electron-cryotomography-of-bacterial-cells

Electron Cryotomography of Bacterial Cells

While much is already known about the basic metabolism of bacterial cells, many fundamental questions are still surprisingly unanswered, including for ...

California Institute of Technology - Caltech

&#x94DC;-&#x4E9A;&#x785D;&#x57FA;&#x4E2D;&#x95F4;&#x5F62;&#x5F0F;&#x50AC;&#x5316;&#x5468;&#x671F;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E9A;&#x785D;&#x9178;&#x76D0;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#xFF0C;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x53CD;&#x785D;&#x5316;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x72AF;&#x4E0B;&#x4E00;&#x6B65;&#x7684;&#x9176;&#x3002;&#x4E9A;&#x785D;&#x9178;&#x76D0;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176; 2 &#x578B;&#x94DC;-&#x4E9A;&#x785D;&#x57FA;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x6C2E;&#x548C;&#x6C27;&#x539F;&#x5B50;&#x5728;&#x8FD1;&#x8DDD;&#x79BB;&#x94DC;&#x7684;&#x8F85;&#x9176;&#x524D;&#x6240;&#x672A;&#x6709;&#x7684;&#x4FA7;&#x4E0A;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;&#x6B64;&#x7ED3;&#x6784;&#x5177;&#x6709;&#x7CBE;&#x81F4;&#x7684;&#x4E9A;&#x785D;&#x9178;&#x76D0;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x6BD4;&#x8F83;&#x8BF4;&#x660E;&#x534F;&#x8C03;&#x5728;&#x50AC;&#x5316;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x5982;&#x4F55;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6539;&#x53D8;&#x94DC;&#x6C27;&#x548C;&#x94DC;-&#x6C2E;&#x4E4B;&#x95F4;&#x3002;&#x4FA7;&#x4E0A;&#x94DC;-&#x4E9A;&#x785D;&#x9178;&#x4E9A;&#x785D;&#x9178;&#x76D0;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x5C06;&#x5C55;&#x5F00;&#x8D85;&#x6C27;&#x5316;&#x7269;&#x6B67;&#x5316;&#x9176;&#x548C;&#x670A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7B49;&#x94DC;&#x86CB;&#x767D;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3002;

&#x4FA7;&#x4E0A;&#x94DC;&#x4E9A;&#x785D;&#x9178;&#x534F;&#x8C03;&#x7531;&#x4E9A;&#x785D;&#x9178;&#x76D0;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x3002;

A copper-nitrosyl intermediate forms during the catalytic cycle of nitrite reductase, the enzyme that mediates the committed step in bacterial denitrification. The crystal structure of a type 2 copper-nitrosyl complex of nitrite reductase reveals an unprecedented side-on binding mode in which the nitrogen and oxygen atoms are nearly equidistant from the copper cofactor. Comparison of this structure with a refined nitrite-bound crystal structure explains how coordination can change between copper-oxygen and copper-nitrogen during catalysis. The side-on copper-nitrosyl in nitrite reductase expands the possibilities for nitric oxide interactions in copper proteins such as superoxide dismutase and prions.

Side-on copper-nitrosyl coordination by nitrite reductase.

Un cuivre nitrosyle formes interm&eacute;diaires au cours du cycle catalytique de nitrite r&eacute;ductase, l&#39;enzyme qui intervient dans l&#39;&eacute;tape commise lors de la d&eacute;nitrification bact&eacute;rienne. La structure cristalline d&#39;un complexe de cuivre-nitrosyle de type 2 de nitrite r&eacute;ductase r&eacute;v&egrave;le un mode de liaison de side-on sans pr&eacute;c&eacute;dent dans lequel les atomes d&#39;azote et l&#39;oxyg&egrave;ne sont presque &eacute;gale distance du cofacteur de cuivre. Comparaison de cette structure avec une structure cristalline de nitrite li&eacute; raffin&eacute; explique comment coordination peut changer entre cuivre-oxyg&egrave;ne et l&#39;azote de cuivre au cours de la catalyse. Le side-on cuivre-nitrosyle en nitrite r&eacute;ductase &eacute;largit les possibilit&eacute;s pour les interactions de l&#39;oxyde nitrique en cuivre prot&eacute;ines telles que la superoxyde dismutase et prions.

Side-on cuivre-nitrosyle coordination de nitrite r&eacute;ductase.

Side-on Kupfer-Nitrosyl-Koordination durch Nitrit-Reduktase.

Un intermedio di rame-nitrosyl forme durante il ciclo catalitico di nitrito reduttasi, l&#39;enzima che media il passaggio impegnato in denitrificazione batterica. La struttura cristallina di un complesso di rame-nitrosyl di tipo 2 di nitrito reduttasi rivela una modalit&agrave; di associazione di side-on senza precedenti in cui gli atomi di azoto e ossigeno sono quasi equidistanti da cofattore il rame. Confronto di questa struttura con una struttura raffinata associati a nitriti crystal spiega come coordinamento pu&ograve; cambiare tra ossigeno-rame e rame-azoto durante la catalisi. Il lato su rame-nitrosyl in nitrito reduttasi espande le possibilit&agrave; di interazioni di ossido nitrico in rame proteine come la superossido dismutasi e prioni.

Lato-su rame-nitrosyl coordinamento di nitrito reduttasi.

&#x9285;&#x30CB;&#x30C8;&#x30ED;&#x30B7;&#x30EB;&#x4E2D;&#x9593;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x89E6;&#x5A92;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x4E2D;&#x306E;&#x4E9C;&#x785D;&#x9178;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x8131;&#x7A92;&#x3067;&#x30B3;&#x30DF;&#x30C3;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x9175;&#x7D20;&#x3002;2 &#x578B;&#x9285;&#x30CB;&#x30C8;&#x30ED;&#x30B7;&#x30EB;&#x932F;&#x4F53;&#x4E9C;&#x785D;&#x9178;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x7A92;&#x7D20;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x9178;&#x7D20;&#x539F;&#x5B50;&#x304C;&#x9285;&#x306E;&#x88DC;&#x56E0;&#x5B50;&#x304B;&#x3089;&#x307B;&#x307C;&#x7B49;&#x8DDD;&#x96E2;&#x3067;&#x3059;&#x5074;&#x3067;&#x524D;&#x4F8B;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x6D17;&#x7DF4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x4E9C;&#x785D;&#x9178;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x69CB;&#x9020;&#x4F53;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x914D;&#x4F4D;&#x9285;-&#x9178;&#x7D20;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x9285;&#x7A92;&#x7D20;&#x9593;&#x89E6;&#x5A92;&#x4E2D;&#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5074;&#x306B;&#x9285;-&#x30CB;&#x30C8;&#x30ED;&#x30B7;&#x30EB;&#x4E9C;&#x785D;&#x9178;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C9;&#x30B8;&#x30B9;&#x30E0;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D7;&#x30EA;&#x30AA;&#x30F3;&#x7B49;&#x306E;&#x9285;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x5E83;&#x3052;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x4E9C;&#x785D;&#x9178;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x9285;&#x30CB;&#x30C8;&#x30ED;&#x30B7;&#x30EB;&#x5074;&#x306B;&#x8ABF;&#x6574;&#x3002;

&#xAD6C;&#xB9AC; nitrosyl &#xC911;&#xAC04; &#xD615;&#xD0DC;&#xC758; &#xCD09;&#xB9E4; &#xC8FC;&#xAE30; &#xB3D9;&#xC548; &#xC544; &#xC9C8;&#xC0B0;&#xC5FC; &#xD658; &#xC6D0; &#xD6A8;&#xC18C;, &#xC138;&#xADE0; denitrification &#xCEE4;&#xBC0B;&#xB41C; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xC911;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xD6A8;&#xC18C;. &#xC544; &#xC9C8;&#xC0B0;&#xC5FC; reductase&#xC758; &#xC720;&#xD615; 2 &#xAD6C;&#xB9AC; nitrosyl &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870; &#xC9C8;&#xC18C;&#xC640; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC6D0;&#xC790;&#xB294; &#xAD6C;&#xB9AC; &#xACF5;&#xB3D9; &#xC778;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC70;&#xC758; &#xB4F1;&#xAC70;&#xB9AC; &#xC804;&#xB840; &#xC5C6;&#xB294; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;. &#xC138;&#xB828; &#xB41C; &#xC544; &#xC9C8;&#xC0B0;&#xC5FC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640;&#xC774; &#xAD6C;&#xC870; &#xBE44;&#xAD50; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xC870;&#xC815; &#xAD6C;&#xB9AC; &#xC0B0;&#xC18C;&#xC640; &#xAD6C;&#xB9AC;-&#xC9C8;&#xC18C; &#xCD09;&#xB9E4; &#xC911; &#xBCC0;&#xACBD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0; &#xAD6C;&#xB9AC;-nitrosyl &#xC544; &#xC9C8;&#xC0B0;&#xC5FC; reductase&#xC5D0; superoxide dismutase prions &#xB4F1; &#xAD6C;&#xB9AC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC9C8;&#xC18C; &#xC0B0;&#xD654;&#xBB3C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC744; &#xD655;&#xC7A5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC544; &#xC9C8;&#xC0B0;&#xC5FC; &#xD658; &#xC6D0; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0; &#xAD6C;&#xB9AC;-nitrosyl &#xC870;&#xC815;.

Un cobre-nitrosyl formas intermedias durante el ciclo catal&iacute;tico de la reductasa de nitrito, la enzima que interviene en el paso comprometido en la desnitrificaci&oacute;n bacteriana. La estructura cristalina de un complejo de cobre-nitrosyl tipo 2 de la reductasa de nitrito revela un modo sin precedentes lateralmente vinculante en el que los &aacute;tomos de nitr&oacute;geno y ox&iacute;geno son casi equidistantes entre el cofactor cobre. Comparaci&oacute;n de esta estructura con una estructura cristalina de nitrito-limite refinado explica c&oacute;mo puede cambiar coordinaci&oacute;n entre cobre y ox&iacute;geno y nitr&oacute;geno cobre durante la cat&aacute;lisis. El lado de cobre-nitrosyl en reductasa de nitrito ampl&iacute;a las posibilidades de interacciones de &oacute;xido n&iacute;trico en cobre prote&iacute;nas tales como la super&oacute;xido dismutasa y priones.

Coordinaci&oacute;n de lado-el cobre-nitrosyl por reductasa de nitrito.

&#x539F;&#x6838;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD; S-&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x7B49;&#x4E0D;&#x540C;&#x8F7D;&#x4F53;&#x7684;&#x540C;&#x884C;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8F83;&#x597D;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x4ECE;&#x4F2F; xenovorans LB400 BphK &#x6D88;&#x8017;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;&#x5206;&#x5B50; reductively dehalogenate &#x6C2F;&#x5316;&#x7684; 2-hydroxy-6-oxo-6-phenyl-2,4-dienoates (HOPDAs) &#x6291;&#x5236;&#x591A;&#x6C2F;&#x8054;&#x82EF;&#x7684;&#x4EE3;&#x8C22;&#x4EA7;&#x7269;&#x3002;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E09;&#x5143;&#x914D;&#x5408;&#x7269; BphK &#x7684; u1-2.1a &#x7CFB;&#x5217;&#x7684;&#x51B3;&#x8BAE;&#x5C06;&#x5F97;&#x5230;&#x4E86;&#x89E3;&#x51B3;&#x3002;BphK-&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;-HOPDA &#x590D;&#x6742;&#x3001; &#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;&#x548C; HOPDA &#x5206;&#x5B50;&#x5360;&#x636E; G-&#x548C; H-&#x5B50;&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x3002;&#x5DEF;&#x57FA;&#x4EB2;&#x6838;&#x8BD5;&#x5242;&#x7684;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;&#x5206;&#x5B50;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x5728;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684; HOPDA &#x7684;&#x78B3; 3 SN2 &#x653B;&#x51FB;&#x3002;&#x5404;&#x81EA;&#x7684;&#x786B;&#x539F;&#x5B50;&#x5B88;&#x6052; Cys 10 &#x548C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;&#x5185; 3.0A&#xFF0C;&#x7B26;&#x5408;&#x4EA7;&#x54C1;&#x53D1;&#x5E03;&#x548C;&#x4E2D;&#x95F4;&#x6DF7;&#x5408;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x5728; BphK (&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;&#xFF09; 2 &#x590D;&#x6742;&#xFF0C;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;&#x5206;&#x5B50;&#x5360;&#x636E;&#x6BCF;&#x4E24;&#x5B50;&#x7F51;&#x7AD9;&#x3002;&#x4E24;&#x79CD;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;&#x5206;&#x5B50;&#x548C; Cys-10 &#x4E09;&#x4E2A;&#x786B;&#x539F;&#x5B50;&#x7684;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#x4EA4;&#x6362;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x5C06;&#x91CD;&#x65B0;&#x751F;&#x6210;&#x4F11;&#x606F;&#x7684;&#x9176;&#x548C;&#x4EA7;&#x91CF;&#x94FE;&#x63A5;&#x4E8C;&#x786B;&#x5316;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;&#x5206;&#x5B50;&#x9002;&#x5F53;&#x5BF9;&#x9F50;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4E2A;&#x5B88;&#x6052;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x4ED6;-106&#xFF0C;&#x662F;&#x6BD7;&#x90BB;&#x7684; Cys 10 &#x786B;&#x9187;&#x548C;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; G &#x7684;&#x5B50;&#x7F51;&#x7AD9;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x53EF;&#x80FD;&#x7A33;&#x5B9A;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#x4EA4;&#x6362;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E2D;&#x7684;&#x8FC7;&#x6E21;&#x6001;&#x3002;&#x603B;&#x4F53;&#x800C;&#x8A00;&#xFF0C;&#x7ED3;&#x6784;&#x652F;&#x6301;&#x548C; BphK &#x7684;&#x9610;&#x8FF0;&#x62DF;&#x8BAE;&#x7684;&#x8131;&#x5364;&#x673A;&#x5236;&#x5E76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6D1E;&#x5BDF; H-&#x5B50;&#x7F51;&#x7AD9;&#x7684;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x3002;

&#x4E09;&#x5143;&#x914D;&#x5408;&#x7269; BphK&#xFF0C;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD; S-&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#xFF0C;reductively dechlorinates &#x4EE3;&#x8C22;&#x7269;&#x591A;&#x6C2F;&#x8054;&#x82EF;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;

Prokaryotic glutathione S-transferases are as diverse as their eukaryotic counterparts but are much less well characterized. BphK from Burkholderia xenovorans LB400 consumes two GSH molecules to reductively dehalogenate chlorinated 2-hydroxy-6-oxo-6-phenyl-2,4-dienoates (HOPDAs), inhibitory polychlorinated biphenyl metabolites. Crystallographic structures of two ternary complexes of BphK were solved to a resolution of 2.1A. In the BphK-GSH-HOPDA complex, GSH and HOPDA molecules occupy the G- and H-subsites, respectively. The thiol nucleophile of the GSH molecule is positioned for SN2 attack at carbon 3 of the bound HOPDA. The respective sulfur atoms of conserved Cys-10 and the bound GSH are within 3.0A, consistent with product release and the formation of a mixed disulfide intermediate. In the BphK-(GSH)2 complex, a GSH molecule occupies each of the two subsites. The three sulfur atoms of the two GSH molecules and Cys-10 are aligned suitably for a disulfide exchange reaction that would regenerate the resting enzyme and yield disulfide-linked GSH molecules. A second conserved residue, His-106, is adjacent to the thiols of Cys-10 and the GSH bound to the G-subsite and thus may stabilize a transition state in the disulfide exchange reaction. Overall, the structures support and elaborate a proposed dehalogenation mechanism for BphK and provide insight into the plasticity of the H-subsite.

Structures of ternary complexes of BphK, a bacterial glutathione S-transferase that reductively dechlorinates polychlorinated biphenyl metabolites.

Procaryote glutathion S-transf&eacute;rases sont aussi vari&eacute;s que leurs homologues eucaryotes mais sont beaucoup moins bien caract&eacute;ris&eacute;s. BphK de Burkholderia xenovorans LB400 consomme deux mol&eacute;cules de BA pour r&eacute;ductrice d&eacute;shalog&eacute;ner 2-hydroxy-6-oxo-6-phenyl-2,4-dienoates chlor&eacute;s (HOPDAs), les m&eacute;tabolites inhibiteurs des biph&eacute;nyles polychlor&eacute;s. Structures cristallographiques des deux complexes ternaires de BphK ont &eacute;t&eacute; r&eacute;solues &agrave; une r&eacute;solution de 2. 1 a. Dans le complexe BphK-BA-HOPDA, BA et HOPDA mol&eacute;cules occupent le G-H-sous-sites et, respectivement. Le nucl&eacute;ophile thiol de la mol&eacute;cule GSH est positionn&eacute; pour attaque SN2 au carbone 3 de la HOPDA li&eacute;. Les atomes de soufre respectifs de conserv&eacute;s Cys-10 et le GSH li&eacute; rel&egrave;vent de 3. 0 a, compatible avec la version du produit et la formation d&#39;un interm&eacute;diaire de disulfure mixte. Dans la BphK-(BA) 2 complexes, une mol&eacute;cule GSH occupe chacune des deux sections. Les trois atomes de soufre des deux mol&eacute;cules de BA et Cys-10 sont convenablement align&eacute;s pour une r&eacute;action d&#39;&eacute;change disulfure qui produisent des mol&eacute;cules GSH disulfure li&eacute;s et r&eacute;g&eacute;n&eacute;rer l&#39;enzyme au repos. Un second r&eacute;sidu conserv&eacute;, sa-106, jouxte les thiols de Cys-10 et le GSH li&eacute; au G-sous-site et donc peut stabiliser un &eacute;tat de transition dans la r&eacute;action d&#39;&eacute;change disulfure. Dans l&#39;ensemble, les structures support et &eacute;laborer un m&eacute;canisme d&eacute;shalog&eacute;nation propos&eacute;e pour BphK et donnent un aper&ccedil;u de la plasticit&eacute; du sous-site-H.

Structures des complexes ternaires de BphK, une bact&eacute;rienne glutathion S-transf&eacute;rase qui d&eacute;chlore r&eacute;ductrice des m&eacute;tabolites de biph&eacute;nyles polychlor&eacute;s.

Prokaryotische Glutathion S-Transferasen sind so vielf&auml;ltig wie die entsprechenden eukaryotischen aber sind viel weniger gut charakterisiert. BphK von Burkholderia Xenovorans LB400 verbraucht zwei Molek&uuml;le der GSH um reduktiv chlorierte 2-hydroxy-6-oxo-6-phenyl-2,4-dienoates (HOPDAs), hemmenden polychlorierte Biphenyle Metaboliten dehalogenate. Kristallographische Strukturen der beiden tern&auml;re komplexe von BphK wurden mit einer Aufl&ouml;sung von 2.1A gel&ouml;st. In einem Komplex der BphK-GSH-HOPDA besetzen Molek&uuml;le GSH und HOPDA G - und H-Unterwebsites, beziehungsweise. Die Thiol-Nucleophil die GSH-Molek&uuml;ls ist f&uuml;r SN2 Angriff am Kohlenstoffatom 3 von den gebundenen HOPDA positioniert. Die jeweiligen Schwefel-Atome von konserviert Cys-10 und die gebundenen GSH sind innerhalb 3. 0a, Einklang mit Produkt-Release und die Bildung einer gemischten Disulfid-Mittelstufe. In der BphK (GSH) 2 komplexe belegt ein GSH-Molek&uuml;l jeweils zwei Unterwebsites. Die drei Schwefel-Atome der beiden GSH-Molek&uuml;le und Cys-10 sind angemessen f&uuml;r eine Disulfid-Austausch-Reaktion ausgerichtet, die ruhelosigkeit Enzyms zu regenerieren und Disulfid-chromosomale GSH Molek&uuml;le ergeben w&uuml;rde. Eine zweite konservierten R&uuml;ckstand, His-106, grenzt an die Thiole Cys-10 und der GSH an die G-Unterwebsite gebunden und somit einen &Uuml;bergangszustand in die Disulfid-Austausch-Reaktion stabilisieren kann. Insgesamt die Strukturen unterst&uuml;tzen und einen vorgeschlagenen Dehalogenation-Mechanismus f&uuml;r BphK zu erarbeiten und einen Einblick in die Plastizit&auml;t der H-Unterwebsite.

Strukturen der tern&auml;re komplexe von BphK, eine bakterielle Glutathion S-Transferase, die polychlorierte Biphenyle Metaboliten reduktiv dechlorinates.

Procariote glutatione S-transferasi sono diversi come le loro controparti negli eucarioti, ma sono molto meno ben caratterizzati. BphK da Burkholderia xenovorans LB400 consuma due molecole GSH per riduttivamente dehalogenate 2-hydroxy-6-oxo-6-phenyl-2,4-dienoates clorurati (HOPDAs), policlorobifenili inibitorio metaboliti. Strutture cristallografiche di due complessi ternari di BphK sono stati risolti a una risoluzione di 2.1 a. Nel complesso GSH-BphK-HOPDA, molecole di GSH e HOPDA occupano il G - e H-secondari, rispettivamente. Il nucleofilo tiolo della molecola del GSH &egrave; posizionato per SN2 attacco al carbonio 3 della HOPDA associata. Gli atomi di zolfo rispettivi di conservano Cys-10 e il GSH associato sono all&#39;interno di 3.0, coerente con il rilascio del prodotto e la formazione di un disolfuro misto intermedio. Nel BphK-(GSH) 2 complessi, una molecola GSH occupa tra i due siti secondari. I tre atomi di zolfo delle due molecole GSH e Cys-10 sono allineati adeguatamente per una reazione di scambio disolfuro che rigenera l&#39;enzima riposo e producono molecole GSH disolfuro collegato. Un secondo residuo conservato, His-106, adiacente i tioli di Cys-10, il GSH associato a G-secondario e quindi pu&ograve; stabilizzare uno stato di transizione nella reazione di scambio disolfuro. Nel complesso, le strutture sostegno ed elaborano un meccanismo proposto Dealogenazione per BphK e permettono di percepire la plasticit&agrave; del H-sito secondario.

Strutture di complessi ternari di BphK, batterico glutatione S-transferasi che riduttivamente dechlorinates policlorobifenili metaboliti.

&#x539F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3; S &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x76F8;&#x624B;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x591A;&#x69D8;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x5927;&#x3044;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3088;&#x304F;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A4;&#x30CD;&#x306E; xenovorans LB400 &#x304B;&#x3089; BphK reductively &#x5869;&#x7D20;&#x5316; 2-hydroxy-6-oxo-6-phenyl-2,4-dienoates (HOPDAs) &#x6291;&#x5236;&#x30DD;&#x30EA;&#x5869;&#x5316;&#x30D3;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EB;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x7269;&#x3092; dehalogenate &#x306B; 2 &#x3064;&#x306E; GSH &#x5206;&#x5B50;&#x3092;&#x6D88;&#x8CBB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;BphK &#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x4E09;&#x5143;&#x932F;&#x4F53;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x306F; 2.1A &#x306E;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x306B;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;BphK-GSH-HOPDA &#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C; G &#x3068; H &#x30B5;&#x30D6;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; GSH &#x3068; HOPDA &#x5206;&#x5B50;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C1;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB;&#x6C42; GSH &#x5206;&#x5B50;&#x306E; SN2 &#x653B;&#x6483;&#x3067;&#x70AD;&#x7D20; 3 &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F; HOPDA &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x914D;&#x7F6E;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x786B;&#x9EC4;&#x539F;&#x5B50;&#x306E; Cys 10 &#x4FDD;&#x5B58;&#x3001;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F; GSH 3.0A&#x3001;&#x88FD;&#x54C1;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3068;&#x6DF7;&#x5408;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x4E2D;&#x9593;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3068;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x5185;&#x3002;BphK - &#xFF08;GSH&#xFF09; 2 &#x8907;&#x96D1;&#x306A;, GSH &#x5206;&#x5B50;&#x306F;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x5360;&#x3081;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;3 &#x3064;&#x306E;&#x786B;&#x9EC4;&#x539F;&#x5B50;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E; GSH &#x5206;&#x5B50;&#x3068; Cys 10 &#x306F;&#x5B89;&#x9759;&#x6642;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x3092;&#x518D;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x3001;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9; GSH &#x5206;&#x5B50;&#x751F;&#x307F;&#x51FA;&#x3059;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x4EA4;&#x63DB;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x9069;&#x5F53;&#x306B;&#x6574;&#x5217;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;2 &#x756A;&#x76EE;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6B8B;&#x6E23;&#x3001;&#x5F7C;-106, 10 &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30C1;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x96A3;&#x63A5;&#x3057;&#x3001;GSH G &#x30B5;&#x30D6;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3053;&#x3046;&#x3057;&#x3066;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x4EA4;&#x63DB;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306E;&#x9077;&#x79FB;&#x72B6;&#x614B;&#x3092;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x307F;&#x3066;&#x3001;&#x69CB;&#x9020;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x63D0;&#x6848;&#x8131;&#x6A5F;&#x69CB; BphK &#x306E;&#x624B;&#x306E;&#x8FBC;&#x3093;&#x3060;&#x304A;&#x3088;&#x3073; H &#x30B5;&#x30D6;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x3078;&#x306E;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x529B;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

BphK&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3; S &#x2010; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; reductively &#x30A8;&#x30C6;&#x30F3; &#x30DD;&#x30EA;&#x5869;&#x5316;&#x30D3;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EB;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x7269;&#x306E;&#x4E09;&#x5143;&#x932F;&#x4F53;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3002;

Prokaryotic glutathione S transferases &#xC9C4; &#xD575; &#xB4E4; &#xB9CC;&#xD07C; &#xC774;&#xB098; &#xB2E4;&#xC591; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB35C; &#xC798; &#xD2B9;&#xC9D5;. BphK Burkholderia xenovorans lb400&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB450; GSH &#xBD84;&#xC790;&#xB97C; reductively &#xC5FC;&#xD654; 2-hydroxy-6-oxo-6-phenyl-2,4-dienoates (HOPDAs), &#xAE08;&#xC9C0; &#xD568;&#xC720; metabolites dehalogenate&#xB97C; &#xC18C;&#xBE44; &#xD55C;&#xB2E4;. Bphk&#xC758; &#xB450; &#xC0BC;&#xD56D; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; crystallographic &#xAD6C;&#xC870; 2.1 a&#xC758; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4;&#xB85C; &#xD574;&#xACB0; &#xD588;&#xB2E4;. BphK-GSH-HOPDA &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; GSH &#xBC0F; HOPDA &#xBD84;&#xC790; &#xAC01;&#xAC01; G-&#xD558;&#xC704; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; H-&#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xCC28;&#xC9C0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. GSH &#xBD84;&#xC790;&#xC758; thiol nucleophile &#xBC14;&#xC6B4;&#xB4DC; HOPDA&#xC758; &#xD0C4;&#xC18C; 3&#xC5D0; SN2 &#xACF5;&#xACA9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC30;&#xCE58; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC01;&#xAC01; &#xD669; &#xC6D0;&#xC790;&#xC758; &#xBCF4;&#xC874; Cys 10 &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xBC14;&#xC6B4;&#xB4DC; GSH 3.0 a, &#xC81C;&#xD488; &#xCD9C;&#xC2DC;&#xC640; &#xD63C;&#xD569;&#xB41C; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xC911;&#xAC04; &#xD615;&#xC131; &#xC77C;&#xCE58; &#xC548;&#xC5D0;. BphK-(GSH) &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; 2, GSH &#xBD84;&#xC790; &#xAC01;&#xAC01; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xD558;&#xC704; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xCC28;&#xC9C0; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xB450; GSH &#xBD84;&#xC790;&#xC640; Cys-10&#xC758; 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xC720;&#xD669; &#xC6D0;&#xC790; &#xD734;&#xC2DD; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB97C; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; &#xD56D;&#xBCF5; GSH &#xBD84;&#xC790; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xAD50;&#xD658; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xC815;&#xB82C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xCC0C; &#xAEBC; &#xAE30;, &#xADF8;&#xC758;-106, Cys-10 thiols&#xC5D0; &#xC778;&#xC811; &#xD55C; &#xACE0;&#xB294; GSH G &#xD558;&#xC704; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD558; &#xACE0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xAD50;&#xD658; &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xC804;&#xC774; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB97C; &#xC548;&#xC815;&#xD654; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xAD6C;&#xC870; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xBC0F; Bphk&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC81C;&#xC548; &#xB41C; dehalogenation &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC815;&#xAD50;&#xC640; H &#xD558;&#xC704; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758;&#xAC00; &#xC18C;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;.

BphK, &#xC138;&#xADE0;&#xC131; glutathione reductively &#xD3F4;&#xB9AC;&#xC5FC;&#xD654; &#xD568;&#xC720; metabolites dechlorinates S &#xC804;&#xC774;&#xC758; 3 &#xC9C4; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;.

Procariota glutati&oacute;n S-transferasas son tan diversas como sus hom&oacute;logos eucariotas pero est&aacute;n mucho menos bien caracterizadas. BphK de Burkholderia xenovorans LB400 consume dos mol&eacute;culas GSH para reductivamente dehalogenate 2-hydroxy-6-oxo-6-phenyl-2,4-dienoates clorados (HOPDAs), metabolitos inhibitorios bifenilos policlorados. Estructuras cristalogr&aacute;ficas de dos complejos ternarios de BphK se resolvieron a una resoluci&oacute;n de 2.1A. En el complejo BphK-GSH-HOPDA, GSH y HOPDA mol&eacute;culas ocupan los G - y H-subsitios, respectivamente. El nucle&oacute;filo tiol de la mol&eacute;cula GSH se posiciona para ataque SN2 en carbono 3 de la HOPDA encuadernado. Los &aacute;tomos de azufre respectivos de conservaron Cys-10 y el GSH consolidado a 3.0A, compatible con la versi&oacute;n del producto y la formaci&oacute;n de un intermedio de disulfuro mixto. En el BphK-(GSH) 2 complejo, una mol&eacute;cula GSH ocupa cada uno de los dos subsitios. Los tres &aacute;tomos de azufre de las dos mol&eacute;culas GSH y Cys-10 est&aacute;n alineados adecuadamente para una reacci&oacute;n de intercambio de disulfuro que regenerar la enzima descanso y producir mol&eacute;culas GSH disulfuro-ligados. Un segundo residuo conservado, su-106, colinda con los tioles de Cys-10 y el GSH atado al G-subsitio y as&iacute; puede estabilizar un estado de transici&oacute;n en la reacci&oacute;n de intercambio de disulfuro. En general, las estructuras soportan y elaboran un mecanismo de dehalogenaci&oacute;n propuesto por BphK y proporcionan la penetraci&oacute;n en la plasticidad del H-subsitio.

Estructuras de complejos ternarios de BphK, una bacteriana glutati&oacute;n S-transferasa que desclora reductivamente metabolitos de bifenilos policlorados.

&#x542B;&#x94DC;&#x4E9A;&#x785D;&#x9178;&#x76D0;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x6E2F;&#x53E3;&#x7C7B;&#x578B; 1 &#x548C;&#x7C7B;&#x578B; 2 &#x94DC;&#x7AD9;&#x70B9;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x7535;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53;&#x7F51;&#x7AD9;&#x524D;&#x884C;&#x4E3A;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x9176;&#xFF0C;&#x800C;&#x540E;&#x8005;&#x662F;&#x7F51;&#x7AD9;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x5BF9;&#x8FD1;&#x7EA2;&#x5916;&#x5149;&#x8C31; (&#x91CE;&#x751F;&#x578B; (wt) &#x548C;&#x53D8;&#x79CD; Met150Gly &#x548C; Met150Thr) &#x4E0E;&#x94C1; (II) EDTA &#x548C; Fe (II) HEDTA &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x7535;&#x5B50;&#x8F6C;&#x79FB;&#x53CD;&#x5E94;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x63A2;&#x8BA8;&#x4E86;&#x5BF9;&#x91CD;&#x7EC4;&#x80FD;&#x6E90;&#x7C7B;&#x578B; 1 &#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x86CB;&#x6C28;&#x9178;&#x914D;&#x4F53;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x7A81;&#x53D8;&#x589E;&#x52A0; 0.3 eV &#x7684;&#x91CD;&#x7EC4;&#x80FD;&#x6E90; (30 kJ mol 1&#xFF09;&#x3002;Wt &#x8FD1;&#x7EA2;&#x5916;&#x8109;&#x51B2;&#x8F90;&#x89E3;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x548C;&#x4E09;&#x4E2A;&#x53D8;&#x79CD; &#xFF08;Met150Gly&#xFF0C;Met150His &#x548C; Met150Thr&#xFF09; &#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x6709;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x7C7B;&#x578B; 1 &#x94DC;&#x4E2D;&#x7684;&#x7F51;&#x7AD9; Met150Gly &#xFF08;&#x4E0B;&#x7684;&#x53D8;&#x6784;&#x6548;&#x5E94;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF09; &#x7684;&#x9644;&#x8FD1; Met62 &#x964D;&#x4F4E;&#x91CD;&#x7EC4;&#x80FD;&#x6E90;&#x56DE;&#x5927;&#x7EA6; wt &#x503C;&#x3002;&#x6839;&#x636E; XRD &#x6570;&#x636E;&#x51CF;&#x5C11;&#x7C7B;&#x578B; 1 &#x7AD9;&#x70B9; Met150Gly &#x8FD1;&#x7EA2;&#x5916;&#x5149;&#x8C31;&#x4E2D;&#x5B58;&#x5728;&#x53D8;&#x6784;&#x6548;&#x5E94;&#x4E0B;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x662F;&#x5728;&#x51CF;&#x5C11; wt &#x8FD1;&#x7EA2;&#x5916;&#x5149;&#x8C31; (&#x89E3;&#x51B3;&#x4E86; 1.85 A&#xFF09;&#xFF0C;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x91CD;&#x7EC4;&#x80FD;&#x6E90;&#x4E2D;&#x7684;&#x76F8;&#x4F3C;&#x6027;&#x4E0E;&#x517C;&#x5BB9;&#x3002;

&#x7C7B;&#x578B; 1 &#x94DC;&#x7F51;&#x7AD9;&#x4E9A;&#x785D;&#x9178;&#x76D0;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4;&#x80FD;&#x91CF;&#x5BF9;&#x86CB;&#x6C28;&#x9178;&#x914D;&#x4F53;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

Copper-containing nitrite reductase harbors a type-1 and a type-2 Cu site. The former acts as the electron acceptor site of the enzyme, and the latter is the site of catalytic action. The effect of the methionine ligand on the reorganization energy of the type-1 site was explored by studying the electron-transfer kinetics between NiR (wild type (wt) and the variants Met150Gly and Met150Thr) with Fe(II)EDTA and Fe(II)HEDTA. The mutations increased the reorganization energy by 0.3 eV (30 kJ mol-1). A similar increase was found from pulse radiolysis experiments on the wt NIR and three variants (Met150Gly, Met150His, and Met150Thr). Binding of the nearby Met62 to the type-1 Cu site in Met150Gly (under influence of an allosteric effector) lowered the reorganization energy back to approximately the wt value. According to XRD data the structure of the reduced type-1 site in Met150Gly NiR in the presence of an allosteric effector is similar to that in the reduced wt NiR (solved to 1.85 A), compatible with the similarity in reorganization energy.

Effect of the methionine ligand on the reorganization energy of the type-1 copper site of nitrite reductase.

Contenant du cuivre nitrite r&eacute;ductase rec&egrave;le un type-1 et un site de Cu de type 2. Les actes anciens comme le site d&#39;accepteur d&#39;&eacute;lectron de l&#39;enzyme et le second est le site d&#39;action catalytique. L&#39;effet du ligand m&eacute;thionine sur l&#39;&eacute;nergie de la r&eacute;organisation du site de type 1 a &eacute;t&eacute; explor&eacute;e par l&#39;&eacute;tude de la cin&eacute;tique de transfert d&#39;&eacute;lectrons entre NiR (type sauvage (wt) et les variantes Met150Gly et Met150Thr) avec le Fe (II) EDTA et de Fe (II) HEDTA. Les mutations augmente l&#39;&eacute;nergie de la r&eacute;organisation de 0,3 eV (30 kJ mol-1). Une augmentation similaire a &eacute;t&eacute; trouv&eacute;e d&#39;exp&eacute;riences de radiolyse impulsion sur le wt NIR et trois variantes (Met150Gly, Met150His et Met150Thr). La liaison de la Met62 &agrave; proximit&eacute; du site Cu de type 1 dans Met150Gly (sous l&#39;influence d&#39;un effecteur allost&eacute;rique) abaisse l&#39;&eacute;nergie de r&eacute;organisation &agrave; environ la valeur de poids. Selon les donn&eacute;es de DRX que la structure du site type 1 r&eacute;duit en Met150Gly NiR en pr&eacute;sence d&#39;un effecteur allost&eacute;rique est similaire &agrave; celle de la r&eacute;duction wt NiR (r&eacute;solu &agrave; 1,85 A), compatible avec la similitude dans les &eacute;nergies de la r&eacute;organisation.

Effet du ligand m&eacute;thionine sur l&#39;&eacute;nergie de la r&eacute;organisation du site cuivre type 1 de nitrite r&eacute;ductase.

Kupfer-haltigen Nitrit-Reduktase birgt eine Typ-1 und ein Typ-2-Cu-Website. Die ehemalige fungiert als Elektronen-Akzeptor-Website des Enzyms, und Letzteres ist die Webseite der katalytischen Reaktion. Die Wirkung des Methionin-Liganden auf die Reorganisation-Energie von der Typ-1-Website wurde durch das Studium der Elektronentransfer Kinetics zwischen NiR (Wildtyp (wt) und die Varianten Met150Gly und Met150Thr) mit Fe (II) EDTA und Fe (II) HEDTA erforscht. Die Mutationen erh&ouml;ht die Energie der Reorganisation von 0,3 eV (30 kJ Mol-1). Ein &auml;hnlicher Anstieg wurde vom Puls Radiolyse Experimente an wt NIR und drei Varianten (Met150Gly, Met150His und Met150Thr) gefunden. Bindung von der nahe gelegenen Met62 an den Typ-1-Cu-Standort in Met150Gly (unter Einfluss von ein allosterischer Effektor) senkte die Reorganisation-Energie in etwa den wt-Wert. Laut XRD-Daten, die die Struktur der reduzierten Typ-1-Website in Met150Gly NiR in Anwesenheit ein allosterischer Effektor ist &auml;hnlich wie in der reduzierten wt NiR (bis 1,85 A gel&ouml;st), kompatibel mit der &Auml;hnlichkeit in Reorganisation Energie.

Effekt des Methionin-Liganden auf die Reorganisation-Energie von der Typ-1-Kupfer-Website von Nitrit-Reduktase.

Rame-contenente nitrato reduttasi porti un tipo-1 e un sito di tipo-2 Cu. L&#39;ex atti come il sito accettore di elettroni dell&#39;enzima e quest&#39;ultimo &egrave; il sito di azione catalitica. L&#39;effetto del legante metionina dall&#39;energia di riorganizzazione del sito tipo-1 &egrave; stato esplorato da studiare la cinetica di trasferimento di elettroni tra NiR (wild type (wt) e le varianti Met150Gly e Met150Thr) con Fe (II) EDTA e Fe (II) HEDTA. Le mutazioni aumentato l&#39;energia di riorganizzazione da 0,3 eV (30 kJ mol-1). Un aumento simile &egrave; stato trovato da polso radiolisi esperimenti su wt NIR e tre varianti (Met150Gly, Met150His e Met150Thr). Associazione della Met62 vicina al tipo-1 Cu sito in Met150Gly (sotto l&#39;influenza di un effettore allosterico) abbassa l&#39;energia di riorganizzazione circa il valore di wt. Secondo i dati XRD che la struttura del sito tipo-1 ridotto in Met150Gly NiR in presenza di un effettore allosterico &egrave; simile a quello del ridotto wt NiR (risolto da 1,85 A), compatibile con la somiglianza in energia di riorganizzazione.

Effetto del legante metionina dall&#39;energia di riorganizzazione del sito di nitrito reduttasi rame tipo-1.

&#x9285;&#x542B;&#x6709;&#x4E9C;&#x785D;&#x9178;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x306F;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; 1 &#x3068;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; 2 Cu &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x96A0;&#x3057;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x96FB;&#x5B50;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5143;&#x306E;&#x884C;&#x70BA;&#x306F;&#x9175;&#x7D20;&#x3068;&#x5F8C;&#x8005;&#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; 1 &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x518D;&#x7DE8;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x30E1;&#x30C1;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3; &#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;NiR &#xFF08;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; &#xFF08;wt&#xFF09; &#x3068; Met150Gly &#x3068; Met150Thr &#x306E;&#x4E9C;&#x7A2E;&#xFF09; &#x3068;&#x9244; (II) EDTA &#x3068;&#x9244; (II) HEDTA &#x9593;&#x96FB;&#x5B50;&#x4F1D;&#x9054;&#x53CD;&#x5FDC;&#x901F;&#x5EA6;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x63A2;&#x691C;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x518D;&#x7DE8;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC; 0.3 eV &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x5897;&#x52A0; (1 mol &#x306E; 30 &#x306E; kJ)&#x3002;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x5897;&#x52A0; wt &#x8FD1;&#x8D64;&#x5916;&#x30D1;&#x30EB;&#x30B9;&#x653E;&#x5C04;&#x7DDA;&#x5206;&#x89E3;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3068; 3 &#x3064;&#x306E;&#x4E9C;&#x7A2E; &#xFF08;Met150Gly&#x3001;Met150His&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; Met150Thr&#xFF09; &#x304B;&#x3089;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; (&#x4E0B;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; &#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;) &#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; 1 &#x306E; Cu &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; Met150Gly &#x306B;&#x8FD1;&#x304F; Met62 &#x306E;&#x518D;&#x7DE8;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x7D04; wt &#x306E;&#x5024;&#x3092;&#x4E0B;&#x3052;&#x305F;&#x3002;X &#x7DDA;&#x56DE;&#x6298;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E; Met150Gly NiR &#x3067;&#x9084;&#x5143;&#x578B; 1 &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; &#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; &#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306E; wt NiR (1.85 A &#x89E3;&#x6C7A;) &#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x3067;&#x3059;&#x4E92;&#x63DB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x518D;&#x7DE8;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x306E;&#x985E;&#x4F3C;&#x6027;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x3068;&#x3002;

&#x4E9C;&#x785D;&#x9178;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; 1 &#x9285;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x518D;&#x7DE8;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x30E1;&#x30C1;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3; &#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3002;

&#xC544; &#xC9C8;&#xC0B0;&#xC5FC; reductase &#xAD6C;&#xB9AC;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xD615; 1&#xACFC; &#xC720;&#xD615; 2 &#xC138;&#xC81C;&#xACF1; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xD56D;&#xB9CC;. &#xD6A8;&#xC18C;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD6C4;&#xC790;&#xC758; &#xC804;&#xC790; &#xC218;&#xB77D;&#xC790; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB85C; &#xC804; &#xD589;&#xC704;&#xB294; &#xCD09;&#xB9E4; &#xC791;&#xC5C5; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD0C0;&#xC785;-1 &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xAC1C;&#xD3B8; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xBA54;&#xD2F0;&#xC624;&#xB2CC; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; NiR (&#xC640;&#xC77C;&#xB4DC; &#xC720;&#xD615; (wt) &#xBC0F; Met150Gly &#xBC0F; Met150Thr &#xBCC0;&#xC885;)&#xC640; Fe (II) EDTA&#xC640; Fe (II) HEDTA &#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC1A1; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860;&#xC744; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558; &#xC5EC; &#xD0D0;&#xD5D8; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBCC0;&#xC774; 0.3 Ev&#xB85C; &#xAC1C;&#xD3B8; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC99D;&#xAC00; (30 kJ mol-1). &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC99D;&#xAC00; wt NIR&#xC5D0; &#xD384;&#xC2A4; radiolysis &#xC2E4;&#xD5D8; &#xBC0F; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBCC0;&#xC885; (Met150Gly, Met150His, &#xBC0F; Met150Thr)&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB410;&#xB2E4;. (&#xC544;&#xB798;&#xC5D0; allosteric &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;) met150gly&#xC5D0; &#xD0C0;&#xC785;-1 Cu &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC6B4; met62&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xAC1C;&#xD3B8; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC57D; wt &#xAC12; &#xB0AE; &#xCDC4; &#xB2E4;. &#xAC1C;&#xD3B8; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0;&#xC758; &#xC720;&#xC0AC;&#xC131;&#xACFC; &#xD638;&#xD658; allosteric &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xC874;&#xC7AC; Met150Gly Nir&#xC5D0; &#xAC10;&#xC18C; &#xC720;&#xD615; 1 &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; &#xAC10;&#xC18C; wt NiR (1.85 A &#xD574;&#xACB0;)&#xACFC; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; XRD &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC5D0; &#xB530;&#xB974;&#xBA74;.

&#xC544; &#xC9C8;&#xC0B0;&#xC5FC; reductase&#xC758; &#xC720;&#xD615;-1 &#xAD6C;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xAC1C;&#xD3B8; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xBA54;&#xD2F0;&#xC624;&#xB2CC; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;.

Reductasa de nitrito que contiene cobre alberga un tipo 1 y un sitio de Cu de tipo 2. Los actos anteriores como el sitio del aceptador del electr&oacute;n de la enzima y el segundo es el sitio de acci&oacute;n catal&iacute;tica. El efecto del ligando metionina en la energ&iacute;a de reorganizaci&oacute;n del sitio tipo 1 fue explorado por estudiar la cin&eacute;tica de transferencia de electrones entre NiR (wild type (wt) y las variantes Met150Gly y Met150Thr) con el Fe (II) EDTA y Fe (II) HEDTA. Las mutaciones aumentaron la energ&iacute;a de reorganizaci&oacute;n por 0,3 eV (30 kJ mol-1). Se encontr&oacute; un aumento similar de pulso radiolysis experimentos en el wt NIR y tres variantes (Met150Gly, Met150His y Met150Thr). Enlace de la Met62 cercana al sitio Cu tipo 1 en Met150Gly (bajo la influencia de un efector alost&eacute;rico) baja la energ&iacute;a de reorganizaci&oacute;n a aproximadamente el valor del peso. Seg&uacute;n datos de DRX, que la estructura del sitio reducido tipo 1 en Met150Gly NiR en presencia de un efector alost&eacute;rico es similar a la del peso reducido NiR (resuelto a 1.85 A), compatible con la semejanza en la energ&iacute;a de reorganizaci&oacute;n.

Efecto del ligando metionina en la energ&iacute;a de reorganizaci&oacute;n del sitio cobre tipo 1 de la reductasa de nitrito.

&#x4E9A;&#x785D;&#x9178;&#x76D0;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176; (NiR) &#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x9176;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x7C7B;&#x578B; 1 &#x548C;&#x7C7B;&#x578B; 2 &#x94DC;&#x7AD9;&#x70B9;&#x671F;&#x95F4;&#x53CD;&#x785D;&#x5316;&#x7EC6;&#x83CC;&#x5BF9;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E9A;&#x785D;&#x9178;&#x76D0;&#x3002;&#x94DC;-&#x4E9A;&#x785D;&#x57FA;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4F53;&#x662F;&#x8FD1;&#x7EA2;&#x5916;&#x50AC;&#x5316;&#x5468;&#x671F;&#x63D0;&#x51FA;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x5584;&#x7279;&#x8272;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x4E2D;&#x95F4;&#x6B63;&#x5F0F;&#x79F0;&#x4E3A;&#x94DC; (I)-&#x6CA1;&#x6709; + &#x548C;&#x62DF;&#x6210;&#x7ACB;&#x7684;&#x7C7B;&#x578B; 2 &#x94DC;&#x5728;&#x7F51;&#x7AD9;&#x540E;&#x4E9A;&#x785D;&#x9178;&#x76D0;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x548C;&#x7535;&#x5B50;&#x4F20;&#x8F93;&#x4ECE;&#x7C7B;&#x578B; 1 &#x94DC;&#x7AD9;&#x70B9;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x957F;&#x671F;&#x63A5;&#x89E6;&#x5916;&#x6E90; no &#x5230;&#x6676;&#x4F53;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x548C;&#x4E24;&#x79CD;&#x53D8;&#x4F53;&#x5F62;&#x5F0F;&#x7684;&#x8FD1;&#x7EA2;&#x5916;&#x5149;&#x8C31;&#x7684;&#x7CAA;&#x4EA7;&#x78B1; &#xFF08;AfNiR&#xFF09;&#xFF0C;&#x6210;&#x7ACB;&#x4E86;&#x94DC;-&#x4E9A;&#x785D;&#x57FA;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x548C;&#x7ED3;&#x6784;&#x5DF2;&#x51B3;&#x5FC3; 1.8 A &#x6216;&#x66F4;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x3002;&#x63ED;&#x9732;&#x6C27;&#x5316;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x6676;&#x4F53;&#x4E2D;&#x7684;&#x9006;&#x5411;&#x53CD;&#x5E94;&#x548C;&#x4ECD;&#x7136;&#x5728;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7F51;&#x7AD9;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x4E9A;&#x785D;&#x9178;&#x76D0;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x6CA1;&#x6709;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;&#x7C7B;&#x578B; 1 &#x94DC;&#x7F51;&#x7AD9;&#x7A81;&#x53D8; &#xFF08;H145A&#xFF09;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x5230; 2 &#x578B;&#x7F51;&#x7AD9;&#x7535;&#x5B50;&#x8F6C;&#x79FB;&#xFF0C;&#x65E0;&#x53D1;&#x73B0;&#x53CD;&#x5411;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x5728;&#x4E24;&#x8005;&#x4E2D;&#x6C27;&#x5316;&#x548C;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684; H145A &#x6676;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x662F;&#x5728;&#x4E00;&#x4FA7;&#x4E0A;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x7684;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x7C7B;&#x578B; 2 &#x94DC;&#x3002;&#x5728; AfNiR&#xFF0C;Asp98 &#x5F62;&#x6210;&#x6C22;&#x952E;&#x57FA;&#x677F;&#x548C;&#x4EA7;&#x54C1;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x7C7B;&#x578B; 2 &#x94DC;&#x3002;&#x5728; D98N &#x53D8;&#x91CF;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x662F;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x4FA7;&#x9762;&#x4E0A;&#xFF0C;&#x4F46;&#x66F4;&#x7D0A;&#x4E71;&#x65F6;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x9176;&#x3002;Crystallographically &#x7279;&#x8272;&#x7684;&#x8FD1;&#x7EA2;&#x5916;&#x65E0;&#x7269;&#x7684;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848; EPR &#x8C31;&#x8868;&#x660E;&#x5B58;&#x5728;&#x6C27;&#x5316;&#x7C7B;&#x578B; 2 &#x94DC;&#x7AD9;&#x70B9;&#x548C;&#x56E0;&#x6B64;&#x88AB;&#x89E3;&#x91CA;&#x4E3A;&#x9020;&#x6210;&#x7A33;&#x5B9A;&#x94DC; nitrosyls &#x548C;&#x6B63;&#x5F0F;&#x5206;&#x914D;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x94DC; (II)-&#x65E0;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4E2A; NO &#x5206;&#x5B50;&#x6C27;&#x5316;&#x4E3A;&#x4E9A;&#x785D;&#x9178;&#x76D0;&#x53EF;&#x8D1F;&#x8D23;&#x65E0;&#x6C14;&#x4F53;&#x6C27;&#x5316; H145A &#x53D8;&#x91CF;&#x7684;&#x63A5;&#x89E6;&#x540E;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x94DC; (II)-&#x6CA1;&#x6709;-&#x7269;&#x79CD;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x8BA1;&#x5212;&#x3002;

&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x94DC;&#x4E9A;&#x785D;&#x9178;&#x5F62;&#x6210;&#x4E9A;&#x785D;&#x9178;&#x76D0;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x6C27;&#x5316;&#x72B6;&#x6001;&#x3002;

Nitrite reductase (NiR) is an enzyme that uses type 1 and type 2 copper sites to reduce nitrite to nitric oxide during bacterial denitrification. A copper-nitrosyl intermediate is a proposed, yet poorly characterized feature of the NiR catalytic cycle. This intermediate is formally described as Cu(I)-NO+ and is proposed to be formed at the type 2 copper site after nitrite binding and electron transfer from the type 1 copper site. In this study, copper-nitrosyl complexes were formed by prolonged exposure of exogenous NO to crystals of wild-type and two variant forms of NiR from Alcaligenes faecalis (AfNiR), and the structures were determined to 1.8 A or better resolution. Exposing oxidized wild-type crystals to NO results in the reverse reaction and formation of nitrite that remains bound at the active site. In a type 1 copper site mutant (H145A) that is incapable of electron transfer to the type 2 site, the reverse reaction is not observed. Instead, in both oxidized and reduced H145A crystals, NO is observed bound in a side-on manner to the type 2 copper. In AfNiR, Asp98 forms hydrogen bonds to both substrate and product bound to the type 2 Cu. In the D98N variant, NO is bound side-on but is more disordered when observed for the wild-type enzyme. The solution EPR spectra of the crystallographically characterized NiR-NO complexes indicate the presence of an oxidized type 2 copper site and thus are interpreted as resulting from stable copper-nitrosyls and formally assigned as Cu(II)-NO-. A reaction scheme in which a second NO molecule is oxidized to nitrite can account for the formation of a Cu(II)-NO- species after exposure of the oxidized H145A variant to NO gas.

Stable copper-nitrosyl formation by nitrite reductase in either oxidation state.

Nitrite r&eacute;ductase (NiR) est une enzyme qui utilise le type 1 et type 2 sites de cuivre afin de r&eacute;duire le nitrite oxyde nitrique pendant la d&eacute;nitrification bact&eacute;rienne. Un interm&eacute;diaire de cuivre-nitrosyle est une fonctionnalit&eacute; propos&eacute;e, pourtant peu caract&eacute;ris&eacute;e du cycle catalytique NiR. Cet interm&eacute;diaire est formellement d&eacute;crit comme Cu (I)-aucun + et doit &ecirc;tre form&eacute; dans le type 2 cuivre site apr&egrave;s liaison de nitrite et &eacute;lectrons transfert du type 1 site de cuivre. Dans cette &eacute;tude, complexes cuivre-nitrosyle ont &eacute;t&eacute; form&eacute;s par une exposition prolong&eacute;e non exog&egrave;ne aux cristaux de type sauvage et deux variantes de NiR de Alcaligenes faecalis (AfNiR), et les structures ont &eacute;t&eacute; d&eacute;termin&eacute;es &agrave; 1,8 A ou une meilleure r&eacute;solution. Exposant oxyd&eacute; sauvage cristaux aucun r&eacute;sultat dans la r&eacute;action inverse et la formation de nitrites qui demeure li&eacute; au site actif. Dans un type 1 site cuivre mutant (H145A) qui est incapable de transfert d&#39;&eacute;lectron &agrave; site de type 2, la r&eacute;action inverse n&#39;est pas observ&eacute;e. Au lieu de cela, &agrave; la fois oxyd&eacute; et r&eacute;duit H145A cristaux, non est li&eacute; observ&eacute;e de mani&egrave;re c&ocirc;t&eacute;-sur le cuivre de type 2. Dans AfNiR, Asp98 forme des liaisons hydrog&egrave;nes &agrave; la fois substrat et produit li&eacute; au type 2 Cu. Dans la variante D98N, non est li&eacute; side-on, mais est plus d&eacute;sordonn&eacute; quand observ&eacute;e pour l&#39;enzyme de type sauvage. Les spectres rpe de solution des complexes caract&eacute;ris&eacute;s par cristallographie NiR-pas indiquent la pr&eacute;sence d&#39;un type oxyd&eacute; 2 site de cuivre et donc sont interpr&eacute;t&eacute;s comme r&eacute;sultant de cuivre-nitrosyls stable et officiellement assign&eacute; comme Cu (II) - non-. Un sch&eacute;ma r&eacute;actionnel dans lequel une seconde QU&#39;AUCUNE mol&eacute;cule n&#39;est oxyd&eacute; en nitrites peut rendre compte de la formation d&#39;une esp&egrave;ce de Cu (II) - non - apr&egrave;s une exposition de la variante H145A oxyd&eacute;e &agrave; aucun gaz.

Formation de cuivre-nitrosyle stable de nitrite r&eacute;ductase dans les deux &Eacute;tats d&#39;oxydation.

Nitrit-Reduktase (NiR) ist ein Enzym, das mit Typ 1 und Typ 2 Kupfer-Websites um Nitrit an Stickstoffmonoxid w&auml;hrend bakterielle Denitrifikation zu vermeiden. Ein Kupfer-Nitrosylverbindungen Mittelstufe ist eine vorgeschlagene, aber schlecht gekennzeichnete Funktion des katalytischen Zyklus NiR. Das Zwischenprodukt wird offiziell beschrieben als Cu (I)-keine + und wird vorgeschlagen, den Typ 2 Kupfer gebildet werden nach Nitrit Bindung und Electron vom Typ 1 Kupfer-Standort Transfer-Website. In dieser Studie Kupfer-Nitrosylverbindungen komplexe bildeten sich bei l&auml;ngerer Exposition von exogenen NO zu Kristalle der Wildtyp und zwei verschiedenen Formen von NiR von Alcaligenes Faecalis (AfNiR) und die Strukturen waren entschlossen, 1,8 A oder bessere Aufl&ouml;sung. Verf&uuml;gbarmachen oxidierte Wildtyp Kristallen keine Ergebnisse in die umgekehrte Reaktion und die Bildung von Nitrit, die bei der aktiven Site gebunden bleibt. In einen Typ 1 Kupfer-Standort Mutant (H145A), der Elektronen-Transfer auf die Typ-2-Website unf&auml;hig ist, wird die umgekehrte Reaktion nicht eingehalten. Stattdessen in beiden oxidiert und reduzierte H145A Kristalle, Nr. ist beobachteten gebunden in gewissem Sinne seitlichem zum Typ 2 Kupfer. In AfNiR, Asp98 bildet Wasserstoffbr&uuml;ckenbindungen Substrat und Produkt gebunden, der Typ 2 Cu. In der D98N Variante nicht gebundenen Seite-auf aber ist mehr ungeordnet, wenn f&uuml;r das Wildtyp-Enzym beobachtet. Die L&ouml;sung EPR-Spektren der crystallographically gepr&auml;gte NiR-Nr. komplexe zeigen die Anwesenheit eines oxidierten Typs 2 Kupfer-Website so interpretiert und als resultierende aus stabilen Kupfer-Nitrosoverbindungen und formal zugewiesenen als Cu (II) - Nein-. Ein Reaktionsschema, in dem eine zweite, die kein Molek&uuml;l zu Nitrit oxidiert ist die Entstehung einer Cu (II) - NO - Arten nach einer Exposition der oxidierten H145A Variante mit kein Gas ausmachen kann.

Stabile Kupfer-Nitrosylverbindungen Bildung von Nitrit-Reduktase entweder Oxidationszahl.

Nitrito reduttasi (NiR) &egrave; un enzima che utilizza il tipo 1 e tipo 2 siti di rame per ridurre il nitrito di ossido nitrico durante la denitrificazione batterica. Un intermedio di rame-nitrosyl &egrave; una caratteristica proposta, ancora scarsamente caratterizzata del ciclo catalitico NiR. Questo intermedio &egrave; formalmente descritto come Cu (I)-NO + e si propone di formare al tipo 2 rame del sito dopo l&#39;associazione di nitrito ed elettrone trasferimento dal tipo 1 sito di rame. In questo studio, complessi di rame-nitrosyl sono stati formati da un&#39;esposizione prolungata di esogeno NO ai cristalli di wild-type e due varianti di NiR da Alcaligenes faecalis (AfNiR), e le strutture erano determinate a 1.8 A o migliore risoluzione. Esporre i cristalli di selvaggio-tipo ossidati a nessun risultato nella reazione inversa e formazione di nitriti che rimane legato al sito attivo. In un tipo 1 sito rame mutante (H145A) che &egrave; incapace di trasferimento di elettroni al sito tipo 2, la reazione inversa non &egrave; osservata. Invece, sia ossidato e ridotti H145A cristalli, NO &egrave; osservato rilegato in maniera side-on per il rame di tipo 2. In AfNiR, Asp98 forma legami a idrogeno al substrato sia prodotto associato al tipo 2 Cu. Nella variante D98N, non &egrave; vincolato side-on, ma &egrave; pi&ugrave; disordinato quando osservata per l&#39;enzima wild-type. Gli spettri EPR soluzione dei complessi caratterizzati crystallographically NiR-NO indicano la presenza di un tipo ossidato 2 sito di rame e cos&igrave; vengono interpretati come risultante da rame-nitrosyls stabile e formalmente assegnata come Cu (II) - NO-. Uno schema di reazione in cui un secondo che nessuna molecola &egrave; ossidata a nitrito pu&ograve; rappresentare per la formazione di una specie di Cu (II) - NO - dopo l&#39;esposizione della variante H145A ossidata a gas NO.

Stabile rame-nitrosyl formazione di nitrito reduttasi in uno stato di ossidazione.

&#x4E9C;&#x785D;&#x9178;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20; (NiR) &#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; 1 &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x4E9C;&#x785D;&#x9178;&#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20;&#x306B;&#x4E2D;&#x306B;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x8131;&#x7A92;&#x3092;&#x6E1B;&#x3089;&#x3059; 2 &#x3064;&#x306E;&#x9285;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x5165;&#x529B;&#x3059;&#x308B;&#x9175;&#x7D20;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9285;&#x30CB;&#x30C8;&#x30ED;&#x30B7;&#x30EB;&#x4E2D;&#x7D1A; NiR &#x89E6;&#x5A92;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x63D0;&#x6848;&#x3001;&#x307E;&#x3060;&#x4E0D;&#x5B8C;&#x5168;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x4E2D;&#x9593;&#x304C;&#x6B63;&#x5F0F;&#x306B; Cu (I) &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8A18;&#x8F09;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;-&#x306A;&#x3044; + 2 &#x9285;&#x578B;&#x3067;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x4E9C;&#x785D;&#x9178;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x3068;&#x96FB;&#x5B50;&#x304B;&#x3089;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; 1 &#x9285;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x8EE2;&#x9001;&#x5F8C;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;, &#x9285;&#x30CB;&#x30C8;&#x30ED;&#x30B7;&#x30EB;&#x932F;&#x4F53;&#x7D50;&#x6676;&#x306E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x304A;&#x3088;&#x3073; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x5F62;&#x5F0F;&#x306E; NiR &#x306B;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x306E; NO &#x30A2;&#x30EB;&#x30AB;&#x30EA;&#x30B2;&#x30CD;&#x30B9;&#x8178; (AfNiR) &#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x9577;&#x671F;&#x66B4;&#x9732;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3001;1.8 A &#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x306B;&#x306F;&#x69CB;&#x9020;&#x304C;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x306A;&#x3044;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x307E;&#x307E;&#x4E9C;&#x785D;&#x9178;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3068;&#x9006;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306B;&#x9178;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7D50;&#x6676;&#x3092;&#x516C;&#x958B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; 2 &#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3078;&#x306E;&#x96FB;&#x5B50;&#x79FB;&#x884C;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; 1 &#x9285;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x5909;&#x7570;&#x3067; &#xFF08;H145A&#xFF09;&#x3001;&#x9006;&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306F;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x9084;&#x5143; H145A &#x7D50;&#x6676;&#x3001;&#x3044;&#x3044;&#x3048;&#x3067;&#x3059; 2 &#x578B;&#x9285;&#x5074;&#x306B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x89B3;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3002;AfNiR &#x3067; Asp98 &#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x6C34;&#x7D20;&#x7D50;&#x5408;&#x57FA;&#x677F;&#x3068;&#x88FD;&#x54C1; 2 &#x578B;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B; Cu&#x3002;D98N &#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x3044;&#x3044;&#x3048;&#x9023;&#x7D50;&#x5074;&#x306B;&#x3067;&#x3059;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x9175;&#x7D20;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x304D;&#x3088;&#x308A;&#x4E0D;&#x898F;&#x5247;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30BD;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E; EPR &#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#xFF09; &#x7279;&#x5FB4;&#x3068; NiR &#x3044;&#x3044;&#x3048;&#x932F;&#x4F53;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x9178;&#x5316;&#x578B;&#x306E; 2 &#x9285;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3001;&#x3053;&#x3046;&#x3057;&#x3066; - &#x306A;&#x3057; - &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x9285;-nitrosyls &#x304B;&#x3089;&#x751F;&#x3058;&#x308B;&#x3068;&#x9285; (II) &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6B63;&#x5F0F;&#x306B;&#x5272;&#x308A;&#x5F53;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x89E3;&#x91C8;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5206;&#x5B50;&#x4E9C;&#x785D;&#x9178;&#x306B;&#x9178;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044; 2 &#x756A;&#x76EE;&#x306E; Cu (II) - &#x306A;&#x3057; - &#x7A2E;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x9178;&#x5316; H145A &#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x30AC;&#x30B9;&#x3078;&#x306E;&#x66B4;&#x9732;&#x5F8C;&#x30A2;&#x30AB;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306E;&#x30B9;&#x30AD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3002;

&#x4E9C;&#x785D;&#x9178;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5B89;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x9285;&#x30CB;&#x30C8;&#x30ED;&#x30B7;&#x30EB;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;

&#xC544; &#xC9C8;&#xC0B0;&#xC5FC; &#xD658; &#xC6D0; &#xD6A8;&#xC18C; (NiR)&#xC740; &#xD0C0;&#xC785;-1&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xADE0; denitrification &#xC911; &#xC544; &#xC9C8;&#xC0B0;&#xC5FC; &#xC9C8;&#xC18C; &#xC0B0;&#xD654;&#xBB3C;&#xC744; &#xC904;&#xC774;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; 2 &#xAD6C;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC785;&#xB825; &#xD558;&#xB294; &#xD6A8;&#xC18C;. &#xAD6C;&#xB9AC; nitrosyl &#xC911;&#xAE09; NiR &#xCD09;&#xB9E4; &#xC0AC;&#xC774;&#xD074;&#xC758; &#xC81C;&#xC548;, &#xC544;&#xC9C1; &#xC81C;&#xB300;&#xB85C; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC774; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC911;&#xAC04; Cu (I)&#xC73C;&#xB85C; &#xACF5;&#xC2DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xB294;-&#xC544;&#xB2C8; + &#xAD6C;&#xB9AC; 2 &#xD615;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD558; &#xACE0; &#xD6C4; &#xC544; &#xC9C8;&#xC0B0;&#xC5FC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; &#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC1A1; &#xD615;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; 1 &#xAD6C;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xAD6C;&#xB9AC; nitrosyl &#xB2E8;&#xC9C0; Alcaligenes faecalis (AfNiR)&#xC5D0;&#xC11C; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD615; &#xBC0F; Nir&#xC758; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBCC0;&#xD615; &#xD615;&#xD0DC; &#xACB0;&#xC815;&#xC744; exogenous NO&#xC758; &#xC7A5;&#xAE30;&#xAC04;&#xB41C; &#xB178;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD615;&#xC131; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xAD6C;&#xC870; 1.8 A &#xB610;&#xB294; &#xB354; &#xB098;&#xC740; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4;&#xB97C; &#xACB0;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5ED; &#xBC18;&#xC751; &#xD65C;&#xC131; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xB294; &#xC544; &#xC9C8;&#xC0B0;&#xC5FC;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xC544;&#xBB34;&#xB7F0; &#xACB0;&#xACFC;&#xB97C; &#xC0B0;&#xD654; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xD06C;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xD0C8; &#xB178;&#xCD9C;. &#xC720;&#xD615; 1 &#xAD6C;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; (H145A) &#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC1A1; &#xC720;&#xD615; 2 &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC218; &#xC788;&#xB294;, &#xC5ED; &#xBC18;&#xC751; &#xAD00;&#xCC30; &#xD558;&#xC9C0;. &#xB458; &#xB2E4; &#xB300;&#xC2E0; &#xC0B0;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xAC10;&#xC18C; &#xB41C; H145A &#xACB0;&#xC815;, &#xC544;&#xB2C8; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xD615; 2 &#xAD6C;&#xB9AC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xCD94;&#xAC00; &#xAD00;&#xCC30;&#xB41C;. AfNiR, Asp98 &#xAE30;&#xD310; &#xBC0F; 2 &#xD615;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xC81C;&#xD488;&#xC5D0; &#xC218;&#xC18C; &#xACB0;&#xD569;&#xC744; &#xD615;&#xC131; Cu. D98N &#xBCC0;&#xC885;&#xC5D0; &#xC544;&#xB2C8;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xCE21;&#xBA74;&#xC740; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD615; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB420; &#xB54C; &#xB354; &#xBB34;&#xC9C8;&#xC11C; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC194;&#xB8E8;&#xC158; EPR &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; crystallographically &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC774; NiR-&#xC544;&#xB2C8; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC0B0;&#xD654; &#xD615;&#xC2DD;&#xC758; 2 &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xAD6C;&#xB9AC; &#xACE0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xD574;&#xC11D; &#xD558;&#xB294; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xAD6C;&#xB9AC; nitrosyls&#xC5D0;&#xC11C; &#xACB0;&#xACFC; &#xBC0F; Cu (II)&#xC73C;&#xB85C; &#xACF5;&#xC2DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD560;&#xB2F9; &#xB41C;-&#xB354;-. &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC544;&#xB2C8; &#xBD84;&#xC790;&#xB294; &#xC544; &#xC9C8;&#xC0B0;&#xC5FC;&#xC744; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0B0;&#xD654; H145A variant&#xC758; &#xAC00;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xB41C; &#xD6C4; Cu (II)-&#xC544;&#xB2C8;-&#xC885; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xACC4;&#xC815;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBC18;&#xC751; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC544; &#xC9C8;&#xC0B0;&#xC5FC; &#xD658; &#xC6D0; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC911; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xAD6C;&#xB9AC; nitrosyl &#xD615;&#xC131;.

Nitrito reductasa (NiR) es una enzima que utiliza el tipo 1 y tipo 2 sitios de cobre para reducir nitrito a &oacute;xido n&iacute;trico durante la desnitrificaci&oacute;n bacteriana. Un intermedio de cobre-nitrosyl es una caracter&iacute;stica de la propuesta, pero mal caracterizada del ciclo catal&iacute;tico de NiR. Este intermedio es descrito formalmente como Cu (I)-NO + y se propone que se formar&aacute; en el tipo 2 de cobre del sitio despu&eacute;s de atascamiento de nitrito y electr&oacute;n transferencia del tipo 1 sitio de cobre. En este estudio, cobre-nitrosyl complejos se formaron por la exposici&oacute;n prolongada de ex&oacute;geno NO a cristales de tipo salvaje y dos formas de NiR de Alcaligenes faecalis (AfNiR), y las estructuras estaban decididas a 1.8 A o mejor resoluci&oacute;n. Exponer el oxidado salvaje-tipo cristales sin resultados en la reacci&oacute;n inversa y la formaci&oacute;n de nitrito que sigue siendo l&iacute;mite en el sitio activo. En un tipo 1 sitio cobre mutante (H145A) que es incapaz de transferencia de electrones en el sitio de tipo 2, no se observa la reacci&oacute;n inversa. En cambio, en tanto oxidado y cristales de H145A reducidos, NO es l&iacute;mite observado de manera lateralmente al cobre tipo 2. En AfNiR, Asp98 forma enlaces de hidr&oacute;geno a sustrato y producto vinculado al tipo 2 Cu. En la variante de D98N, NO es l&iacute;mite lateral pero es m&aacute;s desordenado cuando la enzima de tipo salvaje. Los espectros EPR de soluci&oacute;n de los complejos crystallographically caracterizados de NiR-NO indican la presencia de un tipo oxidado 2 sitio de cobre y as&iacute; se interpretan como resultante de cobre-nitrosyls estable y formalmente asignado como Cu (II) - NO-. Un esquema de reacci&oacute;n en la que un segundo que ninguna mol&eacute;cula se oxida a nitrito puede explicar la formaci&oacute;n de una especie de Cu (II) - NO - despu&eacute;s de la exposici&oacute;n de la variante H145A oxidada a gas NO.

Cobre-nitrosyl estable formaci&oacute;n de reductasa de nitrito en cualquier estado de oxidaci&oacute;n.

&#x4E92;&#x52A8;&#x7684;&#x542B;&#x94DC;&#x7684;&#x5F02;&#x5316;&#x4E9A;&#x785D;&#x9178;&#x76D0;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x4E0E;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x4E94;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x7CAA;&#x4EA7;&#x78B1; S-6 (AfNiR) &#x4ECE;&#x7814;&#x7A76;&#x4E86;&#x4F7F;&#x7528;&#x6676;&#x4F53;&#x5B66;&#x548C;&#x7A33;&#x6001;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x3002;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E0E; AfNiR &#x7684;&#x6C27;&#x5316;&#x50AC;&#x5316;&#x7C7B;&#x578B; 2 &#x94DC;&#x3002;&#x4E09;&#x4E2A;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50; &#xFF08;&#x7532;&#x9178;&#x3001; &#x4E59;&#x9178;&#x3001; &#x785D;&#x9178;&#x76D0;&#xFF09; &#x901A;&#x8FC7;&#x5BF9; 2 &#x578B;&#x9F7F;&#x534F;&#x8C03;&#x7684;&#x81F3;&#x5C11;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6C27;&#x539F;&#x5B50;&#x6A21;&#x4EFF;&#x57FA;&#x677F;&#x94DC;&#x539F;&#x5B50;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E09;&#x79CD;&#x9634;&#x79BB;&#x5B50;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x7684;&#x94DC;&#x79BB;&#x5B50;&#x5728;&#x4E9A;&#x785D;&#x9178;&#x76D0;&#x4E0D;&#x5BF9;&#x79F0;&#x3001; &#x9F7F;&#x65B9;&#x5F0F;&#x76F8;&#x540C;&#x3002;&#x7B26;&#x5408;&#x5176;&#x5F31;&#x6291;&#x5236;&#x8FD9;&#x79CD;&#x9176; (K &#x6211; &gt; 50 &#x6BEB;&#x7C73;&#xFF09;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B; AfNiR &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x4E2D;&#x7684;&#x94DC;-O &#x8DDD;&#x79BB;&#x88AB;&#x7EA6; 0.15 &#x4E00;&#x4E2A;&#x957F;&#x4E8E;&#x5728; AfNiR &#x4E9A;&#x785D;&#x9178;&#x76D0;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x4E2D;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x3002;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6A21;&#x5F0F;&#x4E0E;&#x6B8B;&#x7559;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7F51;&#x7AD9; Ile257 &#x7684;&#x4FA7;&#x94FE;&#x7684;&#x7A7A;&#x95F4;&#x4F4D;&#x963B;&#x4EA4;&#x4E92;&#x90E8;&#x5206;&#x786E;&#x5B9A;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;Asp98&#xFF0C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x6C22;&#x503A;&#x5238;&#x952E;&#x5165; 2 &#x94DC;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4E9A;&#x785D;&#x9178;&#x76D0;&#x548C;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x3001; &#x4FA7;&#x94FE;&#x662F;&#x7D0A;&#x4E71;&#x6216;&#x6307;&#x51FA;&#x4ECE;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3002;&#x4E59;&#x9178;&#x548C;&#x7532;&#x9178;&#x6DF7;&#x5408;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x7B26;&#x5408; occludes &#x7684;&#x7C7B;&#x578B; 2 &#x94DC;&#x83B7;&#x5F97; AfNiR &#x918B;&#x9178;&#x5EFA;&#x7B51;&#x7FA4;&#x5185;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4E2A;&#x918B;&#x9178;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x53D1;&#x751F;&#x6291;&#x5236; AfNiR&#x3002;&#x7B2C;&#x56DB;&#x6B21;&#x7684;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#xFF0C;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x4E8C;&#x6C2E;&#xFF0C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x5728;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x5BF9;&#x51CF;&#x5C11;&#x94DC;&#x8BA9;&#x4EBA;&#x60F3;&#x8D77;&#x4FA7;&#x4E0A;&#x65F6;&#x5C1A;&#x7684;&#x6C27;&#x5316;&#x91D1;&#x5C5E;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x4E8C;&#x6C2E;&#x5728;&#x66F4;&#x8FDC;&#x7684;&#x8DDD;&#x79BB;&#x4E0A;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4ECE;&#x91D1;&#x5C5E;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E94;&#x5C4A;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x3001; &#x53E0;&#x6C2E;&#xFF0C;&#x6700;&#x5F3A;&#x70C8;&#x6291;&#x5236;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E9A;&#x785D;&#x9178;&#x76D0;&#x7684; AfNiR (K ic = 2.0 + /-0.1 m m)&#x3002;&#x6B64;&#x914D;&#x4F53;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x7C7B;&#x578B; 2 &#x94DC;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7ED3;&#x675F;-&#x4E0A;&#x5927;&#x7EA6; 2 A&#xFF0C;&#x94DC; N c &#x8DDD;&#x79BB;&#x548C;&#x662F;&#x552F;&#x4E00;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x5F62;&#x6210;&#x6C22;&#x952E;&#x4E0E; Asp98&#x3002;&#x603B;&#x4F53;&#x800C;&#x8A00;&#xFF0C;&#x6570;&#x636E;&#x8BC1;&#x5B9E; Asp98 &#x548C; Ile257 &#x7684;&#x5224;&#x522B;&#x886C;&#x5E95;&#x4E2D;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#x4ECE;&#x5176;&#x5B83;&#x5C0F;&#x7684;&#x9634;&#x79BB;&#x5B50;&#x3002;

&#x5B88;&#x6052;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7F51;&#x7AD9;&#x6B8B;&#x7559;&#x91CF;&#x9650;&#x5236;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x542B;&#x94DC;&#x4E9A;&#x785D;&#x9178;&#x76D0;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x3002;

The interaction of copper-containing dissimilatory nitrite reductase from Alcaligenes faecalis S-6 ( AfNiR) with each of five small molecules was studied using crystallography and steady-state kinetics. Structural studies revealed that each small molecule interacted with the oxidized catalytic type 2 copper of AfNiR. Three small molecules (formate, acetate and nitrate) mimic the substrate by having at least two oxygen atoms for bidentate coordination to the type 2 copper atom. These three anions bound to the copper ion in the same asymmetric, bidentate manner as nitrite. Consistent with their weak inhibition of the enzyme ( K i >50 mM), the Cu-O distances in these AfNiR-inhibitor complexes were approximately 0.15 A longer than that observed in the AfNiR-nitrite complex. The binding mode of each inhibitor is determined in part by steric interactions with the side chain of active site residue Ile257. Moreover, the side chain of Asp98, a conserved residue that hydrogen bonds to type 2 copper-bound nitrite and nitric oxide, was either disordered or pointed away from the inhibitors. Acetate and formate inhibited AfNiR in a mixed fashion, consistent with the occurrence of second acetate binding site in the AfNiR-acetate complex that occludes access to the type 2 copper. A fourth small molecule, nitrous oxide, bound to the oxidized metal in a side-on fashion reminiscent of nitric oxide to the reduced copper. Nevertheless, nitrous oxide bound at a farther distance from the metal. The fifth small molecule, azide, inhibited the reduction of nitrite by AfNiR most strongly ( K ic = 2.0 +/- 0.1 mM). This ligand bound to the type 2 copper center end-on with a Cu-N c distance of approximately 2 A, and was the only inhibitor to form a hydrogen bond with Asp98. Overall, the data substantiate the roles of Asp98 and Ile257 in discriminating substrate from other small anions.

Conserved active site residues limit inhibition of a copper-containing nitrite reductase by small molecules.

L&#39;interaction contenant du cuivre dissimilatory nitrite r&eacute;ductase de Alcaligenes faecalis S-6 (AfNiR) avec chacun des cinq petites mol&eacute;cules a &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute;e &agrave; l&#39;aide de la cristallographie et &eacute;quilibre cin&eacute;tique. Les &eacute;tudes structurales ont r&eacute;v&eacute;l&eacute; que chaque petite mol&eacute;cule interagit avec le type catalytique oxyd&eacute; 2 cuivre de AfNiR. Trois petites mol&eacute;cules (formate, ac&eacute;tate et nitrate) imitent le substrat en ayant au moins deux atomes d&#39;oxyg&egrave;ne pour bidentate coordination type 2 atome de cuivre. Ces trois anions li&eacute; &agrave; l&#39;ion de cuivre de la m&ecirc;me mani&egrave;re asym&eacute;trique, bidentate comme nitrite. Compatible avec leur faible inhibition de l&#39;enzyme (K j&#39;ai &gt; 50 mM), les distances de Cu-O dans ces complexes de l&#39;inhibiteur de la AfNiR &eacute;taient environ 0,15 A plus longue que celle observ&eacute;e dans le complexe AfNiR-nitrite. Le mode de liaison de chaque inhibiteur est d&eacute;termin&eacute; en partie par des interactions st&eacute;riques avec la cha&icirc;ne lat&eacute;rale du r&eacute;sidu de site actif Ile257. En outre, la cha&icirc;ne lat&eacute;rale de Asp98, un r&eacute;sidu conserv&eacute; que les obligations de l&#39;hydrog&egrave;ne de type 2 de cuivre li&eacute; aux nitrites et de l&#39;oxyde nitrique, a &eacute;t&eacute; d&eacute;sordonn&eacute;e ou point&eacute;e &agrave; l&#39;&eacute;cart les inhibiteurs. L&#39;ac&eacute;tate et le formate inhibent AfNiR de mani&egrave;re mixte, coh&eacute;rente avec l&#39;apparition du deuxi&egrave;me site de liaison de l&#39;ac&eacute;tate dans le complexe AfNiR-ac&eacute;tate qu&#39;occlusion acc&egrave;s au type 2 cuivre. Une quatri&egrave;me petite mol&eacute;cule, l&#39;oxyde nitreux, li&eacute; au m&eacute;tal oxyd&eacute; dans un mode side-on rappelle de l&#39;oxyde nitrique pour le cuivre r&eacute;duit. N&eacute;anmoins, protoxyde d&#39;azote est li&eacute; &agrave; une plus grande distance du m&eacute;tal. La cinqui&egrave;me petite mol&eacute;cule, l&#39;azoture, inhibe la r&eacute;duction des nitrites par AfNiR plus fortement (K ic = 2,0 +/-0,1 mM). Ce ligand li&eacute; &agrave; la type 2 centre cuivre fin-on avec une distance c Cu-N d&#39;environ 2 A et a &eacute;t&eacute; le seul inhibiteur pour former une liaison hydrog&egrave;ne avec Asp98. Dans l&#39;ensemble, les donn&eacute;es prouv&eacute; les r&ocirc;les de Asp98 et Ile257 en discriminant substrat d&#39;autres anions petites.

Site actif conserv&eacute; r&eacute;sidus limite l&#39;inhibition d&#39;une nitrite r&eacute;ductase cuivre contenant de petites mol&eacute;cules.

Die Interaktion von Kupfer-haltigen Dissimilatorische Nitrit wurde Reduktase von Alcaligenes Faecalis S-6 (AfNiR) mit jeweils f&uuml;nf kleine Molek&uuml;le mit Kristallographie und Steady-State-Kinetik untersucht. Strukturelle Studien belegten, dass jedes kleines Molek&uuml;l mit den oxidierte katalytisch Typ 2 Kupfer der AfNiR interagiert. Drei kleine Molek&uuml;le (Formiat, Acetat und Nitrat) imitieren das Substrat mit mindestens zwei Sauerstoffatome zweiz&auml;hniger Koordinierung der Typ 2 Kupfer-Atom. Diese drei Anionen gebunden an das Kupfer-Ion in asymmetrischen, zweiz&auml;hniger genauso wie Nitrit. Einklang mit ihrer schwachen Hemmung des Enzyms (K ich &gt; 50 mM), die Cu-O-Entfernungen in dieser AfNiR-Inhibitor-komplexe wurden etwa 0,15 A l&auml;nger ist als die in der AfNiR-Nitrit-Komplex zu beobachten. Der Bindungsmodus jedes Inhibitor wird teilweise durch sterische Wechselwirkungen mit der Seitenkette von aktiven Site R&uuml;ckstand Ile257 bestimmt. Dar&uuml;ber hinaus war die Seitenkette des Asp98, konservierte R&uuml;ckst&auml;nde, die Wasserstoff haftet an geben Sie 2 Kupfer gebundene Nitrit und Stickoxid, entweder ungeordnet oder Spitzen Weg von den Inhibitoren. Acetat und Formiat gehemmt AfNiR in einem gemischten Mode, konsistent mit Eintritt des zweiten Acetat-Bindungsstelle in der AfNiR-Acetat-Komplex, der Zugriff auf den Typ 2 Kupfer Zahnbildung. Eine vierte niedermolekularer, Lachgas zwangsl&auml;ufig das oxidierte Metall in eine seitliche Mode erinnert an Stickstoffmonoxid zum reduzierten Kupfer. Dennoch gebundenen Lachgas in weiter Entfernung aus Metall. Die f&uuml;nfte niedermolekularer, azid, die Reduktion von Nitrit durch AfNiR am st&auml;rksten gehemmt (K ic = 2,0 +/-0,1 mM). Diese Liganden an die Typ 2 Kupfer Zentrum End-on mit einem Cu-N-C-Abstand von ca. 2 A gebunden, und war der einzige Hemmer eine Wasserstoff-Anleihe mit Asp98 zu bilden. Insgesamt belegen die Daten die Rollen von Asp98 und Ile257 in unterscheidende Substrat aus anderen kleinen Anionen.

Konservierte aktiven Site R&uuml;ckst&auml;nde Grenze Hemmung von einer Kupfer-haltigen Nitrit-Reduktase durch kleine Molek&uuml;le.

L&#39;interazione di rame contenenti Vivarese nitrito reduttasi da Alcaligenes faecalis S-6 (AfNiR) con ognuno dei cinque piccole molecole &egrave; stata studiata utilizzando cinetica di cristallografia e steady-state. Studi strutturali hanno rivelato che ogni piccola molecola ha interagito con il tipo catalitico ossidato 2 rame di AfNiR. Tre piccole molecole (formiato, acetato e nitrato) imitano il substrato di avere almeno due atomi di ossigeno per coordinamento bidentate al tipo 2 atomo di rame. Questi tre anioni associati allo ione rame nello stesso modo asimmetrico, bidentate come nitrito. Coerente con la loro debole inibizione dell&#39;enzima (K mi &amp;gt; 50 mM), le distanze di Cu-O in questi complessi AfNiR-inibitore erano circa 0,15 A pi&ugrave; lungo di quello osservato nel complesso AfNiR-nitrito. La modalit&agrave; di associazione di ciascun inibitore &egrave; determinata in parte dall&#39;interazione sterica con la catena laterale del residuo attivo sito Ile257. Inoltre, la catena laterale di Asp98, un residuo conservato che idrogeno legami di tipo 2 associato a rame nitriti e ossido nitrico, fu disordinata o puntata lontano da inibitori. Acetato e formiato inibito AfNiR in modo misto, coerentemente con la ricorrenza del secondo sito di legame di acetato nel complesso AfNiR-acetato che occlude accesso al tipo 2 di rame. Una piccola molecola quarta, protossido di azoto, associato al metallo ossidato in un side-on moda ricorda di ossido nitrico per il rame ridotto. Tuttavia, protossido di azoto legato a una distanza pi&ugrave; lontano dal metallo. La quinta piccola molecola, azoturo, inibito la riduzione del nitrito di AfNiR pi&ugrave; fortemente (K ic = 2.0 + /-0,1 mM). Questo ligando associato per il tipo 2 rame centro fine su con distanza di circa 2 A c Cu-N e fu l&#39;unico inibitore per formare un legame idrogeno con Asp98. Nel complesso, i dati di suffragare i ruoli di Asp98 e Ile257 nel substrato discriminante da altri piccoli anioni.

Sito attivo conservata residui limite inibizione di un nitrito reduttasi contenenti rame da piccole molecole.

&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x9285;&#x542B;&#x6709;&#x7570;&#x5316;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AB;&#x30EA;&#x30B2;&#x30CD;&#x30B9;&#x8178; S-6 (AfNiR) &#x5404; 5 &#x3064;&#x306E;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x89E3;&#x6790;&#x3068;&#x5B9A;&#x5E38;&#x72B6;&#x614B;&#x52D5;&#x529B;&#x5B66;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x69CB;&#x9020;&#x7814;&#x7A76;&#x5404;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x306F;&#x9178;&#x5316;&#x89E6;&#x5A92; AfNiR &#x306E; 2 &#x578B;&#x9285;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E8C;&#x5EA7;&#x914D;&#x4F4D;&#x578B; 2 &#x3078;&#x306E;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082; 2 &#x3064;&#x306E;&#x9178;&#x7D20;&#x539F;&#x5B50;&#x3092;&#x6301;&#x3064; 3 &#x3064;&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x5206;&#x5B50; (&#x30AE;&#x9178;&#x3001;&#x9162;&#x9178;&#x3001;&#x785D;&#x9178;) &#x6A21;&#x5023;&#x57FA;&#x677F;&#x9285;&#x539F;&#x5B50;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089; 3 &#x3064;&#x306E;&#x9670;&#x306B;&#x4E9C;&#x785D;&#x9178;&#x3068;&#x975E;&#x5BFE;&#x79F0;, &#x4E8C;&#x5EA7;&#x306E;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x9285;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x81EA;&#x5206;&#x5F31;&#x3044;&#x963B;&#x5BB3;&#x9175;&#x7D20;&#x3068;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027; (K &#x79C1;&#x76EE; 50 &#x30DF;&#x30EA;&#x30E1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EB;&#xFF09;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E; AfNiR &#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E; Cu-o &#x8DDD;&#x96E2;&#x7D04; 0.15 AfNiR &#x4E9C;&#x785D;&#x9178;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x9577;&#x3081;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x5404;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x90E8;&#x3067;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269; Ile257 &#x306E;&#x5074;&#x9396;&#x3068;&#x7ACB;&#x4F53;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;Asp98&#x3001;&#x6C34;&#x7D20; 2 &#x9285;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x4E9C;&#x785D;&#x9178;&#x3068;&#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20;, &#x5165;&#x529B;&#x3059;&#x308B;&#x50B5;&#x4FDD;&#x5B58;&#x6B8B;&#x6E23;&#x306E;&#x5074;&#x9396;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x304B;&#x7121;&#x79E9;&#x5E8F;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x963B;&#x5BB3;&#x7269;&#x8CEA;&#x304B;&#x3089;&#x96E2;&#x308C;&#x3066;&#x6307;&#x6458;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9162;&#x9178;&#x3068;&#x87FB;&#x9178;&#x6DF7;&#x5408;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3001;2 &#x756A;&#x76EE;&#x306E;&#x9162;&#x9178;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x578B;&#x9285; 2 &#x3078;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x30AA;&#x30AF;&#x30EB;&#x30FC;&#x30C9; AfNiR &#x9162;&#x9178;&#x932F;&#x4F53;&#x306E;&#x767A;&#x751F;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4; AfNiR &#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;4 &#x756A;&#x76EE;&#x306E;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x3001;&#x4E9C;&#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20;&#x9178;&#x5316;&#x91D1;&#x5C5E;&#x5074;&#x3067;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5F77;&#x5F7F;&#x3068;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20;&#x9084;&#x5143;&#x9285;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x4E9C;&#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20;&#x3088;&#x308A;&#x9060;&#x3044;&#x8DDD;&#x96E2;&#x3067;&#x91D1;&#x5C5E;&#x304B;&#x3089;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E94;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x3001;&#x30A2;&#x30B8;&#x3001;AfNiR &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x4E9C;&#x785D;&#x9178;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x9084;&#x5143;&#x3092;&#x6700;&#x3082;&#x5F37;&#x304F;&#x6291;&#x5236; (K ic = 2.0 &plusmn; 0.1 mM)&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9; 2 &#x578B;&#x9285;&#x30BB;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC; &#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30AA;&#x30F3; Cu N c &#x8DDD;&#x96E2;&#x7D04; 2 A &#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3001;Asp98 &#x3068;&#x6C34;&#x7D20;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x3001;Asp98 &#x3068; Ile257 &#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306E;&#x80A5;&#x3048;&#x305F;&#x57FA;&#x677F;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x7ACB;&#x8A3C;&#x3059;&#x308B;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x304B;&#x3089;&#x3002;

&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x6B8B;&#x7559;&#x5236;&#x9650;&#x963B;&#x5BB3;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x9285;&#x542B;&#x6709;&#x4E9C;&#x785D;&#x9178;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x3002;

&#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; dissimilatory &#xC544; &#xC9C8;&#xC0B0;&#xC5FC; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xAD6C;&#xB9AC;&#xC758; Alcaligenes faecalis S-6 (AfNiR) &#xAC01; 5 &#xAC1C;&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; reductase &#xACB0;&#xC815;&#xD559; &#xBC0F; &#xC815;&#xC0C1; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACF5;&#xBD80; &#xD588;&#xB2E4;. &#xAD6C;&#xC870; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBC1D;&#xD600; &#xAC01; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; Afnir&#xC758; &#xC0B0;&#xD654; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD0C0;&#xC785; 2 &#xAD6C;&#xB9AC;&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;. 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; (&#xD3B8;&#xB300;, &#xCD08; &#xC0B0; &#xBC0F; &#xC9C8;&#xC0B0;&#xC5FC;) 2 &#xD615;&#xC2DD; bidentate &#xC870;&#xC815;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C; 2 &#xAC1C;&#xC758; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC6D0;&#xC790;&#xB97C; &#xD568;&#xC73C;&#xB85C;&#xC368; &#xAE30;&#xD310; &#xBAA8;&#xBC29; &#xAD6C;&#xB9AC; &#xC6D0;&#xC790;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC74C;&#xC774;&#xC628; &#xC544; &#xC9C8;&#xC0B0;&#xC5FC;&#xACFC; &#xAC19;&#xC740; &#xBE44;&#xB300;&#xCE6D;, bidentate &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xAD6C;&#xB9AC; &#xC774;&#xC628;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC57D;&#xD55C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xC77C;&#xCE58; (K &#xB098; &amp;gt; 50 m m), AfNiR &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xB2E8;&#xC9C0; Cu-O &#xAC70;&#xB9AC; &#xC57D; 0.15 A AfNiR-&#xC544; &#xC9C8;&#xC0B0;&#xC5FC; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xD558;&#xB294; &#xC774;&#xC0C1; &#xD588;&#xB2E4;. &#xAC01; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBAA8;&#xB4DC; &#xD65C;&#xC131; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xCC0C; &#xAEBC; &#xAE30; Ile257 &#xC0AC;&#xC774;&#xB4DC; &#xCCB4;&#xC778; &#xC785;&#xCCB4;&#xC801; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xACB0;&#xC815; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, Asp98, &#xC218;&#xC18C; 2 &#xAD6C;&#xB9AC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xC544; &#xC9C8;&#xC0B0;&#xC5FC;&#xACFC; &#xC9C8;&#xC18C;&#xC758; &#xC0B0;&#xD654;&#xBB3C; &#xC785;&#xB825; &#xCC44;&#xAD8C; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xC0AC;&#xC774;&#xB4DC; &#xCCB4;&#xC778; &#xBB34;&#xC9C8;&#xC11C; &#xB610;&#xB294; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C0;&#xC801; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC544;&#xC138;&#xD14C;&#xC774;&#xD2B8;&#xC640; &#xD3B8;&#xB300; &#xD63C;&#xD569; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C;, &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC544;&#xC138;&#xD14C;&#xC774;&#xD2B8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC720;&#xD615; 2 &#xAD6C;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; occludes AfNiR-&#xCD08; &#xC0B0; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xC77C;&#xCE58; Afnir&#xB97C; &#xC800;&#xD574;. 4 &#xBC88;&#xC9F8; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790;, &#xC9C8;&#xC18C; &#xC0B0;&#xD654;&#xBB3C;, &#xC9C8;&#xC18C; &#xC0B0;&#xD654;&#xBB3C; &#xAC10;&#xC18C; &#xB41C; &#xAD6C;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC5F0;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xB294; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD328;&#xC158;&#xC5D0; &#xC0B0;&#xD654; &#xAE08;&#xC18D;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7FC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0;, &#xC544;&#xC0B0;&#xD654; &#xAE08;&#xC18D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBA40;&#xB9AC; &#xAC70;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C;. 5 &#xBC88;&#xC9F8; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790;, &#xC544; &#xC9C0; &#xB4DC;, Afnir&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC544; &#xC9C8;&#xC0B0;&#xC5FC;&#xC758; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xC5B5;&#xC81C; (K ic = 0.1 m m + 2.0). &#xC774; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC;&#xB294; &#xC720;&#xD615; 2 &#xAD6C;&#xB9AC; &#xC13C;&#xD130; &#xB05D;-&#xC5D0; &#xC57D; 2, Cu-N c &#xAC70;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB418;&#xBA70; &#xC720;&#xC77C;&#xD55C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; asp98&#xC640; &#xC218;&#xC18C; &#xACB0;&#xD569;&#xC744; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294;. &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xC785;&#xC99D;&#xD560; &#xCC28;&#xBCC4; &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0;&#xC11C; Asp98 &#xBC0F; ile257&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC791;&#xC740; &#xC74C;&#xC774;&#xC628;.

&#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAD6C;&#xB9AC; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xC544; &#xC9C8;&#xC0B0;&#xC5FC; reductase&#xC758; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xC561;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xB3C4; &#xC800;&#xD574;.

La interacci&oacute;n de cobre silfito nitrito reductasa de Alcaligenes faecalis S-6 (AfNiR) con cada uno de cinco peque&ntilde;as mol&eacute;culas fue estudiado usando cin&eacute;tica de Cristalograf&iacute;a y estacionaria. Estudios estructurales revelaron que cada mol&eacute;cula peque&ntilde;a interactuaron con el tipo catal&iacute;tico oxidado 2 cobre de AfNiR. Tres peque&ntilde;as mol&eacute;culas (formato, acetato y nitrato) m&iacute;mico el sustrato por tener al menos dos &aacute;tomos de ox&iacute;geno para coordinaci&oacute;n bidentado al tipo 2 &aacute;tomo de cobre. Estos tres aniones destinada a los iones de cobre de la misma manera asim&eacute;trica, Sturnira como nitrito. Consistente con su d&eacute;bil inhibici&oacute;n de la enzima (K me &gt; 50 mM), las distancias de Cu-O en estos complejos AfNiR-inhibidor eran aproximadamente 0,15 A mayor que el observado en el complejo AfNiR-nitrito. El modo de enlace de cada inhibidor est&aacute; determinado en parte por est&eacute;rica interacciones con la cadena lateral del sitio activo residuo Ile257. Por otra parte, la cadena lateral de Asp98, un residuo conservado que enlaces del hidr&oacute;geno para tipo 2 nitrito enlazado a cobre y &oacute;xido n&iacute;trico, desordenada o acentuada de los inhibidores. Acetato y formato inhiben AfNiR de manera mixta, consistente con la ocurrencia del segundo sitio de uni&oacute;n de acetato en el complejo de AfNiR-acetato que ocluye el conocimiento de la clase 2 de cobre. Una peque&ntilde;a mol&eacute;cula cuarta, &oacute;xido nitroso, vinculado al metal oxidado de lado-en forma de &oacute;xido n&iacute;trico para el cobre reducido. Sin embargo, el &oacute;xido nitroso atado a una distancia m&aacute;s lejana del metal. La mol&eacute;cula peque&ntilde;a Quinta, azida, inhibe la reducci&oacute;n de nitrito por AfNiR m&aacute;s fuertemente (K ic = 2.0 + /-0,1 mM). Este ligando limitado a la tipo 2 cobre centro final-con una distancia c Cu-N de aproximadamente 2 A y fue el &uacute;nico inhibidor para formar un enlace de hidr&oacute;geno con Asp98. En general, los datos justificar las funciones de Asp98 y Ile257 en sustrato discriminativa de otros aniones peque&ntilde;os.

Sitio activo conservado residuos l&iacute;mite inhibici&oacute;n de una reductasa de nitrito que contiene cobre por peque&ntilde;as mol&eacute;culas.

&#x5316;&#x5B66;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#x5174;&#x594B;&#x4F20;&#x9012;&#x662F;&#x63A7;&#x5236;&#x7EC6;&#x83CC;&#x8D8B;&#x5316;&#x6027;&#x7684;&#x9AD8;&#x6027;&#x80FD;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x3002;&#x5316;&#x5B66;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#x5174;&#x594B;&#x4F20;&#x9012;&#x901A;&#x5E38;&#x662F;&#x5728;&#x7FA4;&#x96C6;&#x4E2D;&#x5728;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x6781;&#x70B9;&#xFF0C;&#x5728;&#x7FA4;&#x96C6;&#x4E2D;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x9AD8;&#x7075;&#x654F;&#x5EA6;&#x3001; &#x5BBD;&#x52A8;&#x6001;&#x8303;&#x56F4;&#x548C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x7CBE;&#x786E;&#x9002;&#x5E94;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7814;&#x7A76;&#x4EA7;&#x751F;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x77DB;&#x76FE;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;&#x5728;&#x96C6;&#x7FA4;&#x4E2D;&#x5316;&#x5B66;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#x5174;&#x594B;&#x4F20;&#x9012;&#x7684;&#x5B89;&#x6392;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x5168;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7535;&#x5B50;&#x4F4E;&#x6E29;&#x5C42;&#x6790;&#x6210;&#x50CF;&#xFF0C;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x5316;&#x5B66;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#x5174;&#x594B;&#x4F20;&#x9012;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x7C7B;&#x522B;&#x548C;&#x5728;&#x8BB8;&#x591A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7269;&#x79CD;&#xFF0C;&#x4EE3;&#x8868;&#x51E0;&#x4E2A;&#x4E3B;&#x8981;&#x7EC6;&#x83CC;&#x95E8;&#x6240;&#x6709;&#x6392;&#x5217;&#x6210;&#x4E00;&#x4E2A;&#x9AD8;&#x4FDD;&#x5B88;&#x3001; 12 nm &#x7684;&#x516D;&#x89D2;&#x5F62;&#x6570;&#x7EC4;&#xFF0C;&#x7B26;&#x5408;&#x8BE5;&#x62DF;&#x8BAE;&quot;&#x4E09;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x805A;&quot;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x3002;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x89C2;&#x6D4B;&#x7684;&#x957F;&#x5EA6;&#x786E;&#x8BA4;&#x5F53;&#x524D;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x3001; &#x7075;&#x6D3B;&#x6346;&#x7ED1;&#x3001; &#x4FE1;&#x53F7;&#x3001; &#x548C;&#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#x5B50;&#x57DF;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x673A;&#x5236;&#x548C;&#x53D7;&#x4F53;&#x805A;&#x7C7B;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x662F;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x79CD;&#x7C7B;&#x4E2D;&#x666E;&#x904D;&#x5B58;&#x5728;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x56E0;&#x6B64;&#x5728;&#x8FDB;&#x5316;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x80FD;&#x5B88;&#x6052;&#x3002;

&#x7EC6;&#x83CC;&#x5316;&#x5B66;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#x9635;&#x5217;&#x7684;&#x901A;&#x7528;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;

Chemoreceptors are key components of the high-performance signal transduction system that controls bacterial chemotaxis. Chemoreceptors are typically localized in a cluster at the cell pole, where interactions among the receptors in the cluster are thought to contribute to the high sensitivity, wide dynamic range, and precise adaptation of the signaling system. Previous structural and genomic studies have produced conflicting models, however, for the arrangement of the chemoreceptors in the clusters. Using whole-cell electron cryo-tomography, here we show that chemoreceptors of different classes and in many different species representing several major bacterial phyla are all arranged into a highly conserved, 12-nm hexagonal array consistent with the proposed "trimer of dimers" organization. The various observed lengths of the receptors confirm current models for the methylation, flexible bundle, signaling, and linker sub-domains in vivo. Our results suggest that the basic mechanism and function of receptor clustering is universal among bacterial species and was thus conserved during evolution.

Universal architecture of bacterial chemoreceptor arrays.

Ch&#xE9;mor&#xE9;cepteurs sont des &#xE9;l&#xE9;ments cl&#xE9;s du syst&#xE8;me de haute performance de transduction du signal qui contr&#xF4;le la chimiotaxie bact&#xE9;rienne. Ch&#xE9;mor&#xE9;cepteurs sont g&#xE9;n&#xE9;ralement localis&#xE9;s dans un cluster au p&#xF4;le cellulaire, o&#xF9; les interactions entre les r&#xE9;cepteurs de la grappe sont consid&#xE9;r&#xE9;s comme contribuant &#xE0; la haute sensibilit&#xE9;, une large gamme dynamique, et l&#x26;#39;adaptation pr&#xE9;cise du syst&#xE8;me de signalisation. Des &#xE9;tudes ant&#xE9;rieures structurelles et de la g&#xE9;nomique ont produit des mod&#xE8;les contradictoires, cependant, pour l&#x26;#39;agencement des ch&#xE9;mor&#xE9;cepteurs dans les clusters. Utilisation de la cellule enti&#xE8;re &#xE9;lectronique cryo-tomographie, ici, nous montrons que les ch&#xE9;mor&#xE9;cepteurs de diff&#xE9;rentes classes et dans de nombreuses esp&#xE8;ces diff&#xE9;rentes, repr&#xE9;sentant plusieurs phylums bact&#xE9;rien majeur sont tous dispos&#xE9;s dans un tr&#xE8;s conserv&#xE9;e, 12-nm r&#xE9;seau hexagonal conforme au projet de &#x26;quot;trim&#xE8;re de dim&#xE8;res&#xAB; organisation . Les diff&#xE9;rentes longueurs observ&#xE9;es des r&#xE9;cepteurs de confirmer les mod&#xE8;les actuels de la m&#xE9;thylation, un faisceau souple, de signalisation, et l&#x26;#39;&#xE9;diteur de liens sous-domaines in vivo. Nos r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que le m&#xE9;canisme de base et la fonction de clustering r&#xE9;cepteur est universel parmi les esp&#xE8;ces bact&#xE9;riennes et a donc &#xE9;t&#xE9; conserv&#xE9; au cours de l&#x26;#39;&#xE9;volution.

Architecture universelle des tableaux ch&#xE9;mor&#xE9;cepteurs bact&#xE9;riennes

Chemoreceptors sind Schl&uuml;sselkomponenten des Hochleistungs-Signaltransduktion Systems, die bakterielle Chemotaxis steuert. Chemoreceptors sind in der Regel in einem Cluster am Pol Zelle, lokalisiert, wo Interaktionen zwischen den Rezeptoren im Cluster gedacht werden, um die hohe Empfindlichkeit und Dynamikbereich pr&auml;zise Anpassung des Signalling Systems beitragen. Bisherige strukturelle und genomische Untersuchungen haben Modelle, jedoch f&uuml;r die Anordnung der Chemoreceptors in den Clustern gebracht. Mit ganzen-Zelle Elektronen Cryo-Tomographie, zeigen hier wir, dass alle Chemoreceptors verschiedener Klassen und in vielen verschiedenen Arten, die mehrere bedeutende bakterielle St&auml;mme in einem stark konservierten, 12-nm sechseckigen Array mit der vorgeschlagenen &quot;Trimer des Dimer&quot; Organisation angeordnet sind. Die verschiedenen beobachteten L&auml;ngen der Rezeptoren best&auml;tigen aktuelle Modelle f&uuml;r die Methylierung, flexible B&uuml;ndel, Signalisierung und Linker Subdomains in-vivo. Unsere Ergebnisse legen nahe, dass ist der grundlegende Mechanismus und Funktion des Rezeptors clustering universal unter bakteriellen Spezies und wurde somit Verlauf der Evolution konserviert.

Universal-Architektur der bakteriellen Chemorezeptor-Arrays.

Chemocettori sono componenti chiave del sistema di trasduzione di segnale ad alte prestazioni che controlla la chemiotassi batterica. Chemocettori sono tipicamente localizzate in un cluster presso il polo della cellula, dove le interazioni tra i recettori del cluster sono pensate per contribuire all&#39;alta sensibilit&agrave;, ampia gamma dinamica e preciso adattamento del sistema di segnalazione. Precedenti studi di genomici e strutturali hanno prodotto modelli in conflitto, tuttavia, per la disposizione dei chemocettori in grappoli. Utilizzando cellule intere elettrone cryo-tomografia, qui mostriamo che chemocettori appartenenti a classi diverse e in molte specie differenti che rappresentano diversi phyla batterici principali sono disposti in una matrice esagonale altamente conservata, 12-nm coerente con l&#39;organizzazione proposta &quot;trimero di dimeri&quot;. Le varie lunghezze osservate dei recettori confermano modelli attuali per la metilazione, bundle flessibili, segnalazione e sottodomini del linker in vivo. I nostri risultati suggeriscono che il meccanismo di base e la funzione del recettore clustering &egrave; universale tra specie batteriche e cos&igrave; &egrave; stato conservato durante l&#39;evoluzione.

Architettura universale di matrici chemoreceptor batterica.

&#x5316;&#x5B66;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x8D70;&#x5316;&#x6027;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x9AD8;&#x6027;&#x80FD;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7CFB;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5316;&#x5B66;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306F;&#x901A;&#x5E38;&#x3001;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x5185;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x9593;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x9AD8;&#x611F;&#x5EA6;&#x3001;&#x5E83;&#x3044;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30C3;&#x30AF;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B8;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x9069;&#x5FDC;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6975;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x5185;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x5185;&#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x914D;&#x7F6E;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x7AF6;&#x5408;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5168;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x96FB;&#x5B50;&#x30AF;&#x30E9;&#x30A4;&#x30AA;&#x30C8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x306E;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x9580;&#x3092;&#x4EE3;&#x8868;&#x3059;&#x308B;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x7A2E;&#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x304C;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E; &#x26;quot;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x26;quot;&#x7D44;&#x7E54;&#x3068;&#x306E;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3001;12 nm&#x306E;&#x516D;&#x89D2;&#x5F62;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x306B;&#x914D;&#x7F6E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x89B3;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x9577;&#x3055;&#x306F;&#x3001;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3001;&#x67D4;&#x8EDF;&#x306A;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#x3001;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x7A2E;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x666E;&#x904D;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x9032;&#x5316;&#x306E;&#x904E;&#x7A0B;&#x3067;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x666E;&#x904D;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;

Chemoreceptors&#xB294; &#xC138;&#xADE0; chemotaxis &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558; &#xACE0; &#xACE0;&#xC131;&#xB2A5; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;. Chemoreceptors&#xC740; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB192;&#xC740; &#xAC10;&#xB3C4;, &#xB113;&#xC740; &#xB3D9;&#xC801; &#xBC94;&#xC704;&#xC758; &#xC2E0;&#xD638; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xC801;&#xC751;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xAC04;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC0DD;&#xAC01; &#xD558;&#xB294; &#xC140; &#xADF9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xC774;&#xC804; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xAC8C;&#xB188; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xC5D0; chemoreceptors &#xBC30;&#xC5F4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C;, &#xCDA9;&#xB3CC; &#xD558;&#xB294; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xC804;&#xC790; &#xACF3;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xB0B4;&#xB294;-&#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC5EC;&#xAE30;&#xB294; chemoreceptors &#xB2E4;&#xB978; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4;&#xC640; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC8FC;&#xC694; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; phyla &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xB9CE;&#xC740; &#xB2E4;&#xB978; &#xC885;&#xC871;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBAA8;&#xB450; &#xC815;&#xB82C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xBCF4;&#xC874;, 12 nm &#xC721;&#xAC01;&#xD615; &#xBC30;&#xC5F4; &quot;&#xC0BC;&#xD569;&#xCCB4; &#xC774;&#xD569;&#xCCB4;&#xC758;&quot; &#xC81C;&#xC548; &#xB41C; &#xC870;&#xC9C1;&#xACFC; &#xC77C;&#xCE58;&#xC5D0; &#xC0B4;&#xD3B4;&#xBCF4;&#xACA0;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xAE38;&#xC774; &#xBA54; &#xD2F8;, &#xC720;&#xC5F0;&#xD55C; &#xBC88;&#xB4E4;, &#xC2E0;&#xD638;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9C1;&#xCEE4; &#xD558;&#xC704; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xBC0F; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xB9C1;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC138;&#xADE0; &#xC885; &#xAC00;&#xC6B4;&#xB370; &#xBCF4;&#xD3B8;&#xC801;&#xC778; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC9C4;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xBCF4;&#xC874; &#xB41C; &#xC218;&#xB294; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC138;&#xADE0;&#xC131; chemoreceptor &#xBC30;&#xC5F4;&#xC758; &#xBC94;&#xC6A9; &#xC544;&#xD0A4;&#xD14D;&#xCC98;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Quimiorreceptores son componentes clave del sistema de se&#xF1;ales de alto rendimiento de transducci&#xF3;n que controla la quimiotaxis bacteriana. Quimiorreceptores se localiza t&#xED;picamente en un grupo en el polo celular, donde las interacciones entre los receptores de la agrupaci&#xF3;n se cree que contribuyen a la alta sensibilidad, amplio rango din&#xE1;mico, y la adaptaci&#xF3;n precisa del sistema de se&#xF1;alizaci&#xF3;n. Anteriores estudios estructurales y gen&#xF3;mica han producido modelos en conflicto, sin embargo, para la disposici&#xF3;n de los quimiorreceptores de los racimos. Uso de c&#xE9;lulas enteras de electrones de la crio-tomograf&#xED;a, aqu&#xED; nos muestran que los quimiorreceptores de diferentes clases y en muchas especies diferentes que representan a varios filos de bacterias m&#xE1;s importantes est&#xE1;n todos dispuestos en una altamente conservada, de 12 nm de forma hexagonal en consonancia con la propuesta de &#x26;quot;tr&#xED;mero de d&#xED;meros de&#x26;quot; organizaci&#xF3;n . Las diferentes longitudes observadas de los receptores confirman los modelos actuales para la metilaci&#xF3;n, grupo flexible, de se&#xF1;alizaci&#xF3;n, y el enlazador sub-dominios en vivo. Nuestros resultados sugieren que el mecanismo b&#xE1;sico y la funci&#xF3;n de agrupaci&#xF3;n receptor es universal entre especies bacterianas y se conservan por lo tanto durante la evoluci&#xF3;n.

Arquitectura Universal de matrices quimiorreceptoras bacterianas

&#x7ED3;&#x6838;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC; (&#x5C71;&#x5730;) &#x548C;&#x7EA2;&#x7403;&#x83CC; jostii RHA1 &#x6709;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x5206;&#x89E3;&#x4EE3;&#x8C22;&#x9014;&#x5F84;&#x3002;&#x6B64;&#x901A;&#x8DEF;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x7ED3;&#x6838;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC;&#x7684;&#x81F4;&#x75C5;&#x6027;&#x3002;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x9884;&#x6D4B; hsaAB &#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x5206;&#x89E3;&#x4EE3;&#x8C22;&#x57FA;&#x56E0;&#x8FDB;&#x884C;&#x7F16;&#x7801;&#x7684;&#x52A0;&#x6C27;&#x9176;&#x548C;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x7684;&#x9EC4;&#x7D20;&#x4F9D;&#x8D56;&#x5355;&#x58F0;&#x9053;-&#x6C27;&#x5316;&#x9176;&#x7684; hydroxylates &#x8FEA;&#x5965; 3-&#x7F9F;&#x57FA;-9&#xFF0C;10-seconandrost-1,3,5 10-&#x5DE5;&#x4E1A;&#x533A;-9,17-&#x5185; (3-HSA) &#x5230;&#x90BB;&#x82EF;&#x4E8C;&#x915A;&#x3002;HsaA &#x7F3A;&#x5931;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; RHA1 &#x7684;&#x957F;&#x5F97;&#x4E0D;&#x4E0A;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x4F46;&#x8F6C;&#x5316;&#xFF0C;&#x540E;&#x8005;&#x5BF9; 3 HSA&#xFF0C;&#x51CF;&#x5C11;&#x76F8;&#x5173;&#x4EE3;&#x8C22;&#x7269;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6BCF;&#x6761;&#x4E24;&#x916E;&#x57FA;&#x7EC4;&#xFF1A; 3,9-&#x4E8C;&#x7F9F;&#x57FA;-9&#xFF0C;10-seconandrost-1,3,5 10-&#x5DE5;&#x4E1A;&#x533A;-17-1 (3,9-DHSA) &#x548C; 3.17-&#x4E8C;&#x7F9F;&#x57FA;-9&#xFF0C;10-seconandrost-1,3,5 10-&#x5DE5;&#x4E1A;&#x533A;-9-1 (3.17-DHSA&#xFF09;&#x3002;&#x51C0;&#x5316;&#x7684; 3-&#x7F9F;&#x57FA;-9&#xFF0C;10-seconandrost-1,3,5 10-&#x5DE5;&#x4E1A;&#x533A;-9,17-&#x8FEA;&#x5965;&#x5185; 4-&#x7F9F;&#x5316;&#x9176; &#xFF08;HsaAB&#xFF09; &#x4ECE;&#x5C71;&#x5730;&#x8F66;&#x6709;&#x8F83;&#x9AD8;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x7684;&#x6BD4; 3 HSA &#x4E3A; 3.17 DHSA (&#x660E;&#x663E; k(cat)/K(m) = 1000 + /-100 M(-1) s(-1) &#x4E0E; 700 + /-100 M(-1) s(-1))&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;3,9 DHSA &#x662F;&#x7A77;&#x6BD4; 3 hydroxybiphenyl &#x57FA;&#x677F; &#xFF08;&#x660E;&#x663E; k(cat)/K(m) = 80 + /-40 M(-1) s(-1))&#x3002;3 HSA &#x5B58;&#x5728;&#x7684; O(2) K(m)(app) &#x662F; 100 + /-10 microM&#x3002;HsaA 2.5 A &#x51B3;&#x8BAE;&#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x663E;&#x793A;&#x8FD9;&#x79CD;&#x9176;&#x6709;&#x540C;&#x4E00;&#x8936;&#x76B1;&#x3001; &#x9EC4;&#x7D20;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x548C;&#x50AC;&#x5316;&#x6B8B;&#x7559; p-&#x5BF9;&#x7F9F;&#x57FA;&#x82EF;&#x4E59;&#x9178;&#x7F9F;&#x5316;&#x9176;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;HsaA &#x6709;&#x591A;&#x5927;&#x7684;&#x82EF;&#x915A;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#xFF0C;&#x7B26;&#x5408;&#x8FD9;&#x79CD;&#x9176;&#x7684;&#x5E95;&#x7269;&#x4E13;&#x4E00;&#x6027;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;HsaA &#x7684;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4E2A;&#x6676;&#x4F53;&#x5F62;&#x5F0F;&#x8868;&#x660E; C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x74E3; (Val(367)-Val(394)) &#x53EF;&#x4EE5;&#x91C7;&#x7528;&#x4E24;&#x79CD;&#x6784;&#x8C61;&#x76F8;&#x5DEE; 25 &#x5EA6;&#x5DE6;&#x53F3; Arg(366) &#x521A;&#x4F53;&#x8F6C;&#x52A8;&#x3002;&#x6B64;&#x65CB;&#x8F6C;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x53EF;&#x80FD;&#x9EC4;&#x7D20;&#x4E1C;&#x95E8;&#x5230;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7F51;&#x7AD9;&#x3002;&#x5728;&#x5BF9;&#x63A5;&#x7814;&#x7A76;&#x4E0E; 3 &#x78C1;&#x5934;&#x548C;&#x9EC4;&#x7D20;&#xFF0C;&#x5C01;&#x95ED;&#x6784;&#x8C61;&#x9176;&#x7684;&#x5E95;&#x7269;&#x4E13;&#x4E00;&#x6027;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7406;&#x7531;&#x3002;&#x603B;&#x4F53;&#x800C;&#x8A00;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x5EFA;&#x7ACB; HsaAB &#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5E76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E00;&#x4E2A;&#x57FA;&#x7840;&#xFF0C;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x8C03;&#x67E5;&#x4E00;&#x7C7B;&#x91CD;&#x8981;&#x7684; monooxygenases&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x7EC6;&#x83CC;&#x5206;&#x89E3;&#x4EE3;&#x8C22;&#x7684;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x3002;

&#x4ECE;&#x7ED3;&#x6838;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x5206;&#x89E3;&#x4EE3;&#x8C22;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x6240;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x9EC4;&#x7D20;&#x4F9D;&#x8D56;&#x5355;&#x3002;

Mycobacterium tuberculosis (Mtb) and Rhodococcus jostii RHA1 have similar cholesterol catabolic pathways. This pathway contributes to the pathogenicity of Mtb. The hsaAB cholesterol catabolic genes have been predicted to encode the oxygenase and reductase, respectively, of a flavin-dependent mono-oxygenase that hydroxylates 3-hydroxy-9,10-seconandrost-1,3,5(10)-triene-9,17-dione (3-HSA) to a catechol. An hsaA deletion mutant of RHA1 did not grow on cholesterol but transformed the latter to 3-HSA and related metabolites in which each of the two keto groups was reduced: 3,9-dihydroxy-9,10-seconandrost-1,3,5(10)-triene-17-one (3,9-DHSA) and 3,17-dihydroxy-9,10-seconandrost-1,3,5(10)-triene-9-one (3,17-DHSA). Purified 3-hydroxy-9,10-seconandrost-1,3,5(10)-triene-9,17-dione 4-hydroxylase (HsaAB) from Mtb had higher specificity for 3-HSA than for 3,17-DHSA (apparent k(cat)/K(m) = 1000 +/- 100 M(-1) s(-1) versus 700 +/- 100 M(-1) s(-1)). However, 3,9-DHSA was a poorer substrate than 3-hydroxybiphenyl (apparent k(cat)/K(m) = 80 +/- 40 M(-1) s(-1)). In the presence of 3-HSA the K(m)(app) for O(2) was 100 +/- 10 microM. The crystal structure of HsaA to 2.5-A resolution revealed that the enzyme has the same fold, flavin-binding site, and catalytic residues as p-hydroxyphenyl acetate hydroxylase. However, HsaA has a much larger phenol-binding site, consistent with the enzyme's substrate specificity. In addition, a second crystal form of HsaA revealed that a C-terminal flap (Val(367)-Val(394)) could adopt two conformations differing by a rigid body rotation of 25 degrees around Arg(366). This rotation appears to gate the likely flavin entrance to the active site. In docking studies with 3-HSA and flavin, the closed conformation provided a rationale for the enzyme's substrate specificity. Overall, the structural and functional data establish the physiological role of HsaAB and provide a basis to further investigate an important class of monooxygenases as well as the bacterial catabolism of steroids.

A flavin-dependent monooxygenase from Mycobacterium tuberculosis involved in cholesterol catabolism.

Mycobacterium tuberculosis (Mtb) et Rhodococcus jostii RHA1 ont des voies cataboliques semblables de cholest&eacute;rol. Cette voie contribue &agrave; la pathog&eacute;nicit&eacute; du VTT. Les g&egrave;nes cataboliques du cholest&eacute;rol hsaAB ont &eacute;t&eacute; pr&eacute;dits pour coder l&#39;oxyg&eacute;nase et la r&eacute;ductase, respectivement, d&#39;une mono-oxyg&eacute;nase flavin-d&eacute;pendante qui hydroxylation 3-hydroxy-9, 10-seconandrost-1,3,5 10-tri&egrave;ne-9,17-dione (HSA-3) &agrave; un cat&eacute;chol. Un mutant de d&eacute;l&eacute;tion de hsaA de RHA1 ne pousse pas sur le cholest&eacute;rol mais transform&eacute; ces derniers &agrave; 3-HSA et m&eacute;tabolites apparent&eacute;s dans lequel chacun des deux groupes c&eacute;toniques a &eacute;t&eacute; r&eacute;duite : 3,9-dihydroxy-9, 10-seconandrost-1,3,5 10-tri&egrave;ne-17-one (3,9-DHSA) et 3, 17-dihydroxy-9, 10-seconandrost-1,3,5 10-tri&egrave;ne-9-one (3,17-DHSA). Purifi&eacute;e 3-hydroxy-9, 10-seconandrost-1,3,5 10-tri&egrave;ne-9,17 dione-4-hydroxylase (HsaAB) de VTT avait une sp&eacute;cificit&eacute; sup&eacute;rieure pour 3-HSA que pour 3, 17-DHSA (k(cat)/K(m) apparent = 1000 +/-100 M(-1) s(-1) contre 700 +/-100 M(-1) s(-1)). Cependant, 3,9-DHSA &eacute;tait un substrat plus pauvres que la 3-hydroxybiphenyl (k(cat)/K(m) apparent = 80 +/-40 M(-1) s(-1)). En pr&eacute;sence de 3-HSA le K(m)(app) d&#39;o (2) &eacute;tait de 100 +/-10 microM. La structure cristalline de HsaA r&eacute;solution 2,5-A r&eacute;v&eacute;l&eacute; que l&#39;enzyme poss&egrave;de le m&ecirc;me pli, flavin-accepteur et r&eacute;sidus catalytiques comme p-hydroxyph&eacute;nyl ac&eacute;tate hydroxylase. Cependant, HsaA a un beaucoup plus grand ph&eacute;nol-site de liaison, conforme &agrave; la sp&eacute;cificit&eacute; de substrat de l&#39;enzyme. En outre, une deuxi&egrave;me forme de cristal de HsaA a r&eacute;v&eacute;l&eacute; qu&#39;un lambeau de C-terminal (Val(367)-Val(394)) pourrait adopter deux conformations diff&egrave;rent par une rotation de corps rigide de 25 degr&eacute;s autour de Arg(366). Cette rotation s&#39;affiche &agrave; la porte de l&#39;entr&eacute;e probable de flavin au site actif. Dans la station d&#39;accueil d&#39;&eacute;tudes avec 3-HSA et flavin, la conformation ferm&eacute;e apportaient une justification pour la sp&eacute;cificit&eacute; de substrat de l&#39;enzyme. Dans l&#39;ensemble, les donn&eacute;es structurales et fonctionnelles &eacute;tablissent le r&ocirc;le physiologique de HsaAB et fournissent une base pour approfondir une classe importante de monooxyg&eacute;nases ainsi que le catabolisme bact&eacute;rien des st&eacute;ro&iuml;des.

Une monooxyg&eacute;nase flavin d&eacute;pendant de Mycobacterium tuberculosis impliqu&eacute;e dans le catabolisme du cholest&eacute;rol.

Mycobacterium Tuberculosis (Mtb) und Rhodococcus Jostii RHA1 haben &auml;hnliche Cholesterin katabolischen Wege. Diese Option tr&auml;gt zur Pathogenit&auml;t von Mtb. Die HsaAB Cholesterin katabolischen Gene haben die Oxygenase und Reduktase, bzw. von einem Flavin-abh&auml;ngige Mono-Oxygenasen codieren, der 3-hydroxy-9, 10-Seconandrost-1,3,5 10-Triene-9,17-Dione (3-HSA) zu einem Brenzcatechin hydroxylates vorausgesagt. Ein HsaA L&ouml;schung Mutant des RHA1 nicht auf Cholesterin wachsen aber Letztere 3-HSA umgewandelt und verwandte Metaboliten in den jedes der beiden Keto-Gruppen reduziert: 3,9-Dihydroxy-9, 10-Seconandrost-1,3,5 10-Triene-17-eins (3,9-DHSA) und 3,17-Dihydroxy-9, 10-Seconandrost-1,3,5 10-Triene-9-One (3,17-DHSA). Gereinigte 3-hydroxy-9, 10-Seconandrost-1,3,5 10-Triene-9,17-Dione 4-Hydroxylase (HsaAB) von Mtb hatten h&ouml;here Spezifit&auml;t f&uuml;r 3-HSA als f&uuml;r 3,17-DHSA (scheinbare k(cat)/K(m) = 1000 +/-100 M(-1)-s(-1) im Vergleich zu 700 +/-100 M(-1) s(-1)). 3,9-DHSA war jedoch eine schlechtere Substrat als 3-Hydroxybiphenyl (scheinbare k(cat)/K(m) = 80 +/-40 M(-1) s(-1)). In Anwesenheit von 3-HSA war der K(m)(app) f&uuml;r O(2) 100 +/-10 MicroM. Die Kristallstruktur von HsaA 2.5-A Aufl&ouml;sung ergab, dass das Enzym die gleichen Falten, Flavin-Bindungsstelle und katalytische R&uuml;ckst&auml;nde als p-Hydroxyphenyl-Acetat-Hydroxylase hat. HsaA hat jedoch eine viel gr&ouml;&szlig;ere Phenol-Bindungsstelle, Einklang mit der Enzym-Substrat-Spezifit&auml;t. Au&szlig;erdem eine zweite Kristall-Form der HsaA ergab, dass eine C-terminale Klappe (Val(367)-Val(394)) k&ouml;nnte zwei Konformationen unterscheiden sich durch eine Rotation starrer K&ouml;rper 25 Grad um Arg(366) erlassen. Diese Rotation ist anscheinend der aktiven Site wahrscheinlich Flavin Eingang Tor. In Studien mit 3-HSA und Flavin Andocken, lieferte die geschlossene Konformation eine Begr&uuml;ndung f&uuml;r das Enzym Substratspezifit&auml;t. Insgesamt, die strukturellen und funktionellen Daten richten die physiologische Rolle des HsaAB und bieten eine Grundlage, um weiter eine wichtige Klasse von Monooxygenasen sowie die bakterielle Katabolismus von Steroiden zu untersuchen.

Eine Flavin-abh&auml;ngige Monooxygenase aus Mycobacterium Tuberculosis Cholesterin Katabolismus beteiligt.

Mycobacterium tuberculosis (Mtb) e Rhodococcus jostii RHA1 hanno simili percorsi catabolico di colesterolo. Questa via metabolica contribuisce alla patogenesi della Mtb. I geni catabolici di colesterolo Raffaele_saracino26 essere stata prevista per codificare le ossigenasi e reduttasi, rispettivamente, di un mono-ossigenasi flavina-dipendenti che idrossila 3-idrossi-9,10-seconandrost-1,3,5 (10) - triene - 9,17-dione (3-HSA) a un catecolo. Un mutante di delezione di hsaA di RHA1 non ha fatto crescere sul colesterolo ma trasformato quest&#39;ultimo a 3-HSA e relativi metaboliti in cui ciascuno dei due gruppi di keto &egrave; stato ridotto: 3,9-diidrossi-9,10-seconandrost-1,3,5 (10) - triene - 17-uno (3,9-DHSA) e 3,17-diidrossi-9,10-seconandrost-1,3,5 (10) - triene - 9-uno (3,17-DHSA). Purificato 3-idrossi-9,10-seconandrost-1,3,5 (10) - triene - 9,17-dione 4-idrossilasi (Raffaele_saracino26) da Mtb ha avuto maggiore specificit&agrave; per 3-HSA rispetto per 3,17-DHSA (apparente k(cat)/K(m) = 1000 + /-100 M(-1) s(-1) versus 700 + /-100 M(-1) s(-1)). Tuttavia, 3,9-DHSA era un substrato pi&ugrave; povero rispetto a 3-idrossibifenile (apparente k(cat)/K(m) = 80 + 40 M(-1) s(-1)). In presenza di 3-HSA K(m)(app) per apparato era 100 + /-10 microM. La struttura di cristallo di HsaA 2.5-A risoluzione ha rivelato che l&#39;enzima ha la stessa piega, flavina-associazione sito e residui catalitici come p-idrossifenil acetato idrossilasi. Tuttavia, HsaA ha un molto pi&ugrave; grande fenolo-sito di legame, coerenza con la specificit&agrave; di substrato dell&#39;enzima. Inoltre, una seconda forma di cristallo di HsaA ha rivelato che un lembo del C-terminale (Val(367)-Val(394)) potrebbe adottare due conformazioni differenti da una rotazione del corpo rigido di 25 gradi intorno a Arg(366). Questa rotazione appare al cancello di ingresso flavina probabile sito attivo. In attracco studi con 3-HSA e flavina, la conformazione chiusa fornito una spiegazione logica per specificit&agrave; di substrato dell&#39;enzima. Nel complesso, i dati strutturali e funzionali stabilire il ruolo fisiologico di Raffaele_saracino26 e forniscano una base per indagare ulteriormente un&#39;importante classe di ossigenasi, come pure il catabolismo batterico di steroidi.

Un monoossigenasi flavina-dipendenti da tubercolosi del micobatterio coinvolto nel catabolismo del colesterolo.

&#x7D50;&#x6838;&#x83CC; (&#x30DE;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C6;&#x30F3; &#x30D0;&#x30A4;&#x30AF;) &#x3068; Rhodococcus jostii RHA1 &#x985E;&#x4F3C;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x7570;&#x5316;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306F;&#x3001;Mtb &#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;HsaAB &#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x7570;&#x5316;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30D8;&#x30E0;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B2;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306A;&#x30D5;&#x30E9;&#x30D3;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x578B;&#x30E2;&#x30CE;&#x30E9;&#x30EB; - &#x305D;&#x306E; 3-&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;-9, 10-seconandrost-1,3,5 (10) - &#x30C8;&#x30EA;&#x30A8;&#x30F3; - 9,17 &#x30D9;&#x30F3;&#x30B7;&#x30B8;&#x30F3; &#x30D8;&#x30E0;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B2;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x306B;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;-&#x30C7;&#x30A3;&#x30AA;&#x30CD; (3-HSA&#xFF09; &#x306F;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;HsaA &#x6B20;&#x5931;&#x5909;&#x7570; RHA1 &#x306E;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x6210;&#x9577;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x304C;&#x3001;&#x5F8C;&#x8005;&#x306E; 3 HSA &#x306B;&#x5909;&#x63DB;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x95A2;&#x9023;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x7523;&#x7269;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30B1;&#x30C8; &#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x304C;&#x524A;&#x6E1B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;: 3, 9-&#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;-9, 10-seconandrost-1,3,5 (10) - &#x30C8;&#x30EA;&#x30A8;&#x30F3; - 17-1 &#x3064;&#x306E; (3, 9-DHSA&#xFF09; &#x3068; 3, 17-&#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;-9, 10-seconandrost-1,3,5 (10) - &#x30C8;&#x30EA;&#x30A8;&#x30F3; - 9-1 &#x3064; &#xFF08;3, 17-DHSA&#xFF09;&#x3002;3-&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;-9, 10-seconandrost-1,3,5 (10) - &#x30C8;&#x30EA;&#x30A8;&#x30F3; - 9,17 &#x7CBE;&#x88FD;-&#x30C7;&#x30A3;&#x30AA;&#x30CD; 4-&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; (HsaAB) Mtb &#x304B;&#x3089;&#x3044;&#x305F; 3-HSA &#x3088;&#x308A; 3, 17-DHSA &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x7279;&#x7570;&#x6027; (&#x898B;&#x304B;&#x3051; k(cat)/K(m) = 1000 + 100 M(-1) s(-1))/700 &#x5BFE; 100 M(-1) s(-1) +/&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;3, 9-DHSA 3-&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x30D3;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EB;&#x3088;&#x308A;&#x8CA7;&#x3057;&#x3044;&#x57FA;&#x677F;&#x3060;&#x3063;&#x305F; &#xFF08;&#x898B;&#x304B;&#x3051;&#x306E; k(cat)/K(m) = 40 M(-1) s(-1)) &plusmn; 80&#x3002;3-HSA &#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067; O(2) &#x306E; K(m)(app) &#x306F; 100 &plusmn; 10 microM &#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;HsaA &#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020; 2.5 A &#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x3092;&#x9175;&#x7D20; p-&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EB;&#x9162;&#x9178;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x540C;&#x3058;&#x6298;&#x308A;, &#x30D5;&#x30E9;&#x30D3;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3068;&#x89E6;&#x5A92;&#x6D3B;&#x6027;&#x6B8B;&#x57FA;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;HsaA &#x304F;&#x3089;&#x3044;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3068;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;HsaA &#x306E;&#x7B2C; 2 &#x7D50;&#x6676;&#x5F62;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F; (Val(367)-Val(394)) &#x3067;&#x3057;&#x305F; 25 &#x5EA6; Arg(366) &#x5468;&#x308A;&#x306E;&#x525B;&#x4F53;&#x56DE;&#x8EE2;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7570;&#x306A;&#x308B; 2 &#x3064;&#x306E;&#x7ACB;&#x4F53;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x63A1;&#x7528; C &#x30BF;&#x30FC;&#x30DF;&#x30CA;&#x30EB; &#x30D5;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x56DE;&#x8EE2;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3078;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x30D5;&#x30E9;&#x30D3;&#x30F3;&#x5165;&#x308A;&#x53E3;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7814;&#x7A76; 3 HSA &#x3068;&#x30D5;&#x30E9;&#x30D3;&#x30F3;&#x3092;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3001;&#x9589;&#x3058;&#x305F;&#x7ACB;&#x4F53;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x6839;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x307F;&#x3066;&#x3001;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F; HsaAB &#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x3001;&#x30E2;&#x30CE;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B2;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x7570;&#x5316;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x3092;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x57FA;&#x790E;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30D5;&#x30E9;&#x30D3;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x578B;&#x306E;&#x30E2;&#x30CE;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B2;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x7D50;&#x6838;&#x83CC;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x7570;&#x5316;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3089;&#x3002;

&#xACB0;&#xD575;&#xADE0; (Mtb)&#xC640; Rhodococcus jostii rha1&#xB294; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; catabolic &#xACBD;&#xB85C;. &#xC774; &#xD1B5;&#xB85C; Mtb pathogenicity&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD55C;&#xB2E4;. HsaAB &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; catabolic &#xC720;&#xC804;&#xC790; 3-hydroxy-9, 10-seconandrost-1.3.5 (10)-triene-9,17-&#xB514;&#xC624;&#xB124; (3-HSA)&#xB294; catechol hydroxylates &#xD558;&#xB294; &#xD50C; &#xB77C;&#xBE48; &#xC885;&#xC18D; &#xBAA8;&#xB178;-oxygenase&#xC758; oxygenase &#xBC0F; reductase, &#xAC01;&#xAC01;, &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC608;&#xC0C1;. Rha1&#xC758; hsaA &#xC0AD;&#xC81C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864;&#xC5D0; &#xC131;&#xC7A5; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; 3 HSA&#xC5D0; &#xD6C4;&#xC790;&#xC640;&#xB294; &#xAC01; &#xB450; keto &#xADF8;&#xB8F9;&#xC758; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; metabolites &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;: 3,9-dihydroxy-9, 10-seconandrost-1.3.5 (10)-triene-17-1 (3,9-DHSA)&#xC640; 3,17-dihydroxy-9, 10-seconandrost-1.3.5 (10)-triene-9-1 (3,17-DHSA). &#xC815;&#xC81C; 3-hydroxy-9, 10-seconandrost-1.3.5 (10)-triene-9,17-&#xB514;&#xC624;&#xB124; 4-hydroxylase (HsaAB) Mtb&#xC5D0;&#xC11C; &#xD588;&#xB2E4; 3,17 DHSA&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xB2E4; 3 HSA&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB354; &#xB192;&#xC740; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; (&#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; k(cat)/K(m) 100 M(-1) s(-1)) + 700 &#xB300; 100 M(-1) s(-1) + 1000 =. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; 3,9 DHSA&#xB294; 3-hydroxybiphenyl &#xBCF4;&#xB2E4; &#xAC00;&#xB09C;&#xD55C; &#xAE30;&#xD310; (&#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; k(cat)/K(m) 40 M(-1) s(-1)) + 80 =. 3 HSA &#xC874;&#xC7AC; O(2)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; k(m)(app)&#xB294; 10 microM + 100. 2.5 A &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4;&#xB97C; Hsaa&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870; &#xBC1D;&#xD600; &#xD6A8;&#xC18C; &#xAC19;&#xC740; &#xBC30;, &#xD50C; &#xB77C;&#xBE48; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xBC0F; &#xCD09;&#xB9E4; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; p hydroxyphenyl &#xC544;&#xC138;&#xD14C;&#xC774;&#xD2B8; hydroxylase&#xB85C; &#xC788;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, Hsaa&#xB294; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB354; &#xD070; &#xD398; &#xB180; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;, &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xAE30;&#xC9C8; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, Hsaa&#xC758; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xD06C;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xD0C8; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xACF5;&#xAC1C; &#xB41C; C-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xD50C;&#xB7A9; (Val(367)-Val(394)) Arg(366) 25&#xB3C4;&#xC758; &#xACBD;&#xC9C1; &#xB41C; &#xBAB8; &#xD68C;&#xC804; &#xD558; &#xC5EC; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; conformations &#xCC44;&#xD0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD68C;&#xC804; &#xD65C;&#xC131; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xD50C; &#xB77C;&#xBE48; &#xC785;&#xAD6C; &#xAC8C;&#xC774;&#xD2B8; &#xB4EF;&#xD558;&#xB2E4;. &#xC5F0;&#xAD6C; 3 HSA&#xC640; &#xD50C; &#xB77C;&#xBE48; &#xB3C4;&#xD0B9; &#xD3D0;&#xC1C4; &#xB098; &#xB780; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xAE30;&#xC9C8; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xADFC;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;. &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xB370;&#xC774;&#xD130; Hsaab&#xC758; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC124;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; &#xCD94;&#xAC00; &#xC870;&#xC0AC; &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC;&#xC758; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; catabolism monooxygenases&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4;&#xB97C; &#xAE30;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; catabolism &#xAD00;&#xC5EC; &#xACB0;&#xD575;&#xADE0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD50C; &#xB77C;&#xBE48; &#xC885;&#xC18D; monooxygenase.

Mycobacterium tuberculosis (Mtb) y Rhodococcus jostii RHA1 tienen similares v&iacute;as catab&oacute;lica de colesterol. Esta v&iacute;a contribuye a la patogenicidad de Mtb. Los genes catab&oacute;licos del colesterol hsaAB han sido predichos para codificar la oxigenasa y reductasa, respectivamente, de un mono-oxigenasa flavin-dependiente que hydroxylates la 3-hidroxi-9,10-seconandrost-1.3.5 10-triene-9,17-diona (3-HSA) a una catecol. Un mutante de la canceladura de hsaA de RHA1 no creci&oacute; en colesterol pero transformado a 3-HSA y metabolitos relacionados en los que cada uno de los dos grupos de keto fue reducido: 3,9-dihydroxy-9,10-seconandrost-1.3.5 10-triene-17-(3.9-DHSA) y 3, 17-dihydroxy-9,10-seconandrost-1.3.5 10-triene-9-(3, 17-DHSA). Purificada 3-hidroxi-9,10-seconandrost-1.3.5 10-triene-9,17-diona 4-hidroxilasa (HsaAB) de Mtb ten&iacute;a mayor especificidad para 3-HSA que para 3, 17-DHSA (k(cat)/K(m) aparente = 1000 + /-100 M(-1) s(-1) versus 700 +/-100 M(-1) s(-1)). Sin embargo, 3,9-DHSA era un sustrato m&aacute;s pobre que 3-Hidroxibifenil (k(cat)/K(m) aparente = 80 +/-40 M(-1) s(-1)). En presencia de 3-HSA el K(m)(app) para O(2) fue 100 +/-10 microM. La estructura cristalina de HsaA 2.5-A resoluci&oacute;n revel&oacute; que la enzima tiene el mismo pliegue, sitio de flavin-Uni&oacute;n y residuos catal&iacute;ticos como p-hydroxyphenyl acetato hidroxilasa. Sin embargo, HsaA tiene un mucho mayor fenol sitio obligatorio, consistente con la especificidad de sustrato de la enzima. Adem&aacute;s, una segunda forma de cristal de HsaA revel&oacute; que una aleta c-terminal (Val(367)-Val(394)) podr&iacute;a adoptar dos conformaciones diferentes por la rotaci&oacute;n de una cuerpo r&iacute;gido de 25 grados alrededor de Arg(366). Esta rotaci&oacute;n parece la entrada probable flavin el sitio activo de la puerta. En estudios con 3-HSA y flavin de acoplamiento, la conformaci&oacute;n cerrada ofreci&oacute; un fundamento para la especificidad de sustrato de la enzima. En general, los datos estructurales y funcionales establecen el papel fisiol&oacute;gico de HsaAB y proporcionan una base para seguir investigando una clase importante de monooxigenasas, as&iacute; como el catabolismo bacteriano de esteroides.

Un dependiente de flavina Monooxigenasa de Mycobacterium tuberculosis en catabolismo del colesterol.

&#x7535;&#x5B50; cryotomography (ECT) &#x662F;&#x4E00;&#x9879;&#x65B0;&#x5174;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x5B83;&#x5141;&#x8BB8;&#x5927;&#x5206;&#x5B50;&#x590D;&#x5408;&#x4F53;&#x548C;&#x5C0F;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&quot;&#x5206;&#x5B50;&quot;&#x7684;&#x8FD1;&#x672C;&#x673A;&#x72B6;&#x6001;&#x4E2D;&#x7684; 3d &#x62CD;&#x6444;&#x7B49;&#x8584;&#x6837;&#x54C1; (&#x7EA6; 4 nm&#xFF09; &#x7684;&#x51B3;&#x8BAE;&#x3002;&#x4E3A;&#x6B64;&#xFF0C;ECT &#x5F00;&#x59CB;&#x63D0;&#x4F9B;&#x671F;&#x5F85;&#x5DF2;&#x4E45;&#x7684;&#x7ACB;&#x573A;&#x548C;&#x7ED3;&#x6784;&#x9AA8;&#x67B6; fi &#x611F;&#x53F9;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x58C1;&#x5143;&#x7D20;&#x3001; &#x52A8;&#x529B;&#x673A;&#x5668;&#x3001; &#x5316;&#x5B66;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#x9635;&#x5217;&#x3001; &#x5185;&#x90E8;&#x9694;&#x95F4;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x8D85;&#x5FAE;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3002;&#x672C;&#x6587;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E86;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6982;&#x8FF0;&#x4E86;&#x5176;&#x5BF9;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x8D21;&#x732E;&#x3002;&#x53EF;&#x6BD4;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x5BA1;&#x67E5;&#xFF0C;&#x8BF7;&#x53C2;&#x9605; &#xFF08;&#x7814; 2005 &#x5E74; &#xFF1B;&#x8A79;&#x68EE;&#x548C; Briegel 2007 &#x5E74; &#xFF1B;&#x58A8;&#x83F2;&#x548C;&#x8A79;&#x68EE; 2007 &#x5E74; &#xFF1B;&#x674E;&#x548C;&#x8A79;&#x68EE; 2009 &#x5E74;&#xFF09;&#x3002;&#x5386;&#x53F2;&#x4E0A;&#x7684;&#x5BA1;&#x67E5;&#xFF0C;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x4FE1;&#x606F;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x66F4;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x5E94;&#x7528;&#x7684;&#x7535;&#x5B50;&#x5C42;&#x6790;&#x6210;&#x50CF;&#x4E00;&#x822C;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x4F8B;&#x5982;&#x89C1; (&#x7814;&#x548C;&#x7C73;&#x5C14;&#x6069; 2004 &#x5E74; &#xFF1B;Luci&#x107; &#x7B49;&#x4EBA;&#xFF0C;2005 &#x5E74; &#xFF1B;&#x83B1;&#x65AF;&#x7ECD;&#x5174;&#x6587;&#x7406;&#x5B66;&#x9662; 2008 &#x5E74; &#xFF1B;&#x57FA;&#x7406;&#x4F1A;&#x9762;&#x65F6;&#x548C; 2009 &#x5E74; Dunin Borkowski)&#x3002;

&#x7535;&#x5B50; cryotomography&#x3002;

Electron cryotomography (ECT) is an emerging technology that allows thin samples such as macromolecular complexes and small bacterial cells to be imaged in 3-D in a nearly native state to "molecular" ( approximately 4 nm) resolution. As such, ECT is beginning to deliver long-awaited insight into the positions and structures of cytoskeletal fi laments, cell wall elements, motility machines, chemoreceptor arrays, internal compartments, and other ultrastructures. This article describes the technique and summarizes its contributions to bacterial cell biology. For comparable recent reviews, see (Subramaniam 2005; Jensen and Briegel 2007; Murphy and Jensen 2007; Li and Jensen 2009). For reviews on the history, technical details, and broader application of electron tomography in general, see for example (Subramaniam and Milne 2004; LuciÄ‡ et al. 2005; Leis et al. 2008; Midgley and Dunin-Borkowski 2009).

Electron cryotomography.

Electron cryotomography (ECT) est une technologie &#xE9;mergente qui permet &#xE9;chantillons minces tels que des complexes macromol&#xE9;culaires et de petites cellules bact&#xE9;riennes &#xE0; imager en 3-D dans un &#xE9;tat presque natif de &#xAB;mol&#xE9;culaire&#xBB; (environ 4 nm) de la r&#xE9;solution. En tant que tel, ECT commence &#xE0; porter ses attendue depuis longtemps un aper&#xE7;u des positions et des structures de lamentations fi du cytosquelette, les &#xE9;l&#xE9;ments de la paroi cellulaire, la motilit&#xE9; des machines, des tableaux, des ch&#xE9;mor&#xE9;cepteurs compartiments internes, et d&#x26;#39;autres ultrastructures. Cet article d&#xE9;crit la technique et r&#xE9;sume ses contributions &#xE0; la biologie de la cellule bact&#xE9;rienne. Pour comparables &#xE9;tudes r&#xE9;centes, voir (Subramaniam 2005; Jensen et Briegel 2007; Murphy et Jensen 2007; Li et Jensen 2009). Pour des critiques sur l&#x26;#39;histoire, les d&#xE9;tails techniques, et une application plus large de la tomographie &#xE9;lectronique en g&#xE9;n&#xE9;ral, voir par exemple (Subramaniam et Milne, 2004; Lucic et al 2005;. Leis et al 2008;. Midgley et Dunin-Borkowski 2009).

Electron Cryotomography

Elektron-Cryotomography (ECT) ist eine aufstrebende Technologie, d&uuml;nne Proben wie Makromolekulare komplexe und kleinen bakteriellen Zellen, in 3-d in einem nahezu einheitlichen Status f&uuml;r &quot;Molekulare&quot; abgebildet werden (ca. 4 nm) Aufl&ouml;sung. ECT beginnt so lang ersehnte Einblick in die Positionen und Strukturen der Zytoskelett Fi beklagt, Zellwand Elemente, Motilit&auml;t Maschinen Chemorezeptor-Arrays, Innenf&auml;cher und andere Ultrastructures zu liefern. Dieser Artikel beschreibt die Technik und seine Beitr&auml;ge zur Biologie der Bakterienzelle zusammenfasst. Vergleichbare Aktuelle Bewertungen finden Sie unter (Subramaniam 2005; Jensen und Briegel 2007; Murphy und Jensen 2007; Li und Jensen-2009). Bewertungen &uuml;ber die Geschichte technische Details und finden Sie breitere Anwendung der Elektronenstrahl-Tomographie in der Regel zum Beispiel (Subramaniam und Milne 2004; Luci&#x107; Et Al. 2005; Leis Et Al. 2008; Midgley und Dunin-Borkowski 2009).

Elektron-Cryotomography.

Elettrone cryotomography (ECT) &egrave; una tecnologia emergente che permette di campioni sottili come complessi macromolecolari e piccole cellule batteriche per essere imaged in 3-d in uno stato quasi nativo &quot;molecolare&quot; (circa 4 nm) risoluzione. Come tali, ECT sta cominciando a fornire tanto atteso spaccato le posizioni e le strutture citoscheletriche fi lamenti, elementi di parete cellulare, macchine di motilit&agrave;, chemoreceptor matrici, scomparti interni e altri ultrastrutture. Questo articolo descrive la tecnica e riassume i suoi contributi alla biologia delle cellule batteriche. Per recensioni recenti comparabili, vedere (Subramaniam 2005; Jensen e Briegel 2007; Murphy e Jensen 2007; Li e Jensen 2009). Per giudizi sulla storia, dettagli tecnici e pi&ugrave; ampia applicazione della tomografia elettronica in generale, vedere per esempio (Subramaniam e Milne 2004; Lucio et al., 2005; Leis et al., 2008; Midgley e Dunin-Borkowski 2009).

Elettrone cryotomography.

&#x96FB;&#x5B50;cryotomography&#xFF08;ECT&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3068;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x7D30;&#x83CC;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x8584;&#x3044;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306F; &#x26;quot;&#x5206;&#x5B50;&#x26;quot;&#xFF08;&#x7D04;4 nm&#xFF09;&#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x306B;&#x307B;&#x307C;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x3067;3-D&#x3067;&#x64AE;&#x50CF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x65B0;&#x6280;&#x8853;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;ECT&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;Fi&#x306E;&#x5606;&#x304D;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x58C1;&#x8981;&#x7D20;&#x3001;&#x904B;&#x52D5;&#x6A5F;&#x68B0;&#x3001;&#x5316;&#x5B66;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x306F;&#x3001;&#x5185;&#x90E8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4ED6;&#x306E;&#x5FAE;&#x7D30;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3068;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x5F85;&#x671B;&#x306E;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x59CB;&#x3081;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x8CC7;&#x6599;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30C6;&#x30AF;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x3078;&#x306E;&#x8CA2;&#x732E;&#x3092;&#x307E;&#x3068;&#x3081;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5339;&#x6575;&#x3059;&#x308B;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x30EC;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#xFF08;;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30BB;&#x30F3;&#x3068;Briegel 2007;&#x30DE;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30BB;&#x30F3;2007; Li&#x3068;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30BB;&#x30F3;2009&#x30B5;&#x30D6;&#x30E9;&#x30DE;&#x30CB;&#x30A2;&#x30E0;2005&#xFF09;&#x3092;&#x53C2;&#x7167;&#x3057;&#x3066;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002;&#x6B74;&#x53F2;&#x3001;&#x6280;&#x8853;&#x7684;&#x306A;&#x8A73;&#x7D30;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x96FB;&#x5B50;&#x7DDA;&#x30C8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x306E;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x4E0A;&#x3067;&#x30EC;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#xFF08;;Luci&#x107;&#x3089;&#x3001;2005;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B9;&#x3089;2008;&#x3002;&#x30DF;&#x30B8;&#x30EA;&#x30FC;&#x3068;Dunin-Borkowski&#x767A;&#x4FE1;&#x8005;2009 Subramaniam&#x3055;&#x3093;&#x3068;&#x30DF;&#x30EB;&#x30F3;2004&#xFF09;&#x306E;&#x4F8B;&#x3092;&#x53C2;&#x7167;&#x3002;

&#x96FB;&#x5B50;Cryotomography

&#xC804;&#xC790; cryotomography (&#xC694;&#xBC95;)&#xC740; &#xC2E0;&#xD765; &#xAE30;&#xC220;&#xB85C; &#xC587;&#xC740; &#xC0D8;&#xD50C; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C; &#xB4F1; &#xC791;&#xC740; &#xC138;&#xADE0; &#xC138;&#xD3EC; &quot;&#xBD84;&#xC790;&quot;&#xB97C; &#xAC70;&#xC758; &#xC6D0;&#xC2DC; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0;&#xC11C; 3 &#xCC28;&#xC6D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; (&#xC57D; 4 nm) &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4;. &#xC774;&#xC640; &#xAC19;&#xC774; &#xC694;&#xBC95; &#xBAA8;&#xCC98;&#xB7FC; &#xC704;&#xCE58;&#xC640; cytoskeletal fi laments, &#xC138;&#xD3EC; &#xBCBD; &#xC694;&#xC18C;, &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131; &#xAE30;&#xACC4;, chemoreceptor &#xBC30;&#xC5F4;, &#xB0B4;&#xBD80; &#xAD6C;&#xD68D; &#xBC0F; &#xB2E4;&#xB978; ultrastructures&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xAE30; &#xC2DC;&#xC791; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBB38;&#xC11C; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC5D0;&#xC758; &#xAE30;&#xC5EC;&#xB97C; &#xC694;&#xC57D;. &#xB300; &#xB4F1; &#xCD5C;&#xADFC; &#xB9AC;&#xBDF0; &#xCC38;&#xC870; (Subramaniam 2005; &#xC820; &#xC2A8;&#xACFC; Briegel 2007; &#xBA38;&#xD53C;&#xC640; &#xC820; &#xC2A8; 2007; &#xB9AC;&#xC640; &#xC820; &#xC2A8; 2009)&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5ED;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9AC;&#xBDF0;, &#xAE30;&#xC220; &#xC815;&#xBCF4;&#xC640; &#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601;&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC608;&#xB97C; &#xB4E4;&#xC5B4; (Subramaniam &#xBC0F; &#xCC38;&#xC870; &#xBC00; &#xB978; 2004; Luci&#x107; &#xC678;. 2005. Leis &#xC678;. 2008. Midgley&#xC640; Dunin Borkowski 2009)&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC804;&#xC790; cryotomography&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Electron cryotomography (TEC) es una tecnolog&#xED;a emergente que permite que las muestras delgadas como complejos macromoleculares y peque&#xF1;as c&#xE9;lulas bacterianas para obtener im&#xE1;genes en 3-D en un estado casi nativo &#x26;quot;molecular&#x26;quot; (aproximadamente 4 nm) de resoluci&#xF3;n. Como tal, la TEC se empieza a dar la tan esperada informaci&#xF3;n sobre las posiciones y las estructuras del citoesqueleto fi lamentos, elementos de la pared celular, la motilidad m&#xE1;quinas, matrices quimiorreceptoras, compartimientos internos y ultraestructuras otros. Este art&#xED;culo describe la t&#xE9;cnica y un resumen de sus contribuciones a la biolog&#xED;a de la c&#xE9;lula bacteriana. Para comparables revisiones recientes, v&#xE9;ase (Subramaniam 2005; Jensen y Briegel 2007, Murphy y Jensen 2007; Li y Jensen 2009). Para una revisi&#xF3;n sobre la historia, los detalles t&#xE9;cnicos, y una aplicaci&#xF3;n m&#xE1;s amplia de la tomograf&#xED;a de electrones en general, v&#xE9;ase, por ejemplo (Subramaniam y Milne 2004; Lucic et al 2005;. Leis et al 2008;. Midgley y Dunin Borkowski-2009).

&#x5982;&#x4F55;&#x6746;&#x72B6;&#x7EC6;&#x83CC;&#x5F62;&#x6210;&#x548C;&#x4FDD;&#x6301;&#x5176;&#x5F62;&#x72B6;&#x662F;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x4E2D;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x95EE;&#x9898;&#x3002;&#x4ECE;&#x8367;&#x5149;&#x5149;&#x955C;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x4F7F;&#x8BB8;&#x591A;&#x4EBA;&#x76F8;&#x4FE1;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x540C;&#x6E90; MreB &#x548C;&#x5927;&#x91CF;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5F62;&#x6210;&#x957F;&#x87BA;&#x65CB;&#x4E1D;&#x6CBF;&#x5185;&#x88AB;&#x819C;&#x4E0A;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x4E0B;&#x9762;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x4F7F;&#x7528;&#x7535;&#x5B50; cryotomography &#x516D;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x6746;&#x5F62;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x79CD;&#x7C7B;&#xFF0C;&#x5728;&#x751F;&#x7269;&#x5927;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x957F; &#xFF08;&gt; 80 nm&#xFF09; &#x87BA;&#x65CB;&#x4E1D;&#x5B58;&#x5728;&#x9644;&#x8FD1;&#x6216;&#x6CBF;&#x4EFB;&#x4E00;&#x9762;&#x5185;&#x88AB;&#x819C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x4F7F;&#x7528;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x4F4E;&#x6E29;&#x8367;&#x5149;&#x5149;&#x955C; (&#x4F4E;&#x6E29; fLM) &#x548C;&#x4F4E;&#x6E29;&#x5C42;&#x6790;&#x6210;&#x50CF;&#x7535;&#x5B50; (ECT) &#x6765;&#x6807;&#x8BC6; MreB&#xFF0C;&#x663E;&#x793A; MreB &#x4E1D;&#x7531; ECT &#x63A2;&#x6D4B;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x675F;&#x3002;&#x6839;&#x636E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6210;&#x679C;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684; MreB &#x5FC5;&#x987B;&#x91CD;&#x65B0;&#x8003;&#x8651;&#xFF1A; &#x4E0D;&#x662F;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7EC6;&#x80DE;&#x58C1;&#x5408;&#x6210;&#x673A;&#x68B0;&#x5927;&#x3001; &#x521A;&#x6027;&#x7684;&#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#xFF0C;&#x79FB;&#x52A8; MreB &#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x53EF;&#x7533;&#x8BF7;&#x7D27;&#x5F20;&#x5C40;&#x52BF;&#x65E5;&#x76CA;&#x589E;&#x957F;&#x7684;&#x80BD;&#x805A;&#x7CD6;&#x94FE;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x786E;&#x4FDD;&#x5176;&#x6709;&#x5E8F;&#x3001; &#x7EBF;&#x6027;&#x63D2;&#x5165;&#x3002;

&#x957F;&#x87BA;&#x65CB;&#x4E1D;&#x90FD;&#x4E0D;&#x662F;&#x5305;&#x56F4;&#x7684;&#x6746;&#x72B6;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7535;&#x5B50; cryotomograms &#x4E2D;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;

How rod-shaped bacteria form and maintain their shape is an important question in bacterial cell biology. Results from fluorescent light microscopy have led many to believe that the actin homolog MreB and a number of other proteins form long helical filaments along the inner membrane of the cell. Here we show using electron cryotomography of six different rod-shaped bacterial species, at macromolecular resolution, that no long (> 80 nm) helical filaments exist near or along either surface of the inner membrane. We also use correlated cryo-fluorescent light microscopy (cryo-fLM) and electron cryo-tomography (ECT) to identify cytoplasmic bundles of MreB, showing that MreB filaments are detectable by ECT. In light of these results, the structure and function of MreB must be reconsidered: instead of acting as a large, rigid scaffold that localizes cell-wall synthetic machinery, moving MreB complexes may apply tension to growing peptidoglycan strands to ensure their orderly, linear insertion.

Long helical filaments are not seen encircling cells in electron cryotomograms of rod-shaped bacteria.

Comment en forme de tige bact&#xE9;ries former et de maintenir leur forme est une question importante en biologie cellulaire bact&#xE9;rienne. R&#xE9;sultats de la microscopie fluorescente ont conduit plusieurs &#xE0; croire que le MreB homologue d&#x26;#39;actine et un certain nombre d&#x26;#39;autres prot&#xE9;ines former des filaments h&#xE9;lico&#xEF;daux le long de long de la membrane interne de la cellule. Ici pr&#xE9;sentent utilisant cryotomography &#xE9;lectrons de six diff&#xE9;rents en forme de tige esp&#xE8;ces bact&#xE9;riennes, &#xE0; une r&#xE9;solution macromol&#xE9;culaire, qu&#x26;#39;aucune longues (&#x26;gt; 80 nm) de filaments h&#xE9;lico&#xEF;daux existent &#xE0; proximit&#xE9; ou le long de chaque surface de la membrane interne. Nous utilisons &#xE9;galement corr&#xE9;l&#xE9;e microscopie optique cryo-fluorescente (cryo-FLM) et d&#x26;#39;&#xE9;lectrons cryo-tomographie (ECT) pour identifier les paquets cytoplasmiques de MreB, montrant que les filaments MreB sont d&#xE9;tectables par ECT. &#xC0; la lumi&#xE8;re de ces r&#xE9;sultats, la structure et la fonction de MreB doit &#xEA;tre reconsid&#xE9;r&#xE9;: au lieu d&#x26;#39;agir comme un grand, rigide &#xE9;chafaudage qui localise la paroi cellulaire machinerie de synth&#xE8;se, le d&#xE9;placement des complexes MreB peut appliquer une tension &#xE0; la croissance des brins de peptidoglycane pour assurer leur ordonn&#xE9;e, insertion lin&#xE9;aire .

De longs filaments h&#xE9;lico&#xEF;daux ne sont pas consid&#xE9;r&#xE9;s cellules encerclants dans Cryotomograms &#xE9;lectrons de bact&#xE9;ries de forme allong&#xE9;e

Wie stabf&ouml;rmige Bakterien bilden und ihre Form pflegen ist eine wichtige Frage in der bakteriellen Zelle Biologie. Ergebnisse von fluoreszierenden Lichtmikroskopie f&uuml;hrten viele glauben, die Aktin-Homolog MreB und eine Reihe anderer Proteine lange spiralf&ouml;rmige Filamenten entlang der inneren Membrane der Zelle bilden. Hier zeigen wir, mit Elektron-Cryotomography von sechs verschiedenen st&auml;bchenf&ouml;rmigen bakteriellen Spezies, Makromolekulare Aufl&ouml;sung, dass keine langen spiralf&ouml;rmige Filamenten (&gt; 80 nm) in der N&auml;he oder entlang entweder Fl&auml;che der inneren Membran vorhanden. Wir verwenden auch korrelierte Cryo-fluoreszierender Lichtmikroskopie (Cryo-fLM) und Cryo-Elektron-Tomographie (ECT) identifizieren zytoplasmatischen B&uuml;ndel von MreB, wonach MreB Filamenten EKT nachweisbar sind. Angesichts dieser Ergebnisse, die Struktur und Funktion von MreB &uuml;berpr&uuml;ft werden m&uuml;ssen: statt als eine gro&szlig;e, starre Ger&uuml;st, die Zellwand synthetische Maschinen lokalisiert fungiert, Verschieben von MreB-komplexe anfallen Spannung auf die wachsende Peptidoglycan Str&auml;nge Originalpackungen geordnete, lineare sicherzustellen.

Lange spiralf&ouml;rmige Filamente sind nicht gesehen, rings um Zellen in Elektron-Cryotomograms von st&auml;bchenf&ouml;rmigen Bakterien.

Come batteri a forma di bastoncello, formano e mantengono la loro forma &egrave; una questione importante nella biologia delle cellule batteriche. Risultati da microscopia in luce fluorescente hanno portato molti a credere che l&#39;omologo dell&#39;actina MreB ed un certo numero di altre proteine formano filamenti lunghi elicoidale lungo la membrana interna della cella. Qui mostriamo usando elettrone cryotomography di sei differenti a forma di bastoncello specie batterici, a risoluzione macromolecolare, che no lunghi filamenti elicoidali (&amp;gt; 80 nm) esistono vicino o lungo una superficie di membrana interna. Usiamo anche correlata microscopia crio-fluorescenti (cryo-fLM) ed elettrone cryo-tomografia (ECT) per identificare i fasci citoplasmatiche di MreB, mostrando che i filamenti MreB sono rilevabili da ECT. Alla luce di questi risultati, deve essere riconsiderate la struttura e la funzione di MreB: invece di agire come un grande, rigida impalcatura che localizza il macchinario sintetico parete cellulare, MreB complessi in movimento pu&ograve; applicare una tensione crescente peptidoglicano fili per garantire il loro inserimento ordinato, lineare.

Filamenti lunghi elicoidale non sono visto che circondano le cellule in elettrone cryotomograms di batteri a forma di bastoncello.

&#x68D2;&#x72B6;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F62;&#x72B6;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x3001;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x554F;&#x984C;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x86CD;&#x5149;&#x706F;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x691C;&#x67FB;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;MreB&#x3068;&#x4ED6;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6570;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5185;&#x819C;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x3066;&#x9577;&#x3044;&#x3089;&#x305B;&#x3093;&#x72B6;&#x306E;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x4FE1;&#x3058;&#x3066;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x3092;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C9;&#x3057;&#x3066;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x9577;&#x3044;&#xFF08;&#x26;gt; 80 nm&#xFF09;&#x306E;&#x30D8;&#x30EA;&#x30AB;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x5185;&#x5074;&#x306E;&#x819C;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x3084;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x3066;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x3001;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x3067;&#x3001;6&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x68D2;&#x72B6;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x7A2E;&#x306E;&#x96FB;&#x5B50;cryotomography&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;MreB&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x304C;ECT&#x3067;&#x691C;&#x51FA;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;MreB&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x76F8;&#x95A2;&#x4F4E;&#x6E29;&#x86CD;&#x5149;&#x706F;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#xFF08;&#x6975;&#x4F4E;&#x6E29;FLM&#xFF09;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x96FB;&#x5B50;&#x30AF;&#x30E9;&#x30A4;&#x30AA;&#x30C8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#xFF08;ECT&#xFF09;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x7167;&#x3089;&#x3057;&#x3066;&#x3001;MreB&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x518D;&#x8003;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x58C1;&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x3092;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3057;&#x3001;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x525B;&#x6027;&#x8DB3;&#x5834;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304B;&#x3089;&#x3001;MreB&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x79FB;&#x52D5;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6574;&#x7136;&#x3068;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x7DDA;&#x5F62;&#x306E;&#x633F;&#x5165;&#x3092;&#x78BA;&#x5B9F;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6210;&#x9577;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x30B0;&#x30EA;&#x30AB;&#x30F3;&#x9396;&#x306B;&#x5F35;&#x529B;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x9577;&#x3044;&#x3089;&#x305B;&#x3093;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x72B6;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x96FB;&#x5B50;Cryotomograms&#x5185;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x3092;&#x53D6;&#x308A;&#x56F2;&#x3080;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x306A;&#x3044;

&#xB9C9;&#xB300; &#xBAA8;&#xC591;&#xC758; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xBAA8;&#xC591;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC9C8;&#xBB38;&#xC774; &#xC774;&#xB2E4;. &#xD615;&#xAD11; &#xAC00;&#xBCBC;&#xC6B4; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xB9CE;&#xC740; &#xB9D0;&#xB77C; &#xCCB4; MreB &#xBC0F; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xB2E4;&#xB978; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD615;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB0B4;&#xBD80; &#xB9C9; &#xB530;&#xB77C; &#xAE34; &#xB098;&#xC120;&#xD615; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8;&#xB97C; &#xBBFF;&#xACE0; &#xC774;&#xB04C;&#xC5B4; &#xB0C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; 6 &#xAC1C;&#xC758; &#xB9C9;&#xB300; &#xBAA8;&#xC591; &#xC138;&#xADE0; &#xC885;, &#xC804;&#xC790; cryotomography&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB354; &#xAE34; (&amp;gt; 80 nm) &#xD5EC;&#xB9AC;&#xCEEC; &#xBA58; &#xADFC;&#xCC98; &#xB610;&#xB294; &#xB0B4;&#xBD80; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC758; &#xC5B4;&#xB290; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC874;&#xC7AC;. &#xC0C1;&#xD638; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xACF3;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xB0B4;&#xB294;-&#xD615;&#xAD11; &#xBE5B; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; (&#xACF3;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xB0B4;&#xB294;-fLM) &#xBC0F; &#xACF3;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xB0B4;&#xB294;-&#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601; (ECT) MreB, MreB &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8; &#xC694;&#xBC95;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC10;&#xC9C0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD398;&#xC774;&#xC9C0;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xBC88;&#xB4E4;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB610;&#xD55C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xBE44;&#xCD94;&#xC5B4; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; Mreb&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC7AC;&#xACE0; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;: &#xD070; &#xB531;&#xB531;&#xD55C; &#xBE44; &#xACC4;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xBCBD; &#xD569;&#xC131; &#xAE30;&#xACC4; localizes&#xB85C; &#xC791;&#xB3D9; &#xD558;&#xB294; &#xB300;&#xC2E0; MreB &#xB2E8;&#xC9C0; &#xC774;&#xB3D9; &#xC801;&#xC6A9; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAE34;&#xC7A5; peptidoglycan &#xAC00;&#xB2E5;&#xC758; &#xC9C8;&#xC11C;, &#xC120;&#xD615; &#xC0BD;&#xC785;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC131;&#xC7A5; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xAE34; &#xB098;&#xC120;&#xD615; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8; &#xC140; &#xB9C9;&#xB300; &#xBAA8;&#xC591; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC758; &#xC804;&#xC790; cryotomograms&#xC5D0; &#xD3EC;&#xC704; &#xB9DD;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB098;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBF;C&#xF3;mo en forma de bastoncillos formar y mantener su forma es una cuesti&#xF3;n importante en la biolog&#xED;a de la c&#xE9;lula bacteriana. Los resultados de la microscop&#xED;a de luz fluorescente han llevado a muchos a creer que el MreB hom&#xF3;logo de actina y un n&#xFA;mero de otras prote&#xED;nas forman largos filamentos helicoidales a lo largo de la membrana interna de la c&#xE9;lula. Aqu&#xED; nos muestran utilizando cryotomography electrones de seis diferentes en forma de varilla especies bacterianas, en la resoluci&#xF3;n macromolecular, que no largas (&#x26;gt; 80 nm) existen alrededor de filamentos helicoidales o bien a lo largo de la superficie de la membrana interna. Tambi&#xE9;n utilizamos la correlaci&#xF3;n de crio-microscop&#xED;a de luz fluorescente (crio-FLM) y la tomograf&#xED;a crio-electr&#xF3;nica (ECT) para identificar los haces citoplasm&#xE1;ticos de MreB, mostrando que los filamentos de MreB son detectables por la TEC. A la luz de estos resultados, la estructura y funci&#xF3;n de MreB debe ser examinada de nuevo: en lugar de actuar como un gran andamio r&#xED;gido que se localiza en la pared celular de la maquinaria sint&#xE9;tica, pasando complejos MreB puede aplicar tensi&#xF3;n a las crecientes cadenas de peptidoglicano para garantizar su inserci&#xF3;n ordenada, lineal .

Largos filamentos helicoidales no se ven las c&#xE9;lulas en el cerco Cryotomograms electr&#xF3;nicas de bacterias de forma bacilar

&#x7EC6;&#x83CC;&#x97AD;&#x6BDB;&#x662F;&#x5927;&#x81EA;&#x7136;&#x7684;&#x6700;&#x4EE4;&#x4EBA;&#x60CA;&#x5F02;&#x548C;&#x730E;&#x6237;&#x5EA7;&#x8EAB;&#x4F53;&#x4E4B;&#x4E00;&#x3002;&#x5176;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5899;&#x951A;&#x7535;&#x673A;&#x4F7F;&#x7528;&#x5316;&#x5B66;&#x80FD;&#x91CF;&#x6765;&#x65CB;&#x8F6C;&#x5FAE;&#x7C73;&#x957F;&#x4E1D;&#x548C;&#x63A8;&#x52A8;&#x8FD9;&#x79CD;&#x7EC6;&#x83CC;&#x5BF9;&#x8425;&#x517B;&#x7269;&#x8D28;&#x548C;&#x6BD2;&#x7D20;&#x4ECE;&#x3002;&#x4E86;&#x89E3;&#x4ECE;&#x67D0;&#x4E9B;&#x6A21;&#x5F0F;&#x751F;&#x7269;&#x7684;&#x97AD;&#x6BDB;&#x7535;&#x673A;&#x5F88;&#x6E05;&#x695A;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x5B83;&#x4EEC;&#x8DE8;&#x7EC6;&#x83CC;&#x738B;&#x56FD;&#x7684;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#x662F;&#x5C11;&#x597D;&#x7279;&#x70B9;&#xFF0C;&#x5141;&#x8BB8;&#x7535;&#x673A;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E0D;&#x53D8;&#x7684;&#x3001; &#x7406;&#x60F3;&#x7684;&#x673A;&#x5668;&#x5076;&#x5C14;&#x7684;&#x5931;&#x5B9E;&#x9648;&#x8FF0;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x76EE;&#x524D;&#x6574;&#x4E2A;&#x7EC6;&#x83CC;&#x97AD;&#x6BDB;&#x7535;&#x673A;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#x7535;&#x5B50; cryotomographical &#x7684;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;&#x5B88;&#x6052;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x6838;&#x5FC3;&#x6620;&#x50CF;&#x7684;&#x6240;&#x6709; 11 &#x7EC6;&#x83CC;&#x5728;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x4EE4;&#x4EBA;&#x60CA;&#x8BB6;&#x7684;&#x5C0F;&#x8BF4;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4E0D;&#x540C;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x5BF9;&#x79F0;&#x53D1;&#x73B0;&#x56F4;&#x7ED5;&#x6838;&#x5FC3;&#x3002;&#x7535;&#x673A;&#x7ED3;&#x6784;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x548C;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x7279;&#x5B9A;&#x7535;&#x673A;&#x57FA;&#x56E0;&#x5728;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x751F;&#x7269;&#x4F53;&#x4E2D;&#x7684;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x4E94;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x53C2;&#x4E0E;&#x51FA;&#x53E3;&#x7684;&#x8BBE;&#x5907;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x7684; FliI&#xFF0C;&#x5176;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x4F4E;&#x4E8E; C &#x73AF;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x5F71;&#x50CF;&#x5220;&#x9664;&#x5E94;&#x53D8;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x770B;&#x5230;&#x7684;&#x5B88;&#x6052;&#x548C;&#x4E13;&#x95E8;&#x8C03;&#x6574;&#x7ED3;&#x6784;&#x76F8;&#x7ED3;&#x5408;&#x9610;&#x660E;&#x5982;&#x4F55;&#x6F14;&#x53D8;&#x8FD9;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x80FD;&#x5948;&#x7C73;&#x673A;&#x5668;&#x4EE5;&#x6EE1;&#x8DB3;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7269;&#x79CD;&#x3002;

&#x7EC6;&#x83CC;&#x97AD;&#x6BDB;&#x7535;&#x673A;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#x3002;

The bacterial flagellum is one of nature's most amazing and well-studied nanomachines. Its cell-wall-anchored motor uses chemical energy to rotate a microns-long filament and propel the bacterium towards nutrients and away from toxins. While much is known about flagellar motors from certain model organisms, their diversity across the bacterial kingdom is less well characterized, allowing the occasional misrepresentation of the motor as an invariant, ideal machine. Here, we present an electron cryotomographical survey of flagellar motor architectures throughout the Bacteria. While a conserved structural core was observed in all 11 bacteria imaged, surprisingly novel and divergent structures as well as different symmetries were observed surrounding the core. Correlating the motor structures with the presence and absence of particular motor genes in each organism suggested the locations of five proteins involved in the export apparatus including FliI, whose position below the C-ring was confirmed by imaging a deletion strain. The combination of conserved and specially-adapted structures seen here sheds light on how this complex protein nanomachine has evolved to meet the needs of different species.

Structural diversity of bacterial flagellar motors.

Le flagelle bact&#xE9;rien est l&#x26;#39;une des nanomachines la plus &#xE9;tonnante et bien &#xE9;tudi&#xE9; la nature. Sa paroi cellulaire ancr&#xE9; moteur utilise l&#x26;#39;&#xE9;nergie chimique pour faire tourner un filament microns de long et de propulser la bact&#xE9;rie vers des &#xE9;l&#xE9;ments nutritifs et &#xE0; l&#x26;#39;abri des toxines. Alors que beaucoup est connu au sujet des moteurs flagellaires de certains organismes mod&#xE8;les, leur diversit&#xE9; &#xE0; travers le royaume bact&#xE9;rienne est moins bien caract&#xE9;ris&#xE9;, ce qui permet la pr&#xE9;sentation inexacte des faits occasionnels du moteur comme un invariant, machine id&#xE9;ale. Ici, nous pr&#xE9;sentons un sondage &#xE9;lectronique cryotomographical d&#x26;#39;architectures moteur flagellaire tout au long des bact&#xE9;ries. Bien conserv&#xE9; un noyau structurel a &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;e dans tous les 11 bact&#xE9;ries imag&#xE9;es, des structures &#xE9;tonnamment nouvelles et divergentes, ainsi que des sym&#xE9;tries diff&#xE9;rentes ont &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;es entourant le noyau. Corr&#xE9;lation entre les structures de moteur avec la pr&#xE9;sence et l&#x26;#39;absence de g&#xE8;nes particuliers dans chaque moteur organisme a sugg&#xE9;r&#xE9; que les emplacements des cinq prot&#xE9;ines impliqu&#xE9;es dans l&#x26;#39;appareil d&#x26;#39;exportation, y compris Flii, dont la position en dessous de la C-anneau a &#xE9;t&#xE9; confirm&#xE9; par l&#x26;#39;imagerie d&#x26;#39;une souche de suppression. La combinaison de structures conserv&#xE9;es et sp&#xE9;cialement adapt&#xE9; vus ici met en lumi&#xE8;re la fa&#xE7;on dont cette prot&#xE9;ine complexe nanomachine a &#xE9;volu&#xE9; pour r&#xE9;pondre aux besoins des diff&#xE9;rentes esp&#xE8;ces.

La diversit&#xE9; structurelle des bact&#xE9;rienne Motors flagellaire

Die bakterielle Flagellen geh&ouml;rt zu der Natur am meisten erstaunlich und gut erforscht Nanomaschinen. Seine Zelle Wand-verankertes Motor wird chemischen Energie verwendet, um einem Mikrometer langen Faden zu drehen und treiben das Bakterium in Richtung N&auml;hrstoffe und entfernt Giftstoffe. W&auml;hrend viel &uuml;ber Flimmerband Motoren von bestimmten Modellorganismen bekannt ist, ist ihre Vielfalt durch das bakterielle K&ouml;nigreich, dass weniger gut charakterisiert die gelegentliche falsche Darstellung der Motor als invariante, ideale Maschine erm&ouml;glicht. Hier pr&auml;sentieren wir eine Elektron-Cryotomographical-Umfrage Flimmerband motor Architekturen w&auml;hrend der Bakterien. W&auml;hrend ein konservierten struktureller Kern in allen 11 Bakterien abgebildet beobachtet wurde, wurden &uuml;berraschenderweise Roman sowie unterschiedliche Strukturen und verschiedenen Symmetrien beobachtet rund um den Kern. Korrelation der motorischen Strukturen mit der Anwesenheit und Abwesenheit von bestimmten motor Gene in jedem Organismus vorgeschlagen, die Positionen der f&uuml;nf-Proteine in der Export-Apparat, einschlie&szlig;lich FliI, deren Position unterhalb der C-Ring Imaging eine L&ouml;schung Belastung best&auml;tigt wurde. Die Kombination von konservierten und speziell angepassten Strukturen gesehen hier beleuchtet wie dieses komplexe Protein Nanomaschine entwickelt hat, um die Bed&uuml;rfnisse der verschiedenen Arten.

Strukturvielfalt bakterielle Flimmerband Motoren.

Il flagello &egrave; una delle nanomacchine pi&ugrave; sorprendente e ben studiata di natura. Il suo motore cella-muro-ancorata utilizza energia chimica per ruotare un filamento lungo micron e spingere il batterio verso le sostanze nutrienti e lontano dalle tossine. Mentre molto &egrave; conosciuto circa flagellari motori da alcuni organismi modello, loro diversit&agrave; attraverso il Regno batterico &egrave; che meno ben caratterizzati, permettendo il travisamento occasionale del motore come una macchina ideale, invariante. Qui di seguito, presentiamo un&#39;indagine cryotomographical elettrone di architetture motore flagellari in tutto i batteri. Mentre un nucleo strutturale conservato &egrave; stato osservato in tutti i 11 batteri imaged, sorprendentemente romanzo e strutture divergenti, come pure diverse simmetrie sono state osservate che circonda il nucleo. Correlando il motore strutture con la presenza e l&#39;assenza di particolari geni motore in ogni organismo, ha suggerito le posizioni delle cinque proteine coinvolte nell&#39;apparato esportazione compresi FliI, la cui posizione sotto l&#39;anello a C &egrave; stata confermata da un ceppo di eliminazione di imaging. La combinazione di strutture conservate e appositamente adattato visto qui getta luce su come questa proteina complessa nanomacchina si &egrave; evoluto per soddisfare le esigenze delle diverse specie.

Diversit&agrave; strutturale dei motori flagellari batterici.

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&#xC138;&#xADE0; flagellar &#xBAA8;&#xD130;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El flagelo bacteriano es una de las nanom&#xE1;quinas m&#xE1;s sorprendente y bien estudiado de la naturaleza. Su pared celular anclado el motor utiliza la energ&#xED;a qu&#xED;mica para hacer girar un filamento de micras de largo y propulsar a la bacteria a los alimentos y lejos de las toxinas. Aunque se sabe mucho sobre los motores flagelares de ciertos organismos modelo, su diversidad en todo el reino bacteriano es muy bien caracterizada, que permite la tergiversaci&#xF3;n ocasional del motor como una m&#xE1;quina de todos los idiomas, ideal. A continuaci&#xF3;n, presentamos una encuesta electr&#xF3;nica cryotomographical de las arquitecturas de motor flagelar a trav&#xE9;s de las bacterias. Mientras que un n&#xFA;cleo estructural conservada se observ&#xF3; en todas las 11 bacterias con imagen, las estructuras sorprendentemente nuevos y divergentes, as&#xED; como diferentes simetr&#xED;as se observ&#xF3; que rodea al n&#xFA;cleo. Correlacionar las estructuras de motor con la presencia y ausencia de genes de motor particulares de cada organismo sugiri&#xF3; la ubicaci&#xF3;n de cinco prote&#xED;nas implicadas en el aparato de exportaci&#xF3;n incluyendo flii, cuya posici&#xF3;n por debajo del anillo C fue confirmada por im&#xE1;genes una supresi&#xF3;n cepa. La combinaci&#xF3;n de estructuras conservadas y adaptados especialmente ven en la foto arroja luz sobre c&#xF3;mo este complejo de prote&#xED;nas nanom&#xE1;quina ha evolucionado para satisfacer las necesidades de las diferentes especies.

La diversidad estructural de las bacterias Motors flagelar

&#x7EC6;&#x83CC;&#x5916;&#x819C;&#x56CA;&#x6CE1; (&#x76D1;&#x67E5;&#x8BA1;&#x5212;) &#x662F;&#x6570;&#x636E;&#x5305;&#x7684;&#x5468;&#x8D28;&#x6750;&#x6599;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x548C;&#x5176;&#x5B83;&#x5206;&#x5B50;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4EEC;&#x5305;&#x542B;&#x5230;&#x73AF;&#x5883;&#x9879;&#x76EE;&#x4EE3;&#x8C22;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x76D1;&#x67E5;&#x8BA1;&#x5212;&#x751F;&#x4EA7;&#x662F;&#x5728; proteobacteria &#x4E2D;&#x666E;&#x904D;&#x5B58;&#x5728;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x4EBA;&#x4EEC;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7814;&#x7A76;&#x4E86;&#x53EA;&#x6709;&#x5728;&#x5C45;&#x4F4F;&#x73AF;&#x5883;&#x5B8C;&#x5168;&#x6C34;&#x5316;&#x7684;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x8BB8;&#x591A; &#xFF08;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8BF4;&#x662F;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#xFF09; &#x7EC6;&#x83CC;&#x751F;&#x5883;&#x3001; &#x571F;&#x58E4;&#xFF0C;&#x90FD;&#x53EA;&#x662F;&#x90E8;&#x5206;&#x6C34;&#x5316;&#x3002;&#x5728;&#x540E;&#x8005;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6C34;&#x662F;&#x5178;&#x578B;&#x5206;&#x5E03;&#x5F0F;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x571F;&#x58E4;&#x9897;&#x7C92;&#x4F1A;&#x5BF9;&#x7535;&#x5F71;&#x3001; &#x5E73;&#x5747;&#x66F4;&#x8584;&#xFF0C;&#x6BD4;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x76D1;&#x67E5; (ca &le; 10 nm &#x6C34;&#x819C;&#x4E0E;&#x5230; 20 &gt; 200 nm &#x76D1;&#x67E5; &#xFF1B;&#xFF09;&#x3002;

Nanopods&#xFF1A; &#x65B0;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x5916;&#x819C;&#x56CA;&#x6CE1;&#x7684;&#x90E8;&#x7F72;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

Bacterial outer membrane vesicles (OMV) are packets of periplasmic material that, via the proteins and other molecules they contain, project metabolic function into the environment. While OMV production is widespread in proteobacteria, they have been extensively studied only in pathogens, which inhabit fully hydrated environments. However, many (arguably most) bacterial habitats, such as soil, are only partially hydrated. In the latter, water is characteristically distributed as films on soil particles that are, on average thinner, than are typical OMV (ca. â‰¤10 nm water film vs. 20 to >200 nm OMV;).

Nanopods: a new bacterial structure and mechanism for deployment of outer membrane vesicles.

V&#xE9;sicules de membrane externe bact&#xE9;rienne (OMV) sont des paquets de mat&#xE9;riau p&#xE9;riplasmique qui, par l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire des prot&#xE9;ines et d&#x26;#39;autres mol&#xE9;cules sont contenues, la fonction m&#xE9;tabolique projet dans l&#x26;#39;environnement. Alors que la production OMV est tr&#xE8;s r&#xE9;pandue dans prot&#xE9;obact&#xE9;ries, ils ont &#xE9;t&#xE9; largement &#xE9;tudi&#xE9;es que chez les agents pathog&#xE8;nes, qui habitent des environnements enti&#xE8;rement hydrat&#xE9;s. Cependant, de nombreux (sans doute le plus) des habitats bact&#xE9;riennes, telles que des sols, ne sont que partiellement hydrat&#xE9;. Dans ce dernier cas, l&#x26;#39;eau est caract&#xE9;ristique distribu&#xE9;s sous forme de films sur les particules du sol qui sont, sur le plus mince moyenne, que sont typiques OMV (ca. &#x2264; 10 nm vs film d&#x26;#39;eau de 20 &#xE0;&#x26;gt; 200 nm ;) OMV.

Nanopods: Une nouvelle structure bact&#xE9;rienne et m&#xE9;canisme de d&#xE9;ploiement des v&#xE9;sicules de membrane externe

Bakterielle Au&szlig;enmembran Bl&auml;schen (OMV) sind Pakete der periplasmatischen Material, die &uuml;ber Proteine und andere Molek&uuml;le, die sie enthalten, die metabolische Funktion in der Umgebung zu projizieren. OMV-Produktion in Proteobacteria weit verbreitet ist, haben sie ausgiebig nur in Krankheitserreger, studiert die vollst&auml;ndig hydratisierte Umgebungen zu bewohnen. Jedoch sind viele (wohl die meisten) bakterielle Lebensr&auml;ume, wie Boden, nur teilweise hydriert. Bei letzterer Wasser ist charakteristisch verteilte als Filme auf Bodenpartikel, die sind, im Durchschnitt d&uuml;nner, als typische OMV sind (ca. &le;10 nm Wasserfilm vs. 20 bis &gt; 200 nm OMV;).

Nanopods: eine neue bakterielle Struktur und Mechanismus f&uuml;r die Bereitstellung der Au&szlig;enmembran Bl&auml;schen.

Vescicole di membrana esterna batterica (OMV) sono i pacchetti di materiale periplasmico che, tramite le proteine e altre molecole che contengono, funzione metabolica del progetto nell&#39;ambiente. Mentre la produzione OMV &egrave; diffusa in proteobacteria, essi sono stati ampiamente studiati solo in patogeni, che abitano gli ambienti completamente idratati. Tuttavia, molti habitat batterico (probabilmente la maggior parte), come terreno, sono solo parzialmente idratato. In quest&#39;ultimo, l&#39;acqua &egrave; caratteristicamente distribuite come film sulle particelle del suolo che sono, in media pi&ugrave; sottili, che sono tipici OMV (pellicola d&#39;acqua ca. &le; 10 nm vs 20 a &amp;gt; 200 nm OMV;).

Nanopods: una nuova struttura batterica e il meccanismo per la distribuzione delle vescicole di membrana esterna.

&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x5916;&#x819C;&#x5C0F;&#x80DE;&#xFF08;OMV&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306B;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x308B;&#x4ED6;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x74B0;&#x5883;&#x3078;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B8;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30DA;&#x30EA;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30E0;&#x6750;&#x6599;&#x306E;&#x30D1;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#x3002; OMV&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x306F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A2;&#x306B;&#x5E83;&#x304F;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306F;&#x5E83;&#x7BC4;&#x56F2;&#x306B;&#x306E;&#x307F;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x6C34;&#x548C;&#x3057;&#x305F;&#x74B0;&#x5883;&#x306B;&#x751F;&#x606F;&#x3059;&#x308B;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x3067;&#x7814;&#x7A76;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x571F;&#x58CC;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#xFF08;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x6700;&#x3082;&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x751F;&#x606F;&#x5730;&#x306F;&#x3001;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x3057;&#x304B;&#x6C34;&#x548C;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x5F8C;&#x8005;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6C34;&#x304C;&#x7279;&#x5FB4;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x3001;&#x5E73;&#x5747;&#x7684;&#x306A;&#x30B7;&#x30F3;&#x30CA;&#x30FC;&#x306E;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x571F;&#x58CC;&#x7C92;&#x5B50;&#x4E0A;&#x306B;&#x819C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x914D;&#x5E03;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x306A;OMV&#xFF08;&#x7D04;&#x2264;10 nm&#x306E;&#x6C34;&#x819C;&#x5BFE;20&#x26;gt; 200 nm&#x306E;OMV ;)&#x3078;&#x3002;

Nanopods&#xFF1A;&#x5916;&#x819C;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x5C55;&#x958B;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;

&#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xC678;&#xBD80; &#xB9C9; &#xC18C;&#xD3EC; (OMV)&#xB294; &#xD328;&#xD0B7;&#xC744; periplasmic &#xC18C;&#xC7AC;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; &#xB2E4;&#xB978; &#xBD84;&#xC790;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xD658;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC2E0;&#xC9C4; &#xB300;&#xC0AC; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xD504;&#xB85C;&#xC81D;&#xD2B8;. OMV &#xC0DD;&#xC0B0; proteobacteria&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xB3D9;&#xC548;, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xC218;&#xC0B0;&#xD654; &#xD658;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC11C;&#xC2DD; &#xD558;&#xB294; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xADE0;&#xC5D0;&#xB9CC; &#xACF5;&#xBD80; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xAC19;&#xC740; &#xD1A0;&#xC591;, &#xB9CE;&#xC740; (&#xD2C0;&#xB9BC; &#xC5C6;&#xC774; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758;) &#xC138;&#xADE0; &#xC11C;&#xC2DD; &#xC9C0;&#xB294; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801; &#xC73C;&#xB85C;&#xB9CC; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C;&#xC9C0; &#xCCB4;&#xD06C; &#xD574;. &#xD6C4;&#xC790;, &#xC218;&#xB294; &#xD2B9;&#xC9C8; &#xC0C1; &#xBD84;&#xC0B0; &#xD1A0;&#xC591; &#xC785;&#xC790; &#xB4E4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC601;&#xD654;&#xB85C;, &#xC804;&#xD615;&#xC801;&#xC778; OMV&#xB294; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD3C9;&#xADE0;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB354; &#xC587;&#xC740; (ca. &le;10 nm &#xBB3C; &#xC601;&#xD654;&#xB97C; 20 &#xB300; &amp;gt; 200 nm OMV;).

Nanopods: &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC138;&#xADE0; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xC678;&#xBD80; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; vesicles&#xC758; &#xBC30;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;.

Bacterianas ves&#xED;culas de membrana externa (OMV) son paquetes de material peripl&#xE1;smico que, a trav&#xE9;s de las prote&#xED;nas y otras mol&#xE9;culas que contienen, la funci&#xF3;n metab&#xF3;lica proyecto en el medio ambiente. Aunque la producci&#xF3;n de OMV se ha generalizado en proteobacterias, que han sido ampliamente estudiados s&#xF3;lo en los agentes pat&#xF3;genos, que habitan en ambientes completamente hidratado. Sin embargo, muchos (probablemente la mayor&#xED;a) de los h&#xE1;bitats de bacterias, tales como el suelo, son s&#xF3;lo parcialmente hidratado. En esta &#xFA;ltima, el agua se distribuye caracter&#xED;sticamente como pel&#xED;culas sobre las part&#xED;culas del suelo que son, en diluyente promedio, que son t&#xED;picos de OMV (ca. 10 &#x2264; pel&#xED;cula de agua nm frente a 20 a&#x26;gt; 200 nm ;) OMV.

Nanopods una nueva estructura bacteriana y el mecanismo para la implementaci&#xF3;n de las ves&#xED;culas de membrana externa

Firmicute &#x52A8;&#x7269;&#x95E8;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x62EC;&#x83CC;&#x548C;&#x68AD;&#x72B6;&#x7C7B;&#xFF0C;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x5176;&#x5F62;&#x5F0F;&#x5927;&#x7403;&#x548C;&#x5176;&quot;&#x9769;&#x5170;&#x6C0F;&#x9633;&#x6027;&quot;&#x5355;&#x5C31;&#x3001; &#x539A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x58C1;&#x56F4;&#x62A4;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;Acetonema &#x957F;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x5927;&#x7403;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4EE4;&#x4EBA;&#x60CA;&#x8BB6;&quot;&#x9769;&#x5170;&#x6C0F;&#x9634;&#x6027;&quot;&#x85CF;&#x6709;&#x5185;&#x3001; &#x5916;&#x819C;&#x53CA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8584;&#x58C1;&#x7684;&#x68AD;&#x72B6;&#x662F;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5C11;&#x4E3A;&#x4EBA;&#x77E5; &#xFF08;Veillonellaceae&#xFF09; &#x7684;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x76EE;&#x524D;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x51B3;&#x8BAE;&#xFF0C;3D &#x7535;&#x5B50; cryotomographic &#x56FE;&#x50CF;&#x7684;&#x690D;&#x7269;&#x4EBA;&#xFF0C;&#x5B62;&#x5B50;&#xFF0C;&#x53CA;&#x79CD;&#x5B50;&#x53D1;&#x82BD; A.&#x957F;&#x663E;&#x793A;&#x5728;&#x82BD;&#x5B62;&#x5F62;&#x6210;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6BCD;&#x4EB2;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5185;&#x88AB;&#x819C;&#x662F;&#x5012;&#x7ACB;&#x548C;&#x6539;&#x5934;&#x6362;&#x9762;&#x6210;&#x4E3A;&#x5916;&#x819C;&#x4E0A;&#x7684;&#x53D1;&#x82BD;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x80BD;&#x805A;&#x7CD6;&#x5B58;&#x5728;&#x5404;&#x5730;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5176;&#x4F5C;&#x7528;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7ECF;&#x4FEE;&#x8BA2;&#x7684;&quot;&#x8FDE;&#x7EED;&quot;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x52A0;&#x4E0A;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x6307;&#x5411;&#x4EA7;&#x5B62;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x673A;&#x5236;&#x53EF;&#x80FD;&#x51FA;&#x73B0;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x5916;&#x819C;&#x548C; A.&#x957F;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6F5C;&#x529B;&#x5355;&#x548C;&#x53CC;&#x5C31;&#x7EC6;&#x83CC;&#x4E4B;&#x95F4;&quot;&#x7F3A;&#x5931;&#x7684;&#x73AF;&#x8282;&quot;&#x3002;

&#x80BD;&#x805A;&#x7CD6;&#x91CD;&#x6784;&#x548C;&#x5185;&#x5728;&#x819C;&#x7684;&#x8F6C;&#x5316;&#x671F;&#x95F4;&#x4EA7;&#x5B62;&#x5916;&#x819C;&#x3002;

Two hallmarks of the Firmicute phylum, which includes the Bacilli and Clostridia classes, are their ability to form endospores and their "Gram-positive" single-membraned, thick-cell-wall envelope structure. Acetonema longum is part of a lesser-known family (the Veillonellaceae) of Clostridia that form endospores but that are surprisingly "Gram negative," possessing both an inner and outer membrane and a thin cell wall. Here, we present macromolecular resolution, 3D electron cryotomographic images of vegetative, sporulating, and germinating A. longum cells showing that during the sporulation process, the inner membrane of the mother cell is inverted and transformed to become the outer membrane of the germinating cell. Peptidoglycan persists throughout, leading to a revised, "continuous" model of its role in the process. Coupled with genomic analyses, these results point to sporulation as a mechanism by which the bacterial outer membrane may have arisen and A. longum as a potential "missing link" between single- and double-membraned bacteria.

Peptidoglycan remodeling and conversion of an inner membrane into an outer membrane during sporulation.

Deux caract&#xE9;ristiques du phylum Firmicute, qui comprend les classes bacilles et Clostridia, sont leur capacit&#xE9; &#xE0; former des endospores et leur &#xAB;Gram-positif&#x26;quot; single-membran&#xE9;es, &#xE9;paisse paroi cellulaire structure d&#x26;#39;enveloppe. Longum Acetonema fait partie d&#x26;#39;une famille moins connus (le Veillonellaceae) de Clostridia qui endospores forme, mais qui sont &#xE9;tonnamment &#x26;quot;Gram n&#xE9;gatif&#x26;quot;, poss&#xE9;dant &#xE0; la fois une membrane interne et externe et une paroi cellulaire mince. Ici, nous pr&#xE9;sentons la r&#xE9;solution macromol&#xE9;culaire, 3D &#xE9;lectrons images cryotomographic de v&#xE9;g&#xE9;tatives, sporulantes, et la germination des cellules longum A. montrant que pendant le processus de la sporulation, la membrane interne de la cellule m&#xE8;re est invers&#xE9;e et transform&#xE9;e pour devenir la membrane externe de la cellule de germination. Peptidoglycane persiste tout au long, menant &#xE0; une version r&#xE9;vis&#xE9;e, &#x26;quot;continue&#x26;quot; mod&#xE8;le de son r&#xF4;le dans le processus. Coupl&#xE9; avec les analyses g&#xE9;nomiques, ces r&#xE9;sultats indiquent &#xE0; la sporulation comme un m&#xE9;canisme par lequel la membrane externe bact&#xE9;rienne peut avoir surgi et longum A. comme un potentiel &#xAB;cha&#xEE;non manquant&#xBB; entre les bact&#xE9;ries &#xE0; simple et double-membran&#xE9;es.

R&#xE9;novation de peptidoglycane et de conversion d&#x26;#39;une membrane int&#xE9;rieure en une membrane externe lors de la sporulation

Zwei sind der Firmicute-Stamm, die die Bazillen und Clostridien Klassen umfasst, ihre F&auml;higkeit, Form Endosporen und deren &quot;Gram-positive&quot; Einzel-membraned, dickwandigen-Zelle Umschlag-Struktur. Acetonema Longum ist Teil einer weniger bekannten Familie (Veillonellaceae) von Clostridien, die Endosporen aber sind &uuml;berraschend &quot;Gram-Negative,&quot; besitzen eine innere und &auml;u&szlig;ere Membran und eine d&uuml;nne Zellwand bilden. Hier pr&auml;sentieren wir Makromolekulare Aufl&ouml;sung, 3D Elektron-Cryotomographic-Bilder der vegetativen, sporenbildende und keimt A. Longum Zellen zeigen, dass bei der Sporenbildung, die innere Membran der Mutter Zelle invertiert und umgewandelt, um die &auml;u&szlig;ere Membran der keimende Zelle geworden ist. Peptidoglycane bestehen bleibt, f&uuml;hrt zu einem &uuml;berarbeiteten, &quot;kontinuierliche&quot; Modell seiner Rolle im Prozess. Gepaart mit genomische Analysen, zeigen diese Ergebnisse auf Sporenbildung als Mechanismus durch die bakterielle Au&szlig;enmembran erwachsen sind und A. Longum als m&ouml;glicher &quot;Missing Link&quot; zwischen Einzel- und Doppel-membraned Bakterien.

Peptidoglycane Umbau und Umwandlung von einer inneren Membrane in eine &auml;u&szlig;ere Membran w&auml;hrend der Sporenbildung.

Due tratti distintivi del phylum Firmicute, che include le classi Bacilli e clostridi, sono la loro capacit&agrave; di endospore forma e la loro struttura &quot;Gram-positivi&quot; busta singola membrana, parete-spessore-cellulare. Acetonema longum &egrave; parte di una famiglia meno noti (la Veillonellaceae) di clostridi che formano endospore ma che sono sorprendentemente &quot;Gram-negativo,&quot; possesso di una membrana interna ed esterna e una sottile parete cellulare. Presentiamo qui, macromolecolari risoluzione, immagini di elettroni 3D cryotomographic di vegetativa, sporulanti e germinazione celle a. longum mostrando che durante il processo di sporulazione, la membrana interna della cellula madre viene invertita e trasformata per diventare la membrana esterna della cellula germinativa. Peptidoglicano persiste in tutto, portando a un modello riveduto, &quot;continuo&quot; del suo ruolo nel processo. Accoppiato con analisi genomiche, questi risultati punto per sporulazione come un meccanismo di manifestatesi membrana esterna batterica pu&ograve; e a. longum come un potenziale &quot;anello mancante&quot; tra singolo e doppio-membrana batteri.

Peptidoglicano rimodellamento e la conversione di una membrana interna in una membrana esterna durante la sporulazione.

&#x30D0;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B9;&#x3068;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EA;&#x30B8;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;Firmicute&#x9580;&#x3001;&#x4E8C;&#x3064;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x306F;&#x3001;&#x5185;&#x751F;&#x80DE;&#x5B50;&#x3068;&#x305D;&#x306E; &#x26;quot;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x967D;&#x6027;&#x26;quot;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;membraned&#x3001;&#x539A;&#x3044;&#x7D30;&#x80DE;&#x58C1;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30D9;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D7;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002; Acetonema&#x306E;&#x30ED;&#x30F3;&#x30AC;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EA;&#x30B8;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x3042;&#x307E;&#x308A;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x5BB6;&#x65CF;&#xFF08;&#x30D9;&#x30A4;&#x30E8;&#x30CD;&#x30E9;&#x79D1;&#xFF09;&#x306E;&#x4E00;&#x90E8;&#x3067;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x5185;&#x751F;&#x80DE;&#x5B50;&#x304C;&#x9A5A;&#x304F;&#x307B;&#x3069;&#x3067;&#x3042;&#x308B; &#x26;quot;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x9670;&#x6027;&#x26;quot;&#x3001;&#x5185;&#x5074;&#x3068;&#x5916;&#x5074;&#x306E;&#x819C;&#x3068;&#x8584;&#x3044;&#x7D30;&#x80DE;&#x58C1;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x80DE;&#x5B50;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x904E;&#x7A0B;&#x3067;&#x3001;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5185;&#x819C;&#x304C;&#x53CD;&#x8EE2;&#x3057;&#x3001;&#x767A;&#x82BD;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5916;&#x819C;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x5909;&#x63DB;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x690D;&#x7269;&#x3001;&#x80DE;&#x5B50;&#x5F62;&#x6210;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x767A;&#x82BD;A.&#x306E;&#x30D3;&#x30D5;&#x30A3;&#x30BA;&#x30B9;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;3&#x6B21;&#x5143;&#x96FB;&#x5B50;cryotomographic&#x753B;&#x50CF;&#x3002;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x30B0;&#x30EA;&#x30AB;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306E;&#x6539;&#x8A02;&#x3001; &#x26;quot;&#x9023;&#x7D9A;&#x26;quot;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3001;&#x5168;&#x4F53;&#x3067;&#x4FDD;&#x6301;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x5916;&#x819C;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x3068;&#x30C0;&#x30D6;&#x30EB;membraned&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A; &#x26;quot;&#x30DF;&#x30C3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x26;quot;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x751F;&#x3058;&#x305F;&#x3068;A.&#x30D3;&#x30D5;&#x30A3;&#x30BA;&#x30B9;&#x305F;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x80DE;&#x5B50;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x89E3;&#x6790;&#x3068;&#x76F8;&#x307E;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x3002;

&#x80DE;&#x5B50;&#x5F62;&#x6210;&#x6642;&#x306B;&#x5916;&#x819C;&#x306B;&#x5185;&#x819C;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x30B0;&#x30EA;&#x30AB;&#x30F3;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x5909;&#x63DB;

Bacilli &#xBC0F; Clostridia &#xD074;&#xB798;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; Firmicute &#xBB38;&#xC758; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC740; &#xC790;&#xC2E0;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xC591;&#xC2DD; endospores &#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &quot;&#xADF8;&#xB78C; &#xC591;&#xC131;&quot; &#xB2E8;&#xC77C; membraned, &#xB450;&#xAEBC;&#xC6B4; &#xC138;&#xD3EC; &#xBCBD; &#xBD09;&#xD22C; &#xAD6C;&#xC870;. Acetonema longum endospores&#xB294; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC758;&#xC678;&#xB85C; &quot;&#xADF8;&#xB7A8; &#xB124;&#xAC70;&#xD2F0;&#xBE0C;,&quot; &#xC18C;&#xC9C0; &#xC548;&#xCABD;&#xACFC; &#xBC14;&#xAE65;&#xCABD; &#xB9C9;&#xACFC; &#xC587;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC; &#xBCBD; &#xD615;&#xC131; Clostridia&#xC758; &#xB35C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xAC00;&#xC871; (Veillonellaceae)&#xC758; &#xC77C;&#xBD80;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4;, 3D &#xC804;&#xC790; cryotomographic &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xC758; &#xC2DD;&#xBB3C;, sporulating, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xADF8; &#xD3EC;&#xC790; &#xD615;&#xC131; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5B4;&#xBA38;&#xB2C8; &#xC140;&#xC758; &#xB0B4;&#xBD80; &#xB9C9;&#xC774; &#xBC18;&#xC804; &#xB420; germinating &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC678;&#xBD80; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC744; &#xBCC0;&#xD615; A. longum &#xC140; germinating &#xC120;&#xBB3C;&#xC774;. Peptidoglycan &#xC804;&#xC5ED;, &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC218;&#xC815; &#xB41C; &#xACBD;&#xC6B0;, &quot;&#xC5F0;&#xC18D;&quot; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC120;&#xB3C4; &#xC720;&#xC9C0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC8C;&#xB188; &#xBD84;&#xC11D;&#xC73C;&#xB85C; &#xACB0;&#xD569;&#xD574;,&#xC774; &#xACB0;&#xACFC; &#xD3EC;&#xC790; &#xD615;&#xC131; &#xAC00;&#xB9AC;&#xD0A8; &#xC758;&#xD574; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC73C;&#xB85C;&#xB294; &#xC678;&#xBD80; &#xC138;&#xADE0; &#xB9C9; &#xBC1C;&#xD604; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xC77C; &#xBC0F; &#xC774;&#xC911; membraned &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; &#xC0AC;&#xC774; &quot;&#xB204;&#xB77D; &#xB41C; &#xB9C1;&#xD06C;&quot;&#xB85C; &#xB300;&#xB2F5; longum.

Peptidoglycan &#xAC1C;&#xC7A5; &#xBC0F; &#xD3EC;&#xC790; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC678;&#xBD80; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xB0B4;&#xBD80; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC758; &#xBCC0;&#xD658;.

Dos rasgos distintivos del phylum Firmicute, que incluye las clases de bacilos y clostridios, son su capacidad para formar endosporas y su &#x26;quot;gram-positivo&#x26;quot; de una sola membrana, gruesa pared celular de estructura envolvente. Longum Acetonema es parte de una familia menos conocida (el Veillonellaceae) de clostridios que endosporas forma sino que son sorprendentemente &#x26;quot;gram negativo&#x26;quot;, que posee tanto una membrana interna y externa y una pared celular delgada. Aqu&#xED;, presentamos resoluci&#xF3;n macromolecular, 3D electrones im&#xE1;genes cryotomographic de vegetativas, esporulantes, y germinar c&#xE9;lulas A. longum que muestran que durante el proceso de esporulaci&#xF3;n, la membrana interna de la c&#xE9;lula madre se invierte y se transform&#xF3; para convertirse en la membrana externa de la c&#xE9;lula germinar. Peptidoglicano persiste a lo largo, dando lugar a una versi&#xF3;n revisada del &#x26;quot;continuo&#x26;quot; modelo de su papel en el proceso. Junto con los an&#xE1;lisis gen&#xF3;micos, estos resultados apuntan a la esporulaci&#xF3;n como un mecanismo por el cual la membrana externa bacteriana puede haber surgido y longum A. como un posible &#x26;quot;eslab&#xF3;n perdido&#x26;quot; entre las bacterias de una y dos con membrana.

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Elitza I. Tocheva

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