t&uacute;bulos en peque&ntilde;os t&uacute;bulos y ves&iacute;culas. Dentro de las ves&iacute;culas producidas por una reacci&oacute;n de brotaci&oacute;n in vitro, GMx33 queda segregado en una regi&oacute;n de la cola stepwise que a veces contiene Golgin-245. Esta matriz trans a menudo enlaza unas ves&iacute;culas. Juntos, estos datos sugieren que GMx33 es un miembro de la matriz de trans-Golgi y ofrecer pistas sobre el papel de la matriz de trans-Golgi en clasificaci&oacute;n y salen del Golgi.

GMx33 asociados con la matriz de trans-Golgi de una manera din&aacute;mica y clasifica dentro de los t&uacute;bulos salir al Golgi.

&#x5256;&#x5207;&#x51B7;&#x51BB;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7684;&#x4F4E;&#x6E29;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x662F;&#x6BD4;&#x5BA4;&#x6E29;&#x5256;&#x5207;&#x7684;&#x5D4C;&#x5165;&#x5851;&#x6599;&#x6837;&#x54C1;&#x66F4;&#x5177;&#x6311;&#x6218;&#x6027;&#x3002;&#x5982;&#x8BE5;&#x793A;&#x4F8B;&#x5FC5;&#x987B;&#x4FDD;&#x6301;&#x5F88;&#x51B7; (&lt;-130 &#x6444;&#x6C0F;&#x5EA6;&#xFF09;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x6709;&#x65E0;&#x4F9D;&#x636E;&#x5404;&#x8282;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6D6E;&#x52A8;&#xFF0C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5207;&#x65AD;&#x7684;&#x6DB2;&#x4F53;&#xFF0C;&#x5C06;&#x4ECE;&#x5200;&#x8FB9;&#x7F18;&#x7684;&#x90E8;&#x5206;&#x8F6C;&#x79FB;&#x5230;&#x7F51;&#x683C;&#x662F;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x66F4;&#x96BE;&#x7684;&#x6B65;&#x9AA4;&#x4E4B;&#x4E00;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x96C7;&#x4E86;&#x5FAE;&#x64CD;&#x4F5C;&#x673A;&#x5668;&#x4EBA;&#x6301;&#x6709;&#x548C;&#x63A7;&#x5236;&#x4F4E;&#x6E29;&#x90E8;&#x5206;&#xFF0C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x628A;&#x8FD9;&#x628A;&#x5200;&#x6765;&#x3002;&#x8FD9;&#x5141;&#x8BB8;&#x7684;&#x5207;&#x524A;&#x901F;&#x5EA6;&#x6BD4;&#x901A;&#x5E38;&#x7528;&#x5728;&#x73BB;&#x7483;&#x4F53;&#x51B0;&#x51BB;&#x5207;&#x7247;&#xFF0C;&#x5728;&#x5207;&#x5272;&#xFF0C;&#x4FBF;&#x5229;&#x53EF;&#x91CD;&#x590D;&#x8282;&#x5230;&#x7F51;&#x683C;&#x4E0A;&#x7684;&#x4E1D;&#x5E26;&#x5B89;&#x7F6E;&#x671F;&#x95F4;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x66F4;&#x597D;&#x5730;&#x63A7;&#x5236;&#x3002;&#x529F;&#x80FD;&#x533A;&#x662F;&#x4E0D;&#x65F6;&#x7D27;&#x5F20;&#x5728;&#x6574;&#x4E2A;&#x5207;&#x5272;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x964D;&#x4F4E;&#x6298;&#x53E0;&#x6216;&#x538B;&#x7F29;&#xFF0C;&#x6240;&#x56FA;&#x6709;&#x7684;&#x73BB;&#x7483;&#x4F53;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6280;&#x672F;&#x6240;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x989D;&#x5916;&#x7684;&#x63A7;&#x5236;&#x5BB9;&#x6613;&#x4E3A;&#x591A;&#x4E2A;&#x529F;&#x80FD;&#x533A;&#x653E;&#x5230;&#x5355;&#x4E2A;&#x7684;&#x7F51;&#x683C;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x53EF;&#x4EE5;&#x68C0;&#x67E5;&#x548C;&#x6210;&#x50CF;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x4F1A;&#x8BDD;&#x671F;&#x95F4;&#x7684;&#x8282;&#x6570;&#x3002;&#x5B83;&#x751A;&#x81F3;&#x5141;&#x8BB8;&#x4E32;&#x884C;&#x4F4E;&#x6E29;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x3002;&#x4E3A;&#x6B64;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x662F;&#x4F4E;&#x6E29;-&#x9664;&#x6389;&#x7684;&#x73BB;&#x7483;&#x4F53;&#x90E8;&#x5206;&#x8FDB;&#x5C55;&#x3002;

&#x73BB;&#x7483;&#x4F53;&#x51B0;&#x51BB;&#x5207;&#x7247;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x4E86;&#x5FAE;&#x64CD;&#x4F5C;&#x673A;&#x5668;&#x4EBA;&#x3002;

Sectioning vitrified cells and tissues for cryo-electron microscopy is more challenging than room-temperature sectioning of plastic-embedded samples. As the sample must be kept very cold (<-130 degrees C) and because there is no liquid upon which the sections can float as they are cut, transferring the sections from the knife edge to a grid is one of the more difficult steps in the process. We employed a micromanipulator to hold and control the cryo-sections as they come off the knife. This allows slower cutting speeds than are typically used in vitreous cryo-sectioning and contributes to better control during cutting, which facilitates repeatable placement of a ribbon of sections onto a grid. The ribbon is kept under tension during the entire cutting process, which may decrease folding and/or compression, features that are inherent to vitreous sections. Furthermore, the added control afforded by this technique makes it easier for multiple ribbons to be placed on a single grid, thereby increasing the number of sections that can be examined and imaged during a microscopy session. It even allows for serial cryo-electron microscopy. As such, this approach is an advance in the cryo-microtomy of vitreous sections.

Vitreous cryo-sectioning of cells facilitated by a micromanipulator.

Sectionnement vitrifi&eacute;s des cellules et des tissus pour cryo-microscopie &eacute;lectronique est plus difficile que la temp&eacute;rature ambiante de sectionnement des &eacute;chantillons de plastique incorpor&eacute;. Comme l&#39;&eacute;chantillon doit &ecirc;tre conserv&eacute; tr&egrave;s froid (&lt;-130 degr&eacute;s C) et parce qu&#39;il n&#39;y a aucun liquide sur lequel les sections peuvent flotter comme ils sont coup&eacute;s, transf&eacute;rant les sections de la lame de couteau &agrave; une grille est une des &eacute;tapes plus difficiles dans le processus. Nous avons utilis&eacute; un micromanipulateur pour tenir et contr&ocirc;ler les cryo-sections tel qu&#39;elles se d&eacute;tachent le couteau. Cela permet des vitesses de coupe plus lente que sont g&eacute;n&eacute;ralement utilis&eacute;s en cryo-sectionnement vitreux et contribue &agrave; un meilleur contr&ocirc;le pendant la coupe, ce qui facilite le placement reproductible d&#39;un ruban de sections sur une grille. Le ruban est maintenu sous tension pendant le processus de coupe enti&egrave;re, ce qui peut diminuer le pliage et/ou compression, caract&eacute;ristiques qui sont inh&eacute;rents aux sections vitreuses. En outre, le contr&ocirc;le ajout&eacute; offerte par cette technique le rend plus facile pour plusieurs rubans &agrave; placer sur une grille unique, ce qui augmente le nombre de sections qui peuvent &ecirc;tre examin&eacute;s et mis en image au cours d&#39;une session de microscopie. Il permet m&ecirc;me de s&eacute;rie cryo-microscopie &eacute;lectronique. Par cons&eacute;quent, cette approche est une avanc&eacute;e dans la cryo-Microtomie des sections vitreuses.

Cryo-profil&eacute;s vitreux des cellules facilit&eacute;e par un micromanipulateur.

Schneiden, verglaste Zellen und Gewebe f&uuml;r Kryo-Elektronenmikroskopie ist schwieriger als Raumtemperatur Schneiden von Kunststoff eingebettete Proben. Wie das Beispiel sehr kalt gehalten werden muss (&lt;-130 Grad C) und da es keine Fl&uuml;ssigkeit auf dem in den Abschnitten schweben k&ouml;nnen gibt, wie sie geschnitten sind, in den Abschnitten von die Messerschneide auf einem Raster &uuml;bertragen ist eine schwieriger Schritte im Prozess. Wir Besch&auml;ftigten einen Mikromanipulator zu halten und die Cryo-Abschnitte zu steuern, wie sie sich das Messer kommen. Das langsamere Schnittgeschwindigkeiten als normalerweise in glasigen Cryo-schneiden verwendet werden kann und tr&auml;gt zur besseren Kontrolle w&auml;hrend des Schneidens, die wiederholbare Platzierung eines Bandes der Abschnitte auf einem Raster erleichtert. Die Multifunktionsleiste ist unter Spannung w&auml;hrend des gesamten Schneidprozesses gehalten, die verringern k&ouml;nnen, Faltung und/oder Kompression, Features, inh&auml;rente glasigen Abschnitte sind. Dar&uuml;ber hinaus erleichtert das hinzugef&uuml;gte Steuerelement von dieser Technik geboten f&uuml;r mehrere B&auml;nder platziert werden, auf einem einzigen Gitter, wodurch die Anzahl der Abschnitte, die untersucht und w&auml;hrend einer Sitzung Mikroskopie abgebildet werden k&ouml;nnen. Es kann sogar f&uuml;r serielle Kryo-Elektronenmikroskopie. Als solche ist dieser Ansatz einen Fortschritt f&uuml;r die Kryo-Mikrotomie glasigen Abschnitte.

Glask&ouml;rper Cryo-Schneiden von Zellen, die durch einen Mikromanipulator erleichtert.

Sezionamento vetrificati di cellule e tessuti per la microscopia elettronica di cryo &egrave; pi&ugrave; impegnativo rispetto a temperatura di sezionamento dei campioni di plastica incorporato. Come il campione deve essere mantenuto molto freddo (&lt;-130 gradi C) e perch&eacute; non non c&#39;&egrave; nessun liquido su cui le sezioni possono galleggiare come sono tagliati, trasferire le sezioni da knife edge a una griglia &egrave; uno dei passaggi pi&ugrave; difficili nel processo. Abbiamo impiegato un micromanipolatore di tenere e cryo-sezioni di controllo come vengono fuori il coltello. Questo permette pi&ugrave; lenta velocit&agrave; di taglio che sono tipicamente utilizzati nel vitreo cryo-sezionamento e contribuisce al miglior controllo durante il taglio, che facilita il posizionamento ripetibile di un nastro di sezioni su una griglia. Il nastro &egrave; tenuto sotto tensione durante il processo di taglio intero, che pu&ograve; diminuire pieghevole o compressione, caratteristiche che sono inerenti alle sezioni vitrei. Inoltre, il controllo aggiunto offerto da questa tecnica rende pi&ugrave; facile per nastri multipli essere collocato su una singola griglia, aumentando cos&igrave; il numero di sezioni che possono essere esaminati e ripresi durante una sessione di microscopia. Esso consente anche per seriale crio-microscopia elettronica. Come tale, questo approccio &egrave; un anticipo in cryo-Microtomia delle sezioni vitrei.

Vitreo cryo-sezionamento delle cellule facilitata da un micromanipolatore.

&#x30AC;&#x30E9;&#x30B9;&#x56FA;&#x5316;&#x4F53;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3084;&#x7D44;&#x7E54;&#x30AF;&#x30E9;&#x30A4;&#x30AA;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306E;&#x30BB;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x5BA4;&#x6E29;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C1;&#x30C3;&#x30AF;&#x5305;&#x57CB;&#x8A66;&#x6599;&#x306E;&#x30BB;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x3088;&#x308A;&#x56F0;&#x96E3;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x6696;&#x304B;&#x3044;&#x4FDD;&#x305F;&#x308C;&#x306A;&#x3051;&#x308C;&#x3070;&#x306A;&#x3089;&#x306A;&#x3044;&#x306E;&#x3067; (&lt;-130 &deg; C) &#x6642;&#x306E;&#x30BB;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30AB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C8;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x6DB2;&#x4F53;&#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x30BB;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30CA;&#x30A4;&#x30D5; &#x30A8;&#x30C3;&#x30B8;&#x304B;&#x3089;&#x8EE2;&#x9001;&#x3059;&#x308B;&#x30B0;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x306B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x56F0;&#x96E3;&#x306A;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x4E00;&#x3064;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x4FDD;&#x6301;&#x3057;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x30AA;&#x30D5;&#x306B;&#x30CA;&#x30A4;&#x30D5;&#x304C;&#x6765;&#x308B;&#x3068;&#x30AF;&#x30E9;&#x30A4;&#x30AA; &#x30BB;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30CB;&#x30D4;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x63A1;&#x7528;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x785D;&#x5B50;&#x4F53;&#x30AF;&#x30E9;&#x30A4;&#x30AA;&#x533A;&#x5206;&#x3067;&#x901A;&#x5E38;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x308A;&#x9045;&#x3044;&#x5207;&#x524A;&#x901F;&#x5EA6;&#x3092;&#x5B9F;&#x73FE;&#x3001;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x53CD;&#x5FA9;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x914D;&#x7F6E;&#x306E;&#x30BB;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x30B0;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x4E0A;&#x306B;&#x30EA;&#x30DC;&#x30F3;&#x306E;&#x5207;&#x524A;&#x6642;&#x3088;&#x308A;&#x826F;&#x3044;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30EA;&#x30DC;&#x30F3;&#x6298;&#x308A;&#x305F;&#x305F;&#x307F;&#x306E;&#x5727;&#x7E2E;&#x3001;&#x785D;&#x5B50;&#x4F53;&#x306E;&#x30BB;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3001;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x5207;&#x524A;&#x52A0;&#x5DE5;&#x4E2D;&#x306E;&#x7DCA;&#x5F35;&#x4E0B;&#x306B;&#x4FDD;&#x6301;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x624B;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4E0E;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x691C;&#x67FB;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x30BB;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x4E2D;&#x306B;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x30BB;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x6570;&#x3092;&#x5897;&#x3084;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30B0;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x4E0A;&#x306B;&#x914D;&#x7F6E;&#x3059;&#x308B;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30EA;&#x30DC;&#x30F3;&#x3084;&#x3059;&#x304F;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB; &#x30AF;&#x30E9;&#x30A4;&#x30AA;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x7528;&#x3053;&#x3068;&#x3082;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306E;&#x9032;&#x6B69;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30A4;&#x30AA; &#x30DF;&#x30AF;&#x30ED;&#x30C8;&#x30FC;&#x30E0;&#x785D;&#x5B50;&#x4F53;&#x306E;&#x30BB;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

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&#xC720;&#xB9AC; &#xAC19;&#xC740; &#xACF3;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xB0B4;&#xB294;-&#xB2E8;&#xBA74;&#xC744; micromanipulator &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558;&#xB294; &#xC140;&#xC758;.

Seccionamiento c&eacute;lulas vitrificadas y tejidos para crio-microscop&iacute;a es m&aacute;s complejo que la temperatura de seccionamiento de muestras embebido en pl&aacute;stico. Como la muestra debe estar muy fr&iacute;a (&lt;-130 grados C) y porque no hay ning&uacute;n l&iacute;quido sobre el cual las secciones pueden flotar como se cortan, transferencia de las secciones de la navaja a una red es uno de los pasos m&aacute;s dif&iacute;ciles en el proceso. Empleamos un micromanipulador para mantener y controlar las cryo-secciones como vienen de la cuchilla. Esto permite velocidades de corte que se suelen utilizar en v&iacute;treo cryo-seccionamiento y contribuye a un mejor control durante el corte, lo que facilita la colocaci&oacute;n repetible de una cinta de secciones sobre una rejilla. La cinta se mantiene bajo tensi&oacute;n durante el proceso de corte entero, que puede disminuir plegable o compresi&oacute;n, caracter&iacute;sticas que son inherentes a las secciones v&iacute;treas. Adem&aacute;s, el control adicional que brinda esta t&eacute;cnica hace m&aacute;s f&aacute;cil para m&uacute;ltiples cintas para colocarse en una red &uacute;nica, aumentando as&iacute; el n&uacute;mero de secciones que puede ser examinado y reflejada durante una sesi&oacute;n de microscop&iacute;a. Incluso permite serial crio-microscop&iacute;a. Como tal, este enfoque es un avance en el cryo-microtom&iacute;a de secciones v&iacute;treas.

V&iacute;treo cryo-seccionamiento de c&eacute;lulas facilitado por un micromanipulador.

&#x7535;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C42;&#x626B;&#x63CF;&#x7684; immunolabeled cryosections&#x3002;

Electron tomography of immunolabeled cryosections.

Tomographie &eacute;lectronique des cryosections immunomarqu&eacute;es.

Elektronenstrahl-Tomographie des Immunolabeled Cryosections.

Tomografia di elettrone di immunolabeled cryosections.

&#x96FB;&#x5B50;&#x7DDA;&#x30C8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC; immunolabeled &#x51CD;&#x7D50;&#x5207;&#x7247;&#x3067;&#x306E;&#x3002;

Immunolabeled cryosections&#xC758; &#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Tomograf&iacute;a de electrones de immunolabeled cryosections.

&#x79EF;&#x5206;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x6267;&#x884C;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x7684;&#x5236;&#x836F;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x5E08;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x758F;&#x6C34;&#x6027;&#x53CA;&#x5176;&#x819C;&#x5D4C;&#x5165;&#x57DF;&#x4F7F;&#x5B83;&#x4EEC;&#x96BE;&#x4EE5;&#x5904;&#x7406;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x7684;&#x79EF;&#x5206;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x819C;&#x5D4C;&#x5165;&#x8DE8;&#x819C;&#x57DF;&#x7684;&#x6269;&#x5C55;&#x8986;&#x76D6;&#x6DF1;&#x5EA6;&#x7684;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x9E1F;&#x67AA;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

&#x730E;&#x67AA;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x5D4C;&#x5165;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x548C;&#x80BD;&#x7684;&#x9274;&#x5B9A;&#x3002;

Integral membrane proteins perform crucial cellular functions and are the targets for the majority of pharmaceutical agents. However, the hydrophobic nature of their membrane-embedded domains makes them difficult to work with. Here, we describe a shotgun proteomic method for the high-throughput analysis of the membrane-embedded transmembrane domains of integral membrane proteins which extends the depth of coverage of the membrane proteome.

A shotgun proteomic method for the identification of membrane-embedded proteins and peptides.

Prot&eacute;ines int&eacute;grales de membrane, effectuent des fonctions cellulaires essentielles et sont les cibles pour la majorit&eacute; des agents pharmaceutiques. Toutefois, la nature hydrophobe de leurs domaines membranaires incorpor&eacute;s les rend difficile &agrave; travailler. Nous d&eacute;crivons ici une m&eacute;thode prot&eacute;omique de fusil de chasse pour l&#39;analyse de haut-d&eacute;bit des domaines transmembranaires membrane enrob&eacute;es de prot&eacute;ines int&eacute;grales de membrane qui s&#39;&eacute;tend de la profondeur de la couverture du prot&eacute;ome membranaire.

Une m&eacute;thode prot&eacute;omique de fusil de chasse pour l&#39;identification des peptides et prot&eacute;ines membranaires incorpor&eacute;s.

Integrale Membranproteine f&uuml;hren wichtige Zellfunktionen und sind die Ziele f&uuml;r die Mehrheit der pharmazeutischen Wirkstoffen. Allerdings erschwert die hydrophobe Natur ihrer Membran eingebettete Bereiche mit arbeiten. Hier beschreiben wir eine Schrotflinte Proteomic-Methode f&uuml;r die Hochdurchsatz-Analyse der die Membran eingebettete Transmembran-Dom&auml;nen von integralen Membranproteinen, die die Tiefe der Berichterstattung &uuml;ber die Membrane Proteome erweitert.

Eine Schrotflinte Proteomic Methode zur Identifizierung von Membran eingebettete Proteine und Peptide.

Proteine integrali di membrana svolgono funzioni cellulari cruciali e sono gli obiettivi per la maggior parte dei agenti farmaceutici. Tuttavia, la natura idrofobica dei loro domini di membrana-embedded li rende difficili da lavorare. Qui, descriviamo un metodo proteomic fucile per l&#39;analisi di alto-rendimento dei domini transmembrana incorporato membrana di proteine integrali di membrana che estende la profondit&agrave; di copertura del proteoma membrana.

Un metodo di proteomic fucile per l&#39;identificazione delle proteine di membrana-embedded e peptidi.

&#x7A4D;&#x5206;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5B9F;&#x884C;&#x3057;&#x3066;&#x5927;&#x534A;&#x306E;&#x88FD;&#x85AC;&#x62C5;&#x5F53;&#x8005;&#x306E;&#x5BFE;&#x8C61;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x819C;&#x57CB;&#x3081;&#x8FBC;&#x307F;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x3067;&#x52D5;&#x4F5C;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x56F0;&#x96E3;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x819C;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30AB;&#x30D0;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B8;&#x306E;&#x6DF1;&#x3055;&#x3092;&#x62E1;&#x5F35;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x89E3;&#x6790;&#x7A4D;&#x5206;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x819C;&#x306B;&#x57CB;&#x3081;&#x8FBC;&#x307E;&#x308C;&#x305F;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x6563;&#x5F3E;&#x9283;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30FB; &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x306E;&#x6563;&#x5F3E;&#x9283;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30FC;&#x30E0;&#x6CD5;&#x3002;

&#xD1B5;&#xD569; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC218;&#xD589; &#xD558; &#xACE0; &#xC81C;&#xC57D; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8;&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBAA9;&#xD45C;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xD2B9;&#xC131; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xAE30; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6B4; &#xAC8C;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xB9C9; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC634;&#xC758; &#xCDE8;&#xC7AC;&#xC758; &#xAE4A;&#xC774; &#xD655;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xD1B5;&#xD569; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB9C9; &#xC784;&#xBCA0;&#xB514;&#xB4DC; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;&#xC758; &#xC0F7;&#xAC74; proteomic &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC758; &#xC0F7;&#xAC74; proteomic &#xBC29;&#xBC95;.

Prote&iacute;nas de membrana integral funciones celulares crucial y son los objetivos para la mayor&iacute;a de agentes farmac&eacute;uticos. Sin embargo, la naturaleza hidrof&oacute;bica de sus dominios de membrana-encajado hace dif&iacute;cil trabajar con. Aqu&iacute; se describe un m&eacute;todo de prote&oacute;mica de escopeta para el an&aacute;lisis de alto rendimiento de los dominios transmembrana embebido en membrana de prote&iacute;nas integrales de membrana que se extiende la profundidad de la cobertura del proteoma membrana.

Un m&eacute;todo de prote&oacute;mica de escopeta para la identificaci&oacute;n de p&eacute;ptidos y prote&iacute;nas de membrana-encajado.

&#x65B0;&#x751F;&#x513F; Fc &#x53D7;&#x4F53; (FcRn) &#x901A;&#x8FC7;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7684;&#x58C1;&#x5792;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x80CE;&#x513F;&#x6216;&#x65B0;&#x751F;&#x513F;&#x4F53;&#x6DB2;&#x514D;&#x75AB;&#x4E4B;&#x524D;&#x5176;&#x514D;&#x75AB;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x662F;&#x5B8C;&#x5168;&#x529F;&#x80FD;&#x4F20;&#x8F93;&#x4EA7;&#x5987; IgG&#x3002;&#x5728;&#x65B0;&#x751F;&#x9F20; FcRn IgG &#x4ECE;&#x725B;&#x5976;&#x5230;&#x8840;&#x6DB2;&#x6240;&#x8F6C;&#x8BA9;&#x57FA;&#x5E95;&#x5916;&#x5FC3;&#x5C16;-&#x5230;-&#x4FA7;&#x80DE;&#x541E;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x8DE8;&#x80A0;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6839;&#x5C16; (pH 6.0-6.5) &#x548C;&#x80A0;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x57FA;&#x5E95;&#x5916;&#x4FA7; (pH 7.4) &#x53CC;&#x65B9;&#x7684; ph &#x503C;&#x533A;&#x522B;&#x4FBF;&#x4E8E;&#x9AD8;&#x6548;&#x5355;&#x5411;&#x8FD0;&#x8F93;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A; FcRn &#x7ED1;&#x5B9A; IgG &#x5728; ph &#x503C; 6.0-6.5&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5728; pH 7 &#x6216;&#x66F4;&#x591A;&#x3002;&#x725B;&#x5976;&#x7ECF;&#x8FC7;&#x65B0;&#x751F;&#x513F;&#x80A0;&#x9053;&#xFF0C;&#x4EA7;&#x5987; IgG &#x88AB;&#x514D;&#x804C; FcRn &#x8868;&#x793A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5728;&#x8FD1;&#x7AEF;&#x5C0F;&#x80A0; &#xFF08;&#x5341;&#x4E8C;&#x6307;&#x80A0;&#x548C;&#x7A7A;&#x80A0;&#xFF09; &#xFF1B;&#x5176;&#x4F59;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x662F;&#x5438;&#x6536;&#x548C;&#x8FDC;&#x7AEF;&#x5C0F;&#x80A0; &#xFF08;&#x56DE;&#x80A0;&#xFF09; FcRn &#x9634;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9000;&#x5316;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x7535;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C42;&#x626B;&#x63CF;&#x4F7F;&#x7A7A;&#x80A0;&#x80DE;&#x541E;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x53EF;&#x89C1;&#x76F4;&#x63A5;&#x5728;&#x7A7A;&#x95F4;&#x548C;&#x65F6;&#x95F4;&#xFF0C;&#x53D1;&#x5C55;&#x65B0;&#x7684;&#x6807;&#x7B7E;&#x548C;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6620;&#x5C04;&#x5355;&#x4E2A;&#x7EB3;&#x7C73;&#x91D1;&#x6807;&#x8BB0; Fc &#x8FD0;&#x8F93;&#x5C0F;&#x6CE1;&#x5185;&#x7684;&#xFF0C;&#x5E76;&#x540C;&#x65F6;&#x901A;&#x8FC7;&#x514D;&#x75AB;&#x7279;&#x70B9;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6C34;&#x6CE1;&#x3002;&#x7535;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C42;&#x626B;&#x63CF;&#x7ED3;&#x5408;&#x975E;&#x6270;&#x52A8;&#x541E;&#x6807;&#x7B7E;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x6211;&#x4EEC;&#x80FD;&#x591F;&#x786E;&#x5207;&#x67E5;&#x660E;&#x53D7;&#x4F53;&#x7ED3;&#x5408;&#x914D;&#x4F53;&#xFF0C;&#x89E3;&#x51B3;&#x4E92;&#x8FDE;&#x6C34;&#x6CE1;&#xFF0C;&#x786E;&#x5B9A;&#x662F;&#x5426;&#x56CA;&#x6CE1;&#x662F;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x76F8;&#x5173;&#x3001; &#x51C6;&#x786E;&#x5730;&#x8DDF;&#x8E2A; IgG &#x4ECB;&#x5BFC; FcRn &#x8FD0;&#x8F93;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x63D0;&#x51FA;&#x7684;&#x8D22;&#x59D4;&#x4F1A;&#x901A;&#x8FC7;&#x7F51;&#x7EDC;&#x7684;&#x79FB;&#x52A8;&#x7EA0;&#x7F20;&#x94A2;&#x7BA1;&#x548C;&#x4E0D;&#x89C4;&#x5219;&#x7684;&#x6C34;&#x6CE1;&#xFF0C;&#x53EA;&#x6709;&#x5176;&#x4E2D;&#x6709;&#x4E9B;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x76F8;&#x5173;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5B83;&#x5C06;&#x8FC1;&#x79FB;&#x5230;&#x57FA;&#x5E95;&#x5916;&#x4FA7;&#x8868;&#x9762;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x56FE;&#x7247;&#x3002;&#x80DE;&#x541E;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x7684;&#x65B0;&#x7279;&#x70B9;&#x88AB;&#x9610;&#x660E;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x6D89;&#x53CA;&#x6CE1;&#x4F53;&#x5185;&#x90E8;&#x7684;&#x56CA;&#x6CE1;&#x7BA1;&#x548C;&#x901A;&#x8FC7;&#x7F51;&#x683C;&#x86CB;&#x767D;&#x6D82;&#x5C42;&#x5751;&#x80DE;&#x7684;&#x8FD0;&#x8F93;&#x3002;&#x65E9;&#x3001; &#x665A;&#x548C;&#x56DE;&#x6536; endosomes &#x6BCF;&#x4E2A;&#x6807;&#x8BB0;&#x8D34;&#x4E0A;&#x6807;&#x7B7E;&#x4E0D;&#x540C;&#x548C;&#x91CD;&#x53E0;&#x7684;&#x5F62;&#x6001;&#x7C7B;&#xFF0C;&#x63ED;&#x793A;&#x7A7A;&#x95F4;&#x590D;&#x6742;&#x6027;&#x8FDC;&#x85E4;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x8D29;&#x5356;&#x7684;&#x6C34;&#x6CE1;&#x3002;

&#x8DE8;&#x7535;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C42;&#x626B;&#x63CF;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x5BFC; FcRn &#x6297;&#x4F53;&#x8FD0;&#x8F93;&#x3002;

The neonatal Fc receptor (FcRn) transports maternal IgG across epithelial barriers, thereby providing the fetus or newborn with humoral immunity before its immune system is fully functional. In newborn rats, FcRn transfers IgG from milk to blood by apical-to-basolateral transcytosis across intestinal epithelial cells. The pH difference between the apical (pH 6.0-6.5) and basolateral (pH 7.4) sides of intestinal epithelial cells facilitates the efficient unidirectional transport of IgG, because FcRn binds IgG at pH 6.0-6.5 but not at pH 7 or more. As milk passes through the neonatal intestine, maternal IgG is removed by FcRn-expressing cells in the proximal small intestine (duodenum and jejunum); remaining proteins are absorbed and degraded by FcRn-negative cells in the distal small intestine (ileum). Here we use electron tomography to make jejunal transcytosis visible directly in space and time, developing new labelling and detection methods to map individual nanogold-labelled Fc within transport vesicles and simultaneously to characterize these vesicles by immunolabelling. Combining electron tomography with a non-perturbing endocytic label allowed us to conclusively identify receptor-bound ligands, resolve interconnecting vesicles, determine whether a vesicle was microtubule-associated, and accurately trace FcRn-mediated transport of IgG. Our results present a complex picture in which Fc moves through networks of entangled tubular and irregular vesicles, only some of which are microtubule-associated, as it migrates to the basolateral surface. New features of transcytosis are elucidated, including transport involving multivesicular body inner vesicles/tubules and exocytosis through clathrin-coated pits. Markers for early, late and recycling endosomes each labelled vesicles in different and overlapping morphological classes, revealing spatial complexity in endo-lysosomal trafficking.

FcRn-mediated antibody transport across epithelial cells revealed by electron tomography.

Le r&#xE9;cepteur Fc n&#xE9;onatal (FcRn) transporte les IgG maternelles &#xE0; travers les barri&#xE8;res &#xE9;pith&#xE9;liales, fournissant ainsi le f&#x153;tus ou le nouveau-n&#xE9; avec l&#x26;#39;immunit&#xE9; humorale, avant que son syst&#xE8;me immunitaire est enti&#xE8;rement fonctionnel. Chez les rats nouveau-n&#xE9;s, FcRn transf&#xE8;re IgG &#xE0; partir du lait au sang par apicale &#xE0; basolat&#xE9;rale transcytose &#xE0; travers les cellules &#xE9;pith&#xE9;liales intestinales. La diff&#xE9;rence de pH entre les apicales (pH 6,0-6,5) et basolat&#xE9;ral (pH 7,4) et d&#x26;#39;autre de cellules &#xE9;pith&#xE9;liales intestinales facilite le transport efficace unidirectionnel de l&#x26;#39;IgG, en raison FcRn lie IgG &#xE0; pH 6,0-6,5, mais pas &#xE0; un pH de 7 ou plus. Comme le lait passe &#xE0; travers l&#x26;#39;intestin n&#xE9;onatal, les IgG maternelles est &#xE9;limin&#xE9; par FcRn cellules exprimant dans l&#x26;#39;intestin gr&#xEA;le proximal (duod&#xE9;num et le j&#xE9;junum); prot&#xE9;ines restantes sont absorb&#xE9;s et d&#xE9;grad&#xE9;s par FcRn cellules n&#xE9;gatives dans l&#x26;#39;intestin gr&#xEA;le distal (il&#xE9;on). Ici, nous utilisons la tomographie &#xE9;lectronique pour faire transcytose j&#xE9;junale visible directement dans l&#x26;#39;espace et le temps, le d&#xE9;veloppement de nouveau syst&#xE8;me d&#x26;#39;&#xE9;tiquetage et les m&#xE9;thodes de d&#xE9;tection de carte individuelle Nanogold marqu&#xE9; Fc dans les v&#xE9;sicules de transport et, simultan&#xE9;ment, pour caract&#xE9;riser ces v&#xE9;sicules par immunomarquage. La combinaison de la tomographie &#xE9;lectronique avec une &#xE9;tiquette non-perturbatrice endocytose nous a permis de mani&#xE8;re concluante des r&#xE9;cepteurs ligands li&#xE9;s, de r&#xE9;soudre les v&#xE9;sicules d&#x26;#39;interconnexion, de d&#xE9;terminer si une v&#xE9;sicule &#xE9;tait associ&#xE9;e aux microtubules, et de retracer avec pr&#xE9;cision FcRn transport m&#xE9;di&#xE9; par des IgG. Nos r&#xE9;sultats brossent un tableau complexe dans lequel se d&#xE9;place &#xE0; travers les r&#xE9;seaux Fc de v&#xE9;sicules tubulaires intriqu&#xE9;s et irr&#xE9;guli&#xE8;res, dont une partie seulement sont associ&#xE9;es aux microtubules, car il migre vers la surface basolat&#xE9;rale. Les nouvelles fonctionnalit&#xE9;s de transcytose sont &#xE9;lucid&#xE9;s, y compris le transport de v&#xE9;sicules corps multiv&#xE9;siculaires int&#xE9;rieurs ou tubules et l&#x26;#39;exocytose par puits recouverts de clathrine. Marqueurs pour le recyclage au d&#xE9;but, la fin et les endosomes chacune des v&#xE9;sicules marqu&#xE9;es dans diff&#xE9;rentes qui se chevauchent et les classes morphologiques, r&#xE9;v&#xE9;lant la complexit&#xE9; spatiale dans l&#x26;#39;endo-lysosomal la traite.

FcRn m&#xE9;di&#xE9;e par Transports Anticorps &#xE0; travers les cellules &#xE9;pith&#xE9;liales r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9;es par la tomographie &#xE9;lectronique

Der neonatale Fc-Rezeptor (FcRn) transportiert m&uuml;tterlichen IgG &uuml;ber epitheliale Barrieren, wodurch der Fetus oder Neugeborenen mit humoralen Immunit&auml;t vor seiner Immunsystem voll funktionsf&auml;hig ist. Bei neugeborenen Ratten &uuml;bertr&auml;gt FcRn IgG aus Milch, Blut von apikalen Basolateraler Transcytosis &uuml;ber intestinale Epithelzellen. Die pH-Wert-Differenz zwischen der apikalen (pH 6.0-6.5) und Basolateraler (pH 7,4) Seiten des intestinalen Epithelzellen erm&ouml;glicht den effizienten unidirektionale Transport von IgG, da FcRn IgG bei pH 6.0-6.5, aber nicht bei pH 7 oder mehr bindet. Wie die Milch durch die neonatale Darm vergeht, wird m&uuml;tterlichen IgG durch FcRn auszudr&uuml;cken Zellen im proximalen D&uuml;nndarm (Duodenum und Jejunum); entfernt. &uuml;brigen Proteine werden absorbiert und vom FcRn-Negative Zellen im distalen D&uuml;nndarm (Ileum) abgebaut. Hier verwenden wir Elektron Tomographie Jejunal Transcytosis sichtbar zu direkt in Raum und Zeit, Entwicklung neuer Kennzeichnung und Abfragung Methoden zuordnen einzelner Nanogold-gekennzeichnet Fc in Transport-Vesikel und gleichzeitig diese Bl&auml;schen von Immunolabelling zu charakterisieren. Elektronenstrahl-Tomographie mit eine st&ouml;rungsfreie endocytic-Label, das konnten wir eindeutig identifizieren Rezeptor gebundene Liganden kombinierend beheben Sie Verbindungsstra&szlig;en Bl&auml;schen, festzustellen Sie, ob ein Vesikel Microtubule-verbundenen war, und pr&auml;zise Spur FcRn-vermittelten Transport von IgG. Unsere Ergebnisse pr&auml;sentieren ein komplexes Bild in dem Fc durch Netze tubul&auml;re und unregelm&auml;&szlig;ige Bl&auml;schen, verstrickt Microtubule-verbundenen, von denen nur, die einige sind wechselt, wie Migration auf die Basolateraler-Oberfl&auml;che. Neue Features von Transcytosis sind aufgekl&auml;rt, einschlie&szlig;lich Verkehr mit multivesicular K&ouml;rper innere Bl&auml;schen/Tubuli und Exozytose durch Clathrin-beschichtete Gruben. Marker f&uuml;r Anfang, Ende und recycling Endosomen mit Bl&auml;schen in verschiedenen und sich &uuml;berlappenden morphologischen Klassen offenbart r&auml;umliche Komplexit&auml;t Endo-lysosomale Handel gekennzeichnet.

Antik&ouml;rper FcRn-vermittelten Transport &uuml;ber epitheliale Zellen durch Elektronenstrahl-Tomographie aufgedeckt.

Il recettore Fc neonatale (FcRn) trasporta IgG materne attraverso le barriere epiteliali, fornendo in tal modo il feto o il neonato con immunit&agrave; umorale prima che il sistema immunitario &egrave; completamente funzionale. In ratti neonati, FcRn trasferimenti IgG da latte a sangue da apicale a basolaterale transcytosis attraverso le cellule epiteliali intestinali. La differenza di pH tra i lati di basolaterale (pH 7,4) delle cellule epiteliali intestinali e apicale (pH 6.0-6.5) facilita il trasporto efficiente unidirezionale di IgG, perch&eacute; FcRn lega IgG a pH 6.0-6.5, ma non a pH 7 o pi&ugrave;. Come latte passa attraverso l&#39;intestino neonatale, IgG materne viene rimosso dalle cellule che esprimono FcRn nel piccolo intestino prossimale (duodeno e digiuno); le restanti proteine sono assorbite e degradate dalle cellule FcRn-negativo il distale dell&#39;intestino tenue (ileo). Qui usiamo la tomografia elettrone effettuare digiunale transcytosis visibile direttamente nello spazio e nel tempo, lo sviluppo di nuovi metodi di rilevamento e l&#39;etichettatura per mappare Fc nanogold-etichettati singoli all&#39;interno di vescicole di trasporto e contemporaneamente per caratterizzare queste vescicole di immunolabelling. Combinando elettrone tomografia con un&#39;etichetta endocitico perturbante non ci ha permesso di identificare conclusivamente ligandi del recettore associato, risolvere le vescicole comunicanti, determinare se una vescicola era microtubule-associated e accuratamente traccia FcRn-mediata trasporto di IgG. I nostri risultati presentano un quadro complesso in cui Fc si muove attraverso le reti di impigliata vescicole tubolare e irregolare, solo alcune delle quali sono associate ai microtubuli, come migra verso la superficie basolaterale. Nuove funzionalit&agrave; di transcytosis sono chiarita, compreso il trasporto che coinvolgono corpo multivesicular interno vescicole/tubuli ed esocitosi attraverso pozzi rivestite da clatrina. Marcatori per inizio, fine e riciclaggio endosomes ogni etichettati vescicole in classi morfologiche diverse e sovrapposte, rivelando la complessit&agrave; spaziale nel traffico endo-lisosomiale.

Trasporto FcRn-mediata anticorpo attraverso cellule epiteliali rivelato dalla tomografia computerizzata degli elettroni.

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&#x3001;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x5F8C;&#x534A;&#x306B;&#x3001;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9; - &#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x8F38;&#x9001;&#x306B;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x306A;&#x8907;&#x96D1;&#x3055;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x5225;&#x306E;&#x91CD;&#x8907;&#x3057;&#x305F;&#x5F62;&#x614B;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x306B;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x6A19;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5C0F;&#x80DE;&#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3002;

&#x96FB;&#x5B50;&#x7DDA;&#x30C8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x6A2A;&#x5207;&#x3063;&#x305F;FcRn&#x4ECB;&#x5728;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;

&#xC2E0;&#xC0DD;&#xC544; Fc &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (FcRn) &#xC81C;&#xACF5; &#xD0DC;&#xC544; &#xB610;&#xB294; &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC544; &#xCCB4;&#xC561; &#xC131; &#xBA74;&#xC5ED;&#xACFC; &#xBA74;&#xC5ED; &#xCCB4;&#xACC4;&#xB294; &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xC791;&#xB3D9; &#xB418;&#xAE30; &#xC804;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC7A5;&#xBCBD;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBAA8;&#xC131; Igg&#xB97C; &#xC804;&#xC1A1; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC13; &#xD0DC;&#xC5B4;&#xB09C; &#xC950;&#xC5D0; FcRn Igg&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xC1A1; &#xC6B0;&#xC720; &#xD608;&#xC561; &#xAF2D;&#xB300;&#xAE30; basolateral transcytosis&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC7A5;&#xB0B4; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0;. &#xC7A5; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xAF2D;&#xB300;&#xAE30; (pH 6.0-6.5) &#xBC0F; basolateral (pH 7.4)&#xC758; pH &#xCC28;&#xC774; pH 6.0-6.5&#xC5D0;&#xC11C; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; pH 7 &#xC774;&#xC0C1;&#xC5D0; Fcrn&#xAC00; Igg&#xB97C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xBBC0;&#xB85C; IgG, &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC29;&#xD5A5; &#xC804;&#xC1A1;&#xC744; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xADFC; &#xC704; &#xC18C;&#xC7A5; (&#xC2ED;&#xC774;&#xC9C0; &#xC7A5;&#xACFC; jejunum); &#xC140; Fcrn&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558; &#xC5EC; &#xBAA8;&#xC131; IgG &#xC81C;&#xAC70; &#xC6B0;&#xC720; &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC544; &#xC18C;&#xC7A5;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC804;&#xB2EC;, &#xB098;&#xBA38;&#xC9C0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xD761;&#xC218; &#xD558; &#xACE0; &#xC6D0;&#xC2EC; &#xC18C;&#xC7A5; (&#xC11C;)&#xC5D0;&#xC11C; &#xC74C;&#xC774; FcRn &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD0C0;&#xB77D;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; jejunal transcytosis &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC2DC;&#xAC04;&#xACFC; &#xACF5;&#xAC04;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C1;&#xC811; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xB77C;&#xBCA8; &#xBC0F; &#xD0D0;&#xC9C0; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC804;&#xC1A1; &#xC18C;&#xD3EC; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC1C;&#xBCC4; nanogold &#xC154; &#xC11C; Fc&#xC744; &#xC9C0;&#xB3C4; &#xD558; &#xACE0; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; immunolabelling&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; vesicles&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; ligands &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xBE44; perturbing endocytic &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xC774; &#xC788;&#xB294; &#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601; &#xACB0;&#xD569;, &#xC0C1;&#xD638; &#xC18C;&#xD3EC;&#xB97C; &#xD574;&#xACB0;, &#xC5EC;&#xBD80;&#xB294; &#xAE30;&#xB294; microtubule &#xC5F0;&#xAD00; &#xB41C; &#xD558; &#xACE0; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xCD94;&#xC801; FcRn &#xC911;&#xC7AC; &#xC804;&#xC1A1; Igg&#xC758; &#xACB0;&#xC815;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;&#xB294; Fc &#xC774;&#xB3D9;&#xC758; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xAD00;&#xC0C1; &#xD558; &#xACE0; &#xBD88;&#xADDC;&#xCE59; &#xD55C; &#xC18C;&#xD3EC;&#xB9CC; &#xC77C;&#xBD80;&#xB294; microtubule &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; basolateral &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xD55C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5BD;&#xD600; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xADF8;&#xB9BC;&#xC744; &#xC81C;&#xC2DC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Transcytosis&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAE30;&#xB2A5; multivesicular &#xBAB8; &#xB0B4;&#xBD80; &#xC18C;&#xD3EC;/tubules &#xBC0F; exocytosis clathrin &#xCF54;&#xD305; &#xAD6C; &#xB369;&#xC774; &#xD1B5;&#xD574; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC804;&#xC1A1; &#xB4F1; &#xD574;&#xBA85; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC77C;&#xCC0D;, &#xB2A6;&#xAC8C; &#xBC0F; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; endosomes &#xAC01;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9C8;&#xCEE4; &#xC5D4;&#xB3C4; lysosomal &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4; &#xACF5;&#xAC04; &#xBCF5;&#xC7A1;&#xC131;&#xC744; &#xB4DC;&#xB7EC;&#xB0B4;&#xB294; &#xB2E4;&#xB974;&#xACE0; &#xACB9;&#xCE58;&#xB294; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC18C;&#xD3EC; &#xC154; &#xC11C;.

&#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601; &#xD558; &#xC5EC; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD558;&#xB294; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD56D; &#xCCB4; FcRn-&#xC911;&#xC7AC; &#xC804;&#xC1A1;.

El receptor Fc neonatal (FcRn) transporta la IgG materna a trav&#xE9;s de barreras epiteliales, lo que proporciona al feto o al reci&#xE9;n nacido con la inmunidad humoral antes de que su sistema inmunol&#xF3;gico es completamente funcional. En ratas reci&#xE9;n nacidas, FcRn transfiere IgG de la leche a la sangre por apical a basolateral transcitosis trav&#xE9;s de las c&#xE9;lulas epiteliales intestinales. La diferencia de pH entre los apicales (pH 6,0-6,5) y basolateral (pH 7,4) lados de las c&#xE9;lulas epiteliales intestinales facilita el transporte eficiente unidireccional de IgG, porque FcRn une IgG a pH 6.0-6.5, pero no a pH 7 o m&#xE1;s. Como la leche pasa a trav&#xE9;s del intestino neonatal, la IgG materna se elimina por FcRn-que expresan las c&#xE9;lulas en el intestino delgado proximal (duodeno y yeyuno); prote&#xED;nas restantes son absorbidos y degradados por FcRn c&#xE9;lulas negativas en el intestino delgado distal (&#xED;leon). Aqu&#xED; se utiliza la tomograf&#xED;a de electrones para hacer transcitosis yeyunal visible directamente en el espacio y el tiempo, el desarrollo de un nuevo etiquetado y m&#xE9;todos de detecci&#xF3;n de mapa individual Nanogold marcado con Fc dentro de ves&#xED;culas de transporte y al mismo tiempo para caracterizar estas ves&#xED;culas por inmunomarcaje. La combinaci&#xF3;n de la tomograf&#xED;a de electrones con una etiqueta que no cause endoc&#xED;tica nos permiti&#xF3; identificar de manera concluyente el receptor unido-ligandos, resolver la interconexi&#xF3;n de las ves&#xED;culas, determinar si una ves&#xED;cula fue asociada a los microt&#xFA;bulos, y precisa remontar FcRn mediada por el transporte de IgG. Nuestros resultados presentan un cuadro complejo en el que se mueve a trav&#xE9;s de redes Fc de ves&#xED;culas tubulares entrelazados e irregular, s&#xF3;lo algunas de las cuales son asociadas con microt&#xFA;bulos, ya que migra a la superficie basolateral. Las nuevas caracter&#xED;sticas de transcitosis se ha dilucidado, incluyendo transporte que afecte a las ves&#xED;culas multivesiculares internas del cuerpo o los t&#xFA;bulos y exocitosis a trav&#xE9;s de depresiones revestidas de clatrina. Marcadores para el reciclaje temprano, tarde y cada uno de los endosomas ves&#xED;culas marcadas en las clases morfol&#xF3;gicas diferentes y superpuestas, revelando la complejidad espacial en el endo-lisosomal trata de personas.

FcRn mediada por anticuerpos de transporte trav&#xE9;s de las c&#xE9;lulas epiteliales reveladas por tomograf&#xED;a electr&#xF3;nica

&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51; (ER) &#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5355;&#x4E00;&#x7684;&#x3001; &#x52A8;&#x6001;&#x7684;&#x548C;&#x8FDE;&#x7EED;&#x7684;&#x819C;&#x7F51;&#x7EDC;&#xFF0C;&#x76F8;&#x4E92;&#x8FDE;&#x63A5;&#x7684; cisternae &#x548C;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x904D;&#x5E03;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x4E0E;&#x6838;&#x4FE1;&#x5C01;&#x76F4;&#x63A5;&#x63A5;&#x89E6;&#x3002;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#xFF0C;&#x671F;&#x95F4;&#x8FC5;&#x901F;&#x8FDB;&#x6025;&#x8BCA;&#x5BA4;&#x5206;&#x533A;&#x53CA;&#x5176;&#x819C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5185;&#x5BB9;&#x65F6;&#x6240;&#x6838;&#x4FE1;&#x5C01;&#x7ECF;&#x5386;&#x91CD;&#x5927;&#x91CD;&#x7EC4;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x5B83;&#x662F;&#x6781;&#x5927;&#x7684;&#x5174;&#x8DA3;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x786E;&#x5B9A;&#x662F;&#x5426; ER &#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E2D;&#x7684;&#x4EFB;&#x4F55;&#x91CD;&#x5927;&#x6539;&#x53D8;&#x4E5F;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x51FA;&#x7ED3;&#x6784;&#x6027;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x5FEB;&#x901F;&#x3001; &#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4E09;&#x7EF4;&#x6210;&#x50CF;&#x4E0E;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7535;&#x955C;&#x6837;&#x54C1;&#x4FDD;&#x7559;&#x7531;&#x9AD8;&#x538B;&#x5C42;&#x6790;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x786E;&#x8BA4;&#x51BB;&#x7ED3;&#xFF0C;&#x51BB;&#x7ED3;&#x66FF;&#x4EE3;&#xFF0C;&#x6BEB;&#x4E0D;&#x542B;&#x7CCA;&#x5730;&#x8868;&#x660E;&#x4ECE;&#x5BF9;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EC8;&#x672B;&#x671F;&#x524D;&#xFF0C;&#x6025;&#x8BCA;&#x5BA4;&#x7684;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6269;&#x5C55; cisternae&#xFF0C;&#x7528;&#x5F88;&#x5C0F;&#x7684;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#xFF0C;&#x5269;&#x4F59;&#x7684;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6709;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E3E;&#x529E;&#x4E86;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x95F4;&#x671F;&#xFF0C;&#x6025;&#x8BCA;&#x5BA4;&#x663E;&#x793A;&#x94FE;&#x63A5;&#x5230;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x7684;&#x76F2;&#x6E90; cisternae &#x7684;&#x719F;&#x6089;&#x7684;&#x7F51;&#x72B6;&#x7F51;&#x7EDC;&#x3002;

&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x671F;&#x95F4;&#x6C60;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x3002;

The endoplasmic reticulum (ER) of animal cells is a single, dynamic, and continuous membrane network of interconnected cisternae and tubules spread out throughout the cytosol in direct contact with the nuclear envelope. During mitosis, the nuclear envelope undergoes a major rearrangement, as it rapidly partitions its membrane-bound contents into the ER. It is therefore of great interest to determine whether any major transformation in the architecture of the ER also occurs during cell division. We present structural evidence, from rapid, live-cell, three-dimensional imaging with confirmation from high-resolution electron microscopy tomography of samples preserved by high-pressure freezing and freeze substitution, unambiguously showing that from prometaphase to telophase of mammalian cells, most of the ER is organized as extended cisternae, with a very small fraction remaining organized as tubules. In contrast, during interphase, the ER displays the familiar reticular network of convolved cisternae linked to tubules.

Cisternal organization of the endoplasmic reticulum during mitosis.

Le r&eacute;ticulum endoplasmique (ER) des cellules animales est un r&eacute;seau de membrane unique, dynamique et continu de saccules interconnect&eacute;s et tubules &eacute;tal&eacute;e dans le cytosol en contact direct avec l&#39;enveloppe nucl&eacute;aire. Au cours de la mitose, l&#39;enveloppe nucl&eacute;aire subit un r&eacute;arrangement important, tel qu&#39;il r&eacute;partit rapidement son contenu li&eacute; &agrave; la membrane dans le re. Il est donc tr&egrave;s int&eacute;ressant pour d&eacute;terminer si une transformation majeure dans l&#39;architecture de l&#39;ER se produit &eacute;galement pendant la division cellulaire. Nous pr&eacute;sentons des preuves de structure, de l&#39;imagerie rapide, cellules vivantes, en trois dimensions avec confirmation de tomographie par microscopie &eacute;lectronique &agrave; haute r&eacute;solution des &eacute;chantillons conserv&eacute;s par haute pression de cong&eacute;lation et cryo-substitution, montrant clairement que de la prom&eacute;taphase t&eacute;lophase des cellules de mammif&egrave;res, la plupart de l&#39;ER est organis&eacute;e comme cisternes &eacute;tendus, avec une tr&egrave;s petite fraction restant organis&eacute;es comme des tubules. En revanche, au cours de l&#39;interphase, le ER affiche le r&eacute;seau r&eacute;ticulaire familier de saccules convolved li&eacute;s aux tubules.

Organisation saccules du r&eacute;ticulum endoplasmique au cours de la mitose.

Das Endoplasmatisches Reticulum (ER) von Tierzellen ist ein einzelnes, dynamisch und kontinuierliche Membran-Netzwerk von miteinander verbundenen Cisternae und Tubuli verteilt das Zytosol in direktem Kontakt mit der Kernh&uuml;lle. W&auml;hrend der Mitose erf&auml;hrt die Kernh&uuml;lle eine gro&szlig;e Umstellung, da es schnell seinen Inhalt Membrane-springen in die ER partitioniert. Es ist daher von gro&szlig;em Interesse zu bestimmen, ob gro&szlig;e Ver&auml;nderung in der Architektur von der ER auch w&auml;hrend der Zellteilung auftritt. Wir pr&auml;sentieren strukturelle Evidenz, rapid, Leben-Zelle, dreidimensionale Bildgebung mit Best&auml;tigung durch hochaufl&ouml;sende Elektronenmikroskopie-Tomographie von Proben, die durch Hochdruck bewahrt Einfrieren und Einfrieren Ersetzung, die eindeutig zeigen, dass vom Spindelapparat zu Telophase der S&auml;ugetier-Zellen, ist die meisten der ER als erweiterte Cisternae, mit einem sehr kleinen Bruchteil Nummer(n) organisierte als Tubuli organisiert. Dagegen zeigt das ER w&auml;hrend der Zwischenphase, das vertraute Retikul&auml;re Netz der gefaltet Cisternae Tubuli verbunden.

Zisternalen Organisation von dem Endoplasmatischen Retikulum w&auml;hrend der Mitose.

Il reticolo endoplasmatico (ER) delle cellule animali &egrave; una rete di membrana singola, dinamico e continuo di destino interconnessi e tubuli sparsi in tutto il citosol a diretto contatto con la membrana nucleare. Durante la mitosi, la busta nucleare subisce un riarrangiamento principale, come esso partizioni rapidamente il contenuto associato a membrana in ER. &Egrave; pertanto di grande interesse per determinare se qualsiasi trasformazione importante nell&#39;architettura di ER si verifica anche durante la divisione cellulare. Vi presentiamo le prove strutturali, dall&#39;imaging tridimensionale, rapida e live-cella con conferma da microscopia elettronica ad alta risoluzione Tomografia di campioni conservati da alta pressione congelamento e congelare sostituzione, mostrando inequivocabilmente che da prometafase a telofase delle cellule di mammiferi, la maggior parte di ER &egrave; organizzato come destino estesa, con una piccolissima frazione rimanente organizzato come tubuli. Al contrario, durante l&#39;interfase, ER Visualizza la rete familiare reticolare del destino convoluta legato ai tubuli.

Intracisternale organizzazione del reticolo endoplasmatico durante la mitosi.

&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53; (ER) &#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x3001;&#x52D5;&#x7684;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x9023;&#x7D9A;&#x819C;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x76F8;&#x4E92;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x89AA;&#x682A;&#x306E;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x5C3F;&#x7D30;&#x7BA1;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306F;&#x6838;&#x819C;&#x3068;&#x76F4;&#x63A5;&#x63A5;&#x89E6;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066; &#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x819C;&#x7D50;&#x5408;&#x5185;&#x5BB9;&#x3092;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6709;&#x7CF8;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x3001;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x8EE2;&#x4F4D;&#x6838;&#x5C01;&#x7B52;&#x3092;&#x7D4C;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3067;&#x3059;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x95A2;&#x5FC3;&#x3092;&#x96C6;&#x3081;&#x3066;&#x3082;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x5909;&#x63DB;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x3067;&#x3001;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x6642;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9AD8;&#x5727;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4FDD;&#x6301;&#x8A66;&#x6599;&#x306E;&#x9AD8;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x30C8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3068;&#x8FC5;&#x901F;&#x306A;&#x751F;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;3&#x6B21;&#x5143;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x304B;&#x3089;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x306A;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x51CD;&#x7D50;&#x30FB;&#x51CD;&#x7D50;&#x7F6E;&#x63DB;, &#x660E;&#x78BA;&#x306B; prometaphase &#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x304B;&#x3089;&#x7D42;&#x671F;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x306E;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x7D30;&#x7BA1;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x7D44;&#x7E54;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6B8B;&#x308A;&#x306E;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x3068;&#x62E1;&#x5F35;&#x306E;&#x89AA;&#x682A;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x4E2D;&#x9593;&#x671F;&#x4E2D;&#x306B; ER &#x7D30;&#x7BA1;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x5206;&#x304B;&#x3089;&#x306A;&#x304F;&#x3066;&#x89AA;&#x682A;&#x306E;&#x304A;&#x306A;&#x3058;&#x307F;&#x306E;&#x7DB2;&#x72B6;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x6709;&#x7CF8;&#x5206;&#x88C2;&#x6642;&#x8133;&#x69FD;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x3067;&#x306F;&#x3002;

&#xB3D9;&#xBB3C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; (ER)&#xB294; &#xC0C1;&#xD638; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; cisternae&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; &#xB3D9;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xC5F0;&#xC18D; &#xB9C9; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xBC0F; tubules cytosol &#xD575; &#xBD09;&#xD22C;&#xC640; &#xC9C1;&#xC811; &#xC811;&#xCD09;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBC16;&#xC73C;&#xB85C; &#xD655;&#xC0B0;. &#xC720;&#xC0AC; &#xBD84;&#xC5F4;, &#xC911; &#xD575; &#xBD09;&#xD22C; &#xADF8;&#xAC83; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;&#xC5D0; &#xB9C9; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xB0B4;&#xC6A9;&#xC744; &#xBD84;&#xD560;&#xB85C; &#xC8FC;&#xC694; &#xC7AC;&#xBC30;&#xCE58;&#xB97C; &#xACAA; &#xC2B5;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xD070; &#xAD00;&#xC2EC; &#xB610;&#xD55C; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;&#xC758; &#xC544;&#xD0A4;&#xD14D;&#xCC98;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xBCC0;&#xD654; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4; &#xC911; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294;&#xC9C0; &#xD655;&#xC778; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xACE0;&#xC555;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBCF4;&#xC874; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC758; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xACE0;&#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD655;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2E0;&#xC18D;&#xD55C; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140;, 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xC601;&#xC0C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC99D;&#xAC70; &#xC81C;&#xC2DC; &#xB3D9;&#xACB0; &#xBC0F; &#xB3D9;&#xACB0; &#xB300;&#xCCB4;, &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; telophase prometaphase&#xC5D0;&#xC11C; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4; tubules&#xB85C; &#xC870;&#xC9C1; &#xB41C; &#xB0A8;&#xC740; &#xC544;&#xC8FC; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC218;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xD655;&#xC7A5; &#xB41C; cisternae&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74;, &#xACC4;&#xBA74;, &#xB3D9;&#xC548; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4; tubules&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; convolved cisternae&#xC758; &#xC775;&#xC219;&#xD55C; &#xB9DD;&#xC0C1; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C;&#xC758; &#xC720;&#xC0AC; &#xBD84;&#xC5F4; &#xC911; cisternal &#xC870;&#xC9C1;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El ret&iacute;culo endopl&aacute;smico (ER) de las c&eacute;lulas animales es una red de membrana &uacute;nica, din&aacute;mica y continua de cisternas interconectados y t&uacute;bulos jalonan el citosol en contacto directo con la envoltura nuclear. Durante la mitosis, la envoltura nuclear se somete a un cambio importante, como divide r&aacute;pidamente su contenido de membrana-limitan en ER. Por ello resulta de gran inter&eacute;s para determinar si cualquier transformaci&oacute;n importante en la arquitectura de la ER tambi&eacute;n ocurre durante la divisi&oacute;n celular. Presentamos evidencia estructural, de la proyecci&oacute;n de imagen r&aacute;pida, c&eacute;lulas vivas, tridimensional con confirmaci&oacute;n de tomograf&iacute;a de alta resoluci&oacute;n de microscopia electr&oacute;nica de muestras conservadas por alta presi&oacute;n de congelaci&oacute;n y congelaci&oacute;n de sustituci&oacute;n, mostrando claramente que de Prometafase a telofase de c&eacute;lulas de mam&iacute;feros, la mayor&iacute;a de la sala de emergencia est&aacute; organizado como cisternas extendidas, con una muy peque&ntilde;a fracci&oacute;n restante organizada como t&uacute;bulos. En contraste, durante la interfase, la ER muestra la red reticular familiar de cisternas convuelta vinculado a los t&uacute;bulos.

Organizaci&oacute;n cisternal del ret&iacute;culo endopl&aacute;smico durante la mitosis.

&#x8DE8;&#x4E24;&#x6781;&#x5316;&#x7684;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4F20;&#x9012;&#x662F;&#x901A;&#x8FC7;&#x53D7;&#x4F53;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x80DE;&#x541E;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x3002;&#x8BB8;&#x591A;&#x7814;&#x7A76;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86;&#x57FA;&#x5E95;&#x5916;&#x4FA7;&#x5C16;&#x8D29;&#x8FD0;&#x7684;&#x805A;&#x5408;&#x7269; IgA (&#x9640;&#x87BA;&#x52A0;&#x901F;&#x5EA6;&#x8BA1;&#xFF09; &#x7531;&#x805A;&#x514D;&#x75AB;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x53D7;&#x4F53; (pIgR)&#x3002;&#x5C11;&#x77E5;&#x57FA;&#x5E95;&#x5916;&#x5FC3;&#x5C16;-&#x5230;-&#x4FA7;&#x80DE;&#x541E;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x3001; &#x65B0;&#x751F;&#x513F; Fc &#x53D7;&#x4F53; (FcRn) &#x65B9;&#x5411;&#x8FD0;&#x8F93;&#x4EA7;&#x5987; IgGs &#x8DE8;&#x80A0;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x6BD4;&#x8F83;&#x57FA;&#x5E95;&#x5916;&#x5FC3;&#x5C16;-&#x5230;-&#x4FA7;&#x548C;&#x57FA;&#x5E95;&#x5916;&#x4FA7;&#x5C16;&#x80DE;&#x541E;&#x8F6C;&#x8FD0;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC; co-expressed FcRn &#x548C; pIgR &#x6885;&#x4E01;&#x8FBE;&#x6BD4;&#x72AC;&#x80BE; (&#x80BE;) &#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x7528;&#x4E8E;&#x8109;&#x51B2;&#x5927;&#x901A;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x4E0E;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x68C0;&#x67E5;&#x8FD0;&#x8F93; apically &#x5E94;&#x7528; IgG Fcgamma &#x548C; basolaterally &#x5E94;&#x7528;&#x9640;&#x87BA;&#x52A0;&#x901F;&#x5EA6;&#x8BA1;&#x3002;Fcgamma &#x548C;&#x8D29;&#x8FD0;&#x8DEF;&#x7EBF;&#x7684;&#x9640;&#x87BA;&#x52A0;&#x901F;&#x5EA6;&#x8BA1;&#x5728;&#x7A0D;&#x540E;&#x5927;&#x901A;&#x65F6;&#x95F4;&#x662F;&#x6700;&#x521D;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4F46;&#x6DF7;&#x5408;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#x3002;Fcgamma &#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x5C40;&#x90E8;&#x63A5;&#x8FD1;&#x5FC3;&#x5C16;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#xFF0C;&#x4F46;&#x6210;&#x4E3A;&#x66F4;&#x5E73;&#x5747;&#x5730;&#x5206;&#x5E03;&#x5728;&#x8BE5;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x7B26;&#x5408;&#x4F34;&#x80DE;&#x541E;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x548C;&#x56DE;&#x6536;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x9640;&#x87BA;&#x52A0;&#x901F;&#x5EA6;&#x8BA1;&#x8FD0;&#x8F93;&#x662F;&#x5F3A;&#x70C8;&#x5355;&#x5411;&#xFF1A; &#x9640;&#x87BA;&#x52A0;&#x901F;&#x5EA6;&#x8BA1;&#x4ECE;&#x8F6C;&#x5411;&#x9644;&#x8FD1;&#x7684;&#x57FA;&#x5E95;&#x5916;&#x4FA7;&#x8868;&#x9762;&#x5FC3;&#x5C16;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x4E0E;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x4E00;&#x4E9B; Fcgamma &#x548C;&#x9640;&#x87BA;&#x52A0;&#x901F;&#x5EA6;&#x8BA1;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#xFF0C;&#x5728;&#x65E9;&#x671F; &#xFF08;EEA1 &#x6297;&#x4F53;&#x9633;&#x6027;)&#x3001; &#x56DE;&#x6536; &#xFF08;Rab11a &#x6297;&#x4F53;&#x9633;&#x6027;) &#x548C;&#x8F6C;&#x94C1;&#x86CB;&#x767D; (Tf) colocalized-&#x57FA;&#x5E95;&#x5916;&#x79EF;&#x6781;&#x5171;&#x540C;/&#x4FA7;&#x56DE;&#x6536; endosomes&#x3002;Fcgamma &#x53D8;&#x5F97;&#x66F4;&#x5BCC; Tf &#x9633;&#x6027; endosomes &#x4E0E;&#x65F6;&#x95F4;&#xFF0C;&#x800C;&#x4ECE;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8F66;&#x53A2;&#x6392;&#x5E8F;&#x7684;&#x9640;&#x87BA;&#x52A0;&#x901F;&#x5EA6;&#x8BA1;&#x3002;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x50CF;&#x663E;&#x793A;&#x542B;&#x6709; Fcgamma &#x6216;&#x9640;&#x87BA;&#x52A0;&#x901F;&#x5EA6;&#x8BA1;&#x7684;&#x56CA;&#x6CE1;&#x5171;&#x4EAB;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x6D41;&#x52A8;&#x6027;&#x7279;&#x5F81;&#x548C;&#x7B49;&#x6548;&#x53D7;&#x5FAE;&#x7BA1;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8D29;&#x8FD0;&#x8DEF;&#x7EBF;&#x5728;&#x5927;&#x81F4;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x5B8C;&#x597D;&#x7684;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x89E3;&#x805A;&#x3002;

&#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x89C2;&#x5BDF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x5BFC; FcRn &#x548C; pIgR &#x8FD0;&#x8F93;&#x7684;&#x6BD4;&#x8F83;&#x3002;

Protein delivery across polarized epithelia is controlled by receptor-mediated transcytosis. Many studies have examined basolateral-to-apical trafficking of polymeric IgA (pIgA) by the polymeric immunoglobulin receptor (pIgR). Less is known about apical-to-basolateral transcytosis, the direction the neonatal Fc receptor (FcRn) transports maternal IgGs across intestinal epithelia. To compare apical-to-basolateral and basolateral-to-apical transcytosis, we co-expressed FcRn and pIgR in Madin-Darby canine kidney (MDCK) cells and used pulse-chase experiments with confocal microscopy to examine transport of apically applied IgG Fcgamma and basolaterally applied pIgA. Fcgamma and pIgA trafficking routes were initially separate but intermixed at later chase times. Fcgamma was first localized near the apical surface, but became more equally distributed across the cell, consistent with concomitant transcytosis and recycling. By contrast, pIgA transport was strongly unidirectional: pIgA shifted from near the basolateral surface to an apical location with increasing time. Some Fcgamma and pIgA fluorescence colocalized in early (EEA1-positive), recycling (Rab11a-positive), and transferrin (Tf)-positive common/basolateral recycling endosomes. Fcgamma became more enriched in Tf-positive endosomes with time, whereas pIgA was sorted from these compartments. Live-cell imaging revealed that vesicles containing Fcgamma or pIgA shared similar mobility characteristics and were equivalently affected by depolymerizing microtubules, indicating that both trafficking routes depended to roughly the same extent on intact microtubules.

Comparison of FcRn- and pIgR-mediated transport in MDCK cells by fluorescence confocal microscopy.

Livraison de prot&eacute;ines dans l&#39;&eacute;pith&eacute;lium polaris&eacute; est contr&ocirc;l&eacute;e par transcytose m&eacute;di&eacute;e par les r&eacute;cepteurs. De nombreuses &eacute;tudes ont examin&eacute; traite basolat&eacute;rale-&agrave;-apicale des polym&egrave;re IgA (pIgA) par le r&eacute;cepteur des immunoglobulines polym&eacute;riques (pIgR). On conna&icirc;t moins transcytose apicale-&agrave;-basolat&eacute;rale, la direction, les r&eacute;cepteurs de Fc n&eacute;onatale (FcRn) transporte les IgG maternel &agrave; travers l&#39;&eacute;pith&eacute;lium intestinal. Pour comparer la transcytose apicale-&agrave;-basolat&eacute;rale et baso-&agrave;-apicale, nous co-exprim&eacute;e FcRn et pIgR en Madin-Darby canine (cellules MDCK) et accompagn&eacute; d&#39;exp&eacute;riences pulse-chase microscopie confocale &agrave; examiner transport apicalement appliqu&eacute;e Fcgamma IgG et pIgA peut appliqu&eacute;e. Fcgamma et pIgA trafic itin&eacute;raires ont &eacute;t&eacute; initialement distinctes mais m&eacute;lang&eacute;s ULTERIEUREMENT chase. Fcgamma fut d&#39;abord localis&eacute; pr&egrave;s de la surface apicale, mais est devenu plus &eacute;galement r&eacute;partie dans l&#39;ensemble de la cellule, compatible avec la transcytose concomitante et recyclage. En revanche, le transport de pIgA &eacute;tait fortement unidirectionnel : pIgA d&eacute;cal&eacute; de pr&egrave;s de la surface basolat&eacute;rale vers un emplacement apical avec le temps. Certains Fcgamma et pIgA fluorescence au d&eacute;but (EEA1-positif), recyclage (Rab11a-positif) et la transferrine (Tf)-positif commun/basolat&eacute;rale endosomes de recyclage. Fcgamma est devenu plus enrichi dans les endosomes Tf-positifs avec le temps, alors que pIgA a &eacute;t&eacute; tri&eacute; de ces compartiments. Imagerie de cellules vivantes a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que les v&eacute;sicules contenant Fcgamma ou pIgA partagent des caract&eacute;ristiques similaires de mobilit&eacute; et ont &eacute;t&eacute; touch&eacute;s de fa&ccedil;on &eacute;quivalente par d&eacute;polym&eacute;risation des microtubules, indiquant que les deux itin&eacute;raires de trafic d&eacute;pendant &agrave; peu pr&egrave;s autant de microtubules intacts.

Comparaison du transport par FcRn et pIgR dans les cellules MDCK par microscopie confocale &agrave; fluorescence.

Protein-Lieferung &uuml;ber polarisierte Epithelien wird durch Rezeptor-vermittelte Transcytosis gesteuert. Viele Studien untersuchten Basolateraler und apikale Menschenhandel Polymeres IgA (pIgA) durch den Polymeren Immunglobulin-Rezeptor (pIgR). Weniger bekannt ist, &uuml;ber apikalen Basolateraler Transcytosis, die Richtung der Neugeborenen Fc-Rezeptor (FcRn) transportiert m&uuml;tterlichen IgGs &uuml;ber intestinale Epithelien. Um apikalen Basolateraler und Basolateraler und apikalen Transcytosis zu vergleichen, wir co-expressed FcRn und pIgR in Madin Darby canine Kidney (MDCK) Zellen und Puls-Chase-Experimente mit confocal Mikroskopie zur Untersuchung von Transport von apically angewandte IgG-Fcgamma und Basolaterally angewendet pIgA verwendet. Fcgamma und pIgA Handels Routen waren urspr&uuml;nglich getrennte, aber gemischt in sp&auml;teren Zeiten der Verfolgung. Fcgamma wurde zuerst in der N&auml;he der apikalen Oberfl&auml;che lokalisiert, aber wurde auf die Zelle, mit begleitenden Transcytosis konsistent und recycling gleichm&auml;&szlig;iger verteilt. Dagegen war pIgA Transport stark einseitig: pIgA aus nahe der Oberfl&auml;che Basolateraler auf eine apikale Lage mit zunehmender Zeit verschoben. Einige Fcgamma und pIgA Fluoreszenz colocalized in fr&uuml;hen (EEA1-positiv), recycling (Rab11a-positiv) und Transferrin (Tf)-positive gemeinsame/Basolateraler Wiederverwertung Endosomen. Fcgamma wurde in Tf-positivem Endosomen mit der Zeit mehr bereichert, w&auml;hrend pIgA aus diesen F&auml;chern sortiert wurde. Leben-Zelle Darstellung ergab, dass die Bl&auml;schen, die mit Fcgamma oder pIgA &auml;hnliche Mobilit&auml;t Eigenschaften und &Auml;quivalent von Mikrotubuli, darauf hinweist, dass beide Routen in etwa gleichem Ma&szlig;e intakt Mikrotubuli abh&auml;ngig von den depolymerizing betroffen waren.

Vergleich der FcRn und pIgR-vermittelten Transport in MDCK Zellen durch konfokale Fluoreszenzmikroskopie.

Consegna della proteina attraverso epiteli polarizzati &egrave; controllata dalla transcytosis del recettore-mediata. Molti studi hanno esaminato traffico basolaterale-apicale di IgA polimerico (pIgA) dal recettore immunoglobuline polimeriche (pIgR). Meno &egrave; noto circa apicale a basolaterale transcytosis, la direzione del recettore Fc neonatale (FcRn) trasporta IgGs materna attraverso l&#39;epitelio intestinale. Per confrontare transcytosis apicale a basolaterale e basolaterale-apicale, abbiamo co-expressed FcRn e pIgR in cellule di rene canino (MDCK) Madin-Darby e utilizzati esperimenti pulse-inseguimento con la microscopia confocale per esaminare trasporto apicalmente applicata Fcgamma IgG e basolaterally applicato pIgA. Fcgamma e pIgA traffico rotte erano inizialmente separati ma frammiste a tempi pi&ugrave; tardi chase. Fcgamma prima era localizzato vicino alla superficie apicale, ma divenne pi&ugrave; equamente distribuito tra la cella, coerenza con concomitante transcytosis e riciclaggio. Al contrario, era fortemente unidirezionale trasporto pIgA: pIgA ha spostato da vicino alla superficie basolaterale di una posizione apicale con l&#39;aumento del tempo. Alcuni Fcgamma e pIgA fluorescenza colocalized precoce (EEA1-positivo), riciclaggio (Rab11a-positivo) e Transferrina (Tf)-positivo comune/basolaterale riciclaggio endosomes. Fcgamma &egrave; diventato pi&ugrave; arricchito in endosomes Tf-positivi con il tempo, mentre pIgA &egrave; stato ordinato da questi compartimenti. Live cell imaging rivel&ograve; che le vescicole contenenti Fcgamma o pIgA condividevano simili caratteristiche di mobilit&agrave; ed equivalentemente sono state colpite dalla depolymerizing dei microtubuli, che indica che entrambe rotte del narcotraffico dipendevano all&#39;incirca nella stessa misura dei microtubuli intatti.

Confronto di trasporto mediato da FcRn e pIgR nelle cellule MDCK di microscopia confocale a fluorescenza.

&#x504F;&#x5149;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x5168;&#x4F53;&#x306B;&#x914D;&#x4FE1;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x57FA;&#x5E95;&#x9802;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x4F0A;&#x8CC0; &#xFF08;&#x30D4;&#x30AC;&#xFF09; &#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x514D;&#x75AB;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (pIgR) &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x57FA;&#x5E95;&#x9802;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x65B0;&#x751F;&#x5150; Fc &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (FcRn) &#x65B9;&#x5411;&#x6BCD;&#x4F53;&#x306E; Igg &#x8178;&#x4E0A;&#x76AE;&#x9593;&#x3067;&#x8F38;&#x9001;&#x3002;&#x57FA;&#x5E95;&#x9802;&#x3068;&#x57FA;&#x5E95;&#x9802;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;FcRn &#x3068; pIgR &#x30DE;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;-&#x30C0;&#x30FC;&#x30D3;&#x30FC;&#x72AC;&#x814E;&#x81D3; (MDCK) &#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5171;&#x540C;&#x3057;&#x3001;&#x30D1;&#x30EB;&#x30B9;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x5B9F;&#x9A13;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x9802;&#x89D2;&#x5FDC;&#x7528; IgG Fcgamma &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x9069;&#x7528; basolaterally &#x5C55;&#x300D;&#x30D4;&#x30AC;&#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Fcgamma &#x3068;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x30EB;&#x30FC;&#x30C8; &#x30D4;&#x30AC;&#x5F8C;&#x306E;&#x30C1;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B9;&#x6642;&#x4EE3;&#x3067;&#x306F;&#x5F53;&#x521D;&#x306F;&#x5225;&#x306E;&#x6DF7;&#x5728;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;Fcgamma &#x306F;&#x307E;&#x305A;&#x9802;&#x7AEF;&#x8868;&#x9762;&#x8FD1;&#x304F;&#x306F;&#x3001;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x304C;&#x30BB;&#x30EB;&#x9593;&#x3067;&#x4F75;&#x7528;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3001;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3092;&#x3088;&#x308A;&#x5747;&#x7B49;&#x306B;&#x5206;&#x6563;&#x3068;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x30D4;&#x30AC; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x304C;&#x5F37;&#x304F;&#x5358;&#x65B9;&#x5411;&#x3060;&#x3063;&#x305F;: &#x30D4;&#x30AC; &#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x57FA;&#x5E95;&#x9762;&#x8FD1;&#x304F;&#x3092;&#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3068;&#x9802;&#x7AEF;&#x306E;&#x5834;&#x6240;&#x3002;&#x521D;&#x671F; &#xFF08;EEA1 &#x6B63;&#xFF09;&#x3001;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB; &#xFF08;Rab11a-&#x6B63;&#xFF09; &#x3068;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EA;&#x30F3; (Tf) &#x3067;&#x7D50;&#x679C;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E; Fcgamma &#x3068;&#x30D4;&#x30AC;&#x86CD;&#x5149;-&#x80AF;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x5171;&#x901A;/&#x57FA;&#x5E95;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5C55;&#x300D;&#x30D4;&#x30AC;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x30BD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057; Fcgamma &#x3088;&#x308A; Tf &#x6B63;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x3067;&#x8C4A;&#x304B;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x4F4F;&#x30BB;&#x30EB;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x6295;&#x5C04; Fcgamma &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30D4;&#x30AC;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5C0F;&#x80DE;&#x985E;&#x4F3C;&#x306E;&#x30E2;&#x30D3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x5171;&#x6709;&#x540C;&#x7B49;&#x4E21;&#x65B9;&#x9EBB;&#x85AC;&#x5BC6;&#x58F2;&#x30EB;&#x30FC;&#x30C8;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x4E0A;&#x307B;&#x307C;&#x540C;&#x3058;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x306E;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x306E;&#x91CD;&#x5408;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3002;

FcRn &#x3068; pIgR &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x7269;&#x8CEA;&#x8F38;&#x9001;&#x86CD;&#x5149;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306B;&#x3088;&#x308B; MDCK &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3002;

&#xD3B8;&#xAD11;&#xB41C; &#xC0C1;&#xD53C;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xBC30;&#xB2EC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;-&#xC911;&#xC7AC; transcytosis&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xC5B4; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9CE;&#xC740; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC911; &#xD569; &#xBA74;&#xC5ED; &#xAE00;&#xB85C;&#xBD88;&#xB9B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (pIgR)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; IgA (pIgA)&#xC758; basolateral-&#xD600;&#xB05D; &#xBC00;&#xB9E4; &#xC870;&#xC0AC;&#xAC00; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC801;&#xC740; &#xAF2D;&#xB300;&#xAE30; basolateral transcytosis&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC798; &#xC54C;&#xB824;&#xC838;, &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC544; Fc &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (FcRn) &#xBC29;&#xD5A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xCC3D; &#xC790; &#xC0C1;&#xD53C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xBAA8;&#xC131; IgGs &#xC804;&#xC1A1;. &#xD600;&#xB05D; basolateral &#xBC0F; basolateral-&#xD600;&#xB05D; transcytosis &#xBE44;&#xAD50;&#xB97C; FcRn &#xBC0F; Madin-&#xB2E4; &#xBE44; &#xC1A1;&#xACF3; &#xB2C8; &#xC2E0;&#xC7A5; (MDCK) &#xC140;&#xC5D0; pIgR co-expressed &#xD558; &#xACE0; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xD384;&#xC2A4;-&#xCCB4;&#xC774;&#xC2A4; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; apically &#xC801;&#xC6A9; &#xB41C; IgG Fcgamma &#xBC0F; basolaterally &#xC801;&#xC6A9; Piga&#xC758; &#xC804;&#xC1A1; &#xAC80;&#xC0AC;. Fcgamma &#xBC0F; pIgA &#xB178;&#xC120; &#xBC00;&#xB9E4; &#xB098;&#xC911; &#xCCB4;&#xC774;&#xC2A4; &#xC5B8;&#xC81C; &#xCC98;&#xC74C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBCC4;&#xB3C4; &#xD63C;&#xD569; &#xD588;&#xB2E4;. Fcgamma&#xB294; &#xBA3C;&#xC800; &#xD600;&#xB05D; &#xD45C;&#xBA74; &#xADFC;&#xCC98; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB41C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB354; &#xB3D9;&#xB4F1; &#xD558; &#xAC8C; &#xC140; &#xC218; &#xBC18;&#xD558;&#xB294; transcytosis&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558; &#xACE0; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xBD84;&#xC0B0; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, pIgA &#xC804;&#xC1A1;&#xC740; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xB2E8;&#xBC29;&#xD5A5;: pIgA &#xC2DC;&#xAC04; &#xC99D;&#xAC00;&#xC640; &#xAF2D;&#xB300;&#xAE30; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; basolateral &#xD45C;&#xBA74; &#xADFC;&#xCC98;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xB3D9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC77C;&#xBD80; Fcgamma &#xBC0F; pIgA &#xD615;&#xAD11; &#xCD08; (EEA1 &#xC591;&#xC131;), &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; (Rab11a-&#xC591;&#xC131;), transferrin (Tf)&#xC5D0; colocalized-&#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xACF5;&#xD1B5;/basolateral endosomes &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9;. Fcgamma Piga&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC815;&#xB82C; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; &#xB354; &#xC591;&#xC131; Tf endosomes &#xC2DC;&#xAC04;, &#xB18D;&#xCD95; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; vesicles &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; Fcgamma &#xB610;&#xB294; pIgA &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC774;&#xB3D9;&#xC131; &#xD2B9;&#xC131; &#xACF5;&#xC720; &#xB450; &#xBC00;&#xB9E4; &#xACBD;&#xB85C; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; microtubules&#xC5D0; &#xB300;&#xB7B5; &#xAC19;&#xC740; &#xC815;&#xB3C4;&#xB85C; &#xC758;&#xC874; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; microtubules depolymerizing&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB3D9;&#xB4F1; &#xD558; &#xAC8C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xC740; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;.

&#xD615;&#xAD11; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; MDCK &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xC1A1; FcRn pIgR &#xC911;&#xC7AC;&#xC758; &#xBE44;&#xAD50;.

Entrega de la prote&iacute;na a trav&eacute;s del epitelio polarizado es controlado por transcitosis mediada por receptor. Muchos estudios han examinado tr&aacute;fico basolateral-a-apical de polim&eacute;rico IgA (pIgA) por el receptor de la inmunoglobulina polim&eacute;rica (pIgR). Se sabe menos acerca de transcitosis apical a basolateral, la direcci&oacute;n del receptor Fc neonatal (FcRn) transporta IgGs materna a trav&eacute;s del epitelio intestinal. Para comparar transcitosis apical a basolateral y basolateral-a-apical, nos co-expressed FcRn y pIgR en c&eacute;lulas de ri&ntilde;&oacute;n canino (MDCK) Madin-Darby y utiliza el pulso-persiga los experimentos con microscop&iacute;a confocal para examinar transporte de apicalmente aplicada Fcgamma IgG y pIgA basolaterally aplicada. Fcgamma y pIgA rutas de tr&aacute;fico fueron inicialmente separados pero entremezclados en tiempos posteriores de la persecuci&oacute;n. Fcgamma primero fue localizado cerca de la superficie apical, pero se convirti&oacute; m&aacute;s igualmente distribuido a trav&eacute;s de la c&eacute;lula, consistente con la concomitante transcitosis y reciclaje. Por el contrario, el transporte de pIgA fue fuertemente unidireccional: pIgA pas&oacute; de cerca de la superficie basolateral a una localizaci&oacute;n apical con el aumento de tiempo. Algunos Fcgamma y pIgA fluorescencia colocalized en temprano (EEA1-positivo), reciclaje (Rab11a-positivo) y transferrina (Tf)-positivo com&uacute;n/basolateral reciclaje endosomas. Fcgamma se convirti&oacute; m&aacute;s enriquecido en endosomas Tf-positivo con el tiempo, mientras que pIgA se clasific&oacute; de estos compartimientos. Im&aacute;genes de c&eacute;lulas vivas revelaron que las ves&iacute;culas que contienen Fcgamma o pIgA comparten similares caracter&iacute;sticas de movilidad y equivalente se vieron afectadas por la depolymerizing de los microt&uacute;bulos, lo que indica que ambas rutas de tr&aacute;fico dependieron m&aacute;s o menos el mismo grado de microt&uacute;bulos intactos.

Comparaci&oacute;n de transporte FcRn - y pIgR-mediado en las c&eacute;lulas MDCK por microscop&iacute;a confocal de fluorescencia.

&#x6709;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x83CC;&#x662F;&#x5176;&#x4E2D;&#x6700;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x751F;&#x7269;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x548C;&#x533B;&#x5B66;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x68C0;&#x8BA8;&#x5982;&#x4F55;&#x88AB;&#x7528;&#x4E8E;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x56FE;&#x50CF;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x603B;&#x7ED3;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3001; &#x6BCF;&#x4E2A;&#xFF0C;&#x5229;&#x5F0A;&#x7684;&#x6280;&#x672F;&#x7EC6;&#x8282;&#x548C;&#x5DF2;&#x53D6;&#x5F97;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x751F;&#x7269;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x529B;&#x3002;&#x4E09;&#x4E2A;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x4F8B;&#x5B50;&#x7ED3;&#x6784;&#x3001;&quot;mesosomes&#xFF0C;&quot;&quot;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x7684;&#x7EC6;&#x4E1D;&#xFF0C;&quot;&#x548C;&quot;nucleoid&#xFF0C;&quot;&#x7528;&#x6765;&#x8BF4;&#x660E;&#x5982;&#x4F55;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x8FDB;&#x5C55;&#x5851;&#x9020;&#x4E86;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x8D85;&#x5FAE;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x7406;&#x89E3;&#x3002;&#x6D89;&#x53CA;&#x8131;&#x6C34;&#x548C;&#x91D1;&#x5C5E;&#x6C61;&#x6E0D;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5728;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x548C;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x5F88;&#x591A;&#x7684;&#x8D85;&#x5FAE;&#x7ED3;&#x6784;&#x7279;&#x70B9;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5B83;&#x4EEC;&#x53EF;&#x4EE5;&#x751F;&#x6210;&#x8BEF;&#x5BFC;&#x6027;&#x6587;&#x7269;&#xFF0C;&#x672A;&#x80FD;&#x4FDD;&#x7559;&#x91CD;&#x8981;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x5982;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x3002;&#x53D1;&#x660E;&#x7684;&#x4F4E;&#x6E29;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x51BB;&#x7ED3;&#x6C34;&#x5316;&#x3001; &#x672C;&#x673A;&#x9644;&#x8FD1;&#x7684;&#x72B6;&#x6001;&#xFF0C;&#x800C;&#x65E0;&#x9700;&#x8131;&#x6C34;&#x548C;&#x6C61;&#x6E0D;&#x6620;&#x50CF;&#xFF0C;&#x73B0;&#x5728;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4E86;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x65B0;&#x89C1;&#x89E3;&#x3002;&#x603B;&#x7ED3;&#x52AA;&#x529B;&#x786E;&#x5B9A;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x4F4E;&#x6E29; EM &#x56FE;&#x50CF;&#x4E2D;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;

&#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x900F;&#x5C04;&#x7535;&#x955C;&#xFF1A; &#x4ECE;&#x51B7;&#x51BB;&#x7535;&#x955C;&#x7684;&#x65B0;&#x89C1;&#x89E3;&#x3002;

Some bacteria are amongst the most important model organisms for biology and medicine. Here we review how electron microscopes have been used to image bacterial cells, summarizing the technical details of the various methods, the advantages and disadvantages of each, and the major biological insights that have been obtained. Three specific example structures, "mesosomes," "cytoskeletal filaments," and "nucleoid," are used to illustrate how methodological advances have shaped our understanding of bacterial ultrastructure. Methods that involve dehydration and metal stains are widely practiced and have revealed many ultrastructural features, but they can generate misleading artifacts and have failed to preserve important structures such as the bacterial cytoskeleton. The invention of cryo-electron microscopy, which allows bacterial cells to be imaged in a frozen-hydrated, near-native state without the need for dehydration and stains, has now led to important new insights. Efforts to identify structures and localize specific proteins in cryo-EM images are summarized.

Bacterial TEM: new insights from cryo-microscopy.

Certaines bact&#xE9;ries sont parmi les organismes mod&#xE8;les les plus importants pour la biologie et la m&#xE9;decine. Ici nous passons en revue la fa&#xE7;on dont des microscopes &#xE9;lectroniques ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;s pour les cellules d&#x26;#39;image bact&#xE9;riennes, r&#xE9;sumant les d&#xE9;tails techniques des diff&#xE9;rentes m&#xE9;thodes, les avantages et les inconv&#xE9;nients de chacun, et les id&#xE9;es principales biologiques qui ont &#xE9;t&#xE9; obtenus. Trois structures sp&#xE9;cifiques, par exemple &#x26;quot;m&#xE9;sosomes&#xBB;, &#xAB;filaments du cytosquelette,&#x26;quot; et &#x26;quot;nucl&#xE9;o&#xEF;de&#x26;quot;, sont utilis&#xE9;s pour illustrer comment les progr&#xE8;s m&#xE9;thodologiques qui ont fa&#xE7;onn&#xE9; notre compr&#xE9;hension de l&#x26;#39;ultrastructure bact&#xE9;rienne. Les m&#xE9;thodes qui impliquent la d&#xE9;shydratation et les taches m&#xE9;talliques sont largement pratiqu&#xE9;s et ont r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; de nombreuses caract&#xE9;ristiques ultrastructurales, mais ils peuvent g&#xE9;n&#xE9;rer des artefacts trompeuses et n&#x26;#39;ont pas r&#xE9;ussi &#xE0; pr&#xE9;server les structures importantes telles que le cytosquelette bact&#xE9;rien. L&#x26;#39;invention de la cryo-microscopie &#xE9;lectronique, qui permet aux cellules bact&#xE9;riennes &#xE0; imager dans une gel&#xE9;e hydrat&#xE9;e, quasi-native Etat sans la n&#xE9;cessit&#xE9; pour la d&#xE9;shydratation et les taches, a conduit &#xE0; d&#x26;#39;importantes nouvelles connaissances. Les efforts pour identifier et localiser les structures des prot&#xE9;ines sp&#xE9;cifiques dans le cryo-EM images sont r&#xE9;sum&#xE9;es.

TEM bact&#xE9;rienne: Les enseignements d&#x26;#39;cryo-microscopie

Einige Bakterien geh&ouml;ren zu den wichtigsten Modellorganismen f&uuml;r Biologie und Medizin. Hier besprechen wir wie Elektronenmikroskopen verwendet wurden zum Bild von bakterieller Zellen zusammenfassen, die technischen Informationen &uuml;ber die verschiedenen Methoden, die vor- und Nachteile der einzelnen und der gro&szlig;en biologischen Einsichten, die erhoben wurden. Drei spezifische Beispielstrukturen, &quot;Mesosomen,&quot; &quot;Zytoskelett Filamenten&quot; und &quot;Kern&auml;quivalent,&quot; werden verwendet, um veranschaulichen, wie methodische Fortschritte haben unser Verst&auml;ndnis der bakteriellen Ultrastruktur gepr&auml;gt. Methoden, die Austrocknung und Metall Flecken beinhalten sind weit verbreitet und viele ultrastrukturelle Eigenschaften aufgedeckt haben, aber sie k&ouml;nnen irref&uuml;hrend Artefakte erzeugen und haben es vers&auml;umt, wichtige Strukturen wie bakterielle Zytoskeletts zu bewahren. Die Erfindung der Kryo-Elektronenmikroskopie, der bakterielle Zellen, die in einem gefroren-hydratisiert, fast Native Zustand ohne die Notwendigkeit f&uuml;r Dehydrierung und Flecken abgebildet werden kann, hat jetzt zu wichtigen neuen Erkenntnissen gef&uuml;hrt. Bem&uuml;hungen um die Strukturen zu identifizieren und lokalisieren spezifische Proteine in Cryo-EM Bilder sind zusammengefasst.

Bakterielle TEM: neue Erkenntnisse aus der Cryo-Mikroskopie.

Alcuni batteri sono tra i pi&ugrave; importanti organismi modello per la biologia e la medicina. Qui esaminiamo come microscopi elettronici sono stati usati per raffigurare le cellule batteriche, che riassume i dettagli tecnici di vari metodi, i vantaggi e gli svantaggi di ciascuno e le principali intuizioni biologiche che sono state ottenute. Tre strutture di esempio specifico, &quot;mesosomes&quot;, &quot;filamenti citoscheletrici&quot; e &quot;nucleoide&quot;, vengono utilizzati per illustrare gli avanzamenti metodologici come hanno plasmato la nostra comprensione dell&#39;ultrastruttura batterica. Metodi che comportano disidratazione e macchie di metalliche sono ampiamente praticati e hanno rivelato molte caratteristiche ultrastrutturali, ma pu&ograve; generare artefatti fuorvianti e non sono riusciti a preservare importanti strutture quali il citoscheletro batterico. L&#39;invenzione del crio-microscopia elettronica, che permette alle cellule batteriche di essere fotografata in uno stato congelato-idratata, quasi nativa senza bisogno di disidratazione e macchie, ha portato a importanti nuove intuizioni. Gli sforzi per individuare strutture e localizzare le proteine specifiche nelle immagini di cryo-EM sono ricapitolati.

TEM batterica: nuove intuizioni da cryo-microscopia.

&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x533B;&#x5B66;&#x306E;&#x6700;&#x3082;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x9577;&#x6240;&#x3068;&#x77ED;&#x6240;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x529B;&#x306E;&#x6280;&#x8853;&#x7684;&#x306A;&#x8A73;&#x7D30;&#x3092;&#x307E;&#x3068;&#x3081;&#x3001;&#x753B;&#x50CF;&#x7D30;&#x83CC;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304B;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x3066;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002; 3&#x3064;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x4F8B;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3001; &#x26;quot;mesosomes&#x26;quot;&#x3001; &#x26;quot;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x26;quot;&#x3068; &#x26;quot;&#x6838;&#x69D8;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x26;quot;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8AD6;&#x306E;&#x9032;&#x6B69;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x5FAE;&#x7D30;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306E;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x3092;&#x5F62;&#x4F5C;&#x3063;&#x3066;&#x304D;&#x305F;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8131;&#x6C34;&#x3068;&#x91D1;&#x5C5E;&#x306E;&#x6C5A;&#x308C;&#x3092;&#x4F34;&#x3046;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x5E83;&#x304F;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x8D85;&#x5FAE;&#x7D30;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x8AA4;&#x89E3;&#x3092;&#x62DB;&#x304F;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30A2;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D5;&#x30A1;&#x30AF;&#x30C8;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x3001;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5931;&#x6557;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x8131;&#x6C34;&#x3084;&#x6C5A;&#x308C;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x305B;&#x305A;&#x306B;&#x51CD;&#x7D50;&#x6C34;&#x548C;&#x3001;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x8FD1;&#x3044;&#x72B6;&#x614B;&#x3067;&#x64AE;&#x50CF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x4F4E;&#x6E29;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306E;&#x767A;&#x660E;&#x306F;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x3001;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x3001;&#x30AF;&#x30E9;&#x30A4;&#x30AA;EM&#x753B;&#x50CF;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x52AA;&#x529B;&#x304C;&#x8981;&#x7D04;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;TEM&#xFF1A;&#x30AF;&#x30E9;&#x30A4;&#x30AA;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6D1E;&#x5BDF;

&#xC77C;&#xBD80; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xB294; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xACFC; &#xC758;&#xD559;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBAA8;&#xB378; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xAC80;&#xD1A0; &#xC138;&#xADE0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC5BC;&#xB9C8;&#xB098; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;, &#xC7A5;&#xC810; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xC810; &#xAC01;&#xAC01;&#xC758; &#xAE30;&#xC220;&#xC801;&#xC778; &#xC138;&#xBD80; &#xC0AC;&#xD56D; &#xBC0F; &#xC8FC;&#xC694; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xAC00;&#xC838;&#xC628; &#xC694;&#xC57D;. &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xD2B9;&#xC815; &#xC608;&#xC81C; &#xAD6C;&#xC870;, &quot;mesosomes,&quot; &quot;cytoskeletal &#xD544; &#xB77C; &#xBA58;,&quot; &#xBC0F; &quot;&#xD575;&#xC591;&#xCCB4;,&quot; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xBC29;&#xBC95;&#xB860;&#xC758; &#xBC1C;&#xC804;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xC138;&#xADE0; &#xB300;&#xAD8C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC774;&#xD574;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD0C8;&#xC218;&#xC640; &#xAE08;&#xC18D; &#xC5BC;&#xB8E9;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xC5F0;&#xC2B5; &#xD558; &#xACE0; &#xB9CE;&#xC740; ultrastructural &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD574;&#xC57C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xC798;&#xBABB; &#xB41C; &#xC544;&#xD2F0;&#xD329;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xADE0; cytoskeleton &#xAC19;&#xC740; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC2E4;&#xD328;. &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC; &#xD0C8;&#xC218;&#xC640; &#xC5BC;&#xB8E9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xC5C6;&#xC774; &#xB0C9;&#xB3D9; &#xC218;&#xC0B0;&#xD654;, &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC5D0; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC6B4; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xACF3;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xB0B4;&#xB294;-&#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC758; &#xBC1C;&#xBA85; &#xC9C0;&#xAE08; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC8FC;&#xB3C4;&#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;. &#xAD6C;&#xC870; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xBC0F; &#xACF3;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xB0B4;&#xB294;-EM &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xC815; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB178;&#xB825;&#xC5D0; &#xC694;&#xC57D; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC138;&#xADE0; &#xD3B8;: &#xACF3;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xB0B4;&#xB294;-&#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;.

Algunas bacterias son algunos de los organismos modelo m&#xE1;s importantes para la biolog&#xED;a y la medicina. Aqu&#xED; hacemos una revisi&#xF3;n de microscopios electr&#xF3;nicos se han utilizado para las c&#xE9;lulas bacterianas de imagen, que resume los detalles t&#xE9;cnicos de los distintos m&#xE9;todos, las ventajas y desventajas de cada uno, y las ideas principales biol&#xF3;gicos que se han obtenido. Tres estructuras de ejemplo concreto, &#x26;quot;mesosomas&#x26;quot;, &#x26;quot;filamentos del citoesqueleto,&#x26;quot; y &#x26;quot;nucleoide&#x26;quot;, se utilizan para ilustrar c&#xF3;mo los avances metodol&#xF3;gicos han dado forma a nuestra comprensi&#xF3;n de la ultraestructura bacteriana. Los m&#xE9;todos que implican la deshidrataci&#xF3;n y las manchas de metal son ampliamente practicado y han puesto de manifiesto muchas caracter&#xED;sticas ultraestructurales, pero pueden generar artefactos enga&#xF1;osos y no han logrado preservar las estructuras importantes, como el citoesqueleto bacteriano. La invenci&#xF3;n de la crio-microscop&#xED;a electr&#xF3;nica, que permite a las c&#xE9;lulas bacterianas a ser fotografiado en un congelado hidratado, un estado casi nativo sin necesidad de la deshidrataci&#xF3;n y las manchas, ya ha dado lugar a nuevas e importantes ideas. Los esfuerzos para identificar y localizar las estructuras de prote&#xED;nas espec&#xED;ficas en la crio-ME im&#xE1;genes se resumen.

Bacteriana TEM: Contribuciones clave a partir de Cryo-microscopio

&#x4F4E;&#x6E29;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C; (&#x4F4E;&#x6E29; EM) &#x975E;&#x56FA;&#x5B9A;&#x3001; &#x5BB6;&#x4EBA;&#x6E05;&#x6E05;&#x767D;&#x767D;&#x3001; &#x51BB;&#x7ED3;&#x6C34;&#x5408;&#x6837;&#x672C;&#x7684;&#x4F20;&#x8FBE;&#x4E86;&#x6700;&#x53EF;&#x9760;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7684;&quot;&#x6D3B;&quot;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x89C6;&#x56FE;&#x3002;&#x6837;&#x54C1;&#x5236;&#x5907;&#x65B9;&#x6CD5;&#x548C;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x6280;&#x672F;&#x5728;&#x8FC7;&#x53BB;&#x5341;&#x5E74;&#x8FDB;&#x5C55;&#x63D0;&#x51FA;&#x4E86;&#x8FD9;&#x79CD;&#x505A;&#x6CD5;&#x66F4;&#x4F8B;&#x884C;&#x548C;&#x83B7;&#x5F97;&#x66F4;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x793E;&#x4F1A;&#x7684;&#x90E8;&#x5206;&#x7ED3;&#x6784;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x3002;&#x8BB8;&#x591A;&#x4F4E;&#x6E29; EM &#x6837;&#x54C1;&#x591F;&#x8584;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6620;&#x50CF;&#x4F5C;&#x4E3A; wholemounts&#xFF0C;&#x4F46;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x592A;&#x539A;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x5FC5;&#x987B;&#x662F; cryosectioned &#x4EE5;&#x83B7;&#x53D6;&#x6210;&#x529F;&#x6210;&#x50CF;&#x8DB3;&#x591F;&#x8584;&#x7684;&#x6837;&#x54C1;&#x3002;&#x73BB;&#x7483;&#x6750;&#x6599;&#x7684;&#x6837;&#x54C1;&#x662F;&#x5177;&#x6709;&#x6311;&#x6218;&#x6027;&#x3001; &#x8017;&#x65F6;&#x7684;&#x4EFB;&#x52A1;&#x3002;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5BA4;&#x7684;&#x4E00;&#x4E9B;&#x52AA;&#x529B;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x4EE5;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x529E;&#x6CD5;&#x548C;&#x6280;&#x672F;&#x6837;&#x54C1;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4ED4;&#x7EC6;&#x63CF;&#x8FF0;&#x73BB;&#x7483;&#x4F53;&#x90E8;&#x5206;&#x548C;&#x4E0E;&#x5B83;&#x4EEC;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x9879;&#x76EE;&#x7684;&#x6027;&#x8D28;&#x3002;&#x5728;&#x4F4E;&#x6E29; EM &#x5B9E;&#x9A8C;&#x5BA4;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x662F;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x7ECF;&#x5E38;&#x4F1A;&#x4EA7;&#x751F;&#x9AD8;&#x8D28;&#x91CF;&#x7ED3;&#x6784;&#x5316;&#x6570;&#x636E;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x6837;&#x54C1;&#x7684;&#x51E0;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C06;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x5229;&#x7528;&#x5FAE;&#x64CD;&#x4F5C;&#x4EE5;&#x5E2E;&#x52A9; cryomicrotomist &#x63A7;&#x5236;&#x73BB;&#x7483;&#x4F53;&#x622A;&#x9762;&#xFF0C;&#x5F53;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x88AB;&#x780D;&#x548C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684;&#x5404;&#x8282;&#x7684; EM &#x7F51;&#x683C;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x4ECE;&#x6837;&#x54C1;&#x5236;&#x5907;&#x7684;&#x9AD8;&#x538B;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x6B65;&#x9AA4;&#x51BB;&#x7ED3;&#x5230;&#x5F20;&#x8D34;&#x5230;&#x7F51;&#x683C;&#x7684;&#x73BB;&#x7483;&#x4F53;&#x90E8;&#x5206;&#x8986;&#x76D6;&#x7684;&#x7EC6;&#x8282;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x6837;&#x54C1;&#x786C;&#x4EF6;&#x3001; &#x73AF;&#x5883;&#x6761;&#x4EF6;&#x3001; &#x8BA8;&#x8BBA;&#x548C;&#x5256;&#x5207;&#x5DE5;&#x4EF6;&#x3002;

&#x5FAE;&#x64CD;&#x4F5C;&#x673A;&#x5668;&#x4EBA;&#x8F85;&#x52A9;&#x73BB;&#x7483;&#x4F53;&#x6837;&#x54C1;&#x548C;&#x6837;&#x54C1;&#x5236;&#x5907;&#x7684;&#x9AD8;&#x538B;&#x51BB;&#x7ED3;&#x3002;

Cryo-electron microscopy (cryo-EM) of unfixed, unstained, frozen-hydrated samples conveys the most reliable view of the "live" state of cells and tissues. Advances in sample preparation methods and electron microscope technology over the last decade have made this approach more routine and available to a broader segment of the structural biology community. Many cryo-EM samples are thin enough to be imaged as wholemounts, but most cells and tissues are too thick and must be cryosectioned to obtain samples that are sufficiently thin for successful imaging. Cryosectioning of vitreous material is a challenging and time-consuming task. A number of laboratories have worked hard to develop approaches and technologies for cryosectioning and to carefully characterize the nature of vitreous sections and the artifacts associated with them. Several different cryosectioning methods are in use in cryo-EM laboratories, each of which is effective and routinely yields high-quality structural data. Here, we describe a particular method that utilizes a micromanipulator to aid the cryomicrotomist in controlling vitreous sections as they are being cut and to facilitate transfer of the sections to an EM grid. Each step in the process, from preparing samples by high-pressure freezing to affixing vitreous sections to a grid, is covered in detail, including discussions of cryosectioning hardware, environmental conditions, and sectioning artifacts.

Micromanipulator-assisted vitreous cryosectioning and sample preparation by high-pressure freezing.

Cryo microscopie &eacute;lectronique (cryo-EM) des &eacute;chantillons non fix&eacute;es, non color&eacute;es, gel&eacute;-hydrat&eacute; transmet l&#39;avis plus fiable de l&#39;&Eacute;tat &laquo; en direct &raquo; des cellules et des tissus. Avanc&eacute;es dans les m&eacute;thodes de pr&eacute;paration d&#39;&eacute;chantillon et de la technologie de la microscopie &eacute;lectronique au cours de la derni&egrave;re d&eacute;cennie ont fait cette d&eacute;marche plus syst&eacute;matique et plus disponible &agrave; un segment plus large de la communaut&eacute; de la biologie structurale. De nombreux &eacute;chantillons de cryo-EM sont suffisamment minces pour &ecirc;tre photographi&eacute; comme wholemounts, mais la plupart des cellules et des tissus sont trop &eacute;pais et doivent &ecirc;tre la phallo&iuml;dine pour pr&eacute;lever des &eacute;chantillons qui sont suffisamment minces pour l&#39;imagerie r&eacute;ussie. Cryosectioning de mat&eacute;riau vitreux est une t&acirc;che difficile et fastidieuse. Un certain nombre de laboratoires ont travaill&eacute; dur pour d&eacute;velopper des approches et des technologies pour cryosectioning et pour bien caract&eacute;riser la nature des sections vitreuses et les objets qui leur sont associ&eacute;s. Plusieurs cryosectioning diff&eacute;rentes m&eacute;thodes sont utilis&eacute;es dans les laboratoires de cryo-EM, dont chacun est efficace et donne syst&eacute;matiquement les donn&eacute;es structurales de haute qualit&eacute;. Nous d&eacute;crivons ici une m&eacute;thode particuli&egrave;re qui utilise un micromanipulateur &agrave; l&#39;aide de la cryomicrotomist dans le contr&ocirc;le des sections vitreuses comme ils sont coup&eacute;s et &agrave; faciliter le transfert des sections &agrave; une grille d&#39;EM. Chaque &eacute;tape du processus, depuis la pr&eacute;paration des &eacute;chantillons par haute pression de cong&eacute;lation &agrave; l&#39;apposition des sections vitreuses &agrave; une grille, est couvert en d&eacute;tail, y compris une discussion de cryosectioning mat&eacute;riel, conditions environnementales et sectionnant des artefacts.

Cryosectioning vitreux micromanipulateur assist&eacute;e et pr&eacute;paration d&#39;&eacute;chantillons par haute pression de gel.

Kryo-Elektronenmikroskopie (Cryo-EM) ungebundenen, Ungef&auml;rbtes, gefroren-hydratisiert Proben vermittelt den zuverl&auml;ssigsten Blick auf die &quot;live&quot; Zustand von Zellen und Geweben. Fortschritte in der Vorbereitung Beispielmethoden und Elektronen-Mikroskop-Technologie im letzten Jahrzehnt haben diesen Ansatz mehr Routine und einem ausgedehnteren Segment der Strukturbiologie Gemeinschaft zug&auml;nglich gemacht. Viele Cryo-EM-Proben sind d&uuml;nn genug, um als Wholemounts abgebildet werden, aber die meisten Zellen und Gewebe sind zu dick und m&uuml;ssen Cryosectioned und Proben zu erhalten, die f&uuml;r erfolgreiche Bildgebung ausreichend d&uuml;nn sind. Kryoschnitte glasartigen Material ist eine schwierige und zeitraubende Angelegenheit. Forschungsinstitute haben hart gearbeitet, Ans&auml;tze und Technologien f&uuml;r die Kryoschnitte entwickeln und um die Natur der Glask&ouml;rper Abschnitte und die Artefakte, die ihnen zugeordneten sorgf&auml;ltig zu charakterisieren. Mehrere verschiedene Kryoschnitte Methoden sind in Cryo-EM Laboratorien, von die jede ist effektiv und routinem&auml;&szlig;ig liefert qualitativ hochwertige Strukturdaten im Einsatz. Hier beschreiben wir eine bestimmte Methode, die verwendet eine Mikromanipulator zur Unterst&uuml;tzung der Cryomicrotomist im Glask&ouml;rper Bereichen controlling, wie sie geschnitten werden und eine &Uuml;bertragung der Abschnitte an einer EM-Netz erm&ouml;glichen. Jeder Schritt in diesem Prozess, von der Vorbereitung der Proben von Hochdruck wird im Detail, einschlie&szlig;lich Diskussionen Kryoschnitte Hardware, Umweltbedingungen, und schneiden Artefakte Einfrieren bis zu anbringen glasigen Abschnitte an ein Netz abgedeckt.

Mikromanipulator-assistierte glasigen Kryoschnitte und Probenvorbereitung von Hochdruck Einfrieren.

Crio-microscopia elettronica (cryo-EM) di campioni slegati, senza macchia, congelati-idratato trasmette la vista pi&ugrave; affidabile dello stato &quot;dal vivo&quot; di cellule e tessuti. Progressi nei metodi di preparazione del campione e microscopio elettronico tecnologia nell&#39;ultimo decennio hanno fatto questo approccio pi&ugrave; sistematiche e disponibile per un ampio segmento della Comunit&agrave; biologia strutturale. Molti campioni di cryo-EM sono abbastanza sottile per essere imaged come wholemounts, ma la maggior parte delle cellule e dei tessuti sono troppo spessi e devono essere cryosectioned per ottenere campioni che sono sufficientemente sottile per l&#39;imaging di successo. Cryosectioning di materiale vitreo &egrave; un compito impegnativo e richiede tempo. Un certo numero di laboratori hanno lavorato duramente per sviluppare approcci e tecnologie per cryosectioning e per caratterizzare accuratamente la natura del vitrei sezioni e gli artefatti associati con loro. Sono diversi cryosectioning diversi metodi in uso nei laboratori di cryo-EM, ognuno dei quali &egrave; efficace e produce regolarmente dati strutturali di alta qualit&agrave;. Qui, descriviamo un particolare metodo che utilizza un micromanipolatore per aiutare il cryomicrotomist nel controllo sezioni vitrei come vengono abbattute e per facilitare il trasferimento delle sezioni di una griglia di EM. Ogni fase del processo, dalla preparazione di campioni di alta pressione congelamento per apposizione vitrei sezioni di una griglia, &egrave; coperto in dettaglio, comprese le discussioni di cryosectioning hardware, condizioni ambientali e gli artefatti di sezionamento.

Micromanipolatore-assistita cryosectioning vitreo e preparazione del campione da alta pressione di congelamento.

&#x30AF;&#x30E9;&#x30A4;&#x30AA;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1; (Cryoem) &#x53D6;&#x308A;&#x306F;&#x305A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x51B7;&#x51CD;&#x6C34;&#x548C;&#x7121;&#x67D3;&#x8272;&#x8A66;&#x6599;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3084;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x300C;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x300D;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x6700;&#x3082;&#x4FE1;&#x983C;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x3092;&#x4F1D;&#x3048;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8A66;&#x6599;&#x4F5C;&#x88FD;&#x6CD5;&#x3068;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x6280;&#x8853;&#x6700;&#x5F8C;&#x306E; 10 &#x5E74;&#x9593;&#x306E;&#x9032;&#x6B69;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x591A;&#x304F;&#x30EB;&#x30FC;&#x30C1;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x69CB;&#x9020;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x30B3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30CB;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x5E83;&#x3044;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x591A;&#x304F;&#x306E; Cryoem &#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB; wholemounts &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x306A;&#x8584;&#x304C;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3084;&#x7D44;&#x7E54;&#x304C;&#x539A;&#x3059;&#x304E;&#x308B;&#x3068; cryosectioned &#x6210;&#x529F;&#x3057;&#x305F;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x306B;&#x8584;&#x3044;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3092;&#x53D6;&#x5F97;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Cryosectioning &#x785D;&#x5B50;&#x4F53;&#x6750;&#x6599;&#x306E;&#x6311;&#x6226;&#x7684;&#x306A;&#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x304B;&#x304B;&#x308B;&#x30BF;&#x30B9;&#x30AF;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x7814;&#x7A76;&#x6240;&#x306E;&#x6570;&#x306F;&#x3001;&#x30CF;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3068;&#x6280;&#x8853; cryosectioning &#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3068;&#x614E;&#x91CD;&#x306B;&#x785D;&#x5B50;&#x4F53;&#x306E;&#x30BB;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30A2;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D5;&#x30A1;&#x30AF;&#x30C8;&#x306E;&#x6027;&#x8CEA;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x308B;&#x50CD;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B; cryosectioning &#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x304C;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x9AD8;&#x54C1;&#x8CEA;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x65E5;&#x5E38;&#x7684;&#x306B;&#x5229;&#x56DE;&#x308A; Cryoem &#x6240;&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x304C;&#x30AB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x785D;&#x5B50;&#x4F53;&#x306E;&#x30BB;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3001;cryomicrotomist &#x3092;&#x652F;&#x63F4;&#x3057;&#x3001;EM &#x30B0;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x3078;&#x306E;&#x30BB;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x8EE2;&#x9001;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30CB;&#x30D4;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3092;&#x9AD8;&#x5727;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6E96;&#x5099;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x5404;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x785D;&#x5B50;&#x4F53;&#x306E;&#x30BB;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x30B0;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x306B;&#x8A3C;&#x5370;&#x3092;&#x3059;&#x308B;&#x51CD;&#x7D50; cryosectioning &#x30CF;&#x30FC;&#x30C9;&#x30A6;&#x30A7;&#x30A2;, &#x74B0;&#x5883;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x8B70;&#x8AD6;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3068;&#x30A2;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D5;&#x30A1;&#x30AF;&#x30C8;&#x3092;&#x30BB;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x8A73;&#x7D30;&#x306B;&#x8986;&#x308F;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xC720;&#xB9AC; cryosectioning micromanipulator &#xC9C0;&#xC6D0; &#xBC0F; &#xACE0;&#xC555;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0D8;&#xD50C; &#xC900;&#xBE44; &#xCC2C;.

Crio-microscop&iacute;a (cryo-EM) de muestras no fijadas, sin manchas, congelados-hidratado transmite la vista m&aacute;s confiable del estado &quot;en vivo&quot; de c&eacute;lulas y tejidos. Avances en m&eacute;todos de preparaci&oacute;n de muestra y la tecnolog&iacute;a del microscopio electr&oacute;nico durante la &uacute;ltima d&eacute;cada han hecho este enfoque m&aacute;s sistem&aacute;tico y disponible para un segmento m&aacute;s amplio de la comunidad de biolog&iacute;a estructural. Muchas muestras de cryo-EM son suficientemente delgadas como para ser reflejada como wholemounts, pero la mayor&iacute;a de las c&eacute;lulas y los tejidos son demasiado gruesos y deben ser cryosectioned para obtener las muestras que son lo suficientemente delgadas para la proyecci&oacute;n de imagen de &eacute;xito. Cryosectioning de material v&iacute;treo es una tarea dif&iacute;cil y requiere mucho tiempo. Un n&uacute;mero de laboratorios ha trabajado duro para desarrollar enfoques y tecnolog&iacute;as para cryosectioning y caracterizar cuidadosamente la naturaleza de las secciones v&iacute;treas y los artefactos asociados con ellos. Varios m&eacute;todos de cryosectioning diferentes est&aacute;n en uso en el laboratorio de cryo-EM, que es eficaz y produce rutinariamente datos estructurales de alta calidad. Aqu&iacute;, describimos un m&eacute;todo particular que utiliza un micromanipulador para facilitar la cryomicrotomist en el control de secciones v&iacute;treas como se cortan y facilitar la transferencia de las secciones a una red de EM. Cada paso en el proceso de preparaci&oacute;n de muestras por alta presi&oacute;n de congelaci&oacute;n para colocaci&oacute;n v&iacute;treas secciones a una red, est&aacute; cubierto en detalle, incluyendo discusiones de cryosectioning hardware, condiciones ambientales y artefactos de seccionamiento.

Congelaci&oacute;n de cryosectioning v&iacute;treo ayuda de instrumental quir&uacute;rgico y la preparaci&oacute;n de la muestra por alta presi&oacute;n.

&#x4E73;&#x817A;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x8102;&#x6CAB; (CLD) &#x63A5;&#x53D7;&#x7531;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x819C;&#x7684;&#x5305;&#x7EDC;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x4EA7;&#x751F;&#x5976;&#x8102;&#x7684;&#x5206;&#x6CCC;&#x3002;Adipophilin (ADPH/Plin2&#xFF09; &#x7684;&#x8102;&#x8D28;&#x6EF4;&#x76F8;&#x5173;&#x86CB;&#x767D;&#x3001; perilipin/PAT &#x5BB6;&#x5EAD;&#x6210;&#x5458;&#x88AB;&#x5047;&#x8BBE;&#x6765;&#x8C03;&#x89E3; CLD &#x5206;&#x6CCC;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E0E;&#x6839;&#x5C16;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x5143;&#x7D20;&#x7684;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;&#x5206;&#x6CCC;&#x7684; CLD &#x5305;&#x8986;&#x622A;&#x65AD; ADPH &#x7F3A;&#x4E4F;&#x7F16;&#x7801;&#x6307;&#x8BA4;&#x56DB;&#x87BA;&#x65CB;&#x675F;&#x7ED3;&#x6784; C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x533A;&#x57DF;&#x76F8;&#x5BF9;&#x4E8E; CLD &#x8986;&#x4EE5;&#x5168;&#x957F; ADPH &#x53D7;&#x635F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x540C;&#x6E90;&#x5EFA;&#x6A21;&#x548C;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x548C;&#x7EAF;&#x5316;&#x91CD;&#x7EC4; ADPH C &#x603B;&#x7AD9;&#x7684;&#x819C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5C5E;&#x6027;&#x6765;&#x4E86;&#x89E3;&#x5982;&#x4F55;&#x6B64;&#x533A;&#x57DF;&#x53EF;&#x80FD;&#x4ECB;&#x5BFC; CLD &#x5206;&#x6CCC;&#x3002;&#x540C;&#x6E90;&#x5EFA;&#x6A21;&#x652F;&#x6301; ADPH C &#x603B;&#x7AD9;&#x5F62;&#x6210;&#x56DB;&#x87BA;&#x65CB;&#x675F;&#x6BCD;&#x9898;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x7ED3;&#x6784;&#x53EF;&#x5F62;&#x6210;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x819C;&#x53CC;&#x5C42;&#x4E92;&#x52A8;&#x7684;&#x6982;&#x5FF5;&#x3002;&#x5706;&#x4E8C;&#x8272;&#x6027;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6620;&#x5C04;&#x7814;&#x7A76;&#x8BC1;&#x5B9E; ADPH C &#x603B;&#x7AD9;&#x662F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x6298;&#x53E0;&#x7684; &alpha; &#x87BA;&#x65CB;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x5B83;&#x662F;&#x76F8;&#x5BF9;&#x8010;&#x5C3F;&#x7D20;&#x53D8;&#x6027;&#x3002;&#x8102;&#x8D28;&#x4F53;&#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x7EAF;&#x51C0;&#x7684; C &#x603B;&#x7AD9;&#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x78F7;&#x8102;&#x819C;&#x9759;&#x7535;&#x4F9D;&#x8D56;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x7814;&#x7A76;&#x8BB0;&#x8F7D;&#x5B83;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x3002;&#x96C6;&#x4F53;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684; ADPH C &#x603B;&#x7AD9;&#x5F62;&#x6210;&#x7A33;&#x5B9A;&#x819C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x87BA;&#x65CB;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x5B83;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684; CLD &#x5206;&#x6CCC;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63A8;&#x6D4B; ADPH &#x548C;&#x819C;&#x78F7;&#x8102;&#x7684;&#x56DB;&#x87BA;&#x65CB;&#x675F;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x5976;&#x8102;&#x5206;&#x6CCC;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B65;&#x3002;

Adipophilin C &#x603B;&#x7AD9;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x5976;&#x8102;&#x5206;&#x6CCC; self-folding &#x819C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x57DF;&#x3002;

Cytoplasmic lipid droplets (CLD) in mammary epithelial cells undergo secretion by a unique membrane envelopment process to produce milk lipids. Adipophilin (ADPH/Plin2), a member of the perilipin/PAT family of lipid droplet-associated proteins, is hypothesized to mediate CLD secretion through interactions with apical plasma membrane elements. We found that the secretion of CLD coated by truncated ADPH lacking the C-terminal region encoding a putative four-helix bundle structure was impaired relative to that of CLD coated by full-length ADPH. We used homology modeling and analyses of the solution and membrane binding properties of purified recombinant ADPH C terminus to understand how this region possibly mediates CLD secretion. Homology modeling supports the concept that the ADPH C terminus forms a four-helix bundle motif and suggests that this structure can form stable membrane bilayer interactions. Circular dichroism and protease mapping studies confirmed that the ADPH C terminus is an independently folding Î±-helical structure that is relatively resistant to urea denaturation. Liposome binding studies showed that the purified C terminus binds to phospholipid membranes through electrostatic dependent interactions, and cell culture studies documented that it localizes to the plasma membrane. Collectively, these data provide direct evidence that the ADPH C terminus forms a stable membrane binding helical structure that is important for CLD secretion. We speculate that interactions between the four-helix bundle of ADPH and membrane phospholipids may be an initial step in milk lipid secretion.

The adipophilin C terminus is a self-folding membrane-binding domain that is important for milk lipid secretion.

Des gouttelettes de lipides cytoplasmique (CLD) dans les cellules &eacute;pith&eacute;liales mammaires subissent une s&eacute;cr&eacute;tion par un processus d&#39;enveloppement de membrane unique pour produire des lipides du lait. L&#39;hypoth&egrave;se adipophilin (ADPH/Plin2), un membre de la famille perilipin/PAT de prot&eacute;ines associ&eacute;es aux gouttelettes de lipides, pour att&eacute;nuer la s&eacute;cr&eacute;tion de la CLD gr&acirc;ce &agrave; des interactions avec des &eacute;l&eacute;ments de la membrane plasmique apicale. Nous avons constat&eacute; que la s&eacute;cr&eacute;tion de CLD enduit par manque de ADPH tronqu&eacute; la r&eacute;gion C-terminale codant une structure putatif quatre h&eacute;lices bundle a &eacute;t&eacute; r&eacute;duite par rapport &agrave; celle du CLD enduit par ADPH pleine longueur. Nous avons utilis&eacute; la mod&eacute;lisation par homologie et analyses de la solution et les propri&eacute;t&eacute;s de liaison de membrane du terminus de ADPH C recombinante purifi&eacute;e pour comprendre comment cette r&eacute;gion est peut-&ecirc;tre intervient dans la s&eacute;cr&eacute;tion de CLD. Mod&eacute;lisation par homologie soutient l&#39;id&eacute;e que le terminus ADPH C constitue un motif de quatre h&eacute;lices bundle et sugg&egrave;re que cette structure peut former des interactions bicouche membrane stable. Dichro&iuml;sme circulaire et &eacute;tudes de cartographie de prot&eacute;ase a confirm&eacute; que le terminus ADPH C est une structure &alpha;-h&eacute;lico&iuml;dale ind&eacute;pendamment de pliage qui est relativement r&eacute;sistante &agrave; la d&eacute;naturation de l&#39;ur&eacute;e. &Eacute;tudes de liaison aux liposomes ont montr&eacute; que le terminus de C purifi&eacute; se lie aux phospholipides membranaires par des interactions &eacute;lectrostatiques d&eacute;pendantes, et &eacute;tudes sur la culture cellulaire document&eacute; qu&#39;il se localise &agrave; la membrane plasmique. Collectivement, ces donn&eacute;es fournissent une preuve directe que le terminus ADPH C forme une structure h&eacute;lico&iuml;dale de liaison stable de membrane qui est importante pour la s&eacute;cr&eacute;tion de CLD. Nous croyons que les interactions entre le faisceau de quatre h&eacute;lices de phospholipides ADPH et membrane peuvent &ecirc;tre un premier pas dans la s&eacute;cr&eacute;tion de lait lipidique.

Le terminus d&#39;adipophilin C est un domaine de liaison &agrave; membrane self-folding qui est important pour la s&eacute;cr&eacute;tion de lait lipidique.

Zellplasmatischen Lipid Tr&ouml;pfchen (CLD) Milch-Epithelzellen unterziehen Sekretion durch eine einzigartige Membranverfahren Umfassung, Fette Milch zu produzieren. Adipophilin (ADPH/Plin2), ein Mitglied der Familie Perilipin/PAT Lipid Droplet-assoziierte Proteine, ist die Hypothese CLD-Sekretion durch Interaktionen mit apikalen Plasmamembran-Elementen zu vermitteln. Wir fanden, dass die Sekretion von CLD beschichtet durch abgeschnittene ADPH fehlt, die die C-terminalen Region Codierung eine vermeintliche vier-Helix-B&uuml;ndel-Struktur im Verh&auml;ltnis zu dem von CLD beschichtet von in ADPH beeintr&auml;chtigt wurde. Wir verwendeten Homologie Modellierung und Analyse der L&ouml;sung und Membran Bindungseigenschaften von gereinigtem rekombinanten ADPH C-Terminus um zu verstehen, wie diese Region m&ouml;glicherweise CLD Sekretion vermittelt. Homologie Modellierung unterst&uuml;tzt das Konzept, dass das ADPH Carboxyl-Terminus ein vier-Helix-B&uuml;ndel-Motiv bildet und legt nahe, dass diese Struktur stabile Membran Bilayer Interaktionen bilden kann. Circulardichroismus und Protease Zuordnung Studien best&auml;tigt, dass das ADPH C-Terminus eine unabh&auml;ngig faltende &alpha;-spiralf&ouml;rmige Struktur, die relativ resistent gegen Harnstoff Denaturierung. Liposomen-Bindungsstudien zeigte, dass das gereinigte Carboxyl-Terminus bindet an Phospholipid-Membranen durch elektrostatische abh&auml;ngige Interaktionen der Zelle Kultur Studien dokumentiert, dass es an der Plasmamembran lokalisiert. Zusammen bieten diese Daten direkte Beweise, dass das ADPH C-Terminus eine stabile Membran Bindung spiralf&ouml;rmige Struktur bildet, die wichtig f&uuml;r CLD-Sekretion. Wir spekulieren, dass die Wechselwirkungen zwischen den vier-Helix-B&uuml;ndel von ADPH und Membran-Phospholipiden einen ersten Schritt in die Milchsekretion Lipid sein k&ouml;nnen.

Das Adipophilin C-Terminus ist eine self-folding Membran-bindende Dom&auml;ne, die f&uuml;r die Milchsekretion Lipid wichtig.

Goccioline di lipidi citoplasmatici (CLD) nelle cellule epiteliali mammarie subiscono la secrezione di un processo di avvolgimento unico membrana per la produzione di lipidi del latte. Adipophilin (ADPH/Plin2), un membro della famiglia perilipina/PAT di goccia-associated proteins dei lipidi, &egrave; stato ipotizzato per mediare la secrezione CLD attraverso le interazioni con gli elementi della membrana plasmatica apicale. Abbiamo scoperto che la secrezione di CLD rivestito dal tronco ADPH manca la regione C-terminale codifica una struttura putativo four-helix bundle &egrave; stata alterata rispetto a quello di CLD rivestito da ADPH full-length. Abbiamo usato omologia di modellazione e analisi della soluzione e propriet&agrave; di associazione a membrana di terminus di C ADPH ricombinante purificato per capire come questa regione possibilmente da intermediario secrezione CLD. Modellistica di omologia supporta il concetto che il capolinea ADPH C costituisce un motivo di four-helix bundle e suggerisce che questa struttura pu&ograve; formare interazioni di doppio strato di membrana stabile. Dicroismo circolare e proteasi mapping studi ha confermato che il capolinea ADPH C &egrave; un&#39;indipendente pieghevole struttura &alpha;-elicoidale che &egrave; relativamente resistente alla denaturazione urea. Liposoma associazione studi hanno mostrato che purificato C terminale si lega alle membrane fosfolipidiche attraverso interazioni elettrostatiche dipendente, e gli studi di cultura cellulare documentato che localizza alla membrana del plasma. Collettivamente, questi dati forniscono una prova diretta che il capolinea ADPH C costituisce una struttura elicoidale di associazione di membrana stabile che &egrave; importante per la secrezione CLD. Si ipotizzano che le interazioni tra il four-helix bundle dei fosfolipidi di membrana e ADPH possono essere un primo passo nella secrezione di lipidi del latte.

Il capolinea adipophilin C &egrave; un dominio di membrana-associazione self-folding che &egrave; importante per la secrezione di lipidi del latte.

&#x4E73;&#x817A;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x8102;&#x8CEA;&#x6DB2;&#x6EF4; &#xFF08;CLD&#xFF09; &#x5206;&#x6CCC;&#x30DF;&#x30EB;&#x30AF;&#x8102;&#x8CEA;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x819C;&#x306E;&#x5305;&#x7D61;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Adipophilin (ADPH/Plin2&#xFF09;&#x3001;&#x8102;&#x8CEA;&#x6DB2;&#x6EF4;&#x95A2;&#x9023;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x306E; perilipin/&#x30D1;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x4E00;&#x54E1; CLD &#x5206;&#x6CCC;&#x30A2;&#x30D4;&#x30AB;&#x30EB;&#x819C;&#x8981;&#x7D20;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x305F; ADPH &#x63A8;&#x5B9A; 4 &#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x304C;&#x675F;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9; C &#x672B;&#x7AEF;&#x9818;&#x57DF;&#x88AB;&#x8986;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9; ADPH CLD &#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x304C;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; CLD &#x306E;&#x5206;&#x6CCC;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5730;&#x57DF;&#x304C;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F; CLD &#x5206;&#x6CCC;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC; &#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x30BD;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3068;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057;&#x305F;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048; ADPH C &#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x819C;&#x7D50;&#x5408;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC; &#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; ADPH C &#x672B;&#x7AEF; 4 &#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB; &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x304C;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x819C;&#x4E8C;&#x91CD;&#x819C;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x6982;&#x5FF5;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E8C;&#x8272;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; &#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x7814;&#x7A76; ADPH C &#x672B;&#x7AEF;&#x5C3F;&#x7D20;&#x5909;&#x6027;&#x306B;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x62B5;&#x6297;&#x529B;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x304C;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307F;&#x306E; &alpha; &#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x69CB;&#x9020;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30EA;&#x30DD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x7CBE;&#x88FD;&#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x819C;&#x9759;&#x96FB;&#x4F9D;&#x5B58;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x3092;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x7D30;&#x80DE;&#x6587;&#x5316;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x8A18;&#x8F09;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7DCF;&#x79F0;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF; ADPH C &#x672B;&#x7AEF; CLD &#x5206;&#x6CCC;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3001;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x819C;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D8;&#x30EA;&#x30AB;&#x30EB;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;4 &#x306E;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB; ADPH &#x3068;&#x819C;&#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x725B;&#x4E73;&#x306E;&#x8102;&#x8CEA;&#x306E;&#x5206;&#x6CCC;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63A8;&#x6E2C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Adipophilin C &#x672B;&#x7AEF;&#x306F;&#x3001;&#x725B;&#x4E73;&#x306E;&#x8102;&#x8CEA;&#x306E;&#x5206;&#x6CCC;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x3080;&#x819C;&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#xC720; &#xBC29; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xBC29;&#xC6B8; (CLD) &#xC6B0;&#xC720; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xB9C9; &#xBD09;&#xD568; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD84; &#xBE44;&#xB97C; &#xBC1B; &#xB2E4;. Adipophilin (ADPH/Plin2), &#xC9C0;&#xC9C8; &#xBC29;&#xC6B8; &#xAD00;&#xB828; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; perilipin/&#xD33B; &#xC81C;&#xD488;&#xAD70; CLD &#xBD84; &#xBE44; &#xAF2D;&#xB300;&#xAE30; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xC694;&#xC18C;&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xC138;&#xC6E0;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; CLD &#xC798;&#xB9B0; ADPH &#xBD80;&#xC871; &#xD55C; &#xC0C1; 4 &#xB098;&#xC120; &#xBC88;&#xB4E4; &#xAD6C;&#xC870; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC740; CLD &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; ADPH&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCF54;&#xD305;&#xC758; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC778; &#xC7A5;&#xC560;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCF54;&#xD305;&#xC758; &#xBD84; &#xBE44;&#xB97C; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC774; &#xC9C0;&#xC5ED; CLD &#xBD84; &#xBE44;&#xB97C; &#xAC00;&#xB2A5; &#xD558; &#xAC8C; &#xC911;&#xC7AC; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xC774;&#xD574; homology &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xBC0F; &#xBD84;&#xC11D; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;&#xC758; &#xC21C;&#xD654; &#xB41C; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; ADPH C &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC758; &#xB9C9; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD638;&#xBAB0;&#xB85C;&#xC9C0; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; ADPH C &#xC885;&#xC810; 4 &#xB098;&#xC120; &#xBC88;&#xB4E4; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD558; &#xACE0;&#xC774; &#xAD6C;&#xC870; &#xC548;&#xC815; &#xB9C9; bilayer &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD615;&#xC131;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xAC1C;&#xB150;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6D0;&#xD615; &#x9EC4; protease &#xB9E4;&#xD551; &#xC5F0;&#xAD6C; ADPH C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110;&#xC740; &#xBE44;&#xAD50;&#xC801; &#xC800;&#xD56D; &#xC694;&#xC18C; &#xBCC0;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC811;&#xB294; &alpha; &#xB098;&#xC120;&#xD615; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Liposome &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC815;&#xD654; C &#xB9D0;&#xB2E8; &#xC885;&#xC18D; &#xC815;&#xC804;&#xAE30; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9; &#xC778;&#xC9C0;&#xC9C8;&#xC744; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xACE0; &#xC140; &#xBB38;&#xD654; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBB38;&#xC11C;&#xD654; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; localizes &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xC0E8; &#xB2E4;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; ADPH C &#xB9D0;&#xB2E8; CLD &#xBD84; &#xBE44;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC548;&#xC815; &#xB9C9; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB098;&#xC120;&#xD615; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; ADPH&#xACFC; &#xB9C9; &#xC778;&#xC9C0;&#xC9C8; 4 &#xB098;&#xC120; &#xBC88;&#xB4E4; &#xAC04;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC6B0;&#xC720; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xBD84; &#xBE44;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xC788;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xCD94;&#xCE21; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;.

Adipophilin C &#xB9D0;&#xB2E8; &#xC6B0;&#xC720; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xBD84; &#xBE44;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; self-folding &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Gotas de l&iacute;pidos citoplasm&aacute;ticos (EPC) en c&eacute;lulas epiteliales mamarias sufren secreci&oacute;n por un proceso de envolvimiento de membrana &uacute;nica para producir los l&iacute;pidos de la leche. Adipophilin (alimentos/Plin2), miembro de la familia de la Perilipina/PAT de prote&iacute;nas asociadas a gotas de l&iacute;pidos, se presume para mediar la secreci&oacute;n de EPC a trav&eacute;s de interacciones con elementos de la membrana de plasma apical. Encontramos que la secreci&oacute;n de EPC cubierto por carecer de alimentos truncado la regi&oacute;n c-terminal codificaci&oacute;n una estructura supuesta cuatro h&eacute;lice paquete fue deteriorada en relaci&oacute;n a la de EPC cubierto por alimentos completos. Utilizamos homolog&iacute;a modelado y an&aacute;lisis de la soluci&oacute;n y propiedades de enlace de la membrana de la terminal de ADPH C recombinante purificada para entender c&oacute;mo esta regi&oacute;n posiblemente interviene en la secreci&oacute;n de la CLD. Modelado de homolog&iacute;a apoya el concepto de que la terminal de ADPH C constituye un motivo de four-helix bundle y sugiere que esta estructura puede formar estable membrana bicapa interacciones. Dicro&iacute;smo circular y estudios de mapeo de proteasa confirmaron que la terminal de ADPH C es una estructura &alpha;-helicoidal independientemente plegable que es relativamente resistente a la desnaturalizaci&oacute;n de la urea. Liposoma enlace estudios demostraron que la terminal C purificada se une a las membranas de fosfol&iacute;pidos a trav&eacute;s de interacciones electrost&aacute;ticas dependientes, y estudios en cultivos celulares documentan que localiza a la membrana plasm&aacute;tica. Colectivamente, estos datos proporcionan evidencia directa que la terminal de ADPH C forma una estructura helicoidal de uni&oacute;n estable de la membrana que es importante para la secreci&oacute;n de la CLD. Especulamos que las interacciones entre el paquete de cuatro-h&eacute;lice de los fosfol&iacute;pidos de la membrana y alimentos pueden ser un paso inicial en la secreci&oacute;n de l&iacute;pidos de la leche.

La terminal de adipophilin C es un dominio de uni&oacute;n a la membrana self-folding que es importante para la secreci&oacute;n de l&iacute;pidos de la leche.

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Mark Ladinsky

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