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Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts

Specification of the trophectoderm is one of the earliest differentiation events of mammalian development. The trophoblast lineage derived from the ...

University of Rochester

&#x4E00;&#x6D3E;&#x80E1;&#x8A00;&#x4ECB;&#x5BFC; mRNA &#x8870;&#x53D8; &#xFF08;NMD&#xFF09; &#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; Upf1&#x3001; &#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E; RNA &#x7684; ATPase &#x548C; 5&#39;-&#x5230;-3&#39; &#x89E3;&#x65CB;&#x9176;&#x3002;Upf1 &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x662F;&#x7531; Smg1&#x3001; &#x808C;&#x9187;&#x78F7;&#x8102; 3-&#x6FC0;&#x9176;&#x76F8;&#x5173;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C06;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x7528; hSmg5/7a&#xFF0C;&#x4F53;&#x73B0;&#x4E8E;&#x79C0;&#x4E3D;&#x9690;&#x6746;&#x7EBF;&#x866B; NMD &#x56E0;&#x7D20; CeSMG5 &#x548C; CeSMG7 &#x7684;&#x76F8;&#x4F3C;&#x6027;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4E5F;&#x662F;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x7EBF;&#x866B; NMD &#x56E0;&#x7D20;&#x7684;&#x4E24;&#x79CD;&#x679C;&#x8747;&#x679C;&#x8747;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;hSmg5/7a &#x4E2D;&#x78F7;&#x7684; Upf1 &#x51FD;&#x6570;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;hSmg5/7a copurifies &#x4E0E; Upf1&#x3001; Upf2&#x3001; Upf3X&#x3001; Smg1&#x3001; &#x50AC;&#x5316;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x9176; 2A&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x8868;&#x660E; Upf2&#xFF0C;&#x6240;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x56FD;&#x5BB6;&#x5BFC;&#x5F39;&#x9632;&#x5FA1;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x53E6;&#x4E00;&#x4E2A;&#x56E0;&#x7D20;&#x662F;&#x78F7;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;hSmg5/7a &#x4E0D;&#x8D77;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684; Upf2 &#x8131;&#x78F7;&#x4E2D;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x5230; Upf1&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; Upf2&#xFF0C;hSmg5/7a &#x76EE;&#x6807;&#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x9176; 2A&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x5370;&#x8FF9;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;hSmg5/7a HEK293T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x5927;&#x591A;&#x662F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x3002;

&#x8868;&#x5F81;&#x4EBA;&#x7C7B; Smg5/7a&#xFF1A; &#x86CB;&#x767D;&#x4E0E; SMG5 &#x548C; SMG7&#xFF0C;&#x5176;&#x529F;&#x80FD;&#x7684; Upf1 &#x8131;&#x6746;&#x7EBF;&#x866B;&#x7684;&#x76F8;&#x4F3C;&#x4E4B;&#x5904;&#x3002;

Nonsense-mediated mRNA decay (NMD) in mammalian cells depends on phosphorylation of Upf1, an RNA-dependent ATPase and 5'-to-3' helicase. Upf1 phosphorylation is mediated by Smg1, a phosphoinositol 3-kinase-related protein kinase. Here, we describe a human protein, which we call hSmg5/7a, that manifests similarity to Caenorhabditis elegans NMD factors CeSMG5 and CeSMG7, as well as two Drosophila melanogaster proteins that are also similar to the C. elegans NMD factors. Results indicate that hSmg5/7a functions in the dephosphorylation of Upf1. Furthermore, hSmg5/7a copurifies with Upf1, Upf2, Upf3X, Smg1, and the catalytic subunit of protein phosphatase 2A. We also demonstrate that Upf2, another factor involved in NMD, is a phosphoprotein. However, hSmg5/7a plays no role in the dephosphorylation of Upf2. These data indicate that hSmg5/7a targets protein phosphatase 2A to Upf1 but not Upf2. Results of Western blotting reveal that hSmg5/7a is mostly cytoplasmic in HEK293T cells.

Characterization of human Smg5/7a: a protein with similarities to Caenorhabditis elegans SMG5 and SMG7 that functions in the dephosphorylation of Upf1.

D&eacute;sint&eacute;gration de mRNA induite par l&#39;absurde (NMD) dans les cellules de mammif&egrave;res d&eacute;pend de la phosphorylation de Upf1, ARN-d&eacute;pendante ATPase et 5&#39;-3&#39; h&eacute;licase. Upf1 phosphorylation est m&eacute;di&eacute;e par Smg1, une phosphoinositol 3-kinase-related prot&eacute;ine kinase. Nous d&eacute;crivons ici une prot&eacute;ine humaine, que nous appelons hSmg5/7 a, qui se manifeste de similitude aux facteurs de NMD Caenorhabditis elegans CeSMG5 et CeSMG7, ainsi que deux prot&eacute;ines melanogaster de drosophile qui ressemblent aussi &agrave; des facteurs NMD de c. elegans. Les r&eacute;sultats indiquent que hSmg5/7 a les fonctions dans la d&eacute;phosphorylation du Upf1. En outre, hSmg5/7 a copurifies avec Upf1, Upf2, Upf3X, Smg1 et la sous-unit&eacute; catalytique de la prot&eacute;ine phosphatase 2 a. Nous d&eacute;montrons &eacute;galement que Upf2, un autre facteur impliqu&eacute; dans la NMD, est une phosphoprot&eacute;ine. Cependant, hSmg5/7 a ne joue aucun r&ocirc;le dans la d&eacute;phosphorylation du Upf2. Ces donn&eacute;es indiquent que les cibles hSmg5/7 a prot&eacute;ine phosphatase 2 a &agrave; Upf1 mais pas Upf2. R&eacute;sultats de l&#39;immunobuvardage r&eacute;v&egrave;lent que hSmg5/7 a est le plus souvent cytoplasmique dans les cellules HEK293T.

Caract&eacute;risation de l&#39;humaine Smg5/7 a: une prot&eacute;ine ayant des similitudes avec le Caenorhabditis elegans SMG5 et SMG7 qui fonctionne dans la d&eacute;phosphorylation du Upf1.

Charakterisierung humaner Smg5/7a: ein Protein mit &#xC4;hnlichkeiten zu Caenorhabditis elegans SMG5 und SMG7, dass Funktionen in der Dephosphorylierung von UPF1.

Sciocchezze-mediata la decadenza di mRNA (NMD) nelle cellule dei mammiferi dipende dalla fosforilazione di Upf1, un RNA-dipendente ATPasi e 5&#39;--a 3&#39; elicasi. Upf1 fosforilazione &egrave; mediata da Smg1, una phosphoinositol 3-chinasi-related protein chinasi. Qui, descriviamo una proteina umana, che noi chiamiamo hSmg5/7a, che manifesta la somiglianza di Caenorhabditis elegans fattori NMD CeSMG5 e CeSMG7, cos&igrave; come le due proteine di melanogaster della drosofila che sono simili ai fattori NMD c. elegans. I risultati indicano che hSmg5/7a funzioni nella defosforilazione del Upf1. Inoltre, hSmg5/7a copurifies con Upf1, Upf2, Upf3X, Smg1 e la subunit&agrave; catalitica della proteina fosfatasi 2A. Abbiamo anche dimostrare che Upf2, un altro fattore coinvolto nella NMD, &egrave; una fosfoproteina. Tuttavia, hSmg5/7a non ha alcun ruolo nella defosforilazione del Upf2. Questi dati indicano che gli obiettivi hSmg5/7a proteina fosfatasi 2A a Upf1 ma non Upf2. Risultati di macchiarsi occidentale rivelano che hSmg5/7a &egrave; prevalentemente citoplasmatica di HEK293T cellule.

Caratterizzazione del Smg5 umano/7a: una proteina con le somiglianze a Caenorhabditis elegans SMG5 e SMG7 che funzioni nella defosforilazione del Upf1.

&#x30CA;&#x30F3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F; mrna (NMD) &#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; Upf1&#x3001;RNA &#x4F9D;&#x5B58; ATPase &#x3068; 5&#39;--&#x306B; 3&#39; &#x30D8;&#x30EA;&#x30AB;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Upf1 &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316; phosphoinositol 3 &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x95A2;&#x9023;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; Smg1 &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;CeSMG5 &#x304A;&#x3088;&#x3073; CeSMG7 &#x578B;&#x7DDA;&#x866B;&#x7DDA;&#x866B; NMD &#x8981;&#x56E0;&#x3078;&#x306E;&#x985E;&#x4F3C;&#x6027;&#x3092;&#x30DE;&#x30CB;&#x30D5;&#x30A7;&#x30B9;&#x30C8;&#x3001;hSmg5/7a &#x3092;&#x547C;&#x3073;&#x51FA;&#x3059;&#x4EBA;&#x9593;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3082;&#x7DDA;&#x866B; NMD &#x8981;&#x56E0;&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8; &#x30AD;&#x30A4;&#x30ED;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x305D;&#x306E; hSmg5/7a Upf1 &#x306E;&#x8131;&#x71D0;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;hSmg5/7a Upf1&#x3001;Upf2&#x3001;Upf3X&#x3001;Smg1&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC; 2 a &#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; copurifies &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;Upf2&#x3001;NMD &#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x5225;&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x306F;&#x30EA;&#x30F3;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;hSmg5/7a &#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066; Upf2 &#x306E;&#x8131;&#x71D0;&#x9178;&#x5316;&#x3067;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E; hSmg5/7a &#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC; 2 a Upf1 &#x304C;&#x306A;&#x3044; Upf2 &#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A6;&#x30A7;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E; hSmg5/7a &#x4E3B; hek293t &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x3067;&#x3059;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3002;

&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; Smg5/7a &#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;: &#x7DDA;&#x866B; SMG5 &#x3068; Upf1 &#x306E;&#x8131;&#x71D0;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD; SMG7 &#x306B;&#x985E;&#x4F3C;&#x6027;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3002;

&#xB9D0;&#xB3C4; &#xC911;&#xC7AC; mRNA &#xAC10;&#xD1F4; (NMD) &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; Upf1, RNA &#xC885;&#xC18D; ATPase &#xBC0F; 5&#39;-3&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#39; helicase. Upf1 &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB294; Smg1, phosphoinositol 3 &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xAD00;&#xB828; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; C. elegans NMD &#xC694;&#xC18C;&#xC640; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB610;&#xD55C; &#xB450; Drosophila melanogaster &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; &#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC804;&#xD654; hSmg5/7a &#xC720;&#xC0AC;&#xC131; Caenorhabditis elegans NMD &#xC694;&#xC778; CeSMG5 &#xBC0F; Cesmg7&#xC5D0; &#xB098;&#xD0C0;&#xB098;&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; hSmg5/7a Upf1 dephosphorylation&#xC758; &#xD568;&#xC218;. &#xB610;&#xD55C;, hSmg5/7a copurifies Upf1, Upf2, Upf3X, Smg1, &#xBC0F; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; 2a&#xC758; &#xCD09;&#xB9E4; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC640; &#xD568;&#xAED8;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; Upf2, NMD&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xB610; &#xB2E4;&#xB978; &#xC694;&#xC18C;&#xB294; phosphoprotein&#xC740; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, hSmg5/7a Upf2 dephosphorylation&#xC5D0; &#xC544;&#xBB34; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; Upf1 &#xD558;&#xC9C0; upf2&#xC744; hSmg5/7a &#xB300;&#xC0C1; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; 2a&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC11C;&#xC591; blotting&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; hSmg5/7a HEK293T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC740; &#xACF5;&#xAC1C;.

&#xC778;&#xAC04; Smg5/7a&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;: Caenorhabditis elegans smg5&#xC640; upf1&#xC758; dephosphorylation&#xC5D0;&#xC11C; &#xC791;&#xB3D9; &#xD558;&#xB294; smg7&#xACFC;&#xC758; &#xC720;&#xC0AC;&#xC131;&#xC774; &#xC788;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;.

Decaimiento mRNA absurdo-mediado (NMD) en c&eacute;lulas de mam&iacute;feros depende de fosforilaci&oacute;n de Upf1, una ATPasa dependiente de RNA y 5&#39;-a-3&#39; helicasa. Upf1 fosforilaci&oacute;n est&aacute; mediada por Smg1, una Fosfoinositol 3-quinasa-relacionada de la prote&iacute;na quinasa. Aqu&iacute;, describimos una prote&iacute;na humana, que llamamos hSmg5/7a, que se manifiesta similitud con factores NMD elegans de Caenorhabditis CeSMG5 y CeSMG7, as&iacute; como dos prote&iacute;nas de melanogaster del Drosophila que tambi&eacute;n son similares a los factores NMD C. elegans. Los resultados indican que hSmg5/7a funciones en la desfosforilaci&oacute;n de Upf1. Adem&aacute;s, hSmg5/7a copurifies con Upf1, Upf2, Upf3X, Smg1 y la subunidad catal&iacute;tica de la prote&iacute;na fosfatasa 2A. Tambi&eacute;n demostramos que Upf2, otro factor implicado en NMD, es una fosfoprote&iacute;na. Sin embargo, hSmg5/7a juega ning&uacute;n papel en la desfosforilaci&oacute;n de Upf2. Estos datos indican metas hSmg5/7a prote&iacute;na fosfatasa 2A Upf1 pero no Upf2. Resultados de Western Blot revelan que hsmg5/7a es sobre todo citoplasm&aacute;ticos en c&eacute;lulas HEK293T.

Caracterizaci&oacute;n de Smg5 humano/7a: una prote&iacute;na con semejanzas a Caenorhabditis elegans, SMG5 y SMG7 que funciona en la desfosforilaci&oacute;n de Upf1.

15 &#x65B0;&#x53CC;&#x82EF;&#x5E9A;&#x916E;&#x662F;&#x5408;&#x6210;&#x548C;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x5BF9;&#x96C4;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53; (AR) &#x62EE;&#x6297;&#x4F5C;&#x7528;-&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x8BB0;&#x8005;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5F55;&#x4F7F;&#x7528; DU145&#xFF0C;PC-3 &#x548C; LNCaP &#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x5316;&#x5408;&#x7269; 5alpha-&#x777E;&#x916E; (DHT) &#x4E2D;&#x663E;&#x793A;&#x6D3B;&#x52A8;-DU145 &#x7EC6;&#x80DE;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x8BB0;&#x8005;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x68C0;&#x6D4B;&#x8F6C;&#x67D3;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x6C29;&#x6C14;&#x4FDD;&#x62A4;&#x5341;&#x4E2A;&#x5316;&#x5408;&#x7269; (5&#x3001; 8&#x3001; 10&#x3001; 14-15 &#x548C; 18-22) &#x4E0E;&#x7F9F;&#x57FA;&#x6C1F;&#x4ED6;&#x80FA; &#xFF08;HF&#xFF09;&#xFF0C;&#x76EE;&#x524D;&#x53EF;&#x7528;&#x4E8E;&#x6CBB;&#x7597;&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x764C;&#x7684; anti-androgen &#x88AB;&#x6362;&#x7B97;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x9664;&#x4E86;&#x5316;&#x5408;&#x7269; 5 &#x548C; 10&#xFF0C;&#x6CA1;&#x6709;&#x7ECF;&#x8FC7;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x7684;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x662F;&#x663E;&#x8457;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x8870;&#x51CF; DHT &#x8BF1;&#x5BFC;&#x8BB0;&#x8005;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5728; LNCaP &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x542B;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x7A81;&#x53D8;&#x4EBA;&#x624D;&#x57F9;&#x8BAD;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x3002;

&#x6297;&#x80BF;&#x7624;&#x836F;&#x7269; 222&#x3002;&#x65B0;&#x53CC;&#x82EF;&#x5E9A;&#x916E;&#x7684;&#x5408;&#x6210;&#x548C; anti-androgen &#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;

Fifteen new diarylheptanoids were synthesized and evaluated for antagonistic activity against androgen receptor (AR)-mediated reporter gene transcription using DU145, PC-3, and LNCaP prostate cancer cell lines. Most compounds showed activity in a 5alpha-dihydrotestosterone (DHT)-induced reporter gene expression assay in DU145 cells transfected with wild-type AR. Ten compounds (5, 8, 10, 14-15, and 18-22) were equipotent with hydroxyflutamide (HF), the anti-androgen currently available for the treatment of prostate cancer. However, except for compounds 5 and 10, none of the tested compounds was significantly effective in attenuating DHT-induced reporter gene expression in LNCaP cells, which contain endogenous mutant AR.

Antitumor agents 222. Synthesis and anti-androgen activity of new diarylheptanoids.

Diarylheptanoids nouveau quinze ont &eacute;t&eacute; synth&eacute;tis&eacute;s et &eacute;valu&eacute;s pour une activit&eacute; antagoniste contre le r&eacute;cepteur des androg&egrave;nes (AR)-m&eacute;di&eacute;e par la transcription du g&egrave;ne de journaliste &agrave; l&#39;aide de DU145, PC-3 et lign&eacute;es de cellules de cancer de la prostate de LNCaP. La plupart des compos&eacute;s ont montr&eacute; une activit&eacute; dans une 5alpha-dihydrotestost&eacute;rone (DHT)-analyse d&#39;expression de g&egrave;ne reporter induite dans les cellules DU145 transfect&eacute;es avec des compos&eacute;s de dix AR. sauvage (5, 8, 10, 14-15 et 18-22) ont la m&ecirc;me puissance avec hydroxyflutamide (HF), l&#39;antiandrog&egrave;ne actuellement disponible pour le traitement du cancer de la prostate. Toutefois, &agrave; l&#39;exception des compos&eacute;s 5 et 10, aucun des compos&eacute;s test&eacute;s &eacute;tait significativement efficace pour att&eacute;nuer l&#39;expression du g&egrave;ne rapporteur induite par la DHT dans des cellules LNCaP qui contiennent endog&egrave;ne mutant AR.

Agents antitumoraux 222. Activit&eacute; de synth&egrave;se et antiandrog&eacute;nique de nouveaux diarylheptanoids.

Antitumormittel 222. Synthese und anti-androgene Aktivit&#xE4;t von neuen Diarylheptanoiden.

Quindici nuovi diarylheptanoids sono stati sintetizzati e valutati per attivit&agrave; antagonista contro il recettore degli androgeni (AR)-mediata trascrizione del gene reporter utilizzando DU145, PC-3 e linee di cellule di cancro alla prostata LNCaP. La maggior parte dei composti hanno mostrato attivit&agrave; in un 5 &alpha;-diidrotestosterone (DHT)-analisi di espressione di gene reporter indotta nelle cellule DU145 transfected con composti di dieci AR. wild-type (5, 8, 10, 14-15 e 18-22) sono equipotenti con hydroxyflutamide (HF), il anti-androgen attualmente disponibili per il trattamento del cancro della prostata. Tuttavia, fatta eccezione per i composti di 5 e 10, nessuno dei composti testati era notevolmente efficacia nell&#39;attenuare l&#39;espressione del gene reporter DHT-indotta in cellule LNCaP, che contengono endogeno mutante AR.

Agenti antitumorali 222. Attivit&agrave; di sintesi e anti-androgen di nuovo diarylheptanoids.

15 &#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044; diarylheptanoids &#x5408;&#x6210;&#x3057;&#x3001;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (AR) &#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x62EE;&#x6297;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x8A55;&#x4FA1;-DU145 &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F; PC 3 &#x3068; LNCaP &#x524D;&#x7ACB;&#x817A;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x3002;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306F;&#x3001;5 alpha &#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30F3; &#xFF08;DHT&#xFF09; &#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;-&#x8A98;&#x5C0E;&#x5F0F;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B8;&#x30FC;&#x30F3;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4; DU145 &#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5C0E;&#x5165; (5, 8, 10, 14-15 &#x304A;&#x3088;&#x3073; 18-22) &#x306E;&#x6301;&#x3064;&#x5316;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7740; 10 equipotent hydroxyflutamide (HF)&#x3001;&#x524D;&#x7ACB;&#x817A;&#x304C;&#x3093;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x73FE;&#x5728;&#x5229;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x6297;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30F3;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x3092;&#x9664;&#x3044;&#x3066; 5 &#x304A;&#x3088;&#x3073; 10&#x3001;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x6E08;&#x307F;&#x306E;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x3069;&#x308C;&#x3082;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x5909;&#x7570;&#x7740;&#x3092;&#x542B;&#x3080; LNCaP &#x7D30;&#x80DE;&#x306E; DHT &#x8A98;&#x8D77;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x6E1B;&#x8870;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x3060;&#x3063;&#x305F;

&#x6297;&#x816B;&#x760D;&#x5264; 222&#x3002;&#x65B0;&#x3057;&#x3044; diarylheptanoids &#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x3068;&#x6297;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;

15 &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; diarylheptanoids &#xD569;&#xC131; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xC548; &#xB4DC;&#xB85C; &#xAC90; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (&#xC544;&#xCE78;&#xC18C; &#xC8FC;)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBD84;&#xC5F4; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD3C9;&#xAC00;-&#xC911;&#xC7AC; &#xB9AC;&#xD3EC;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC0AC; DU145&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; PC-3, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; LNCaP &#xC804;&#xB9BD;&#xC120; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC; &#xB77C;&#xC778;. &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; 5alpha dihydrotestosterone (DHT)&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xD588;&#xB2E4;-DU145 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xB9AC;&#xD3EC;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC2DD; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xD398; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xC544;&#xCE78;&#xC18C; 10 &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; (5, 8, 10, 14-15, 18-22)&#xACFC; hydroxyflutamide (HF), &#xC804;&#xB9BD;&#xC120; &#xC554; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD604;&#xC7AC; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; anti-androgen&#xC640; equipotent &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; 5 &#xBC0F; 10 &#xC81C;&#xC678;&#xD55C; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xB41C; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xC544;&#xBB34;&#xB3C4; DHT &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xB9AC;&#xD3EC;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604; LNCaP &#xC138;&#xD3EC; &#xB0B4; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC544;&#xCE78;&#xC18C; &#xD3EC;&#xD568;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC1E0; &#xD6A8;&#xACFC;&#xAC00; &#xD06C;&#xAC8C;

Antitumor &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8; 222&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; diarylheptanoids&#xC758; &#xD569;&#xC131; &#xBC0F; anti-androgen &#xD65C;&#xB3D9;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Quince nuevas diarylheptanoids se sintetizan y evaluaron para actividad antagonista contra el receptor de andr&oacute;genos (AR)-mediada por transcripci&oacute;n de gen reportero usando DU145, PC-3 y LNCaP las l&iacute;neas celulares de c&aacute;ncer de pr&oacute;stata. Mayor&iacute;a de los compuestos mostraron actividad en un 5-dihidrotestosterona (DHT)-ensayo de expresi&oacute;n gen&eacute;tica inducida reportero en DU145 c&eacute;lulas transfectadas con compuestos AR. diez de tipo salvaje (5, 8, 10, 14 y 15 y 18-22) fueron equipotente con hydroxyflutamide (HF), el antiandr&oacute;geno actualmente disponible para el tratamiento del c&aacute;ncer de pr&oacute;stata. Sin embargo, excepto los compuestos 5 y 10, ninguno de los compuestos probados fue significativamente m&aacute;s efectivo para atenuar la expresi&oacute;n del gen reportero DHT-inducida en las c&eacute;lulas LNCaP, que contienen a end&oacute;geno mutante AR.

Agentes antitumorales 222. Actividad de s&iacute;ntesis y antiandr&oacute;geno de nueva diarylheptanoids.

&#x4ECE;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x7684;&#x771F;&#x6838;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x8D77;&#x59CB;&#x56E0;&#x5B50; &#xFF08;eIF&#xFF09; 4E &#x7ED1;&#x5B9A;&#x6D3E;&#x751F;&#x7684;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x7EC6;&#x80DE;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684; mRNA&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x5E9F;&#x8BDD;&#x4ECB;&#x5BFC; mRNA &#x8870;&#x53D8; &#xFF08;NMD&#xFF09; &#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x8BE5;&#x7AE0;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; (CBP) 80 &#x7ED1;&#x5B9A; mRNA &#x662F; eIF4E &#x7ED1;&#x5B9A; mRNA &#x7684;&#x524D;&#x594F;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x5148;&#x9A71;&#x8F6E;&#x671F;&#x95F4;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x5148;&#x950B;&#x5012;&#x5706;&#x89D2;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x901A;&#x8FC7;&#x6D4B;&#x91CF;&#x56FD;&#x5BB6;&#x5BFC;&#x5F39;&#x9632;&#x5FA1;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x8BC4;&#x4F30;&#xFF0C;&#x7531;&#x4E0D;&#x53D7; 4E-BP1&#xFF0C;&#x4F17;&#x6240;&#x5468;&#x77E5;&#xFF0C;&#x7531;&#x7528;&#x4E8E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; eIF4E eIF4G &#x7ADE;&#x4E89;&#x6291;&#x5236;&#x7A33;&#x6001;&#x7684;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x81F3;&#x5C11;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x7684;&#x5148;&#x9A71;&#x8F6E;&#x6709;&#x522B;&#x4E8E;&#x7A33;&#x6001;&#x7684;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x3002;eIF4GI&#x3001; &#x805A; (A)-&#x7ED1;&#x5B9A;&#x86CB;&#x767D; (PABP) 1&#x3001; eIF3&#x3001; eIF4AI&#x3001; eIF2alpha coimmunopurify &#x4E0E; CBP80 &#x548C; eIF4E&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x56E0;&#x5B50;&#x529F;&#x80FD;&#x5728;&#x4E24;&#x79CD;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7684;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x3002;&#x7B26;&#x5408; PABP1 &#x548C; eIF2alpha &#x7FFB;&#x8BD1;&#x7684;&#x5148;&#x9A71;&#x8F6E;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;PABP &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x86CB;&#x767D; 2&#xFF0C;&#x5373;&#x7834;&#x574F; PABP1 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; poly(A)&#xFF0C;&#x6291;&#x5236;&#x7A33;&#x6001;&#x7684;&#x7FFB;&#x8BD1;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5904;&#x4E8E;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#x7684; eIF2alpha&#xFF0C;&#x4E5F;&#x5DF2;&#x77E5;&#x6291;&#x5236;&#x7A33;&#x6001;&#x7FFB;&#x8BD1;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x59A8;&#x788D;&#x56FD;&#x5BB6;&#x5BFC;&#x5F39;&#x9632;&#x5FA1;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;Polysome &#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#x6307;&#x793A; CBP80 &#x7ED1;&#x5B9A; mRNAs &#x88AB;&#x7FFB;&#x8BD1; eIF4E &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x540C;&#x884C;&#x76F8;&#x6BD4;&#x6548;&#x7387;&#x8F83;&#x4F4E;&#x3002;

&#x5148;&#x9A71;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x8D77;&#x59CB;&#x590D;&#x6742;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0A;&#x6709;&#x522B;&#x4E8E;&#xFF0C;&#x4F46;&#x7ED3;&#x6784;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x7A33;&#x6001;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x8D77;&#x59CB;&#x4E0E;&#x91CD;&#x53E0;&#x3002;

The bulk of cellular proteins derive from the translation of eukaryotic translation initiation factor (eIF)4E-bound mRNA. However, recent studies of nonsense-mediated mRNA decay (NMD) indicate that cap-binding protein (CBP)80-bound mRNA, which is a precursor to eIF4E-bound mRNA, can also be translated during a pioneer round of translation. Here, we report that the pioneer round, which can be assessed by measuring NMD, is not inhibited by 4E-BP1, which is known to inhibit steady-state translation by competing with eIF4G for binding to eIF4E. Therefore, at least in this way, the pioneer round of translation is distinct from steady-state translation. eIF4GI, poly(A)-binding protein (PABP)1, eIF3, eIF4AI, and eIF2alpha coimmunopurify with both CBP80 and eIF4E, which suggests that each factor functions in both modes of translation. Consistent with roles for PABP1 and eIF2alpha in the pioneer round of translation, PABP-interacting protein 2, which is known to destabilize PABP1 binding to poly(A) and inhibit steady-state translation, as well as inactive eIF2alpha, which is also known to inhibit steady-state translation, also inhibit NMD. Polysome profiles indicate that CBP80-bound mRNAs are translated less efficiently than their eIF4E-bound counterparts.

The pioneer translation initiation complex is functionally distinct from but structurally overlaps with the steady-state translation initiation complex.

La majeure partie des prot&eacute;ines cellulaires d&eacute;riv&eacute;es de la traduction de la traduction eucaryote initiation factor (FEI) 4E-limite l&#39;ARNm. Toutefois, de r&eacute;centes &eacute;tudes de d&eacute;composition de mRNA m&eacute;di&eacute;e par un non-sens (NMD) indiquent que cap-binding protein (CBP) li&eacute; aux 80 ARNm, ce qui est un pr&eacute;curseur de mRNA li&eacute; aux eIF4E, peut traduire aussi durant un round pionnier de la traduction. Nous rapportons ici que le pionnier rond, qui peut &ecirc;tre &eacute;valu&eacute; en mesurant la NMD, n&#39;est pas inhib&eacute; par 4E-BP1, qui est connu pour inhiber la traduction d&#39;&eacute;quilibre en se disputant avec eIF4G pour liaison eIF4E. Donc, au moins de cette fa&ccedil;on, la s&eacute;rie pionni&egrave;re de traduction se distingue de la traduction stationnaire. eIF4GI, poly (A)-binding prot&eacute;ine (PABP) 1, eIF3, eIF4AI et eIF2alpha coimmunopurify avec CBP80 et eIF4E, qui donne &agrave; penser que les fonctions de chaque facteur dans les deux modes de traduction. Conform&eacute;ment aux r&ocirc;les pour PABP1 et eIF2alpha dans la s&eacute;rie pionni&egrave;re de la traduction, PABP-interacting protein 2, qui est connu pour d&eacute;stabiliser PABP1 liaison au poly (a) et inhiber la traduction de l&#39;&eacute;quilibre, ainsi qu&#39;eIF2alpha inactif, qui est &eacute;galement connu pour inhiber la traduction d&#39;&eacute;quilibre, aussi inhiber NMD. Profils polysomiques indiquent que les ARNm li&eacute; aux CBP80 se traduisent moins efficacement que leurs homologues d&#39;eIF4E li&eacute;.

Le complexe d&#39;initiation de traduction pionnier est fonctionnellement distincte mais structurellement chevauche l&#39;initiation de la traduction de l&#39;&eacute;quilibre complexe.

Der Pionier &#xDC;bersetzung Initiationskomplex ist funktionell unterschiedlichen, aber strukturell von &#xDC;berschneidungen mit der Steady-State-Translations-Initiations-Komplex.

La maggior parte delle proteine cellulari derivano dalla traduzione di traduzione negli eucarioti iniziazione fattore (FEI) associato a 4E mRNA. Tuttavia, recenti studi di nonsense mediated decay mRNA (NMD) indicano che PAC-binding protein (CBP) associato a 80 mRNA, che &egrave; un precursore di mRNA associato a eIF4E, pu&ograve; anche essere tradotto durante un round pioniera della traduzione. Qui, segnaliamo che il pioniere di turno, che pu&ograve; essere valutato misurando NMD, non &egrave; inibito da 4E-BP1, che &egrave; noto per inibire la traduzione di steady-state in competizione con eIF4G per l&#39;associazione di eIF4E. Pertanto, almeno in questo modo, il turno di pioniera della traduzione &egrave; distinto dalla traduzione di steady-state. eIF4GI, poli (A)-binding protein (PABP) 1, eIF3, eIF4AI ed eIF2alpha coimmunopurify con CBP80 ed eIF4E, che suggerisce che ogni fattore funzioni in entrambe le modalit&agrave; di traduzione. Coerenti con i ruoli per PABP1 ed eIF2alpha nel turno pioniera della traduzione, proteine interagenti PABP 2, che sono noto per destabilizzare l&#39;associazione PABP1 di poli (a) e inibire la traduzione di steady-state, come pure eIF2alpha inattivo, che &egrave; anche noto per inibire la traduzione di steady-state, anche inibire NMD. Profili Polisoma indicano che mRNAs associato a CBP80 sono tradotti in modo meno efficiente rispetto ai loro omologhi eIF4E-bound.

L&#39;iniziazione di traduzione pioniere complesso &egrave; funzionalmente distinto da ma strutturalmente si sovrappone con l&#39;iniziazione di steady-state traduzione complesso.

&#x7D30;&#x80DE;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x4E00;&#x62EC;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x7FFB;&#x8A33;&#x958B;&#x59CB;&#x56E0;&#x5B50; (eIF) 4E &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3059;&#x308B; mRNA&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x30CA;&#x30F3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F; mrna (NMD) &#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (CBP) 80 &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3092;&#x793A;&#x3059; eIF4E &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9; mRNA &#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3001;mRNA &#x306F;&#x7FFB;&#x8A33;&#x306E;&#x30D1;&#x30A4;&#x30AA;&#x30CB;&#x30A2;&#x306E;&#x30E9;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C9;&#x4E2D;&#x306B;&#x7FFB;&#x8A33;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;NMD &#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3001;&#x30D1;&#x30A4;&#x30AA;&#x30CB;&#x30A2;&#x306E;&#x30E9;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C9;&#x3001;eIF4G eIF4E &#x3078;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x7AF6;&#x5408;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5B9A;&#x5E38;&#x7FFB;&#x8A33;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; 4E-BP1 &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;&#x3053;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7FFB;&#x8A33;&#x306E;&#x30D1;&#x30A4;&#x30AA;&#x30CB;&#x30A2;&#x306E;&#x30E9;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C9;&#x306F;&#x5B9A;&#x5E38;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x304B;&#x3089;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x3067;&#x3059;&#x3002;eIF4GI &#x30DD;&#x30EA; (A)-&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (PABP) 1&#x3001;eIF3&#x3001;eIF4AI&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; eIF2alpha coimmunopurify CBP80 &#x3068;&#x5404;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x3067;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B; eIF4E &#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;PABP1 &#x304A;&#x3088;&#x3073; eIF2alpha &#x7FFB;&#x8A33;&#x306E;&#x30D1;&#x30A4;&#x30AA;&#x30CB;&#x30A2;&#x306E;&#x30E9;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C9;&#x3067;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x3001;PABP1 &#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x30DD;&#x30EA; (a) &#x3092;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x5B9A;&#x5E38;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x5B9A;&#x5E38;&#x7FFB;&#x8A33;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x3067;&#x306A;&#x3044; eIF2alpha &#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; PABP &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; 2&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x963B;&#x5BB3; NMD&#x3002;&#x30DD;&#x30EA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; &#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30EB; CBP80 &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9; Mrna &#x304C;&#x305D;&#x306E; eIF4E &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3088;&#x308A;&#x80FD;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x5909;&#x63DB;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30D1;&#x30A4;&#x30AA;&#x30CB;&#x30A2;&#x7FFB;&#x8A33;&#x958B;&#x59CB;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306F;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x304B;&#x3089;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x306B;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x306E;&#x5B9A;&#x5E38;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x958B;&#x59CB;&#x3068;&#x91CD;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC9C4; &#xD575; &#xBC88;&#xC5ED; &#xAC1C;&#xC2DC; &#xC778;&#xC790; (eIF) 4E &#xBC14;&#xC6B4;&#xB4DC;&#xC758; &#xBC88;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB418;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB300;&#xB7C9; mRNA. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xB9D0;&#xB3C4; &#xC911;&#xC7AC; mRNA &#xAC10;&#xD1F4; (NMD)&#xC758; &#xCD5C;&#xADFC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB530;&#xB974;&#xBA74; &#xADF8; &#xBAA8;&#xC790; &#xC758;&#xBB34;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (CBP) 80 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD45C;&#xC2DC; mRNA eIF4E &#xBC14;&#xC778;&#xB529; Mrna&#xC5D0; &#xC804;&#xC870;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xBC88;&#xC5ED;&#xC758; &#xAC1C;&#xCC99;&#xC790; &#xB77C;&#xC6B4;&#xB4DC; &#xB3D9;&#xC548; &#xBC88;&#xC5ED; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; NMD&#xB97C; &#xCE21;&#xC815; &#xD558; &#xC5EC; &#xD3C9;&#xAC00; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;, &#xC120;&#xAD6C;&#xC790;, 4E-BP1 &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; eIF4E Eif4g&#xC640; &#xACBD;&#xC7C1; &#xD558; &#xC5EC; &#xC815;&#xC0C1; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC758; &#xBC88;&#xC5ED;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB294; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574; &#xD558;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4;&#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC88;&#xC5ED;&#xC758; &#xAC1C;&#xCC99;&#xC790; &#xB77C;&#xC6B4;&#xB4DC;&#xB294; &#xC815;&#xC0C1; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC758; &#xBC88;&#xC5ED; &#xB2E4;&#xB97C;. eIF4GI, &#xD3F4; &#xB9AC; (A)-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (PABP) 1, eIF3, eIF4AI, eIF2alpha coimmunopurify cbp80&#xC640; eIF4E, &#xAC01; &#xC694;&#xC18C; &#xBC88;&#xC5ED;&#xC758; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC791;&#xB3D9; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC744; &#xC554;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;. PABP1 &#xBC0F; eIF2alpha &#xBC88;&#xC5ED;&#xC758; &#xAC1C;&#xCC99;&#xC790; &#xB77C;&#xC6B4;&#xB4DC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5ED;&#xD560;&#xACFC; &#xC77C;&#xCE58;, PABP &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 2, PABP1 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB9CE;&#xC740;&#xB97C; &#xBD88;&#xC548;&#xC815; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558; &#xC5EC; &#xC815;&#xC0C1; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC758; &#xBC88;&#xC5ED; &#xC5B5;&#xC81C; &#xB610;&#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838;, &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; Eif2alpha&#xB85C; &#xC815;&#xC0C1; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC758; &#xBC88;&#xC5ED; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; NMD &#xC5B5;&#xC81C;. Polysome &#xD504;&#xB85C;&#xD544; &#xD45C;&#xC2DC; CBP80 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; mRNAs eIF4E &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB4E4; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB35C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCC0;&#xD658; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xAC1C;&#xCC99;&#xC790; &#xBC88;&#xC5ED; &#xAC1C;&#xC2DC; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xBD84; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC815;&#xC0C1; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC758; &#xBC88;&#xC5ED; &#xAC1C;&#xC2DC; &#xACB9;&#xCE69;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La mayor parte de prote&iacute;nas celulares derivan de la traducci&oacute;n de la traducci&oacute;n en eucariotas iniciaci&oacute;n factor (FEI) 4E-limite mRNA. Sin embargo, estudios recientes de decaimiento absurdo-mediado de mRNA (NMD) indican que prote&iacute;na de uni&oacute;n a cap (CBP) 80-limite mRNA, que es un precursor de ARNm de eIF4E-limite, tambi&eacute;n puede ser traducido durante una ronda pionera de la traducci&oacute;n. Aqu&iacute;, se reporta que el pionero redondo, que puede ser evaluado midiendo NMD, no es inhibido por 4E-BP1, que se sabe para inhibir la traducci&oacute;n estacionaria compitiendo con eIF4G Uni&oacute;n eIF4E. Por lo tanto, al menos de esta manera, la Ronda pionera de la traducci&oacute;n es distinta de la traducci&oacute;n de estado estacionario. eIF4GI, poli (A)-vinculante prote&iacute;nas (PABP) 1, eIF3, eIF4AI y eIF2alpha coimmunopurify con CBP80 y eIF4E, lo que sugiere que cada factor funciona en ambos modos de traducci&oacute;n. De acuerdo con papeles de PABP1 y eIF2alpha en la Ronda pionera de la traducci&oacute;n, PABP interacci&oacute;n prote&iacute;na 2, que se conoce para desestabilizar la Uni&oacute;n de PABP1 a poly(A) e inhibir la traducci&oacute;n de estado estacionario, as&iacute; como los eIF2alpha inactivos, que tambi&eacute;n se sabe para inhibir traducci&oacute;n en estado estacionario, tambi&eacute;n inhiben la NMD. Perfiles de Polisoma indican que CBP80-limite mRNAs se traducen menos eficientemente que sus contrapartes de eIF4E-limite.

La iniciaci&oacute;n de la traducci&oacute;n pionera compleja es funcionalmente distinta pero estructuralmente coincide con la iniciaci&oacute;n de la traducci&oacute;n de estado estacionario compleja.

&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#x96C6;&#x6210; Cre &#x4ECB;&#x5BFC;&#x548C;&#x56DB;&#x73AF;&#x7D20;&#x53CC;&#x8868;&#x8FBE;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x5148;&#x8FDB;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;RtTA &#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x524D;&#x9762;&#x6709;&#x4E00;&#x4E2A; loxp &#x5E8F;&#x5217;&#x91CD;&#x7EC4;&#x4E24;&#x4FA7;&#x7AD9;&#x5E8F;&#x5217;&#xFF0C;&#x63D2;&#x5165;&#x4E86; ROSA26 &#x8F68;&#x8FF9;&#x521B;&#x5EFA; R26STOPrtTA &#x5C0F;&#x9F20;&#x54C1;&#x7CFB;&#x3002;&#x5F53;&#x505C;&#x6B62;&#x5E8F;&#x5217;&#x5272;&#x53BB;&#x4E86; Cre &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4;&#x65F6;&#xFF0C;rtTA &#x88AB;&#x8868;&#x793A; Cre &#x8868;&#x793A;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x548C;&#x5176;&#x884D;&#x751F;&#x4EA7;&#x54C1;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x578B;&#x3001; &#x7EC4;&#x7EC7;&#x6216; rtTA &#x6CBF;&#x88AD;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x8868;&#x8FBE;&#x88AB;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x9002;&#x5F53;&#x7684; Cre &#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x682A;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#x643A;&#x5E26;&#x7684;&#x56DB;&#x73AF;&#x7D20;&#x54CD;&#x5E94;&#x5143;&#x7D20;&#x7684;&#x63A7;&#x5236;&#x4E0B;&#x76EE;&#x6807;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#xFF0C;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x6682;&#x65F6;&#x53D7;&#x76D0;&#x9178;&#x591A;&#x897F;&#x73AF;&#x7D20;&#x7684;&#x7BA1;&#x7406;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x666E;&#x904D;&#x7684;&#x5236;&#x5EA6;&#x662F;&#x552F;&#x4E00;&#x9002;&#x5408;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x578B;&#x65F6;&#x5C1A;&#x65F6;&#x7A7A;&#x548C;&#x6CBF;&#x88AD;&#x7279;&#x5B9A;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x53EF;&#x64CD;&#x4F5C;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x578B;&#x548C;&#x5B97;&#x65CF;&#x4E0E;&#x7075;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x5F88;&#x96BE;&#x7528;&#x5E38;&#x89C4;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5B9E;&#x73B0;&#x3002;

&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4E2D;&#x7684;&#x65F6;&#x7A7A;&#x548C;&#x6CBF;&#x88AD;&#x7279;&#x5B9A;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x72EC;&#x7279;&#x5236;&#x5EA6;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;

We have developed an advanced method for conditional gene expression in mice that integrates the Cre-mediated and tetracycline-dependent expression systems. An rtTA gene, preceded by a loxP-flanked STOP sequence, was inserted into the ROSA26 locus to create a R26STOPrtTA mouse strain. When the STOP sequence is excised by Cre-mediated recombination, the rtTA is expressed in the Cre-expressing cells and all of their derivatives. Therefore, cell type-, tissue-, or lineage-specific expression of rtTA is achieved by the use of an appropriate Cre transgenic strain. In mice also carrying a target gene under the control of the tetracycline response element, inducible expression of the target gene is temporally regulated by administration of doxycycline. Our results demonstrate that this universal system is uniquely suited for spatiotemporal and lineage-specific gene expression in an inducible fashion. Gene expression can be manipulated in specific cell types and lineages with a flexibility that is difficult to achieve with conventional methods.

Development of a unique system for spatiotemporal and lineage-specific gene expression in mice.

Nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; une m&#xE9;thode avanc&#xE9;e pour l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes chez la souris conditionnelle qui int&#xE8;gre les syst&#xE8;mes d&#x26;#39;expression de Cre-m&#xE9;diation et &#xE0; la t&#xE9;tracycline-d&#xE9;pendante. Un g&#xE8;ne rtTA, pr&#xE9;c&#xE9;d&#xE9;e par une s&#xE9;quence loxP-flanqu&#xE9; STOP, a &#xE9;t&#xE9; ins&#xE9;r&#xE9; dans le locus ROSA26 pour cr&#xE9;er une souche de souris R26STOPrtTA. Lorsque la s&#xE9;quence d&#x26;#39;arr&#xEA;t est excis&#xE9; par Cre-m&#xE9;diation recombinaison, la rtTA est exprim&#xE9; dans les cellules exprimant Cre-et tous leurs d&#xE9;riv&#xE9;s. Par cons&#xE9;quent, la cellule de type, de tissus, ou de la lign&#xE9;e expression sp&#xE9;cifique de rtTA est r&#xE9;alis&#xE9;e par l&#x26;#39;utilisation d&#x26;#39;une souche appropri&#xE9;e Cre transg&#xE9;nique. Chez des souris pr&#xE9;sentant &#xE9;galement un g&#xE8;ne cible sous le contr&#xF4;le de l&#x26;#39;&#xE9;l&#xE9;ment de r&#xE9;ponse t&#xE9;tracycline, l&#x26;#39;expression inductible du g&#xE8;ne cible est r&#xE9;gul&#xE9;e dans le temps par l&#x26;#39;administration de la doxycycline. Nos r&#xE9;sultats d&#xE9;montrent que ce syst&#xE8;me universel est particuli&#xE8;rement bien adapt&#xE9; pour l&#x26;#39;expression g&#xE9;nique spatio-temporelle et de la lign&#xE9;e sp&#xE9;cifique d&#x26;#39;une mani&#xE8;re inductible. L&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes peut &#xEA;tre manipul&#xE9; dans des types cellulaires sp&#xE9;cifiques et des lignages avec une flexibilit&#xE9; qui est difficile &#xE0; r&#xE9;aliser avec les m&#xE9;thodes conventionnelles.

D&#xE9;veloppement d&#x26;#39;un syst&#xE8;me unique pour l&#x26;#39;expression g&#xE9;nique spatio-temporelle et Lineage sp&#xE9;cifique chez la souris

Entwicklung eines einzigartigen Systems zur r&#xE4;umlich-zeitlichen und Linie-spezifische Genexpression bei M&#xE4;usen.

Abbiamo sviluppato un metodo avanzato per l&#39;espressione del gene condizionale nei topi che integra i sistemi di espressione Cre-mediata e tetraciclina-dipendente. Un gene rtTA, preceduto da una sequenza STOP loxP-fiancheggiato, fu inserito il locus ROSA26 per creare un ceppo di topo R26STOPrtTA. Quando la sequenza STOP &egrave; esaltata dalla ricombinazione mediata Cre, la rtTA &egrave; espresso in cellule che esprimono Cre e tutti i loro derivati. Pertanto, cellula tipo, tessuto- o espressione lineage-specifici di rtTA &egrave; ottenuta mediante l&#39;uso di un appropriato ceppo transgenico Cre. Nei topi anche trasportare un gene bersaglio sotto il controllo dell&#39;elemento risposta tetraciclina, inducibile espressione del gene dell&#39;obiettivo &egrave; regolato temporaneamente con la somministrazione di doxiciclina. I nostri risultati dimostrano che questo sistema universale &egrave; univocamente adatto per l&#39;espressione del gene spatiotemporal e lineage-specifici in maniera inducibile. Espressione genica pu&ograve; essere manipolato in tipi cellulari specifici e lignaggi con una flessibilit&agrave; che &egrave; difficile da raggiungere con i metodi convenzionali.

Sviluppo di un sistema unico per l&#39;espressione del gene spatiotemporal e lineage-specifici nei topi.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;Cre&#x5A92;&#x4ECB;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x767A;&#x73FE;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x7D71;&#x5408;&#x3057;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306A;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; loxP&#x90E8;&#x4F4D;&#x306B;&#x631F;&#x307E;-STOP&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306B;&#x7D9A;&#x304F;rtTA&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;R26STOPrtTA&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x7CFB;&#x7D71;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3059;&#x308B;ROSA26&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5EA7;&#x306B;&#x633F;&#x5165;&#x3057;&#x305F;&#x3002; STOP&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306F;&#x306F;&#x3001;Cre-&#x5A92;&#x4ECB;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5207;&#x308A;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x3001;rtTA&#x306F;&#x3001;Cre&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x4F53;&#x306E;&#x5168;&#x3066;&#x3067;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x578B;&#x3001;&#x7D44;&#x7E54;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;rtTA&#x306E;&#x7CFB;&#x7D71;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306A;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x9069;&#x5207;&#x306A;Cre&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x682A;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x5FDC;&#x7B54;&#x30A8;&#x30EC;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3001;&#x6A19;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x4E0B;&#x3067;&#x6A19;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306B;&#x30C9;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x6295;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x666E;&#x904D;&#x7684;&#x306A;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x304C;&#x4E00;&#x610F;&#x306B;&#x6642;&#x7A7A;&#x9593;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8A98;&#x5C0E;&#x65B9;&#x5F0F;&#x3067;&#x7CFB;&#x7D71;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x9069;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x56F0;&#x96E3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x67D4;&#x8EDF;&#x6027;&#x3092;&#x5099;&#x3048;&#x305F;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x578B;&#x3068;&#x7CFB;&#x7D71;&#x3067;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6642;&#x7A7A;&#x9593;&#x3068;&#x7CFB;&#x7D71;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x958B;&#x767A;

Cre &#xC911;&#xC7AC; &#xBC0F; &#xD56D;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC9C8; &#xC885;&#xC18D; &#xC2DD; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xD1B5;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xC950;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC870;&#xAC74;&#xBD80; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACE0;&#xAE09; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. LoxP &#xCE21;&#xBA74; &#xC911;&#xC9C0; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xC55E;&#xC5D0; rtTA &#xC720;&#xC804;&#xC790; R26STOPrtTA &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778;&#xC744; &#xB9CC;&#xB4DC;&#xB294; ROSA26 &#xB85C;&#xCEE4; &#xC2A4;&#xC5D0; &#xC0BD;&#xC785; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC911;&#xC9C0; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB294; Cre &#xC911;&#xC7AC; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; excised&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xB294; rtTA Cre &#xD45C;&#xD604; &#xC140;&#xACFC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC720;&#xB3C4;&#xCCB4;&#xC758; &#xBAA8;&#xB450;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC140; &#xD615;&#xC2DD;-, &#xC870;&#xC9C1;-&#xB610;&#xB294; Rtta&#xC758; &#xACC4;&#xBCF4; &#xD2B9;&#xC815; &#xD45C;&#xD604; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; Cre &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xBCC0;&#xD615; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C; &#xD56D;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC9C8; &#xC751;&#xB2F5; &#xC694;&#xC18C;&#xC758; &#xD1B5;&#xC81C; &#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC6B4;&#xBC18; &#xD558;&#xB294; &#xC950; &#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xD45C;&#xD604;&#xC758; temporally &#xC544;&#xBAA9;&#xC2DC;&#xC2E4;&#xB9B0;&#xACFC;&#xC758; &#xD589;&#xC815;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC785;&#xC99D;&#xC774; &#xBC94;&#xC6A9; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC740; &#xACE0;&#xC720; &#xD558; &#xAC8C; &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xD328;&#xC158;&#xC5D0; spatiotemporal &#xBC0F; &#xACC4;&#xBCF4; &#xAD00;&#xB828; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC5D0; &#xC801;&#xD569; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xBC29;&#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6B4; &#xC720;&#xC5F0;&#xC131;&#xACFC; &#xD2B9;&#xC815; &#xC140; &#xC720;&#xD615;&#xACFC; &#xACC4;&#xBCF4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC744; &#xC870;&#xC791;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; spatiotemporal &#xBC0F; &#xACC4;&#xBCF4; &#xAD00;&#xB828; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;.

Hemos desarrollado un m&#xE9;todo avanzado para la expresi&#xF3;n de genes en ratones condicionales, que integra los sistemas de expresi&#xF3;n de Cre-mediada y la tetraciclina dependiente. Un gen rtTA, precedido por un loxP-flanqueado secuencia de parada, se insert&#xF3; en el locus ROSA26 para crear una cepa de rat&#xF3;n R26STOPrtTA. Cuando la secuencia de parada se escinde por Cre mediada por recombinaci&#xF3;n, el rtTA se expresa en las c&#xE9;lulas que expresan Cre-y todos sus derivados. Por lo tanto, el tipo de c&#xE9;lulas, tejidos, o linaje expresi&#xF3;n espec&#xED;fica de rtTA se consigue mediante el uso de una cepa apropiada Cre transg&#xE9;nico. En los ratones tambi&#xE9;n llevan un gen diana bajo el control del elemento de respuesta tetraciclina, la expresi&#xF3;n inducible del gen diana est&#xE1; regulado temporalmente por la administraci&#xF3;n de doxiciclina. Nuestros resultados demuestran que este sistema universal es especialmente adecuado para la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica espacio-temporal y el linaje espec&#xED;fico de una forma inducible. La expresi&#xF3;n g&#xE9;nica puede ser manipulado en determinados tipos de c&#xE9;lulas y linajes con una flexibilidad que es dif&#xED;cil de lograr con los m&#xE9;todos convencionales.

Desarrollo de un Sistema &#xDA;nico de la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica espacio-temporal y el linaje espec&#xED;ficos en ratones

&#x76F8;&#x6251;&#x7279;&#x5B9A;&#x86CB;&#x767D;&#x9176; 2 (SENP2) &#x4FEE;&#x6539;&#x86CB;&#x767D;&#x53CA;&#x5176;&#x5E95;&#x7269;&#x4ECE;&#x5220;&#x9664;&#x7684;&#x76F8;&#x6251;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x76F8;&#x6251;&#x7279;&#x5B9A;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x5DF2;&#x77E5;&#x8BB8;&#x591A;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x53CD;&#x5411; sumoylation&#xFF0C;&#x5B83;&#x4EEC;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x53D1;&#x5C55;&#x548C;&#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x4ECD;&#x7136;&#x662F;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x96BE;&#x4EE5;&#x6349;&#x6478;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A; SENP2 &#x9AD8;&#x5EA6;&#x8868;&#x793A;&#x6ECB;&#x517B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6240;&#x9700;&#x7684; placentation&#x3002;SENP2 &#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4E2D;&#x7684;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x5730;&#x7684;&#x4E2D;&#x65AD;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x6240;&#x6709;&#x4E09;&#x4E2A;&#x6ECB;&#x517B;&#x5C42;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x53D1;&#x6325;&#x7740;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x7A81;&#x53D8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x865A;&#x3002;SENP2 &#x7684; G-S &#x8FC7;&#x6E21;&#x671F;&#xFF0C;&#x9700;&#x8981;&#x6709;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x590D;&#x5236;&#x5468;&#x671F;&#x4E2D;&#x6ECB;&#x517B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x548C;&#x5206;&#x5316;&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x3002;SENP2 &#x6D88;&#x878D;&#x6270;&#x4E71; p53 Mdm2 &#x901A;&#x8DEF;&#xFF0C;&#x5F71;&#x54CD;&#x6269;&#x5927;&#x7684;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6ECB;&#x517B;&#x5C42;&#x548C;&#x5176;&#x6210;&#x719F;&#x3002;&#x4F01;&#x671B; SENP2 &#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x6210;&#x53EF;&#x4EE5;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684; Mdm2 sumoylation&#x3001; &#x51CF;&#x5C11; p53 &#x6C34;&#x5E73;&#x548C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x6ECB;&#x517B;&#x5C42;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x4E0B;&#x8C03; p53 &#x7684;&#x7F13;&#x89E3; SENP2 &#x7A7A;&#x8868;&#x578B;&#x548C; p53 &#x523A;&#x6FC0;&#x6ECB;&#x517B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x548C;&#x5206;&#x5316;&#xFF0C;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x90A3;&#x4E9B; SENP2 &#x7A81;&#x53D8;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5F02;&#x5E38;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x63ED;&#x793A;&#x9057;&#x4F20;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x9014;&#x5F84;&#xFF0C;SENP2-Mdm2-p53&#xFF0C;&#x57FA;&#x7840;&#x6ECB;&#x517B;&#x6CBF;&#x88AD;&#x53D1;&#x5C55;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x7684;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x548C;&#x5185;&#x590D;&#x5236;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x76F8;&#x6251;&#x7279;&#x5B9A;&#x86CB;&#x767D;&#x9176; 2 &#x5BF9;&#x4E8E;&#x8C03;&#x8282; p53 Mdm2 &#x5728;&#x6ECB;&#x517B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x58C1;&#x9F9B;&#x548C;&#x5B97;&#x65CF;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;

SUMO-specific protease 2 (SENP2) modifies proteins by removing SUMO from its substrates. Although SUMO-specific proteases are known to reverse sumoylation in many defined systems, their importance in mammalian development and pathogenesis remains largely elusive. Here we report that SENP2 is highly expressed in trophoblast cells that are required for placentation. Targeted disruption of SENP2 in mice reveals its essential role in development of all three trophoblast layers. The mutation causes a deficiency in cell cycle progression. SENP2 has a specific role in the G-S transition, which is required for mitotic and endoreduplication cell cycles in trophoblast proliferation and differentiation, respectively. SENP2 ablation disturbs the p53-Mdm2 pathway, affecting the expansion of trophoblast progenitors and their maturation. Reintroducing SENP2 into the mutants can reduce the sumoylation of Mdm2, diminish the p53 level and promote trophoblast development. Furthermore, downregulation of p53 alleviates the SENP2-null phenotypes and stimulation of p53 causes abnormalities in trophoblast proliferation and differentiation, resembling those of the SENP2 mutants. Our data reveal a key genetic pathway, SENP2-Mdm2-p53, underlying trophoblast lineage development, suggesting its pivotal role in cell cycle progression of mitosis and endoreduplication.

SUMO-specific protease 2 is essential for modulating p53-Mdm2 in development of trophoblast stem cell niches and lineages.

SUMO-prot&#xE9;ase sp&#xE9;cifique de 2 (SENP2) modifie les prot&#xE9;ines par la suppression de SUMO ses substrats. Bien que SUMO-prot&#xE9;ases sp&#xE9;cifiques sont connus pour inverser sumoylation dans de nombreux syst&#xE8;mes d&#xE9;finis, leur importance dans le d&#xE9;veloppement des mammif&#xE8;res et la pathogen&#xE8;se reste largement insaisissable. Nous rapportons ici que SENP2 est fortement exprim&#xE9;e dans les cellules du trophoblaste qui sont n&#xE9;cessaires pour la placentation. Perturbation cibl&#xE9;e des SENP2 chez la souris r&#xE9;v&#xE8;le son r&#xF4;le essentiel dans le d&#xE9;veloppement de tous les trois couches trophoblastiques. La mutation provoque une d&#xE9;ficience dans la progression du cycle cellulaire. SENP2 a un r&#xF4;le sp&#xE9;cifique dans la transition GS, qui est n&#xE9;cessaire pour mitotique et cycles cellulaires dans la prolif&#xE9;ration du trophoblaste endor&#xE9;duplication et la diff&#xE9;renciation, respectivement. SENP2 ablation perturbe la voie p53-MDM2, affectant l&#x26;#39;expansion des prog&#xE9;niteurs trophoblastiques et leur maturation. SENP2 r&#xE9;introduire dans les mutants peuvent r&#xE9;duire la sumoylation de Mdm2, diminuer le niveau de p53 et de promouvoir le d&#xE9;veloppement du trophoblaste. En outre, la r&#xE9;gulation n&#xE9;gative de p53 soulage les ph&#xE9;notypes SENP2-nulles et la stimulation de la prot&#xE9;ine p53 provoque des anomalies dans la prolif&#xE9;ration et la diff&#xE9;renciation du trophoblaste, ressemblant &#xE0; celles des mutants SENP2. Nos donn&#xE9;es r&#xE9;v&#xE8;lent une voie g&#xE9;n&#xE9;tique cl&#xE9;, SENP2-Mdm2-p53, sous-jacent au d&#xE9;veloppement lign&#xE9;e trophoblaste, ce qui sugg&#xE8;re son r&#xF4;le central dans la progression du cycle cellulaire de la mitose et endor&#xE9;duplication.

SUMO-sp&#xE9;cifique prot&#xE9;ase 2 est essentiel pour moduler p53-MDM2 dans le d&#xE9;veloppement des niches de cellules souches trophoblastiques et des lignages

SUMO-spezifische Protease 2 (SENP2) &auml;ndert Proteine durch Entfernen von SUMO aus ihrer Substrate. Obwohl SUMO-spezifische Proteasen bekannt sind, Sumoylation in vielen definierten Systemen r&uuml;ckg&auml;ngig zu machen, bleibt ihre Bedeutung in der S&auml;ugetier-Entwicklung und Pathogenese weitgehend tr&uuml;gerisch. Hier berichten wir, dass SENP2 hoch in den Trophoblast Zellen ausgedr&uuml;ckt wird, die f&uuml;r manchen erforderlich sind. Gezielte St&ouml;rung des SENP2 in den M&auml;usen zeigt seine wesentliche Rolle bei der Entwicklung aller drei Trophoblast-Schichten. Die Mutation verursacht einen Mangel in Zellzyklusprogression. SENP2 hat eine besondere Rolle in der G-S-&Uuml;bergang, der f&uuml;r erforderlich ist mitotische und Endoreduplikation Zelle Zyklen in Trophoblast Proliferation und Differenzierung, beziehungsweise. SENP2 Ablation st&ouml;rt die p53-Mdm2-Pathway, Auswirkungen auf die Ausweitung der Trophoblast Vorl&auml;uferzellen und ihrer Reifung. Wiedereinf&uuml;hrung der SENP2 in die Mutanten kann reduzieren die Sumoylation von Mdm2, die p53-Ebene zu verringern und Trophoblast Entwicklung f&ouml;rdern. Dar&uuml;ber hinaus Heraufregulation von p53 vermindert die SENP2-Null-Ph&auml;notypen und Stimulation von p53 verursacht Fehlbildungen in Trophoblast Proliferation und Differenzierung, &auml;hnlich wie diejenigen der SENP2-Mutanten. Unsere Daten zeigen eine wichtige genetische Weg SENP2-Mdm2-p53, Trophoblast &Uuml;bertragungslinie Entwicklung zugrunde, was seine Schl&uuml;sselrolle beim Zellzyklusprogression Mitose und Endoreduplikation.

SUMO-spezifische Protease 2 unbedingt modulierenden p53-Mdm2 in Entwicklung von Trophoblast Stammzelle Nischen und Linien.

SUMO specifiche proteasi 2 (SENP2) modifica le proteine rimuovendo SUMO da suoi substrati. Sebbene le proteasi specifiche SUMO sono noti per invertire sumoylation in molti sistemi definiti, loro importanza nello sviluppo dei mammiferi e patogenesi rimane in gran parte sfuggente. Qui riportiamo che SENP2 &egrave; altamente espresso nelle cellule del trofoblasto che sono richieste per placentazione. Perturbazione mirati di SENP2 nei topi rivela il ruolo essenziale nello sviluppo di tutti i tre strati del trofoblasto. La mutazione provoca un deficit nella progressione del ciclo cellulare. SENP2 ha un ruolo specifico nella transizione G-S, che &egrave; richiesto per mitotica ed endoreduplication cella cicli nel trofoblasto proliferazione e differenziazione, rispettivamente. SENP2 ablazione disturba il pathway di p53-Mdm2, che interessano l&#39;espansione di progenitori del trofoblasto e la loro maturazione. Reintroducendo SENP2 in mutanti pu&ograve; ridurre il sumoylation di Mdm2, diminuire il livello di p53 e promuovere lo sviluppo del trofoblasto. Inoltre, downregulation di p53 allevia i fenotipi SENP2 null e stimolazione della p53 provoca anomalie nel trofoblasto proliferazione e differenziazione, simili a quelli dei mutanti SENP2. I nostri dati rivelano un percorso chiave genetico, SENP2-Mdm2-p53, sottostante lo sviluppo di lignaggio trofoblasto, suggerendo il suo ruolo fondamentale nella progressione del ciclo cellulare mitosi e endoreduplication.

SUMO specifiche proteasi 2 sono essenziale per modulante p53-Mdm2 in sviluppo di trophoblast cellule staminali nicchie e lignaggi.

SUMO&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;2&#xFF08;SENP2&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x57FA;&#x677F;&#x304B;&#x3089;SUMO&#x3092;&#x9664;&#x53BB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; SUMO&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x304C;&#x591A;&#x304F;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;SUMO&#x5316;&#x3092;&#x9006;&#x306B;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x767A;&#x751F;&#x3068;&#x75C5;&#x56E0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x3068;&#x3089;&#x3048;&#x3069;&#x3053;&#x308D;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x307E;&#x307E;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;SENP2&#x304C;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x80CE;&#x76E4;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x6804;&#x990A;&#x819C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;SENP2&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x7834;&#x58CA;&#x306F;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;3&#x3064;&#x306E;&#x6804;&#x990A;&#x819C;&#x5C64;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x306E;&#x6B20;&#x4E4F;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; SENP2&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x3001;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DB;&#x30D6;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3068;&#x5206;&#x5316;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x3068;&#x6838;&#x5185;&#x500D;&#x52A0;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x308B;GS&#x9077;&#x79FB;&#x3001;&#x5185;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x62C5;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; SENP2&#x30A2;&#x30D6;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x6804;&#x990A;&#x819C;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x306E;&#x62E1;&#x5927;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3001;p53-Mdm2&#x306E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x59A8;&#x3052;&#x308B;&#x3002;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306B;&#x518D;&#x5C0E;&#x5165;SENP2&#x306F;MDM2&#x306E;SUMO&#x5316;&#x3092;&#x6E1B;&#x3089;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x3001;p53&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3068;&#x6804;&#x990A;&#x819C;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x63A8;&#x9032;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;p53&#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;SENP2&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;SENP2&#x304C;null&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3068;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DB;&#x30D6;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3068;&#x5206;&#x5316;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;p53&#x306E;&#x539F;&#x56E0;&#x7570;&#x5E38;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x3092;&#x8EFD;&#x6E1B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x6709;&#x7CF8;&#x5206;&#x88C2;&#x3068;&#x6838;&#x5185;&#x500D;&#x52A0;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3059;&#x308B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3001;SENP2-Mdm2&#x306E;-P53&#x306F;&#x3001;&#x57FA;&#x790E;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x6804;&#x990A;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x3001;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

SUMO&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;2&#x306F;&#x7D68;&#x6BDB;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C1;&#x3068;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;P53-Mdm2&#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;

&#xC2A4;&#xBAA8; &#xAD00;&#xB828; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 2 (SENP2)&#xC758; &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2A4;&#xBAA8;&#xB97C; &#xC81C;&#xAC70; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC218;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2A4;&#xBAA8; &#xAD00;&#xB828; &#xD504;&#xB85C; &#xD14C;&#xC544; &#xC81C;&#xB294; &#xB9CE;&#xC740; &#xC815;&#xC758; &#xB41C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0;&#xC11C; sumoylation &#xBC18;&#xB300;&#xB85C; &#xBE44;&#xB85D;, &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xACFC; pathogenesis &#xC911;&#xC694;&#xC131; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC560;&#xB9E4; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; senp2&#xC740; &#xB192;&#xC740; placentation&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; trophoblast &#xC140; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; senp2&#xC758; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xB41C; &#xC911;&#xB2E8; &#xC138; trophoblast &#xB808;&#xC774;&#xC5B4;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;. &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xC9C4;&#xD589;&#xC5D0; &#xBD80;&#xC871;&#xC744; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. SENP2 G S &#xC804;&#xD658;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xD2B9;&#xC815; &#xC5ED;&#xD560;&#xC774; mitotic endoreduplication &#xC140; &#xAC01;&#xAC01; trophoblast &#xD655;&#xC0B0; &#xBC0F; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;, &#xC8FC;&#xAE30; &#xBC0F;. SENP2 &#xC808;&#xC81C; trophoblast progenitors &#xBC0F; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC131;&#xC219;&#xC758; &#xD655;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; p53 Mdm2 &#xD1B5;&#xB85C; &#xBC29;&#xD574;. SENP2 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xC218; Mdm2 sumoylation, p53 &#xC218;&#xC900; &#xAC10;&#xC18C; &#xC904;&#xC774;&#xACE0; trophoblast &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, p53&#xC758; downregulation SENP2 null &#xACE0;&#xAE30; &#xC644;&#xD654; &#xBC0F; p53&#xC758; &#xC790;&#xADF9; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xC774;&#xC0C1; trophoblast &#xC99D;&#xC2DD;&#xACFC; &#xBD84;&#xD654;, SENP2 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB2EE;&#xC740;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD575;&#xC2EC; &#xC720;&#xC804; &#xACBD;&#xB85C; SENP2-Mdm2-p53, trophoblast &#xB9AC;&#xB2C8;&#xC9C0; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8;, &#xC720;&#xC0AC; &#xBD84;&#xC5F4; &#xBC0F; endoreduplication&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xC9C4;&#xD589; &#xD558;&#xB294; &#xC911;&#xCD94;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2A4;&#xBAA8; &#xAD00;&#xB828; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 2 &#xBCC0;&#xC870; p53-Mdm2 trophoblast &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xBCBD; &#xAC10; &#xBC0F; &#xACC4;&#xBCF4;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;.

SUMO-proteasa espec&#xED;fica 2 (SENP2) modifica las prote&#xED;nas mediante la eliminaci&#xF3;n de SUMO de sus sustratos. A pesar de SUMO-proteasas espec&#xED;ficas se sabe que invertir sumoylation en muchos sistemas definidos, su importancia en el desarrollo de los mam&#xED;feros y la patog&#xE9;nesis sigue siendo en gran medida dif&#xED;cil de alcanzar. Aqu&#xED; mostramos que SENP2 es altamente expresado en c&#xE9;lulas del trofoblasto que se requieren para la placentaci&#xF3;n. Interrupci&#xF3;n selectiva de SENP2 en ratones revela su papel esencial en el desarrollo de las tres capas de trofoblasto. La mutaci&#xF3;n causa una deficiencia en la progresi&#xF3;n del ciclo celular. SENP2 tiene un papel espec&#xED;fico en la transici&#xF3;n GS, que se requiere para mit&#xF3;tico y ciclos Endorreduplicaci&#xF3;n celulares en la proliferaci&#xF3;n y diferenciaci&#xF3;n trofoblasto, respectivamente. SENP2 la ablaci&#xF3;n perturba la p53-Mdm2 v&#xED;a, que afecta a la expansi&#xF3;n de los progenitores trofoblasto y su maduraci&#xF3;n. SENP2 reintroducir en los mutantes pueden reducir la sumoylation de Mdm2, disminuir el nivel de p53 y promover el desarrollo del trofoblasto. Por otra parte, regulaci&#xF3;n a la baja de p53 alivia los fenotipos SENP2 nulo y la estimulaci&#xF3;n de la prote&#xED;na p53 provoca alteraciones en la proliferaci&#xF3;n y la diferenciaci&#xF3;n del trofoblasto, parecidas a las de los SENP2 mutantes. Nuestros datos revelan una v&#xED;a clave gen&#xE9;tica, SENP2-Mdm2-p53, linaje de desarrollo subyacente trofoblasto, lo que sugiere su papel fundamental en la progresi&#xF3;n del ciclo celular de la mitosis y endorreduplicaci&#xF3;n.

SUMO-espec&#xED;fica de proteasa 2 es esencial para la modulaci&#xF3;n de p53-Mdm2 en el desarrollo de nichos de c&#xE9;lulas madre Trofoblasto y linajes

Article	Year
Characterization of human Smg5/7a: a protein with similarities to Caenorhabditis elegans SMG5 and SMG7 that functions in the dephosphorylation of Upf1. RNA (New York, N.Y.)\| PubMed ID: 12554878	2003
Antitumor agents 222. Synthesis and anti-androgen activity of new diarylheptanoids. Bioorganic & medicinal chemistry\| PubMed ID: 14604672	2003
The pioneer translation initiation complex is functionally distinct from but structurally overlaps with the steady-state translation initiation complex. Genes & development\| PubMed ID: 15059963	2004
Development of a unique system for spatiotemporal and lineage-specific gene expression in mice. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America\| PubMed ID: 15941831	2005
SUMO-specific protease 2 is essential for modulating p53-Mdm2 in development of trophoblast stem cell niches and lineages. PLoS biology\| PubMed ID: 19090619	2008

Shang-Yi Chiu

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