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Electron Cryotomography of Bacterial Cells

While much is already known about the basic metabolism of bacterial cells, many fundamental questions are still surprisingly unanswered, including for ...

California Institute of Technology - Caltech

Prosthecobacter&#xFF0C;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x52A8;&#x7269;&#x95E8; Verrucomicrobia&#xFF0C;&#x53EF;&#x8015;&#x5730;&#x51E0;&#x4E2A;&#x4EE3;&#x8868;&#x4E4B;&#x4E00;&#x662F;&#x589E;&#x52A0;&#x5176;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x548C;&#x7EC6;&#x83CC;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269; FtsZ &#x901A;&#x5E38;&#x5305;&#x542B;&#x5728;&#x539F;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x660E;&#x663E;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x5BF9;&#x79D1;&#x5B66;&#x793E;&#x4F1A;&#x7531;&#x4E8E;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x611F;&#x5174;&#x8DA3;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x901A;&#x8FC7;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x65B0;&#x578B; tubulins FtsZ &#x51FD;&#x6570;&#x66FF;&#x4EE3;&#x6536;&#x8D2D;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x53CA;&#x6253;&#x5F00;&#x4E0A;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x53EF;&#x80FD;&#x6F14;&#x53D8;&#x7684;&#x65B0;&#x65B9;&#x6848;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x624B;&#x7A3F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x4E2D;&#x8FD8;&#x62E5;&#x6709;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C; Prosthecobacter &#x7269;&#x79CD;&#x7684; ftsZ &#x548C; ftsA &#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x5728; Verrucomicrobia FtsZ &#x57FA;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x673A;&#x5236;&#x3002;Verrucomicrobia &#x7684;&#x53EF;&#x7528;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x6570;&#x636E;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E; tubulins &#x4E0D;&#x5230;&#x8FD9;&#x4E00;&#x95E8;&#x7C7B;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x6210;&#x5458;&#x7684;&#x5171;&#x540C;&#x7279;&#x5F81;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5047;&#x5B9A; Prosthecobacter &#x6536;&#x8D2D; tubulins &#x901A;&#x8FC7;&#x6C34;&#x5E73;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x79FB;&#x3002;&#x5728; Prosthecobacter tubulins &#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x89D2;&#x8272;&#x4ECD;&#x7136;&#x662F;&#x795E;&#x79D8;&#x7684;&#x3002;

Tubulins &#x548C; ftsZ Prosthecobacter &#x4E0D;&#x540C;&#x7269;&#x79CD;&#x5171;&#x5B58;&#x3002;

Prosthecobacter, one of the few cultivable representatives of the bacterial phylum Verrucomicrobia, is of increasing interest to the scientific community due to the presence of tubulin genes in its genome and the apparent absence of the bacterial homologue FtsZ that is normally involved in prokaryotic cell division. These findings suggested the possibility of a vicarious takeover of the FtsZ function through these novel tubulins and opened new scenarios on the possible evolution of bacterial cytoskeleton and cell division. In the present manuscript, we report the characterization of ftsZ and ftsA homologues in different Prosthecobacter species that also possess tubulin genes. Based on these findings, we propose an FtsZ-based cell division mechanism in Verrucomicrobia. The analysis of available genome data of Verrucomicrobia suggests that tubulins are not a feature common to all members of this phylum. Therefore, it can be assumed that Prosthecobacter acquired tubulins through horizontal gene transfer. The functional role of tubulins in Prosthecobacter remains enigmatic.

Coexistence of tubulins and ftsZ in different Prosthecobacter species.

Prosthecobacter, un des rares repr&eacute;sentants cultivables du phylum des bact&eacute;ries Verrucomicrobia, est d&#39;un int&eacute;r&ecirc;t croissant pour la communaut&eacute; scientifique en raison de la pr&eacute;sence de g&egrave;nes de la tubuline dans son g&eacute;nome et l&#39;absence apparente de l&#39;homologue bact&eacute;rien FtsZ qui intervient normalement dans la division cellulaire procaryote. Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent la possibilit&eacute; d&#39;une prise de contr&ocirc;le du fait d&#39;autrui de la fonction FtsZ gr&acirc;ce &agrave; ces nouveaux tubulines et ouvert de nouveaux sc&eacute;narios sur l&#39;&eacute;volution possible du cytosquelette bact&eacute;rien et la division cellulaire. Dans le pr&eacute;sent manuscrit, nous rapportons la caract&eacute;risation des homologues ftsZ et ftsA chez diff&eacute;rentes esp&egrave;ces de Prosthecobacter qui poss&egrave;dent aussi des g&egrave;nes de la tubuline. Se fondant sur ces constatations, nous proposons un m&eacute;canisme FtsZ bas&eacute;e sur la division cellulaire chez les Verrucomicrobia. L&#39;analyse des donn&eacute;es disponibles de g&eacute;nome de Verrucomicrobia sugg&egrave;re que les tubulines ne sont pas une caract&eacute;ristique commune &agrave; tous les membres de ce phylum. Par cons&eacute;quent, on peut supposer que Prosthecobacter acquis tubulines par transfert horizontal de g&egrave;nes. Le r&ocirc;le fonctionnel des tubulines dans Prosthecobacter reste &eacute;nigmatique.

Coexistence des tubulines et ftsZ chez diff&eacute;rentes esp&egrave;ces de Prosthecobacter.

Prosthecobacter, einer der wenigen bestellbarem Vertreter von der bakteriellen Stamm Verrucomicrobia, ist der zunehmenden Interesse f&uuml;r die wissenschaftliche Gemeinschaft aufgrund des Vorhandenseins von Tubulin-Gene in ihrem Genom und das offensichtliche Fehlen einer die bakterielle homologe FtsZ, die normalerweise in prokaryotischen Zellteilung beteiligt ist. Diese Befunde die M&ouml;glichkeit einer stellvertretenden &Uuml;bernahme der FtsZ Funktion durch diese neuartige Tubulins vorgeschlagen und er&ouml;ffnet neue Szenarien auf die m&ouml;gliche Entwicklung von bakteriellen Cytoskeleton und Zellteilung. Im vorliegenden Manuskript teilen wir Ihnen die Charakterisierung von FtsZ und FtsA Homologen in verschiedenen Prosthecobacter-Arten, die auch Tubulin-Gene besitzen. Auf der Grundlage dieser Ergebnisse schlagen wir einen Zellteilung FtsZ basierenden Mechanismus in Verrucomicrobia. Die Auswertung von verf&uuml;gbaren Genom der Verrucomicrobia legt nahe, dass Tubulins kein f&uuml;r alle Mitglieder von diesem Stamm gemeinsames Merkmal sind. Daher kann davon ausgegangen werden, dass Prosthecobacter Tubulins durch horizontalen Gentransfer erworben. Die funktionale Rolle des Tubulins in Prosthecobacter bleibt r&auml;tselhaft.

Koexistenz von Tubulins und FtsZ in verschiedenen Prosthecobacter-Arten.

Prosthecobacter, uno dei pochi rappresentanti coltivabili del phylum batterico Verrucomicrobia, &egrave; di crescente interesse per la comunit&agrave; scientifica a causa della presenza di geni di tubulina nel suo genoma e l&#39;apparente assenza dell&#39;omologo batterico FtsZ che &egrave; normalmente coinvolti nella divisione delle cellule procariote. Queste scoperte ha suggerito la possibilit&agrave; di un takeover vicaria della funzione FtsZ attraverso questi tubulins romanzo e apre nuovi scenari sull&#39;evoluzione possibile del citoscheletro batterico e la divisione cellulare. Nel manoscritto presente, segnaliamo la caratterizzazione di ftsZ e ftsA omologhi in diverse specie di Prosthecobacter che possiedono anche geni di tubulina. Sulla base di questi risultati, vi proponiamo un meccanismo di divisione cellulare basato su FtsZ in Verrucomicrobia. L&#39;analisi dei dati disponibili del genoma di Verrucomicrobia suggerisce che tubulins non sono una caratteristica comune a tutti i membri di questo phylum. Pertanto, si pu&ograve; presumere che Prosthecobacter acquisito tubulins attraverso il trasferimento genico orizzontale. Il ruolo funzionale di tubulins in Prosthecobacter rimane enigmatico.

Coesistenza di tubulins e ftsZ in diverse specie di Prosthecobacter.

Prosthecobacter&#x3001;&#x53EF;&#x8015;&#x5730;&#x4EE3;&#x8868;&#x8005;&#x306E;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A2;&#x9580;&#x30A6;&#x30A7;&#x30EB;&#x30B3;&#x30DF;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D3;&#x30A6;&#x30E0;&#x9580;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E; 1 &#x3064;&#x305D;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x3068;&#x7D30;&#x83CC;&#x76F8;&#x540C;&#x4F53;&#x901A;&#x5E38;&#x539F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B; FtsZ &#x306E;&#x898B;&#x304B;&#x3051;&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x3067;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x79D1;&#x5B66;&#x7684;&#x306A;&#x30B3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30CB;&#x30C6;&#x30A3;&#x3078;&#x306E;&#x95A2;&#x5FC3;&#x304C;&#x9AD8;&#x307E;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306F; FtsZ &#x95A2;&#x6570;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x306E;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x306E;&#x8EAB;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306E;&#x8CB7;&#x53CE;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x306E;&#x9032;&#x5316;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30B7;&#x30CA;&#x30EA;&#x30AA;&#x3092;&#x958B;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7A3F;&#x3067;&#x306F;&#x3001;ftsZ &#x3068; ftsA &#x306E;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x3082;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5225;&#x306E; Prosthecobacter &#x7A2E;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6240;&#x898B;&#x306F;&#x30A6;&#x30A7;&#x30EB;&#x30B3;&#x30DF;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D3;&#x30A6;&#x30E0;&#x9580;&#x3067; FtsZ &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;.&#x30A6;&#x30A7;&#x30EB;&#x30B3;&#x30DF;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D3;&#x30A6;&#x30E0;&#x9580;&#x306E;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0; &#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x304C;&#x3053;&#x306E;&#x9580;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306B;&#x5171;&#x901A;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;Prosthecobacter &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6C34;&#x5E73;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x8CB7;&#x53CE;&#x3068;&#x4EEE;&#x5B9A;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Prosthecobacter &#x306E;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x5F79;&#x5272;&#x8B0E;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x3002;

&#x5C0F;&#x7BA1;&#x3068; ftsZ &#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B; Prosthecobacter &#x7A2E;&#x306E;&#x5171;&#x5B58;&#x3002;

Prosthecobacter, Verrucomicrobia, &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xBB38; &#xBA87; cultivable &#xB300;&#xD45C; &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xB294; &#xAC8C;&#xB188; &#xBC0F; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; homologue Ftsz&#xB294; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; prokaryotic &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC;&#xC758; &#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0; tubulin &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xACFC;&#xD559;&#xACC4;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC2EC; &#xC99D;&#xAC00;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC18C;&#xC124; tubulins &#xD1B5;&#xD574; FtsZ &#xD568;&#xC218; &#xB300;&#xB9AC; &#xC778;&#xC218; &#xD569;&#xBCD1;&#xC758; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; cytoskeleton &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC9C4;&#xD654;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC2DC;&#xB098;&#xB9AC;&#xC624; &#xC5F4;&#xB9BD;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC; &#xC6D0;&#xACE0; &#xC6B0;&#xB9AC; ftsZ &#xBC0F; ftsA homologues &#xB610;&#xD55C; tubulin &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC18C;&#xC720; &#xD558;&#xB294; Prosthecobacter &#xC885;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xBC14;&#xD0D5;&#xC73C;&#xB85C;, Verrucomicrobia&#xC5D0;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4; FtsZ &#xAE30;&#xBC18; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD55C;&#xB2E4;. Verrucomicrobia&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xAC8C;&#xB188; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xBD84;&#xC11D; tubulins &#xAE30;&#xB2A5;&#xC774;&#xC774; &#xBB38;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC5D0; &#xAC8C; &#xACF5;&#xD1B5; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB098;&#xC654;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, Prosthecobacter &#xC218;&#xD3C9; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC1A1;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; tubulins &#xC778;&#xC218; &#xC0DD;&#xAC01; &#xD558;&#xC2E4; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Prosthecobacter&#xC5D0;&#xC11C; tubulins&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0; &#xC218;&#xC218;&#xAED8;&#xB07C;&#xC758; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB85C; &#xC720;&#xC9C0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Tubulins&#xC640; Prosthecobacter&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xC885;&#xC5D0; ftsZ &#xACF5;&#xC874;.

Prosthecobacter, uno de los pocos representantes cultivables del filo bacteriana Verrucomicrobia, es de creciente inter&eacute;s para la comunidad cient&iacute;fica debido a la presencia de genes de la tubulina en su genoma y la aparente ausencia del hom&oacute;logo bacteriana FtsZ que normalmente participa en la divisi&oacute;n de c&eacute;lulas procariota. Estos resultados sugirieron la posibilidad de una adquisici&oacute;n vicaria de la funci&oacute;n de FtsZ a trav&eacute;s de estos nuevos tubulinas y abrieron nuevos escenarios sobre la posible evoluci&oacute;n del citoesqueleto bacteriano y la divisi&oacute;n celular. En el presente manuscrito, divulgamos la caracterizaci&oacute;n de ftsZ y ftsA hom&oacute;logos en diferentes especies de Prosthecobacter que tambi&eacute;n poseen genes de tubulina. De acuerdo con estos resultados, proponemos un mecanismo de divisi&oacute;n celular FtsZ basadas en Verrucomicrobia. El an&aacute;lisis de datos del genoma disponibles de Verrucomicrobia sugiere que las tubulinas no son una caracter&iacute;stica com&uacute;n a todos los miembros de este filo. Por lo tanto, se puede suponer que los Prosthecobacter adquirido tubulinas a trav&eacute;s de la transferencia horizontal del gene. El papel funcional de tubulinas en Prosthecobacter sigue siendo enigm&aacute;tico.

Coexistencia de tubulinas y ftsZ en diferentes especies de Prosthecobacter.

Tubulins &#x4ECD;&#x88AB;&#x89C6;&#x4E3A;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x6700;&#x8FD1;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x5728;&#x4E0D;&#x5BFB;&#x5E38;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC; Prosthecobacter (btubAB)&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x65B0;&#x5F00;&#x53D1;&#x7684;&#x4E24;&#x6B65;&#x57FA;&#x56E0;&#x6B65;&#x884C;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7EC4;&#x7EC7; btub &#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x5176;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7684;&#x73AF;&#x5883;&#x3002;&#x5728;&#x6240;&#x6709;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684; Prosthecobacters&#xFF0C;btubAB &#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x3002;&#x5F15;&#x4EBA;&#x6CE8;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6240;&#x6709; btub operons &#x90FD;&#x7EC4;&#x6210;&#x7B2C;&#x4E09;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#x4E0E;&#x9A71;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x8F7B;&#x94FE;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x76F8;&#x4F3C;&#x4E4B;&#x5904;&#x3002;&#x7279;&#x8272; btub-operons &#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7684;&#x73AF;&#x5883;&#x59CB;&#x7EC8;&#x662F;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x3002;&#x8FD9;&#x652F;&#x6301;&#x8FD9;&#x7EC4;&#x57FA;&#x56E0;&#x4EE3;&#x8868;&#x4E00;&#x4E2A;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x5355;&#x5143;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x6C34;&#x5E73;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x79FB;&#x88AB; Prosthecobacter &#x6536;&#x8D2D;&#x7684;&#x5047;&#x8BF4;&#x3002;&#x65B0;&#x5F00;&#x53D1;&#x7684;&#x4E24;&#x6B65;&#x57FA;&#x56E0;&#x6B65;&#x884C;&#x65B9;&#x6CD5;&#x57FA;&#x4E8E;&#x968F;&#x673A;&#x5F15;&#x7269;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94; (PCR)&#x3002;&#x5B83;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x7B80;&#x5355;&#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x6D41;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x542B;&#x53EA;&#x6709;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E3B;&#x8981;&#x6B65;&#x9AA4; &mdash; &mdash; &#x4E0E;&#x6307;&#x5411;&#x5E95;&#x6F06; &#xFF08;&#x6B65;&#x9AA4; 1&#xFF09; &#x548C;&#x76F4;&#x63A5;&#x6D4B;&#x5E8F;&#x6CD5;&#x4F7F;&#x7528;&#x5D4C;&#x5957;&#x7279;&#x5F02;&#x5F15;&#x7269; &#xFF08;&#x6B65;&#x9AA4; 2&#xFF09; &#x53CA;&#x5176;&#x4EA7;&#x54C1;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A;&#x7279;&#x5B9A;&#x5916;&#x5411;&#x6B65;&#x884C; PCR&#x3002;&#x4E24;&#x6B65;&#x57FA;&#x56E0;&#x884C;&#x8D70;&#x88AB;&#x8BC1;&#x660E;&#x662F;&#x975E;&#x5E38;&#x6709;&#x6548;&#x548C;&#x6210;&#x529F;&#x5730;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x63CF;&#x8FF0;&#x8D85;&#x8FC7; 20 kb &#x7684;&#x5E8F;&#x5217;&#x4E0D;&#x4EC5;&#x7EAF;&#x57F9;&#x517B;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5373;&#x4F7F;&#x5728;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x975E;&#x7EAF;&#x57F9;&#x517B;&#x6807;&#x672C;&#x3002;

&#x7EC6;&#x83CC; operons &#x65B0;&#x578B;&#x4E24;&#x6B65;&#x57FA;&#x56E0;&#x8D70;&#x6CD5;&#x7531;&#x4E24;&#x4E2A; tubulins &#x548C;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x9A71;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;

Tubulins are still considered as typical proteins of Eukaryotes. However, more recently they have been found in the unusual bacteria Prosthecobacter (btubAB). In this study, the genomic organization of the btub-genes and their genomic environment were characterized by using the newly developed Two-Step Gene Walking method. In all investigated Prosthecobacters, btubAB are organized in a typical bacterial operon. Strikingly, all btub-operons comprise a third gene with similarities to kinesin light chain sequences. The genomic environments of the characterized btub-operons are always different. This supports the hypothesis that this group of genes represents an independent functional unit, which was acquired by Prosthecobacter via horizontal gene transfer. The newly developed Two-Step Gene Walking method is based on randomly primed polymerase chain reaction (PCR). It presents a simple workflow, which comprises only two major steps--a Walking-PCR with a single specific outward pointing primer (step 1) and the direct sequencing of its product using a nested specific primer (step 2). Two-Step Gene Walking proved to be highly efficient and was successfully used to characterize over 20 kb of sequence not only in pure culture but even in complex non-pure culture samples.

Characterization of bacterial operons consisting of two tubulins and a kinesin-like gene by the novel Two-Step Gene Walking method.

Tubulines sont toujours consid&eacute;r&eacute;s comme des prot&eacute;ines typiques des eucaryotes. Cependant, plus r&eacute;cemment ils ont &eacute;t&eacute; trouv&eacute;s dans les bact&eacute;ries inhabituelles Prosthecobacter (btubAB). Dans cette &eacute;tude, l&#39;organisation g&eacute;nomique des g&egrave;nes-btub et de leur environnement g&eacute;nomique ont &eacute;t&eacute; caract&eacute;ris&eacute;s en utilisant la m&eacute;thode en deux &eacute;tapes Gene Walking nouvellement d&eacute;velopp&eacute;e. Dans tous les Prosthecobacters &eacute;tudi&eacute;s, btubAB sont organis&eacute;es dans un op&eacute;ron bact&eacute;rien typique. &Eacute;tonnamment, tous les btub-op&eacute;rons constituent un troisi&egrave;me g&egrave;ne avec des similitudes de s&eacute;quences de cha&icirc;ne l&eacute;g&egrave;re de la kin&eacute;sine. Les environnements de g&eacute;nomiques de le btub-op&eacute;rons caract&eacute;ris&eacute;s sont toujours diff&eacute;rents. Cela appuie l&#39;hypoth&egrave;se que ce groupe de g&egrave;nes repr&eacute;sente une unit&eacute; fonctionnelle ind&eacute;pendante, qui a &eacute;t&eacute; acquise par Prosthecobacter par l&#39;interm&eacute;diaire de transfert horizontal de g&egrave;nes. La m&eacute;thode en deux &eacute;tapes Gene Walking nouvellement d&eacute;velopp&eacute;e repose sur au hasard appr&ecirc;t&eacute; polymerase chain reaction (PCR). Il pr&eacute;sente un workflow simple, qui comprend seulement deux &eacute;tapes majeures--un Walking-PCR avec un ext&eacute;rieur sp&eacute;cifique unique pointant primer (&eacute;tape 1) et le s&eacute;quen&ccedil;age direct de son produit &agrave; l&#39;aide d&#39;un appr&ecirc;t sp&eacute;cifique imbriqu&eacute; (&eacute;tape 2). Deux &eacute;tapes Gene Walking s&#39;est av&eacute;r&eacute; tr&egrave;s efficace et a &eacute;t&eacute; utilis&eacute; avec succ&egrave;s pour caract&eacute;riser de s&eacute;quence non seulement en culture pure, mais m&ecirc;me dans les &eacute;chantillons de culture non pures complexe de plus de 20 Ko.

Caract&eacute;risation des op&eacute;rons bact&eacute;riens consistant en deux tubulines et un g&egrave;ne de la kin&eacute;sine semblable par la nouvelle m&eacute;thode marche de g&egrave;ne en deux &eacute;tapes.

Tubulins gelten immer noch als typische Proteine der Eukaryoten. Jedoch wurden vor kurzem sie in der ungew&ouml;hnlichen Bakterien Prosthecobacter (BtubAB) gefunden. In dieser Studie waren die genomische Organisation der Btub-Gene und ihrer genomischen Umgebung mit die neu entwickelte zweistufigen gen Walking-Methode gepr&auml;gt. In allen untersuchten Prosthecobacters werden in einer typischen bakteriellen Operon BtubAB organisiert. Auff&auml;llig ist, umfassen alle Btub-Operone ein drittes gen mit &Auml;hnlichkeiten zu Kinesin Leichtketten-Sequenzen. Die genomischen gekennzeichnete Btub-Operone-Umgebungen sind immer unterschiedlich. Dies unterst&uuml;tzt die Hypothese, dass diese Gruppe von Genen eine eigenst&auml;ndige funktionelle Einheit, darstellt, die von Prosthecobacter &uuml;ber Horizontaler Gentransfer &uuml;bernommen wurde. Die neu entwickelte zweistufigen gen Walking-Methode basiert auf zuf&auml;llig grundiert Polymerase-Kettenreaktion (PCR). Es stellt einen einfachen Workflow umfasst nur zwei Hauptschritte--ein Walking-PCR mit einer einzigen bestimmten nach au&szlig;en zeigen Primer (Schritt 1) und die direkte Sequenzierung seines Produktes unter Verwendung einer geschachtelten spezifischen Z&uuml;ndkapsel (Schritt 2). Zweistufiger Gene Walking erwies sich als hocheffiziente und wurde erfolgreich verwendet, um mehr als 20 kb Sequenz nicht nur in Reinkultur, sondern auch in komplexen nicht reine Kultur Proben zu charakterisieren.

Charakterisierung von bakteriellen Operone bestehend aus zwei Tubulins und ein Kinesin-&auml;hnliche-gen von der neuartigen zweistufigen gen Walking-Methode.

Tubulins sono ancora considerati come tipiche proteine di eucarioti. Tuttavia, pi&ugrave; recentemente essi sono stati trovati nei batteri insoliti Prosthecobacter (btubAB). In questo studio, l&#39;organizzazione genomica del btub-geni e il loro ambiente genomica sono stati caratterizzati utilizzando il metodo recentemente sviluppato in due fasi Gene Walking. In tutti i Prosthecobacters investigato, btubAB sono organizzati in un tipico operone batterico. Sorprendentemente, tutti btub-operoni comprendono un terzo gene con similitudini con sequenze di chinesina catena leggera. Gli ambienti genomici della btub-operoni caratterizzati sono sempre diversi. Questo supporta l&#39;ipotesi che questo gruppo di geni rappresenta un&#39;unit&agrave; funzionale indipendente, che &egrave; stata acquisita da Prosthecobacter tramite trasferimento genico orizzontale. Il metodo recentemente sviluppato in due fasi Gene Walking si basa su casualmente adescata polymerase chain reaction (PCR). Presenta un semplice flusso di lavoro, che comprende solo due passi principali - un Walking-PCR con un singolo specifico verso l&#39;esterno puntando primer (passo 1) e il sequenziamento diretto del suo prodotto utilizzando un primer specifico nidificato (passaggio 2). Due fasi Gene Walking ha dimostrato di essere altamente efficace ed &egrave; stato usato con successo per caratterizzare oltre 20 kb di sequenza non solo in coltura pura, ma anche in campioni complessi non pure cultura.

Caratterizzazione di operoni batterici composto da due tubulins e un gene chinesina-come dal metodo in due fasi Gene Walking romanzo.

&#x5C0F;&#x7BA1;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x6700;&#x8FD1;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x73CD;&#x3057;&#x3044;&#x7D30;&#x83CC; Prosthecobacter (btubAB) &#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;, btub &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x74B0;&#x5883;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x69CB;&#x6210;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x65B0;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E; 2 &#x6BB5;&#x968E;&#x306E;&#x6B69;&#x884C;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB; Prosthecobacters &#x306E; btubAB &#x306F;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x306A;&#x7D30;&#x83CC;&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9A5A;&#x304F;&#x307B;&#x3069;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066; btub &#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3; &#x30AD;&#x30CD;&#x30B7;&#x30F3;&#x8EFD;&#x9396;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3078;&#x306E;&#x985E;&#x4F3C;&#x70B9;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x7B2C; 3 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7279;&#x5FB4;&#x306E; btub &#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x74B0;&#x5883;&#x306F;&#x5E38;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E; Prosthecobacter &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6C34;&#x5E73;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x7531;&#x3067;&#x53D6;&#x5F97;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x72EC;&#x7ACB;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x5358;&#x4F4D;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x65B0;&#x3057;&#x304F;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E; 2 &#x6BB5;&#x968E;&#x306E;&#x6B69;&#x884C;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0;&#x306B;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0; &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x9023;&#x9396;&#x53CD;&#x5FDC; (PCR) &#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x552F;&#x4E00;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x4E3B;&#x306A;&#x624B;&#x9806;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x5358;&#x7D14;&#x306A;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x3001;&#x30A6;&#x30A9;&#x30FC;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0; PCR &#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC; (&#x624B;&#x9806; 1) &#x3068;&#x5165;&#x308C;&#x5B50;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC; (&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7; 2) &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x88FD;&#x54C1;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x6307;&#x3059; 1 &#x3064;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x5916;&#x5074;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;2 &#x6BB5;&#x968E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6B69;&#x884C;&#x52B9;&#x7387;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x8A3C;&#x660E;&#x3057;&#x3001;&#x6B63;&#x5E38;&#x306B; 20 kb &#x3092;&#x8D85;&#x3048;&#x308B;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x7D14;&#x7C8B;&#x57F9;&#x990A;&#x306E;&#x307F;&#x306A;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x975E;&#x7D14;&#x7C8B;&#x57F9;&#x990A;&#x306E;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3067;&#x3055;&#x3048;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

2 &#x3064;&#x306E;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x3068;&#x30AD;&#x30CD;&#x30B7;&#x30F3;&#x69D8;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E; 2 &#x6BB5;&#x968E;&#x306E;&#x6B69;&#x884C;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x304B;&#x3089;&#x6210;&#x308B;&#x7D30;&#x83CC;&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;

Tubulins&#xC740; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xC9C4;&#xD575;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC758; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC04;&#xC8FC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xC788;&#xB2E4; Prosthecobacter (btubAB)&#xC758; &#xBE44;&#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; btub &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC640; &#xAC8C;&#xB188; &#xD658;&#xACBD;&#xC758; &#xAC8C;&#xB188; &#xC870;&#xC9C1; &#xD588;&#xB2E4; &#xC0C8;&#xB86D;&#xAC8C; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xB41C; &#xB41C; 2 &#xB2E8;&#xACC4; &#xC9C4; &#xAC77;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC870;&#xC0AC; Prosthecobacters, Btubab&#xB294; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC138;&#xADE0; &#xC624; &#xD398;&#xB860; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE30; &#xB9C9;&#xD788;&#xAC8C;, &#xBAA8;&#xB4E0; btub operons kinesin &#xBE5B; &#xCCB4;&#xC778; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC720;&#xC0AC;&#xC131;&#xACFC; &#xC81C; 3 &#xC9C4;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC774; btub operons&#xC758; &#xAC8C;&#xB188; &#xD658;&#xACBD; &#xD56D;&#xC0C1; &#xB2E4;&#xB974;&#xB2E4;. &#xC774; &#xADF8;&#xB8F9; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC218;&#xD3C9; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC1A1;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; Prosthecobacter&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC778;&#xC218; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xAE30;&#xB2A5; &#xB2E8;&#xC704;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0C8;&#xB86D;&#xAC8C; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xB41C; &#xB41C; 2 &#xB2E8;&#xACC4; &#xC9C4; &#xAC77;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xBB34;&#xC791;&#xC704;&#xB85C; &#xB05D;&#xB0AC;&#xB2E4; &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC5F0;&#xC1C4; &#xBC18;&#xC751; (PCR)&#xC744; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xC6CC;&#xD06C;&#xD50C;&#xB85C;, &#xAD6C;&#xC131;&#xB9CC; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC8FC;&#xC694; &#xB2E8;&#xACC4;-&#xC6CC;&#xD0B9;-PCR &#xB1CC;&#xAD00; (1 &#xB2E8;&#xACC4;) &#xBC0F; &#xC911;&#xCCA9; &#xB41C; &#xD2B9;&#xC815; &#xB1CC;&#xAD00; (2 &#xB2E8;&#xACC4;)&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC81C;&#xD488;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC5F0;&#xC18D; &#xAC00;&#xB9AC;&#xD0A4;&#xB294; &#xB2E8;&#xC77C; &#xD2B9;&#xC815; &#xBC14;&#xAE65;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC120;&#xBB3C; &#xD55C;&#xB2E4;. 2 &#xB2E8;&#xACC4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC6CC;&#xD0B9; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xD310;&#xBA85; &#xD558; &#xACE0; 20kb &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; &#xC21C;&#xC218; &#xBB38;&#xD654; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBE44; &#xC21C;&#xC218; &#xBB38;&#xD654; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;.

&#xC18C;&#xC124; 2 &#xB2E8;&#xACC4; &#xC9C4; &#xAC77;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; tubulins &#xBC0F; kinesin &#xAC19;&#xC740; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; &#xC138;&#xADE0; operons&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;.

Tubulinas todav&iacute;a se consideran como prote&iacute;nas t&iacute;picas de los eucariotas. Sin embargo, m&aacute;s recientemente se han encontrado en las bacterias inusuales Prosthecobacter (btubAB). En este estudio, la organizaci&oacute;n gen&oacute;mica de los genes btub y su entorno gen&oacute;mico se caracterizaron mediante el m&eacute;todo de dos pasos caminando de Gene desarrollado recientemente. En todos los Prosthecobacters investigados, btubAB se organizan en un oper&oacute;n bacteriano t&iacute;pico. Sorprendentemente, todos btub-operones forman un tercer gen con semejanzas a las secuencias de la cadena ligera kinesin. Los entornos de gen&oacute;micos de las btub-operones caracterizados siempre son diferentes. Esto apoya la hip&oacute;tesis de que este grupo de genes representa una unidad funcional independiente, que fue adquirida por Prosthecobacter v&iacute;a transferencia horizontal del gene. El m&eacute;todo de dos pasos caminando de Gene reci&eacute;n desarrollado se basa en la reacci&oacute;n en cadena al azar preparado de la polimerasa (PCR). Presenta un flujo simple, que comprende dos pasos importantes--un Walking-PCR con un exterior espec&iacute;fico solo se&ntilde;alar la cartilla (paso 1) y la secuencia directa de su producto utilizando un primer espec&iacute;fico anidado (paso 2). Dos etapas Gene Walking demostr&oacute; para ser altamente eficiente y fue utilizado con &eacute;xito para caracterizar m&aacute;s de 20 kb de secuencia no s&oacute;lo en cultivo puro, sino incluso en las muestras de cultura compleja no puro.

Caracterizaci&oacute;n de operones bacterianos que consiste en dos tubulinas y un gen kinesin-como por el novedoso m&eacute;todo de dos pasos caminando de Gene.

&#x5728;&#x8FC7;&#x53BB;&#xFF0C;Planctomycetes&#x3001; &#x8863;&#x539F;&#x4F53;&#x3001; Lentisphaerae&#x3001; Verrucomicrobia &#x4F7F;&#x7528;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x53D1;&#x80B2;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x95E8;&#x7684;&#x5173;&#x7CFB;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x4E00;&#x76F4;&#x6709;&#x4E89;&#x8BAE;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E; 16S rRNA &#x5E8F;&#x5217;&#x5206;&#x6790;&#x8C03;&#x67E5;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x7684;&#x56DB;&#x4E2A;&#x95E8;&#xFF0C;&#x663E;&#x793A;&#x5206;&#x652F;&#x987A;&#x5E8F; Planctomycetes&#xFF0C;&#x8863;&#x539F;&#x4F53;&#x3001; Verrucomicrobia/Lentisphaerae &#x7684;&#x5173;&#x7CFB;&#x3002;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x53D1;&#x80B2;&#x5206;&#x6790; 23 &#x578B;&#x98DE;&#x673A; rRNA &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x4E5F;&#x652F;&#x6301;&#x4E00;&#x5143;&#x7684;&#x5206;&#x7EC4;&#x548C;&#x5176;&#x5206;&#x652F;&#x7684;&#x79E9;&#x5E8F;--&#x8FD9;&#x79CD;&#x5206;&#x7EC4;&#x662F;&#x5BF9;&#x7406;&#x89E3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#xFF0C;&#x610F;&#x4E49;&#x91CD;&#x5927;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x4E3B;&#x8981;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x86CB;&#x767D; FtsZ &#x662F;&#x7F3A;&#x5E2D;&#x4ECE;&#x95E8;&#x8863;&#x539F;&#x4F53;&#x548C; Planctomycetes &#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6210;&#x5458;&#x3002;&#x5728; Verrucomicrobia&#xFF0C;&#x4E3B;&#x8981;&#x9650;&#x4E8E;&#x5BC6;&#x5207;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x5C5E; Prosthecobacter &#x548C; Verrucomicrobium ftsZ &#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x62A5;&#x544A;&#x6709;&#x5173;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x7684;&#x77E5;&#x8BC6;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x5728;&#x6240;&#x6709; verrucomicrobial &#x7EC6;&#x5206; &#xFF08;1 &#x81F3; 4&#xFF09; &#x4E0E;&#x53EF;&#x8015;&#x5730;&#x4EE3;&#x8868; &#xFF08;1 &#x81F3; 4&#xFF09; &#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x5B88;&#x6052;&#x7684;&#x53F8;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x58C1; (&#xE7FE;) &#x7FA4;&#x96C6; &#xFF08;ftsZ&#x3001; ftsQ&#x3001; ftsA&#x3001; ddl&#xFF09; &#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x5E8F;&#x5217;&#x5206;&#x6790;&#x548C;&#x8F6C;&#x5F55;&#x5206;&#x6790;&#x5728; Verrucomicrobia &#x548C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x6570;&#x636E;&#x5206;&#x6790; Lentisphaerae &#x5EFA;&#x8BAE;&#x8BE5;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x57FA;&#x4E8E; FtsZ verrucomicrobial &#x6280;&#x672F;&#x88C5;&#x5907;&#x548C;&#x53EF;&#x80FD;&#x8FD8;&#x5728;&#x59B9;&#x59B9;&#x52A8;&#x7269; Lentisphaerae &#x95E8;&#x3002;&#x5168;&#x9762;&#x7684;&#x5E8F;&#x5217;&#x5206;&#x6790;&#x53EF;&#x7528;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x6570;&#x636E;&#x7684; Verrucomicrobia&#x3001; Lentisphaerae&#x3001; &#x8863;&#x539F;&#x4F53;&#x548C; Planctomycetes &#x7684;&#x4EE3;&#x8868;&#x5F3A;&#x70C8;&#x8868;&#x660E;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x6700;&#x540E;&#x7684;&#x5171;&#x540C;&#x7956;&#x5148;&#x62E5;&#x6709;&#x5B88;&#x6052;&#x3001; &#x7956;&#x4F20; &#xE7FE; &#x57FA;&#x56E0;&#x7C07;&#x548C;&#x57FA;&#x4E8E; FtsZ &#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x7C7B;&#x578B;&#x3002;&#x8FD9;&#x610F;&#x5473;&#x7740; Planctomycetes &#x548C;&#x8863;&#x539F;&#x4F53;&#x53EF;&#x80FD;&#x5DF2;&#x8F6C;&#x5411;&#x72EC;&#x7ACB;&#x540E;&#x6709;&#x5176;&#x5355;&#x72EC;&#x7684;&#x5206;&#x652F;&#x975E;&#x57FA;&#x4E8E; FtsZ &#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x673A;&#x5236;&#x4ECE;&#x5176;&#x6700;&#x540E;&#x7684;&#x5171;&#x540C;&#x7956;&#x5148;&#x4E0E; Verrucomicrobia&#x3002;

&#x8868;&#x5F81;&#x548C;&#x6F14;&#x5316;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x58C1;&#x5408;&#x6210;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x95E8; Verrucomicrobia&#x3001; Lentisphaerae&#x3001; &#x8863;&#x539F;&#x4F53;&#xFF0C;&#x548C; Planctomycetes &#x548C; rRNA &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x53D1;&#x80B2;&#x6BD4;&#x8F83;&#x3002;

In the past, studies on the relationships of the bacterial phyla Planctomycetes, Chlamydiae, Lentisphaerae, and Verrucomicrobia using different phylogenetic markers have been controversial. Investigations based on 16S rRNA sequence analyses suggested a relationship of the four phyla, showing the branching order Planctomycetes, Chlamydiae, Verrucomicrobia/Lentisphaerae. Phylogenetic analyses of 23S rRNA genes in this study also support a monophyletic grouping and their branching order--this grouping is significant for understanding cell division, since the major bacterial cell division protein FtsZ is absent from members of two of the phyla Chlamydiae and Planctomycetes. In Verrucomicrobia, knowledge about cell division is mainly restricted to the recent report of ftsZ in the closely related genera Prosthecobacter and Verrucomicrobium. In this study, genes of the conserved division and cell wall (dcw) cluster (ddl, ftsQ, ftsA, and ftsZ) were characterized in all verrucomicrobial subdivisions (1 to 4) with cultivable representatives (1 to 4). Sequence analyses and transcriptional analyses in Verrucomicrobia and genome data analyses in Lentisphaerae suggested that cell division is based on FtsZ in all verrucomicrobial subdivisions and possibly also in the sister phylum Lentisphaerae. Comprehensive sequence analyses of available genome data for representatives of Verrucomicrobia, Lentisphaerae, Chlamydiae, and Planctomycetes strongly indicate that their last common ancestor possessed a conserved, ancestral type of dcw gene cluster and an FtsZ-based cell division mechanism. This implies that Planctomycetes and Chlamydiae may have shifted independently to a non-FtsZ-based cell division mechanism after their separate branchings from their last common ancestor with Verrucomicrobia.

Characterization and evolution of cell division and cell wall synthesis genes in the bacterial phyla Verrucomicrobia, Lentisphaerae, Chlamydiae, and Planctomycetes and phylogenetic comparison with rRNA genes.

Dans le pass&eacute;, les &eacute;tudes sur les relations entre les phylums bact&eacute;riennes Planctomycetes, Chlamydiae, Lentisphaerae et Verrucomicrobia &agrave; l&#39;aide de diff&eacute;rents marqueurs phylog&eacute;n&eacute;tiques ont &eacute;t&eacute; controvers&eacute;es. Enqu&ecirc;tes bas&eacute;es sur les analyses des s&eacute;quences d&#39;ARNr 16 s sugg&egrave;rent une relation entre les quatre phylums, montrant l&#39;ordre branchement Planctomycetes, Chlamydiae, Verrucomicrobia/Lentisphaerae. Les analyses phylog&eacute;n&eacute;tiques des g&egrave;nes ARNr 23 s dans cette &eacute;tude soutiennent &eacute;galement un groupe monophyl&eacute;tique et leur ordre ramification--ce regroupement est important pour comprendre la division cellulaire, la division de cellule bact&eacute;rienne majeure prot&eacute;ine FtsZ &eacute;tant absente de deux des phylums Chlamydiae et Planctomycetes. Dans Verrucomicrobia, connaissances sur la division cellulaire est principalement limit&eacute; au r&eacute;cent rapport du ftsZ dans les genres Prosthecobacter et Verrucomicrobium. Dans cette &eacute;tude, les g&egrave;nes de la division conserv&eacute;e et de la paroi cellulaire (CDW) cluster (ddl, ftsQ, ftsA et ftsZ) ont &eacute;t&eacute; caract&eacute;ris&eacute;s dans toutes les subdivisions de la verrucomicrobial (1 &agrave; 4) avec les repr&eacute;sentants cultivables (1 &agrave; 4). Analyses et transcription en donn&eacute;es Verrucomicrobia et g&eacute;nome dans Lentisphaerae, les analyses sugg&egrave;rent que la division cellulaire est issue FtsZ dans toutes les subdivisions verrucomicrobial et peut-&ecirc;tre aussi &agrave; la soeur de s&eacute;quence phylum des Lentisphaerae. Analyse de la s&eacute;quence compl&egrave;te des donn&eacute;es de g&eacute;nome disponible pour les repr&eacute;sentants de Verrucomicrobia, Lentisphaerae, Chlamydiae et Planctomycetes indique fortement que leur dernier anc&ecirc;tre commun poss&eacute;dait un type conserv&eacute;, ancestral du groupe de g&egrave;nes dcw et un m&eacute;canisme de division cellulaire FtsZ-bas&eacute;e. Cela implique que Planctomycetes et Chlamydiae peuvent sont pass&eacute;s ind&eacute;pendamment &agrave; un m&eacute;canisme FtsZ non dot&eacute;s de division cellulaire apr&egrave;s leurs embranchements distincts de leur dernier anc&ecirc;tre commun avec les Verrucomicrobia.

Caract&eacute;risation et &eacute;volution des g&egrave;nes de synth&egrave;se la division cellulaire et la paroi cellulaire chez les phylums bact&eacute;riennes Verrucomicrobia, Lentisphaerae, Chlamydiae et Planctomycetes et comparaison phylog&eacute;n&eacute;tique avec des g&egrave;nes ARNr.

In der Vergangenheit sind die Studien &uuml;ber die Beziehungen zwischen der bakteriellen St&auml;mme Planctomyceten, Chlamydien, Lentisphaerae und Verrucomicrobia mit verschiedene phylogenetische Markern umstritten. Untersuchungen auf der Grundlage von 16S rRNA Sequenz Analysen regt eine Beziehung von den vier St&auml;mme, zeigen die Verzweigungsstruktur Planctomyceten, Chlamydien, Verrucomicrobia/Lentisphaerae. Phylogenetische Analysen 23S rRNA gene in dieser Studie auch eine monophyletische Gruppe und deren Verzweigungsstruktur--diese Gruppierung ist von Bedeutung f&uuml;r Verst&auml;ndnis Zellteilung, da das gro&szlig;e bakterielle Zellteilung Protein FtsZ fehlt von Mitgliedern zweier der St&auml;mme Chlamydien und Planctomyceten. Wissen &uuml;ber Zellteilung beschr&auml;nkt sich in Verrucomicrobia vor allem auf den j&uuml;ngsten Bericht der FtsZ in den eng verwandten Gattungen Prosthecobacter und Verrucomicrobium. In dieser Studie waren Gene der konservierten Division und Zellwand (Dcw) Cluster (Ddl, FtsQ, FtsA und FtsZ) in allen Verrucomicrobial Unterteilungen (1 bis 4) mit bestellbarem Vertretern (1-4) gekennzeichnet. Laufende Analysen und transkriptionelle Analysen in Verrucomicrobia und Genom-Daten und Analysen im Lentisphaerae vorgeschlagen, dass Zellteilung beruht auf FtsZ in allen Verrucomicrobial Unterteilungen und m&ouml;glicherweise auch im Schwesterhotel Stamm Lentisphaerae. Umfassende Sequenz Analysen der verf&uuml;gbaren Genomdaten f&uuml;r die Vertreter der Verrucomicrobia, Lentisphaerae, Chlamydien und Planctomyceten zufolge stark ihres letzten gemeinsamen Vorfahrens eine konservierte, Vorfahren Art der Dcw-gen-Cluster und eine Zellteilung FtsZ basierenden Mechanismus besa&szlig;. Dies impliziert, dass Planctomyceten und Chlamydien unabh&auml;ngig von ihren letzten gemeinsamen Vorfahren mit Verrucomicrobia zu einer Zellteilung FtsZ-basierten Mechanismus nach ihren eigenen Gedankeng&auml;nge verschoben haben k&ouml;nnen.

Charakterisierung und Entwicklung der Zellteilung und Zellwand-Synthese-Gene in die bakterielle St&auml;mme Verrucomicrobia, Lentisphaerae, Chlamydien, und Planctomyceten und phylogenetische Vergleich mit rRNA gene.

In passato, gli studi sulle relazioni del phyla batterici Planctomycetes, Chlamydia, Lentisphaerae e Verrucomicrobia utilizzando diversi marker filogenetici sono stati controversi. Le indagini basate su analisi di sequenza 16S rRNA ha suggerito una relazione tra le quattro phyla, mostrando la ramificazione ordine Planctomycetes, Chlamydia, Verrucomicrobia/Lentisphaerae. Analisi filogenetiche dei geni rRNA 23S in questo studio supportano anche un raggruppamento monofiletico e loro ordine di ramificazione - questo raggruppamento &egrave; significativo per la comprensione di divisione cellulare, dal momento che la principale divisione cellulare batterica proteina FtsZ &egrave; assente da membri di due phyla Chlamydiae e Planctomycetes. In Verrucomicrobia, conoscenza di divisione delle cellule &egrave; principalmente limitata per la recente relazione di ftsZ in generi strettamente correlati Prosthecobacter e Verrucomicrobium. In questo studio, geni della divisione conservata e parete cellulare (dcw) cluster (ddl, ftsQ, ftsA e ftsZ) sono stati caratterizzati in tutte le suddivisioni di verrucomicrobial (da 1 a 4) con rappresentanti coltivabili (1 a 4). Analisi e analisi trascrizionale in Verrucomicrobia e genoma dati analisi in Lentisphaerae suggerito che divisione cellulare &egrave; basato su FtsZ in tutte le suddivisioni di verrucomicrobial e possibilmente anche la sorella di sequenza phylum Lentisphaerae. Analisi di sequenza completa dei dati del genoma disponibili per i rappresentanti di Verrucomicrobia, Lentisphaerae, Chlamydia e Planctomycetes indicano fortemente che il loro ultimo antenato comune possedeva un tipo ancestrale, conservato di dcw gene cluster e un meccanismo di divisione cellulare basato su FtsZ. Questo implica che Planctomycetes e Chlamydia pu&ograve; hanno spostato in modo indipendente a un meccanismo di divisione cellulare non basati su FtsZ dopo loro branchings separato dal loro ultimo antenato comune con Verrucomicrobia.

Caratterizzazione ed evoluzione della divisione cellulare e parete cellulare geni di sintesi nel phyla batterici Verrucomicrobia, Lentisphaerae, Chlamydiae e Planctomycetes e filogenetica confronto con geni rRNA.

&#x904E;&#x53BB;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30F3;&#x30AF;&#x30C8;&#x30DF;&#x30B1;&#x30B9;&#x9580;&#x3001;&#x30AF;&#x30E9;&#x30DF;&#x30B8;&#x30A2;&#x3001;Lentisphaerae&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A6;&#x30A7;&#x30EB;&#x30B3;&#x30DF;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D3;&#x30A6;&#x30E0;&#x9580;&#x306E;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x5225;&#x306E;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x754C;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x7814;&#x7A76;&#x7269;&#x8B70;&#x3092;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;16S rRNA &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x8ABF;&#x67FB;&#x5206;&#x5C90;&#x9806;&#x30D7;&#x30E9;&#x30F3;&#x30AF;&#x30C8;&#x30DF;&#x30B1;&#x30B9;&#x9580;&#x3001;&#x30AF;&#x30E9;&#x30DF;&#x30B8;&#x30A2;&#x3001;&#x30A6;&#x30A7;&#x30EB;&#x30B3;&#x30DF;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D3;&#x30A6;&#x30E0;&#x9580;/Lentisphaerae &#x3092;&#x793A;&#x3059; 4 &#x3064;&#x306E;&#x9580;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E; 23S rRNA &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7CFB;&#x7D71;&#x89E3;&#x6790;&#x3082;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x5358;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x5316;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4E3B;&#x8981;&#x7D30;&#x83CC;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; FtsZ &#x304C;&#x4F11;&#x3093;&#x3067;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x5206;&#x5C90;&#x9806;&#x5E8F;--&#x3053;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x3042;&#x308B;&#x30AF;&#x30E9;&#x30DF;&#x30B8;&#x30A2;&#x3068;&#x30D7;&#x30E9;&#x30F3;&#x30AF;&#x30C8;&#x30DF;&#x30B1;&#x30B9;&#x9580;&#x9580;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x3002;&#x30A6;&#x30A7;&#x30EB;&#x30B3;&#x30DF;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D3;&#x30A6;&#x30E0;&#x9580;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306E;&#x77E5;&#x8B58;&#x306F; ftsZ &#x8FD1;&#x7E01;&#x5C5E; Prosthecobacter &#x3068; Verrucomicrobium &#x3067;&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x5831;&#x544A;&#x66F8;&#x306B;&#x4E3B;&#x306B;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x90E8;&#x9580;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D30;&#x80DE;&#x58C1; (dcw) &#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC; (ddl&#x3001;ftsQ&#x3001;ftsA&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; ftsZ) &#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3059;&#x3079;&#x3066; verrucomicrobial &#x4E0B;&#x4F4D;&#x533A;&#x5206; &#xFF08;1 &#x306B; 4&#xFF09; &#x53EF;&#x8015;&#x5730;&#x4EE3;&#x8868; (4 &#x306B; 1&#xFF09; &#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9; Lentisphaerae &#x3067;&#x793A;&#x5506;&#x305D;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x3067;&#x3059;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066; FtsZ &#x306B;&#x3059;&#x3079;&#x3066; verrucomicrobial &#x4E0B;&#x4F4D;&#x533A;&#x5206;&#x3001;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x3082;&#x59B9;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x89E3;&#x6790;&#x3001;&#x89E3;&#x6790;&#x30A6;&#x30A7;&#x30EB;&#x30B3;&#x30DF;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D3;&#x30A6;&#x30E0;&#x9580;&#x3068;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0; &#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x9580; Lentisphaerae&#x3002;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0; &#x30C7;&#x30FC;&#x30BF; &#x30A6;&#x30A7;&#x30EB;&#x30B3;&#x30DF;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D3;&#x30A6;&#x30E0;&#x9580;&#x3001;Lentisphaerae&#x3001;&#x30AF;&#x30E9;&#x30DF;&#x30B8;&#x30A2;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30F3;&#x30AF;&#x30C8;&#x30DF;&#x30B1;&#x30B9;&#x9580;&#x306E;&#x4EE3;&#x8868;&#x8005;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5305;&#x62EC;&#x7684;&#x306A;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x89E3;&#x6790;&#x306F;&#x5F37;&#x304F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6700;&#x5F8C;&#x306E;&#x5171;&#x901A;&#x306E;&#x7956;&#x5148;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x7956;&#x5148;&#x578B; dcw &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068; FtsZ &#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x6240;&#x6709;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30F3;&#x30AF;&#x30C8;&#x30DF;&#x30B1;&#x30B9;&#x9580;&#x3068;&#x30AF;&#x30E9;&#x30DF;&#x30B8;&#x30A2;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x5F7C;&#x3089;&#x5225;&#x306E;&#x5206;&#x679D;&#x5F8C; FtsZ &#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x6700;&#x5F8C;&#x306E;&#x5171;&#x901A;&#x306E;&#x7956;&#x5148;&#x3068;&#x30A6;&#x30A7;&#x30EB;&#x30B3;&#x30DF;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D3;&#x30A6;&#x30E0;&#x9580;&#x304B;&#x3089;&#x79FB;&#x3057;&#x305F;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x610F;&#x5473;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x9580;&#x30A6;&#x30A7;&#x30EB;&#x30B3;&#x30DF;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D3;&#x30A6;&#x30E0;&#x9580;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D30;&#x80DE;&#x58C1;&#x5408;&#x6210;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x9032;&#x5316;&#x3001;Lentisphaerae&#x3001;&#x30AF;&#x30E9;&#x30DF;&#x30B8;&#x30A2;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D7;&#x30E9;&#x30F3;&#x30AF;&#x30C8;&#x30DF;&#x30B1;&#x30B9;&#x9580;&#x306E; rRNA &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7CFB;&#x7D71;&#x5B66;&#x7684;&#x6BD4;&#x8F03;

&#xACFC;&#xAC70;&#xC5D0;&#xB294;, &#xC138;&#xADE0;&#xC131; phyla Planctomycetes, Chlamydiae, Lentisphaerae, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB2E4;&#xB978; phylogenetic &#xB9C8;&#xCEE4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; Verrucomicrobia&#xC758; &#xAD00;&#xACC4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xB17C;&#xB780;&#xC774; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. 16S rRNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC870;&#xC0AC; 4 phyla, &#xBD84;&#xAE30; &#xC21C;&#xC11C; Planctomycetes, Chlamydiae, Verrucomicrobia/Lentisphaerae &#xD398;&#xC774;&#xC9C0;&#xC758; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. 23S rRNA &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC740; phylogenetic monophyletic &#xADF8;&#xB8F9;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD558; &#xACE0; &#xBD84;&#xAE30; &#xC21C;&#xC11C;-&#xC774; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC740; &#xC8FC;&#xC694; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Ftsz&#xB294; &#xC774;&#xD6C4; &#xC774;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB450; phyla Chlamydiae &#xBC0F; Planctomycetes&#xC758; &#xD68C;&#xC6D0;&#xC5D0;&#xC11C;. Verrucomicrobia, &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC9C0;&#xC2DD;&#xC744; &#xC8FC;&#xB85C; ftsZ &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; &#xC18D; Prosthecobacter&#xC640; Verrucomicrobium&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xCD5C;&#xADFC; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;&#xC5D0; &#xC81C;&#xD55C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; cultivable &#xB300;&#xD45C; (1 ~ 4) &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xBD80;&#xBB38; (ddl, ftsQ, ftsA, &#xBC0F; ftsZ) &#xC138;&#xD3EC; &#xBCBD; (dcw) &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; verrucomicrobial &#xAD6C;&#xD68D; (1 ~ 4) &#xD2B9;&#xC9D5; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBD84;&#xC11D; &#xBC0F; Lentisphaerae &#xBD84;&#xC11D; &#xC81C;&#xC548; &#xADF8; &#xC140; &#xBD84;&#xD560; &#xAE30;&#xBC18; FtsZ &#xBAA8;&#xB4E0; verrucomicrobial &#xC138;&#xBD84;&#xACFC; &#xAC00;&#xB2A5; &#xD558; &#xAC8C; &#xB610;&#xD55C; &#xC790;&#xB9E4;&#xC5D0; Verrucomicrobia &#xBC0F; &#xAC8C;&#xB188; &#xB370;&#xC774;&#xD130; transcriptional &#xBD84;&#xC11D; &#xC21C;&#xC11C; &#xBB38; Lentisphaerae. Verrucomicrobia, Lentisphaerae, Chlamydiae, &#xBC0F; Planctomycetes&#xC758; &#xB300;&#xD45C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xAC8C;&#xB188; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC758; &#xD3EC;&#xAD04;&#xC801;&#xC778; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBD84;&#xC11D; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9; &#xACF5;&#xD1B5; &#xC870;&#xC0C1; &#xBCF4;&#xC720; &#xBCF4;&#xC874;, &#xC870;&#xC0C1;&#xC758; &#xC720;&#xD615; dcw &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4; FtsZ &#xAE30;&#xBC18; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; Planctomycetes&#xC640; Chlamydiae &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC774;&#xB3D9; &#xD558;&#xC9C0; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xBCC4;&#xB3C4; branchings &#xD6C4; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4; FtsZ &#xAE30;&#xBC18; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; Verrucomicrobia&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9; &#xACF5;&#xD1B5; &#xC870;&#xC0C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC758;&#xBBF8; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD2B9;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; phyla Verrucomicrobia&#xC758;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4;&#xACFC; &#xC138;&#xD3EC; &#xBCBD; &#xD569;&#xC131; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC9C4;&#xD654;, Lentisphaerae, Chlamydiae, &#xBC0F; Planctomycetes &#xBC0F; rRNA &#xC720;&#xC804;&#xC790; phylogenetic &#xBE44;&#xAD50;.

En el pasado, los estudios sobre las relaciones de los filos bacterianos Planctomycetes, clamidias, Lentisphaerae y Verrucomicrobia utilizando diferentes marcadores filogen&eacute;ticos han sido pol&eacute;micos. Las investigaciones basadas en el an&aacute;lisis de la secuencia 16S rRNA sugieren una relaci&oacute;n de los cuatro filos, mostrando el orden de ramificaci&oacute;n Planctomycetes, clamidias, Verrucomicrobia/Lentisphaerae. Los an&aacute;lisis filogen&eacute;ticos de genes de ARNr 23S en este estudio tambi&eacute;n apoyan un grupo monofil&eacute;tico y su orden de ramificaci&oacute;n--esta agrupaci&oacute;n es importante para entender la divisi&oacute;n celular, ya que la divisi&oacute;n de c&eacute;lula bacteriana importante prote&iacute;na FtsZ est&aacute; ausente de los miembros de dos de los filos de clamidias y Planctomycetes. En Verrucomicrobia, conocimiento de divisi&oacute;n celular es principalmente restringido el reciente informe de ftsZ en los g&eacute;neros estrechamente relacionados con Prosthecobacter y Verrucomicrobium. En este estudio, se caracterizaron los genes de la divisi&oacute;n conservada y pared celular (dcw) (ddl, ftsQ, ftsA y ftsZ) en todas las subdivisiones verrucomicrobial (1 a 4) con representantes cultivables (1 a 4). Secuencia de an&aacute;lisis y an&aacute;lisis transcripcionales en datos Verrucomicrobia y genoma an&aacute;lisis en Lentisphaerae sugirieron que la divisi&oacute;n celular se basa en FtsZ en todas las subdivisiones de verrucomicrobial y posiblemente tambi&eacute;n en la hermana filo Lentisphaerae. An&aacute;lisis de la secuencia completa de datos del genoma disponibles para representantes de Verrucomicrobia, Lentisphaerae, Chlamydia y Planctomycetes indican fuertemente que su antepasado com&uacute;n pasado pose&iacute;a un tipo de racimo del gene dcw y un mecanismo de divisi&oacute;n celular basadas en FtsZ conservado, ancestral. Esto implica que Planctomycetes y clamidias pueden haber cambiado independientemente a un mecanismo de divisi&oacute;n celular no basadas en FtsZ despu&eacute;s sus branchings separados del su &uacute;ltimo antepasado com&uacute;n con Verrucomicrobia.

Caracterizaci&oacute;n y evoluci&oacute;n de la divisi&oacute;n celular y pared celular genes de s&iacute;ntesis en los filos bacterianos Verrucomicrobia, Lentisphaerae, clamidias y Planctomycetes y filogen&eacute;tica comparaci&oacute;n con genes rRNA.

&#x7EC6;&#x83CC; mRNA &#x7684;&#x539F;&#x4F4D;&#x68C0;&#x6D4B;&#x4E0A;&#x7684;&#x51E0;&#x4EFD;&#x62A5;&#x544A;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x51FA;&#x7248;&#xFF0C;&#x5373;&#x4F7F;&#x5728;&#x73AF;&#x5883;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x76EE;&#x7684;&#xFF0C;&#x662F;&#x8981;&#x94FE;&#x63A5;&#x5230;&#x7684;&#x6709;&#x673A;&#x4F53;&#x4E2D;&#x7684;&#x6807;&#x8BC6;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;/&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x62A5;&#x544A;&#x7684; nifH &#x57FA;&#x4E8E;&#x4E00;&#x79CD;&#x524D;&#x9762;&#x6240;&#x8FF0;&#x7684; pmoA &#x534F;&#x8BAE;&#x4F7F;&#x7528;&#x8367;&#x5149;&#x6742;&#x4EA4;&#x7684; mRNA &#x539F;&#x4F4D;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7684;&#x53EF;&#x9760;&#x529E;&#x6CD5;&#x3002;dinitrogenase &#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#xFF0C;&#x9176;&#x7684;&#x56FA;&#x6C2E;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684; nifH &#x4EE3;&#x7801;&#x3002;nifH mRNA &#x5730;&#x9AD8;&#x8F9B;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x591A;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x63A2;&#x9488;&#x6742;&#x4EA4;&#x3002;&#x6742;&#x4EA4;&#x68C0;&#x6D4B;&#x6297;-DIG-&#x6297;&#x4F53;&#x8FA3;&#x6839;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x7269;&#x9176;&#x5728;&#x6807;&#x7B7E;&#x4E0A;&#x3002;&#x968F;&#x540E;&#xFF0C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x88AB;&#x653E;&#x5927;&#x4E0E;&#x8367;&#x5149;&#x6807;&#x8BB0; tyramides &#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x7684;&#x8BB0;&#x8005;&#x6C89;&#x79EF; (&#x5361;)&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x6709;&#x673A;&#x4F53;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x4F7F;&#x7528;&#x6807;&#x51C6;&#x8367;&#x5149;&#x539F;&#x4F4D;&#x6742;&#x4EA4;&#x6280;&#x672F;&#x7684; rRNA&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x529E;&#x6CD5;&#x4F7F;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E13;&#x95E8;&#x94FE;&#x63A5;&#x539F;&#x4F4D;&#x7684;&#x673A;&#x4F53;&#x7684;&#x6C2E;&#x56FA;&#x5B9A;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4FE1;&#x606F;&#x4E3A;&#x5176;&#x8EAB;&#x4EFD;&#x3002;&#x610F;&#x5916;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x6765;&#x81EA;&#x4E8E;&#x5728;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5185;&#x663E;&#x793A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x4E0D;&#x5E73;&#x8861;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7684; nifH mRNA &#x6742;&#x4EA4;&#x3002;&#x8FD9;&#x8868;&#x793A;&#x8BE5;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x7528;&#x4E8E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684; mRNA &#x8367;&#x5149;&#x539F;&#x4F4D;&#x6742;&#x4EA4; (FISH)&#xFF0C;&#x672A;&#x62A5;&#x544A;&#x8FBE;&#x73B0;&#x5728;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x751A;&#x81F3;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x6709;&#x5173;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x89C1;&#x89E3;&#x3002;

&#x8367;&#x5149;&#x539F;&#x4F4D;&#x6742;&#x4EA4;&#x6280;&#x672F;&#x7684; nifH &#x80DE;&#x5185;&#x5B9A;&#x4F4D; mRNA&#x3002;

Few reports on in situ mRNA detection in bacteria have been published, even though a major aim in environmental microbiology is to link function/activity to the identity of the organisms. This study reports a reliable approach for the in situ detection of nifH mRNA using fluorescence hybridization based on a previously described protocol for pmoA. nifH codes for a dinitrogenase reductase, a key enzyme in dinitrogen fixation. nifH mRNA was hybridized with a digoxigenin-labelled polynucleotide probe. The hybrid was detected with an anti-DIG-antibody labelled with horseradish peroxidase. Subsequently, the signal was amplified by catalyzed reporter deposition (CARD) with fluorochrome-labelled tyramides. Furthermore, the imaged organisms were identified using standard fluorescence in situ hybridization of rRNA. Thus, the approach enabled us specifically to link in situ the information from the dinitrogen fixation activity of an organism to its identity. Unexpectedly, the signals derived from nifH mRNA hybridization showed a distinct uneven pattern within the cells. This indicated that the method used could even give insights about the localization of the detected mRNA within the cell, which is a potential use of mRNA fluorescence in situ hybridization (FISH) that has not been reported up to now for bacterial cells.

Fluorescence in situ hybridization for intracellular localization of nifH mRNA.

Peu de rapports sur la d&eacute;tection d&#39;ADN messag&egrave;re in situ chez les bact&eacute;ries ont &eacute;t&eacute; publi&eacute;s, m&ecirc;me si un objectif majeur en microbiologie environnementale est de lier la fonction/activit&eacute; &agrave; l&#39;identit&eacute; des organismes. Cette &eacute;tude d&eacute;crit une m&eacute;thode fiable pour la d&eacute;tection in situe de nifH ARNm par hybridation par fluorescence bas&eacute; sur un protocole d&eacute;crit pr&eacute;c&eacute;demment pour pmoA. nifH codes pour un dinitrog&eacute;nase r&eacute;ductase, une enzyme cl&eacute; dans la fixation d&#39;azote. nifH ARNm a &eacute;t&eacute; hybrid&eacute; avec une sonde marqu&eacute;e digoxig&eacute;nine polynucl&eacute;otide. L&#39;hybride a &eacute;t&eacute; d&eacute;tect&eacute;e avec un anti-DIG-anticorps marqu&eacute; &agrave; la peroxydase de raifort. Par la suite, le signal a &eacute;t&eacute; amplifi&eacute; par la d&eacute;position du journaliste catalys&eacute;e (carte) avec tyramides marqu&eacute;s au fluorochrome. En outre, les organismes de repr&eacute;sentation ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;s par fluorescence standard hybridation in situ de l&#39;ARNr. Ainsi, l&#39;approche nous a permis sp&eacute;cifiquement pour poster un lien sur place les informations de l&#39;activit&eacute; de fixation d&#39;azote atmosph&eacute;rique de l&#39;organisme &agrave; son identit&eacute;. Contre toute attente, les signaux issus de nifH hybridation de l&#39;ARNm a montr&eacute; une nette tendance in&eacute;gale dans les cellules. Ceci indique que la m&eacute;thode utilis&eacute;e pourrait m&ecirc;me donner aper&ccedil;us sur la localisation de l&#39;ARNm d&eacute;tect&eacute;s au sein de la cellule, qui est une utilisation potentielle des ARNm hybridation in situ fluorescence (FISH) qui n&#39;a pas &eacute;t&eacute; rapport&eacute;e jusqu&#39;&agrave; maintenant pour les cellules bact&eacute;riennes.

Hybridation in situ fluorescence pour la localisation intracellulaire de nifH ARNm.

Einige Berichte &uuml;ber in-situ-mRNA-Erkennung in Bakterien sind ver&ouml;ffentlicht worden, obwohl ein wichtiges Ziel in &ouml;kologische Mikrobiologie ist Funktion/T&auml;tigkeit mit der Identit&auml;t der Organismen zu verkn&uuml;pfen. Diese Studie berichtet einen zuverl&auml;ssigen Ansatz zur in-situ Detektion von NifH mRNA mit Fluoreszenz-Hybridisierung auf ein zuvor beschriebenen Protokoll f&uuml;r PmoA basiert. NifH Codes f&uuml;r ein Dinitrogenase-Reduktase, ein Schl&uuml;sselenzym in Dinitrogen Fixierung. NifH mRNA wurde mit einem Digoxigenin-gekennzeichnet Polynukleotid-Sonde hybridisiert. Die Hybrid wurde mit einem anti-DIG-Antik&ouml;rper gekennzeichnet mit Meerrettichperoxidase konjugiert ermittelt. Anschlie&szlig;end wurde das Signal durch katalysierte Reporter Ablagerung (CARD) mit Fluorochrom-gekennzeichnet Tyramides verst&auml;rkt. Dar&uuml;ber hinaus wurden die abgebildeten Organismen identifiziert mit standard-Fluoreszenz in Situ Hybridisierung von rRNA. So konnten der Ansatz wir speziell f&uuml;r in-situ verkn&uuml;pfen die Informationen aus der Dinitrogen Fixierung Aktivit&auml;t des Organismus auf seine Identit&auml;t. Unerwartet, die Signale von NifH mRNA Hybridisierung zeigte ein bestimmtes ungleichm&auml;&szlig;ige Muster innerhalb der Zellen abgeleitet. Dies erkl&auml;rt, dass die verwendete Methode sogar Erkenntnisse &uuml;ber die Lokalisierung des erkannten mRNA innerhalb der Zelle, geben k&ouml;nnte, die eine m&ouml;gliche Verwendung von mRNA-Fluoreszenz in Situ Hybridisierung (FISH), die bis zu nicht gemeldet wurde jetzt f&uuml;r bakterielle Zellen.

Fluoreszenz in Situ Hybridisierung f&uuml;r die intrazellul&auml;re Lokalisation des NifH mRNA.

Sono stati pubblicati alcuni rapporti sulla rilevazione di mRNA in situ in batteri, anche se &egrave; un obiettivo importante in Microbiologia ambientale linkare funzione/attivit&agrave; l&#39;identit&agrave; degli organismi. Questo studio segnala un approccio affidabile per il rilevamento in situ di nifH mRNA mediante ibridazione di fluorescenza basato su un protocollo descritto in precedenza per pmoA. nifH codici per un dinitrogenase reduttasi, un enzima chiave nella fissazione di diazoto. nifH mRNA &egrave; stato ibridato con una sonda polinucleotide digoxigenin-etichettati. L&#39;ibrido &egrave; stato rilevato con un anti-DIG-anticorpi coniugati con perossidasi di rafano. Successivamente, il segnale &egrave; stato amplificato da deposizione di reporter catalizzata (CARD) con tyramides fluorocromo-etichettati. Inoltre, gli organismi di immagine sono stati identificati mediante fluorescenza standard l&#39;ibridazione in situ di rRNA. Cos&igrave;, l&#39;approccio ci ha permesso in particolare per il collegamento in situ le informazioni dall&#39;attivit&agrave; dinitrogen fissazione di un organismo alla sua identit&agrave;. Inaspettatamente, i segnali derivano da ibridazione di mRNA nifH ha mostrato un pattern irregolare distinto all&#39;interno delle cellule. Questo indicato che il metodo utilizzato potrebbe dare anche intuizioni circa la localizzazione del mRNA rilevati all&#39;interno della cellula, che &egrave; un potenziale utilizzo della fluorescenza mRNA l&#39;ibridazione in situ (FISH) che non &egrave; stato segnalato fino a ora per le cellule batteriche.

L&#39;ibridazione in situ per la localizzazione intracellulare di nifH mRNA.

&#x7D30;&#x83CC;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; in situ mRNA &#x691C;&#x51FA;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x74B0;&#x5883;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x3067;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x76EE;&#x7684;&#x95A2;&#x6570;/&#x6D3B;&#x52D5;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x7269;&#x306E; id &#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x516C;&#x958B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;mRNA &#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x4EA4;&#x914D;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066; pmoA &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x524D;&#x8FF0;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F; nifH &#x306E; in situ &#x691C;&#x51FA;&#x306E;&#x4FE1;&#x983C;&#x6027;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;dinitrogenase &#x306E;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x5185;&#x7A92;&#x7D20;&#x56FA;&#x5B9A;&#x9175;&#x7D20;&#x306E; nifH &#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3067;&#x3059;&#x3002;nifH mRNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9; &#x30B8;&#x30B4;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B2;&#x30CB;&#x30F3;&#x6A19;&#x8B58;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3068;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30BA;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x6297; DIG &#x3067;&#x897F;&#x6D0B;&#x30EF;&#x30B5;&#x30D3;&#x30DA;&#x30EB;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#x6A19;&#x8B58;&#x6297;&#x4F53;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x3001;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306F;&#x87A2;&#x5149;&#x8272;&#x7D20;&#x6A19;&#x8B58; tyramides &#x3068;&#x89E6;&#x5A92;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x6C88;&#x7740; &#xFF08;&#x30AB;&#x30FC;&#x30C9;&#xFF09; &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5897;&#x5E45;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x6A19;&#x6E96;&#x86CD;&#x5149;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; rRNA &#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x306E;&#x4EA4;&#x914D;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x7279;&#x306B;&#x4E0A;&#x76AE;&#x5185;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3092;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x3068;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x4E8C;&#x7A92;&#x7D20;&#x56FA;&#x5B9A;&#x6D3B;&#x6027;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x60C5;&#x5831;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3002;&#x7A81;&#x7136;&#x3001;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5185;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x4E0D;&#x5747;&#x7B49;&#x306B;&#x660E;&#x78BA;&#x306A;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F; nifH mRNA &#x306E;&#x4EA4;&#x914D;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x4F7F;&#x7528;&#x6CD5;&#x3082;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F; mRNA &#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306E;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x529B;&#x306B;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x306E;&#x4EA4;&#x914D; (&#x9B5A;) &#x306E; mRNA &#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x4F7F;&#x7528;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4ECA;&#x3067;&#x3059;&#x30BB;&#x30EB;&#x5185;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x86CD;&#x5149; in situ &#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; nifH &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5C40;&#x5728;&#x306E; mRNA&#x3002;

&#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6D0;&#xB798;&#xC758; mRNA &#xAC80;&#xC0C9; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;, &#xD658;&#xACBD; &#xBBF8;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB294; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xC758; &#xC815;&#xCCB4;&#xC131; &#xAE30;&#xB2A5;/&#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC5D0; &#xCD9C;&#xD310; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBCF4;&#xACE0; nifH Pmoa&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC124;&#xBA85;&#xD55C; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC744; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD615;&#xAD11; &#xAD50; &#xC7A1; &#xD558;&#xB294; Mrna&#xC758; &#xC6D0;&#xB798;&#xC758; &#xC7A5;&#xC18C;&#xC5D0; &#xAC80;&#xCD9C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC2E0;&#xB8B0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC811;&#xADFC;&#xBC95;. dinitrogenase reductase &#xC774;&#xC9C8;&#xC18C; &#xACE0;&#xC815;&#xC5D0; &#xC8FC;&#xC694; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; nifH &#xCF54;&#xB4DC;. nifH polynucleotide digoxigenin &#xC154; &#xC11C; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; mRNA hybridized&#xB294;. &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xD56D; &#xC548;&#xD2F0;-DIG-&#xCCB4; &#xC154; &#xC11C; &#xC591; &#xACE0;&#xCD94;&#xB0C9;&#xC774; &#xACFC;&#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xADF8; &#xD6C4;, &#xCD09;&#xB9E4; &#xAE30;&#xC790; &#xC99D; &#xCC29; (&#xCE74;&#xB4DC;) tyramides &#xD615;&#xAD11; &#xC0C9;&#xC18C;&#xB85C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2E0;&#xD638; &#xC99D;&#xD3ED; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C; &#xAD70;&#xB370; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD45C;&#xC900; &#xD615;&#xAD11; &#xC81C;&#xC790;&#xB9AC; &#xAD50; &#xC7A1; Rrna&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC811;&#xADFC; &#xD2B9;&#xD788; &#xC6D0;&#xB798;&#xC758; &#xC7A5;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0;&#xD560; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC0DD;&#xBA85;&#xCCB4;&#xC758; &#xC815;&#xCCB4;&#xC131; &#xC774;&#xC9C8;&#xC18C; &#xACE0;&#xC815; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC608;&#xAE30;&#xCE58; &#xC54A;&#xAC8C;, &#xC2E0;&#xD638;&#xB294; &#xC140; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC4;&#xAC1C;&#xC758; &#xACE0;&#xB974;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xD328;&#xD134;&#xC744; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4; nifH mRNA &#xAD50; &#xC7A1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C;. &#xC774; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95; &#xC9C0;&#xAE08; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; mRNA &#xD615;&#xAD11; &#xC81C;&#xC790;&#xB9AC; &#xAD50; &#xC7A1; (&#xBB3C;&#xACE0;&#xAE30;)&#xAE4C;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB418;&#xC9C0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xC140; &#xB0B4; &#xAC80;&#xC0C9; &#xB41C; Mrna&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC904;&#xB3C4; &#xC218; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD615;&#xAD11; &#xC81C;&#xC790;&#xB9AC; &#xAD50; &#xC7A1; Nifh&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; mRNA.

Algunos informes en la detecci&oacute;n de mRNA in situ en las bacterias han sido publicados, aunque un objetivo importante en microbiolog&iacute;a ambiental es vincular la funci&oacute;n o actividad a la identidad de los organismos. Este estudio divulga un acercamiento confiable para la detecci&oacute;n in situ de nifH mRNA utilizando la hibridaci&oacute;n de la fluorescencia basado en un protocolo previamente descrito para PMO. nifH codifica para una dinitrogenasa reductasa, una enzima clave en la fijaci&oacute;n de dinitr&oacute;geno. nifH mRNA fue cruzado por hibridaci&oacute;n con una sonda marcada con digoxigenina Polinucle&oacute;tido. El h&iacute;brido fue detectado con un anti-DIG-anticuerpo marcado con peroxidasa de r&aacute;bano. Posteriormente, la se&ntilde;al fue amplificada por la deposici&oacute;n de reportero catalizada (tarjeta) con tyramides marcado con fluorocromo. Adem&aacute;s, los organismos reflejados se identificaron usando est&aacute;ndar fluorescencia hibridaci&oacute;n in situ del rRNA. As&iacute;, el enfoque permiti&oacute; espec&iacute;ficamente enlace in situ la informaci&oacute;n de la actividad de fijaci&oacute;n de dinitr&oacute;geno de un organismo a su identidad. Inesperadamente, las se&ntilde;ales derivan de hibridaci&oacute;n de mRNA nifH demostrado un patr&oacute;n distinto de desigual dentro de las c&eacute;lulas. Esto indica que el m&eacute;todo utilizado incluso podr&iacute;a dar informaci&oacute;n sobre la localizaci&oacute;n del mRNA detectado dentro de la c&eacute;lula, que es un uso potencial del mRNA hibridaci&oacute;n fluorescente in situ (FISH) que no se ha divulgado hasta ahora para las c&eacute;lulas bacterianas.

Hibridaci&oacute;n fluorescente in situ para la localizaci&oacute;n intracelular de nifH mRNA.

&#x8367;&#x5149;&#x539F;&#x4F4D;&#x6742;&#x4EA4;&#x6280;&#x672F; (FISH) &#x4F7F;&#x7528;&#x8367;&#x5149;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684; DNA &#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x63A2;&#x9488;&#x539F;&#x4F4D;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7684;&#x538C;&#x6C27;&#x6C28;&#x6C27;&#x5316;&#x83CC; &#xFF08;&#x538C;&#x6C27;&#xFF09; &#x5DF2;&#x6210;&#x529F;&#x5E94;&#x7528;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x6807;&#x51C6;&#x9C7C;&#x534F;&#x8BAE;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x4EE5;&#x76F4;&#x89C2;&#x663E;&#x793A;&#x4ECE;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5BA4;&#x53CD;&#x5E94;&#x5668;&#x5E9F;&#x6C34;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x4E2D;&#x7684;&#x538C;&#x6C27;&#x6C28;&#x6C27;&#x5316;&#x7EC6;&#x83CC;&#x4EA7;&#x751F;&#x53EA;&#x6709;&#x5FAE;&#x5F31;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x88AB;&#x53D6;&#x5F97;&#x901A;&#x8FC7;&#x4FEE;&#x6539;&#x6807;&#x51C6;&#x7684;&#x9C7C;&#x534F;&#x8BAE;&#x3001; &#x4F7F;&#x7528;&#x80BD;&#x6838;&#x9178;&#x63A2;&#x9488; (PNA FISH)&#xFF0C;&#x6216;&#x5E94;&#x7528;&#x9A6C;&#x841D;&#x535C;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x7269;&#x9176; (HRP-) &#x6807;&#x8BB0;&#x63A2;&#x9488;&#x548C;&#x968F;&#x540E;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x7684;&#x8BB0;&#x8005;&#x6C89;&#x79EF; (&#x5361;&#x9C7C;)&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x4ECE;&#x4E0D;&#x540C;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5BA4;&#x5E9F;&#x6C34;&#x538C;&#x6C27;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x6837;&#x54C1;&#x548C;&#x60AC;&#x6D6E;&#x7684;&#x538C;&#x6C27;&#x751F;&#x7269;&#x53CD;&#x5E94;&#x5668;&#x900F;&#x9732;&#x4FEE;&#x6539;&#x540E;&#x7684;&#x6807;&#x51C6;&#x9C7C;&#x534F;&#x8BAE;&#x548C;&#x5DF4;&#x52D2;&#x65AF;&#x5766;&#x6C11;&#x65CF;&#x6743;&#x529B;&#x673A;&#x6784;&#x9C7C;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#x4EA7;&#x751F;&#x540C;&#x6837;&#x5F3A;&#x8367;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4E0A;&#x7684;&#x6BD4;&#x8F83;&#x5206;&#x6790;&#x6682;&#x505C;&#x751F;&#x7269;&#x8D28;&#xFF0C;&#x4F46;&#x53EA;&#x6709;&#x5FAE;&#x5F31;&#x4FE1;&#x53F7;&#x83B7;&#x5F97;&#x4E0E;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x6837;&#x54C1;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x56FA;&#x5B9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9176;&#x9884;&#x5904;&#x7406;&#x548C;&#x589E;&#x52A0; PNA &#x9C7C;&#x8BAE;&#x5B9A;&#x4E66;&#x7684;&#x6742;&#x4EA4;&#x65F6;&#x95F4;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x52A0;&#x5F3A;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x6837;&#x54C1;&#x4E2D;&#x7684;&#x63A2;&#x5934;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x3002;&#x5361;&#x9C7C;&#x603B;&#x662F;&#x751F;&#x4EA7;&#x56DB;&#x500D;&#x66F4;&#x5F3A;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x6307;&#x5B9A;&#x8367;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x6B63;&#x5982;&#x5728;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x4E00;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x62A5;&#x544A;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x7531;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x7269;&#x9176;&#x6240;&#x81F4;&#x635F;&#x5BB3;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x7269;&#x9176;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x53D1;&#x5C55;&#x5E72;&#x6270;&#x8FD8;&#x6307;&#x51FA;&#x50CF;&#x785D;&#x5316; europea &#x6709;&#x6C27;&#x94F5;&#x6C27;&#x5316;&#x5242;&#x548C;&#x786B;&#x9178;&#x51CF;&#x901F;&#x5668;&#x50CF; Desulfobacter postgatei &#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6CA1;&#x6709;&#x5E72;&#x6270;&#x6307;&#x51FA;&#x5176;&#x4ED6;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x7269;&#x9176;&#x6297;&#x4F53;&#x9633;&#x6027;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x5361;&#x9C7C;&#x4E0D;&#x53EA;&#x635F;&#x5BB3;&#x7531;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x7269;&#x9176;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x7EC6;&#x80DE;&#x706D;&#x6D3B;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x7269;&#x9176;&#x4E0E; HCl &#x6216; autoclavation/&#x5DF4;&#x6C0F;&#x6740;&#x83CC;&#x7684;&#x9884;&#x5904;&#x7406;&#x5931;&#x8D25;&#x5230;&#x5904;&#x4E8E;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x7269;&#x9176;&#xFF0C;&#x4F46; H(2)O(2) &#x5927;&#x5927;&#x51CF;&#x5C11;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x8FC7;&#x6C27;&#x5316;&#x7269;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x6700;&#x4F73;&#x706D;&#x6D3B;&#x3001; &#x4E0D;&#x540C; H(2)O(2) &#x6D53;&#x5EA6;&#x548C;&#x5B75;&#x5316;&#x65F6;&#x95F4;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x9700;&#x8981;&#x6839;&#x636E;&#x6837;&#x54C1;&#x7684;&#x6027;&#x8D28;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x5E94;&#x59CB;&#x7EC8;&#x5C06;&#x5355;&#x72EC;&#x786E;&#x5B9A;&#x6BCF;&#x4EFD;&#x7814;&#x7A76;&#x62A5;&#x544A;&#x3002;

&#x539F;&#x4F4D;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7684;&#x538C;&#x6C27;&#x6C28;&#x6C27;&#x5316;&#x7EC6;&#x83CC;&#x751F;&#x7269;&#x5E9F;&#x6C34;&#x5904;&#x7406;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x9C7C;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x4F18;&#x5316;&#x3002;

Fluorescence in situ hybridization (FISH) using fluorochrome-labeled DNA oligonucleotide probes has been successfully applied for in situ detection of anaerobic ammonium oxidizing (anammox) bacteria. However, application of the standard FISH protocols to visualize anammox bacteria in biofilms from a laboratory-scale wastewater reactor produced only weak signals. Increased signal intensity was achieved either by modifying the standard FISH protocol, using peptide nucleic acid probes (PNA FISH), or applying horse radish peroxidase- (HRP-) labeled probes and subsequent catalyzed reporter deposition (CARD-FISH). A comparative analysis using anammox biofilm samples and suspended anammox biomass from different laboratory wastewater bioreactors revealed that the modified standard FISH protocol and the PNA FISH probes produced equally strong fluorescence signals on suspended biomass, but only weak signals were obtained with the biofilm samples. The probe signal intensities in the biofilm samples could be enhanced by enzymatic pre-treatment of fixed cells, and by increasing the hybridization time of the PNA FISH protocol. CARD-FISH always produced up to four-fold stronger fluorescent signals but unspecific fluorescence signals, likely caused by endogenous peroxidases as reported in several previous studies, compromised the results. Interference of the development of fluorescence intensity with endogenous peroxidases was also observed in cells of aerobic ammonium oxidizers like Nitrosomonas europea, and sulfate-reducers like Desulfobacter postgatei. Interestingly, no interference was observed with other peroxidase-positive microorganisms, suggesting that CARD-FISH is not only compromised by the mere presence of peroxidases. Pre-treatment of cells to inactivate peroxidase with HCl or autoclavation/pasteurization failed to inactive peroxidases, but H(2)O(2) significantly reduced endogenous peroxidase activity. However, for optimal inactivation, different H(2)O(2) concentrations and incubation time may be needed, depending on nature of sample and should therefore always be individually determined for each study.

Optimization of three FISH procedures for in situ detection of anaerobic ammonium oxidizing bacteria in biological wastewater treatment.

Hybridation in situ fluorescence (FISH) &agrave; l&#39;aide de sondes oligonucl&eacute;otides d&#39;ADN marqu&eacute;s au fluorochrome a &eacute;t&eacute; appliqu&eacute;e avec succ&egrave;s pour la d&eacute;tection in situe d&#39;ammonium ana&eacute;robie (anammox) bact&eacute;ries oxydant. Cependant, application des protocoles standards poissons visualiser anammox bact&eacute;ries dans les biofilms d&#39;un r&eacute;acteur de laboratoire des eaux us&eacute;es produites uniquement les signaux faibles. Intensit&eacute; du signal accrue a &eacute;t&eacute; atteint, soit en modifiant le protocole standard de poissons, &agrave; l&#39;aide de sondes d&#39;acide nucl&eacute;ique peptidique (PNA FISH) ou en appliquant le cheval radis peroxydase-(HRP-) &eacute;tiquet&eacute; les sondes et le d&eacute;p&ocirc;t subs&eacute;quent journaliste catalys&eacute;e (carte-poisson). Une analyse comparative &agrave; l&#39;aide d&#39;anammox biofilm &eacute;chantillons et suspension anammox biomasse des eaux us&eacute;es de laboratoire diff&eacute;rents bior&eacute;acteurs ont r&eacute;v&eacute;l&eacute; que le mis &agrave; jour le protocole standard de poissons et les sondes PNA FISH aurait &eacute;t&eacute; tout aussi forte fluorescence signaux sur suspendu de biomasse, mais seulement de faibles signaux ont &eacute;t&eacute; obtenus avec les &eacute;chantillons du biofilm. Les intensit&eacute;s de signal de sonde dans les &eacute;chantillons de biofilm pourraient &ecirc;tre am&eacute;lior&eacute;es par pr&eacute;traitement enzymatique des cellules fixes et en augmentant le temps de l&#39;hybridation du protocole PNA FISH. CARTE-poisson a toujours produit jusqu&#39;&agrave; quatre signaux fluorescents plus fort, mais compromise de signaux de fluorescence non-sp&eacute;cifique, probablement caus&eacute;s par les peroxydases endog&egrave;nes tel que rapport&eacute; dans plusieurs &eacute;tudes ant&eacute;rieures, les r&eacute;sultats. Interf&eacute;rence de l&#39;&eacute;volution de l&#39;intensit&eacute; de fluorescence avec des peroxydases endog&egrave;nes a &eacute;galement &eacute;t&eacute; observ&eacute; dans les cellules des oxydants a&eacute;robie d&#39;ammonium comme Nitrosomonas europea et sulfate-r&eacute;ducteurs comme Desulfobacter postgatei. Fait int&eacute;ressant, aucune interf&eacute;rence n&#39;a &eacute;t&eacute; observ&eacute;e avec d&#39;autres microorganismes peroxydase-positif, ce qui sugg&egrave;re que carte-poisson n&#39;est pas seulement compromise par la simple pr&eacute;sence des peroxydases. Pr&eacute;traitement des cellules pour inactiver la peroxydase avec HCl ou autoclavation/pasteurisation ne peroxydases inactifs, mais H(2)O(2) a consid&eacute;rablement r&eacute;duit l&#39;activit&eacute; peroxydasique endog&egrave;ne. Toutefois, pour l&#39;inactivation optimale, les diff&eacute;rentes concentrations de H(2)O(2) et les temps d&#39;incubation peuvent &ecirc;tre n&eacute;cessaire, selon la nature de l&#39;&eacute;chantillon et qui doivent donc toujours &ecirc;tre individuellement d&eacute;termin&eacute; pour chaque &eacute;tude.

Optimisation des trois proc&eacute;dures de poisson pour la d&eacute;tection in situe des oxydants de bact&eacute;ries dans l&#39;&eacute;puration biologique ana&eacute;robie de l&#39;ammonium.

Fluoreszenz in Situ Hybridisierung (FISH) mit Fluorochrom-markierten DNA-Oligonukleotid Sonden wurde f&uuml;r in-situ Detektion von anaerobe Ammonium oxidieren (Anammox) Bakterien erfolgreich angewendet. Anwendung von Fisch-Standardprotokollen Anammox-Bakterien in Biofilmen aus einem Laborma&szlig;stab Abwasser Reaktor visualisieren produziert wird jedoch nur schwache Signale. Erh&ouml;hte Signalintensit&auml;t wurde entweder durch &Auml;ndern des standard-Fisch-Protokolls, verwenden von Peptid-Nukleins&auml;ure Pr&uuml;fspitzen (PNA FISH) oder durch Pferd Rettich Peroxydase-(HRP-) beschriftet, Sonden und nachfolgende katalysierten Reporter Deposition (CARD-FISH) erreicht. Eine Vergleichsanalyse mit Anammox Biofilm Proben und ausgesetzten Anammox Biomasse aus verschiedenen Labor Abwasser Bioreaktoren ergab, dass das ge&auml;nderte Standardprotokoll f&uuml;r die Fische und die PNA FISH-Sonden gleicherma&szlig;en starke Fluoreszenzsignale auf produziert unterbrochen Biomasse, aber nur schwache Signale wurden erzielt mit den Biofilm-Beispielen. Die Sonde Signal Intensit&auml;ten in den Biofilm-Beispielen k&ouml;nnte durch eine enzymatische Vorbehandlung fixierte Zellen und erh&ouml;hen die Hybridisierung-Zeit des Protokolls PNA Fisch verbessert werden. CARD-FISH immer produziert bis zu vierfach st&auml;rkere Signale fluoreszierende, aber unspezifisch Fluoreszenzsignale, wahrscheinlich verursacht durch endogene Peroxidasen, wie berichtet in mehreren fr&uuml;heren Untersuchungen, gef&auml;hrdet die Ergebnisse. Beeintr&auml;chtigung der Entwicklung der Fluoreszenz Intensit&auml;t endogener Peroxidasen wurde auch in Zellen des aeroben Ammonium Oxidationsmittel wie Nitrosomonas Europea und Sulfat-Reduzier wie Desulfobacter Postgatei beobachtet. Interessanterweise wurde keine Interferenzen mit anderen Peroxydase-Positive Mikroorganismen, die darauf hindeutet, dass CARD-FISH nicht nur durch die blo&szlig;e Anwesenheit von Peroxidasen beeintr&auml;chtigt wird beobachtet. Vorbehandlung der Zellen zu inaktivieren Peroxydase mit HCl oder Autoclavation/Pasteurisierung vers&auml;umt inaktive Peroxidasen, sondern H(2)O(2) deutlich reduziert endogene Peroxidase-Aktivit&auml;t. Jedoch, f&uuml;r optimale Inaktivierung, verschiedene H(2)O(2)-Konzentrationen und Inkubationszeit k&ouml;nnen, je nach Art der Probe erforderlich sein und daher immer sollte werden Sie individuell f&uuml;r jede Untersuchung festgestellt.

Optimierung der drei Fische-Verfahren zur in-situ Detektion von anaerobe Ammonium oxidierende Bakterien in der biologischen Abwasserreinigung.

Fluorescenza l&#39;ibridazione in situ (FISH) utilizzando il fluorocromo-contrassegnato le sonde del oligonucleotide del DNA &egrave; stato applicato con successo per il rilevamento in situ di anaerobica dell&#39;ammonio ossidanti (anammox) batteri. Tuttavia, applicazione dei protocolli standard di pesce per visualizzare anammox batteri nei biofilm da un reattore di su scala di laboratorio delle acque reflue prodotte solo deboli segnali. Intensit&agrave; di segnale maggiore &egrave; stata ottenuta modificando il protocollo standard di pesce, utilizzando sonde di acido nucleico del peptide (PNA pesce) o applicando cavallo rafano perossidasi-(HRP-) classificati come sonde e deposizione successiva reporter catalizzata (carta-pesce). Un&#39;analisi comparativa utilizzando campioni di biofilm anammox e biomassa sospesa anammox da reflui di laboratorio diversi bioreattori ha rivelato che il protocollo standard modificato di pesce e le sonde PNA pesce prodotto altrettanto forte fluorescenza segnali su sospeso biomassa, ma solo segnali deboli sono stati ottenuti con i campioni del biofilm. L&#39;intensit&agrave; di segnale sonda nei biofilm campioni potrebbe essere rafforzata dal pretrattamento enzimatico delle cellule fisse e aumentando il tempo di ibridazione del protocollo PNA pesce. CARTA-pesce sempre prodotte fino a quattro volte pi&ugrave; forti segnali fluorescenti ma segnali di fluorescenza aspecifica, probabilmente causati dalla perossidasi endogene, come riportato in diversi studi precedenti, compromesso i risultati. Disturbi dello sviluppo dell&#39;intensit&agrave; di fluorescenza con perossidasi endogene &egrave; stata osservata anche nelle cellule di sostanze ossidanti di ammonio aerobico come Nitrosomonas europea e solfato-riduttori come Desulfobacter postgatei. &Egrave; interessante, &egrave; stata osservata alcuna interferenza con altri microrganismi perossidasi-positive, suggerendo che pesci di carta non sono compromessa solo dalla mera presenza di perossidasi. Pretrattamento delle cellule per inattivare le perossidasi con HCl o autoclavation/pastorizzazione non &egrave; riuscito a perossidasi inattive, ma H(2)O(2) significativamente ridotta attivit&agrave; perossidasica endogena. Tuttavia, per inattivazione ottimale, differenti concentrazioni di H(2)O(2) e tempo di incubazione pu&ograve; essere necessario, a seconda della natura del campione e quindi dovrebbe sempre essere determinata individualmente per ogni studio.

Ottimizzazione delle tre procedure di pesce per il rilevamento in situ di anaerobica dell&#39;ammonio ossidanti batteri nel trattamento biologico delle acque reflue.

&#x87A2;&#x5149;&#x8272;&#x7D20;&#x6A19;&#x8B58; DNA &#x306E;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9; &#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x86CD;&#x5149;&#x6027;&#x306E;&#x73FE;&#x5834;&#x306E;&#x4EA4;&#x914D; (&#x9B5A;) &#x306E;&#x5ACC;&#x6C17;&#x6027;&#x30A2;&#x30F3;&#x30E2;&#x30CB;&#x30A2;&#x9178;&#x5316; (anammox) &#x7D30;&#x83CC;&#x306E; in situ &#x691C;&#x51FA;&#x304C;&#x6B63;&#x5E38;&#x306B;&#x9069;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x30A2;&#x30CA;&#x30E2;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x7D30;&#x83CC;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA; &#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x5B9F;&#x9A13;&#x5BA4;&#x898F;&#x6A21;&#x6392;&#x6C34;&#x539F;&#x5B50;&#x7089;&#x304B;&#x3089;&#x3092;&#x8996;&#x899A;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x6A19;&#x6E96;&#x306E;&#x9B5A;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306F;&#x5F31;&#x3044;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#x307F;&#x3092;&#x751F;&#x7523;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5897;&#x52A0;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5F37;&#x5EA6;&#x306F;&#x3001;&#x9B5A;&#x306E;&#x6A19;&#x6E96;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x6838;&#x9178;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6; (PNA &#x9B5A;) &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x99AC;&#x5927;&#x6839;&#x30DA;&#x30EB;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#x6A19;&#x8B58;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3068;&#x5F8C;&#x7D9A;&#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x6C88;&#x7740; (&#x30AB;&#x30FC;&#x30C9;-&#x9B5A;)-(HRP-) &#x9069;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30DE;&#x30B9;&#x3001;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30EA;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x9B5A;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x306E;&#x6A19;&#x6E96;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x3068; PNA &#x9B5A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x5747;&#x7B49;&#x306B;&#x5F37;&#x3044;&#x86CD;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x751F;&#x7523;&#x3057;&#x305F; anammox &#x30D0;&#x30A4;&#x30AA; &#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x306E;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3068;&#x6D6E;&#x904A; anammox &#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30DE;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x5B9F;&#x9A13;&#x5BA4;&#x6392;&#x6C34;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x6BD4;&#x8F03;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x4E2D;&#x65AD;&#x304C;&#x5F31;&#x3044;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#x307F;&#x304C;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA; &#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x306E;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3092;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5F37;&#x5EA6;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA; &#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x306E;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x56FA;&#x5B9A;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x524D;&#x51E6;&#x7406;&#x304A;&#x3088;&#x3073; PNA &#x306E;&#x9B5A;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306E;&#x4EA4;&#x914D;&#x6642;&#x9593;&#x3092;&#x5897;&#x5927;&#x5F37;&#x5316;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AB;&#x30FC;&#x30C9;&#x9B5A;&#x306F;&#x5E38;&#x306B;&#x6700;&#x5927; 4 &#x500D;&#x306E;&#x5F37;&#x3044;&#x86CD;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x975E;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x86CD;&#x5149;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x3001;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x30DA;&#x30EB;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x539F;&#x56E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x4FB5;&#x5BB3;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x30DA;&#x30EB;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x306E;&#x5E72;&#x6E09;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x5F37;&#x5EA6;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306F;&#x3001;Nitrosomonas europea &#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x597D;&#x6C17;&#x6027;&#x30A2;&#x30F3;&#x30E2;&#x30CB;&#x30A2;&#x9178;&#x5316;&#x5264;&#x3068;&#x786B;&#x9178;-&#x6E1B;&#x901F;&#x6A5F; Desulfobacter postgatei &#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x3082;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;.&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x30AB;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x9B5A;&#x306E;&#x307F;&#x30DA;&#x30EB;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x5358;&#x306A;&#x308B;&#x5B58;&#x5728;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x59A5;&#x5354;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x4ED6;&#x30DA;&#x30EB;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#x967D;&#x6027;&#x306E;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x3068;&#x5E72;&#x6E09;&#x306F;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x524D;&#x51E6;&#x7406; HCl &#x307E;&#x305F;&#x306F; autoclavation/&#x6BBA;&#x83CC;&#x3068;&#x30DA;&#x30EB;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x975E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;&#x30DA;&#x30EB;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x5931;&#x6557;&#x3001;&#x30AB;&#x30BF;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x30DA;&#x30EB;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x524A;&#x6E1B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x6700;&#x9069;&#x306A;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;, &#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30AB;&#x30BF;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x6642;&#x9593;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306E;&#x6027;&#x8CEA;&#x306B;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x5E38;&#x306B;&#x3079;&#x304D;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x5404;&#x8ABF;&#x67FB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x500B;&#x5225;&#x306B;&#x5224;&#x65AD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

3 &#x3064;&#x306E;&#x9B5A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E3;&#x5ACC;&#x6C17;&#x6027;&#x30A2;&#x30F3;&#x30E2;&#x30CB;&#x30A2;&#x9178;&#x5316;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x5EC3;&#x6C34;&#x51E6;&#x7406;&#x3067;&#x306E; in situ &#x691C;&#x51FA;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3002;

&#xD615;&#xAD11; &#xC81C;&#xC790;&#xB9AC; &#xAD50; &#xC7A1; (&#xBB3C;&#xACE0;&#xAE30;)&#xC5D0; &#xD615;&#xAD11; &#xC0C9;&#xC18C;&#xB85C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; DNA oligonucleotide &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD610; &#xAE30;&#xC131; &#xC554;&#xBAA8;&#xB284; &#xC0B0;&#xD654; (anammox) &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC758; &#xC6D0;&#xB798;&#xC758; &#xC7A5;&#xC18C;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xACAC;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC801;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC2E4; &#xADDC;&#xBAA8; &#xD3D0;&#xC218; &#xBC18;&#xC751; &#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C; biofilms&#xC5D0; anammox &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; &#xD45C;&#xC900; &#xBB3C;&#xACE0;&#xAE30; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC758; &#xC801;&#xC6A9;&#xB9CC; &#xC57D;&#xD55C; &#xC2E0;&#xD638; &#xC0DD;&#xC0B0;. &#xC99D;&#xAC00; &#xC2E0;&#xD638; &#xAC15;&#xB3C4; &#xD45C;&#xC900; &#xBB3C;&#xACE0;&#xAE30; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC744; &#xC218;&#xC815;, &#xD3A9;&#xD0C0;&#xC774;&#xB4DC; &#xD575; &#xC0B0; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; (PNA &#xBB3C;&#xACE0;&#xAE30;)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB610;&#xB294; &#xC801;&#xC6A9; &#xB9D0; &#xBB34; &#xACFC;&#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C;-(HRP-) &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xBC0F; &#xD6C4;&#xC18D; &#xCD09;&#xB9E4; &#xAE30;&#xC790; &#xC99D; &#xCC29; (&#xCE74;&#xB4DC;-&#xBB3C;&#xACE0;&#xAE30;)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB2EC;&#xC131; &#xD588;&#xB2E4;. Bioreactors &#xACF5;&#xAC1C;&#xB294; &#xC218;&#xC815;&#xB41C; &#xD45C;&#xC900; &#xBB3C;&#xACE0;&#xAE30; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C; &#xBC0F; PNA &#xBB3C;&#xACE0;&#xAE30; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xB3D9;&#xB4F1; &#xD558; &#xAC8C; &#xAC15;&#xD55C; &#xD615;&#xAD11; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xB978; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC2E4; &#xD3D0;&#xC218;&#xC5D0;&#xC11C; anammox biofilm &#xC0D8;&#xD50C; &#xBC0F; &#xC77C;&#xC2DC; &#xC911;&#xB2E8; &#xB41C; anammox &#xBC14;&#xC774;&#xC624; &#xB9E4;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBE44;&#xAD50; &#xBD84;&#xC11D; &#xC911;&#xB2E8; &#xBC14;&#xC774;&#xC624; &#xB9E4;&#xC2A4;, &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xC57D;&#xD55C; &#xC2E0;&#xD638; biofilm &#xC0D8;&#xD50C; &#xD68D;&#xB4DD; &#xD588;&#xB2E4;. &#xACE0;&#xC815;&#xB41C; &#xC140;&#xC758; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC804;&#xCC98;&#xB9AC; &#xBC0F; PNA &#xBB3C;&#xACE0;&#xAE30; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC758; &#xAD50; &#xC7A1; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC744; &#xB298;&#xB824; biofilm &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xC2E0;&#xD638; &#xAC15;&#xB3C4; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCE74;&#xB4DC;-&#xBB3C;&#xACE0;&#xAE30;&#xB294; &#xD56D;&#xC0C1; &#xCD5C;&#xB300; 4 &#xBC30; &#xB354; &#xAC15;&#xD55C; &#xD615;&#xAD11; &#xC2E0;&#xD638; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBD88;&#xD2B9;&#xC815; &#xD615;&#xAD11; &#xC2E0;&#xD638;, &#xC774;&#xC804; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB41C; &#xC0DD; peroxidases &#xC544;&#xB9C8; &#xAE30;&#xC778;&#xD55C; &#xC190;&#xC0C1; &#xACB0;&#xACFC;. &#xC0DD; peroxidases &#xD615;&#xAD11; &#xAC15;&#xB3C4;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC758; &#xAC04;&#xC12D; &#xB610;&#xD55C; Nitrosomonas europea&#xC640; &#xAC19;&#xC740; &#xD638; &#xAE30;&#xC131; &#xC554;&#xBAA8;&#xB284; &#xC0B0;&#xD654; &#xC81C;&#xC640; &#xD669;&#xC0B0;-&#xD761; Desulfobacter postgatei &#xAC19;&#xC740; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xBC29;&#xD574; &#xCE74;&#xB4DC; &#xBB3C;&#xACE0;&#xAE30;&#xB9CC; peroxidases&#xC758; &#xB2E8;&#xC21C;&#xD55C; &#xC874;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC190;&#xC0C1; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xB2E4;&#xB978; &#xACFC;&#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC591;&#xC131; &#xBBF8;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC744; &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4;. HCl &#xB610;&#xB294; autoclavation/&#xC800;&#xC628; &#xC0B4; &#xADE0; &#xBC95; &#xACFC;&#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB97C; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xC140;&#xC758; &#xC804;&#xCC98;&#xB9AC; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; peroxidases&#xB97C; &#xC2E4;&#xD328; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; H(2)O(2)&#xB294; &#xD06C;&#xAC8C; &#xB0B4; &#xC778; &#xC131; &#xACFC;&#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xAC10;&#xC18C;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xCD5C;&#xC801;&#xC758; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;, &#xB2E4;&#xB978; H(2)O(2) &#xB18D;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xBD80; &#xD654; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC758; &#xC131;&#xACA9;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD544;&#xC694;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xD56D;&#xC0C1; &#xD574;&#xC57C; &#xB420; &#xAC1C;&#xBCC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC01; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACB0;&#xC815;.

&#xD610; &#xAE30;&#xC131; &#xC554;&#xBAA8;&#xB284; &#xC0B0;&#xD654; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD3D0;&#xC218; &#xCC98;&#xB9AC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xD604;&#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xBB3C;&#xACE0;&#xAE30; &#xC808;&#xCC28;&#xC758; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654;.

Hibridaci&oacute;n fluorescente in situ (FISH) con sondas de oligonucle&oacute;tidos de ADN marcado con fluorocromo se ha aplicado con &eacute;xito para la detecci&oacute;n in situ de anaerobio oxidadoras de amonio (anammox) bacterias. Sin embargo, la aplicaci&oacute;n de los protocolos est&aacute;ndar de pescado para visualizar bacterias anammox en biofilms de un reactor de aguas residuales de laboratorio produce s&oacute;lo se&ntilde;ales d&eacute;biles. Se&ntilde;al mayor intensidad fue alcanzada por modificar el protocolo est&aacute;ndar de pescado, utilizando sondas de &aacute;cido nucleico del p&eacute;ptido (PNA FISH) o aplicar caballo r&aacute;bano peroxidasa-(HRP) sondas y deposici&oacute;n subsecuente reportero catalizada (tarjeta-FISH). Suspendido de un an&aacute;lisis comparativo usando anammox biofilm muestras y biomasa anammox suspendidos de las aguas residuales de laboratorio diferentes Biorreactores revelaron que el protocolo est&aacute;ndar modificado de pescado y las sondas de PNA pescado producci&oacute;n igualmente fuerte fluorescencia se&ntilde;ales en biomasa, pero s&oacute;lo se&ntilde;ales d&eacute;biles se obtuvieron con las muestras de biofilm. Las intensidades de la se&ntilde;al de la sonda en las muestras de biofilm podr&iacute;an mejorarse pre-tratamiento enzim&aacute;tico de c&eacute;lulas fijas y aumentando el tiempo de la hibridaci&oacute;n del protocolo PNA pescado. TARJETA-pescado siempre produce hasta cuatro veces m&aacute;s fuertes se&ntilde;ales de fluorescente pero comprometida de las se&ntilde;ales de la fluorescencia inespec&iacute;fica, probablemente causadas por peroxidasas end&oacute;genas, como se inform&oacute; en varios estudios anteriores, los resultados. Interferencia del desarrollo de la intensidad de fluorescencia con peroxidasas end&oacute;genas tambi&eacute;n fue observado en las c&eacute;lulas de oxidantes de amonio aer&oacute;bico como Nitrosomonas europea y reductores de sulfato como Desulfobacter postgatei. Curiosamente, no se observ&oacute; ninguna interferencia con otros microorganismos de peroxidasa-positivos, lo que sugiere que tarjeta-FISH est&aacute; comprometido no s&oacute;lo por la mera presencia de peroxidasas. Pretratamiento de las c&eacute;lulas para inactivar la peroxidasa con &aacute;cido clorh&iacute;drico o autoclavation/pasteurizaci&oacute;n no peroxidasas inactivos, pero h redujo significativamente la actividad de la peroxidasa end&oacute;gena. Sin embargo, para inactivaci&oacute;n &oacute;ptima, diferentes concentraciones de h y tiempo de incubaci&oacute;n se necesite, dependiendo de la naturaleza de la muestra y deben por lo tanto siempre determinar&aacute; individualmente para cada estudio.

Optimizaci&oacute;n de tres procedimientos de pescado para la detecci&oacute;n in situ de anaerobio oxidadoras de amonio bacterias en el tratamiento biol&oacute;gico de aguas residuales.

&#x597D;&#x6C27;&#x6C61;&#x6C34;&#x9897;&#x7C92;&#x662F;&#x5BC6;&#x3001; &#x7403;&#x5F62;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#xFF0C;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x662F;&#x6709;&#x7528;&#x548C;&#x6709;&#x524D;&#x9014;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#xFF0C;&#x5728;&#x6C61;&#x6C34;&#x5904;&#x7406;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x771F;&#x83CC;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5B9E;&#x65BD;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x8BD5;&#x56FE;&#x901A;&#x8FC7; 18 &#x548C; 5.8S &#x5E8F;&#x5217;&#x5206;&#x6790;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E2D;&#x597D;&#x6C27;&#x9897;&#x7C92;&#x771F;&#x83CC;&#x591A;&#x6837;&#x6027; rRNA &#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x5185;&#x90E8;&#x8F6C;&#x5F55;&#x95F4;&#x9694;&#x533A;&#x3002;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x6240;&#x9009;&#x4E3A;&#x6B64;&#x76EE;&#x7684;&#xFF0C;&#x9002;&#x5F53;&#x7684;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94;&#x548C;&#x6D4B;&#x5E8F;&#x5F15;&#x7269;&#x548C;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E86;&#x4E00;&#x79CD;&#x6539;&#x8FDB;&#x7684; DNA &#x5206;&#x79BB;&#x534F;&#x8BAE;&#x3002;41 &#x682A;&#x7684;&#x5E8F;&#x5217;&#x88AB;&#x5206;&#x914D;&#x7ED9;&#x5206;&#x7C7B;&#x7EC4; Pleosporaceae&#x3001; Xylariales&#x3001; Theleobolaceae&#x3001; &#x9EA6;&#x89D2;&#x3001; &#x51FA;&#x82BD;&#x77ED;&#xFF0C;&#x5FF5;&#x73E0;&#x83CC; boleticola &#x548C; Tremellomycetes &#x5185;&#x771F;&#x83CC;&#x3002;&#x539F;&#x6765;&#x9897;&#x7C92;&#x4E2D;&#x7684;&#x771F;&#x83CC;&#x7FA4;&#x843D;&#x7EC4;&#x6210;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x5E9F;&#x6C34;&#x7C7B;&#x578B;&#x548C;&#x9897;&#x7C92;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x9636;&#x6BB5;&#x3002;

&#x597D;&#x6C27;&#x6C61;&#x6C34;&#x9897;&#x7C92;&#x4E2D;&#x771F;&#x83CC;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#x8BC4;&#x4F30; 18 rRNA &#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x5176;&#x5E8F;&#x5217;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

Aerobic sewage granules are dense, spherical biofilms, regarded as a useful and promising tool in wastewater treatment processes. Recent studies revealed that fungi can be implemented in biofilm formation. This study attempts to uncover the fungal diversity in aerobic granules by sequence analysis of the 18S and 5.8S rRNA genes and the internal transcribed spacer regions. For this purpose, appropriate PCR and sequencing primer sets were selected and an improved DNA isolation protocol was used. The sequences of 41 isolates were assigned to the taxonomic groups Pleosporaceae, Xylariales, Theleobolaceae, Claviceps, Aureobasidium, Candida boleticola, and Tremellomycetes within the fungi. It turned out that the fungal community composition in granules depended on the wastewater type and the phase of granule development.

The diversity of fungi in aerobic sewage granules assessed by 18S rRNA gene and ITS sequence analyses.

Granules d&#39;&eacute;puration a&eacute;robie sont sph&eacute;riques et denses, biofilms, consid&eacute;r&eacute;s comme un outil utile et prometteur pour le traitement des eaux us&eacute;es. Des &eacute;tudes r&eacute;centes ont r&eacute;v&eacute;l&eacute; que les champignons peuvent &ecirc;tre impl&eacute;ment&eacute;es dans la formation de biofilm. Cette &eacute;tude tente de d&eacute;couvrir la diversit&eacute; fongique dans les granules a&eacute;robies par analyse de la s&eacute;quence de 18 s et 5,8 s ARNr et interne transcrit r&eacute;gions interg&eacute;niques. &Agrave; cette fin, la PCR appropri&eacute;e et l&#39;amorce de s&eacute;quen&ccedil;age ensembles ont &eacute;t&eacute; s&eacute;lectionn&eacute;s et un protocole d&#39;isolement de l&#39;ADN am&eacute;lior&eacute; a &eacute;t&eacute; utilis&eacute;. Les s&eacute;quences de 41 isolats ont &eacute;t&eacute; assign&eacute;s aux groupes taxonomiques Pl&eacute;osporaceae, Theleobolaceae, Claviceps, Xylariaceae Aureobasidium, Candida boleticola et Tremellomycetes dans les champignons. Il s&#39;est av&eacute;r&eacute; que la composition de la communaut&eacute; fongique dans les granules d&eacute;pend du type de traitement des eaux us&eacute;es et la phase de d&eacute;veloppement de granule.

La diversit&eacute; des champignons dans les granules d&#39;&eacute;puration a&eacute;robie &eacute;valu&eacute;s par le g&egrave;ne de l&#39;ARNr 18 s et sa s&eacute;quence d&#39;analyses.

Aerobe Abwasser Granulate sind dichten, kugelf&ouml;rmigen Biofilme, als ein n&uuml;tzliches und vielversprechenden Werkzeug im Abwasser Behandlung verarbeitet. J&uuml;ngste Studien gezeigt, dass Pilze im Biofilm-Bildung umgesetzt werden k&ouml;nnen. Diese Studie versucht die pilzartige Verschiedenartigkeit aerobe Granulat durch Sequenzanalyse der 18S und 5.8S aufzudecken rRNA gene und die interne transkribiert Abstandhalter Regionen. F&uuml;r diesen Zweck, geeignete PCR und Sequenzierung Grundierung S&auml;tze wurden ausgew&auml;hlt und eine verbesserte DNA-Lokalisierungs-Protokoll wurde verwendet. Die Sequenzen von 41-Isolaten wurden beauftragt, die taxonomischen Gruppen Pleosporaceae, Xylariales, Theleobolaceae, Claviceps und, Candida Boleticola und Tremellomycetes innerhalb der Pilze. Es stellte sich heraus, dass die Abwasser-Typ und der Entwicklungsphase Untermodul pilzartigen Gemeinschaft Komposition in Granulat abh&auml;ngig.

Die Vielfalt der Pilze im aeroben Abwasser Granulat beurteilt 18S rRNA gen und seine Sequenz Analysen.

Granuli di depurazione aerobica sono biofilm denso, sferico, considerato come uno strumento utile e promettente nei processi di trattamento delle acque reflue. Recenti studi hanno rivelato che i funghi possono essere implementate nella formazione di biofilm. Questo studio cerca di scoprire la diversit&agrave; fungosa in granuli aerobiche mediante analisi di sequenza del 18S e 5.8S geni rRNA e l&#39;interno trascritto regioni distanziale. Per questo scopo, PCR appropriato e primer di sequenziamento sono stati selezionati set ed &egrave; stato utilizzato un protocollo di isolamento del DNA migliorato. Le sequenze di 41 isolati sono state assegnate a gruppi tassonomici, Pleosporaceae, Xylariales, Theleobolaceae, Claviceps, Aureobasidium, Candida boleticola e Auriculariales all&#39;interno dei funghi. Si &egrave; scoperto che la composizione della Comunit&agrave; fungine in granuli dipendeva dal tipo di acque reflue e la fase di sviluppo del granulo.

La diversit&agrave; di funghi in granuli di depurazione aerobica valutati da gene del rRNA 18S e relativa sequenza di analisi.

&#x597D;&#x6C17;&#x6027;&#x4E0B;&#x6C34;&#x9846;&#x7C92;&#x5BC6;&#x3001;&#x7403;&#x5F62;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA; &#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;, &#x6392;&#x6C34;&#x51E6;&#x7406;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6709;&#x7528;&#x306A;&#x6709;&#x671B;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x307F;&#x306A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x83CC;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA; &#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x5B9F;&#x88C5;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306F; 18 &#x79D2;&#x3068; 5.8 s &#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x597D;&#x6C17;&#x6027;&#x9846;&#x7C92;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x771F;&#x83CC;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x3088;&#x3046;&#x3068; rRNA &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5185;&#x90E8;&#x8EE2;&#x5199;&#x30B9;&#x30DA;&#x30FC;&#x30B5;&#x30FC;&#x9818;&#x57DF;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x3001;&#x9069;&#x5207;&#x306A; PCR &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC; &#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x304C;&#x9078;&#x629E;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x6539;&#x5584;&#x306E; DNA &#x306E;&#x9694;&#x96E2;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x304C;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9; 41 &#x682A;&#x306E;&#x5206;&#x985E;&#x5B66;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306B;&#x5272;&#x308A;&#x5F53;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F; Pleosporaceae&#x3001;Xylariales&#x3001;Theleobolaceae&#x3001;Claviceps&#x3001;&#x30A2;&#x30A6;&#x30EC;&#x30AA;&#x30D0;&#x30B7;&#x30B8;&#x30A6;&#x30E0;&#x3001;&#x30AB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30C0;&#x306E; boleticola&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; Tremellomycetes &#x83CC;&#x5185;&#x3002;&#x83CC;&#x7FA4;&#x96C6;&#x7D44;&#x6210;&#x306E;&#x9846;&#x7C92;&#x6392;&#x6C34;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x3068;&#x9846;&#x7C92;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x6BB5;&#x968E;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x597D;&#x6C17;&#x6027;&#x4E0B;&#x6C34;&#x9846;&#x7C92;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x83CC;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x6027; 18S rRNA &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5206;&#x6790;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3002;

&#xC5D0;&#xC5B4;&#xB85C;&#xBE45; &#xD558; &#xC218;&#xACFC; &#xB9BD; &#xBC00;&#xB3C4;, &#xAD6C;&#xD615; biofilms, &#xD3D0;&#xC218; &#xCC98;&#xB9AC; &#xACF5;&#xC815;&#xC5D0; &#xC720;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xC720;&#xB9DD;&#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB85C; &#xAC04;&#xC8FC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xADFC; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xBC1D;&#xD600; biofilm &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xACF0; &#xD321;&#xC774; &#xAD6C;&#xD604;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; 18S &#xBC0F; 5.8s&#xC758; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD638; &#xAE30;&#xC131;&#xACFC; &#xB9BD;&#xC5D0; &#xACF0; &#xD321;&#xC774; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;&#xC744; &#xD3ED;&#xB85C; &#xD558;&#xB824;&#xACE0; rRNA &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC640; &#xB0B4;&#xBD80; &#xACF5;&#xBC31; &#xC601;&#xC5ED;&#xC744; &#xBCF5;&#xC0AC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBAA9;&#xC801;, &#xC801;&#xC808; &#xD55C; PCR &#xBC0F; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1; &#xC785;&#xBB38;&#xC11C; &#xC138;&#xD2B8; &#xC120;&#xC815; &#xB410;&#xB2E4; &#xD558; &#xACE0; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; DNA &#xACA9;&#xB9AC; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. Pleosporaceae, Xylariales, Theleobolaceae, Claviceps, Aureobasidium, 41 &#xACA9;&#xB9AC; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; taxonomic &#xADF8;&#xB8F9;&#xC5D0; &#xD560;&#xB2F9; &#xB41C; Candida boleticola, &#xBC0F; Tremellomycetes &#xB0B4; &#xACF0; &#xD321;&#xC774;. &#xACFC; &#xB9BD;&#xC5D0; &#xACF0; &#xD321;&#xC774; &#xCEE4;&#xBBA4;&#xB2C8;&#xD2F0; &#xC870;&#xC131; &#xD3D0;&#xC218;&#xC758; &#xC885;&#xB958;&#xC640;&#xACFC; &#xB9BD; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC758; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xAC83;&#xC774; &#xBC1D;&#xD600;&#xC84C;&#xB2E4;.

&#xC5D0;&#xC5B4;&#xB85C;&#xBE45; &#xD558; &#xC218;&#xACFC; &#xB9BD;&#xC5D0;&#xB294; &#xBC84;&#xC12F;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D; 18S rRNA &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC0F; &#xADF8; &#xC21C;&#xC11C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD3C9;&#xAC00;.

Aguas residuales aer&oacute;bica gr&aacute;nulos son los biofilms densos, esf&eacute;ricos, considerados como una herramienta &uacute;til y prometedor en los procesos de tratamiento de aguas residuales. Estudios recientes revelaron que los hongos pueden implementarse en la formaci&oacute;n de biopel&iacute;culas. Este estudio intenta descubrir la diversidad f&uacute;ngica en aerobic granules por an&aacute;lisis de la secuencia de la 18 y 5.8S genes rRNA y el interno transcrito regiones del espaciador. Para este prop&oacute;sito, PCR apropiado y cartilla de secuenciaci&oacute;n conjuntos fueron seleccionados y se utiliz&oacute; un protocolo de aislamiento de ADN mejorado. Las secuencias de 41 aislados fueron asignadas a los grupos taxon&oacute;micos, Pleosporaceae, Xylariales, Claviceps, Theleobolaceae, Aureobasidium, Candida boleticola y Tremellomycetes dentro de los hongos. Result&oacute; que la composici&oacute;n de la comunidad de hongos en gr&aacute;nulos depende del tipo de aguas residuales y la fase del desarrollo del gr&aacute;nulo.

La diversidad de hongos en gr&aacute;nulos de aguas residuales aer&oacute;bica evaluados por gene del rRNA 18S y su secuencia de an&aacute;lisis.

&#x6709;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x83CC;&#x662F;&#x5176;&#x4E2D;&#x6700;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x751F;&#x7269;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x548C;&#x533B;&#x5B66;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x68C0;&#x8BA8;&#x5982;&#x4F55;&#x88AB;&#x7528;&#x4E8E;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x56FE;&#x50CF;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x603B;&#x7ED3;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3001; &#x6BCF;&#x4E2A;&#xFF0C;&#x5229;&#x5F0A;&#x7684;&#x6280;&#x672F;&#x7EC6;&#x8282;&#x548C;&#x5DF2;&#x53D6;&#x5F97;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x751F;&#x7269;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x529B;&#x3002;&#x4E09;&#x4E2A;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x4F8B;&#x5B50;&#x7ED3;&#x6784;&#x3001;&quot;mesosomes&#xFF0C;&quot;&quot;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x7684;&#x7EC6;&#x4E1D;&#xFF0C;&quot;&#x548C;&quot;nucleoid&#xFF0C;&quot;&#x7528;&#x6765;&#x8BF4;&#x660E;&#x5982;&#x4F55;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x8FDB;&#x5C55;&#x5851;&#x9020;&#x4E86;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x8D85;&#x5FAE;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x7406;&#x89E3;&#x3002;&#x6D89;&#x53CA;&#x8131;&#x6C34;&#x548C;&#x91D1;&#x5C5E;&#x6C61;&#x6E0D;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5728;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x548C;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x5F88;&#x591A;&#x7684;&#x8D85;&#x5FAE;&#x7ED3;&#x6784;&#x7279;&#x70B9;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5B83;&#x4EEC;&#x53EF;&#x4EE5;&#x751F;&#x6210;&#x8BEF;&#x5BFC;&#x6027;&#x6587;&#x7269;&#xFF0C;&#x672A;&#x80FD;&#x4FDD;&#x7559;&#x91CD;&#x8981;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x5982;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x3002;&#x53D1;&#x660E;&#x7684;&#x4F4E;&#x6E29;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x51BB;&#x7ED3;&#x6C34;&#x5316;&#x3001; &#x672C;&#x673A;&#x9644;&#x8FD1;&#x7684;&#x72B6;&#x6001;&#xFF0C;&#x800C;&#x65E0;&#x9700;&#x8131;&#x6C34;&#x548C;&#x6C61;&#x6E0D;&#x6620;&#x50CF;&#xFF0C;&#x73B0;&#x5728;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4E86;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x65B0;&#x89C1;&#x89E3;&#x3002;&#x603B;&#x7ED3;&#x52AA;&#x529B;&#x786E;&#x5B9A;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x4F4E;&#x6E29; EM &#x56FE;&#x50CF;&#x4E2D;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;

&#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x900F;&#x5C04;&#x7535;&#x955C;&#xFF1A; &#x4ECE;&#x51B7;&#x51BB;&#x7535;&#x955C;&#x7684;&#x65B0;&#x89C1;&#x89E3;&#x3002;

Some bacteria are amongst the most important model organisms for biology and medicine. Here we review how electron microscopes have been used to image bacterial cells, summarizing the technical details of the various methods, the advantages and disadvantages of each, and the major biological insights that have been obtained. Three specific example structures, "mesosomes," "cytoskeletal filaments," and "nucleoid," are used to illustrate how methodological advances have shaped our understanding of bacterial ultrastructure. Methods that involve dehydration and metal stains are widely practiced and have revealed many ultrastructural features, but they can generate misleading artifacts and have failed to preserve important structures such as the bacterial cytoskeleton. The invention of cryo-electron microscopy, which allows bacterial cells to be imaged in a frozen-hydrated, near-native state without the need for dehydration and stains, has now led to important new insights. Efforts to identify structures and localize specific proteins in cryo-EM images are summarized.

Bacterial TEM: new insights from cryo-microscopy.

Certaines bact&#xE9;ries sont parmi les organismes mod&#xE8;les les plus importants pour la biologie et la m&#xE9;decine. Ici nous passons en revue la fa&#xE7;on dont des microscopes &#xE9;lectroniques ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;s pour les cellules d&#x26;#39;image bact&#xE9;riennes, r&#xE9;sumant les d&#xE9;tails techniques des diff&#xE9;rentes m&#xE9;thodes, les avantages et les inconv&#xE9;nients de chacun, et les id&#xE9;es principales biologiques qui ont &#xE9;t&#xE9; obtenus. Trois structures sp&#xE9;cifiques, par exemple &#x26;quot;m&#xE9;sosomes&#xBB;, &#xAB;filaments du cytosquelette,&#x26;quot; et &#x26;quot;nucl&#xE9;o&#xEF;de&#x26;quot;, sont utilis&#xE9;s pour illustrer comment les progr&#xE8;s m&#xE9;thodologiques qui ont fa&#xE7;onn&#xE9; notre compr&#xE9;hension de l&#x26;#39;ultrastructure bact&#xE9;rienne. Les m&#xE9;thodes qui impliquent la d&#xE9;shydratation et les taches m&#xE9;talliques sont largement pratiqu&#xE9;s et ont r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; de nombreuses caract&#xE9;ristiques ultrastructurales, mais ils peuvent g&#xE9;n&#xE9;rer des artefacts trompeuses et n&#x26;#39;ont pas r&#xE9;ussi &#xE0; pr&#xE9;server les structures importantes telles que le cytosquelette bact&#xE9;rien. L&#x26;#39;invention de la cryo-microscopie &#xE9;lectronique, qui permet aux cellules bact&#xE9;riennes &#xE0; imager dans une gel&#xE9;e hydrat&#xE9;e, quasi-native Etat sans la n&#xE9;cessit&#xE9; pour la d&#xE9;shydratation et les taches, a conduit &#xE0; d&#x26;#39;importantes nouvelles connaissances. Les efforts pour identifier et localiser les structures des prot&#xE9;ines sp&#xE9;cifiques dans le cryo-EM images sont r&#xE9;sum&#xE9;es.

TEM bact&#xE9;rienne: Les enseignements d&#x26;#39;cryo-microscopie

Einige Bakterien geh&ouml;ren zu den wichtigsten Modellorganismen f&uuml;r Biologie und Medizin. Hier besprechen wir wie Elektronenmikroskopen verwendet wurden zum Bild von bakterieller Zellen zusammenfassen, die technischen Informationen &uuml;ber die verschiedenen Methoden, die vor- und Nachteile der einzelnen und der gro&szlig;en biologischen Einsichten, die erhoben wurden. Drei spezifische Beispielstrukturen, &quot;Mesosomen,&quot; &quot;Zytoskelett Filamenten&quot; und &quot;Kern&auml;quivalent,&quot; werden verwendet, um veranschaulichen, wie methodische Fortschritte haben unser Verst&auml;ndnis der bakteriellen Ultrastruktur gepr&auml;gt. Methoden, die Austrocknung und Metall Flecken beinhalten sind weit verbreitet und viele ultrastrukturelle Eigenschaften aufgedeckt haben, aber sie k&ouml;nnen irref&uuml;hrend Artefakte erzeugen und haben es vers&auml;umt, wichtige Strukturen wie bakterielle Zytoskeletts zu bewahren. Die Erfindung der Kryo-Elektronenmikroskopie, der bakterielle Zellen, die in einem gefroren-hydratisiert, fast Native Zustand ohne die Notwendigkeit f&uuml;r Dehydrierung und Flecken abgebildet werden kann, hat jetzt zu wichtigen neuen Erkenntnissen gef&uuml;hrt. Bem&uuml;hungen um die Strukturen zu identifizieren und lokalisieren spezifische Proteine in Cryo-EM Bilder sind zusammengefasst.

Bakterielle TEM: neue Erkenntnisse aus der Cryo-Mikroskopie.

Alcuni batteri sono tra i pi&ugrave; importanti organismi modello per la biologia e la medicina. Qui esaminiamo come microscopi elettronici sono stati usati per raffigurare le cellule batteriche, che riassume i dettagli tecnici di vari metodi, i vantaggi e gli svantaggi di ciascuno e le principali intuizioni biologiche che sono state ottenute. Tre strutture di esempio specifico, &quot;mesosomes&quot;, &quot;filamenti citoscheletrici&quot; e &quot;nucleoide&quot;, vengono utilizzati per illustrare gli avanzamenti metodologici come hanno plasmato la nostra comprensione dell&#39;ultrastruttura batterica. Metodi che comportano disidratazione e macchie di metalliche sono ampiamente praticati e hanno rivelato molte caratteristiche ultrastrutturali, ma pu&ograve; generare artefatti fuorvianti e non sono riusciti a preservare importanti strutture quali il citoscheletro batterico. L&#39;invenzione del crio-microscopia elettronica, che permette alle cellule batteriche di essere fotografata in uno stato congelato-idratata, quasi nativa senza bisogno di disidratazione e macchie, ha portato a importanti nuove intuizioni. Gli sforzi per individuare strutture e localizzare le proteine specifiche nelle immagini di cryo-EM sono ricapitolati.

TEM batterica: nuove intuizioni da cryo-microscopia.

&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x533B;&#x5B66;&#x306E;&#x6700;&#x3082;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x9577;&#x6240;&#x3068;&#x77ED;&#x6240;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x529B;&#x306E;&#x6280;&#x8853;&#x7684;&#x306A;&#x8A73;&#x7D30;&#x3092;&#x307E;&#x3068;&#x3081;&#x3001;&#x753B;&#x50CF;&#x7D30;&#x83CC;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304B;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x3066;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002; 3&#x3064;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x4F8B;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3001; &#x26;quot;mesosomes&#x26;quot;&#x3001; &#x26;quot;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x26;quot;&#x3068; &#x26;quot;&#x6838;&#x69D8;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x26;quot;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8AD6;&#x306E;&#x9032;&#x6B69;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x5FAE;&#x7D30;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306E;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x3092;&#x5F62;&#x4F5C;&#x3063;&#x3066;&#x304D;&#x305F;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8131;&#x6C34;&#x3068;&#x91D1;&#x5C5E;&#x306E;&#x6C5A;&#x308C;&#x3092;&#x4F34;&#x3046;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x5E83;&#x304F;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x8D85;&#x5FAE;&#x7D30;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x8AA4;&#x89E3;&#x3092;&#x62DB;&#x304F;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30A2;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D5;&#x30A1;&#x30AF;&#x30C8;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x3001;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5931;&#x6557;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x8131;&#x6C34;&#x3084;&#x6C5A;&#x308C;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x305B;&#x305A;&#x306B;&#x51CD;&#x7D50;&#x6C34;&#x548C;&#x3001;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x8FD1;&#x3044;&#x72B6;&#x614B;&#x3067;&#x64AE;&#x50CF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x4F4E;&#x6E29;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306E;&#x767A;&#x660E;&#x306F;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x3001;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x3001;&#x30AF;&#x30E9;&#x30A4;&#x30AA;EM&#x753B;&#x50CF;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x52AA;&#x529B;&#x304C;&#x8981;&#x7D04;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;TEM&#xFF1A;&#x30AF;&#x30E9;&#x30A4;&#x30AA;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6D1E;&#x5BDF;

&#xC77C;&#xBD80; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xB294; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xACFC; &#xC758;&#xD559;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBAA8;&#xB378; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xAC80;&#xD1A0; &#xC138;&#xADE0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC5BC;&#xB9C8;&#xB098; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;, &#xC7A5;&#xC810; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xC810; &#xAC01;&#xAC01;&#xC758; &#xAE30;&#xC220;&#xC801;&#xC778; &#xC138;&#xBD80; &#xC0AC;&#xD56D; &#xBC0F; &#xC8FC;&#xC694; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xAC00;&#xC838;&#xC628; &#xC694;&#xC57D;. &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xD2B9;&#xC815; &#xC608;&#xC81C; &#xAD6C;&#xC870;, &quot;mesosomes,&quot; &quot;cytoskeletal &#xD544; &#xB77C; &#xBA58;,&quot; &#xBC0F; &quot;&#xD575;&#xC591;&#xCCB4;,&quot; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xBC29;&#xBC95;&#xB860;&#xC758; &#xBC1C;&#xC804;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xC138;&#xADE0; &#xB300;&#xAD8C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC774;&#xD574;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD0C8;&#xC218;&#xC640; &#xAE08;&#xC18D; &#xC5BC;&#xB8E9;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xC5F0;&#xC2B5; &#xD558; &#xACE0; &#xB9CE;&#xC740; ultrastructural &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD574;&#xC57C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xC798;&#xBABB; &#xB41C; &#xC544;&#xD2F0;&#xD329;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xADE0; cytoskeleton &#xAC19;&#xC740; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC2E4;&#xD328;. &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC; &#xD0C8;&#xC218;&#xC640; &#xC5BC;&#xB8E9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xC5C6;&#xC774; &#xB0C9;&#xB3D9; &#xC218;&#xC0B0;&#xD654;, &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC5D0; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC6B4; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xACF3;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xB0B4;&#xB294;-&#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC758; &#xBC1C;&#xBA85; &#xC9C0;&#xAE08; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC8FC;&#xB3C4;&#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;. &#xAD6C;&#xC870; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xBC0F; &#xACF3;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xB0B4;&#xB294;-EM &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xC815; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB178;&#xB825;&#xC5D0; &#xC694;&#xC57D; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC138;&#xADE0; &#xD3B8;: &#xACF3;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xB0B4;&#xB294;-&#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;.

Algunas bacterias son algunos de los organismos modelo m&#xE1;s importantes para la biolog&#xED;a y la medicina. Aqu&#xED; hacemos una revisi&#xF3;n de microscopios electr&#xF3;nicos se han utilizado para las c&#xE9;lulas bacterianas de imagen, que resume los detalles t&#xE9;cnicos de los distintos m&#xE9;todos, las ventajas y desventajas de cada uno, y las ideas principales biol&#xF3;gicos que se han obtenido. Tres estructuras de ejemplo concreto, &#x26;quot;mesosomas&#x26;quot;, &#x26;quot;filamentos del citoesqueleto,&#x26;quot; y &#x26;quot;nucleoide&#x26;quot;, se utilizan para ilustrar c&#xF3;mo los avances metodol&#xF3;gicos han dado forma a nuestra comprensi&#xF3;n de la ultraestructura bacteriana. Los m&#xE9;todos que implican la deshidrataci&#xF3;n y las manchas de metal son ampliamente practicado y han puesto de manifiesto muchas caracter&#xED;sticas ultraestructurales, pero pueden generar artefactos enga&#xF1;osos y no han logrado preservar las estructuras importantes, como el citoesqueleto bacteriano. La invenci&#xF3;n de la crio-microscop&#xED;a electr&#xF3;nica, que permite a las c&#xE9;lulas bacterianas a ser fotografiado en un congelado hidratado, un estado casi nativo sin necesidad de la deshidrataci&#xF3;n y las manchas, ya ha dado lugar a nuevas e importantes ideas. Los esfuerzos para identificar y localizar las estructuras de prote&#xED;nas espec&#xED;ficas en la crio-ME im&#xE1;genes se resumen.

Bacteriana TEM: Contribuciones clave a partir de Cryo-microscopio

&#x5982;&#x4F55;&#x6746;&#x72B6;&#x7EC6;&#x83CC;&#x5F62;&#x6210;&#x548C;&#x4FDD;&#x6301;&#x5176;&#x5F62;&#x72B6;&#x662F;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x4E2D;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x95EE;&#x9898;&#x3002;&#x4ECE;&#x8367;&#x5149;&#x5149;&#x955C;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x4F7F;&#x8BB8;&#x591A;&#x4EBA;&#x76F8;&#x4FE1;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x540C;&#x6E90; MreB &#x548C;&#x5927;&#x91CF;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5F62;&#x6210;&#x957F;&#x87BA;&#x65CB;&#x4E1D;&#x6CBF;&#x5185;&#x88AB;&#x819C;&#x4E0A;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x4E0B;&#x9762;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x4F7F;&#x7528;&#x7535;&#x5B50; cryotomography &#x516D;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x6746;&#x5F62;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x79CD;&#x7C7B;&#xFF0C;&#x5728;&#x751F;&#x7269;&#x5927;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x957F; &#xFF08;&gt; 80 nm&#xFF09; &#x87BA;&#x65CB;&#x4E1D;&#x5B58;&#x5728;&#x9644;&#x8FD1;&#x6216;&#x6CBF;&#x4EFB;&#x4E00;&#x9762;&#x5185;&#x88AB;&#x819C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x4F7F;&#x7528;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x4F4E;&#x6E29;&#x8367;&#x5149;&#x5149;&#x955C; (&#x4F4E;&#x6E29; fLM) &#x548C;&#x4F4E;&#x6E29;&#x5C42;&#x6790;&#x6210;&#x50CF;&#x7535;&#x5B50; (ECT) &#x6765;&#x6807;&#x8BC6; MreB&#xFF0C;&#x663E;&#x793A; MreB &#x4E1D;&#x7531; ECT &#x63A2;&#x6D4B;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x675F;&#x3002;&#x6839;&#x636E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6210;&#x679C;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684; MreB &#x5FC5;&#x987B;&#x91CD;&#x65B0;&#x8003;&#x8651;&#xFF1A; &#x4E0D;&#x662F;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7EC6;&#x80DE;&#x58C1;&#x5408;&#x6210;&#x673A;&#x68B0;&#x5927;&#x3001; &#x521A;&#x6027;&#x7684;&#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#xFF0C;&#x79FB;&#x52A8; MreB &#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x53EF;&#x7533;&#x8BF7;&#x7D27;&#x5F20;&#x5C40;&#x52BF;&#x65E5;&#x76CA;&#x589E;&#x957F;&#x7684;&#x80BD;&#x805A;&#x7CD6;&#x94FE;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x786E;&#x4FDD;&#x5176;&#x6709;&#x5E8F;&#x3001; &#x7EBF;&#x6027;&#x63D2;&#x5165;&#x3002;

&#x957F;&#x87BA;&#x65CB;&#x4E1D;&#x90FD;&#x4E0D;&#x662F;&#x5305;&#x56F4;&#x7684;&#x6746;&#x72B6;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7535;&#x5B50; cryotomograms &#x4E2D;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;

How rod-shaped bacteria form and maintain their shape is an important question in bacterial cell biology. Results from fluorescent light microscopy have led many to believe that the actin homolog MreB and a number of other proteins form long helical filaments along the inner membrane of the cell. Here we show using electron cryotomography of six different rod-shaped bacterial species, at macromolecular resolution, that no long (> 80 nm) helical filaments exist near or along either surface of the inner membrane. We also use correlated cryo-fluorescent light microscopy (cryo-fLM) and electron cryo-tomography (ECT) to identify cytoplasmic bundles of MreB, showing that MreB filaments are detectable by ECT. In light of these results, the structure and function of MreB must be reconsidered: instead of acting as a large, rigid scaffold that localizes cell-wall synthetic machinery, moving MreB complexes may apply tension to growing peptidoglycan strands to ensure their orderly, linear insertion.

Long helical filaments are not seen encircling cells in electron cryotomograms of rod-shaped bacteria.

Comment en forme de tige bact&#xE9;ries former et de maintenir leur forme est une question importante en biologie cellulaire bact&#xE9;rienne. R&#xE9;sultats de la microscopie fluorescente ont conduit plusieurs &#xE0; croire que le MreB homologue d&#x26;#39;actine et un certain nombre d&#x26;#39;autres prot&#xE9;ines former des filaments h&#xE9;lico&#xEF;daux le long de long de la membrane interne de la cellule. Ici pr&#xE9;sentent utilisant cryotomography &#xE9;lectrons de six diff&#xE9;rents en forme de tige esp&#xE8;ces bact&#xE9;riennes, &#xE0; une r&#xE9;solution macromol&#xE9;culaire, qu&#x26;#39;aucune longues (&#x26;gt; 80 nm) de filaments h&#xE9;lico&#xEF;daux existent &#xE0; proximit&#xE9; ou le long de chaque surface de la membrane interne. Nous utilisons &#xE9;galement corr&#xE9;l&#xE9;e microscopie optique cryo-fluorescente (cryo-FLM) et d&#x26;#39;&#xE9;lectrons cryo-tomographie (ECT) pour identifier les paquets cytoplasmiques de MreB, montrant que les filaments MreB sont d&#xE9;tectables par ECT. &#xC0; la lumi&#xE8;re de ces r&#xE9;sultats, la structure et la fonction de MreB doit &#xEA;tre reconsid&#xE9;r&#xE9;: au lieu d&#x26;#39;agir comme un grand, rigide &#xE9;chafaudage qui localise la paroi cellulaire machinerie de synth&#xE8;se, le d&#xE9;placement des complexes MreB peut appliquer une tension &#xE0; la croissance des brins de peptidoglycane pour assurer leur ordonn&#xE9;e, insertion lin&#xE9;aire .

De longs filaments h&#xE9;lico&#xEF;daux ne sont pas consid&#xE9;r&#xE9;s cellules encerclants dans Cryotomograms &#xE9;lectrons de bact&#xE9;ries de forme allong&#xE9;e

Wie stabf&ouml;rmige Bakterien bilden und ihre Form pflegen ist eine wichtige Frage in der bakteriellen Zelle Biologie. Ergebnisse von fluoreszierenden Lichtmikroskopie f&uuml;hrten viele glauben, die Aktin-Homolog MreB und eine Reihe anderer Proteine lange spiralf&ouml;rmige Filamenten entlang der inneren Membrane der Zelle bilden. Hier zeigen wir, mit Elektron-Cryotomography von sechs verschiedenen st&auml;bchenf&ouml;rmigen bakteriellen Spezies, Makromolekulare Aufl&ouml;sung, dass keine langen spiralf&ouml;rmige Filamenten (&gt; 80 nm) in der N&auml;he oder entlang entweder Fl&auml;che der inneren Membran vorhanden. Wir verwenden auch korrelierte Cryo-fluoreszierender Lichtmikroskopie (Cryo-fLM) und Cryo-Elektron-Tomographie (ECT) identifizieren zytoplasmatischen B&uuml;ndel von MreB, wonach MreB Filamenten EKT nachweisbar sind. Angesichts dieser Ergebnisse, die Struktur und Funktion von MreB &uuml;berpr&uuml;ft werden m&uuml;ssen: statt als eine gro&szlig;e, starre Ger&uuml;st, die Zellwand synthetische Maschinen lokalisiert fungiert, Verschieben von MreB-komplexe anfallen Spannung auf die wachsende Peptidoglycan Str&auml;nge Originalpackungen geordnete, lineare sicherzustellen.

Lange spiralf&ouml;rmige Filamente sind nicht gesehen, rings um Zellen in Elektron-Cryotomograms von st&auml;bchenf&ouml;rmigen Bakterien.

Come batteri a forma di bastoncello, formano e mantengono la loro forma &egrave; una questione importante nella biologia delle cellule batteriche. Risultati da microscopia in luce fluorescente hanno portato molti a credere che l&#39;omologo dell&#39;actina MreB ed un certo numero di altre proteine formano filamenti lunghi elicoidale lungo la membrana interna della cella. Qui mostriamo usando elettrone cryotomography di sei differenti a forma di bastoncello specie batterici, a risoluzione macromolecolare, che no lunghi filamenti elicoidali (&amp;gt; 80 nm) esistono vicino o lungo una superficie di membrana interna. Usiamo anche correlata microscopia crio-fluorescenti (cryo-fLM) ed elettrone cryo-tomografia (ECT) per identificare i fasci citoplasmatiche di MreB, mostrando che i filamenti MreB sono rilevabili da ECT. Alla luce di questi risultati, deve essere riconsiderate la struttura e la funzione di MreB: invece di agire come un grande, rigida impalcatura che localizza il macchinario sintetico parete cellulare, MreB complessi in movimento pu&ograve; applicare una tensione crescente peptidoglicano fili per garantire il loro inserimento ordinato, lineare.

Filamenti lunghi elicoidale non sono visto che circondano le cellule in elettrone cryotomograms di batteri a forma di bastoncello.

&#x68D2;&#x72B6;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F62;&#x72B6;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x3001;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x554F;&#x984C;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x86CD;&#x5149;&#x706F;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x691C;&#x67FB;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;MreB&#x3068;&#x4ED6;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6570;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5185;&#x819C;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x3066;&#x9577;&#x3044;&#x3089;&#x305B;&#x3093;&#x72B6;&#x306E;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x4FE1;&#x3058;&#x3066;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x3092;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C9;&#x3057;&#x3066;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x9577;&#x3044;&#xFF08;&#x26;gt; 80 nm&#xFF09;&#x306E;&#x30D8;&#x30EA;&#x30AB;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x5185;&#x5074;&#x306E;&#x819C;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x3084;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x3066;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x3001;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x3067;&#x3001;6&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x68D2;&#x72B6;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x7A2E;&#x306E;&#x96FB;&#x5B50;cryotomography&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;MreB&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x304C;ECT&#x3067;&#x691C;&#x51FA;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;MreB&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x76F8;&#x95A2;&#x4F4E;&#x6E29;&#x86CD;&#x5149;&#x706F;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#xFF08;&#x6975;&#x4F4E;&#x6E29;FLM&#xFF09;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x96FB;&#x5B50;&#x30AF;&#x30E9;&#x30A4;&#x30AA;&#x30C8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#xFF08;ECT&#xFF09;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x7167;&#x3089;&#x3057;&#x3066;&#x3001;MreB&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x518D;&#x8003;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x58C1;&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x3092;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3057;&#x3001;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x525B;&#x6027;&#x8DB3;&#x5834;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304B;&#x3089;&#x3001;MreB&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x79FB;&#x52D5;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6574;&#x7136;&#x3068;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x7DDA;&#x5F62;&#x306E;&#x633F;&#x5165;&#x3092;&#x78BA;&#x5B9F;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6210;&#x9577;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x30B0;&#x30EA;&#x30AB;&#x30F3;&#x9396;&#x306B;&#x5F35;&#x529B;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xB9C9;&#xB300; &#xBAA8;&#xC591;&#xC758; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xBAA8;&#xC591;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC9C8;&#xBB38;&#xC774; &#xC774;&#xB2E4;. &#xD615;&#xAD11; &#xAC00;&#xBCBC;&#xC6B4; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xB9CE;&#xC740; &#xB9D0;&#xB77C; &#xCCB4; MreB &#xBC0F; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xB2E4;&#xB978; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD615;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB0B4;&#xBD80; &#xB9C9; &#xB530;&#xB77C; &#xAE34; &#xB098;&#xC120;&#xD615; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8;&#xB97C; &#xBBFF;&#xACE0; &#xC774;&#xB04C;&#xC5B4; &#xB0C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; 6 &#xAC1C;&#xC758; &#xB9C9;&#xB300; &#xBAA8;&#xC591; &#xC138;&#xADE0; &#xC885;, &#xC804;&#xC790; cryotomography&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB354; &#xAE34; (&amp;gt; 80 nm) &#xD5EC;&#xB9AC;&#xCEEC; &#xBA58; &#xADFC;&#xCC98; &#xB610;&#xB294; &#xB0B4;&#xBD80; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC758; &#xC5B4;&#xB290; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC874;&#xC7AC;. &#xC0C1;&#xD638; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xACF3;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xB0B4;&#xB294;-&#xD615;&#xAD11; &#xBE5B; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; (&#xACF3;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xB0B4;&#xB294;-fLM) &#xBC0F; &#xACF3;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xB0B4;&#xB294;-&#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601; (ECT) MreB, MreB &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8; &#xC694;&#xBC95;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC10;&#xC9C0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD398;&#xC774;&#xC9C0;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xBC88;&#xB4E4;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB610;&#xD55C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xBE44;&#xCD94;&#xC5B4; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; Mreb&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC7AC;&#xACE0; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;: &#xD070; &#xB531;&#xB531;&#xD55C; &#xBE44; &#xACC4;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xBCBD; &#xD569;&#xC131; &#xAE30;&#xACC4; localizes&#xB85C; &#xC791;&#xB3D9; &#xD558;&#xB294; &#xB300;&#xC2E0; MreB &#xB2E8;&#xC9C0; &#xC774;&#xB3D9; &#xC801;&#xC6A9; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAE34;&#xC7A5; peptidoglycan &#xAC00;&#xB2E5;&#xC758; &#xC9C8;&#xC11C;, &#xC120;&#xD615; &#xC0BD;&#xC785;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC131;&#xC7A5; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xAE34; &#xB098;&#xC120;&#xD615; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8; &#xC140; &#xB9C9;&#xB300; &#xBAA8;&#xC591; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC758; &#xC804;&#xC790; cryotomograms&#xC5D0; &#xD3EC;&#xC704; &#xB9DD;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB098;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBF;C&#xF3;mo en forma de bastoncillos formar y mantener su forma es una cuesti&#xF3;n importante en la biolog&#xED;a de la c&#xE9;lula bacteriana. Los resultados de la microscop&#xED;a de luz fluorescente han llevado a muchos a creer que el MreB hom&#xF3;logo de actina y un n&#xFA;mero de otras prote&#xED;nas forman largos filamentos helicoidales a lo largo de la membrana interna de la c&#xE9;lula. Aqu&#xED; nos muestran utilizando cryotomography electrones de seis diferentes en forma de varilla especies bacterianas, en la resoluci&#xF3;n macromolecular, que no largas (&#x26;gt; 80 nm) existen alrededor de filamentos helicoidales o bien a lo largo de la superficie de la membrana interna. Tambi&#xE9;n utilizamos la correlaci&#xF3;n de crio-microscop&#xED;a de luz fluorescente (crio-FLM) y la tomograf&#xED;a crio-electr&#xF3;nica (ECT) para identificar los haces citoplasm&#xE1;ticos de MreB, mostrando que los filamentos de MreB son detectables por la TEC. A la luz de estos resultados, la estructura y funci&#xF3;n de MreB debe ser examinada de nuevo: en lugar de actuar como un gran andamio r&#xED;gido que se localiza en la pared celular de la maquinaria sint&#xE9;tica, pasando complejos MreB puede aplicar tensi&#xF3;n a las crecientes cadenas de peptidoglicano para garantizar su inserci&#xF3;n ordenada, lineal .

Largos filamentos helicoidales no se ven las c&#xE9;lulas en el cerco Cryotomograms electr&#xF3;nicas de bacterias de forma bacilar

&#x5FAE;&#x7BA1;&#x8D77;&#x7740;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5728;&#x80DE;&#x8D28;&#x5206;&#x88C2;&#x3001; &#x4EA4;&#x901A;&#x548C;&#x52A8;&#x529B;&#xFF0C;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x7CBE;&#x6E5B;&#x76EE;&#x6807;&#x7684;&#x6297;&#x764C;&#x836F;&#x7269;&#x3002;&#x6240;&#x6709; tubulins &#x4ECE;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x4E0E;&#x4EB2;&#x7F18;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x86CB;&#x767D; FtsZ&#xFF0C;&#x5206;&#x4EAB;&#x5171;&#x540C;&#x7684;&#x7956;&#x5148;&#x8FDB;&#x5316;&#x800C;&#x90FD;&#x6765;&#xFF0C;&#x4F46;&#x867D;&#x7136;&#x771F;&#x6838; tubulins &#x90FD;&#x6F14;&#x53D8;&#x6210;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x5F62;&#x6210; heterodimers&#xFF0C;&#x7EC6;&#x83CC; FtsZ &#x5927;&#x6982;&#x662F;&#x7EE7;&#x7EED;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5355;&#x4E2A; homopolymeric &#x539F;&#x4ECA;&#x5929;&#x8FD9;&#x822C;&#x3002;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x4E0D;&#x5148;&#x524D;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x6709;&#x7EC6;&#x83CC;&#xFF0C;&#x548C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x4ECE;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x86CB;&#x767D;/FtsZ &#x7956;&#x5148;&#x7684;&#x6F14;&#x5316;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x7535;&#x5B50;&#x51BB;&#xFF0C;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; BtubA &#x548C; BtubB &#x7684;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x86CB;&#x767D;&#x540C;&#x6E90;&#x5F62;&#x6210;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x88AB;&#x79F0;&#x4E3A;&quot;&#x7EC6;&#x83CC;&#x5FAE;&#x7BA1;&quot;&#xFF08;Bmt&#xFF09;&#x3002;Bmt &#x4E0E;&#x76F4;&#x539F;&#x548C;&#x7C7B;&#x4F3C; protofilament &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7B49;&#x771F;&#x6838;&#x540C;&#x884C;&#x5206;&#x4EAB;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;Bmt &#x7684;&#x7EC4;&#x6210;&#x53EA;&#x6709;&#x4E94;&#x4E2A;&#x539F;&#xFF0C;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x5728;&#x771F;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5178;&#x578B; 13&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x6765;&#x81EA;&#x73B0;&#x4EE3;&#x771F;&#x6838;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;BtubA &#x548C; BtubB &#x4EA7;&#x751F;&#x4E8E;&#x65E9;&#x671F;&#x5F62;&#x6210;&#x5C0F;&#x7684;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x7684;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x86CB;&#x767D;&#x4E2D;&#x95F4;&#x3002;&#x65E2;&#x7136;&#x6211;&#x4EEC;&#x90FD;&#x663E;&#x793A;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x65E0;&#x4F34;&#x4FA3;&#x7684;&#x4E30;&#x5EA6;&#x5185;&#x4EA7;&#x751F;&#x7EC6;&#x83CC;&#x5FAE;&#x7BA1;&#xFF0C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5E94;&#x8BE5;&#x662F;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x86CB;&#x767D;&#x7814;&#x7A76;&#x548C;&#x836F;&#x7269;&#x7B5B;&#x9009;&#x7684;&#x6709;&#x7528;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;

&#x5728;&#x7EC6;&#x83CC;&#x4E2D;&#x7684;&#x5FAE;&#x7BA1;&#xFF1A; &#x53E4;&#x4EE3; tubulins &#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x771F;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x7684;&#x4E94; protofilament &#x540C;&#x6E90;&#x3002;

Microtubules play crucial roles in cytokinesis, transport, and motility, and are therefore superb targets for anti-cancer drugs. All tubulins evolved from a common ancestor they share with the distantly related bacterial cell division protein FtsZ, but while eukaryotic tubulins evolved into highly conserved microtubule-forming heterodimers, bacterial FtsZ presumably continued to function as single homopolymeric protofilaments as it does today. Microtubules have not previously been found in bacteria, and we lack insight into their evolution from the tubulin/FtsZ ancestor. Using electron cryomicroscopy, here we show that the tubulin homologs BtubA and BtubB form microtubules in bacteria and suggest these be referred to as "bacterial microtubules" (bMTs). bMTs share important features with their eukaryotic counterparts, such as straight protofilaments and similar protofilament interactions. bMTs are composed of only five protofilaments, however, instead of the 13 typical in eukaryotes. These and other results suggest that rather than being derived from modern eukaryotic tubulin, BtubA and BtubB arose from early tubulin intermediates that formed small microtubules. Since we show that bacterial microtubules can be produced in abundance in vitro without chaperones, they should be useful tools for tubulin research and drug screening.

Microtubules in bacteria: ancient tubulins build a five-protofilament homolog of the eukaryotic cytoskeleton.

Les microtubules jouent un r&#xF4;le crucial dans la cytokin&#xE8;se, le transport, et de la motilit&#xE9;, et sont donc des cibles pour de superbes m&#xE9;dicaments anti-canc&#xE9;reux. Tous les tubulines ont &#xE9;volu&#xE9; &#xE0; partir d&#x26;#39;un anc&#xEA;tre commun qu&#x26;#39;ils partagent avec le parent &#xE9;loign&#xE9; FtsZ division cellulaire bact&#xE9;rienne des prot&#xE9;ines, mais tout en tubulines eucaryotes &#xE9;volu&#xE9; en tr&#xE8;s conserv&#xE9;es microtubules formant des h&#xE9;t&#xE9;rodim&#xE8;res, bact&#xE9;rienne FtsZ vraisemblablement continu&#xE9; &#xE0; fonctionner comme simples protofilaments homopolym&#xE9;riques comme il le fait aujourd&#x26;#39;hui. Les microtubules n&#x26;#39;ont pas encore &#xE9;t&#xE9; trouv&#xE9; dans les bact&#xE9;ries, et nous manquons de comprendre leur &#xE9;volution &#xE0; partir de l&#x26;#39;anc&#xEA;tre tubuline / FtsZ. Utilisation de cryo-microscopie &#xE9;lectronique, ici, nous montrons que la tubuline et les microtubules homologues BtubA forme BtubB chez les bact&#xE9;ries et de proposer celles-ci soient appel&#xE9;s &#xAB;microtubules&#xBB; bact&#xE9;riennes (BMTS). OGEC partagent des traits importants avec leurs homologues eucaryotes, comme les protofilaments droites et les interactions protofilaments similaires. OGEC sont compos&#xE9;s de seulement cinq protofilaments, cependant, au lieu de la typique 13 chez les eucaryotes. Ces r&#xE9;sultats et d&#x26;#39;autres sugg&#xE8;rent que, plut&#xF4;t que de d&#xE9;couler de la tubuline eucaryote moderne, BtubA et BtubB surgi &#xE0; partir d&#x26;#39;interm&#xE9;diaires qui se sont form&#xE9;es au d&#xE9;but de tubuline des microtubules petits. Depuis que nous avons montrent que les microtubules bact&#xE9;riennes peuvent &#xEA;tre produites en abondance in vitro sans chaperons, elles devraient &#xEA;tre des outils utiles pour la recherche de la tubuline et de d&#xE9;pistage de drogues.

Les microtubules chez les bact&#xE9;ries: les tubulines anciens Construire un homologue Cinq-protofilaments du cytosquelette des eucaryotes

Mikrotubuli spielen eine wichtige Rolle in der Zellteilung, Transport und Motilit&auml;t und sind daher hervorragende Ziele f&uuml;r Krebsmedikamente. Alle Tubulins entwickelte sich aus einem gemeinsamen Vorfahren, den sie mit dem weitl&auml;ufig Verwandte bakterielle Zellteilung Protein FtsZ teilen, aber w&auml;hrend eukaryotischen Tubulins zu stark konservierten Microtubule-bildenden Heterodimere entwickelt, bakterielle FtsZ vermutlich weiterhin als einzigen Homopolymeric Protofilaments wie heute. Mikrotubuli zuvor nicht in Bakterien entdeckt wurden, und uns Einblick in ihre Entwicklung aus dem Tubulin/FtsZ-Vorg&auml;nger fehlt. Mit Elektron-Cryomicroscopy, hier zeigen wir, dass das Tubulin UCP1 BtubA und BtubB Mikrotubuli in Bakterien bilden und schlagen vor, diese werden als &quot;bakterielle Mikrotubuli&quot; bezeichnet (bMTs). mit ihrer eukaryotischen Entsprechungen, wie gerade Protofilaments und &auml;hnliche Protofilament Interaktionen Teilen bMTs wichtige Funktionen. bMTs bestehen aus nur f&uuml;nf Protofilaments, jedoch statt der typischen in den Eukaryotes 13. Diese und andere Ergebnisse legen nahe, dass, anstatt wird abgeleitet von modernen eukaryotischen Tubulin, BtubA und BtubB entstand aus fr&uuml;hen Tubulin-Zwischenprodukte, die kleinen Mikrotubuli gebildet. Da wir zeigen, dass bakterielle Mikrotubuli in H&uuml;lle und F&uuml;lle in-vitro ohne Chaperone hergestellt werden k&ouml;nnen, sollten sie n&uuml;tzliche Werkzeuge f&uuml;r die Tubulin-Forschung und Medikamenten Screening werden.

Mikrotubuli in Bakterien: alte Tubulins bauen ein f&uuml;nf-Protofilament Homolog des eukaryotischen Zytoskeletts.

Microtubuli giocano un ruolo cruciale nella Citocinesi in, trasporti e motilit&agrave; e sono pertanto superbe bersagli per farmaci anti-cancro. Tubulins tutti si &egrave; evoluto da un antenato comune che condividono con la lontanamente correlati divisione cellulare batterica proteina FtsZ, ma mentre tubulins eucariotica evoluto in altamente conservato microtubule-formare eterodimeri, FtsZ batterica presumibilmente continu&ograve; a funzionare come singolo omopolimero protofilamenti come fa oggi. Microtubuli non sono stati trovati in precedenza nei batteri, e ci manca la loro evoluzione dal predecessore tubulina/FtsZ. Usando elettrone criomicroscopia, qui vi mostriamo che gli omologhi di tubulina, BtubA e BtubB formano i microtubuli in batteri e suggeriscono questi essere indicati come &quot;microtubuli batterici&quot; (bMTs). bMTs condividere importanti caratteristiche con le loro controparti negli eucarioti, come protofilamenti dritto e simili interazioni protofilament. bMTs sono composti di solo cinque protofilamenti, tuttavia, anzich&eacute; il 13 tipico negli eucarioti. Questi e altri risultati suggeriscono che, piuttosto che essendo derivato da tubulina eucariotica moderna, BtubA e BtubB &egrave; sorto dal primi intermedi di tubulina che formano piccoli microtubuli. Poich&eacute; ci mostrano che i microtubuli batterici possono essere prodotta in abbondanza in vitro senza accompagnatori, dovrebbero essere strumenti utili per la ricerca di tubulina e screening di stupefacenti.

Microtubuli in batteri: antica tubulins costruire un cinque-protofilament dell&#39;omologo del citoscheletro eucariotico.

&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x5206;&#x88C2;&#x3001;&#x8F38;&#x9001;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x904B;&#x52D5;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x6297;&#x304C;&#x3093;&#x85AC;&#x306E;&#x512A;&#x308C;&#x305F;&#x6A19;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x9060;&#x7E01;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;FtsZ&#x3068;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x5171;&#x901A;&#x306E;&#x7956;&#x5148;&#x304B;&#x3089;&#x9032;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x304C;&#x3001;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x3078;&#x3068;&#x9032;&#x5316;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;FtsZ&#x306F;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x305D;&#x308C;&#x304C;&#x4ECA;&#x65E5;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5358;&#x4E00;&#x30DB;&#x30E2;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;protofilaments&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x7D9A;&#x3051;&#x305F;&#x3002;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306F;&#x7D30;&#x83CC;&#x3067;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;/ FtsZ&#x7956;&#x5148;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x9032;&#x5316;&#x3078;&#x306E;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x4F4E;&#x6E29;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;BtubA&#x3068;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;BtubB&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306F; &#x26;quot;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x26;quot;&#xFF08;bMTs&#xFF09;&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; bMTs&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;protofilaments&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x30AB;&#x30A6;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x3068;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5171;&#x6709;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; bMTs&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x306A;13&#x306E;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x308F;&#x305A;&#x304B;5 protofilaments&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x3080;&#x3057;&#x308D;&#x73FE;&#x4EE3;&#x7684;&#x306A;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;BtubA&#x3068;BtubB&#x304C;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x305F;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x4E2D;&#x9593;&#x4F53;&#x304B;&#x3089;&#x751F;&#x3058;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x306F;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306A;&#x3057;&#x3001;in vitro&#x3067;&#x591A;&#x91CF;&#x306B;&#x88FD;&#x9020;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306F;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3068;&#x5275;&#x85AC;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7D30;&#x83CC;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#xFF1A;&#x53E4;&#x4EE3;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x306E;5-&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x3092;&#x69CB;&#x7BC9;

Microtubules cytokinesis, &#xC804;&#xC1A1; &#xBC0F; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xBC0F; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xD56D; &#xC554; &#xC57D;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD6CC;&#xB96D;&#xD55C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB4E0; tubulins &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xBA3C; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC138;&#xADE0; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; FtsZ, &#xD568;&#xAED8; &#xACF5;&#xC720; &#xD558;&#xB294; &#xACF5;&#xD1B5; &#xB41C; &#xC870;&#xC0C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C4;&#xD654; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC9C4; &#xD575; tubulins&#xC5D0;&#xC11C; &#xACE0;&#xB3C4;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; microtubule &#xD615;&#xC131; heterodimers, &#xC9C4;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC138;&#xADE0; FtsZ &#xC544;&#xB9C8;&#xB3C4; &#xC624;&#xB298;&#xC640; &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C; &#xB2E8;&#xC77C; homopolymeric protofilaments&#xB85C; &#xC791;&#xB3D9; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xACC4;&#xC18D; &#xD588;&#xB2E4;. Microtubules &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xACE0; tubulin/FtsZ &#xC870;&#xC0C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC9C4;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825; &#xBD80;&#xC871; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xC790; cryomicroscopy&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC; tubulin homologs BtubA &#xBC0F; BtubB microtubules &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &quot;&#xC138;&#xADE0;&#xC131; microtubules&quot; &#xB77C;&#xACE0; &#xC81C;&#xC548; (bMTs). bMTs &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC774;&#xD2B8; protofilaments&#xC640; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; protofilament &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xAC19;&#xC740; &#xC9C4; &#xD575; &#xB4E4;&#xACFC; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xACF5;&#xC720;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; bMTs 5 protofilaments&#xC758; &#xC9C4;&#xD575;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xD615;&#xC801;&#xC778; 13 &#xB300;&#xC2E0; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB4E4;&#xACFC; &#xB2E4;&#xB978; &#xACB0;&#xACFC; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xD604;&#xB300; &#xC9C4; &#xD575; tubulin&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB418; &#xACE0;, BtubA &#xBC0F; BtubB &#xC791;&#xC740; microtubules &#xD615;&#xC131; &#xCD08;&#xAE30; tubulin &#xC911;&#xAC04;&#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC138;&#xADE0; microtubules &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xC5C6;&#xC774; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xD48D;&#xBD80; &#xD558; &#xAC8C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xB420; &#xC218; &#xD45C;&#xC2DC;, &#xC774;&#xD6C4; tubulin &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBC0F; &#xC57D;&#xBB3C; &#xAC80;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xAC00; &#xB418;&#xC5B4;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; microtubules: &#xACE0; &#xB300; tubulins 5 protofilament &#xCCB4; &#xC9C4; &#xD575; cytoskeleton&#xC758; &#xAD6C;&#xCD95;.

Los microt&#xFA;bulos juegan un papel crucial en la citocinesis, el transporte y la movilidad, y por tanto son objetivos excelentes para medicamentos contra el c&#xE1;ncer. Todas las tubulinas evolucionaron de un ancestro com&#xFA;n que compartimos con el pariente lejano de la c&#xE9;lula bacteriana prote&#xED;na FtsZ la divisi&#xF3;n, pero al mismo tiempo tubulinas eucariotas se convirti&#xF3; en altamente conservados que forman los microt&#xFA;bulos heterod&#xED;meros, presumiblemente bacteriana FtsZ continu&#xF3; funcionando como un solo protofilamentos homopolim&#xE9;ricas como lo hace hoy. Los microt&#xFA;bulos no han sido encontrados en las bacterias, y no tenemos idea de su evoluci&#xF3;n desde el ancestro tubulina / FtsZ. Usando criomicroscop&#xED;a electr&#xF3;n, aqu&#xED; se muestra que la tubulina y microt&#xFA;bulos hom&#xF3;logos BtubA BtubB forma de bacterias y sugieren que estos se conoce como &#x26;quot;los microt&#xFA;bulos bacterianas&#x26;quot; (BMT). BMT comparten caracter&#xED;sticas importantes con sus hom&#xF3;logos eucariotas, tales como protofilamentos rectos y las interacciones similares protofilamento. BMTs se compone de s&#xF3;lo cinco protofilamentos, sin embargo, en lugar del t&#xED;pico 13 en eucariotas. Estos y otros resultados sugieren que en lugar de ser derivado de tubulina eucari&#xF3;tica moderna, BtubA y BtubB surgi&#xF3; de productos intermedios de tubulina primeros que se formaron peque&#xF1;os microt&#xFA;bulos. Como nos muestran que los microt&#xFA;bulos bacterianas pueden ser producidos en abundancia in vitro sin acompa&#xF1;antes, deben ser herramientas &#xFA;tiles para la investigaci&#xF3;n tubulina y la detecci&#xF3;n de drogas.

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Martin Pilhofer

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