Eukaryotic Polyribosome Profile Analysis

Protein synthesis is a complex cellular process that is regulated at many levels. For example, global translation can be inhibited at the initiation phase ...

University of Medicine and Dentistry of New Jersey, Robert Wood Johnson Medical School

Smad &#x86CB;&#x767D;&#x8C03;&#x89E3;&#x8F6C;&#x5316;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50; &beta; (TGF-&beta;)-&#x8BF1;&#x5BFC;&#x8F6C;&#x5F55;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x6D3B;&#x5316;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x548C;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5B50; (PIA) &#x8868;&#x793A;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6291;&#x5236;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x548C;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5B50;&#xFF0C;&#x8FD8;&#x89C4;&#x5B9A;&#x5176;&#x4ED6;&#x8F6C;&#x5F55;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x67E5;&#x660E; Smad &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E09;&#x6742;&#x4EA4;&#x5C4F;&#x5E55; Smad3 &#x4E0E; Smad4 &#x4F5C;&#x4E3A;&#x8BF1;&#x9975;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x627E;&#x51FA; PIASy&#xFF0C;PIA &#x5927;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x6210;&#x5458;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;&#xFF0C;&#x4E0E; Smad4 &#x5E76;&#x4E0E;&#x53D7;&#x4F53;&#x8C03;&#x63A7; Smads PIASy &#x4EA4;&#x4E92;&#x7684;&#x5F3A;&#x70C8;&#x3002;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D; PIASy &#x4E0E; Smad3 &#x6700;&#x5F3A;&#x70C8;&#x7ED1;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8FD8;&#x5C06;&#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6;&#x53D7;&#x4F53;&#x8C03;&#x63A7; Smads &#x548C; Smad4 &#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;Smad3 &#x4E0E; PIASy &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#x589E;&#x52A0;&#x5728;&#x573A; TGF-&beta; &#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7; Smad3 &#x7684; C &#x672B;&#x7AEF;&#x57DF;&#x53D1;&#x751F;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;Smad3&#x3001; Smad4 &#x548C; PIASy &#x53EF;&#x4EE5;&#x5F62;&#x6210;&#x4E09;&#x5143;&#x590D;&#x6570;&#x3002;PIASy &#x5E76;&#x4E0D;&#x59A8;&#x788D; Smad &#x590D;&#x6742;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; DNA&#xFF0C;&#x4F46;&#x5B83;&#x538B;&#x6291; Smad &#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6709;&#x6761;&#x4EF6;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; PIASy &#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x6291;&#x5236;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; TGF-&beta;-&#x53CD;&#x5E94;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x62EC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x6FC0;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242; p15 &#x548C;&#x7EA4;&#x6EB6;&#x9176;&#x539F;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7269;&#x6291;&#x5236;&#x7269; 1 &#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7684;&#x5B50;&#x96C6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x663E;&#x793A; PIASy &#x53EF;&#x4EE5;&#x4E0E;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x53BB;&#x4E59;&#x9170;&#x9176; 1 (HDAC1) &#x4E00;&#x4EA4;&#x4E92;&#x548C;&#x52A0;&#x6CD5; HDAC &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x66F2;&#x53E4;&#x6291;&#x83CC;&#x7D20; A (TSA) &#x53EF;&#x4EE5;&#x9632;&#x6B62; PIASy &#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E; PIASy &#x53EF;&#x4EE5;&#x6291;&#x5236; TGF-&beta;/Smad &#x4E0E; Smad &#x86CB;&#x767D;&#x548C; HDAC &#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x8F6C;&#x5F55;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;

&#x901A;&#x8FC7; PIASy&#xFF0C;&#x4E00;&#x79CD;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027; STAT Smad &#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x9547;&#x538B;&#x3002;

Smad proteins mediate transforming growth factor beta (TGF-beta)-inducible transcriptional responses. Protein inhibitor of activated signal transducer and activator of transcription (PIAS) represents a family of proteins that inhibits signal transducer and activator of transcription and also regulates other transcriptional responses. In an effort to identify Smad-interacting proteins by a yeast three-hybrid screen with Smad3 and Smad4 as baits, we identified PIASy, a member of the PIAS family. In yeast, PIASy interacts strongly with Smad4 and also with receptor-regulated Smads. In mammalian cells, PIASy binds most strongly with Smad3 and also associates with other receptor-regulated Smads and Smad4. The interaction between Smad3 and PIASy is increased in the presence of TGF-beta and occurs through the C-terminal domain of Smad3. Moreover, Smad3, Smad4, and PIASy can form a ternary complex. PIASy does not inhibit Smad complex binding to DNA, but it represses Smad transcriptional activity. Interestingly, conditional overexpression of PIASy selectively inhibits a subset of endogenous TGF-beta-responsive genes, which includes the cyclin-dependent kinase inhibitor p15, and the plasminogen activator inhibitor 1. We further show that PIASy can interact constitutively with histone deacetylase 1 (HDAC1) and that addition of HDAC inhibitor trichostatin A (TSA) can prevent the inhibitory function of PIASy. Taken together, our studies indicate that PIASy can inhibit TGF-beta/Smad transcriptional responses through interactions with Smad proteins and HDAC.

Repression of Smad transcriptional activity by PIASy, an inhibitor of activated STAT.

Les prot&eacute;ines SMAD interviennent dans le facteur de croissance transformant b&ecirc;ta (TGF-b&ecirc;ta)-r&eacute;ponses transcriptionnelles inductibles. Inhibiteur de la prot&eacute;ine d&#39;activ&eacute; signal transducteur et activateur de la transcription (PIAS) repr&eacute;sente une famille de prot&eacute;ines qui inhibe le signal transducer et un activateur de transcription et r&eacute;glemente &eacute;galement les autres r&eacute;ponses transcriptionnelles. Dans le but d&#39;identifier les prot&eacute;ines Smad interagissant par un &eacute;cran de trois-hybride de levure avec Smad3 et Smad4 comme app&acirc;ts, nous avons identifi&eacute; PIASy, membre de la famille des assemblys PIA. Chez la levure, PIASy interagit fortement avec Smad4 ainsi qu&#39;avec les prot&eacute;ines SMAD r&eacute;cepteur r&eacute;gl&eacute;. Dans les cellules de mammif&egrave;res, PIASy se lie plus fortement avec Smad3 et associe &eacute;galement aux autres prot&eacute;ines SMAD r&eacute;cepteur r&eacute;gl&eacute; et de Smad4. L&#39;interaction entre Smad3 et PIASy est augment&eacute;e en pr&eacute;sence de TGF-beta et se produit &agrave; travers le domaine C-terminal de Smad3. En outre, Smad3 et PIASy Smad4 peuvent former un complexe ternaire. PIASy n&#39;inhibe pas les Smad complexe liant &agrave; l&#39;ADN, mais il r&eacute;prime l&#39;activit&eacute; transcriptionnelle de Smad. Fait int&eacute;ressant, surexpression conditionnelle de PIASy inhibe s&eacute;lectivement un sous-ensemble de g&egrave;nes endog&egrave;nes de TGF-beta-sensible, qui comprend le p15 inhibiteur de kinase cycline-d&eacute;pendante et l&#39;inhibiteur de l&#39;activateur du plasminog&egrave;ne 1. Nous montrons que PIASy peut interagir de fa&ccedil;on constitutive avec histone deacetylase 1 (HDAC1) et que l&#39;addition de l&#39;inhibiteur HDAC trichostatine A (TSA) peut emp&ecirc;cher la fonction inhibitrice des PIASy. Ensemble, nos &eacute;tudes indiquent que PIASy peut inhiber les r&eacute;ponses transcriptionnelles de TGF-beta/Smad gr&acirc;ce &agrave; des interactions avec les prot&eacute;ines Smad et HDAC.

R&eacute;pression de l&#39;activit&eacute; transcriptionnelle de Smad par PIASy, un inhibiteur de la STAT activ&eacute;e.

Die Unterdr&#xFC;ckung der Smad Transkriptionsaktivit&#xE4;t von PIASy, ein Inhibitor der STAT aktiviert.

Le proteine SMAD mediano transforming growth factor beta (TGF-beta)-risposte trascrizionali inducibili. Inibitore della proteina di attivazione trasduttore di segnale e attivatore della trascrizione (PIAS) rappresenta una famiglia di proteine che inibisce il trasduttore di segnale e attivatore di trascrizione e regola anche altre risposte di transcriptional. Nel tentativo di identificare le proteine Smad interagenti da uno schermo di tre-ibrido del lievito con Smad3 e Smad4 come esche, abbiamo identificato PIASy, un membro della famiglia pia. In lievito, PIASy interagisce fortemente con Smad4 e anche con ricevitore regolato SMAD. In cellule di mammifero, PIASy si lega pi&ugrave; fortemente con Smad3 e associa anche altri recettori-regolato SMAD e Smad4. L&#39;interazione tra Smad3 e PIASy &egrave; aumentato in presenza di TGF-beta e si verifica attraverso il dominio C-terminale di Smad3. Inoltre, Smad3, Smad4 e PIASy possono formare un complesso ternario. PIASy non inibisce Smad associazione complessa di DNA, ma reprime l&#39;attivit&agrave; trascrizionale Smad. &Egrave; interessante notare, condizionale sovraespressione di PIASy inibisce selettivamente un sottoinsieme dei geni endogeni TGF-beta-reattiva, che comprende il p15 inibitore della chinasi ciclina-dipendenti e l&#39;inibitore attivatore del plasminogeno 1. Mostriamo ulteriormente che PIASy pu&ograve; interagire costitutivamente con istone deacetylase 1 (HDAC1) e che aggiunta di HDAC inibitori trichostatin A (TSA) pu&ograve; prevenire la funzione inibitoria del PIASy. Presi insieme, i nostri studi indicano che PIASy pu&ograve; inibire TGF-beta/Smad transcriptional risposte attraverso interazioni con proteine Smad e HDAC.

Repressione dell&#39;attivit&agrave; trascrizionale Smad di PIASy, un inibitore della STAT attivata.

Smad &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50; &beta; &#xFF08;TGF &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;&#xFF09;-&#x8A98;&#x5C0E;&#x6027;&#x8EE2;&#x5199;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3002;&#x4FE1;&#x53F7;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C7;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B5;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x4FE1;&#x53F7;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C7;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B5;&#x30FC;&#x3068;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x4ED6;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x65CF;&#x6027;&#x8EE2;&#x5199; (PIA) &#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Smad &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x9175;&#x6BCD; 3 &#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9; &#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; Smad3 &#x3068; Smad4 &#x3092;&#x990C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x52AA;&#x529B;&#x3067;&#x306F;&#x3001;PIASy&#x3001;PIA &#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;&#x3067;&#x306F;&#x3001;PIASy &#x306F;&#x5F37;&#x304F; Smad4 &#x3068;&#x3082;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x898F;&#x5236; Smads &#x5BFE;&#x8A71;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; PIASy &#x3068; Smad3 &#x3092;&#x6700;&#x3082;&#x5F37;&#x304F;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x3001;&#x4ED6;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x898F;&#x5236; Smads &#x3068; Smad4 &#x3068;&#x3092;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Smad3 &#x3068; PIASy &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;TGF-&beta; &#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;Smad3 &#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;Smad3&#x3001;Smad4&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; PIASy &#x4E09;&#x5143;&#x932F;&#x4F53;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;PIASy DNA &#x306B; Smad &#x8907;&#x5408;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x304C; Smad &#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;PIASy &#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x4ED8;&#x304D;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; p15, &#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3; &#x30FB; &#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; &#x30FB; &#x30A4;&#x30F3;&#x30D2;&#x30D3;&#x30BF;&#x30FC; 1 &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E; TGF &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x5FDC;&#x7B54;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B; PIASy &#x304C;&#x6052;&#x5E38;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x8131;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x9175;&#x7D20; 1 (HDAC1) &#x3068;&#x3084;&#x308A;&#x53D6;&#x308A;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3068; HDAC &#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x30C8;&#x30EA;&#x30B3;&#x30B9;&#x30BF;&#x30C1;&#x30F3; A (TSA) &#x306E;&#x6DFB;&#x52A0; PIASy &#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;.&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x53D6;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;PIASy TGF-&beta;/Smad &#x8EE2;&#x5199;&#x5FDC;&#x7B54; HDAC Smad &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Smad &#x6D3B;&#x6027; STAT &#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264; PIASy &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x6291;&#x5236;

Smad &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCC0;&#xD615; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; &#xBCA0;&#xD0C0; (TGF-&#xBCA0;&#xD0C0;) &#xC911;&#xC7AC;-&#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; transcriptional &#xC751;&#xB2F5;. &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC2E0;&#xD638; &#xBCC0;&#xD658;&#xAE30; &#xBC0F; &#xC804;&#xC0AC; (PIA)&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC2E0;&#xD638; &#xBCC0;&#xD658;&#xAE30; &#xBC0F; &#xC804;&#xC0AC; &#xD65C;&#xC131;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xB610;&#xD55C; &#xB2E4;&#xB978; transcriptional &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAC00;&#xC871;. Baits&#xB85C; smad3&#xC640; Smad4 Smad &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD6A8; &#xBAA8; 3 &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xD654;&#xBA74;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; PIASy, PIA &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0; &#xD655;&#xC778;. &#xC5D0; &#xD6A8; &#xBAA8;, Piasy&#xB294; Smad4 &#xBC0F; Smads &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xADDC;&#xC81C;&#xB3C4; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; PIASy smad3&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xAC00;&#xC7A5; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xACB0;&#xC18D; &#xD558; &#xACE0; &#xB610;&#xD55C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB41C; Smads&#xC640; Smad4 &#xC5F0;&#xACB0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Smad3&#xC640; PIASy &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; TGF-&#xBCA0;&#xD0C0; &#xC874;&#xC7AC; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; smad3&#xC758; C-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, Smad3, Smad4, &#xBC0F; PIASy &#xC0BC;&#xD56D; &#xBCF5;&#xD569;&#xCCB4;&#xB97C; &#xD615;&#xC131;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. PIASy Smad &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; DNA &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; Smad transcriptional &#xD65C;&#xB3D9; &#xB204;&#xB974;&#xB294;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, Piasy&#xC758; &#xC870;&#xAC74;&#xBD80; overexpression&#xB294; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD3EC;&#xD568; &#xF06C; &#xC885;&#xC18D; kinase &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; p15 plasminogen activator &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; 1 &#xC0DD; TGF-&#xBCA0;&#xD0C0;-&#xBC18;&#xC751; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB354; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; deacetylase 1 (HDAC1)&#xC640; PIASy constitutively &#xC791;&#xC6A9; &#xC218; &#xD45C;&#xC2DC; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; HDAC &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; trichostatin A (TSA)&#xC758; Piasy&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xBC29;&#xC9C0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; PIASy Smad &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xACFC; HDAC&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; TGF-&#xBCA0;&#xD0C0;/Smad transcriptional &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

PIASy, &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; STAT&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Smad transcriptional &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC5B5;&#xC555;.

Prote&iacute;nas smad median el factor de crecimiento transformante beta (TGF-beta)-inducibles respuestas transcripcionales. Inhibidor de la prote&iacute;na de activado transductor de se&ntilde;al y activador de la transcripci&oacute;n (PIAS) representa una familia de prote&iacute;nas que inhibe el transductor de se&ntilde;al y activador de la transcripci&oacute;n y tambi&eacute;n regula otras respuestas transcripcionales. En un esfuerzo para identificar prote&iacute;nas Smad-interactuando por una pantalla de tres h&iacute;bridos de levadura con Smad3 y Smad4 como cebos, identificamos fosforiladas, un miembro de la familia de PIAS. En la levadura, fosforiladas interact&uacute;a fuertemente con Smad4 y tambi&eacute;n con Smads regulados por el receptor. En c&eacute;lulas de mam&iacute;feros, fosforiladas se une m&aacute;s fuertemente con Smad3 y tambi&eacute;n se asocia con otros Smads y Smad4 regulados por el receptor. La interacci&oacute;n entre Smad3 y fosforiladas se incrementa en presencia de TGF-beta y se produce a trav&eacute;s del dominio c-terminal de Smad3. Por otra parte, Smad3, Smad4 y fosforiladas pueden formar un complejo ternario. Fosforiladas no inhiben Smad complejo Uni&oacute;n al ADN, pero reprime la actividad transcripcional de Smad. Curiosamente, condicional sobreexpresi&oacute;n de fosforiladas inhibe selectivamente un subconjunto de genes end&oacute;genos de TGF-beta-sensible, que incluye la p15 de inhibidor de la quinasa dependiente de ciclina y el inhibidor del activador del plasmin&oacute;geno 1. Adem&aacute;s, mostramos que fosforiladas pueden interactuar constitutivamente con Histona deacetilasa 1 (HDAC1) y que adem&aacute;s del inhibidor HDAC tricostatina A (TSA) pueden prevenir la funci&oacute;n inhibidora de fosforiladas. Tomados en conjunto, nuestros estudios indican que fosforiladas pueden inhibir respuestas transcripcionales de TGF-beta/Smad a trav&eacute;s de interacciones con las prote&iacute;nas Smad y HDAC.

Represi&oacute;n de la actividad transcripcional de Smad por fosforiladas, un inhibidor de STAT activado.

Smad &#x86CB;&#x767D;&#x53D1;&#x6325;&#x67A2;&#x7EBD;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5728;&#x8C03;&#x89E3;&#x8F6C;&#x5316;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50; &beta; (TGF-&beta;) &#x8F6C;&#x5F55;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728; PIAS3&#xFF0C;&#x86CB;&#x767D;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x6FC0;&#x6D3B; STAT (PIA) &#x5BB6;&#x5EAD;&#x6210;&#x5458;&#x6FC0;&#x6D3B; TGF-&beta;/Smad &#x8F6C;&#x5F55;&#x53CD;&#x5E94;&#x6B64;&#x62A5;&#x8868;&#x4E2D;&#x663E;&#x793A;&#x3002;PIAS3 &#x4E0E; Smad &#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x6700;&#x5F3A;&#x70C8;&#x7684; Smad3 &#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;PIAS3 &#x548C; Smad3 &#x5F7C;&#x6B64;&#x4EA4;&#x4E92;&#x4E00;&#x7EA7;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x548C;&#x4E5F;&#x5728;&#x8BD5;&#x7BA1;&#x91CC;&#xFF0C;&#x548C;&#x901A;&#x8FC7; Smad3 &#x7684; C &#x672B;&#x7AEF;&#x57DF;&#x53D1;&#x751F;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x663E;&#x793A; PIAS3 &#x53EF;&#x4EE5;&#x4EA4;&#x4E92;&#x4E00;&#x822C;&#x5171; 300 &#x82AF;&#x7247;/CBP&#xFF0C;PIA &#x86CB;&#x767D;&#x53EF;&#x4E0E; 300 &#x82AF;&#x7247;/CBP &#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;PIASy&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x6291;&#x5236; Smad &#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x6027;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x662F;&#x65E0;&#x6CD5;&#x4E0E; 300 &#x82AF;&#x7247;/CBP &#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;PIAS3 &#x7684;&#x73AF;&#x57DF;&#x662F; 300 &#x82AF;&#x7247;/CBP &#x4E0E;&#x4E92;&#x52A8;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x548C;&#x73AF;&#x57DF;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; PIAS3&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x4E0D;&#x80FD;&#x7ED1;&#x5B9A; 300 &#x82AF;&#x7247;/CBP&#xFF0C;&#x4E0D;&#x518D;&#x6FC0;&#x6D3B; TGF beta Smad &#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x8F6C;&#x5F55;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; PIAS3&#x3001; Smad3 &#x548C; 300 &#x82AF;&#x7247;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5F62;&#x6210;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E09;&#x5143;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#xFF0C;&#x663E;&#x8457;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86; TGF-&beta; &#x7684;&#x5F85;&#x9047;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x5BF9; TGF-&beta; &#x7684;&#x5F85;&#x9047;&#xFF0C;PIAS3 &#x53EF;&#x4EE5;&#x5F62;&#x6210;&#x4E00;&#x4E2A;&#x590D;&#x6742;&#x4E0E; Smads &#x548C; 300 &#x82AF;&#x7247;/CBP &#x6FC0;&#x6D3B; Smad &#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;

Smad &#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027; STAT3 &#x6FC0;&#x6D3B; &#xFF08;PIAS3&#xFF09;&#x3002;

Smad proteins play pivotal roles in mediating the transforming growth factor beta (TGF-beta) transcriptional responses. We show in this report that PIAS3, a member of the protein inhibitor of activated STAT (PIAS) family, activates TGF-beta/Smad transcriptional responses. PIAS3 interacts with Smad proteins, most strongly with Smad3. PIAS3 and Smad3 interact with each other at the endogenous protein level in mammalian cells and also in vitro, and the association occurs through the C-terminal domain of Smad3. We further show that PIAS3 can interact with the general coactivators p300/CBP, the first evidence that a PIAS protein can associate with p300/CBP. In contrast, PIASy, which inhibits Smad transcriptional activity and other transcriptional responses, is unable to interact with p300/CBP. The RING domain of PIAS3 is essential for interaction with p300/CBP, and a RING domain mutant PIAS3, which cannot bind p300/CBP, no longer activates TGF-beta/Smad-dependent transcription. Furthermore, we show that PIAS3, Smad3, and p300 can form a ternary complex, which is markedly increased by TGF-beta treatment. Taken together, our studies indicate that on TGF-beta treatment, PIAS3 can form a complex with Smads and p300/CBP and activate Smad transcriptional activity.

Activation of Smad transcriptional activity by protein inhibitor of activated STAT3 (PIAS3).

Les prot&eacute;ines SMAD jouent un r&ocirc;le crucial dans la m&eacute;diation des r&eacute;ponses transcriptionnelles b&ecirc;ta (TGF-b&ecirc;ta) facteur de croissance transformant. Nous montrons dans le pr&eacute;sent rapport que PIAS3, un membre de l&#39;inhibiteur de la prot&eacute;ine activ&eacute;e famille STAT (PIAS), active le TGF-beta/Smad r&eacute;ponses transcriptionnelles. PIAS3 interagit avec les prot&eacute;ines Smad, plus fortement avec Smad3. PIAS3 et Smad3 interagissent entre eux au niveau des prot&eacute;ines endog&egrave;nes dans les cellules de mammif&egrave;res et aussi in vitro, et l&#39;association se fait par le domaine C-terminal de Smad3. Nous montrons que PIAS3 peut interagir avec le g&eacute;n&eacute;rales coactivateurs p300/CBP, la premi&egrave;re preuve que p300/CBP peut associer une prot&eacute;ine PIAS. En revanche, PIASy, qui inhibe l&#39;activit&eacute; transcriptionnelle de Smad et autres r&eacute;ponses transcriptionnelles, ne peut pas interagir avec le p300/CBP. Le domaine de l&#39;anneau de PIAS3 est essentiel pour l&#39;interaction avec le p300/CBP et un mutant de domaine RING PIAS3, qui ne peut pas lier le p300/CBP, n&#39;est plus active TGF-beta/Smad-d&eacute;pendants de transcription. De plus, nous montrons que PIAS3 et Smad3 p300 peuvent former un complexe ternaire, qui est augment&eacute; par un traitement de TGF-b&ecirc;ta. Ensemble, nos &eacute;tudes indiquent que sur le traitement de TGF-b&ecirc;ta, PIAS3 pouvez forment un complexe avec les prot&eacute;ines SMAD et p300/CBP et activer Smad activit&eacute; transcriptionnelle.

Activation de l&#39;activit&eacute; transcriptionnelle de Smad par inhibiteur de la prot&eacute;ine de STAT3 activ&eacute;e (PIAS3).

Die Aktivierung des Smad Transkriptionsaktivit&#xE4;t durch Protein Inhibitor des aktivierten STAT3 (PIAS3).

Le proteine SMAD giocano un ruolo cruciale nel mediare le risposte transcriptional del transforming growth factor beta (TGF-beta). Vi mostriamo in questa relazione che PIAS3, un membro dell&#39;inibitore della proteina della famiglia STAT (PIAS) attivato, attiva risposte di transcriptional TGF-beta/Smad. PIAS3 interagisce con le proteine Smad, pi&ugrave; fortemente con Smad3. PIAS3 e Smad3 interagiscono tra loro a livello di proteina endogena in cellule di mammiferi e anche in vitro, e l&#39;associazione avviene attraverso il dominio C-terminale di Smad3. Ulteriormente, ci mostra che PIAS3 pu&ograve; interagire con il generale coattivatori p300/CBP, la prima prova che una proteina PIAS pu&ograve; associare p300/CBP. Al contrario, PIASy, che inibisce l&#39;attivit&agrave; trascrizionale Smad e altre risposte di transcriptional, &egrave; in grado di interagire con p300/CBP. Il dominio di anello di PIAS3 &egrave; essenziale per l&#39;interazione con p300/CBP e un mutante di dominio RING PIAS3, che non &egrave; possibile associare p300/CBP, non pi&ugrave; attiva trascrizione TGF-beta/Smad-dipendente. Inoltre, mostriamo che PIAS3, Smad3 e p300 pu&ograve; formare un complesso ternario, che &egrave; notevolmente aumentato dal trattamento di TGF-beta. Presi insieme, i nostri studi indicano che il trattamento di TGF-beta, PIAS3 pu&ograve; formano un complesso con SMAD e p300/CBP e attivare attivit&agrave; transcriptional Smad.

Attivazione dell&#39;attivit&agrave; trascrizionale Smad da inibitore della proteina di attivazione STAT3 (PIAS3).

Smad &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5909;&#x5F62;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50; (TGF &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;&#xFF09; &#x306E;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x6975;&#x3081;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x5831;&#x544A;&#x3067;&#x306F; TGF-&beta;/Smad &#x8EE2;&#x5199;&#x5FDC;&#x7B54; PIAS3 &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x963B;&#x5BB3;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E; STAT (PIA) &#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Smad &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; Smad3 &#x3068;&#x6700;&#x3082;&#x5F37;&#x304F; PIAS3 &#x3068;&#x3084;&#x308A;&#x53D6;&#x308A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x3082; in vitro &#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306E; PIAS3 &#x3068; Smad3 &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x3067;&#x3001;&#x5354;&#x4F1A; Smad3 &#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B; PIAS3 &#x4E00;&#x822C;&#x30B3;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; p300/CBP&#x3001;PIA &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; p300/CBP &#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3068;&#x3084;&#x308A;&#x53D6;&#x308A;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;Smad &#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x3068;&#x4ED6;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3001;PIASy &#x306F; p300/CBP &#x3068;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;PIAS3 &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304C; p300/CBP &#x3068;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x5909;&#x7570; p300/CBP &#x304C;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3001;PIAS3 &#x306F;&#x3082;&#x306F;&#x3084; TGF &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; Smad &#x4F9D;&#x5B58;&#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;PIAS3&#x3001;Smad3&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; p300 TGF-&beta; &#x51E6;&#x7406;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x5897;&#x52A0;&#x4E09;&#x5143;&#x8907;&#x5408;&#x304C;&#x5F62;&#x6210;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x53D6;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x7814;&#x7A76; TGF &beta; &#x6CBB;&#x7642;&#x3067; PIAS3 &#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059; Smads &#x3068; p300/CBP &#x3068;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x5F62;&#x6210; Smad &#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;.

Smad &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x963B;&#x5BB3;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316; STAT3 &#x306E;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316; (PIAS3)&#x3002;

Smad &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCC0;&#xD615; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; (TGF-&#xBCA0;&#xD0C0;) &#xBCA0;&#xD0C0; transcriptional &#xC751;&#xB2F5; &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC911;&#xCD94;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; PIAS3, &#xAC00;&#xC871;, &#xD569;&#xACC4; (PIA) &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0; TGF-&#xBCA0;&#xD0C0;/Smad transcriptional &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294;&#xC774; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xC2DC;. PIAS3 smad3&#xC640; &#xAC00;&#xC7A5; &#xAC15;&#xD558;&#xAC8C; Smad &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. PIAS3 &#xBC0F; Smad3 &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACE0;&#xB3C4; &#xCCB4; &#xC678;, &#xC0DD; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC11C;&#xB85C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xD611;&#xD68C; smad3&#xC758; C-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB354; PIAS3 &#xC77C;&#xBC18; coactivators p300/CBP, PIA &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; p300/CBP&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC99D;&#xAC70;&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74;, Smad transcriptional &#xD65C;&#xB3D9;&#xACFC; &#xB2E4;&#xB978; transcriptional &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; Piasy&#xB294; p300/CBP&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. PIAS3 &#xB9C1; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; p300/CBP&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xBA70; &#xBC18;&#xC9C0; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; p300/CBP&#xB97C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, PIAS3 &#xC774;&#xC0C1; TGF-&#xBCA0;&#xD0C0;/Smad &#xC885;&#xC18D; &#xC804;&#xC0AC;&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; PIAS3, Smad3, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; p300 TGF-&#xBCA0;&#xD0C0; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; 3 &#xC9C4; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD615;&#xC131; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xACE0; TGF-&#xBCA0;&#xD0C0; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; PIAS3 &#xC218; &#xC788;&#xB294; Smads&#xC640; p300/CBP &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD615;&#xC131; Smad transcriptional &#xD65C;&#xB3D9; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;.

&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; stat3&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Smad transcriptional &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; (PIAS3).

Prote&iacute;nas smad juegan un papel fundamental en la mediaci&oacute;n de las transformaci&oacute;n respuestas transcripcional de factor de crecimiento beta (TGF-beta). Mostramos en este informe que PIAS3, un miembro del inhibidor de la prote&iacute;na de la familia de STAT (PIAS) activada, activa las respuestas transcripcionales de TGF-beta/Smad. PIAS3 interact&uacute;a con las prote&iacute;nas Smad, m&aacute;s fuertemente con Smad3. PIAS3 y Smad3 interactuan unos con otros en el nivel de prote&iacute;na end&oacute;gena, en c&eacute;lulas de mam&iacute;feros y tambi&eacute;n in vitro, y la asociaci&oacute;n se produce a trav&eacute;s del dominio c-terminal de Smad3. Adem&aacute;s, mostramos que PIAS3 puede interactuar con la activaci&oacute;n general p300/CBP, la primera evidencia que una prote&iacute;na Pia puede asociar con la CBP/p300. Por el contrario, fosforiladas, que inhibe la actividad transcripcional de Smad y otras respuestas transcripcionales, es incapaz de interactuar con la CBP/p300. El dominio del anillo de PIAS3 es esencial para la interacci&oacute;n con la CBP/p300, y un mutante del dominio del anillo PIAS3, que no se puede enlazar el CBP/p300, ya no activa la transcripci&oacute;n de TGF-beta/Smad-dependiente. Adem&aacute;s, mostramos que PIAS3, Smad3 y p300 pueden formar un complejo ternario, que se incrementa notablemente por el tratamiento de TGF-beta. Tomados en conjunto, nuestros estudios indican que en tratamiento de TGF-beta, PIAS3 puede formar un complejo con Smads y CBP/p300 y activar la actividad transcripcional de Smad.

Activaci&oacute;n de la actividad transcripcional de Smad por el inhibidor de la prote&iacute;na de STAT3 activado (PIAS3).

Smad4 &#x5728; TGF-&beta; (&#x8F6C;&#x5316;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50; &beta;) &#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x7740;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528; / Smad &#x4ECB;&#x5BFC;&#x8F6C;&#x5F55;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; Smad4 &#x662F;&#x4F53;&#x5185;&#x548C;&#x4F53;&#x5916;&#x7684; sumoylated&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x663E;&#x793A; sumoylation Smad4 &#x89C4;&#x7BA1;&#x5176;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#xFF0C;&#x4F46;&#x672A;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684; sumoylation &#x5BF9; Smad4 &#x7684;&#x5185;&#x5728;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x8BE5;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x76F8;&#x6251; &#xFF08;&#x5C0F;&#x6CDB;&#x7D20;&#x76F8;&#x5173;&#x4FEE;&#x9970;&#x7B26;&#xFF09;-1&#x3001; Ubc9 &#x53EF;&#x4EE5;&#x6291;&#x5236; TGF-&beta;-&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x62A5;&#x544A;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x800C;&#x8054;&#x5408;&#x8F6C;&#x67D3;&#x4E0E;&#x76F8;&#x6251; 1 &#x86CB;&#x767D;&#x9176;-1 (SuPr-1) &#x53EF;&#x4EE5;&#x589E;&#x52A0; TGF-&beta; &#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x663E;&#x793A;&#x8BE5;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684; Smad4 sumoylation &#x7AD9;&#x70B9;&#x6216;&#x8054;&#x5408;&#x8F6C;&#x67D3;&#x4E0E; SuPr 1 &#x6781;&#x5927;&#x5730;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86; Smad4 &#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x76F4;&#x63A5;&#x878D;&#x5408;&#x7684;&#x76F8;&#x6251; 1 sumoylation Smad4 &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x5176;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x662F;&#x6B63;&#x5728;&#x8FC5;&#x901F;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;sumoylation &#x6291;&#x5236;&#x8BB8;&#x591A;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;sumoylation &#x8FD8;&#x538B;&#x6291; Smad4 &#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;Sumoylation Smad4 &#x7684;&#x51C0;&#x5F71;&#x54CD;&#x56E0;&#x6B64;&#x53EF;&#x4EE5;&#x523A;&#x6FC0;&#x6216;&#x6291;&#x5236;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x6839;&#x636E;&#x76EE;&#x6807;&#x63A8;&#x52A8;&#x8005;&#xFF0C;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x3002;

&#x76F8;&#x6251;&#x6539;&#x6027; Smad4 &#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x9547;&#x538B;&#x3002;

&#x5148;&#x5929;&#x8F6C;&#x5316;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;-&beta; (TGF-&beta;) &#x6291;&#x5236; G1 &#x671F;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x3002;Smad3 &#x5DF2;&#x8C03;&#x89E3;&#x751F;&#x957F;&#x6291;&#x5236; TGF-&beta; &#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E2D;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A; Smad3 &#x662F; G1 &#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x6FC0;&#x9176; CDK4 &#x548C; CDK2 &#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x751F;&#x7406;&#x57FA;&#x677F;&#x3002;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7624;&#x86CB;&#x767D;&#x5BB6;&#x65CF;&#xFF0C;&#x9664;&#x4E86; Smad3 &#x662F;&#x8FC4;&#x4ECA;&#x4E3A;&#x6B62;&#x7684;&#x552F;&#x4E00; CDK4 &#x886C;&#x5E95;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x6620;&#x5C04;&#x5230; 8 &#x82CF;&#x6C28;&#x9178;&#x3001; &#x82CF;&#x6C28;&#x9178; 178 &#x548C; Ser 212 &#x4E2D; Smad3 CDK4 &#x548C; CDK2 &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7AD9;&#x70B9;&#x3002;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684; CDK &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7AD9;&#x70B9;&#x589E;&#x52A0; Smad3 &#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7684; CDK &#x6291;&#x5236;&#x56E0;&#x5B50; p15 &#x7684;&#x9AD8;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684; Smad3 CDK &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4E5F;&#x589E;&#x5927;&#x4E0B;&#x8C03;&#x5176;&#x80FD;&#x529B; c myc.&#x4F7F;&#x7528; Smad3(-/-) &#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x663E;&#x793A; Smad3 &#x6291;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x4ECE; G1 &#x81F3; S &#x671F;&#x548C;&#x7A81;&#x53D8; Smad3 &#x7684; CDK &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7F51;&#x7AD9;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86;&#x8FD9;&#x79CD;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x603B;&#x4E4B;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; Smad3 CDK &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x6291;&#x5236;&#x5176;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x6027;&#x548C;&#x589E;&#x6B96;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F80;&#x5F80;&#x542B;&#x6709;&#x9AD8;&#x91CF;&#x7684; CDK &#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x51CF;&#x5C11; Smad3 &#x6D3B;&#x52A8;&#x7531; CDK &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x80BF;&#x7624;&#x53D1;&#x751F;&#x4E0E; TGF-&beta; &#x62B5;&#x6297;&#x764C;&#x75C7;&#x7684;&#x3002;

&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x6FC0;&#x9176;&#x8C03;&#x8282; Smads &#x7684;&#x6297;&#x589E;&#x6B96;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Transforming growth factor-beta (TGF-beta) potently inhibits cell cycle progression at the G1 phase. Smad3 has a key function in mediating the TGF-beta growth-inhibitory response. Here we show that Smad3 is a major physiological substrate of the G1 cyclin-dependent kinases CDK4 and CDK2. Except for the retinoblastoma protein family, Smad3 is the only CDK4 substrate demonstrated so far. We have mapped CDK4 and CDK2 phosphorylation sites to Thr 8, Thr 178 and Ser 212 in Smad3. Mutation of the CDK phosphorylation sites increases Smad3 transcriptional activity, leading to higher expression of the CDK inhibitor p15. Mutation of the CDK phosphorylation sites of Smad3 also increases its ability to downregulate the expression of c-myc. Using Smad3(-/-) mouse embryonic fibroblasts and other epithelial cell lines, we further show that Smad3 inhibits cell cycle progression from G1 to S phase and that mutation of the CDK phosphorylation sites in Smad3 increases this ability. Taken together, these findings indicate that CDK phosphorylation of Smad3 inhibits its transcriptional activity and antiproliferative function. Because cancer cells often contain high levels of CDK activity, diminishing Smad3 activity by CDK phosphorylation may contribute to tumorigenesis and TGF-beta resistance in cancers.

Cyclin-dependent kinases regulate the antiproliferative function of Smads.

Transformation puissamment TGF-b&ecirc;ta (TGF-b&ecirc;ta), inhibe la progression du cycle cellulaire en phase G1. Smad3 joue un r&ocirc;le cl&eacute; dans la m&eacute;diation de la r&eacute;ponse inhibitrice de croissance TGF-beta. Nous montrons ici que Smad3 est un principal substrat physiologique des kinases cycline-d&eacute;pendantes G1 CDK4 et CDK2. &Agrave; l&#39;exception de la famille de prot&eacute;ine du r&eacute;tinoblastome, Smad3 est le seul substrat CDK4 d&eacute;montr&eacute; jusqu&#39;&agrave; pr&eacute;sent. Nous avons cartographi&eacute; les sites de phosphorylation CDK4 et CDK2 Thr 8, 178 Thr et Ser 212 dans Smad3. Mutation des sites de phosphorylation CDK augmente l&#39;activit&eacute; transcriptionnelle Smad3, menant &agrave; une expression plus &eacute;lev&eacute;e de la CDK inhibiteur p15. Mutation des sites de phosphorylation de CDK de Smad3 augmente aussi sa capacit&eacute; &agrave; diminuer l&#39;expression de fibroblastes embryonnaires de souris &agrave; l&#39;aide de Smad3(-/-) c-transcription et autres lign&eacute;es de cellules &eacute;pith&eacute;liales, nous montrons que Smad3 inhibe la progression du cycle cellulaire de G1 &agrave; la phase S et que la mutation des sites de phosphorylation de CDK dans Smad3 augmente cette capacit&eacute;. Ensemble, ces r&eacute;sultats indiquent que la phosphorylation de CDK de Smad3 inhibe sa fonction de l&#39;activit&eacute; et antiprolif&eacute;ratives transcriptionnelle. Parce que les cellules canc&eacute;reuses contiennent souvent des niveaux &eacute;lev&eacute;s d&#39;activit&eacute; CDK, diminuant l&#39;activit&eacute; Smad3 par phosphorylation de CDK peut contribuer &agrave; la tumorigen&egrave;se et r&eacute;sistance de TGF-b&ecirc;ta dans les cancers.

Kinases cycline-d&eacute;pendantes r&eacute;gulent la fonction antiprolif&eacute;rative de prot&eacute;ines SMAD.

Cyclin-abh&#xE4;ngige Kinasen regulieren die antiproliferative Funktion Smads.

Trasformare potentemente growth factor-beta (TGF-beta) inibisce la progressione del ciclo cellulare nella fase G1. SMAD3 ha una funzione chiave nella mediazione della risposta inibitoria di crescita TGF-beta. Qui vi mostriamo che Smad3 &egrave; un importante substrato fisiologico la chinasi ciclina-dipendente G1 CDK4 e CDK2. Ad eccezione della famiglia della proteina retinoblastoma, Smad3 &egrave; il substrato di CDK4 solo dimostrato finora. Noi abbiamo mappati CDK4 e CDK2 siti di fosforilazione della Thr 8, Thr 178 e Ser 212 in Smad3. Mutazione dei siti di fosforilazione CDK aumenta l&#39;attivit&agrave; trascrizionale Smad3, portando a maggiore espressione del p15 inibitore CDK. Mutazione dei siti di fosforilazione CDK di Smad3 aumenta anche la capacit&agrave; di regolare l&#39;espressione di c-myc. Smad3(-/-) utilizzando mouse fibroblasti embrionali e altre linee di cellule epiteliali, mostriamo ulteriormente Smad3 inibisce la progressione del ciclo cellulare da G1 alla fase S e che la mutazione dei luoghi di fosforilazione CDK Smad3 aumenta questa possibilit&agrave;. Presi insieme, questi risultati indicano che la fosforilazione di CDK di Smad3 inibisce la sua funzione trascrizionale attivit&agrave; e antiproliferativi. Perch&eacute; le cellule tumorali spesso contengono alti livelli di attivit&agrave; CDK, diminuendo Smad3 attivit&agrave; di fosforilazione CDK pu&ograve; contribuire alla tumorigenesi e resistenza TGF-beta in tumori.

Le chinasi ciclina-dipendente regolano la funzione antiproliferativa di smad.

&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50; &beta; &#xFF08;TGF &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;&#xFF09; &#x3092;&#x5F37;&#x529B;&#x306B;&#x5909;&#x63DB;&#x3067; G1 &#x671F;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Smad3 TGF &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x6210;&#x9577;&#x6291;&#x5236;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x30AD;&#x30FC;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005; Smad3 G1 &#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; CDK4 &#x3068; CDK2 &#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x306A;&#x57FA;&#x677F;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7DB2;&#x819C;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x816B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x3092;&#x9664;&#x3044;&#x3066;&#x3001;Smad3 &#x3068;&#x3053;&#x308D;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x552F;&#x4E00;&#x306E; CDK4 &#x57FA;&#x677F;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F; Thr 8&#x3001;Thr 178&#x3001;Ser 212 Smad3 &#x306B; CDK4 &#x3068; CDK2 &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;CDK &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x3059;&#x308B; CDK &#x30A4;&#x30F3;&#x30D2;&#x30D3;&#x30BF;&#x30FC; p15 &#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x8868;&#x73FE;&#x3092;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C9;&#x3001;Smad3 &#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;CDK &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E; Smad3 &#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x307E;&#x305F; c myc. Smad3(-/-) &#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80DA;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x884C;&#x306E;&#x5F0F;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5; &#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B; Smad3 G1 &#x304B;&#x3089; S &#x671F;&#x3078;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x3001;, Smad3 &#x306E; CDK &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x304C;&#x3053;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x53D6;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x767A;&#x898B;&#x306F;&#x3001;CDK &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316; Smad3 &#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5897;&#x6B96;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x304C;&#x3093;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070; CDK &#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x30CF;&#x30A4;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x542B;&#x3093;&#x3067;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;Smad3 &#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3; CDK &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x767A;&#x764C;&#x3068;&#x764C;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; TGF &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x62B5;&#x6297;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3002;

&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; Smads &#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xBCC0;&#xD615; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790;-&#xBCA0;&#xD0C0; (TGF-&#xBCA0;&#xD0C0;) potently g 1 &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xC9C4;&#xD589;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;. Smad3 TGF-&#xBCA0;&#xD0C0; &#xC131;&#xC7A5; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC751;&#xB2F5; &#xC911;&#xC7AC;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC774; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; smad3&#xC740; G1 &#xF06C; &#xC885;&#xC18D; kinases CDK4 &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; cdk2&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xAE30;&#xC9C8;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Retinoblastoma &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAC00;&#xC871;&#xC744; &#xC81C;&#xC678;&#xD55C; Smad3 &#xC9C0;&#xAE08;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900; &#xC720;&#xC77C;&#xD55C; CDK4 &#xAE30;&#xD310; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC138; 8 &#xC138; 178, smad3&#xC5D0;&#xC11C; Ser 212 CDK4 CDK2 &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xB9E4;&#xD551;&#xD55C;. CDK &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; Smad3 transcriptional &#xD65C;&#xB3D9;, CDK &#xC5B5;&#xC81C; &#xBB3C; p15&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xD45C;&#xD604;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C0;&#xB294; &#xC99D;&#xAC00; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. CDK &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; smad3&#xC758; &#xBCC0;&#xC774; &#xB610;&#xD55C; &#xC99D;&#xAC00; downregulate &#xD558;&#xB294; &#xB2A5;&#xB825; c myc.&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; Smad3(-/-) &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBBF8; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC120; &#xB2E4;&#xB978; &#xD45C;&#xD604;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB354; Smad3 g 1&#xC5D0;&#xC11C; S &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xC9C4;&#xD589;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; smad3&#xC5D0;&#xC11C; CDK &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC99D;&#xAC00;&#xC774; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740; &#xC774;&#xB4E4;&#xC774; &#xBC1C;&#xACAC; smad3&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; CDK &#xC5B5;&#xC81C; transcriptional &#xD65C;&#xB3D9; &#xBC0F; antiproliferative &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xC885;&#xC885; CDK &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568;, tumorigenesis &#xBC0F; &#xC554;&#xC5D0;&#xC11C; TGF-&#xBCA0;&#xD0C0; &#xC800;&#xD56D;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; CDK &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Smad3 &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C;.

&#xF06C; &#xC885;&#xC18D; kinases Smads antiproliferative &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC870;&#xC808;.

Transformar el factor de crecimiento beta (TGF-beta) potentemente inhibe la progresi&oacute;n del ciclo celular en la fase G1. Smad3 tiene una funci&oacute;n clave en la mediaci&oacute;n de la respuesta inhibitoria de crecimiento TGF-beta. Aqu&iacute; mostramos que Smad3 es un importante sustrato fisiol&oacute;gico de las Quinasas Ciclina-dependientes de G1 CDK4 y CDK2. Excepci&oacute;n de la familia de la prote&iacute;na del retinoblastoma, Smad3 es el substrato de CDK4 &uacute;nico demostrado hasta ahora. Nos hemos asignado CDK4 y CDK2 sitios de fosforilaci&oacute;n Thr 8, 178 Thr y Ser 212 en Smad3. Mutaci&oacute;n de los sitios de fosforilaci&oacute;n de CDK aumenta la actividad transcripcional de Smad3, llevando a mayor expresi&oacute;n de la p15 de inhibidor de la CDK. Mutaci&oacute;n de los sitios de fosforilaci&oacute;n de CDK de Smad3 tambi&eacute;n aumenta su capacidad para regular a la baja la expresi&oacute;n de fibroblastos embrionarios de c-myc. Smad3(-/-) utilizando rat&oacute;n y otras l&iacute;neas celulares epiteliales, os mostramos m&aacute;s que Smad3 inhibe la progresi&oacute;n del ciclo celular de G1 a la fase S y que la mutaci&oacute;n de los sitios de fosforilaci&oacute;n de CDK en Smad3 aumenta esta capacidad. Tomados en conjunto, estos resultados indican que la fosforilaci&oacute;n de CDK de Smad3 inhibe su funci&oacute;n transcripcional de la actividad y antiproliferativa. Porque las c&eacute;lulas cancerosas a menudo contienen altos niveles de actividad CDK, disminuyendo la actividad de Smad3 por fosforilaci&oacute;n de CDK puede contribuir a la tumorig&eacute;nesis y resistencia de TGF-beta en c&aacute;nceres.

Quinasas Ciclina-Dependientes regulan la funci&oacute;n antiproliferativo de Smads.

&#x8F6C;&#x5316;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;-&beta; (TGF-&beta;) / Smads &#x89C4;&#x8303;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x53CD;&#x5E94;&#x901A;&#x8FC7;&#x9776;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8C03;&#x63A7;&#x3002;Smad3 TGF-&beta;/Smad &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; Smad3 &#x5BCC;&#x542B;&#x812F;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#x533A;&#x57DF;&#x5305;&#x542B;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x57DF;&#x3002;&#x5F53;&#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#x533A;&#x57DF;&#x878D;&#x5408;&#x5230;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5916;&#x6E90; DNA &#x7ED3;&#x5408;&#x57DF;&#x65F6;&#xFF0C;&#x5219;&#x8BE5;&#x51FD;&#x6570;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x8F6C;&#x5F55;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x8BE5;&#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#x533A;&#x57DF;&#x7269;&#x7406;&#x4E0E; 300 &#x82AF;&#x7247;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2; E1a &#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x5B83;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; 300 &#x82AF;&#x7247;&#xFF0C;&#x6291;&#x5236;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#x533A;&#x57DF;&#xFF0C;&#x548C;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; 300 &#x82AF;&#x7247;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6551;&#x63F4;&#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2; E1a &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x80FD;&#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; 300 &#x82AF;&#x7247;&#xFF0C;&#x6761;&#x6587;&#x6CA1;&#x6709;&#x963B;&#x788D;&#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x3002;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x8BE5;&#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x672C;&#x673A; Smad3 &#x86CB;&#x767D;&#x4E0D;&#x80FD;&#x8C03;&#x89E3; TGF-&beta; &#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x5316;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x5B83;&#x53EF;&#x4EE5;&#x901A;&#x8FC7;&#x5728; C-&#x672B;&#x7AEF;&#x7684; TGF-&beta; &#x53D7;&#x4F53;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#xFF0C;&#x5927;&#x5927;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x5F62;&#x6210;&#x590D;&#x6742;&#x4E0E; Smad4 &#x7684;&#x7F1D;&#x9699;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x663E;&#x793A;&#x8BE5;&#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#x533A;&#x57DF;&#x548C; Smad3 C &#x672B;&#x7AEF;&#x57DF;&#x534F;&#x540C;&#x4E0B; TGF-&beta; &#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x53D1;&#x73B0; Smad3 &#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#x533A;&#x57DF; Smad &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x804C;&#x80FD;&#x3002;

Smad3 &#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#x533A;&#x57DF;&#x5305;&#x542B;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x57DF;&#x3002;

Transforming growth factor-beta (TGF-beta)/Smads regulate a wide variety of biological responses through transcriptional regulation of target genes. Smad3 plays a key role in TGF-beta/Smad-mediated transcriptional responses. Here, we show that the proline-rich linker region of Smad3 contains a transcriptional activation domain. When the linker region is fused to a heterologous DNA-binding domain, it activates transcription. We show that the linker region physically interacts with p300. The adenovirus E1a protein, which binds to p300, inhibits the transcriptional activity of the linker region, and overexpression of p300 can rescue the linker-mediated transcriptional activation. In contrast, an adenovirus E1a mutant, which cannot bind to p300, does not inhibit the linker-mediated transcription. The native Smad3 protein lacking the linker region is unable to mediate TGF-beta transcriptional activation responses, although it can be phosphorylated by the TGF-beta receptor at the C-terminal tail and has a significantly increased ability to form a heteromeric complex with Smad4. We show further that the linker region and the C-terminal domain of Smad3 synergize for transcriptional activation in the presence of TGF-beta. Thus our findings uncover an important function of the Smad3 linker region in Smad-mediated transcriptional control.

The Smad3 linker region contains a transcriptional activation domain.

Transformation de TGF-b&ecirc;ta (TGF-b&ecirc;ta) / prot&eacute;ines SMAD r&eacute;guler une grande vari&eacute;t&eacute; de r&eacute;actions biologiques par le biais de la r&eacute;gulation transcriptionnelle des g&egrave;nes cibles. Smad3 joue un r&ocirc;le cl&eacute; dans les r&eacute;ponses transcriptionnelles par TGF-beta/Smad. Ici, nous montrons que la r&eacute;gion riche en proline de Smad3 contienne un domaine d&#39;activation de la transcription. Lorsque la r&eacute;gion est fix&eacute;e sur un domaine de liaison &agrave; l&#39;ADN h&eacute;t&eacute;rologue, il active la transcription. Nous montrons que la r&eacute;gion interagit physiquement avec p300. L&#39;adenovirus E1a prot&eacute;ine qui se lie &agrave; p300, inhibe l&#39;activit&eacute; transcriptionnelle de la r&eacute;gion, et la surexpression de p300 peut sauver l&#39;activation transcriptionnelle m&eacute;di&eacute;e par l&#39;&eacute;diteur de liens. En revanche, un mutant de E1a de l&#39;ad&eacute;novirus, qui ne peut pas lier p300, n&#39;inhibe pas la transcription induite par l&#39;&eacute;diteur de liens. La prot&eacute;ine native de Smad3 manquant de la r&eacute;gion de l&#39;&eacute;diteur de liens ne peut pas interviennent dans des r&eacute;actions de l&#39;activation transcriptionnelle de TGF-b&ecirc;ta, m&ecirc;me si elle peut &ecirc;tre phosphoryl&eacute;e par le r&eacute;cepteur du TGF-b&ecirc;ta &agrave; la queue de C-terminal et a une capacit&eacute; consid&eacute;rablement accrue pour former un complexe avec Smad4 h&eacute;t&eacute;rom&eacute;rique. De plus, nous montrons que la r&eacute;gion et le domaine C-terminal de Smad3 en synergie pour activation de la transcription en pr&eacute;sence de TGF-b&ecirc;ta. Ainsi, nos r&eacute;sultats d&eacute;couvrent une fonction importante de la r&eacute;gion Smad3 dans la r&eacute;gulation transcriptionnelle m&eacute;di&eacute;e par les Smad.

La r&eacute;gion Smad3 contient un domaine d&#39;activation de la transcription.

Die Smad3 Linker-Region enth&#xE4;lt eine Transkriptionsaktivierungsdom&#xE4;ne.

Trasformando growth factor-beta (TGF-beta) / SMAD regolare una grande variet&agrave; di risposte biologiche attraverso regolazione trascrizionale dei geni bersaglio. SMAD3 gioca un ruolo chiave nelle risposte di transcriptional TGF-beta/Smad-mediata. Qui, ci mostra che la regione linker ricco di prolina Smad3 contiene un dominio di attivazione trascrizionale. Quando la regione linker &egrave; fusa a un dominio DNA-binding eterologo, che attiva la trascrizione. Mostriamo che la regione linker interagisce fisicamente con p300. Adenovirus proteina E1a, che associa alla p300, inibisce l&#39;attivit&agrave; trascrizionale della regione linker e iperespressione del p300 pu&ograve; salvare l&#39;attivazione trascrizionale mediata dal linker. Al contrario, un mutante di adenovirus E1a, che non &egrave; possibile associare alla p300, non inibisce la trascrizione mediata dal linker. La proteina nativa Smad3 manca la regione linker &egrave; in grado di mediare le risposte di transcriptional di attivazione del TGF-beta, anche se pu&ograve; essere fosforilata dal recettore TGF-beta alla coda C-terminale e ha una capacit&agrave; notevolmente aumentata per formare un complesso con Smad4 eteromerici. Ci mostra inoltre che la regione linker e il dominio C-terminale di Smad3 sinergizzare per attivazione trascrizionale in presenza di TGF-beta. Cos&igrave; i nostri risultati scoprono un&#39;importante funzione della regione linker Smad3 di controllo trascrizionale mediata da Smad.

La regione di linker Smad3 contiene un dominio di attivazione trascrizionale.

&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50; &beta; &#xFF08;TGF &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;&#xFF09; &#x306E;&#x5909;&#x63DB;/Smads &#x591A;&#x7A2E;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x6A19;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x751F;&#x4F53;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Smad3 TGF &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;/Smad &#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x8EE2;&#x5199;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x9818;&#x57DF; Smad3 &#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x9818;&#x57DF;&#x304C;&#x7570;&#x7A2E;&#x306E; DNA &#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x878D;&#x5408;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x304D;&#x306F;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x9818;&#x57DF;&#x304C;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x306B; p300 &#x3068;&#x3084;&#x308A;&#x53D6;&#x308A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; E1a &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;p300 &#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x3066; p300 &#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x6551;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;p300 &#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3001;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; E1a &#x5909;&#x7570;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x9818;&#x57DF;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E; Smad3 &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F; TGF-&beta; &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; C &#x672B;&#x7AEF;&#x3067;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x3001;Smad4 &#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A; heteromeric &#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x306E;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x5411;&#x4E0A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C; TGF &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x9818;&#x57DF;&#x3068; Smad3 &#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027; TGF-&beta; &#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x76F8;&#x4E57;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C; Smad &#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; Smad3 &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Smad3 &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x306F;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xBCC0;&#xD615; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790;-&#xBCA0;&#xD0C0; (TGF-&#xBCA0;&#xD0C0;) / Smads &#xADDC;&#xC81C; &#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; transcriptional &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC801; &#xC751;&#xB2F5;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591;. Smad3 transcriptional &#xC751;&#xB2F5; TGF-&#xBCA0;&#xD0C0;/Smad-&#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xD575;&#xC2EC;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; smad3&#xC758; &#xD504;&#xB864;&#xB9B0; &#xBD80;&#xC720;&#xD55C; &#xB9C1;&#xCEE4; &#xC9C0;&#xC5ED; transcriptional &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xD3EC;&#xD568; &#xB418;&#xC5B4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C1;&#xCEE4; &#xC601;&#xC5ED; &#xBD84;&#xB9AC; DNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC735;&#xD569;&#xC740; &#xC804;&#xC0AC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB9C1;&#xCEE4; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC758; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; p300&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; p300 &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; E1a &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC5B5;&#xC81C; &#xB9C1;&#xCEE4; &#xC601;&#xC5ED;&#xC758; transcriptional &#xD65C;&#xB3D9; &#xBC0F; p300 overexpression &#xB9C1;&#xCEE4; &#xC911;&#xC7AC; transcriptional &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xAD6C;&#xCD9C; &#xD558;&#xC2E4; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74;, p300&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; E1a &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB9C1;&#xCEE4; &#xC911;&#xC7AC; &#xC804;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C1;&#xCEE4; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC758; &#xBD80;&#xC871; &#xD55C; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; Smad3 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xAF2C;&#xB9AC;&#xC5D0; TGF-&#xBCA0;&#xD0C0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; phosphorylated &#xC218; &#xACE0; heteromeric smad4&#xC640; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC99D;&#xAC00; &#xB2A5;&#xB825;&#xC774; TGF-&#xBCA0;&#xD0C0; transcriptional &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xC911;&#xC7AC;&#xD560; &#xC218; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xB354;&#xC6B1; &#xB9C1;&#xCEE4; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xBC0F; smad3&#xC758; C-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; synergize transcriptional &#xD65C;&#xC131;&#xD654; TGF-&#xBCA0;&#xD0C0;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; transcriptional &#xC81C;&#xC5B4; Smad &#xC911;&#xC7AC; Smad3 &#xB9C1;&#xCEE4; &#xC601;&#xC5ED;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xBC1D;&#xD788;&#xAE30;.

Smad3 &#xB9C1;&#xCEE4; &#xC9C0;&#xC5ED; transcriptional &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Transformar el factor de crecimiento beta (TGF-beta) / Smads regular una amplia variedad de respuestas biol&oacute;gicas a trav&eacute;s de la regulaci&oacute;n transcripcional de genes diana. Smad3 desempe&ntilde;a un papel clave en la respuesta transcripcional mediada por TGF-beta/Smad. Aqu&iacute;, demostramos que la regi&oacute;n de ricos en prolina vinculador de Smad3 contiene un dominio de activaci&oacute;n transcripcional. En la regi&oacute;n de vinculador se funde a un dominio de uni&oacute;n al ADN heter&oacute;logo, activa transcripci&oacute;n. Demostramos que la regi&oacute;n de vinculador interacciona f&iacute;sicamente con p300. El adenovirus E1a prote&iacute;na, que se une a p300, inhibe la actividad transcripcional de la regi&oacute;n de vinculador y sobreexpresi&oacute;n de p300 puede rescatar la activaci&oacute;n transcripcional mediada por vinculador. Por el contrario, un mutante E1a de adenovirus, que no se puede enlazar a p300, no inhibe la transcripci&oacute;n mediada por vinculador. La prote&iacute;na Smad3 nativa que carecen de la regi&oacute;n de vinculador es incapaz de mediar las respuestas de activaci&oacute;n transcripcional de TGF-beta, aunque puede ser fosforilado por el receptor de TGF-beta en la cola de la terminal C y tiene una capacidad significativamente mayor para formar un complejo con Smad4 de heter&oacute;mera. Se muestra m&aacute;s que la regi&oacute;n de vinculador y el dominio c-terminal de Smad3 sinergizar para activaci&oacute;n transcripcional en presencia de TGF-beta. As&iacute;, nuestros resultados descubren una funci&oacute;n importante de la regi&oacute;n de vinculador de Smad3 en el control transcripcional mediada por Smad.

La regi&oacute;n de vinculador Smad3 contiene un dominio de activaci&oacute;n transcripcional.

Smad3 &#x662F;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x6CBB;&#x7597;&#x540E; ERK MAP &#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x6620;&#x5C04;&#x5230; Ser 207&#x3001; Ser 203 &#x548C;&#x82CF;&#x6C28;&#x9178; 178 &#x4E2D; Smad3 ERK &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7AD9;&#x70B9;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x540E;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x6CBB;&#x7597; Smad3 &#x8FC5;&#x901F;&#x78F7;&#x9178;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7F51;&#x7AD9;&#xFF0C;&#x8FBE;&#x5230;&#x7EA6; 15 &#x81F3; 30 &#x5206;&#x949F;&#x7684;&#x5CF0;&#x503C;&#x548C; MEK1 &#x6291;&#x5236;&#x5242; PD98059 &#x548C; U0216 &#x6291;&#x5236; Smad3 &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;Ser 207 &#x662F; Smad3 &#x6700;&#x4F73; ERK &#x7F51;&#x7AD9;&#x3002;&#x5176;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5728; Smad3 &#x663E;&#x793A;&#x6700;&#x9AD8;&#x7684;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x3002;&#x5B83;&#x4E5F;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x975E;&#x5E38;&#x654F;&#x611F;&#x7684;&#x7F51;&#x7AD9;&#x5230;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x6CBB;&#x7597;&#xFF0C;&#x5927;&#x5927;&#x4F4E;&#x6D53;&#x5EA6;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x54CD;&#x5E94;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E09;&#x4E2A;&#x5730;&#x65B9;&#x4E5F;&#x662F;&#x7531;&#x4F53;&#x5916;&#x91CD;&#x7EC4; ERK2 &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x4E3A; ERK2 &#x6BD4;&#x8F83; Smad3 &#x4E0E; ELK1 &#x548C; MBP &#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x53C2;&#x6570;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x663E;&#x793A;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684; ERK &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7AD9;&#x70B9;&#x589E;&#x52A0; Smad3 &#x80FD;&#x591F;&#x523A;&#x6FC0; Smad &#x9776;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E; ERK &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x6291;&#x5236; Smad3 &#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;

&#x8BC6;&#x522B;&#x548C; ERK &#x5730;&#x56FE;&#x6FC0;&#x9176;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7F51;&#x7AD9;&#x4E2D; Smad3 &#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;

Smad3 is phosphorylated by ERK MAP kinase upon EGF treatment. We have mapped the ERK phosphorylation sites to Ser 207, Ser 203, and Thr 178 in Smad3. We show that, upon EGF treatment, Smad3 is rapidly phosphorylated in these sites, peaking at approximately 15-30 min and that MEK1 inhibitors PD98059 and U0216 inhibit Smad3 phosphorylation induced by EGF. Ser 207 is the best ERK site in Smad3. Its phosphorylation shows the highest EGF induction in Smad3. It is also a very sensitive site to EGF treatment, significantly responding to low concentrations of EGF. These three sites are also phosphorylated by recombinant ERK2 in vitro. We have compared the kinetic parameters of Smad3 with those of ELK1 and MBP for ERK2. We further show that mutation of the ERK phosphorylation sites increases the ability of Smad3 to stimulate a Smad target gene, suggesting that ERK phosphorylation inhibits Smad3 activity.

Identification and characterization of ERK MAP kinase phosphorylation sites in Smad3.

Smad3 est phosphoryl&eacute; par la kinase ERK carte apr&egrave;s traitement de l&#39;EGF. Nous avons cartographi&eacute; les sites de phosphorylation de ERK Ser 207, 203 Ser et Thr 178 dans Smad3. Nous montrons que, sur le traitement de l&#39;EGF, Smad3 est rapidement phosphoryl&eacute;e dans ces sites, avec un pic &agrave; environ 15-30 min et qu&#39;inhibiteurs MEK1 le PD98059 et U0216 inhibent la phosphorylation Smad3 induite par l&#39;EGF. SER 207 est le meilleur site ERK dans Smad3. Sa phosphorylation pr&eacute;sente la plus forte induction EGF Smad3. C&#39;est aussi un site tr&egrave;s sensible au traitement de l&#39;EGF, significativement en r&eacute;ponse &agrave; de faibles concentrations de l&#39;EGF. Ces trois sites sont &eacute;galement phosphoryl&eacute;s par ERK2 recombinaison in vitro. Nous avons compar&eacute; les param&egrave;tres cin&eacute;tiques de Smad3 avec celles de ELK1 et MBP pour ERK2. Nous montrons &eacute;galement que mutation des sites de phosphorylation de ERK augmente la capacit&eacute; de Smad3 pour stimuler un g&egrave;ne cible Smad, sugg&eacute;rant que la phosphorylation de ERK inhibe l&#39;activit&eacute; Smad3.

Identification et caract&eacute;risation des sites de phosphorylation de kinase ERK carte dans Smad3.

Smad3 ist von ERK MAP-Kinase auf EGF Behandlung phosphoryliert. Wir haben die ERK Phosphorylierung Sites Ser 207, Ser 203 und Thr 178 in Smad3 zugeordnet. Wir zeigen, dass bei EGF-Behandlung, Smad3 H&ouml;chststand von etwa 15-30 min schnell auf diesen Sites phosphoryliert ist, und dass MEK1-Inhibitoren PD98059 und U0216 Smad3 Phosphorylierung hemmen durch EGF induziert. Ser 207 ist die beste ERK-Seite in Smad3. Die Phosphorylierung zeigt die h&ouml;chste EGF-Induktion in Smad3. Es ist auch eine sehr sensible Seite EGF-Behandlung, deutlich zu niedrigen Konzentrationen von EGF reagiert. Diese drei Standorte sind auch von in-vitro-rekombinante ERK2 phosphoryliert. Wir haben die kinetischen Parameter von Smad3 mit denen von ELK1 und MBP f&uuml;r ERK2 verglichen. Weiter zeigen wir, dass die Mutation der ERK Phosphorylierung Seiten erh&ouml;ht die F&auml;higkeit der Smad3 zur Stimulierung eines Smad-Ziel-Gens, was darauf hindeutet, dass ERK Phosphorylierung Smad3 Aktivit&auml;t hemmt.

Identifizierung und Charakterisierung von ERK MAP-Kinase-Phosphorylierung-Standorte in Smad3.

SMAD3 &egrave; fosforilata da una chinasi ERK mappa previo trattamento di EGF. Noi abbiamo mappato i siti di fosforilazione di ERK Ser 207, 203 Ser e Thr 178 in Smad3. Dimostriamo che, previo trattamento di EGF, Smad3 rapidamente &egrave; fosforilata in questi siti, arrivando a circa 15-30 min e che inibitori MEK1 PD98059 e U0216 inibiscono la fosforilazione Smad3 indotta dall&#39;EGF. Ser 207 &egrave; il miglior sito di ERK Smad3. La fosforilazione Mostra l&#39;alta induzione EGF Smad3. &Egrave; anche un sito molto sensibile al trattamento EGF, rispondendo in modo significativo a basse concentrazioni di EGF. Questi tre siti sono anche fosforilati da ERK2 ricombinanti in vitro. Abbiamo confrontato i parametri cinetici di Smad3 con quelli di ELK1 e MBP per ERK2. Ulteriormente dimostriamo che la mutazione dei siti di fosforilazione di ERK aumenta la capacit&agrave; di stimolare un gene bersaglio Smad, Smad3 suggerendo che la fosforilazione di ERK inibisce l&#39;attivit&agrave; Smad3.

Identificazione e caratterizzazione dei siti di fosforilazione della chinasi ERK mappa Smad3.

Smad3 EGF &#x6CBB;&#x7642;&#x8981; ERK MAP &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Ser 207&#x3001;Ser 203&#x3001;Thr 178 Smad3 &#x3067; ERK &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x5272;&#x308A;&#x5F53;&#x3066;&#x305F;&#x3002;&#x79C1;&#x9054;&#x306F; EGF &#x6CBB;&#x7642;&#x6642;&#x306B;&#x7D04; 15-30 &#x5206;&#x3067;&#x30D4;&#x30FC;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Smad3 &#x304C;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3001;MEK1 &#x963B;&#x5BB3;&#x5264; PD98059 &#x3068; U0216 Smad3 &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308B; EGF &#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Ser 207 Smad3 &#x306E;&#x6700;&#x9AD8;&#x306E; ERK &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x6700;&#x9AD8;&#x306E; EGF &#x8A98;&#x5C0E; Smad3 &#x3067;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;EGF &#x6CBB;&#x7642;&#x3001;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x4F4E;&#x6FC3;&#x5EA6; EGF &#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x306A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089; 3 &#x3064;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048; ERK2 in vitro &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3067;&#x3059;&#x3002;ERK2 &#x306E; Smad3 &#x3068; ELK1 &#x3068; MBP &#x306E;&#x904B;&#x52D5;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x6BD4;&#x3079;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B; ERK &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306F; Smad &#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3059;&#x308B; Smad3 &#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092; ERK &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316; Smad3 &#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x540C;&#x5B9A;&#x304A;&#x3088;&#x3073; ERK &#x5730;&#x56F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; Smad3 &#x3067;&#x3002;

Smad3&#xB294; EGF &#xCE58;&#xB8CC; &#xC2DC; ERK &#xC9C0;&#xB3C4; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; phosphorylated &#xC774;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; Ser 207, Ser 203, &#xBC0F; smad3&#xC5D0;&#xC11C; Thr 178 ERK &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xB9E4;&#xD551;&#xD55C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294;, EGF &#xCE58;&#xB8CC; &#xC2DC; smad3&#xC740; &#xBE60;&#xB974;&#xAC8C; phosphorylated&#xC774; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC57D; 15-30 &#xBD84;&#xC5D0; &#xCD5C;&#xACE0;&#xCE58;&#xC640; MEK1 &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; PD98059 &#xBC0F; U0216 Smad3 &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC720;&#xB3C4; EGF &#xD558; &#xC5EC; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Ser 207 smad3&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD5C;&#xACE0;&#xC758; ERK &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; smad3&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xB192;&#xC740; EGF &#xC720;&#xB3C4;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. EGF&#xC758; &#xB0AE;&#xC740; &#xB18D;&#xB3C4;&#xB97C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC751;&#xB2F5; EGF &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC774;&#xAE30;&#xB3C4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB294; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; erk2&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; phosphorylated &#xB610;&#xD55C;. &#xC6B0;&#xB9AC; erk2&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; ELK1 &#xBC0F; MBP&#xC758; smad3&#xC758; &#xD0A4;&#xB124;&#xD2F1; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218;&#xB97C; &#xBE44;&#xAD50;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB354; ERK &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC790;&#xADF9; &#xD558;&#xB294; Smad &#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790; smad3&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; ERK &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC5B5;&#xC81C; Smad3 &#xD65C;&#xB3D9; &#xC81C;&#xC548; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2DD;&#xBCC4; &#xBC0F; smad3&#xC5D0;&#xC11C; ERK &#xC9C0;&#xB3C4; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;.

Smad3 es fosforilado por ERK MAP quinasa sobre el tratamiento de EGF. Nos hemos trazado los sitios de fosforilaci&oacute;n de ERK a Ser 207, Ser 203 y Thr 178 en Smad3. Mostramos que, sobre el tratamiento de EGF, Smad3 r&aacute;pidamente es fosforilado en estos sitios, alcanzando un m&aacute;ximo de aproximadamente 15-30 min y que los inhibidores de MEK1 PD98059 y U0216 inhiben la fosforilaci&oacute;n de Smad3 inducida por EGF. Ser 207 es el mejor sitio ERK en Smad3. Su fosforilaci&oacute;n muestra la mayor inducci&oacute;n de EGF en Smad3. Tambi&eacute;n es un sitio muy sensible al tratamiento de EGF, responde significativamente a concentraciones bajas de EGF. Estos tres sitios tambi&eacute;n son fosforilados por ERK2 recombinante in vitro. Hemos comparado los par&aacute;metros cin&eacute;ticos de Smad3 con los de ELK1 y MBP para ERK2. Adem&aacute;s demostramos que la mutaci&oacute;n de los sitios de fosforilaci&oacute;n de ERK aumenta la capacidad de Smad3 para estimular un gene de la blanco del Smad, sugiriendo que la fosforilaci&oacute;n de ERK inhibe la actividad de Smad3.

Identificaci&oacute;n y caracterizaci&oacute;n de sitios de fosforilaci&oacute;n de quinasa ERK mapa en Smad3.

&#x7852;&#x4E2D;&#x6BD2;&#x662F;&#x7531;&#x4E8E;&#x9AD8;&#x5242;&#x91CF;&#x7852;&#x8865;&#x5145;&#x5242;&#x7684;&#x666E;&#x53CA;&#x548C;&#x53D1;&#x5C55;&#x9AD8;&#x7852;&#x519C;&#x4E1A;&#x6392;&#x6C34;&#x76C6;&#x5730;&#x7684;&#x73AF;&#x5883;&#x65E5;&#x76CA;&#x5173;&#x6CE8;&#x3002;&#x8981;&#x5F00;&#x59CB;&#x5206;&#x6790;&#x9057;&#x4F20;&#x4E00;&#x7EA7;&#x7852;&#x6BD2;&#x6027;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x6709;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5730;&#x786E;&#x5B9A;&#x54EA;&#x4E9B;&#x57FA;&#x56E0;&#x53C2;&#x4E0E;&#x4E86;&#x54CD;&#x5E94;&#x9AD8;&#x73AF;&#x5883;&#x7852;&#x4F7F;&#x7528;&#x53EF;&#x884C;&#x5355;&#x500D;&#x4F53;&#x7A7A;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x682A;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#x4EE3;&#x8868;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E3B;&#x8981;&#x7684;&#x5E94;&#x529B;&#x8DEF;&#x5F84;&#x7684;&#x96C6;&#x5408;&#xFF1A; RAD9 &#x4F9D;&#x8D56; DNA &#x4FEE;&#x590D;&#x9014;&#x5F84;&#x3001; RAD6/RAD18 DNA &#x635F;&#x4F24;&#x5BB9;&#x5FCD;&#x901A;&#x8DEF;&#x4E0E;&#x6C27;&#x5316;&#x5E94;&#x6FC0;&#x901A;&#x8DEF;&#x3002;&#x603B;&#x5171;&#x6709; 53 &#x7A7A;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x83CC;&#x682A;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x7F3A;&#x9677;&#x5B58;&#x5728;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x7684;&#x4E9A;&#x7852;&#x9178;&#x94A0;&#x548C;&#x7852;&#x4EE3;&#x86CB;&#x6C28;&#x9178; (&#x7D22;&#x5C14;&#x7EF4;) &#x6D53;&#x5EA6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x5927;&#x7EA6; 64 72%&#x7684;&#x54C1;&#x7CFB;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E; RAD9 &#x7684; DNA &#x4FEE;&#x590D;&#x6216; RAD6/RAD18 DNA &#x635F;&#x4F24;&#x5BB9;&#x5FCD;&#x901A;&#x8DEF;&#x57FA;&#x56E0;&#x663E;&#x793A;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E9A;&#x7852;&#x9178;&#x94A0;&#x4E0E;&#x7D22;&#x5C14;&#x7EF4;&#x7EA6; 28-36%&#x7684;&#x589E;&#x957F;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x51CF;&#x5C11;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x6C27;&#x5316;&#x5E94;&#x6FC0;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x83CC;&#x682A;&#x5728; 21-25%&#x5DE6;&#x53F3;&#x589E;&#x957F;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x4E9A;&#x7852;&#x9178;&#x94A0;&#x3001; &#x7D22;&#x5C14;&#x7EF4;&#x53EF;&#x80FD;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x751F;&#x6210;&#x6D3B;&#x6027;&#x7269;&#x79CD;&#x7684; DNA &#x635F;&#x4F24;&#x3002;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x6C27;&#x5316;&#x5E94;&#x6FC0;&#x901A;&#x8DEF;&#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x9884;&#x671F;&#x7684;&#x6548;&#x679C;&#x4E0D;&#x83B7;&#x9075;&#x5B88;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x7531;&#x4E8E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x5728;&#x68C0;&#x67E5;&#x4E2D;&#x4FDD;&#x6301;&#x7684;&#x7834;&#x574F;&#x6027;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x4EA7;&#x54C1;&#x660E;&#x663E;&#x88C1;&#x5458;&#x3002;

&#x9175;&#x6BCD;&#x83CC;&#x7A7A;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x901A;&#x8FC7;&#x7852;&#x6807;&#x8BC6;&#x4E3A; DNA &#x635F;&#x4F24;&#x4E0E;&#x6C27;&#x5316;&#x5E94;&#x6FC0;&#x901A;&#x8DEF;&#x4E2D;&#x751F;&#x957F;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x66F4;&#x5927;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Selenium toxicity is a growing environmental concern due to widespread availability of high-dose selenium supplements and the development of high-selenium agricultural drainage basins. To begin to analyze the effects of selenium toxicity at the genetic level, we have systematically determined which genes are involved in responding to high environmental selenium using a collection of viable haploid null allele strains of Saccharomyces cerevisiae representing three major stress pathways: the RAD9-dependent DNA repair pathway, the RAD6/RAD18 DNA damage tolerance pathway, and the oxidative stress pathway. A total of 53 null allele strains were tested for growth defects in the presence of a range of sodium selenite and selenomethionine (SeMet) concentrations. Our results show that approximately 64-72% of the strains lacking RAD9-dependent DNA repair or RAD6/RAD18 DNA damage tolerance pathway genes show reduced growth in sodium selenite versus approximately 28-36% in SeMet. Interestingly both compounds reduced growth in approximately 21-25% of the strains lacking oxidative stress genes. These data suggest that both selenite and SeMet are likely inducing DNA damage by generating reactive species. The anticipated effects of loss of components of the oxidative stress pathway were not observed, likely due to apparent redundancies in these gene products that may keep the damaging effects in check.

Analysis of Saccharomyces cerevisiae null allele strains identifies a larger role for DNA damage versus oxidative stress pathways in growth inhibition by selenium.

La toxicit&eacute; du s&eacute;l&eacute;nium est une pr&eacute;occupation environnementale croissante en raison de la large disponibilit&eacute; de suppl&eacute;ments de s&eacute;l&eacute;nium de dose &eacute;lev&eacute;e et le d&eacute;veloppement des bassins hydrographiques agricoles de haut-s&eacute;l&eacute;nium. Pour commencer &agrave; analyser les effets de la toxicit&eacute; du s&eacute;l&eacute;nium au niveau g&eacute;n&eacute;tique, nous avons syst&eacute;matiquement d&eacute;termin&eacute; quels g&egrave;nes sont impliqu&eacute;s dans r&eacute;pondant &agrave; haute s&eacute;l&eacute;nium environnementaux &agrave; l&#39;aide d&#39;une collection de souches viables all&egrave;le nul haplo&iuml;des de Saccharomyces cerevisiae, repr&eacute;sentant les trois voies de stress majeur : r&eacute;paration de l&#39;ADN de la RAD9-d&eacute;pendant voie, la voie de la tol&eacute;rance de dommages ADN RAD6/RAD18 et la voie du stress oxydatif. Un total de 53 all&egrave;le nul souches ont &eacute;t&eacute; test&eacute;es pour la croissance les d&eacute;fauts en pr&eacute;sence d&#39;une gamme de s&eacute;l&eacute;nite de sodium et de la s&eacute;l&eacute;nom&eacute;thionine (SeMet) les concentrations. Nos r&eacute;sultats montrent qu&#39;environ 64 &agrave; 72 % des souches manque de r&eacute;paration de l&#39;ADN d&eacute;pendante RAD9 ou RAD6/RAD18 ADN dommages tol&eacute;rance voie g&egrave;nes spectacle r&eacute;duit la croissance en s&eacute;l&eacute;nite de sodium contre environ 28 &agrave; 36 % en SeMet. Il est int&eacute;ressant les deux compos&eacute;s r&eacute;duit la croissance &agrave; environ 21 &agrave; 25 % des souches d&eacute;pourvues g&egrave;nes de stress oxydatif. Ces donn&eacute;es sugg&egrave;rent que les s&eacute;l&eacute;nite et SeMet sont probablement induisant dommages &agrave; l&#39;ADN par la g&eacute;n&eacute;ration d&#39;esp&egrave;ces r&eacute;actives. Les effets attendus de la perte d&#39;&eacute;l&eacute;ments de la voie de stress oxydatif n&#39;ont pas observ&eacute;s, probablement en raison de l&#39;apparentes licenciements dans ces produits de g&egrave;nes qui peuvent garder les m&eacute;faits en &eacute;chec.

L&#39;analyse des souches de Saccharomyces cerevisiae all&egrave;le nul identifie un r&ocirc;le plus important pour dommages &agrave; l&#39;ADN par rapport aux voies du stress oxydatif dans l&#39;inhibition de la croissance en s&eacute;l&eacute;nium.

Selen Toxizit&auml;t ist ein wachsenden &ouml;kologischen Anliegen aufgrund der weit verbreiteten Verf&uuml;gbarkeit von hoch dosierten Selen-Beilagen und die Entwicklung von hoch-Selen landwirtschaftliche Einzugsgebieten. Um zu beginnen, die Wirkung von Selen Toxizit&auml;t auf genetischer Ebene zu analysieren, haben wir systematisch bestimmt, welche Gene beteiligt sind, bei der Reaktion auf hohe &ouml;kologische Selen mit einer Sammlung von lebensf&auml;higen haploide null Allel St&auml;mme von Saccharomyces Cerevisiae, die drei Wege der gro&szlig;en Belastung darstellt: die RAD9-abh&auml;ngige DNA zu reparieren, Weg, die RAD6/RAD18 DNA-Sch&auml;den-Toleranz-Pathway und der oxidativen Stress Weg. Insgesamt 53 null Allel, die Belastungen f&uuml;r Wachstum getestet wurden M&auml;ngel in Gegenwart von Natriumselenit und Selenomethionin (SeMet) Konzentrationen. Unsere Ergebnisse zeigen, dass etwa 64-72 % der Sorten fehlt RAD9-abh&auml;ngige DNA-Reparatur oder RAD6/RAD18 DNA Sch&auml;den Toleranz Stoffwechselweg Gene Karte Wachstum in Natriumselenit gegen&uuml;ber ca. 28-36 % SeMet reduziert. Interessanterweise reduziert beider Verbindungen Wachstum bei ca. 21-25 % der St&auml;mme fehlen oxidativen Stress-Gene. Diese Daten legen nahe, dass Selenit und SeMet wahrscheinlich DNA-Schaden induzierende sind durch die Generierung von reaktiven Spezies. Die erwarteten Auswirkungen des Verlustes von Komponenten des Signalweges oxidativen Stress wurden nicht, wahrscheinlich aufgrund der offensichtlichen Entlassungen in diese Genprodukte beobachtet, die die sch&auml;dlichen Auswirkungen im Zaum halten kann.

Analyse der Saccharomyces Cerevisiae null-Allel-St&auml;mme werden eine gr&ouml;&szlig;ere Rolle f&uuml;r DNA-Sch&auml;den gegen&uuml;ber oxidativem Stress wegen Wachstum Hemmung von Selen.

Tossicit&agrave; del selenio &egrave; una crescente preoccupazione ambientale a causa della diffusa disponibilit&agrave; di alte dosi di selenio integratori e lo sviluppo di bacini di drenaggio agricoli alto-selenio. Per iniziare ad analizzare gli effetti di tossicit&agrave; del selenio a livello genetico, sistematicamente abbiamo determinato quali geni sono coinvolti nella risposta alle alta selenio ambientale utilizzando una collezione di allele null aploidi vitali ceppi di Saccharomyces cerevisiae che rappresentano tre percorsi principali dello stress: il DNA RAD9-dipendente di riparazione pathway, il pathway di tolleranza RAD6/RAD18 DNA danni e il percorso dello stress ossidativo. Un totale di 53 allele null ceppi sono stati testati per la crescita di difetti in presenza di una gamma di selenito di sodio e selenometionina concentrazioni (SeMet). I nostri risultati mostrano che circa il 64-72% dei ceppi privo di riparazione del DNA RAD9-dipendente o RAD6/RAD18 DNA danni tolleranza pathway geni show ridotta crescita in selenite di sodio contro circa 28-36% in SeMet. &Egrave; interessante notare che entrambi i composti ridotta crescita in circa 21-25% dei ceppi privi di geni dello stress ossidativo. Questi dati suggeriscono che sia selenite e SeMet sono probabilmente indurre danni al DNA tramite la generazione di specie reattive. Gli effetti attesi della perdita dei componenti della via lo stress ossidativo non sono stati osservati, probabilmente a causa di licenziamenti apparenti in questi prodotti del gene che possono mantenere sotto controllo gli effetti dannosi.

Analisi dei ceppi di Saccharomyces cerevisiae allele null identifica un ruolo maggiore per i danni del DNA contro i percorsi dello stress ossidativo nell&#39;inibizione della crescita di selenio.

&#x30BB;&#x30EC;&#x30F3;&#x306E;&#x6BD2;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x7528;&#x91CF;&#x30BB;&#x30EC;&#x30F3;&#x306E;&#x30B5;&#x30D7;&#x30EA;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x53EF;&#x7528;&#x6027;&#x3068;&#x9AD8;&#x30BB;&#x30EC;&#x30F3;&#x8FB2;&#x696D;&#x6D41;&#x57DF;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x74B0;&#x5883;&#x306E;&#x61F8;&#x5FF5;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30BB;&#x30EC;&#x30F3;&#x306E;&#x6BD2;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x4F53;&#x7CFB;&#x7684;&#x306B; 3 &#x3064;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x51FA;&#x82BD;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x5B9F;&#x5B58;&#x3057;&#x5F97;&#x308B;&#x534A;&#x6570;&#x4F53; null &#x30A2;&#x30EC;&#x30EB;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x30B3;&#x30EC;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x9AD8;&#x306E;&#x74B0;&#x5883;&#x30BB;&#x30EC;&#x30F3;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3067;&#x3069;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x304C;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x6C7A;&#x5B9A;: RAD9 &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027; DNA &#x4FEE;&#x5FA9;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3001;RAD6/rad6-rad 18 DNA &#x640D;&#x50B7;&#x8010;&#x6027;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3068;&#x9178;&#x5316;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3002;&#x5408;&#x8A08;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x305F; 53 null &#x5BFE;&#x7ACB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x4E9C;&#x30BB;&#x30EC;&#x30F3;&#x9178;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x3068;&#x30BB;&#x30EC;&#x30CE;&#x30E1;&#x30C1;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2; (SeMet) &#x6FC3;&#x5EA6;&#x3002;RAD9 &#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x306A; DNA &#x4FEE;&#x5FA9;&#x307E;&#x305F;&#x306F; RAD6/rad6-rad 18 DNA &#x640D;&#x50B7;&#x8010;&#x6027;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B7;&#x30E7;&#x30FC;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x83CC;&#x682A;&#x306E;&#x304A;&#x3088;&#x305D; 64-72% &#x4E9C;&#x30BB;&#x30EC;&#x30F3;&#x9178;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x5BFE; SeMet &#x3067;&#x7D04; 28 36% &#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x3092;&#x4F4E;&#x6E1B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306F;&#x9178;&#x5316;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x83CC;&#x682A;&#x306E;&#x7D04; 21 25% &#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x3092;&#x4F4E;&#x6E1B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x4E9C;&#x30BB;&#x30EC;&#x30F3;&#x9178;&#x3068; SeMet &#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044; DNA &#x640D;&#x50B7;&#x53CD;&#x5FDC;&#x7A2E;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9178;&#x5316;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306E;&#x4E88;&#x60F3;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3001;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x640D;&#x50B7;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x6291;&#x3048;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7523;&#x7269;&#x306E;&#x898B;&#x304B;&#x3051;&#x306E;&#x5197;&#x9577;&#x6027;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;

&#x30B5;&#x30C3;&#x30AB;&#x30ED; &#x30DF;&#x30BB;&#x30B9;&#x9175;&#x6BCD; null &#x5BFE;&#x7ACB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30BB;&#x30EC;&#x30F3;&#x751F;&#x9577;&#x963B;&#x5BB3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x9178;&#x5316;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x5BFE; DNA &#x640D;&#x50B7;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC140;&#xB808;&#xB284; &#xB3C5;&#xC131;&#xC740; &#xB192;&#xC740; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9; &#xC140;&#xB808;&#xB284; &#xBCF4;&#xCDA9;&#xC81C;&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xAC00;&#xC6A9;&#xC131;&#xACFC; &#xB192;&#xC740; &#xC140;&#xB808;&#xB284; &#xB18D;&#xC5C5; &#xBC30;&#xC218; &#xBD84; &#xC9C0;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xC131;&#xC7A5; &#xD658;&#xACBD; &#xAD00;&#xC2EC;&#xC0AC;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC140;&#xB808;&#xB284; &#xB3C5;&#xC131;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558;&#xAE30; &#xC2DC;&#xC791; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xAC00; &#xB192;&#xC740; &#xD658;&#xACBD; &#xC140;&#xB808;&#xB284; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC8FC;&#xC694; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xACBD;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; Saccharomyces cerevisiae&#xC758; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; haploid null &#xB300;&#xB9BD; &#xC885;&#xC790;&#xC758; &#xCEEC;&#xB809;&#xC158;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xACB0;&#xC815; &#xD55C;: RAD9 &#xC885;&#xC18D; &#xB41C; DNA&#xB97C; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xD1B5;&#xB85C;, RAD6/RAD18 DNA &#xC190;&#xC0C1; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xC624;&#xCC28; &#xD1B5;&#xB85C; &#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xD1B5;&#xB85C;. &#xCD1D; 53 null &#xB300;&#xB9BD; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xC885; &#xC99D;&#xAC00; &#xB300; &#xD55C; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xD588;&#xB2E4; (SeMet) &#xB18D;&#xB3C4;&#xAC00; &#xB098;&#xD2B8;&#xB968; selenite&#xACFC; selenomethionine&#xC758; &#xBC94;&#xC704; &#xC874;&#xC7AC; &#xACB0;&#xD568;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; RAD9 &#xC885;&#xC18D; DNA &#xC218;&#xB9AC; &#xB610;&#xB294; RAD6/RAD18 DNA &#xC190;&#xC0C1; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xC624;&#xCC28; &#xD1B5;&#xB85C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD45C;&#xC2DC; &#xBD80;&#xC871; &#xD55C; &#xC885;&#xC790;&#xC758; &#xC57D; 64-72% &#xB098;&#xD2B8;&#xB968; selenite Semet&#xC5D0; &#xC57D; 28-36% &#xB300;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4; &#xB450; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; &#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBD80;&#xC871; &#xAE34;&#xC7A5;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xC57D; 21-25% &#xAC10;&#xC18C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; selenite&#xACFC; Semet&#xB294; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xC720;&#xB3C4; DNA &#xC190;&#xC0C1; &#xBC18;&#xC751; &#xC885; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB294; &#xC190;&#xC2E4;&#xC758; &#xC608;&#xC0C1;&#xB41C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xD558;&#xC9C0; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;, &#xC544;&#xB9C8; &#xD45C;&#xC5D0; &#xC190;&#xC0C1; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC720;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC81C;&#xD488;&#xC5D0; &#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; &#xC911;&#xBCF5; &#xB54C;&#xBB38;.

Saccharomyces cerevisiae null &#xB300;&#xB9BD; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xC885; &#xBD84;&#xC11D; &#xC140;&#xB808;&#xB284;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xACBD;&#xB85C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC800;&#xD574;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; DNA &#xC190;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB354; &#xD070; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Toxicidad del selenio es una creciente preocupaci&oacute;n ambiental debido a la amplia disponibilidad de suplementos de selenio de la alto-dosis y el desarrollo de las cuencas agr&iacute;colas de alta-selenio. Para comenzar a analizar los efectos de la toxicidad del selenio en el nivel gen&eacute;tico, sistem&aacute;ticamente hemos determinado que genes est&aacute;n involucrados en la respuesta a la alto selenio ambiental utilizando una colecci&oacute;n de cepas viables haploides alelo nulo de Saccharomyces cerevisiae que representan tres v&iacute;as principales de estr&eacute;s: el ADN de RAD9-dependiente reparar el camino, el camino de tolerancia de da&ntilde;o de ADN RAD6/RAD18 y el camino de estr&eacute;s oxidativo. Un total de 53 alelo nulo cepas fueron probadas para crecimiento defectos en presencia de una gama de selenito de sodio y selenometionina concentraciones (SeMet). Nuestros resultados muestran que aproximadamente 64-72% de las cepas de falta de reparaci&oacute;n del ADN RAD9-dependiente o RAD6/RAD18 ADN da&ntilde;os tolerancia v&iacute;a genes Mostrar reducido crecimiento de selenito de sodio versus aproximadamente 28-36% en SeMet. Curiosamente ambos compuestos redujeron el crecimiento en aproximadamente 21-25% de las cepas que carecen de genes del estr&eacute;s oxidativo. Estos datos sugieren que tanto selenita y SeMet probablemente inducen da&ntilde;o en el ADN mediante la generaci&oacute;n de especies reactivas. Los efectos previstos de la p&eacute;rdida de componentes de la v&iacute;a de estr&eacute;s oxidativo no se observaron, probablemente debido a la aparentes despidos en estos productos g&eacute;nicos que pueden mantener los efectos da&ntilde;inos bajo control.

An&aacute;lisis de cepas de Saccharomyces cerevisiae alelo nulo identifican un papel m&aacute;s grande para el da&ntilde;o de la DNA contra v&iacute;as de estr&eacute;s oxidativo en la inhibici&oacute;n del crecimiento de selenio.

&#x86CB;&#x6C28;&#x9178; (&#x7D22;&#x5C14;&#x7EF4;) &#x662F;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x6BD2;&#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#xFF0C;&#x548C;&#x672A;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x51C6;&#x5907;&#x591A;&#x6CE2;&#x957F;&#x53CD;&#x5E38;&#x8272;&#x6563;&#x6216;&#x5355;&#x6CE2;&#x957F;&#x53CD;&#x5E38;&#x8272;&#x6563; x &#x5C04;&#x7EBF;&#x6676;&#x4F53;&#x5B66;&#x4E2D;&#x9010;&#x6B65;&#x7684;&#x5B9D;&#x8D35;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;&#x7D22;&#x5C14;&#x7EF4;&#x5C55;&#x54C1;&#x53CA;&#x5176;&#x5728;&#x771F;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6BD2;&#x6027;&#x6548;&#x5E94;&#x4ECD;&#x672A;&#x5B8C;&#x5168;&#x7406;&#x89E3;&#x54EA;&#x4E9B;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x4F01;&#x56FE;&#x5229;&#x7528;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#x6765;&#x5B8C;&#x5168;&#x53D6;&#x4EE3;&#x7D22;&#x5C14;&#x7EF4;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x51C6;&#x5907; x &#x5C04;&#x7EBF;&#x6676;&#x4F53;&#x5B66;&#x4E00;&#x76F4;&#x6709;&#x9650;&#x3002;&#x7D22;&#x5C14;&#x7EF4;&#x6297;&#x6027;&#x7684;&#x53EF;&#x884C; S.&#x9175;&#x6BCD;&#x5355;&#x500D;&#x4F53;&#x7A7A;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x5E94;&#x53D8;&#x96C6;&#x5408;&#x7684;&#x5C4F;&#x5E55;&#x88AB;&#x6267;&#x884C;&#x3002;&#x5220;&#x9664; CYS3 &#x57FA;&#x56E0;&#x7F16;&#x7801;&#x80F1;&#x786B;&#x919A; &gamma;-&#x88C2;&#x89E3;&#x9176;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7D22;&#x5C14;&#x7EF4;&#x6700;&#x9AD8;&#x6297;&#x6027;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;SSN2 &#x5220;&#x9664;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7D22;&#x5C14;&#x7EF4;&#x5747;&#x589E;&#x52A0;&#x6297;&#x6027;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA; Cys3p &#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x964D;&#x4F4E;&#x3002;&#x7F3A;&#x4E4F; CYS3 &#x86CB;&#x6C28;&#x9178;&#x8425;&#x517B;&#x7F3A;&#x9677;&#x578B;&#x83CC;&#x682A;&#x5F97;&#x4EE5;&#x6210;&#x957F;&#x4E2D;&#x5A92;&#x4F53;&#x4E0E;&#x7D22;&#x5C14;&#x7EF4;&#x4E3A;&#x5B5F;&#x4E70;&#xFF0C;&#x5B9E;&#x73B0;&#x603B;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x672C;&#x4E0A;&#x662F; 100%&#x5165;&#x4F4F;&#x7387;&#x7684;&#x552F;&#x4E00;&#x6765;&#x6E90;&#x3002;CYS3 &#x5220;&#x9664;&#x5E94;&#x53D8;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x7B80;&#x5355;&#x548C;&#x5177;&#x6709;&#x6210;&#x672C;&#x6548;&#x76CA;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x51C6;&#x5907;&#x53D6;&#x4EE3;&#x7D22;&#x5C14;&#x7EF4;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x9175;&#x6BCD;&#x548C;&#x4E5F;&#x8BB8;&#x5176;&#x4ED6;&#x771F;&#x6838;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x4F18;&#x52BF;&#x3002;

&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#x7A7A;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x682A;&#x7684;&#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5C4F;&#x5E55;&#x6807;&#x8BC6;&#x57FA;&#x56E0;&#x53C2;&#x4E0E;&#x86CB;&#x6C28;&#x9178;&#x62B5;&#x6297;&#x7684;&#x3002;

Selenomethionine (SeMet) is a potentially toxic amino acid, and yet it is a valuable tool in the preparation of labeled proteins for multiwavelength anomalous dispersion or single-wavelength anomalous dispersion phasing in X-ray crystallography. The mechanism by which high levels of SeMet exhibits its toxic effects in eukaryotic cells is not fully understood. Attempts to use Saccharomyces cerevisiae for the preparation of fully substituted SeMet proteins for X-ray crystallography have been limited. A screen of the viable S. cerevisiae haploid null allele strain collection for resistance to SeMet was performed. Deletion of the CYS3 gene encoding cystathionine gamma-lyase resulted in the highest resistance to SeMet. In addition, deletion of SSN2 resulted in both increased resistance to SeMet as well as reduced levels of Cys3p. A methionine auxotrophic strain lacking CYS3 was able to grow in media with SeMet as the only source of Met, achieving essentially 100% occupancy in total proteins. The CYS3 deletion strain provides advantages for an easy and cost-effective method to prepare SeMet-substituted protein in yeast and perhaps other eukaryotic systems.

Genome-wide screen of Saccharomyces cerevisiae null allele strains identifies genes involved in selenomethionine resistance.

S&eacute;l&eacute;nom&eacute;thionine (SeMet) est un acide amin&eacute; potentiellement toxique, et pourtant c&#39;est un outil pr&eacute;cieux dans la pr&eacute;paration de prot&eacute;ines marqu&eacute;es pour les longueurs d&#39;onde multiples dispersion anomale ou dispersion anomale de simple-longueur d&#39;onde progressive en cristallographie aux rayons x. Le m&eacute;canisme par lequel des niveaux &eacute;lev&eacute;s de pi&egrave;ces SeMet ses effets toxiques dans les cellules eucaryotes n&#39;est pas enti&egrave;rement comprise. Tentatives d&#39;utilisation de Saccharomyces cerevisiae pour la pr&eacute;paration des prot&eacute;ines totalement substitu&eacute;s de SeMet cristallographie aux rayons x ont &eacute;t&eacute; limit&eacute;s. Un &eacute;cran de la viable S. cerevisiae haplo&iuml;de all&egrave;le nul collection de souches pour la r&eacute;sistance &agrave; SeMet a &eacute;t&eacute; r&eacute;alis&eacute;. D&eacute;l&eacute;tion du g&egrave;ne CYS3 codant la cystathionine gamma-lyase a abouti &agrave; la plus haute r&eacute;sistance &agrave; SeMet. En outre, suppression de SSN2 a donn&eacute; lieu &agrave; la fois une r&eacute;sistance accrue aux SeMet, ainsi que des niveaux r&eacute;duits de Cys3p. Une souche auxotrophe de m&eacute;thionine, sans CYS3 est capable de cro&icirc;tre dans des milieux contenant SeMet comme la seule source d&#39;&eacute;conomie de march&eacute;, r&eacute;alisation d&#39;occupation de 100 %, essentiellement dans les prot&eacute;ines totales. La souche de suppression CYS3 offre les avantages d&#39;une m&eacute;thode simple et rentable pr&eacute;parer SeMet-substitu&eacute;s de prot&eacute;ine dans la levure et peut-&ecirc;tre d&#39;autres syst&egrave;mes eucaryotes.

G&eacute;nome-large &eacute;cran de souches de Saccharomyces cerevisiae all&egrave;le nul identifie des g&egrave;nes impliqu&eacute;s dans la r&eacute;sistance de la s&eacute;l&eacute;nom&eacute;thionine.

Selenmethionin (SeMet) ist eine potenziell giftige Aminos&auml;ure, und doch ist es ein wertvolles Instrument bei der Vorbereitung der beschriftete Proteine f&uuml;r multiwavelength anomale Dispersion oder Einzel-Wellenl&auml;nge anomale Dispersion phasing-in Kristallstrukturanalyse. Der Mechanismus, durch welchen hohe SeMet Exponate seiner toxischen Wirkungen in eukaryotischen Zellen ist nicht vollst&auml;ndig verstanden. Versuche mithilfe der Saccharomyces Cerevisiae f&uuml;r die Vorbereitung der vollst&auml;ndig ersetzten SeMet Proteine Kristallstrukturanalyse wurden beschr&auml;nkt. Ein Bildschirm der lebensf&auml;higen S. Cerevisiae haploide null Allel Belastung Collection f&uuml;r die Resistenz gegen SeMet wurde durchgef&uuml;hrt. L&ouml;schen von CYS3 gen, das Cystathionin-Gamma-Lyase f&uuml;hrte die h&ouml;chste Resistenz gegen SeMet. Dar&uuml;ber hinaus Streichung des SSN2 f&uuml;hrte zu beide erh&ouml;hte Resistenz gegen SeMet sowie geringere Ebenen der Cys3p. Methionin auxotrophe Belastung fehlt CYS3 konnte in den Medien mit SeMet wachsen, als die einzige Quelle der Met, im wesentlichen 100 % Auslastung im gesamten Proteine zu erreichen. Die CYS3-L&ouml;schung-Belastung bietet Vorteile f&uuml;r eine einfache und kosteng&uuml;nstige Methode SeMet-substituierte Protein in Hefe und vielleicht andere eukaryotic Systeme vorbereiten.

Genomweiten Bildschirm von Saccharomyces Cerevisiae null Allel St&auml;mmen identifiziert Gene Selenmethionin Widerstand beteiligt.

Selenometionina (SeMet) &egrave; un amminoacido potenzialmente tossico, e ancora &egrave; uno strumento prezioso nella preparazione delle proteine etichette per dispersione anomala composita o dispersione anomala di singolo-lunghezza d&#39;onda phasing in cristallografia a raggi x. Il meccanismo da cui alti livelli di esposizioni SeMet suoi effetti tossici nelle cellule eucariotiche non &egrave; pienamente compresa. Tentativi di usare Saccharomyces cerevisiae per la preparazione di proteine SeMet completamente sostituite per cristallografia a raggi x sono stati limitati. Una schermata di vitale S. cerevisiae aploide allele null ceppo insieme per la resistenza a SeMet &egrave; stata eseguita. Delezione del gene CYS3 che codifica la cistationina gamma-liasi ha provocato la pi&ugrave; alta resistenza a SeMet. Inoltre, eliminazione di SSN2 ha provocato entrambi maggiore resistenza a SeMet cos&igrave; come ha ridotto i livelli di Cys3p. Un ceppo auxotrofi metionina privo di CYS3 era in grado di crescere in media con SeMet come l&#39;unica fonte di Met, raggiungere essenzialmente 100% di occupazione in proteine totali. Il ceppo di eliminazione CYS3 fornisce vantaggi per un metodo facile e conveniente preparare proteina SeMet-sostituiti nel lievito e forse altri sistemi eucariotici.

Genome-wide screen di ceppi di Saccharomyces cerevisiae allele null identifica i geni coinvolti nella resistenza selenometionina.

&#x30BB;&#x30EC;&#x30CE;&#x30E1;&#x30C1;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3; &#xFF08;SeMet&#xFF09; &#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306B;&#x6709;&#x6BD2;&#x306A;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x307E;&#x3060;&#x591A;&#x6CE2;&#x9577;&#x7570;&#x5E38;&#x5206;&#x6563;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5358;&#x4E00;&#x6CE2;&#x9577;&#x7570;&#x5E38;&#x5206;&#x6563; x &#x7DDA;&#x7D50;&#x6676;&#x89E3;&#x6790;&#x3067;&#x6BB5;&#x968E;&#x7684;&#x306B;&#x5EC3;&#x6B62;&#x306E;&#x5206;&#x985E;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x6E96;&#x5099;&#x3067;&#x8CB4;&#x91CD;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x6BD2;&#x6027;&#x306E;&#x771F;&#x6838;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093; SeMet &#x5C55;&#x793A;&#x306E;&#x9AD8;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3002;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x7F6E;&#x63DB;&#x3055;&#x308C;&#x305F; SeMet &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E; x &#x7DDA;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x89E3;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6E96;&#x5099;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x51FA;&#x82BD;&#x9175;&#x6BCD;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x8A66;&#x307F;&#x306F;&#x3001;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5B9F;&#x884C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A; s. &#x9175;&#x6BCD; SeMet &#x62B5;&#x6297;&#x6027;&#x534A;&#x6570;&#x4F53; null &#x30A2;&#x30EC;&#x30EB;&#x3072;&#x305A;&#x307F;&#x30B3;&#x30EC;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x524A;&#x9664;&#x30B7;&#x30B9;&#x30BF;&#x30C1;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3; &gamma;-&#x30EA;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E; CYS3 &#x306E; SeMet &#x3078;&#x306E;&#x6700;&#x9AD8;&#x306E;&#x62B5;&#x6297;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;SSN2 &#x306E;&#x524A;&#x9664;&#x4E21;&#x65B9; SeMet &#x306B;&#x62B5;&#x6297;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F; Cys3p &#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x6E1B;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x3002;CYS3 &#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x30E1;&#x30C1;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x6804;&#x990A;&#x8981;&#x6C42;&#x6027;&#x3072;&#x305A;&#x307F;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A2; SeMet &#x3068; Met&#x3001;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B; 100 &#xFF05; &#x5360;&#x6709;&#x7DCF;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3067;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6210;&#x9577;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x305F;&#x3002;CYS3 &#x524A;&#x9664;&#x3072;&#x305A;&#x307F;&#x306E; SeMet-&#x7F6E;&#x63DB;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x9175;&#x6BCD;&#x3068;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x4ED6;&#x306E;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x6E96;&#x5099;&#x3059;&#x308B;&#x7C21;&#x5358;&#x304B;&#x3064;&#x30B3;&#x30B9;&#x30C8;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306E;&#x5229;&#x70B9;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30B5;&#x30C3;&#x30AB;&#x30ED; &#x30DF;&#x30BB;&#x30B9;&#x9175;&#x6BCD; null &#x30A2;&#x30EC;&#x30EB;&#x83CC;&#x682A;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x5E83;&#x3044;&#x753B;&#x9762;&#x30BB;&#x30EC;&#x30CE;&#x30E1;&#x30C1;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x8010;&#x6027;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Selenomethionine (SeMet)&#xC740; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB3C5;&#xC131; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC544;&#xC9C1;&#xC774; &#xBCC0;&#xCE59; &#xBD84;&#xC0B0; &#xB610;&#xB294; &#xB2E8;&#xC77C; &#xD30C;&#xC7A5; &#xBCC0;&#xCE59; &#xBD84;&#xC0B0; x-&#xC120; &#xACB0;&#xC815;&#xD559;&#xC5D0; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xC774; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC900;&#xBE44;&#xC5D0; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;. &#xC9C4; &#xD575; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB3C5;&#xC131; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xC774;&#xD574; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; SeMet &#xC804;&#xC2DC;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;. &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xB300;&#xCCB4; &#xB41C; SeMet &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; x-&#xC120; &#xACB0;&#xC815;&#xD559;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC900;&#xBE44;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; Saccharomyces cerevisiae&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2DC;&#xB3C4; &#xC81C;&#xD55C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Semet&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC800;&#xD56D;&#xC758; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; S. cerevisiae haploid null &#xB300;&#xB9BD; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xCEEC;&#xB809;&#xC158; &#xD654;&#xBA74; &#xC218;&#xD589; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC0AD;&#xC81C; cystathionine &#xAC10;&#xB9C8;-lyase &#xC778;&#xCF54;&#xB529; CYS3 &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; Semet&#xC5D0; &#xB192;&#xC740; &#xC800;&#xD56D; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, ssn2&#xC758; &#xC0AD;&#xC81C; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4; SeMet &#xBAA8;&#xB450; &#xC99D;&#xAC00; &#xC800;&#xD56D;&#xC73C;&#xB85C; cys3p&#xC758; &#xB808;&#xBCA8;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C;. CYS3 &#xBD80;&#xC871; &#xD55C; &#xBA54;&#xD2F0;&#xC624;&#xB2CC; auxotrophic &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778; &#xBA54;&#xD2B8;&#xB85C;, &#xCD1D; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; 100% &#xC810;&#xC720;&#xC728; &#xB2EC;&#xC131;&#xC758; &#xC720;&#xC77C;&#xD55C; &#xC6D0;&#xBCF8;&#xC73C;&#xB85C; Semet&#xC640; &#xBBF8;&#xB514;&#xC5B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC131;&#xC7A5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. CYS3 &#xC0AD;&#xC81C; &#xBCC0;&#xD615; &#xD6A8; &#xBAA8;&#xC640; &#xC544;&#xB9C8;&#xB3C4; &#xB2E4;&#xB978; &#xC9C4; &#xD575; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; SeMet &#xB300;&#xCCB4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC900;&#xBE44;&#xB97C; &#xAC04;&#xD3B8; &#xD558; &#xACE0; &#xBE44;&#xC6A9; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xC810;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Saccharomyces cerevisiae null &#xB300;&#xB9BD; &#xC885;&#xC790;&#xC758; &#xAC8C;&#xB188; &#xB113;&#xC740; &#xD654;&#xBA74; selenomethionine &#xC800;&#xD56D;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Selenometionina (SeMet) es un amino&aacute;cido potencialmente t&oacute;xico, y sin embargo es una herramienta valiosa en la elaboraci&oacute;n de prote&iacute;nas marcadas de m&uacute;ltiples longitudes de onda dispersi&oacute;n an&oacute;mala o sola longitud de onda dispersi&oacute;n an&oacute;mala eliminaci&oacute;n en cristalograf&iacute;a de rayos x. El mecanismo por el que altos niveles de SeMet expone sus efectos t&oacute;xicos en las c&eacute;lulas eucariotas no se entiende completamente. Se han limitado los intentos de utilizar Saccharomyces cerevisiae para la preparaci&oacute;n de prote&iacute;nas de SeMet completamente sustituidas por Cristalograf&iacute;a de rayos x. Se realiz&oacute; una pantalla de la viable S. cerevisiae haploides alelo nulo cepa colecci&oacute;n para resistencia a SeMet. Canceladura del gene CYS3 codificaci&oacute;n cystathionine gamma-lyase dio lugar a la m&aacute;xima resistencia a SeMet. Adem&aacute;s, supresi&oacute;n de SSN2 dio lugar a tanto mayor resistencia al SeMet as&iacute; como reducci&oacute;n en los niveles de Cys3p. Una cepa auxotr&oacute;fica de metionina que carecen de CYS3 fue capaz de crecer en medios con SeMet como la &uacute;nica fuente de Met, lograr esencialmente 100% de ocupaci&oacute;n en prote&iacute;nas totales. La cepa de la eliminaci&oacute;n de CYS3 proporciona ventajas para un m&eacute;todo f&aacute;cil y rentable preparar la prote&iacute;na SeMet-sustituido en levadura y quiz&aacute;s otros sistemas eucari&oacute;ticos.

Pantalla de genoma de cepas de Saccharomyces cerevisiae alelo nulo identifica genes implicados en la resistencia selenometionina.

Smad &#x86CB;&#x767D;&#x6362;&#x80FD;&#x5668;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x4E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8C03;&#x8282;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x8F6C;&#x5316;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;-&beta; (TGF-&beta;) &#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;TGF-&beta; &#x6CBB;&#x7597;&#x540E;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x540C;&#x6E90; Smad2 &#x548C; Smad3 &#x662F; TGF-&beta; &#x53D7;&#x4F53;&#x5728; SSXS &#x6BCD;&#x9898;&#x7684; C-&#x672B;&#x7AEF;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E; C-&#x5C3E;&#xFF0C;&#x9664;&#x4E86;&#x4E09;&#x4E2A; (S/T)-Smad3 &#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#x533A;&#x57DF;&#x3001; Ser(208)&#x3001; Ser(204)&#xFF0C;&#x548C; Thr(179) P &#x7AD9;&#x70B9;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; TGF-&beta; &#x7684;&#x56DE;&#x5E94;&#x3002;&#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x9AD8;&#x5CF0; 1 h &#x540E; TGF-&beta; &#x7684;&#x5F85;&#x9047;&#xFF0C;&#x80CC;&#x540E; C &#x5C3E;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x9AD8;&#x5CF0;&#x671F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x4F9B;&#x8BC1;&#x636E;&#x8868;&#x660E; C &#x5C3E; TGF-&beta; &#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; TGF-&beta; &#x8BF1;&#x5BFC;&#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x9700;&#x8981;&#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; TGF-&beta; &#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x8BE5;&#x53D7;&#x4F53;&#x672C;&#x8EAB;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x4E0D; phosphorylate &#x8FD9;&#x4E9B;&#x7F51;&#x7AD9;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x663E;&#x793A; ERK &#x4E0D;&#x8D1F;&#x8D23; TGF-&beta;-&#x4F9D;&#x8D56;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x8FD9;&#x4E09;&#x4E2A;&#x5730;&#x65B9;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A; GSK3 &#x5E10;&#x6237;&#x4E3A; TGF-&beta; &#x8BF1;&#x5BFC;&#x578B; Ser(204) &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;Flavopiridol&#xFF0C;&#x6CDB; CDK &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#xFF0C;&#x5E9F;&#x9664; TGF-&beta; &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684; Thr(179) &#x548C; Ser(208)&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E; CDK &#x5BB6;&#x5EAD;&#x8D1F;&#x8D23;&#x54CD;&#x5E94; TGF-&beta; &#x5728; Thr(179) &#x548C; Ser(208) &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;&#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7F51;&#x7AD9;&#x5230; nonphosphorylatable &#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x589E;&#x52A0;&#x6FC0;&#x6D3B; TGF beta Smad &#x9776;&#x57FA;&#x56E0; Smad3 &#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA; Smad3 &#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x89C2;&#x5BDF;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;TGF-&beta; &#x8BF1;&#x5BFC;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684; Smad3 &#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#x7AD9;&#x70B9;&#x6291;&#x5236;&#x5176;&#x589E;&#x6B96;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;

&#x8F6C;&#x5316;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;-{beta}-Smad3 &#x8BF1;&#x5BFC;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;

Smad proteins transduce the transforming growth factor-beta (TGF-beta) signal at the cell surface into gene regulation in the nucleus. Upon TGF-beta treatment, the highly homologous Smad2 and Smad3 are phosphorylated by the TGF-beta receptor at the SSXS motif in the C-terminal tail. Here we show that in addition to the C-tail, three (S/T)-P sites in the Smad3 linker region, Ser(208), Ser(204), and Thr(179) are phosphorylated in response to TGF-beta. The linker phosphorylation peaks at 1 h after TGF-beta treatment, behind the peak of the C-tail phosphorylation. We provide evidence suggesting that the C-tail phosphorylation by the TGF-beta receptor is necessary for the TGF-beta-induced linker phosphorylation. Although the TGF-beta receptor is necessary for the linker phosphorylation, the receptor itself does not phosphorylate these sites. We further show that ERK is not responsible for TGF-beta-dependent phosphorylation of these three sites. We show that GSK3 accounts for TGF-beta-inducible Ser(204) phosphorylation. Flavopiridol, a pan-CDK inhibitor, abolishes TGF-beta-induced phosphorylation of Thr(179) and Ser(208), suggesting that the CDK family is responsible for phosphorylation of Thr(179) and Ser(208) in response to TGF-beta. Mutation of the linker phosphorylation sites to nonphosphorylatable residues increases the ability of Smad3 to activate a TGF-beta/Smad-target gene as well as the growth-inhibitory function of Smad3. Thus, these observations suggest that TGF-beta-induced phosphorylation of Smad3 linker sites inhibits its antiproliferative activity.

Transforming growth factor-{beta}-inducible phosphorylation of Smad3.

Prot&eacute;ines SMAD transmettre le signal de facteur de croissance-b&ecirc;ta (TGF-b&ecirc;ta) transformant &agrave; la surface cellulaire dans la r&eacute;gulation des g&egrave;nes dans le noyau. Par traitement de TGF-b&ecirc;ta, la tr&egrave;s homologues Smad2 et Smad3 sont phosphoryl&eacute;s par les r&eacute;cepteurs du TGF-b&ecirc;ta &agrave; motif SSXS dans la queue de C-terminal. Ici, nous montrons que, en plus de la C-queue, trois (S/T)-sites de P dans la r&eacute;gion de l&#39;&eacute;diteur de liens Smad3, Ser(208), Ser(204) et Thr(179) sont phosphoryl&eacute;es en r&eacute;ponse &agrave; TGF-beta. Les sommets de la phosphorylation de linker &agrave; 1 h apr&egrave;s le traitement de TGF-b&ecirc;ta, derri&egrave;re le pic de la phosphorylation de C-queue. Nous fournissons des preuves sugg&eacute;rant que la phosphorylation de C-queue par les r&eacute;cepteurs du TGF-b&ecirc;ta est n&eacute;cessaire pour la phosphorylation de l&#39;&eacute;diteur de liens induite par TGF-b&ecirc;ta. Bien que les r&eacute;cepteurs du TGF-b&ecirc;ta sont n&eacute;cessaire pour la phosphorylation de l&#39;&eacute;diteur de liens, le r&eacute;cepteur lui-m&ecirc;me phosphoryler pas ces sites. De plus, nous montrons que ERK n&#39;est pas responsable de la phosphorylation d&eacute;pendante de TGF-b&ecirc;ta de ces trois sites. Nous montrons que GSK3 responsable de la phosphorylation de TGF-b&ecirc;ta-inducible Ser(204). FLAVOPIRIDOL, un inhibiteur de la pan-CDK, abolit la phosphorylation induite par TGF-b&ecirc;ta de Thr(179) et Ser(208), ce qui sugg&egrave;re que la famille CDK est responsable de la phosphorylation de Thr(179) et Ser(208) en r&eacute;ponse au TGF-beta. Mutation des sites de phosphorylation de l&#39;&eacute;diteur de liens &agrave; des r&eacute;sidus de nonphosphorylatable augmente la capacit&eacute; de Smad3 pour activer un g&egrave;ne TGF-b&ecirc;ta/Smad-cible ainsi que la fonction croissance-inhibiteur de Smad3. Ainsi, ces observations sugg&egrave;rent que la phosphorylation induite par TGF-b&ecirc;ta de Smad3 sites linker inhibe son activit&eacute; antiprolif&eacute;rative.

Transforming growth factor-{beta}-inductible par phosphorylation de Smad3.

SMAD-Proteine zur&uuml;ckwirken transformierende Wachstumsfaktor-Beta (TGF-Beta) Signals an der Zelloberfl&auml;che in Genregulation im Zellkern. Bei TGF-Beta-Behandlung sind die hochgradig homologe Smad2 und Smad3 durch die TGF-Beta-Rezeptor auf der SSXS-Motiv in der C-terminalen Schwanz phosphoryliert. Hier zeigen wir, dass neben der C-Schwanz, drei (S/T)-P-Standorte in der Smad3 Linker-Region, Ser(208), Ser(204) und Thr(179) sind als Reaktion auf die TGF-Beta phosphoryliert. Die Linker-Phosphorylierung-Gipfel um 1 h nach der TGF-Beta-Behandlung, hinter dem Gipfel des C-Tail-Phosphorylierung. Wir liefern Hinweise darauf, dass die C-Tail-Phosphorylierung durch die TGF-Beta-Rezeptor f&uuml;r den Linker TGF-Beta-induzierte Phosphorylierung notwendig. Obwohl der TGF-Beta-Rezeptor f&uuml;r die Linker-Phosphorylierung notwendig ist, wird der Rezeptor selbst dieser Sites nicht phosphoryliert. Wir zeigen weitere ERK ist nicht verantwortlich f&uuml;r TGF-Beta-abh&auml;ngige Phosphorylierung dieser drei Sites. Wir zeigen, dass TGF-Beta-inducible Ser(204) Phosphorylierung GSK3 entfallen. Flavopiridol, eine Pfanne-CDK-Inhibitor wird abgeschafft, TGF-Beta-induzierte Phosphorylierung von Thr(179) und Ser(208), die darauf hindeutet, dass die CDK-Familie f&uuml;r die Phosphorylierung von Thr(179) und Ser(208) als Reaktion auf die TGF-Beta verantwortlich ist. Mutation der Linker Phosphorylierung Seiten Nonphosphorylatable R&uuml;ckst&auml;nden erh&ouml;ht die F&auml;higkeit der Smad3, ein TGF-Beta/Smad-Korb-gen zu aktivieren sowie das Wachstum hemmende Funktion der Smad3. Also, diese Beobachtungen legen nahe, dass TGF-Beta-induzierte Phosphorylierung von Smad3 hemmt Linker Seiten Antiproliferative T&auml;tigkeit.

Transforming Growth Factor-{Beta}-durch Induktion erh&auml;ltlichen Phosphorylierung von Smad3.

Le proteine SMAD trasducono il segnale transforming growth factor-beta (TGF-beta) alla superficie delle cellule nella regolazione dei geni nel nucleo. Previo trattamento di TGF-beta, l&#39;altamente omologhe Smad2 e Smad3 sono fosforilati dal recettore TGF-beta presso il motivo SSXS in coda C-terminale. Qui vi mostriamo che oltre la coda-C, tre (S/T)-siti P nella regione linker Smad3, Ser(208), Ser(204) e Thr(179) sono fosforilati in risposta al TGF-beta. I picchi di fosforilazione del linker a 1 h dopo il trattamento di TGF-beta, dietro il picco di fosforilazione della coda-C. Forniamo prove suggeriscono che la fosforilazione di C-coda dal recettore TGF-beta &egrave; necessaria per la fosforilazione di TGF-beta-indotta del linker. Anche se il recettore TGF-beta &egrave; necessario per la fosforilazione del linker, il recettore stesso non fosforila questi siti. Mostriamo ulteriormente che ERK non &egrave; responsabile per la fosforilazione di TGF-beta-dipendente di questi tre siti. Mostriamo che GSK3 conti per TGF-beta-inducible Ser(204) fosforilazione. Flavopiridol, un inibitore di pan-CDK, abolisce la fosforilazione di TGF-beta-indotta di Thr(179) e Ser(208), suggerendo che la famiglia CDK &egrave; responsabile della fosforilazione di Thr(179) e Ser(208) in risposta a TGF-beta. Mutazione dei siti linker fosforilazione di residui di nonphosphorylatable aumenta la capacit&agrave; di attivare un gene bersaglio TGF-beta/Smad Smad3, cos&igrave; come la funzione crescita-inibitoria di Smad3. Cos&igrave;, queste osservazioni suggeriscono che la fosforilazione indotta da TGF-beta di Smad3 siti linker inibisce la sua attivit&agrave; antiproliferativa.

Trasformazione di fattore di crescita-{beta}-inducible fosforilazione di Smad3.

Smad &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x6838;&#x5185;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3067;&#x5909;&#x63DB;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50; &beta; &#xFF08;TGF-&beta;&#xFF09; &#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x4F1D;&#x9054;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;TGF &beta; &#x6CBB;&#x7642;&#x6642;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x76F8;&#x540C;&#x306E; Smad2 &#x3068; Smad3 SSXS &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3092; C &#x672B;&#x7AEF;&#x306E; TGF-&beta; &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066; C &#x5C3E;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3059;&#x308B; 3 &#x3064; &#xFF08;S/T)-P &#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; Smad3 &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x9818;&#x57DF;&#x3001;Ser(208)&#x3001;Ser(204)&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; Thr(179) &#x3067;&#x306F; TGF &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3067;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30D4;&#x30FC;&#x30AF; 1 h C &#x5C3E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x30D4;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x5F8C;&#x308D;&#x306E; TGF-&beta; &#x6CBB;&#x7642;&#x5F8C;&#x3002;TGF &beta; &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306B;&#x3088;&#x308B; C &#x5C3E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316; TGF &beta; &#x8A98;&#x767A;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC; &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3059;&#x308B;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;TGF &beta; &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x304C;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3001;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x81EA;&#x4F53;&#x3092;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;ERK &#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089; 3 &#x3064;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E; TGF &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x4F9D;&#x5B58;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;GSK3 TGF &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x8A98;&#x5C0E; Ser(204) &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30A2;&#x30AB;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Flavopiridol&#x3001;&#x30D1;&#x30F3; CDK &#x30A4;&#x30F3;&#x30D2;&#x30D3;&#x30BF;&#x30FC;, TGF &beta; &#x8A98;&#x767A;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E; Thr(179) &#x3068; Ser(208)&#x3001;CDK &#x5BB6;&#x65CF; TGF &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E; Thr(179) &#x3068; Ser(208) &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3092;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;TGF &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; Smad &#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3059;&#x308B; Smad3 &#x306E;&#x6A5F;&#x80FD; Smad3 &#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x963B;&#x5BB3;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC; &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306B; nonphosphorylatable &#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x89B3;&#x6E2C; TGF &beta; &#x8A98;&#x767A;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B; Smad3 &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;-{&beta;} &#x5909;&#x63DB;-Smad3 &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3002;

Smad &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; transduce &#xD575;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC808;&#xC5D0; &#xC140; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xD615; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790;-&#xBCA0;&#xD0C0; (TGF-&#xBCA0;&#xD0C0;) &#xC2E0;&#xD638;. TGF-&#xBCA0;&#xD0C0; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC2DC; &#xB192;&#xC740; &#xB3D9;&#xC885; smad2&#xC640; Smad3 C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xAF2C;&#xB9AC;&#xC5D0; SSXS &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC5D0;&#xC11C; TGF-&#xBCA0;&#xD0C0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; phosphorylated &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; C &#xAF2C;&#xB9AC; &#xC678;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC5EC; 3 (S/T)-Smad3 &#xB9C1;&#xCEE4; &#xC9C0;&#xC5ED;, Ser(208), Ser(204), &#xBC0F; Thr(179) P &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; TGF-&#xBCA0;&#xD0C0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; phosphorylated &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. C-&#xAF2C;&#xB9AC; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xC808;&#xC815; &#xB4A4;&#xC5D0; TGF-&#xBCA0;&#xD0C0; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD6C4; 1 &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9C1;&#xCEE4; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xBD09;&#xC6B0;&#xB9AC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; TGF-&#xBCA0;&#xD0C0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; C &#xAF2C;&#xB9AC; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB294; TGF-&#xBCA0;&#xD0C0; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9C1;&#xCEE4; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. TGF-&#xBCA0;&#xD0C0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB294; &#xB9C1;&#xCEE4; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC790;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; phosphorylate &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB354; ERK TGF-&#xBCA0;&#xD0C0;-&#xC885;&#xC18D; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC744; &#xC9C0;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; GSK3 TGF-&#xBCA0;&#xD0C0;-&#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; Ser(204) &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACC4;&#xC815; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Flavopiridol, &#xD32C; CDK &#xC5B5;&#xC81C; &#xBB3C; &#xACE7; thr(179)&#xC640; Ser(208), CDK &#xAC00;&#xC871; TGF-&#xBCA0;&#xD0C0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; thr(179)&#xC640; ser(208)&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC740; &#xC81C;&#xC548; TGF-&#xBCA0;&#xD0C0; &#xC720;&#xB3C4; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;. &#xB9C1;&#xCEE4; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; nonphosphorylatable &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; smad3&#xC758; &#xC131;&#xC7A5; &#xC5B5;&#xC81C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; TGF-&#xBCA0;&#xD0C0;/Smad-&#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; smad3&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAD00;&#xCE21; &#xC81C;&#xC548; TGF-&#xBCA0;&#xD0C0; &#xC720;&#xB3C4; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB294; smad3&#xC758; &#xB9C1;&#xCEE4; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; antiproliferative &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;.

&#xBCC0;&#xD615; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790;-{&#xBCA0;&#xD0C0;}-smad3&#xC758; &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;.

Prote&iacute;nas smad transducen la se&ntilde;al transformadora del factor de crecimiento beta (TGF-beta) en la superficie de la c&eacute;lula en la regulaci&oacute;n de los genes en el n&uacute;cleo. Sobre el tratamiento de TGF-beta, la altamente hom&oacute;logas Smad2 y Smad3 son fosforiladas por el receptor de TGF-beta en el adorno SSXS en la cola del c-terminal. Aqu&iacute; se demuestra que adem&aacute;s de la C-cola, tres (S/T)-sitios de P en la regi&oacute;n de vinculador Smad3, Ser(208), Ser(204) y Thr(179) son fosforilados en respuesta a TGF-beta. Los picos de la fosforilaci&oacute;n del vinculador a 1 h despu&eacute;s del tratamiento de TGF-beta, detr&aacute;s de la cima de la fosforilaci&oacute;n de C-cola. Proporcionamos evidencia que sugiere que la fosforilaci&oacute;n de C-cola por el receptor de TGF-beta es necesaria para la fosforilaci&oacute;n del vinculador inducida por TGF-beta. Aunque el receptor de TGF-beta es necesario para la fosforilaci&oacute;n del vinculador, el receptor fosforilan no estos sitios. Adem&aacute;s, mostramos que ERK no es responsable de la fosforilaci&oacute;n de TGF-beta-dependiente de estos tres sitios. Mostramos que GSK3 representa el TGF-beta-inducible Ser(204) fosforilaci&oacute;n. Flavopiridol, un inhibidor de la pan-CDK, suprime la fosforilaci&oacute;n inducida por TGF-beta de Thr(179) y Ser(208), sugiriendo que la familia CDK es responsable de la fosforilaci&oacute;n de Thr(179) y Ser(208) en respuesta a TGF-beta. Mutaci&oacute;n de los sitios de fosforilaci&oacute;n de vinculador para residuos de nonphosphorylatable aumenta la capacidad de Smad3 para activar un gen de TGF-beta/Smad objetivo as&iacute; como la funci&oacute;n de crecimiento-inhibitoria de Smad3. As&iacute;, estas observaciones sugieren que la fosforilaci&oacute;n inducida por TGF-beta de Smad3 sitios de vinculador inhibe su actividad antiproliferativa.

Transforming growth factor-{beta}-inducible fosforilaci&oacute;n de Smad3.

&#x8F6C;&#x5316;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;-&beta; (TGF-&beta;) &#x89C4;&#x5B9A;&#x4E86;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x5B83;&#x8BF1;&#x4F7F;&#x6B63;&#x5E38;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x70C8;&#x6027;&#x751F;&#x957F;&#x6291;&#x5236;&#x54CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x8FC1;&#x79FB;&#x548C;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5165;&#x4FB5;&#x3002;Smads &#x8C03;&#x89E3; TGF-&beta; &#x7684;&#x7B54;&#x590D;&#x3002;TGF-&beta; &#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x53D7;&#x4F53;&#x7ED3;&#x5408;&#x5BFC;&#x81F4;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; Smad2/3 &#x4E2D;&#x5176; C &#x603B;&#x7AD9;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5BCC;&#x542B;&#x812F;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#x533A;&#x57DF;&#x3002;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;/&#x82CF;&#x6C28;&#x9178;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7AD9;&#x70B9;&#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#x533A;&#x57DF;&#x88AB;&#x8DDF;&#x812F;&#x6C28;&#x9178;&#x6B8B;&#x7559;&#x3002;Pin1&#xFF0C;&#x9170;-&#x812F;&#x6C28;&#x9170;&#x72EC;&#x8054;&#x4F53;/&#x8DE8;&#x5F02;&#x6784;&#x9176;&#xFF0C;&#x8BA4;&#x8BC6;&#x5230;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;/&#x82CF;&#x6C28;&#x9178;-&#x812F;&#x6C28;&#x9178;&#x56FE;&#x6848;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A; Smad2/3 &#x4E0E; Pin1 TGF-&beta;-&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x663E;&#x793A;&#x94FE;&#x63A5;&#x5668; Smad3 &#x5730;&#x533A;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x82CF;&#x6C28;&#x9178; 179-&#x812F;&#x6C28;&#x9178;&#x6BCD;&#x9898;&#x662F; Pin1 &#x7684;&#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3002;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x4E5F;&#x8BF1;&#x4F7F;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x82CF;&#x6C28;&#x9178; 179 &#x548C; Smad3 &#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#x533A;&#x57DF;&#x4E2D;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269; TGF-&beta; &#x76F8;&#x540C;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x65E0;&#x6CD5;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x523A;&#x6FC0; Smad3 Pin1&#x3002;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684; c Smad3 &#x603B;&#x7AD9;&#x662F; Pin1 &#x4E0E;&#x4E92;&#x52A8;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;TGF-&beta; &#x8BF1;&#x5BFC;&#x751F;&#x957F;&#x6291;&#x5236;&#x53CD;&#x5E94;&#x548C;&#x5927;&#x91CF;&#x7684; TGF-&beta;/Smad &#x76EE;&#x6807;&#x57FA;&#x56E0;&#x8FDB;&#x884C;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x5E76;&#x65E0;&#x91CD;&#x5927;&#x5F71;&#x54CD; Pin1 &#x5C0F;&#x53D1;&#x5939; RNA &#x7684;&#x6D88;&#x8017;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x2477; Pin1 PC3 &#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F3A;&#x70C8;&#x6291;&#x5236; TGF-&beta; &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x8FC1;&#x79FB;&#x548C;&#x5165;&#x4FB5;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;TGF-&beta; &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684; N-&#x9499;&#x3001; &#x8FC1;&#x79FB;&#x548C;&#x4FB5;&#x88AD;&#x4E2D;&#x5177;&#x6709;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x662F;&#x660E;&#x663E;&#x51CF;&#x5C11;&#x65F6; Pin1 &#x8017;&#x5C3D; PC3 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A; Pin1 &#x6297;&#x539F;&#x5728;&#x8BB8;&#x591A;&#x764C;&#x75C7;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x7A81;&#x51FA;&#x663E;&#x793A;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5165;&#x4FB5;&#x548C; Pin1 TGF-&beta; &#x8BF1;&#x5BFC;&#x8FC1;&#x79FB;&#x4E2D;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3002;

Pin1 &#x4FC3;&#x8FDB;&#x8F6C;&#x5316;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;-&beta; &#x8BF1;&#x5BFC;&#x8FC1;&#x79FB;&#x548C;&#x5165;&#x4FB5;&#x3002;

Transforming growth factor-beta (TGF-beta) regulates a wide variety of biological activities. It induces potent growth-inhibitory responses in normal cells but promotes migration and invasion of cancer cells. Smads mediate the TGF-beta responses. TGF-beta binding to the cell surface receptors leads to the phosphorylation of Smad2/3 in their C terminus as well as in the proline-rich linker region. The serine/threonine phosphorylation sites in the linker region are followed by the proline residue. Pin1, a peptidyl-prolyl cis/trans isomerase, recognizes phosphorylated serine/threonine-proline motifs. Here we show that Smad2/3 interacts with Pin1 in a TGF-beta-dependent manner. We further show that the phosphorylated threonine 179-proline motif in the Smad3 linker region is the major binding site for Pin1. Although epidermal growth factor also induces phosphorylation of threonine 179 and other residues in the Smad3 linker region the same as TGF-beta, Pin1 is unable to bind to the epidermal growth factor-stimulated Smad3. Further analysis suggests that phosphorylation of Smad3 in the C terminus is necessary for the interaction with Pin1. Depletion of Pin1 by small hairpin RNA does not significantly affect TGF-beta-induced growth-inhibitory responses and a number of TGF-beta/Smad target genes analyzed. In contrast, knockdown of Pin1 in human PC3 prostate cancer cells strongly inhibited TGF-beta-mediated migration and invasion. Accordingly, TGF-beta induction of N-cadherin, which plays an important role in migration and invasion, is markedly reduced when Pin1 is depleted in PC3 cells. Because Pin1 is overexpressed in many cancers, our findings highlight the importance of Pin1 in TGF-beta-induced migration and invasion of cancer cells.

Pin1 promotes transforming growth factor-beta-induced migration and invasion.

Facteur de croissance transformant b&ecirc;ta (TGF-b&ecirc;ta) r&eacute;glemente un large &eacute;ventail d&#39;activit&eacute;s biologiques. Il entra&icirc;ne des r&eacute;ponses puissantes et inhibiteurs de croissance dans les cellules normales, mais favorise la migration et l&#39;invasion des cellules canc&eacute;reuses. SMAD m&eacute;dier les r&eacute;ponses de TGF-b&ecirc;ta. Liaison de TGF-b&ecirc;ta pour les r&eacute;cepteurs de surface cellulaire m&egrave;ne &agrave; la phosphorylation de Smad2/3 dans leur partie C terminale ainsi que dans la r&eacute;gion riche en proline. Les sites de phosphorylation de s&eacute;rine/thr&eacute;onine dans la r&eacute;gion sont suivis par les r&eacute;sidus de proline. PIN1, une peptidyl-prolyl cis/trans isom&eacute;rase, reconna&icirc;t des motifs de s&eacute;rine/thr&eacute;onine-proline phosphoryl&eacute;s. Nous d&eacute;montrons que Smad2/3 interagit avec la broche 1 de mani&egrave;re d&eacute;pendante de TGF-b&ecirc;ta. De plus, nous montrons que le motif de 179-proline thr&eacute;onine phosphoryl&eacute;e dans la r&eacute;gion d&#39;&eacute;diteur de liens Smad3 est le site de liaison majeur pour Pin1. Bien que le facteur de croissance &eacute;pidermique induit &eacute;galement la phosphorylation de la thr&eacute;onine 179 et autres r&eacute;sidus dans la r&eacute;gion d&#39;&eacute;diteur de liens Smad3 identique &agrave; TGF-b&ecirc;ta, Pin1 est incapable de se lier &agrave; la Smad3 stimul&eacute;e par facteur de croissance &eacute;pidermique. Une analyse plus approfondie sugg&egrave;re que la phosphorylation de Smad3 dans le C, le terminus est n&eacute;cessaire pour l&#39;interaction avec la broche 1. Appauvrissement de la couche de Pin1 par small hairpin RNA n&#39;affecte pas significativement r&eacute;ponses inhibiteurs de croissance induite par le TGF-b&ecirc;ta et un certain nombre de g&egrave;nes cibles de TGF-b&ecirc;ta/Smad analys&eacute;s. En revanche, pr&eacute;cipitation de Pin1 dans les cellules humaines de cancer de la prostate PC3 est fortement inhib&eacute;e invasion et migration induite par TGF-b&ecirc;ta. En cons&eacute;quence, l&#39;induction de la N-cadh&eacute;rine, qui joue un r&ocirc;le important dans la migration et invasion, TGF-b&ecirc;ta est consid&eacute;rablement r&eacute;duite lorsque la broche 1 est appauvri en cellules PC3. Parce que la broche 1 est surexprim&eacute; dans nombreux cancers, nos r&eacute;sultats soulignent l&#39;importance de la broche 1 migration induite par TGF-b&ecirc;ta et invasion des cellules canc&eacute;reuses.

PIN1 favorise la transformation d&#39;invasion et migration induite par le facteur de croissance-b&ecirc;ta.

Transforming Growth Factor-Beta (TGF-Beta) regelt eine Vielzahl von biologischen Aktivit&auml;ten. Es f&ouml;rdert, Migration und Invasion der Krebszellen aber starke Wachstum-hemmende Antworten in normalen Zellen induziert. Smads vermitteln die TGF-Beta-Antworten. TGF-Beta-Bindung an die Zellrezeptoren Oberfl&auml;che f&uuml;hrt zu die Phosphorylierung von Smad2/3 in ihren Carboxyl-Terminus ebenso wie in der Prolin-reiche Linker-Region. Die Serin/Threonin-Phosphorylierung-Standorte in der Linker-Region Folgen der Prolin-R&uuml;ckstand. PIN1, ein konvertierende-Prolyl-Cis/Trans-Isomerase, erkennt Phosphorylierte Serin/Threonin-Prolin-Motiven. Hier zeigen wir, dass Smad2/3 mit Pin1 TGF-Beta-abh&auml;ngigen Weise interagiert. Wir zeigen weiter, dass das Phosphorylierte Threonin-179-Prolin-Motiv in der Smad3-Linker-Region die wichtigsten Bindungsstelle f&uuml;r Pin1. Obwohl epidermaler Wachstumsfaktor auch Phosphorylierung von Threonin 179 und andere R&uuml;ckst&auml;nde in der Smad3-Linker-Region das gleiche wie TGF-Beta induziert, ist Pin1 Bindung an den epidermalen Wachstumsfaktor stimuliert Smad3. Weitere Analysen deuten darauf hin, dass die Phosphorylierung von Smad3 im C-Terminus ist notwendig f&uuml;r die Interaktion mit Pin1. Ersch&ouml;pfung der Pin1 von kleinen Hairpin RNA wirkt nicht wesentlich TGF-Beta-induzierte Wachstum-hemmenden Antworten und eine Reihe von TGF-Beta/Smad-Zielgene analysiert. Im Gegensatz dazu Niederschlag von Pin1 in menschlichen PC3 Prostatakrebszellen stark gehemmt, TGF-Beta-vermittelte Migration und Invasion. TGF-Beta-Induktion von N-Cadherin, die eine wichtige Rolle bei der Migration und Invasion spielt, ist dementsprechend stark vermindert, wenn Pin1 in PC3 Zellen leer ist. Da Pin1 in vielen Krebsarten Pleuramesotheliom ist, markieren Sie unsere Erkenntnisse, die Bedeutung der Pin1 TGF-Beta-induzierte Migration und Invasion der Krebszellen.

PIN1 f&ouml;rdert die Umwandlung von Wachstumsfaktor-Beta-induzierte Migration und Invasion.

Fattore di crescita trasformante-beta (TGF-beta) regola una vasta gamma di attivit&agrave; biologiche. Induce risposte crescite-inibitorie potente in cellule normali, ma promuove la migrazione e l&#39;invasione delle cellule tumorali. SMAD mediare le risposte di TGF-beta. Associazione di TGF-beta per i recettori della superficie cellulare porta alla fosforilazione di Smad2/3 nella loro terminus di C cos&igrave; come nella regione linker proline-rich. I siti di fosforilazione della serina/treonina nella regione linker sono seguiti dai residui di prolina. Pin1, un peptidilica-prolyl cis/trans isomerasi, riconosce fosforilate serina/treonina-prolina motivi. Qui vi mostriamo che Smad2/3 interagisce con il Pin1 in modo TGF-beta-dipendente. Ulteriormente, ci mostra che il motivo di 179-prolina treonina fosforilato nella regione linker Smad3 &egrave; il sito di legame importante per Pin1. Anche se il fattore di crescita epidermico induce anche la fosforilazione della treonina 179 ed altri residui della regione linker Smad3 lo stesso come TGF-beta, Pin1 &egrave; in grado di associare il Smad3 stimolata dal fattore di crescita epidermico. Un&#39;ulteriore analisi suggerisce che la fosforilazione di Smad3 nel C &egrave; necessaria per l&#39;interazione con il Pin1 capolinea. Deplezione di Pin1 da piccolo hairpin RNA non influisce significativamente risposte inibitorie di crescita TGF-beta-indotta e un certo numero di geni bersaglio di TGF-beta/Smad analizzati. Al contrario, atterramento di Pin1 nelle cellule umane di cancro alla prostata PC3 fortemente inibito invasione e la migrazione di TGF-beta-mediata. Di conseguenza, induzione di TGF-beta di N-caderina, che svolge un ruolo importante nella migrazione e invasione, &egrave; marcatamente ridotto quando Pin1 &egrave; impoverito in cellule PC3. Perch&eacute; il Pin1 &egrave; sovraespressa in molti tipi di cancro, i nostri risultati evidenziano l&#39;importanza del Pin1 in TGF-beta-indotta di migrazione e invasione delle cellule tumorali.

PIN1 promuove trasformando l&#39;invasione e la migrazione growth factor-beta-indotta.

&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;-&beta; (TGF-&beta;&#xFF09; &#x591A;&#x7A2E;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x751F;&#x7269;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x6210;&#x9577;&#x6291;&#x5236;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x6B63;&#x5E38;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x79FB;&#x884C;&#x3068;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D78;&#x6F64;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Smads TGF &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;TGF &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7D50;&#x5408;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306B; Smad2/3 &#x30D7;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x9818;&#x57DF;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;C &#x672B;&#x7AEF;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B; &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;/&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3; &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; &#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x9818;&#x57DF;&#x3067;&#x306F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306B;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Pin1 &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;-&#x30D7;&#x30ED;&#x30EA;&#x30EB;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;/&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x7570;&#x6027;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;/&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3; &#x30D7;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3; &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3092;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067; Smad2/3 Pin1 &#x3067;&#x306F; TGF-&beta;-&#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x306B;&#x3084;&#x308A;&#x53D6;&#x308A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B; Smad3 &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3; 179 &#x30D7;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3; &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5; Pin1 &#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E0A;&#x76AE;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#x3082; TGF &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x3068;&#x540C;&#x3058;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3; 179 &#x53CA;&#x3073;&#x4ED6;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E; Smad3 &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x9818;&#x57DF;&#x3067;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;Pin1 &#x306F;&#x8868;&#x76AE;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#x523A;&#x6FC0; Smad3 &#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x5206;&#x6790;&#x304C;&#x793A;&#x3059;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316; Smad3 c &#x306E;&#x672B;&#x7AEF; Pin1 &#x3068;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;Pin1 &#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30D8;&#x30A2;&#x30D4;&#x30F3; RNA &#x306F;&#x3001;TGF &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x8A98;&#x8D77;&#x6210;&#x9577;&#x963B;&#x5BB3;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3068;&#x5206;&#x6790; TGF-&beta;/Smad &#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6570;&#x3092;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;Pin1 PC3 &#x524D;&#x7ACB;&#x817A;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306F;&#x5F37;&#x304F; TGF &beta; &#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x79FB;&#x884C;&#x3068;&#x4FB5;&#x7565;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;Pin1 PC3 &#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x6D88;&#x8017;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x304D;&#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x3068;&#x4FB5;&#x7565;&#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;N &#x578B;&#x30AB;&#x30C9;&#x30D8;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E; TGF &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x8A98;&#x5C0E;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Pin1 &#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x304C;&#x3093;&#x3067;&#x904E;&#x5270;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C; Pin1 TGF &beta; &#x8A98;&#x767A;&#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3068;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D78;&#x6F64;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Pin1 &#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50; &beta; &#x8A98;&#x767A;&#x79FB;&#x884C;&#x3068;&#x4FB5;&#x7565;&#x306E;&#x5909;&#x63DB;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xBCC0;&#xD615; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790;-&#xBCA0;&#xD0C0; (TGF-&#xBCA0;&#xD0C0;) &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC870;&#xC808;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC815;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBC18;&#xC751;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xBC0F; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xCE68;&#xC785;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Smads TGF-&#xBCA0;&#xD0C0; &#xC751;&#xB2F5; &#xC911;&#xC7AC;. TGF-&#xBCA0;&#xD0C0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; C &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC73C;&#xB85C; &#xD504;&#xB864;&#xB9B0; &#xBD80;&#xC720;&#xD55C; &#xB9C1;&#xCEE4; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; Smad2/3&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC774;&#xB974;&#xAC8C;. &#xB9C1;&#xCEE4; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0;/&#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xD504;&#xB864;&#xB9B0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xC635;&#xB2C8;&#xB2E4;. Pin1, peptidyl prolyl cis/trans isomerase phosphorylated &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0;/&#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC;-&#xD504;&#xB864;&#xB9B0; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xB97C; &#xC778;&#xC2DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Smad2/3 TGF-&#xBCA0;&#xD0C0;-&#xC885;&#xC18D; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; Pin1 &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; Smad3 &#xB9C1;&#xCEE4; &#xC601;&#xC5ED;&#xC758; phosphorylated &#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC; 179-&#xD504;&#xB864;&#xB9B0; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xB294; pin1&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD45C; &#xD53C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790;&#xB3C4; &#xC720;&#xB3C4; &#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC; 179 Smad3 &#xB9C1;&#xCEE4; &#xC601;&#xC5ED;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; TGF-&#xBCA0;&#xD0C0;&#xC640; &#xB3D9;&#xC77C;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; pin1&#xB294; &#xD45C; &#xD53C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; &#xC790;&#xADF9; Smad3 &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD94;&#xAC00; &#xBD84;&#xC11D; &#xB098;&#xC654;&#xB2E4; &#xADF8; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; C&#xC5D0;&#xC11C; smad3&#xC758; &#xC885;&#xC810; Pin1 &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;. &#xC791;&#xC740; &#xD5E4;&#xC5B4;&#xD540; RNA&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Pin1 &#xACE0;&#xAC08; TGF-&#xBCA0;&#xD0C0; &#xC720;&#xB3C4; &#xC131;&#xC7A5; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBC18;&#xC751;&#xACFC; TGF-&#xBCA0;&#xD0C0;/Smad &#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBD84;&#xC11D; &#xC218; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74;, TGF-&#xBCA0;&#xD0C0; &#xC911;&#xC7AC; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xACFC; &#xCE68;&#xACF5; Pin1 &#xC778;&#xAC04;&#xC758; PC3 &#xC804;&#xB9BD;&#xC120; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xCD5C;&#xC800; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xC5B5;&#xC81C;. &#xC774; &#xB530;&#xB77C; Pin1 PC3 &#xC140;&#xC5D0; &#xACE0;&#xAC08; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; N-cadherin, &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xBC0F; &#xCE68;&#xC785;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744;, TGF-&#xBCA0;&#xD0C0; &#xC720;&#xB3C4; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xC904;&#xC5B4;&#xB4ED;&#xB2C8;&#xB2E4;. Pin1 &#xB9CE;&#xC740; &#xC554;&#xC5D0; overexpressed&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xBC1C;&#xACAC; Pin1 &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; TGF-&#xBCA0;&#xD0C0; &#xC720;&#xBC1C; &#xC131;&#xACFC; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xCE68;&#xC785;&#xC744; &#xAC15;&#xC870; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Pin1 &#xBCC0;&#xD615; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xBC0F; &#xCE68;&#xB7B5;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Factor de crecimiento transformante-beta (TGF-beta) regula una amplia variedad de actividades biol&oacute;gicas. Se induce respuestas de crecimiento-inhibidoras potentes en las c&eacute;lulas normales pero promueve la migraci&oacute;n y la invasi&oacute;n de las c&eacute;lulas cancerosas. Smads median las respuestas de TGF-beta. Uni&oacute;n de TGF-beta a los receptores de superficie celular conduce a la fosforilaci&oacute;n de Smad2/3 en su terminal C, as&iacute; como en la regi&oacute;n de vinculador ricos en prolina. Los sitios de fosforilaci&oacute;n de serina/treonina en la regi&oacute;n de vinculador son seguidos por el residuo de la prolina. PIN1, un peptidyl-prolyl cis/trans isomerasa, reconoce fosforiladas motivos de serina/treonina-prolina. Aqu&iacute; mostramos que Smad2/3 interacciona con Pin1 en una forma dependiente de TGF-beta. Adem&aacute;s, mostramos que el motivo de 179-prolina treonina fosforilada en la regi&oacute;n de vinculador Smad3 es el sitio de Uni&oacute;n principales para Pin1. Aunque el factor de crecimiento epid&eacute;rmico tambi&eacute;n induce la fosforilaci&oacute;n de la treonina 179 y otros residuos en la regi&oacute;n de vinculador Smad3 igual a TGF-beta, Pin1 es incapaz de unirse a la Smad3 estimulada por el factor de crecimiento epid&eacute;rmico. Nuevo an&aacute;lisis sugiere que la fosforilaci&oacute;n de Smad3 en el C terminal es necesario para la interacci&oacute;n con el pin 1. Agotamiento de Pin1 por peque&ntilde;a horquilla RNA no afect&oacute; significativamente respuestas inhibitorias de crecimiento TGF-beta-inducido y un n&uacute;mero de genes diana de TGF-beta/Smad analizados. En cambio, ca&iacute;da de Pin1 en c&eacute;lulas humanas de c&aacute;ncer de pr&oacute;stata PC3 fuertemente hab&iacute;a inhibida invasi&oacute;n y migraci&oacute;n mediada por TGF-beta. Por consiguiente, inducci&oacute;n de TGF-beta de N-cadherina, que desempe&ntilde;a un papel importante en la migraci&oacute;n y la invasi&oacute;n, se reduce notablemente cuando se agota la Pin1 en c&eacute;lulas PC3. Porque Pin1 se sobreexpresa en muchos tipos de c&aacute;ncer, nuestros resultados destacan la importancia de Pin1 en migraci&oacute;n inducida por el TGF-beta y la invasi&oacute;n de las c&eacute;lulas cancerosas.

Article	Year
Repression of Smad transcriptional activity by PIASy, an inhibitor of activated STAT. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America\| PubMed ID: 12904571	2003
Activation of Smad transcriptional activity by protein inhibitor of activated STAT3 (PIAS3). Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America\| PubMed ID: 14691252	2004
相扑改性 Smad4 转录活性的镇压。 The Biochemical journal\| PubMed ID: 14750902	2004
Cyclin-dependent kinases regulate the antiproliferative function of Smads. Nature\| PubMed ID: 15241418	2004
The Smad3 linker region contains a transcriptional activation domain. The Biochemical journal\| PubMed ID: 15588252	2005
Identification and characterization of ERK MAP kinase phosphorylation sites in Smad3. Biochemistry\| PubMed ID: 16156666	2005
Analysis of Saccharomyces cerevisiae null allele strains identifies a larger role for DNA damage versus oxidative stress pathways in growth inhibition by selenium. Molecular nutrition & food research\| PubMed ID: 18496816	2008
Genome-wide screen of Saccharomyces cerevisiae null allele strains identifies genes involved in selenomethionine resistance. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America\| PubMed ID: 19004804	2008
Transforming growth factor-{beta}-inducible phosphorylation of Smad3. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 19218245	2009
Pin1 promotes transforming growth factor-beta-induced migration and invasion. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 19920136	2010

Dongming He

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