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Photoconversion of Purified Fluorescent Proteins and Dual-probe Optical Highlighting in Live Cells

Photoconvertible fluorescent proteins (pc-FPs) are a class of fluorescent proteins with "optical highlighter" capability, meaning that the color of ...

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A Method to Study the Correlation Between Local Collagen Structure and Mechanical Properties of Atherosclerotic Plaque Fibrous Tissue

The rupture of atherosclerotic plaques in coronary and carotid arteries is the primary cause of fatal cardiovascular events. However, the rupture ...

Vanderbilt University

Erasmus Medical Center

&#x589E;&#x5F3A;&#x7684;&#x9752;&#x8272;&#x548C;&#x9EC4;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7528;&#x4E8E;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#x53CC;&#x5F69;&#x8272;&#x6210;&#x50CF;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6709;&#x9650;&#x7684;&#x70ED;&#x654F;&#x3001; &#x6697;&#x6DE1;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x548C;&#x805A;&#x5408;&#x7684;&#x8D8B;&#x52BF;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x7F51;&#x7AD9;&#x5B9A;&#x5411;&#x8BF1;&#x53D8;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x63D0;&#x9AD8;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x521B;&#x5EFA;&#x4E86;&#x5355;&#x4F53;&#x4F18;&#x5316;&#x7684;&#x53D8;&#x79CD; ECFP &#x548C; EYFP&#xFF0C;&#x6298;&#x53E0;&#x66F4;&#x5FEB;&#x548C;&#x66F4;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x5728;&#x6444;&#x6C0F; 37 &#x5EA6;&#x7684;&#x3001; &#x6709;&#x4F18;&#x826F;&#x7684;&#x6EB6;&#x89E3;&#x6027;&#x548C;&#x4EAE;&#x5EA6;&#x3002;&#x8868;&#x793A; SCFP3A &#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x662F;&#x6BD4;&#x90A3;&#x4E9B;&#x8868;&#x793A; ECFP 9-fold &#x660E;&#x4EAE;&#x548C; 1.2-fold &#x5149;&#x660E;&#x6BD4;&#x8868;&#x793A;&#x851A;&#x84DD;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x3002;SCFP3A &#x5177;&#x6709;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x91CF;&#x5B50;&#x4EA7;&#x7387; (0.56) &#x548C;&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x3002;&#x8868;&#x793A; SYFP2 &#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x662F;&#x6BD4;&#x90A3;&#x4E9B;&#x8868;&#x793A; EYFP(Q69K) 12 &#x500D;&#x7684;&#x4EAE;&#x5EA6;&#x9AD8;&#x548C;&#x6BD4;&#x7EC6;&#x83CC;&#x8868;&#x8FBE;&#x91D1;&#x661F;&#x51E0;&#x4E4E; 2 &#x6298;&#x9875;&#x66F4;&#x5149;&#x660E;&#x3002;&#x5728; HeLa &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x592A;&#x660E;&#x663E;&#x6539;&#x5584; &#xFF1B;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x5982;&#x6B64;&#xFF0C;SCFP3A &#x548C; SYFP2 &#x8868;&#x793A;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x90FD;&#x6BD4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x522B;&#x8868;&#x793A; ECFP &#x548C; EYFP(Q69K)&#xFF0C;1.5-fold &#x66F4;&#x5149;&#x660E;&#x3002;SCFP3A &#x548C; SYFP2 &#x7684;&#x589E;&#x5F3A;&#x529F;&#x80FD;&#x6700;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x63D0;&#x9AD8;&#x5185;&#x5728;&#x4EAE;&#x5EA6; &#xFF08;1.7-fold &#x548C; 1.3-fold &#x7EAF;&#x5316;&#x91CD;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x76F8;&#x6BD4; ECFP &amp; EYFP(Q69K)&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;) &#x548C;&#x589E;&#x5F3A;&#x578B;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6298;&#x53E0;&#x548C;&#x6210;&#x719F;&#x3002;&#x540E;&#x8005;&#x589E;&#x5F3A;&#x529F;&#x80FD;&#x6700;&#x5927;&#x5927;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x706F;&#x4EA7;&#x91CF;&#x589E;&#x52A0;&#x800C;&#x5B83;&#x4EEC;&#x51FA;&#x73B0;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E0D;&#x592A;&#x663E;&#x8457;&#x3002;SCFP3A &#x548C; SYFP2 &#x4F7F;&#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#xFF0C;&#x4F18;&#x8D8A;&#x7684;&#x6350;&#x52A9;&#x627F;&#x5151;&#x4EBA;&#x5BF9;&#x7531;&#x4E8E;&#x9AD8;&#x91CF;&#x5B50;&#x4EA7;&#x91CF;&#x548C;&#x589E;&#x52A0;&#x5BFF;&#x547D;&#x7684; SCFP3A &#x548C; SYFP2 &#x7684;&#x9AD8;&#x6D88;&#x5149;&#x7CFB;&#x6570;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;SCFP1&#xFF0C;&#x4E0E;&#x77ED;&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#xFF0C;&#x4F46;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x5149;&#x8C31; ECFP &#x548C; SCFP3A&#xFF0C;&#x76F8;&#x6BD4; CFP variant &#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528; SCFP1 &#x548C; SCFP3A &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5927;&#x751F;&#x5B58;&#x671F;&#x5DEE;&#x5F02;&#x4F7F;&#x6211;&#x4EEC;&#x80FD;&#x591F;&#x5728;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x5149;&#x8C31;&#x76F8;&#x540C;&#x7269;&#x79CD;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x53CC;&#x751F;&#x5B58;&#x671F;&#x6210;&#x50CF;&#x4E3A;&#x6267;&#x884C;&#x3002;

&#x4E0E;&#x6539;&#x8FDB;&#x7684;&#x4EAE;&#x5EA6;&#x3001; &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6298;&#x53E0;&#x548C;&#x97F3;&#x54C1; F&ouml;rster &#x534A;&#x5F84;&#x7684;&#x9752;&#x8272;&#x548C;&#x9EC4;&#x8272;&#x8D85;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;

Enhanced cyan and yellow fluorescent proteins are widely used for dual color imaging and protein-protein interaction studies based on fluorescence resonance energy transfer. Use of these fluorescent proteins can be limited by their thermosensitivity, dim fluorescence, and tendency for aggregation. Here we report the results of a site-directed mutagenesis approach to improve these fluorescent proteins. We created monomeric optimized variants of ECFP and EYFP, which fold faster and more efficiently at 37 degrees C and have superior solubility and brightness. Bacteria expressing SCFP3A were 9-fold brighter than those expressing ECFP and 1.2-fold brighter than bacteria expressing Cerulean. SCFP3A has an increased quantum yield (0.56) and fluorescence lifetime. Bacteria expressing SYFP2 were 12 times brighter than those expressing EYFP(Q69K) and almost 2-fold brighter than bacteria expressing Venus. In HeLa cells, the improvements were less pronounced; nonetheless, cells expressing SCFP3A and SYFP2 were both 1.5-fold brighter than cells expressing ECFP and EYFP(Q69K), respectively. The enhancements of SCFP3A and SYFP2 are most probably due to an increased intrinsic brightness (1.7-fold and 1.3-fold for purified recombinant proteins, compared to ECFP & EYFP(Q69K), respectively) and due to enhanced protein folding and maturation. The latter enhancements most significantly contribute to the increased fluorescent yield in bacteria whereas they appear less significant for mammalian cell systems. SCFP3A and SYFP2 make a superior donor-acceptor pair for fluorescence resonance energy transfer, because of the high quantum yield and increased lifetime of SCFP3A and the high extinction coefficient of SYFP2. Furthermore, SCFP1, a CFP variant with a short fluorescence lifetime but identical spectra compared to ECFP and SCFP3A, was characterized. Using the large lifetime difference between SCFP1 and SCFP3A enabled us to perform for the first time dual-lifetime imaging of spectrally identical fluorescent species in living cells.

Cyan and yellow super fluorescent proteins with improved brightness, protein folding, and FRET FÃ¶rster radius.

Accrue des prot&eacute;ines fluorescentes cyan et jaunes sont employ&eacute;s couramment pour bicolore d&#39;imagerie et de prot&eacute;ine-prot&eacute;ine &eacute;tudes d&#39;interaction bas&eacute;es sur le transfert d&#39;&eacute;nergie de fluorescence par r&eacute;sonance. L&#39;utilisation de ces prot&eacute;ines fluorescents peut &ecirc;tre limit&eacute;e par leur thermosensibilit&eacute;, fluorescence dim et tendance pour l&#39;agr&eacute;gation. Nous rapportons ici les r&eacute;sultats d&#39;une approche de mutagen&egrave;se pour am&eacute;liorer ces prot&eacute;ines fluorescentes. Nous avons cr&eacute;&eacute; le monom&egrave;res variantes optimis&eacute;es de ECFP et EYFP, plier plus rapidement et plus efficacement &agrave; 37 degr&eacute;s C, qui ont la luminosit&eacute; et la solubilit&eacute; sup&eacute;rieure. Bact&eacute;ries exprimant SCFP3A &eacute;taient consacrent plus brillantes que celles exprimant ECFP et 1,2 plus lumineux que les bact&eacute;ries exprimant Cerulean. SCFP3A a un rendement quantique accrue (0,56) et la dur&eacute;e de vie de fluorescence. Bact&eacute;ries exprimant SYFP2 sont 12 fois plus brillantes que celles exprimant EYFP(Q69K) et presque 2 fois plus lumineux que les bact&eacute;ries exprimant V&eacute;nus. Dans les cellules HeLa, les am&eacute;liorations ont &eacute;t&eacute; moins prononc&eacute;es ; N&eacute;anmoins, les cellules exprimant SCFP3A et SYFP2 &eacute;taient tous deux de 1,5 fois plus lumineux que les cellules exprimant ECFP et EYFP(Q69K), respectivement. Les am&eacute;liorations de SCFP3A et SYFP2 sont tr&egrave;s probablement due &agrave; une une luminosit&eacute; intrins&egrave;que (1,7 fois plus &eacute;lev&eacute; et 1.3-fold pour les prot&eacute;ines recombinantes purifi&eacute;es, comparativement &agrave; ECFP &amp; EYFP(Q69K), respectivement) et &agrave; cause de repliement des prot&eacute;ines accrue et de la maturation. Les am&eacute;liorations de ce dernier plus significativement contribuent au rendement fluorescent accru chez les bact&eacute;ries alors qu&#39;elles apparaissent moins importantes pour les syst&egrave;mes cellulaires de mammif&egrave;res. SCFP3A et SYFP2 font une paire sup&eacute;rieure donneur-accepteur pour le transfert d&#39;&eacute;nergie de fluorescence par r&eacute;sonance, en raison du rendement quantique &eacute;lev&eacute;e et a augment&eacute; la dur&eacute;e de vie de SCFP3A et le coefficient d&#39;extinction &eacute;lev&eacute;e de SYFP2. En outre, SCFP1, une variante de la CFP avec une dur&eacute;e de vie de fluorescence court mais les spectres identiques par rapport &agrave; ECFP et SCFP3A, a &eacute;t&eacute; caract&eacute;ris&eacute;e. En utilisant la diff&eacute;rence de dur&eacute;e de vie importante entre SCFP1 et SCFP3A nous a permis d&#39;effectuer pour l&#39;imagerie de double-vie premier temps spectralement identiques esp&egrave;ces fluorescentes dans les cellules vivantes.

Cyan et jaunes fluorescents super prot&eacute;ines avec luminosit&eacute; am&eacute;lior&eacute;e, le repliement des prot&eacute;ines et le rayon de F&ouml;rster frette.

Verbesserte Cyan und gelb fluoreszierende Proteine werden f&uuml;r dual Color Imaging und Protein-Protein Interaktion-Studien, basierend auf Fluoreszenz-Resonanz-Energie-Transfer eingesetzt. Verwendung dieser fluoreszierende Proteine kann durch ihre Thermosensitivity, dim Fluoreszenz und Neigung zur Aggregation eingeschr&auml;nkt werden. Hier berichten wir &uuml;ber die Ergebnisse einer Site-verwiesene Mutagenese Herangehensweise an diese fluoreszierende Proteine zu verbessern. Wir erschaffen Monomere optimierte Varianten von ECFP und EYFP, die Falten Sie schneller und effizienter bei 37 Grad C und &uuml;berlegenen L&ouml;slichkeit und Helligkeit. Bakterien zum Ausdruck SCFP3A waren 9-fold heller als die ECFP zum Ausdruck zu bringen und 1,2-fachen heller als Bakterien Cerulean zum Ausdruck zu bringen. SCFP3A hat eine h&ouml;here Quantenausbeute (0,56) und Fluoreszenz-Lebensdauer. Bakterien, die SYFP2 zum Ausdruck zu bringen waren 12-mal heller als die EYFP(Q69K) zum Ausdruck zu bringen und fast 2-fach heller als Bakterien, die Venus zum Ausdruck zu bringen. Die Verbesserungen wurden in HeLa-Zellen weniger ausgepr&auml;gt; Nichtsdestotrotz waren Zellen, SCFP3A und SYFP2 beide 1.5-fold heller als Zellen, die ECFP und EYFP(Q69K), bzw. Ausdr&uuml;cken. Die Verbesserungen der SCFP3A und SYFP2 sind vermutlich aufgrund einer erh&ouml;hten intrinsischen Helligkeit (1.7-fold und 1.3-fold f&uuml;r gereinigte rekombinante Proteine, verglichen mit ECFP- &amp; -EYFP(Q69K), beziehungsweise) und durch verbesserte Proteinfaltung und Reifung. Verbesserungen die letzteren tragen erheblich zur erh&ouml;hten fluoreszierende Rendite in Bakterien, w&auml;hrend sie weniger bedeutsam f&uuml;r S&auml;ugetier-Zellkultur Systeme erscheinen. SCFP3A und SYFP2 machen eine &uuml;berlegene Donor-Akzeptor-Paar f&uuml;r Fluoreszenz-Resonanz-Energie-Transfer, wegen der hohen Quantenausbeute und erh&ouml;hte Lebensdauer des SCFP3A und der hohen Extinktionskoeffizient von SYFP2. Ferner war die SCFP1, eine GFP-Variante mit einem kurzen Fluoreszenz-Lebensdauer aber identische Spektren im Vergleich zu ECFP und SCFP3A, gekennzeichnet. Mit den gro&szlig;en Lebensdauer-Unterschied zwischen SCFP1 und SCFP3A konnten wir f&uuml;r die erste Zeit Dual-Lebensdauer Bildgebung Spektral identisch fluoreszierende Arten in lebenden Zellen durchf&uuml;hren.

Cyan und gelb super fluoreszierende Proteine mit verbesserte Helligkeit, Proteinfaltung und FRET-F&ouml;rster-Radius.

Migliorate le proteine fluorescenti gialle e ciano sono ampiamente usate per dual color imaging e proteina-proteina studi di interazione basati sul trasferimento di energia di risonanza di fluorescenza. Uso di queste proteine fluorescenti pu&ograve; essere limitato dalla loro termosensibilit&agrave;, dim fluorescenza e tendenza per l&#39;aggregazione. Riportiamo i risultati di un approccio di mutagenesi luogo-diretta a migliorare queste proteine fluorescenti. Abbiamo creato monomerici varianti ottimizzate di ECFP ed EYFP, che piega pi&ugrave; veloce ed efficiente a 37 gradi C e hanno luminosit&agrave; e superiore solubilit&agrave;. Batteri che esprimono SCFP3A sono stati 9-fold rispetto a quelli che esprimono ECFP pi&ugrave; luminoso e 1.2-fold batteri esprimendo ceruleo. SCFP3A ha un rendimento quantico aumentato (0,56) e vita di fluorescenza. Batteri che esprimono SYFP2 erano 12 volte pi&ugrave; brillanti di quelli che esprimono EYFP(Q69K) e quasi 2 volte pi&ugrave; luminoso di batteri esprimendo Venus. In cellule HeLa, i miglioramenti sono stati meno pronunciati; Tuttavia, le cellule che esprimono SCFP3A e SYFP2 erano entrambi 1.5-fold pi&ugrave; luminoso di cellule che esprimono ECFP ed EYFP(Q69K), rispettivamente. I miglioramenti di SCFP3A e SYFP2 sono pi&ugrave; probabilmente a causa di una maggiore luminosit&agrave; intrinseca (1.7-fold e 1.3-fold per le proteine ricombinanti purificate, rispetto ai EYFP(Q69K) &amp; ECFP, rispettivamente) e a causa della maggiore protein folding e maturazione. I miglioramenti di quest&#39;ultimi pi&ugrave; significativamente contribuiscono al maggiore rendimento fluorescente in batteri mentre appaiono meno significativi per i sistemi di cellule di mammifero. SCFP3A e SYFP2 fanno una coppia donatore-accettore superiore per il trasferimento di energia di risonanza di fluorescenza, a causa del rendimento quantico alta e maggiore durata di SCFP3A e il coefficiente di estinzione alta di SYFP2. Inoltre, SCFP1, una variante CFP con una durata breve fluorescenza ma spettri identici rispetto a ECFP e SCFP3A, &egrave; stato caratterizzato. Utilizzando la vita grande differenza tra SCFP1 e SCFP3A ci ha permesso di eseguire per l&#39;imaging di dual-durata tempo prima delle specie fluorescenti spettralmente identici in cellule viventi.

Ciano e gialle le proteine fluorescenti super con luminosit&agrave; migliorata, il protein folding e radius FRET F&ouml;rster.

&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B7;&#x30A2;&#x30F3;&#x3068;&#x9EC4;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F;&#x86CD;&#x5149;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x30C7;&#x30E5;&#x30A2;&#x30EB; &#x30AB;&#x30E9;&#x30FC; &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x5E83;&#x304F;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x611F;&#x5FDC;&#x3001;&#x8584;&#x6697;&#x3044;&#x86CD;&#x5149;&#x3068;&#x96C6;&#x7D04;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x50BE;&#x5411;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x9650;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x6307;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x5358;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x751F;&#x3055;&#x3068; EYFP &#x3088;&#x308A;&#x901F;&#x304F;&#x3088;&#x308A;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B; 37 &#x2103; &#x3067;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x3057;&#x512A;&#x308C;&#x305F;&#x6EB6;&#x89E3;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x660E;&#x308B;&#x3055;&#x306E;&#x4F5C;&#x6210;&#x3002;SCFP3A &#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x83CC; 9-fold &#x751F;&#x3055;&#x8868;&#x73FE;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x660E;&#x308B;&#x304F;&#x3055;&#x308C;&#x3001;1.2-fold &#x30BB;&#x30EB;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x83CC;&#x3088;&#x308A;&#x660E;&#x308B;&#x3044;&#x3002;SCFP3A &#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x91CF;&#x5B50;&#x53CE;&#x7387; (0.56) &#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x3092;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;SYFP2 &#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x83CC;&#x306F;&#x3001;12 &#x500D;&#x660E;&#x308B;&#x3044;&#x3088;&#x308A;&#x3082; EYFP(Q69K) &#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x91D1;&#x661F;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x83CC;&#x3088;&#x308A;&#x307B;&#x307C;&#x500D;&#x660E;&#x308B;&#x3044;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;HeLa &#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306E;&#x6539;&#x5584;&#x306F;&#x5C11;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x767A;&#x97F3;&#x3055;&#x308C;&#x305F;;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;SCFP3A &#x3068; SYFP2 &#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x751F;&#x3055;&#x3001;EYFP(Q69K)&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x767A;&#x73FE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x7D04; 1.5 &#x500D;&#x660E;&#x308B;&#x3044;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;SCFP3A &#x3068; SYFP2 &#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x5F37;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x3001;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x660E;&#x308B;&#x3055;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3067;&#x3059; &#xFF08;&#x30DA;&#x30DA;&#x30FC;&#x30AA;&#x30A4;&#x30EB;&#x3068; 1.3 &#x500D;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057;&#x305F;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x751F;&#x3055; &amp; EYFP(Q69K) &#x306B;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#xFF09; &#x3068;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307F;&#x3068;&#x6210;&#x719F;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3002;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x306E;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x91CD;&#x5927;&#x306A;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x5F8C;&#x8005;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x5F37;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x3082;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x7D30;&#x83CC;&#x86CD;&#x5149;&#x6B69;&#x7559;&#x5411;&#x4E0A;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;SCFP3A &#x3068; SYFP2 &#x512A;&#x308C;&#x305F;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC; &#x30FB; &#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x5BFE;&#x86CD;&#x5149;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x9AD8;&#x3044;&#x91CF;&#x5B50;&#x53CE;&#x7387;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3068; SCFP3A &#x306E;&#x6709;&#x52B9;&#x671F;&#x9593;&#x304A;&#x3088;&#x3073; SYFP2 &#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x6D88;&#x6563;&#x4FC2;&#x6570;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;SCFP1&#x3001;CFP &#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x77ED;&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x304C;&#x751F;&#x3055;&#x3084; SCFP3A &#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x540C;&#x4E00;&#x306E;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;SCFP1 &#x3068; SCFP3A &#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x5BFF;&#x547D;&#x5DEE;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x30C7;&#x30E5;&#x30A2;&#x30EB;&#x5BFF;&#x547D;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x751F;&#x304D;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x540C;&#x4E00;&#x86CD;&#x5149;&#x7A2E;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5B9F;&#x884C;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3002;

&#x6539;&#x826F;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x660E;&#x308B;&#x3055;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307F;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D5;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8; &#x30D5;&#x30A7;&#x30EB;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC; &#x30FB;&#x534A;&#x5F84;&#x3092;&#x30B7;&#x30A2;&#x30F3;&#x3068;&#x9EC4;&#x8272;&#x306E;&#x8D85;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;

&#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xCCAD;&#xB85D; &#xBC0F; &#xD669;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD615;&#xAD11; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xAE30;&#xBC18;&#xD55C; &#xB4C0;&#xC5BC; &#xCEEC;&#xB7EC; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB110;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC740; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; thermosensitivity, dim &#xD615;&#xAD11; &#xBC0F; &#xC9D1;&#xACC4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACBD;&#xD5A5;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xD55C; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00;&#xC774; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xAC1C;&#xC120; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC9C0;&#xC2DC; &#xB41C; mutagenesis &#xC811;&#xADFC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xBCF4;&#xACE0;. ECFP &#xBC0F; EYFP, 37&#xB3C4; C&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xBE60;&#xB974;&#xACE0; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xB3D9; &#xD558; &#xACE0; &#xC6B0;&#xC218;&#xD55C; &#xC6A9; &#xD574;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xBC1D;&#xAE30;&#xB294; monomeric &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB41C; &#xBCC0;&#xC885;&#xC744; &#xB9CC;&#xB4E4;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; &#xD45C;&#xD604; SCFP3A 9-fold ECFP&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xBC1D;&#xACE0; 1.2-fold &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; &#xB9AC;&#xC548; &#xD45C;&#xD604; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xBC1D;&#xAC8C; &#xD588;&#xB2E4;. Scfp3a&#xB294; &#xC99D;&#xAC00; &#xC591;&#xC790; &#xC218;&#xC728; (0.56) &#xBC0F; &#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85;. Syfp2&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; EYFP(Q69K) &#xD45C;&#xD604; &#xBCF4;&#xB2E4; 12 &#xBC30; &#xB354; &#xBC1D;&#xC740; &#xAC70;&#xC758; 2-fold &#xAE08;&#xC131;&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xBC1D;&#xAC8C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD5EC;&#xB7EC; &#xC138;&#xD3EC; &#xAC1C;&#xC120; &#xBC1C;&#xC74C; &#xB35C; &#xD588;&#xB2E4;; &#xADF8;&#xB7FC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0;, &#xC140; scfp3a&#xC640; SYFP2 &#xB458; &#xB2E4; karin &#xC140; &#xAC01;&#xAC01; ECFP&#xC640; EYFP(Q69K), &#xD45C;&#xD604; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xBC1D;&#xAC8C; &#xD588;&#xB2E4;. SCFP3A &#xBC0F; syfp2&#xC758; &#xD5A5;&#xC0C1;&#xC740; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xC544;&#xB9C8; &#xC99D;&#xAC00; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBC1D;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38; (1.7-fold &#xBC0F; 1.3-fold &#xC21C;&#xD654; &#xB41C; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; ECFP &amp; EYFP(Q69K)&#xC744; &#xAC01;&#xAC01; &#xBE44;&#xAD50;) &#xBC0F; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD3F4;&#xB529;&#xACFC; &#xC131;&#xC219;. &#xD6C4;&#xC790;&#xC758; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB35C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; &#xC99D;&#xAC00; &#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xC728;&#xC5D0; &#xAC00;&#xC7A5; &#xD06C;&#xAC8C; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD55C;&#xB2E4;. SCFP3A &#xBC0F; SYFP2 &#xB192;&#xC740; &#xC591;&#xC790; &#xC218;&#xC728; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xD615;&#xAD11; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6B0;&#xC218;&#xD55C; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xC218;&#xB77D;&#xC790; &#xC30D;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD558; &#xACE0; syfp2&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC18C;&#xBA78; &#xACC4;&#xC218; &#xBC0F; scfp3a&#xC758; &#xC218;&#xBA85;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00;. &#xB610;&#xD55C;, SCFP1, &#xC9E7;&#xC740; &#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; ECFP &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; SCFP3A, c f P &#xBCC0;&#xC885; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xC774;&#xC5C8;&#xB2E4;. SCFP1 &#xBC0F; scfp3a&#xC758; &#xB300;&#xD615; &#xC218;&#xBA85; &#xCC28;&#xC774; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xD615;&#xAD11; spectrally &#xB3D9;&#xC77C; &#xC885;&#xC758; &#xCCAB; &#xC2DC;&#xAC04; &#xB4C0;&#xC5BC; &#xD3C9;&#xC0DD; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC218;&#xD589;&#xD560; &#xC218; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xBC1D;&#xAE30;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC811;&#xAE30;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; F&ouml;rster &#xBC18;&#xACBD; &#xB179;&#xCCAD; &#xBC0F; &#xB178;&#xB791; &#xC288;&#xD37C; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;.

Mayor prote&iacute;nas fluorescentes cian y amarillas son ampliamente utilizadas para la bicolor im&aacute;genes y prote&iacute;nas estudios de interacci&oacute;n basados en la transferencia de energ&iacute;a de resonancia de fluorescencia. Uso de estas prote&iacute;nas fluorescentes puede ser limitado por su tendencia para la agregaci&oacute;n, thermosensitivity y tenue fluorescencia. Presentamos los resultados de un enfoque de mutag&eacute;nesis sitio-dirigida a mejorar estas prote&iacute;nas fluorescentes. Creamos monom&eacute;ricas variantes optimizadas de ECFP y EYFP, que doblar m&aacute;s r&aacute;pido y m&aacute;s eficientemente a 37 grados C y tienen brillo y solubilidad superior. Bacterias expresando SCFP3A eran 9-fold m&aacute;s brillante que los expresando ECFP y 1.2-fold m&aacute;s brillante que las bacterias expresando cer&uacute;leo. SCFP3A tiene una producci&oacute;n de mayor quantum (0.56) y vida de fluorescencia. Expresar SYFP2 las bacterias fueron casi 2 m&aacute;s brillante que las bacterias expresando a Venus y 12 veces m&aacute;s brillante que aquellos que expresan EYFP(Q69K). En c&eacute;lulas HeLa, las mejoras fueron menos pronunciadas; sin embargo, las c&eacute;lulas que expresan SCFP3A y SYFP2 eran ambos 1.5 m&aacute;s brillante que las c&eacute;lulas que expresan ECFP y EYFP(Q69K), respectivamente. Las mejoras de SCFP3A y SYFP2 son probablemente debido a un mayor brillo intr&iacute;nseco (1.7-fold y 1.3-fold de prote&iacute;nas recombinantes purificadas, comparado ECFP EYFP(Q69K) &amp;, respectivamente) y debido al plegamiento de la prote&iacute;na mejorada y maduraci&oacute;n. Las mejoras de este &uacute;ltimas m&aacute;s importante contribuyen al aumento del rendimiento fluorescente en bacterias mientras que parecen menos importantes para los sistemas de c&eacute;lulas de mam&iacute;fero. SCFP3A y SYFP2 hacen un par de donantes-aceptador superior para la transferencia de energ&iacute;a de resonancia de fluorescencia, debido a la producci&oacute;n de qu&aacute;ntum alta y aumentaron la vida de SCFP3A y el coeficiente de extinci&oacute;n alto de SYFP2. Adem&aacute;s, SCFP1, una variante de la pol&iacute;tica pesquera com&uacute;n con una vida de fluorescencia corto pero id&eacute;nticos espectros comparados ECFP y SCFP3A, se caracteriz&oacute;. Mediante la diferencia de vida grande entre SCFP1 y SCFP3A permiti&oacute; realizar la primera imagen de doble vida tiempo de especies fluorescentes espectralmente id&eacute;nticas en las c&eacute;lulas vivas.

Cian y amarillas super fluorescentes prote&iacute;nas con mayor brillo, plegamiento de la prote&iacute;na y radio traste F&ouml;rster.

&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x5DF2;&#x6210;&#x4E3A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x5B9D;&#x8D35;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x5E94;&#x7528;&#x7684;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x53D8;&#x4F53;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#x53EF;&#x4EE5;&#x963B;&#x788D;&#x4E86;&#x6548;&#x7387;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6298;&#x53E0;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x805A;&#x96C6;&#x548C;&#x51CF;&#x5C11;&#x8367;&#x5149;&#x3002;&#x5728;&#x539F;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x662F;&#x5C24;&#x5176;&#x6DF1;&#x523B;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;EBFP&#xFF0C;&#x84DD;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x7684;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x53D8;&#x4F53;&#x5F88;&#x5C11;&#x4F7F;&#x7528; dim &#x8367;&#x5149;&#x548C;&#x5FEB;&#x901F;&#x6F02;&#x767D;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x52AA;&#x529B;&#x6539;&#x5584;&#x6027;&#x80FD;&#xFF0C;&#x5982;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6298;&#x53E0;&#x3001; &#x8367;&#x5149;&#x4EAE;&#x5EA6;&#x548C;&#x5149;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x90FD;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x5927;&#x529B;&#x52A0;&#x5F3A;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149; (SGFP2) &#x548C;&#x5F3A;&#x70C8;&#x589E;&#x5F3A;&#x7684;&#x84DD;&#x8272;&#x8367;&#x5149; (SBFP2) &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x88AB;&#x521B;&#x5EFA;&#xFF0C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x548C; EBFP&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x4E8E;&#x5B9A;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x5F15;&#x5165;&#x51E0;&#x4E2A;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x6700;&#x8FD1;&#x6539;&#x8FDB;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; EYFP &#x548C; ECFP &#x800C;&#x6240;&#x793A;&#x3002;SGFP2 &#x548C; SBFP2 &#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x66F4;&#x5FEB;&#x3001; &#x66F4;&#x9AD8;&#x6548;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6298;&#x53E0;&#x548C;&#x52A0;&#x901F;&#x4F53;&#x5916;&#x7684;&#x53D1;&#x8272;&#x56E2;&#x6C27;&#x5316;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5F3A;&#x70C8;&#x589E;&#x5F3A;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x5149;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x63D0;&#x9AD8;&#x4E86; 2 &#x500D;&#x548C; SBFP2 &#x91CF;&#x5B50;&#x4EA7;&#x91CF;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86; 3-fold&#x3002;&#x6298;&#x53E0;&#x6548;&#x7387;&#x63D0;&#x9AD8;&#x51CF;&#x5C11;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x805A;&#x96C6;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x8868;&#x8FBE; SGFP2 &#x7C92;&#x5B50;&#x675F;&#x76F8;&#x6BD4;&#x90A3;&#x4E9B;&#x8868;&#x8FBE;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x4EAE;&#x5EA6;&#x4EAE;&#x5EA6;&#x7684;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x3002;&#x8868;&#x793A; SBFP2 &#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x662F;&#x81EA;&#x66F4;&#x6BD4;&#x90A3;&#x4E9B;&#x8868;&#x793A; EBFP &#x8367;&#x5149;&#x3002;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x592A;&#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x6539;&#x5584;&#x3002;1.7-Fold &#x5149;&#x660E;&#x6BD4;&#x90A3;&#x4E9B;&#x8868;&#x8FBE;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x663E;&#x7136;&#x662F;&#x7531;&#x4E8E;&#x6548;&#x7387;&#x66F4;&#x9AD8;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;/&#x6216;&#x53D1;&#x8272;&#x56E2;&#x6210;&#x719F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE; SGFP2&#x3002;&#x8868;&#x793A; SBFP2 &#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE; EBFP &#x6BD4; 3.7-fold &#x66F4;&#x5149;&#x660E;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x589E;&#x52A0;&#x4EAE;&#x5EA6;&#x7CBE;&#x602A;&#x4E2D;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x7EAF;&#x5316;&#x91CD;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x56FA;&#x6709;&#x4EAE;&#x5EA6;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x6210;&#x719F;&#x6548;&#x7387;&#x548C;&#x5149;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x7684; SGFP2 &#x548C; SBFP2 &#x65B9;&#x4FBF;&#x68C0;&#x6D4B;&#x548C;&#x8367;&#x5149;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x6700;&#x5927;&#x6301;&#x7EED;&#x65F6;&#x95F4;&#x5EF6;&#x957F;&#x3002;

&#x6539;&#x8FDB;&#x7EFF;&#x8272;&#x548C;&#x84DD;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x7EC6;&#x83CC;&#x548C;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;

Fluorescent proteins have become an invaluable tool in cell biology. The green fluorescent protein variant EGFP is especially widely applied. Use of fluorescent proteins, including EGFP, however can be hindered by inefficient protein folding, resulting in protein aggregation and reduced fluorescence. This is especially profound in prokaryotic cells. Furthermore, EBFP, a blue fluorescent variant of EGFP, is rarely used because of its dim fluorescence and fast photobleaching. Thus, efforts to improve properties such as protein folding, fluorescence brightness, and photostability are important. Strongly enhanced green fluorescent (SGFP2) and strongly enhanced blue fluorescent (SBFP2) proteins were created, based on EGFP and EBFP, respectively. We used site-directed mutagenesis to introduce several mutations, which were recently shown to improve the fluorescent proteins EYFP and ECFP. SGFP2 and SBFP2 exhibit faster and more efficient protein folding and accelerated chromophore oxidation in vitro. For both strongly enhanced fluorescent proteins, the photostability was improved 2-fold and the quantum yield of SBFP2 was increased 3-fold. The improved folding efficiency reduced the extent of protein aggregation in Escherichia coli, thereby increasing the brightness of bacteria expressing SGFP2 7-fold compared to the brightness of those expressing EGFP. Bacteria expressing SBFP2 were 16-fold more fluorescent than those expressing EBFP. In mammalian cells, the improvements were less pronounced. Cells expressing SGFP2 were 1.7-fold brighter than those expressing EGFP, which was apparently due to more efficient protein expression and/or chromophore maturation. Mammalian cells expressing SBFP2 were 3.7-fold brighter than cells expressing EBFP. This increase in brightness closely resembled the increase in intrinsic brightness observed for the purified recombinant protein. The increased maturation efficiency and photostability of SGFP2 and SBFP2 facilitate detection and extend the maximum duration of fluorescence imaging.

Improved green and blue fluorescent proteins for expression in bacteria and mammalian cells.

Prot&eacute;ines fluorescentes sont devenus un outil pr&eacute;cieux en biologie cellulaire. La variante de la prot&eacute;ine verte fluorescente EGFP est surtout largement appliqu&eacute;e. Utilisation de prot&eacute;ines fluorescentes, y compris EGFP, cependant peut &ecirc;tre entrav&eacute;e par le repliement des prot&eacute;ines inefficace, r&eacute;sultant dans l&#39;agr&eacute;gation des prot&eacute;ines et r&eacute;duit la fluorescence. C&#39;est particuli&egrave;rement profond dans les cellules procaryotes. En outre, EBFP, une variante fluorescente bleue de EGFP, est rarement utilis&eacute;e en raison de sa fluorescence dim et le photoblanchiment rapide. Ainsi, les efforts visant &agrave; am&eacute;liorer les propri&eacute;t&eacute;s telles que le repliement des prot&eacute;ines, la luminosit&eacute; de la fluorescence et photostabilit&eacute; est importants. Fortement am&eacute;lior&eacute; vert fluorescent (SGFP2) et fortement renforc&eacute;e bleu fluorescents prot&eacute;ines (SBFP2) ont &eacute;t&eacute; cr&eacute;&eacute;s, selon EGFP et EBFP, respectivement. Nous avons utilis&eacute; la mutag&eacute;n&egrave;se dirig&eacute;e d&#39;introduire plusieurs mutations, lesquelles se sont r&eacute;cemment pour am&eacute;liorer les prot&eacute;ines fluorescentes EYFP et ECFP. SGFP2 et SBFP2 pr&eacute;sentent le repliement des prot&eacute;ines plus rapide et plus efficace et acc&eacute;l&eacute;r&eacute; l&#39;oxydation du chromophore in vitro. Pour les deux prot&eacute;ines fluorescentes fortement am&eacute;lior&eacute;es, la photostabilit&eacute; a &eacute;t&eacute; am&eacute;lior&eacute;e de 2 fois et le rendement quantique de SBFP2 a &eacute;t&eacute; augment&eacute; de 3 fois. L&#39;am&eacute;lioration de l&#39;efficacit&eacute; pliage r&eacute;duit l&#39;&eacute;tendue de l&#39;agr&eacute;gation des prot&eacute;ines chez Escherichia coli, ce qui augmente la luminosit&eacute; des bact&eacute;ries exprimant SGFP2 7 fois par rapport &agrave; l&#39;&eacute;clat de ceux exprimant EGFP. Bact&eacute;ries exprimant SBFP2 ont &eacute;t&eacute; 16 fois plus fluorescents que celles exprimant EBFP. Dans les cellules de mammif&egrave;res, les am&eacute;liorations ont &eacute;t&eacute; moins prononc&eacute;es. Les cellules exprimant SGFP2 ont 1,7 fois plus brillantes que celles exprimant EGFP, qui &eacute;tait apparemment en raison de la maturation plus efficace des prot&eacute;ines expression et/ou chromophore. Cellules de mammif&egrave;res exprimant SBFP2 &eacute;taient 3.7-fold plus lumineux que les cellules exprimant EBFP. Cette augmentation de luminosit&eacute; ressemblait beaucoup &agrave; l&#39;augmentation de luminosit&eacute; intrins&egrave;que, observ&eacute;e pour la prot&eacute;ine recombinante purifi&eacute;e. L&#39;efficacit&eacute; accrue de la maturation et la photostabilit&eacute; de SGFP2 et SBFP2 facilitent la d&eacute;tection et la prolongent de la dur&eacute;e maximale de l&#39;imagerie de fluorescence.

Am&eacute;lioration des prot&eacute;ines fluorescentes vertes et bleues pour l&#39;expression chez les bact&eacute;ries et les cellules de mammif&egrave;res.

Fluoreszierende Proteine sind ein wertvolles Instrument in der Zellbiologie geworden. Die gr&uuml;n fluoreszierende Protein-Variante EGFP ist besonders breit verwendet. Fluoreszierende Proteine, einschlie&szlig;lich EGFP, jedoch k&ouml;nnen werden behindert durch ineffiziente Proteinfaltung, wodurch Proteinanh&auml;ufung und Fluoreszenz reduziert. Dies ist besonders tief in den prokaryotic Zellen. Dar&uuml;ber hinaus ist EBFP, eine blaue fluoreszierende Variante des EGFP, selten wegen seiner dim Fluoreszenz und schnelle Photobleaching verwendet. Anstrengungen zur Verbesserung der Eigenschaften wie Proteinfaltung, Fluoreszenz-Helligkeit und Photostabilit&auml;t sind daher wichtig. Stark verbesserte gr&uuml;n fluoreszierend (SGFP2) und stark verbesserte blau fluoreszierende Proteine in (SBFP2) erstellt wurden, basierend auf EGFP und EBFP, bzw.. Wir verwendeten Site-verwiesene Mutagenese, mehrere Mutationen, einzuf&uuml;hren, die vor kurzem gezeigt wurden, die fluoreszierende Proteine EYFP und ECFP zu verbessern. SGFP2 und SBFP2 ausstellen, schneller und effizienter Proteinfaltung und beschleunigte Chromophor-Oxidation in vitro. F&uuml;r beide stark verbesserte fluoreszierende Proteine die Photostabilit&auml;t 2-fach verbessert wurde und die Quantenausbeute des SBFP2 wurde 3-fach erh&ouml;ht. Die Effizienzsteigerung Falten verringert das Ausma&szlig; der Proteinanh&auml;ufung in Escherichia coli, wodurch die Helligkeit der Bakterien SGFP2 versiebenfachte die Helligkeit dieser Ausdruck EGFP gegen&uuml;ber zum Ausdruck zu bringen. Bakterien, die SBFP2 zum Ausdruck zu bringen waren 16fache mehr fluoreszierende als die EBFP zum Ausdruck zu bringen. In S&auml;ugetierzellen wurden die Verbesserungen weniger stark ausgepr&auml;gt. Zellen, die zum Ausdruck SGFP2 waren 1.7-fold heller als die EGFP, die offenbar aufgrund effizienter Protein Ausdruck und/oder Chromophor Reifung war zum Ausdruck zu bringen. S&auml;ugetierzellen Ausdr&uuml;cken SBFP2 waren 3.7-fold heller als Zellen EBFP zum Ausdruck zu bringen. Dieser Anstieg der Helligkeit &auml;hnelte den Anstieg im intrinsischen Helligkeit f&uuml;r das gereinigte rekombinante Protein beobachtet. Die erh&ouml;hte Reifung Effizienz und Photostabilit&auml;t von SGFP2 und SBFP2 Erkennung erleichtern und die maximale Dauer der Fluoreszenz-Bildgebung.

Gr&uuml;n und blau fluoreszierende Proteine f&uuml;r Ausdruck in Bakterien und S&auml;ugerzellen verbessert.

Le proteine fluorescenti sono diventati uno strumento prezioso nella biologia delle cellule. La variante della proteina verde fluorescente EGFP &egrave; soprattutto ampiamente applicata. Uso delle proteine fluorescenti, tra cui EGFP, tuttavia pu&ograve; essere ostacolato da inefficiente protein folding, con conseguente aggregazione proteica e ridotto la fluorescenza. Questo &egrave; particolarmente profondo nelle cellule procariote. Inoltre, EBFP, una variante blu fluorescente EGFP, &egrave; raramente utilizzato a causa della sua dim fluorescenza e photobleaching veloce. Cos&igrave;, gli sforzi per migliorare le propriet&agrave; quali il protein folding, luminosit&agrave; di fluorescenza e fotostabilit&agrave; sono importanti. Fortemente migliorato verde fluorescente (SGFP2) e fortemente migliorata blu sono state create le proteine fluorescenti (SBFP2), basato su EGFP ed EBFP, rispettivamente. Abbiamo usato la mutagenesi luogo-diretta a introdurre diverse mutazioni, che recentemente sono state indicate per migliorare le proteine fluorescenti EYFP ed ECFP. SGFP2 e SBFP2 mostrano pi&ugrave; veloce ed efficiente il protein folding e accelerata ossidazione cromoforo in vitro. Per entrambe le proteine fluorescenti fortemente rafforzate, la fotostabilit&agrave; &egrave; stato migliorato 2 volte e il rendimento quantico di SBFP2 &egrave; stato aumentato di 3 volte. La migliorata efficienza pieghevole ridotto nella misura di aggregazione proteica in Escherichia coli, aumentando cos&igrave; la luminosit&agrave; dei batteri che esprimono SGFP2 7-fold rispetto alla luminosit&agrave; di coloro che esprimono EGFP. Batteri che esprimono SBFP2 erano 16-fold pi&ugrave; fluorescenti rispetto a quelli che esprimono EBFP. In cellule di mammiferi, i miglioramenti sono stati meno pronunciati. Le cellule che esprimono SGFP2 erano 1.7-fold pi&ugrave; brillanti di quelli che esprimono EGFP, che era apparentemente a causa della maturazione di espressione e/o cromoforo della proteina pi&ugrave; efficiente. Le cellule di mammiferi che esprimono SBFP2 erano 3.7-fold pi&ugrave; luminose di cellule che esprimono EBFP. Questo aumento di luminosit&agrave; assomigliava all&#39;aumento di luminosit&agrave; intrinseca osservati per la proteina ricombinante purificata. L&#39;efficienza aumentata maturazione e fotostabilit&agrave; di SGFP2 e SBFP2 facilitare l&#39;individuazione ed estendere la durata massima dell&#39;imaging in fluorescenza.

Migliorate le proteine fluorescenti verde e blue per l&#39;espressione in batteri e cellule di mammifero.

&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x306E;&#x8CB4;&#x91CD;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8; EGFP &#x306F;&#x7279;&#x306B;&#x5E83;&#x304F;&#x9069;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;EGFP &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306F;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x975E;&#x80FD;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307F;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x51DD;&#x96C6;&#x306B;&#x751F;&#x3058;&#x308B;&#x59A8;&#x3052;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x3092;&#x4F4E;&#x6E1B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x539F;&#x6838;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x7279;&#x306B;&#x6DF1;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;EBFP&#x3001;&#x9752;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8; EGFP &#x306F;&#x3081;&#x3063;&#x305F;&#x306B;&#x305D;&#x306E; dim &#x86CD;&#x5149;&#x3068;&#x9AD8;&#x901F;&#x306E;&#x5149;&#x9000;&#x8272;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307F;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x8F1D;&#x5EA6;&#x5149;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3059;&#x308B;&#x52AA;&#x529B;&#x306F;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5F37;&#x304F;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149; (SGFP2) &#x3068;&#x5F37;&#x304F;&#x62E1;&#x5F35;&#x9752; EGFP &#x3068; EBFP&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (SBFP2) &#x304C;&#x4F5C;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x6307;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3001;&#x6700;&#x8FD1;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; EYFP &#x3068;&#x751F;&#x3055;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;SGFP2 &#x3068; SBFP2 &#x3088;&#x308A;&#x901F;&#x304F;&#x3088;&#x308A;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307F;&#x3092;&#x5C55;&#x793A;&#x3057;&#x3001;in vitro &#x3067;&#x767A;&#x8272;&#x56E3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x52A0;&#x901F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E21;&#x65B9;&#x5F37;&#x304F;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x5149;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x304C;&#x6539;&#x5584;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x305F;&#x3081;, &#x3068; SBFP2 &#x306E;&#x91CF;&#x5B50;&#x53CE;&#x7387;&#x304C; 3 &#x500D;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6298;&#x308A;&#x305F;&#x305F;&#x307F;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x306E;&#x5411;&#x4E0A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x51DD;&#x96C6;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; 7 &#x500D;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x3053;&#x308C;&#x3089; EGFP &#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x660E;&#x308B;&#x3055;&#x306B; SGFP2 &#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x660E;&#x308B;&#x3055;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x3092;&#x524A;&#x6E1B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;SBFP2 &#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x83CC;&#x306F;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x3088;&#x308A; EBFP &#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B; 16-fold &#x3088;&#x308A;&#x86CD;&#x5149;&#x706F;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306E;&#x6539;&#x5584;&#x306F;&#x5C11;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x767A;&#x97F3;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;SGFP2 &#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F; 1.7-fold &#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5F0F;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x767A;&#x8272;&#x56E3;&#x6210;&#x719F;&#x539F;&#x56E0;&#x3089;&#x3057;&#x3044; EGFP &#x767A;&#x73FE;&#x3088;&#x308A;&#x660E;&#x308B;&#x3044;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;SBFP2 &#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F; 3.7-fold EBFP &#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x660E;&#x308B;&#x304F;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x660E;&#x308B;&#x3055;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306F;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057;&#x305F;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x89B3;&#x5BDF;&#x306E;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x660E;&#x308B;&#x3055;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x5BC6;&#x63A5;&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5897;&#x52A0;&#x6210;&#x719F;&#x52B9;&#x7387;&#x3068; SGFP2 &#x3068; SBFP2 &#x306E;&#x5149;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x304C;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x86CD;&#x5149;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x6700;&#x5927;&#x671F;&#x9593;&#x3092;&#x5EF6;&#x9577;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7DD1;&#x3068;&#x9752;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x3068;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC5D0; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xAC00; &#xB418;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCC0;&#xC885; EGFP&#xC740; &#xD2B9;&#xD788; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xC801;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC9D1;&#xACC4; &#xACB0;&#xACFC; &#xBE44;&#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC811;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC29;&#xD574; &#xC218; &#xBC0F; &#xD615;&#xAD11; &#xAC10;&#xC18C; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, EGFP&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0AC;&#xC6A9;. &#xC774;&#xAC83;&#xC740; prokaryotic &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xD788; &#xAE4A;&#xC740;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, EBFP, EGFP, &#xBE14;&#xB8E8; &#xD615;&#xAD11; &#xBCC0;&#xC885;&#xC740; dim &#xD615;&#xAD11;&#xACFC; &#xBE60;&#xB978; photobleaching &#xAC70;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC811;&#xAE30;, &#xD615;&#xAD11; &#xAD11;&#xB3C4;, photostability &#xB4F1;&#xC758; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xAC1C;&#xC120; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB178;&#xB825; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;. &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; (SGFP2)&#xC640; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xBE14;&#xB8E8; &#xD615;&#xAD11; (SBFP2) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xAC01;&#xAC01; EGFP&#xC640; EBFP&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB9CC;&#xB4E4;&#xC5B4;&#xC9C4;. &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; EYFP&#xC640; ECFP&#xC744; &#xAC1C;&#xC120; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC18C;&#xAC1C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC9C0;&#xC2DC; &#xB41C; mutagenesis&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. SGFP2 &#xBC0F; SBFP2 &#xBE60;&#xB974;&#xACE0; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC811;&#xAE30; &#xC804;&#xC2DC; &#xBC0F; &#xCCB4; &#xC678; &#xBC1C; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xAC00;&#xC18D;. &#xBAA8;&#xB450; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; photostability 2-fold &#xAC1C;&#xC120; &#xBC0F; 3-fold sbfp2&#xC758; &#xC591;&#xC790; &#xC218;&#xC728;&#xC740; &#xC99D;&#xAC00;. &#xC811;&#xB294; &#xD6A8;&#xC728; &#xD5A5;&#xC0C1;&#xB41C; SGFP2 7-fold EGFP&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xADF8;&#xC758; &#xBC1D;&#xAE30;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC758; &#xBC1D;&#xAE30; &#xC99D;&#xAC00; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC9D1;&#xACC4; &#xBC94;&#xC704; &#xAC10;&#xC18C;. Sbfp2&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; &#xD588;&#xB2E4; 16-fold &#xB354; EBFP &#xD45C;&#xD604; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD615;&#xAD11;. &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC1C;&#xC120; &#xB35C; &#xBC1C;&#xC74C; &#xD588;&#xB2E4;. Sgfp2&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC140; 1.7-fold &#xD45C;&#xD604; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xB354; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2DD; &#xBC0F; &#xBC1C; &#xC131;&#xC219; &#xBD84;&#xBA85;&#xD788;&#xB294; EGFP &#xBCF4;&#xB2E4; &#xBC1D;&#xAC8C; &#xD588;&#xB2E4;. Sbfp2&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC; 3.7-fold EBFP&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xBC1D;&#xAC8C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBC1D;&#xAE30;&#xC774; &#xC99D;&#xAC00; &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBC1D;&#xAE30; &#xC21C;&#xD654; &#xB41C; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD00;&#xCC30;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC99D;&#xAC00; &#xB2EE;&#xC740;. &#xC99D;&#xAC00; &#xC131;&#xC219; &#xD6A8;&#xC728;&#xC131;&#xACFC; photostability sgfp2&#xACFC; sbfp2&#xC758; &#xAC80;&#xC0C9;&#xC744; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558; &#xACE0; &#xD615;&#xAD11; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;&#xC758; &#xCD5C;&#xB300; &#xAE30;&#xAC04; &#xC5F0;&#xC7A5;.

&#xB179;&#xC0C9;&#xACFC; &#xCCAD;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC640; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC2DD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC1C;&#xC120;.

Prote&iacute;nas fluorescentes se han convertido en una herramienta invaluable en la biolog&iacute;a celular. La variante de la prote&iacute;na verde fluorescente EGFP se aplica especialmente extensamente. Uso de prote&iacute;nas fluorescentes, incluyendo EGFP, sin embargo puede verse entorpecida por plegamiento de la prote&iacute;na ineficiente, resultando en la agregaci&oacute;n proteica y reduce la fluorescencia. Esto es especialmente profunda en c&eacute;lulas procariotas. Adem&aacute;s, EBFP, una variante fluorescente azul de EGFP, raramente se utiliza debido a su tenue fluorescencia y photobleaching r&aacute;pido. As&iacute;, los esfuerzos para mejorar las propiedades como el plegamiento de la prote&iacute;na, brillo de fluorescencia y fotoestabilidad son importantes. Fuertemente mejorado fluorescente verde (SGFP2) y fuertemente mejorada azul fluorescentes prote&iacute;nas (SBFP2) se crearon, basado en EGFP y EBFP, respectivamente. Utilizamos mutag&eacute;nesis sitio-dirigida a introducir varias mutaciones, que recientemente fueron demostradas para mejorar las prote&iacute;nas fluorescentes EYFP y ECFP. SGFP2 y SBFP2 exhiben el plegamiento de la prote&iacute;na de la m&aacute;s r&aacute;pida y eficaz y aceleraron la oxidaci&oacute;n del crom&oacute;foro in vitro. Para ambas prote&iacute;nas fluorescentes fuertemente mejoradas, la fotoestabilidad mejor&oacute; 2 y el rendimiento cu&aacute;ntico de SBFP2 se increment&oacute; 3-fold. La mejora de la eficiencia plegable reduce el grado de agregaci&oacute;n de la prote&iacute;na en Escherichia coli, lo que aumenta el brillo de las bacterias que expresan SGFP2 productora comparado con el brillo de aquellos que expresan EGFP. Bacterias expresando SBFP2 fueron 16-fold m&aacute;s fluorescentes que expresar EBFP. En c&eacute;lulas de mam&iacute;feros, las mejoras fueron menos pronunciadas. Las c&eacute;lulas que expresan SGFP2 fueron 1.7-fold m&aacute;s brillantes que aquellos que expresan EGFP, que era al parecer debido a la maduraci&oacute;n m&aacute;s eficiente de crom&oacute;foro o expresiones de prote&iacute;na. C&eacute;lulas de mam&iacute;fero que expresan SBFP2 fueron 3.7-fold m&aacute;s brillantes que las c&eacute;lulas que expresan EBFP. Este aumento de brillo cerca se asemej&oacute; al aumento en el brillo intr&iacute;nseco observada la prote&iacute;na recombinante purificada. La eficacia creciente maduraci&oacute;n y fotoestabilidad de SGFP2 y SBFP2 facilitan la detecci&oacute;n y extienden la duraci&oacute;n m&aacute;xima de proyecci&oacute;n de imagen de fluorescencia.

Mejorado prote&iacute;nas fluorescentes verdes y azules para la expresi&oacute;n en bacterias y c&eacute;lulas de mam&iacute;fero.

&#x52A8;&#x6001;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x8BB8;&#x591A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x4E86;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x4E00;&#x79CD;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x5728;&#x9610;&#x660E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x4E92;&#x52A8;&#x663E;&#x793A;&#x76F8;&#x5F53;&#x5927;&#x7684;&#x5E0C;&#x671B;&#x662F; F&ouml;rster &#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB; &#xFF08;&#x97F3;&#x54C1;&#xFF09;&#x3002;&#x5F53;&#x4E0E;&#x591A;&#x4E2A;&#xFF0C;&#x5F69;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x7ED3;&#x5408;&#xFF0C;&#x97F3;&#x54C1;&#x5141;&#x8BB8;&#x5728;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x9AD8;&#x7A7A;&#x95F4;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x97F3;&#x54C1;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x5E38;&#x5F88;&#x5C0F;&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x5176;&#x6D4B;&#x91CF;&#x8981;&#x6C42;&#x4ED4;&#x7EC6;&#x89E3;&#x91CA;&#x548C;&#x51E0;&#x4E2A;&#x63A7;&#x5236;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x8FC7;&#x53BB;&#x51E0;&#x5E74;&#x7206;&#x70B8;&#x5DF2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x70E6;&#x607C;&#x3002;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x97F3;&#x54C1;&#x548C;&#x9002;&#x5408;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x7269;&#x8D28;&#x57FA;&#x7840;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4EA6;&#x68C0;&#x8BA8;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x6765;&#x8861;&#x91CF;&#x97F3;&#x54C1;&#xFF0C;&#x7279;&#x522B;&#x4FA7;&#x91CD;&#x4E8E;&#x4E0E;&#x6BCF;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x9879;&#x76EE;&#x7684;&#x3002;

&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x97F3;&#x54C1;&#xFF1A; &#x597D;&#x3001; &#x574F;&#x7684;&#x548C;&#x4E11;&#x964B;&#x3002;

Dynamic protein interactions play a significant part in many cellular processes. A technique that shows considerable promise in elucidating such interactions is FÃ¶rster resonance energy transfer (FRET). When combined with multiple, colored fluorescent proteins, FRET permits high spatial resolution assays of protein-protein interactions in living cells. Because FRET signals are usually small, however, their measurement requires careful interpretation and several control experiments. Nevertheless, the use of FRET in cell biological experiments has exploded over the past few years. Here we describe the physical basis of FRET and the fluorescent proteins appropriate for these experiments. We also review the approaches that can be used to measure FRET, with particular emphasis on the potential artifacts associated with each approach.

Fluorescent protein FRET: the good, the bad and the ugly.

Les interactions entre prot&#xE9;ines et dynamique, jouent un r&#xF4;le important dans de nombreux processus cellulaires. Une technique qui semble tr&#xE8;s prometteuse dans l&#x26;#39;&#xE9;lucidation de ces interactions est F&#xF6;rster r&#xE9;sonance de transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie (FRET). Lorsqu&#x26;#39;il est combin&#xE9; avec de multiples couleurs des prot&#xE9;ines fluorescentes, FRET permis haute r&#xE9;solution spatiale de tests interactions prot&#xE9;ine-prot&#xE9;ine dans les cellules vivantes. Parce que FRET signaux sont g&#xE9;n&#xE9;ralement de petite taille, cependant, leur mesure n&#xE9;cessite une interpr&#xE9;tation prudente et des exp&#xE9;riences de contr&#xF4;le de plusieurs. N&#xE9;anmoins, l&#x26;#39;utilisation de FRET en cellules exp&#xE9;riences biologiques a explos&#xE9; au cours des derni&#xE8;res ann&#xE9;es. Nous d&#xE9;crivons ici la base physique du FRET et les prot&#xE9;ines fluorescentes appropri&#xE9;es pour ces exp&#xE9;riences. Nous avons &#xE9;galement en revue les approches qui peuvent &#xEA;tre utilis&#xE9;s pour mesurer le FRET, avec un accent particulier sur les artefacts potentiels associ&#xE9;s &#xE0; chaque approche.

La prot&#xE9;ine fluorescente FRET: le Bon, la Brute et le Truand

Dynamische Proteininteraktionen spielen einen bedeutenden Teil in vielen zellul&auml;ren Prozessen. Eine Technik, die betr&auml;chtliche Versprechung zeigt in elucidating solche Wechselwirkungen ist F&ouml;rster-Resonanz-Energie-Transfer (FRET). In Kombination mit mehreren farbigen fluoreszierende Proteine erlaubt FRET hoher r&auml;umlicher Aufl&ouml;sung Proben von Protein-Protein Interaktionen in lebenden Zellen. Da FRET-Signale in der Regel klein sind, erfordert jedoch ihre Messung, sorgf&auml;ltige Auslegung und mehrere Regelungs-Experimente. Dennoch ist die Verwendung von FRET in Zelle biologische Experimente in den letzten Jahren explodiert. Hier beschreiben wir die physische Basis der Bund und die fluoreszierende Proteine, die f&uuml;r diese Experimente geeignet. Wir &uuml;berpr&uuml;fen auch die Ans&auml;tze, die dazu dient, FRET, mit besonderem Schwerpunkt auf m&ouml;gliche Artefakte bei jedem neuen Ansatz zu messen.

Fluoreszierende Protein FRET: das gute, das schlechte und das h&auml;&szlig;liche.

Le interazioni della proteina dinamico giocano una parte importante in molti processi cellulari. Una tecnica che mostra la promessa considerevole nel chiarimento di tali interazioni &egrave; F&ouml;rster resonance energy transfer (FRET). Quando combinato con multiple, le proteine fluorescenti colorate, FRET permette dosaggi ad alta risoluzione spaziale delle interazioni della proteina-proteina in cellule viventi. Perch&eacute; segnali FRET sono solitamente di piccole dimensioni, tuttavia, loro misurazione richiede un&#39;attenta interpretazione e molti esperimenti di controllo. Tuttavia, l&#39;uso del tasto in esperimenti biologici cellulari &egrave; esploso negli ultimi anni. Qui descriviamo la base fisica di FRET e le proteine fluorescenti appropriate per questi esperimenti. Passiamo in Rassegna anche gli approcci che possono essere utilizzati per misurare la FRET, con particolare enfasi sugli artefatti potenziali associati a ogni approccio.

Proteina fluorescente FRET: il buono, il brutto e il cattivo.

&#x52D5;&#x7684;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x89E3;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x306E;&#x7D04;&#x675F;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x6280;&#x8853;&#x306F;&#x3001;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EB;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#xFF08;FRET&#xFF09;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x8907;&#x6570;&#x8272;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x308B;&#x3068;&#x3001;FRET&#x306F;&#x751F;&#x304D;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; - &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x9AD8;&#x7A7A;&#x9593;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306F;&#x901A;&#x5E38;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x306E;&#x3067;&#x3001;FRET&#x304C;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306F;&#x614E;&#x91CD;&#x306B;&#x89E3;&#x91C8;&#x3057;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3092;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3067;&#x306F;FRET&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x904E;&#x53BB;&#x6570;&#x5E74;&#x9593;&#x3067;&#x7206;&#x767A;&#x7684;&#x306B;&#x5897;&#x3048;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;FRET&#x306E;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x57FA;&#x790E;&#x3068;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306B;&#x9069;&#x3057;&#x305F;&#x86CD;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x6210;&#x679C;&#x7269;&#x306B;&#x7279;&#x306B;&#x91CD;&#x70B9;&#x3092;&#x7F6E;&#x3044;&#x3066;&#x3001;FRET&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x3066;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002;

&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;FRET&#xFF1A;&#x826F;&#x3044;&#x3001;&#x60AA;&#x3044;&#x3068;&#x919C;&#x3044;

&#xB3D9;&#xC801; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC740; &#xB9CE;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Elucidating &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC57D;&#xC18D;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; F&ouml;rster &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC; (FRET)&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC1C;&#xC758; &#xC0C9;&#xB41C; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD568;&#xAED8; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xBA74; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xACF5;&#xAC04; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; FRET &#xC2E0;&#xD638;&#xB294; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xC740;,, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xCE21;&#xC815; &#xB530;&#xB974;&#xBBC0;&#xB85C; &#xC8FC;&#xC758; &#xD574;&#xC11D;&#xACFC; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC2E4;&#xD5D8;. &#xADF8;&#xB7FC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0;, &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC740; &#xC9C0;&#xB09C; &#xBA87; &#xB144; &#xB3D9;&#xC548; &#xD3ED;&#xBC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xD558; &#xACE0;&#xC774; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xC801;&#xD569; &#xD55C; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801; &#xAE30;&#xCD08; &#xC124;&#xBA85;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC;, &#xAC01; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xBC95;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC544;&#xD2F0;&#xD329;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xBCC4; &#xD55C; &#xAC15;&#xC870;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xCE21;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xAC80;&#xD1A0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC;: &#xC88B;&#xC740;, &#xB098;&#xC05C;&#xC640; &#xCD94;&#xC545;&#xD55C;.

Las interacciones din&#xE1;micas prote&#xED;nas juegan un papel importante en muchos procesos celulares. Una t&#xE9;cnica que muestra una promesa considerable en la aclaraci&#xF3;n de tales interacciones es la resonancia de transferencia de energ&#xED;a F&#xF6;rster (FRET). Cuando se combina con prote&#xED;nas fluorescentes de colores m&#xFA;ltiples,, FRET permite ensayos de alta resoluci&#xF3;n espacial de las interacciones prote&#xED;na-prote&#xED;na en las c&#xE9;lulas vivas. Debido a que las se&#xF1;ales de FRET son generalmente peque&#xF1;os, sin embargo, su medici&#xF3;n requiere una interpretaci&#xF3;n cuidadosa y varios experimentos de control. Sin embargo, el uso de celulares en FRET experimentos biol&#xF3;gicos se ha disparado en los &#xFA;ltimos a&#xF1;os. A continuaci&#xF3;n se describe la base f&#xED;sica de FRET y las prote&#xED;nas fluorescentes adecuadas para estos experimentos. Realizamos una revisi&#xF3;n de los enfoques que se pueden utilizar para medir el FRET, con especial &#xE9;nfasis en los artefactos potenciales asociados con cada enfoque.

Prote&#xED;na fluorescente FRET: el bueno, lo malo y lo feo

&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x6210;&#x50CF;&#x663E;&#x5FAE;&#x6280;&#x672F; (FLIM) &#x662F;&#x8367;&#x5149;&#x7684;&#x6210;&#x50CF;&#x7EB3;&#x79D2;&#x8870;&#x53D8;&#x6B21;&#x6570;&#x5B9A;&#x91CF;&#x663E;&#x5FAE;&#x6280;&#x672F;&#x3002;&#x5728;&#x9891;&#x7387;&#x57DF;&#x5BBD;&#xFF0C;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E86;&#x51E0;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x8981;&#x89E3;&#x51B3;&#x76F8;&#x5BF9;&#x4E30;&#x5BCC;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8367;&#x5149;&#x7269;&#x79CD;&#x4E0D;&#x540C;&#x8367;&#x5149;&#x8870;&#x53D8;&#x65F6;&#x95F4;&#x3002;&#x5230;&#x76EE;&#x524D;&#x4E3A;&#x6B62;&#xFF0C;&#x5355;&#x9891;&#x7387;&#x7279;&#x5730;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4E00;&#x822C;&#x4E00;&#x76F4;&#x9650;&#x4E8E;&#x91CF;&#x5316;&#x4E0E; monoexponential &#x8870;&#x53D8;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7269;&#x79CD;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;multiexponential &#x8870;&#x53D8;&#x662F;&#x89C4;&#x8303;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x4F8B;&#x5916;&#xFF0C;&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#x5BF9;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x751F;&#x7269;&#x6837;&#x54C1;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x786E;&#x5B9A;&#x793A;&#x4F8B;&#x5305;&#x542B;&#x4E24;&#x4E2A; &#xFF08;multiexponentially&#xFF09; &#x8150;&#x70C2;&#x7269;&#x79CD;&#x4F7F;&#x7528;&#x5355;&#x9891;&#x5BBD;&#x7684;&#x56FE;&#x50CF;&#x4E2D;&#x7684;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x50CF;&#x7D20;&#x7684;&#x5206;&#x6570;&#x8D21;&#x732E;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6280;&#x672F;&#x5141;&#x8BB8;&#x4E24;&#x79CD;&#x5149;&#x8C31;&#x76F8;&#x540C;&#x9752;&#x8272;&#x6216;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x90FD;&#x6709; multiexponential &#x8870;&#x53D8;&#x7684;&#x4E8C;&#x5143;&#x6DF7;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x5206;&#x89E3;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x7531;&#x4E8E;&#x5176;&#x5149;&#x8C31;&#x7279;&#x6027;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5206;&#x5B50;&#x76F8;&#x5BF9;&#x4E30;&#x5EA6;&#x7684;&#x5B9A;&#x91CF;&#x56FE;&#x50CF;&#x53EF;&#x4EE5;&#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x5149;&#x8DEF;&#x65E0;&#x5173;&#x7684;&#x3002;&#x8BE5;&#x65B9;&#x6CD5;&#x662F;&#x7ECF;&#x8FC7;&#x4E25;&#x683C;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7EC4;&#x6210;&#x6837;&#x672C;&#x548C;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x4F7F;&#x7528;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x8868;&#x793A;&#x591A;&#x4E2A; (multiexponentially &#x8150;&#x70C2;) &#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x4E2D;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x3002;

Multiexponentially &#x8870;&#x51CF;&#x4F7F;&#x7528;&#x5355;&#x4E00;&#x9891;&#x7387;&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x6210;&#x50CF;&#x663E;&#x5FAE;&#x8367;&#x5149;&#x7684;&#x5206;&#x89E3;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x751F;&#x5B58;&#x671F;&#x3002;

Fluorescence lifetime imaging microscopy (FLIM) is a quantitative microscopy technique for imaging nanosecond decay times of fluorophores. In the case of frequency-domain FLIM, several methods have been described to resolve the relative abundance of two fluorescent species with different fluorescence decay times. Thus far, single-frequency FLIM methods generally have been limited to quantifying two species with monoexponential decay. However, multiexponential decays are the norm rather than the exception, especially for fluorescent proteins and biological samples. Here, we describe a novel method for determining the fractional contribution in each pixel of an image of a sample containing two (multiexponentially) decaying species using single-frequency FLIM. We demonstrate that this technique allows the unmixing of binary mixtures of two spectrally identical cyan or green fluorescent proteins, each with multiexponential decay. Furthermore, because of their spectral identity, quantitative images of the relative molecular abundance of these fluorescent proteins can be generated that are independent of the microscope light path. The method is rigorously tested using samples of known composition and applied to live cell microscopy using cells expressing multiple (multiexponentially decaying) fluorescent proteins.

Quantitative lifetime unmixing of multiexponentially decaying fluorophores using single-frequency fluorescence lifetime imaging microscopy.

Fluorescence lifetime imaging microscopy (FLIM) est une technique de microscopie quantitative d&#39;imagerie fois carie nanosecondes de fluorophores. Dans le cas de FLIM fr&eacute;quentiel, plusieurs m&eacute;thodes ont &eacute;t&eacute; d&eacute;crites pour r&eacute;soudre l&#39;abondance relative des deux esp&egrave;ces fluorescentes avec des temps de d&eacute;sint&eacute;gration de fluorescence diff&eacute;rente. Jusqu&#39;ici, monofr&eacute;quence FLIM m&eacute;thodes g&eacute;n&eacute;ralement ont &eacute;t&eacute; limit&eacute;es &agrave; la quantification des deux esp&egrave;ces avec carie monoexponentielles. Cependant, multiexponentielle d&eacute;sint&eacute;grations sont la norme plut&ocirc;t que l&#39;exception, notamment pour les prot&eacute;ines fluorescentes et des &eacute;chantillons biologiques. Nous d&eacute;crivons ici une nouvelle m&eacute;thode permettant de d&eacute;terminer la contribution fractionnaire dans chaque pixel d&#39;une image d&#39;un &eacute;chantillon contenant deux esp&egrave;ces (multiexponentially) en d&eacute;composition &agrave; l&#39;aide de FLIM de fr&eacute;quence unique. Nous d&eacute;montrons que cette technique permet la d&eacute;convolution de m&eacute;langes binaires de deux spectralement identiques cyan ou verts prot&eacute;ines fluorescentes, chacun avec une carie multiexponentielle. En outre, en raison de leur identit&eacute; spectrale, images quantitatives de l&#39;abondance relative et mol&eacute;culaire de ces prot&eacute;ines fluorescentes peuvent &ecirc;tre g&eacute;n&eacute;r&eacute;s qui sont ind&eacute;pendantes du rayon lumineux microscope. La m&eacute;thode est rigoureusement test&eacute;e &agrave; l&#39;aide d&#39;&eacute;chantillons de composition connue et appliqu&eacute;e pour vivre la microscopie des cellules &agrave; l&#39;aide de cellules exprimant plusieurs prot&eacute;ines fluorescentes (multiexponentially en d&eacute;composition).

Vie quantitative exsolution de multiexponentially en d&eacute;composition fluorophores monofr&eacute;quence fluorescence lifetime microscopie d&#39;imagerie.

Fluoreszenz-Lebensdauer-Mikroskopie (FLIM) imaging ist eine quantitative Mikroskopie-Technik f&uuml;r imaging Nanosekunden Verfall Zeiten des Fluorophore. Bei Frequenzbereich FLIM sind mehrere Methoden beschrieben worden, um die relative H&auml;ufigkeit von zwei fluoreszierende Arten mit verschiedenen Fluoreszenz Zerfall Mal zu beheben. Bisher wurden Einzel-Frequenz-FLIM-Methoden im allgemeinen begrenzt auf zwei Arten mit Monoexponential Zerfall zu quantifizieren. Multiexponential Zerf&auml;llen sind jedoch eher die Norm als die Ausnahme, speziell f&uuml;r fluoreszierende Proteine und biologischen Proben. Hier beschreiben wir eine neuartige Methode zur Bestimmung des gebrochenen Beitrags in jedes Pixel eines Bildes einer Probe mit zwei (multiexponentially) verfallende Arten mit Einzel-Frequenz-FLIM. Wir zeigen, dass diese Technik erm&ouml;glicht das entmischen von bin&auml;ren Gemischen zweier Spektral identisch Cyan oder gr&uuml;n fluoreszierende Proteine, jeweils mit multiexponential Zerfall. Dar&uuml;ber hinaus k&ouml;nnen wegen ihrer spektralen Identit&auml;t, quantitative Bilder der relative Molekulare F&uuml;lle dieser fluoreszierende Proteine erzeugt werden, die unabh&auml;ngig vom Mikroskop Strahlengang sind. Die Methode ist gr&uuml;ndlich getestet, mit Proben von bekannter Zusammensetzung und angewendet, um die Zelle Mikroskopie mit Zellen, die zum Ausdruck bringen mehrere (multiexponentially verfallenden) fluoreszierende Proteine zu leben.

Quantitative Lebensdauer entmischen multiexponentially Verwesender Fluorophore mit Einzel-Frequenz Fluoreszenzmikroskopie Lebensdauer Bildgebung.

Vita di fluorescenza (FLIM) microscopia di imaging &egrave; una tecnica di microscopia quantitativa per imaging volte decadimento nanosecondi di fluorofori. Nel caso di frequenza-dominio FLIM, sono stati descritti diversi metodi per risolvere l&#39;abbondanza relativa delle due specie fluorescenti con tempi di decadimento diversa fluorescenza. Finora, singola frequenza FLIM metodi generalmente sono stati limitati a quantificare due specie con decadimento utilizzando. Tuttavia, decadimenti multiexponential sono la norma piuttosto che l&#39;eccezione, soprattutto per le proteine fluorescenti e campioni biologici. Qui, descriviamo un nuovo metodo per determinare il contributo frazionale in ogni pixel di un&#39;immagine di un campione contenente due specie (multiexponentially) decadente utilizzando FLIM singola frequenza. Dimostriamo che questa tecnica permette di unmixing di mischie binarie di due spettralmente identiche ciano o verde fluorescente proteine, ciascuna con decadimento multiexponential. Inoltre, a causa della loro identit&agrave; spettrale, immagini quantitative dell&#39;abbondanza relativa molecolare di queste proteine fluorescenti possono essere generati che sono indipendenti del percorso della luce del microscopio. Il metodo &egrave; rigorosamente testato utilizzando campioni di composizione nota e applicata per vivere microscopia cellulare utilizzando le cellule che esprimono pi&ugrave; le proteine fluorescenti (multiexponentially decadente).

Durata quantitativa unmixing del multiexponentially decadente fluorofori utilizzando la singola frequenza fluorescenza lifetime imaging microscopia.

&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x6CD5; (FLIM) &#x30CA;&#x30CE;&#x79D2;&#x6E1B;&#x8870;&#x6642;&#x9593; fluorophores &#x306E;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x306A;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x6280;&#x8853;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; FLIM &#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5; 2 &#x3064;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x86CD;&#x5149;&#x6E1B;&#x8870;&#x6642;&#x9593;&#x86CD;&#x5149;&#x7A2E;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;&#x8C4A;&#x304B;&#x3055;&#x3092;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x8A18;&#x8F09;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x307E;&#x3067;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570; FLIM &#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x5909;&#x52D5;&#x5D29;&#x58CA;&#x3068; 2 &#x7A2E;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x306B;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;multiexponential &#x306E;&#x5D29;&#x58CA;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x306B;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x751F;&#x7269;&#x8A66;&#x6599;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4F8B;&#x5916;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30CE;&#x30EB;&#x30E0;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x306E; FLIM &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066; 2 &#x3064;&#x306E; (multiexponentially) &#x8150;&#x98DF;&#x306E;&#x7A2E;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306E;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x5404;&#x30D4;&#x30AF;&#x30BB;&#x30EB;&#x3067;&#x5C0F;&#x6570;&#x306E;&#x8CA2;&#x732E;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x624B;&#x6CD5;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30C6;&#x30AF;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF; 2 &#x3064;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x540C;&#x4E00;&#x30B7;&#x30A2;&#x30F3;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C; multiexponential &#x306E;&#x5D29;&#x58CA;&#x306E;&#x4E8C;&#x6210;&#x5206;&#x6DF7;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x8EAB;&#x5143;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x5206;&#x5B50;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x753B;&#x50CF;&#x306F;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306E;&#x5149;&#x30D1;&#x30B9;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x751F;&#x6210;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;&#x7D44;&#x6210;&#x306E;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E; (multiexponentially &#x8150;&#x6557;) &#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x306B;&#x9069;&#x7528;&#x53B3;&#x3057;&#x304F;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x5BFF;&#x547D; multiexponentially &#x5358;&#x4E00;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F; fluorophores &#x6E1B;&#x8870;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x3002;

&#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95; (FLIM) &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85; &#xB098;&#xB178;&#xCD08; &#xCDA9; &#xBC88; fluorophores&#xC758; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC591;&#xC801; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAE30;&#xC220;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; FLIM&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xB2E4;&#xB978; &#xD615;&#xAD11; &#xBD95;&#xAD34; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xD615;&#xAD11; &#xC885;&#xC758; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC778; &#xD48D;&#xBD80;&#xB97C; &#xD574;&#xACB0; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC124;&#xBA85; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xAE08;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218; FLIM &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB294; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; monoexponential &#xBD80;&#xD328;&#xC640; &#xB450; &#xC885;&#xC871;&#xC744; &#xCE21;&#xC815; &#xC81C;&#xD55C; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xC788;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, multiexponential &#xC790;&#xC5F0; &#xBD95;&#xAD34;&#xB294; &#xD2B9;&#xD788; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC608;&#xC678; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xADDC;&#xBC94;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB450; (multiexponentially) &#xC369; &#xC5B4; &#xC885; FLIM &#xB2E8;&#xC77C; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC758; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xC758; &#xAC01; &#xD53D;&#xC140;&#xC5D0; &#xC18C;&#xC218; &#xAE30;&#xC5EC;&#xB97C; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xAE30;&#xC220;&#xC740; &#xB450; spectrally &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xC2DC;&#xC548;&#xC0C9; &#xB610;&#xB294; &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, multiexponential &#xCDA9; &#xCE58;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xAC01;&#xAC01;&#xC758; &#xC774;&#xC9C4; &#xD63C;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; unmixing &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xC790;&#xC2E0;&#xC758; &#xC815;&#xCCB4;&#xC131; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB300; &#xBD84;&#xC790;&#xC774; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD48D;&#xC694;&#xB85C; &#xC6C0;&#xC758; &#xC591;&#xC801; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xC0DD;&#xC131;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xBE5B; &#xACBD;&#xB85C; &#xB3C5;&#xB9BD;. &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB294; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xAD6C;&#xC131;&#xC758; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xC5EC;&#xB7EC; (multiexponentially &#xBD80;&#xD328;) &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC140;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC140; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC5C4;&#xACA9; &#xD558; &#xAC8C; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;.

&#xC815;&#xB7C9;&#xC801; &#xC218;&#xBA85; multiexponentially fluorophores &#xB2E8;&#xC77C; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218; &#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85; &#xC601;&#xC0C1; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC369; &#xC5B4;&#xC758; unmixing.

Vida de fluorescencia im&aacute;genes de microscop&iacute;a (FLIM) es una t&eacute;cnica de microscop&iacute;a cuantitativa para tiempos de decaimiento de nanosegundo de fluor&oacute;foros la proyecci&oacute;n de imagen. En el caso de FLIM de dominio de la frecuencia, se han descrito varios m&eacute;todos para resolver la abundancia relativa de dos especies fluorescentes con tiempos de decaimiento de fluorescencia diferentes. Hasta el momento, m&eacute;todos FLIM de frecuencia &uacute;nica generalmente se han limitado a cuantificar dos especies con decaimiento de monoexponential. Sin embargo, multiexponential caries son la norma en lugar de la excepci&oacute;n, especialmente para prote&iacute;nas fluorescentes y muestras biol&oacute;gicas. Aqu&iacute;, describimos un nuevo m&eacute;todo para determinar la contribuci&oacute;n fraccional en cada p&iacute;xel de una imagen de una muestra que contiene dos especies (multiexponentially) que se decae con FLIM de frecuencia &uacute;nica. Demostramos que esta t&eacute;cnica permite la desmezclar de mezclas binarias de dos espectralmente cyan o verdes fluorescentes prote&iacute;nas id&eacute;nticas, cada una con caries multiexponential. Adem&aacute;s, debido a su identidad espectral, im&aacute;genes cuantitativas de la abundancia relativa de molecular de estas prote&iacute;nas fluorescentes pueden generarse que son independientes de la trayectoria de la luz de microscopio. El m&eacute;todo es probado rigurosamente utilizando muestras de composici&oacute;n conocida y aplicada para vivir la microscop&iacute;a celular utilizando las c&eacute;lulas que expresan m&uacute;ltiples prote&iacute;nas fluorescentes (multiexponentially descomposici&oacute;n).

Vida cuantitativa desmezclar de multiexponentially que se decae fluor&oacute;foros utilizando im&aacute;genes microscop&iacute;a de fluorescencia de frecuencia &uacute;nica de por vida.

&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x53D8;&#x6210;&#x8282;&#x80FD;&#x706F;&#x6CE1;&#x3002;

Turning fluorescent proteins into energy-saving light bulbs.

Mise en prot&#xE9;ines fluorescentes Ampoules &#xE0; &#xE9;conomie d&#x26;#39;&#xE9;nergie

Fluoreszierende Proteine in energiesparende Gl&uuml;hbirnen zu verwandeln.

Trasformando le proteine fluorescenti in lampadine a risparmio energetico.

&#x7701;&#x30A8;&#x30CD;&#x578B;&#x96FB;&#x7403;&#x306B;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x56DE;&#x3059;

&#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC808;&#xC57D; &#xC804;&#xAD6C; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC120;&#xD68C;.

En cuanto a prote&#xED;nas fluorescentes bombillas de ahorro de energ&#xED;a

&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x8FD9; photoconversion 8 12 &#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x5C4F;&#x5E55;&#xFF0C;&#x5C55;&#x51FA; photoconversion &#x662F;&#x6A59;&#x8272;&#x548C;&#x7EA2;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x76F8;&#x5F53;&#x5E38;&#x89C1;&#x3002;&#x5177;&#x4F53;&#x6765;&#x8BF4;&#xFF0C;&#x4E09;&#x79CD;&#x7EA2;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5207;&#x6362;&#x5230;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7EFF;&#x8272;&#x7684;&#x56FD;&#x5BB6;&#xFF0C;&#x548C;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6A59;&#x8272;&#x53D8;&#x79CD;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F; photoconverted &#x5230;&#x8FDC;&#x7EA2;&#x7684;&#x72B6;&#x6001;&#x3002;&#x6A59;&#x8272;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x53CC;&#x63A2;&#x9488;&#x8367;&#x5149;&#x7B14;&#x5E94;&#x7528;&#x7684;&#x7406;&#x60F3;&#x9009;&#x62E9;&#xFF0C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5C55;&#x51FA;&#x8FC4;&#x4ECA;&#x6240;&#x8FF0;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x6700;&#x7EA2;&#x79FB;&#x6FC0;&#x52B1;&#x3002;

&#x6A59;&#x8272;&#x548C;&#x7EA2;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x4E2D;&#x7684; Photoconversion&#x3002;

We found that photoconversion is fairly common among orange and red fluorescent proteins, as in a screen of 12 proteins, 8 exhibited photoconversion. Specifically, three red fluorescent proteins could be switched to a green state, and two orange variants could be photoconverted to a far-red state. The orange proteins are ideal for dual-probe highlighter applications, and they exhibited the most red-shifted excitation of all fluorescent proteins described to date.

Photoconversion in orange and red fluorescent proteins.

Nous avons constat&#xE9; que photoconversion est assez courante chez orange et rouge des prot&#xE9;ines fluorescentes, comme dans un &#xE9;cran de 12 prot&#xE9;ines, 8 pr&#xE9;sentaient photoconversion. Plus pr&#xE9;cis&#xE9;ment, trois prot&#xE9;ines fluorescentes rouges pouvaient &#xEA;tre ramen&#xE9;s &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;tat vert, d&#x26;#39;orange et deux variantes pourraient &#xEA;tre photoconverted &#xE0; un &#xE9;tat d&#x26;#39;extr&#xEA;me rouge. Les prot&#xE9;ines sont oranges id&#xE9;al pour les applications surligneur double sonde, et ils ont fait preuve l&#x26;#39;excitation la plus d&#xE9;cal&#xE9;e vers le rouge de toutes les prot&#xE9;ines fluorescentes d&#xE9;crites &#xE0; ce jour.

Photoconversion en orange et rouge prot&#xE9;ines fluorescentes

Wir fanden, dass Photoconversion ziemlich h&auml;ufig bei orange und rot fluoreszierende Proteine, da in einem Bildschirm 12 Proteine, 8 Photoconversion ausgestellt. Insbesondere k&ouml;nnte drei rot fluoreszierende Proteine zu einem gr&uuml;nen Zustand umgeschaltet werden konnte, und zwei orange Varianten Photoconverted eine dunkelrote Zustand. Orange Proteine sind ideal f&uuml;r Dual-Probe-Textmarker-Anwendungen, und sie stellte die meisten Rot-verschoben Anregung aller fluoreszierende Proteine, die bisher beschrieben.

Photoconversion in orange und rot fluoreszierende Proteine.

Abbiamo trovato che photoconversion &egrave; abbastanza comune tra le proteine fluorescenti arancione e rosse, come in uno schermo di 12 proteine, 8 esposto photoconversion. In particolare, tre proteine fluorescenti rosse potrebbero essere commutate allo stato verde e due varianti arancione potrebbero essere photoconverted ad uno stato far-red. Le proteine arancione sono ideali per le applicazioni dual-sonda evidenziatore, e hanno esposto l&#39;eccitazione pi&ugrave; rosso-spostato di tutte le proteine fluorescenti descritto finora.

Photoconversion di proteine fluorescenti arancione e rosse.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x5149;&#x96FB;&#x306F;&#x3001;12&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;8&#x306F;&#x5149;&#x5909;&#x63DB;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x30AA;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B8;&#x8272;&#x3068;&#x8D64;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5206;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x3001;3&#x8D64;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x7DD1;&#x8272;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x5207;&#x308A;&#x66FF;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x3001;&#x4E8C;&#x3064;&#x306E;&#x30AA;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B8;&#x8272;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x9060;&#x8D64;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;photoconverted&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AA;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B8;&#x8272;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x30C7;&#x30E5;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x86CD;&#x5149;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x6700;&#x9069;&#x3067;&#x3059;&#x3001;&#x305D;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x307E;&#x3067;&#x306B;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C9;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x52B1;&#x8D77;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30AA;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B8;&#x3068;&#x8D64;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5149;&#x96FB;

&#xADF8; photoconversion&#xC740; &#xC624;&#xB80C;&#xC9C0;&#xC640; &#xBE68;&#xAC04;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC911; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD788; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801; 12 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD654;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; 8 photoconversion &#xC804;&#xC2DC;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD2B9;&#xD788;, 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xBD89;&#xC740; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB179;&#xC0C9; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB97C; &#xC804;&#xD658;&#xD560; &#xC218; &#xBC0F; &#xB450; &#xC624;&#xB80C;&#xC9C0; &#xBCC0;&#xC885; &#xC9C0;&#xAE08; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB97C; photoconverted &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC624;&#xB80C;&#xC9C0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB4C0;&#xC5BC;-&#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xD615;&#xAD11;&#xD39C; &#xC560;&#xD50C;&#xB9AC;&#xCF00;&#xC774;&#xC158;&#xC5D0; &#xC774;&#xC0C1;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xB0A0;&#xC9DC;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xB294; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5; &#xB808;&#xB4DC; &#xC774;&#xB3D9; &#xC5EC;&#xAE30; &#xC804;&#xC2DC;.

&#xC8FC;&#xD669;&#xC0C9;&#xACFC; &#xBE68;&#xAC04;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0;&#xC11C; Photoconversion&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Hemos encontrado que fotoconversi&#xF3;n es bastante com&#xFA;n entre las prote&#xED;nas fluorescentes de color naranja y rojo, como en una pantalla de 12 prote&#xED;nas, 8 exhibi&#xF3; fotoconversi&#xF3;n. En concreto, tres prote&#xED;nas fluorescentes rojas, podr&#xED;an reconvertirse en un estado verde, y dos variantes de color naranja podr&#xED;a photoconverted a un estado rojo lejano. Las prote&#xED;nas de color naranja son ideales para aplicaciones de resaltado de doble sonda, y exhibieron una excitaci&#xF3;n m&#xE1;s desplazada hacia el rojo de todas las prote&#xED;nas fluorescentes descritas hasta la fecha.

Fotoconversi&#xF3;n prote&#xED;nas fluorescentes en naranja y rojo

&#x82E5;&#x8981;&#x5728;&#x65E9;&#x671F;&#x4E73;&#x817A;&#x764C;&#x8F6C;&#x79FB;&#x671F;&#x95F4;&#x68C0;&#x67E5;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86; ex &#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5916;&#x690D;&#x4F53;&#x4F7F;&#x7528;&#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x6D3B;&#x4F53;&#x6210;&#x50CF;&#x6280;&#x672F;&#x3002;&#x7531;&#x540C;&#x4E00;&#x7624;&#x4E2D;&#x95F4;&#x7684; T &#x53D1;&#x8D77;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4E73;&#x817A;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x7684;&#x6CE8;&#x5C04;&#x540E;&#x5F71;&#x50CF;&#x5B66;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x673A;&#x6784;&#x5728;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x70B9;&#x6BD4;&#x8F83;&#x4E86;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x809D;&#x548C;&#x80BA;&#x3002;&#x80BA;&#x4E0E;&#x809D;&#xFF0C;&#x6709; 56%&#x7684;&#x809D;&#x7600;&#x6709;&#x75C7; 24 &#x5C0F;&#x65F6;&#x76F8;&#x6BD4;&#x53EA;&#x6709; 22%&#x7684;&#x80BA;&#x5185;&#x6709;&#x7600;&#x75C7;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x6BD4;&#x5927;&#x5927;&#x51CF;&#x5C11;&#x5916;&#x6E17;&#x3002;&#x5728;&#x809D;&#x810F;&#x3001; &#x6620;&#x50CF;&#x5230;&#x8840;&#x7BA1;&#x5916;&#x7684;&#x7F51;&#x7AD9;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x8840;&#x7BA1;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x4E0D;&#x65AD;&#x8F6C;&#x6362;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x800C;&#x5728;&#x80BA;&#x91CC;&#x5916;, &#x6E17;&#x7387;&#x653E;&#x7F13;&#x540E; 6 &#x4E2A;&#x5C0F;&#x65F6;&#x3002;&#x809D;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x5185;&#x7684;&#x6210;&#x50CF;&#x4E2D;&#x5FAE;&#x8F6C;&#x79FB;&#x75C5;&#x53D8;&#x7684;&#x5E73;&#x5747;&#x5927;&#x5C0F;&#x589E;&#x52A0;&#x9E21;&#x6C41;&#x5929; 5 &#x548C; 12 &#x4E4B;&#x95F4;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x75C5;&#x53D8;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86; 12 &#x5929;&#xFF0C;&#x5FAE;&#x8F6C;&#x79FB;&#x662F;&#x5F02;&#x7C7B;&#xFF0C;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x8840;&#x53CB;&#x75C5;&#x56E0;&#x5B50;&#x6297;&#x4F53;&#x9633;&#x6027;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;&#x4E0E;&#x9759;&#x8109;&#x6EF4;&#x6CE8;&#x7BA1;&#x7406;&#x51DD;&#x96C6;&#x7D20;&#x7684;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x4E2D;&#x5FAE;&#x8F6C;&#x79FB;&#x80BF;&#x7624;&#x75C5;&#x7076;&#x5185;&#x7684;&#x8239;&#x53EA;&#x7684;&#x7B2C; 12 &#x5929;&#x4E13;&#x5229;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x76EE;&#x524D;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x76F4;&#x63A5;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4F7F;&#x7528;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x4E2D;&#x6BD4;&#x8F83;&#x5916;&#x6E17;&#x65F6;&#x95F4;&#x5E76;&#x7A81;&#x51FA;&#x663E;&#x793A;&#x5728;&#x65E9;&#x671F;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x548C;&#x8F6C;&#x79FB;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7684;&#x4E73;&#x817A;&#x80BF;&#x7624;&#x4E0E;&#x672A;&#x6765;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x8F85;&#x52A9;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;

&#x5FEB;&#x901F;&#x6E17;&#x548C;&#x4E73;&#x623F;&#x764C;&#x5FAE;&#x8F6C;&#x79FB;&#x809D;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x7684;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x3002;

To examine the interplay between tumor cells and the microenvironment during early breast cancer metastasis, we developed a technique for ex vivo imaging of murine tissue explants using two-photon microscopy. Cancer cells in the liver and the lung were compared by imaging both organs at specific time points after the injection of the same polyomavirus middle T-initiated murine mammary tumor cell line. Extravasation was greatly reduced in the lung compared with the liver, with 56% of tumor cells in the liver having extravasated by 24 hours, compared with only 22% of tumor cells in the lung that have extravasated. In the liver, imaged cells continually transitioned from an intravascular location to an extravascular site, whereas in the lung, extravasation rates slowed after 6 hours. Within the liver microenvironment, the average size of the imaged micrometastatic lesions increased 4-fold between days 5 and 12. Histologic analysis of these lesions determined that by day 12, the micrometastases were heterogeneous, consisting of both tumor cells and von Willebrand factor-positive endothelial cells. Further analysis with intravenously administered lectin indicated that vessels within the micrometastatic tumor foci were patent by day 12. These data present the use of two-photon microscopy to directly compare extravasation times in metastatic sites using the same tumor cell line and highlight the differences in early events and metastatic patterns between two important secondary sites of breast cancer progression with implications for future therapy.

Rapid extravasation and establishment of breast cancer micrometastases in the liver microenvironment.

Pour examiner l&#x26;#39;interaction entre les cellules tumorales et le microenvironnement au cours des m&#xE9;tastases du cancer du sein pr&#xE9;coce, nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; une technique pour ex vivo d&#x26;#39;imagerie des explants de tissu murin en utilisant la microscopie &#xE0; deux photons. Les cellules canc&#xE9;reuses dans le foie et le poumon ont &#xE9;t&#xE9; compar&#xE9;es par les deux organes d&#x26;#39;imagerie &#xE0; des moments pr&#xE9;cis apr&#xE8;s l&#x26;#39;injection du polyomavirus m&#xEA;me milieu T-initi&#xE9; lign&#xE9;e murine de cellules tumorales mammaires. L&#x26;#39;extravasation a &#xE9;t&#xE9; consid&#xE9;rablement r&#xE9;duite dans le poumon par rapport &#xE0; la foie, avec 56% des cellules tumorales dans le foie apr&#xE8;s avoir &#xE9;panch&#xE9; par 24 heures, comparativement &#xE0; seulement 22% des cellules tumorales dans le poumon qui ont &#xE9;panch&#xE9;. Dans le foie, les cellules imag&#xE9;es en permanence la transition d&#x26;#39;une situation intravasculaire &#xE0; un site extravasculaire, alors que dans le poumon, les taux d&#x26;#39;extravasation ralenti apr&#xE8;s 6 heures. Dans le microenvironnement du foie, la taille moyenne des l&#xE9;sions imag&#xE9;es microm&#xE9;tastatiques a augment&#xE9; de 4 fois entre les jours 5 et 12. L&#x26;#39;analyse histologique de ces l&#xE9;sions a d&#xE9;termin&#xE9; que le jour 12, les microm&#xE9;tastases &#xE9;taient h&#xE9;t&#xE9;rog&#xE8;nes, compos&#xE9; de deux cellules tumorales et le facteur von Willebrand-positifs des cellules endoth&#xE9;liales. Une analyse plus pouss&#xE9;e avec la lectine administr&#xE9; par voie intraveineuse a indiqu&#xE9; que les navires au sein de la tumeur microm&#xE9;tastatique foyers &#xE9;taient perm&#xE9;ables au jour 12. Ces donn&#xE9;es pr&#xE9;sentent l&#x26;#39;utilisation de la microscopie biphotonique de comparer directement fois extravasation dans les sites m&#xE9;tastatiques en utilisant la lign&#xE9;e tumorale m&#xEA;me cellule et mettre en &#xE9;vidence les diff&#xE9;rences entre les &#xE9;v&#xE9;nements pr&#xE9;coces et l&#x26;#39;&#xE9;volution m&#xE9;tastatique entre deux importants sites secondaires de la progression du cancer du sein avec des implications pour les futurs traitements.

L&#x26;#39;extravasation rapide et l&#x26;#39;&#xE9;tablissement de cancer du sein microm&#xE9;tastases dans le micro-environnement du foie

Um das Zusammenspiel zwischen Tumorzellen und das Mikromilieu w&auml;hrend der fr&uuml;hen Brustkrebs Krebs Metastasen zu untersuchen, entwickelten wir eine Technik f&uuml;r ex-Vivo Bildgebung des murinen Gewebe Explantaten mit zwei-Photonen-Mikroskopie. Krebszellen in der Leber und Lunge wurden von imaging beide Organe zu bestimmten Zeitpunkten nach der Injektion der gleichen Polyomaviridae mittleren T initiierte murinen Milch-Tumor Zelle Zeile verglichen. Paravasation wurde stark reduziert, in der Lunge, der Leber, mit 56 % der Tumorzellen in die Leber, dass Bedarfs von 24 Stunden, verglichen mit nur 22 % der Tumorzellen in der Lunge, die Bedarfs haben gegen&uuml;ber. In der Leber abgebildet Zellen kontinuierlich umgestellt von einer intravasale Lage zu einer extravaskul&auml;ren Site, w&auml;hrend in der Lunge, Paravasation Preise nach 6 Stunden verlangsamt. Innerhalb der Leber Mikromilieu, stieg die durchschnittliche Gr&ouml;&szlig;e der abgebildeten Micrometastatic L&auml;sionen 4-fach zwischen 5 und 12 Tagen. Histologische Analyse dieser L&auml;sionen festgestellt, dass am Tag 12 der Micrometastases heterogen, bestehend aus Tumorzellen und von-Willebrand-Faktor-positivem Endothelzellen wurden. Weitere Analyse mit intraven&ouml;s verabreichten Lektin zeigten, dass Schiffe innerhalb der Micrometastatic Tumor Herde von Tag 12 patent waren. Diese Daten stellen die Verwendung von zwei-Photonen-Mikroskopie direkt vergleichen Paravasation Mal in metastasiertem Websites mit die gleichen Tumor-Zelllinie und markieren Sie die Unterschiede im fr&uuml;hen Ereignisse und metastasiertem Muster zwischen zwei wichtige sekund&auml;re Standorte der Brust Fortschreiten mit Auswirkungen auf die zuk&uuml;nftige Therapie.

Schnelle Paravasation und Einrichtung von Brust-Krebs-Micrometastases in der Leber Mikromilieu.

Per esaminare l&#39;interazione tra cellule tumorali e il microambiente durante primi metastasi di cancro al seno, abbiamo sviluppato una tecnica per ex vivo imaging di espianti di tessuto murino mediante microscopia del due-fotone. Le cellule tumorali nel fegato e del polmone sono state confrontate da imaging entrambi gli organi a punti temporali specifici dopo l&#39;iniezione della stessa linea cellulare poliomavirus medio tumore mammario murino T-avviato. Stravaso &egrave; stato notevolmente ridotto nel polmone confrontato con il fegato, con il 56% delle cellule tumorali nel fegato avendo travasatosi di 24 ore, rispetto a solo il 22% delle cellule del tumore del polmone che hanno travasatosi. Nel fegato, imaged cellule continuamente la transizione da una posizione intravascolare a un sito extravascolare, considerando che nel polmone, tariffe stravaso rallentarono dopo 6 ore. All&#39;interno del fegato microambiente, la dimensione media delle lesioni micrometastatic immagine aumentata 4 volte tra i giorni 5 e 12. Analisi istologica di queste lesioni determinato che dal giorno 12, i micrometastases erano eterogenei, che consiste di cellule tumorali e cellule endoteliali positivo fattore di von Willebrand. Un&#39;ulteriore analisi con lectina somministrato per via endovenosa hanno indicato che i vasi entro i focolai di tumore micrometastatic erano brevetti da giorno 12. Questi dati presentano l&#39;uso della microscopia del due-fotone per direttamente confrontare tempi stravaso in siti metastatici utilizzando la stessa linea cellulare tumorale ed evidenziare le differenze nei modelli metastatici e primi eventi tra due importanti siti secondari di progressione del cancro al seno con implicazioni per la terapia del futura.

Rapido stravaso e istituzione di micrometastases cancro al seno nel microambiente del fegato.

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&#xC2E0;&#xC18D;&#xD55C; &#xB118;&#xCCD0; &#xD750;&#xB984; &#xBC0F; &#xC720; &#xBC29; &#xC554; &#xAC04; microenvironment&#xC5D0; micrometastases&#xC758; &#xC124;&#xB9BD;.

Para examinar la interacci&#xF3;n entre las c&#xE9;lulas tumorales y el microambiente de la met&#xE1;stasis temprana en el c&#xE1;ncer de mama, hemos desarrollado una t&#xE9;cnica para la ex vivo de im&#xE1;genes de los explantes de tejidos de rat&#xF3;n utilizando microscop&#xED;a de dos fotones. Las c&#xE9;lulas de c&#xE1;ncer en el h&#xED;gado y el pulm&#xF3;n fueron comparados por im&#xE1;genes de ambos &#xF3;rganos en los puntos de tiempo espec&#xED;ficos despu&#xE9;s de la inyecci&#xF3;n de la misma media poliomavirus T-iniciado l&#xED;nea mamaria murino de c&#xE9;lulas tumorales. La extravasaci&#xF3;n se reduce en gran medida en el pulm&#xF3;n en comparaci&#xF3;n con el h&#xED;gado, con el 56% de las c&#xE9;lulas tumorales en el h&#xED;gado despu&#xE9;s de haber extravasado a las 24 horas, en comparaci&#xF3;n con s&#xF3;lo el 22% de las c&#xE9;lulas tumorales en el pulm&#xF3;n que se han extravasado. En el h&#xED;gado, las c&#xE9;lulas con imagen continuamente la transici&#xF3;n desde una ubicaci&#xF3;n intravascular a un sitio extravascular, mientras que en el pulm&#xF3;n, las tasas de extravasaci&#xF3;n disminuy&#xF3; despu&#xE9;s de 6 horas. Dentro del microentorno del h&#xED;gado, el tama&#xF1;o medio de las lesiones micrometast&#xE1;sicas fotografiados aument&#xF3; 4-pliegue entre los d&#xED;as 5 y 12. El an&#xE1;lisis histol&#xF3;gico de las lesiones determinaron que el d&#xED;a 12, las micromet&#xE1;stasis fueron heterog&#xE9;neos, que consiste en las c&#xE9;lulas tumorales y von Willebrand factor positivo las c&#xE9;lulas endoteliales. Un an&#xE1;lisis m&#xE1;s detallado con lectina administrado por v&#xED;a intravenosa se indica que los vasos dentro del tumor micrometast&#xE1;sica focos eran permeables por d&#xED;a 12. Estos datos presentan el uso de la microscopia de dos fotones de comparar directamente los tiempos de la extravasaci&#xF3;n de los sitios de met&#xE1;stasis mediante la l&#xED;nea de c&#xE9;lulas tumorales misma y poner de relieve las diferencias en los eventos tempranos y patrones metast&#xE1;sicos entre dos importantes sitios secundarios de la progresi&#xF3;n del c&#xE1;ncer de mama, con implicaciones para la terapia del futuro.

La extravasaci&#xF3;n r&#xE1;pida y el establecimiento de C&#xE1;ncer de Mama micromet&#xE1;stasis en el microambiente del h&#xED;gado

&#x4E00;&#x76EE;&#x4E86;&#x7136;&#x7684;&#x8424;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;

Fluorescent proteins at a glance.

Les prot&#xE9;ines fluorescentes &#xE0; un coup d&#x26;#39;oeil

Fluoreszierende Proteine auf einen Blick.

Proteine fluorescenti in un colpo d&#39;occhio.

&#x4E00;&#x76EE;&#x3067;&#x308F;&#x304B;&#x308B;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;

&#xD55C; &#xB208;&#xC5D0; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Las prote&#xED;nas fluorescentes de un vistazo

Nanoprobe (HINP) &#x7684;&#x5F71;&#x50CF;&#x5B66;&#x67D3;&#x5305;&#x8986;&#x5242;&#x6DF7;&#x5408;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x53EF;&#x89C1;&#x548C;&#x8FD1;&#x7EA2;&#x5916; (NIR) &#x53D1;&#x5149;&#x62F4; (SPIO) &#x7684;&#x8D85;&#x987A;&#x78C1;&#x6027;&#x6C27;&#x5316;&#x94C1;&#x7EB3;&#x7C73;&#x7C92;&#x5B50;&#x7684;&#x91CF;&#x5B50;&#x70B9; &#xFF08;&#x91CF;&#x5B50;&#xFF09; &#x53D1;&#x8FBE;&#x56FD;&#x5BB6;&#x3002;&#x8868;&#x9762;&#x6539;&#x6027;&#x7684;&#x91CF;&#x5B50;&#x548C;&#x78C1;&#x6027;&#x7EB3;&#x7C73;&#x6750;&#x6599;&#x9897;&#x7C92;&#x548C;&#x53CC;&#x91CF;&#x5B50;&#x78C1;&#x6027;&#x7EB3;&#x7C73;&#x6750;&#x6599;&#x5185;&#x7EB3;&#x5165;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x52A8;&#x6001;&#x5149;&#x6563;&#x5C04; &#xFF08;DLS&#xFF09;&#x3001; &#x77F3;&#x82F1;&#x6676;&#x4F53;&#x5FAE;&#x5929;&#x5E73; (QCM) &#x5206;&#x6790;&#x548C;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C; &#xFF08;AFM&#xFF09;&#x3002;&#x5438;&#x6536;&#x548C;&#x5149;&#x81F4;&#x53D1;&#x5149;&#x5149;&#x8C31;&#x548C;&#x8367;&#x5149;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x5149;&#x5BF9;&#x6BD4;&#x7684; HINP &#x5C5E;&#x6027;&#x3002;&#x591A;&#x8272; HINP &#x7528;&#x4E8E;&#x8FC1;&#x79FB;&#x7684;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE; (Dc) &#x7531;&#x5149;&#x5B66;&#x3001; &#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x548C;&#x78C1;&#x5171;&#x632F;&#x6210;&#x50CF;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x5F71;&#x50CF;&#x3002;&#x4ECE;&#x4E34;&#x5E8A;&#x7F16;&#x8F91;&#x5668;&#xFF1A; &#x67D3;&#x5305;&#x8986;&#x5242;&#x6DF7;&#x5408;&#xFF0C;nanoprobe (HINP) &#x7684;&#x5F71;&#x50CF;&#x5B66;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x53EF;&#x89C1;&#x548C;&#x8FD1;&#x7EA2;&#x5916;&#x53D1;&#x5149;&#x672C;&#x6587;&#x62A5;&#x9053;&#x62F4;&#x8D85;&#x987A;&#x78C1;&#x6027;&#x6C27;&#x5316;&#x94C1;&#x7EB3;&#x7C73;&#x7C92;&#x5B50;&#x7684;&#x91CF;&#x5B50;&#x70B9; &#xFF08;&#x91CF;&#x5B50;&#xFF09; &#x7EC4;&#x6210;&#x3002;&#x591A;&#x8272; HINP &#x7528;&#x4E8E;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x5149;&#x5B66;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x3001; &#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x548C;&#x78C1;&#x5171;&#x632F;&#x6210;&#x50CF;&#x6280;&#x672F;&#x3002;

&#x591A;&#x5F0F;&#x8054;&#x8FD0;&#x6210;&#x50CF;&#x7814;&#x7A76;&#x4F7F;&#x7528;&#x65B0;&#x578B;&#x6DF7;&#x5408;&#x78C1;&#x5149; nanoprobe &#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

A transfecting agent-coated hybrid imaging nanoprobe (HINP) composed of visible and near-infrared (NIR) light emitting quantum dots (QDs) tethered to superparamagnetic iron oxide (SPIO) nanoparticles was developed. The surface modification of QDs and SPIO particles and incorporation of dual QDs within the SPIO were characterized by dynamic light scattering (DLS), quartz crystal microbalance (QCM) analysis and atomic force microscopy (AFM). The optical contrasting properties of HINP were characterized by absorption and photoluminescence spectroscopy and fluorescence imaging. Multicolor HINP was used in imaging the migration of dendritic cells (DCs) by optical, two-photon and magnetic resonance imaging techniques. FROM THE CLINICAL EDITOR: The development of a transfecting agent-coated hybrid imaging nanoprobe (HINP) composed of visible and near-infrared light emitting quantum dots (QDs) tethered to superparamagnetic iron oxide nanoparticles is reported in this paper. Multicolor HINP was used in imaging the migration of dendritic cells by optical, two-photon and magnetic resonance imaging techniques.

Multimodal imaging of dendritic cells using a novel hybrid magneto-optical nanoprobe.

Un hybride d&#39;enduit agent de transfection imagerie nanoprobe (HINP) compos&eacute; de visible et proche infrarouge (NIR) &eacute;mettant de la lumi&egrave;re quantum dots (QDs) attach&eacute;s aux nanoparticules superparamagn&eacute;tiques d&#39;oxyde de fer (SPIO) a &eacute;t&eacute; d&eacute;velopp&eacute;e. La modification de la surface des QDs et SPIO les particules et l&#39;incorporation des QDs doubles au sein de la SPIO ont &eacute;t&eacute; caract&eacute;ris&eacute;s par diffusion dynamique de la lumi&egrave;re (DLS), analyse (QCM) microbalance &agrave; cristal de quartz et microscopie &agrave; force atomique (AFM). Les propri&eacute;t&eacute;s optiques et contrast&eacute;es de HINP ont &eacute;t&eacute; caract&eacute;ris&eacute;es par spectroscopie d&#39;absorption et de photoluminescence et imagerie de fluorescence. HINP multicolore a &eacute;t&eacute; utilis&eacute; dans l&#39;imagerie de la migration des cellules dendritiques (CD), de l&#39;optique, les deux photons et les techniques d&#39;imagerie par r&eacute;sonance magn&eacute;tique. LE r&eacute;dacteur en chef de clinique : Le d&eacute;veloppement d&#39;un hybride d&#39;enduit agent de transfection d&#39;imagerie nanoprobe (HINP) compos&eacute; de la lumi&egrave;re visible et proche infrarouge &eacute;mettant des quantum dots (QDs) attach&eacute;s &agrave; superparamagnetic iron oxide nanoparticles est rapport&eacute; dans cet article. HINP multicolore a &eacute;t&eacute; utilis&eacute; dans l&#39;imagerie de la migration des cellules dendritiques de l&#39;optique, les deux photons et les techniques d&#39;imagerie par r&eacute;sonance magn&eacute;tique.

Imagerie multimodale des cellules dendritiques en utilisant un nanoprobe magn&eacute;to-optiques de nouveaux hybrides.

Ein transfecting Agent-beschichtete Hybrid imaging Nanosonde (HINP) aus sichtbaren und nahen Infrarot (NIR) Leuchtdioden Quantenpunkte (QDs) angebunden mit superparamagnetischen Eisenoxid (SPIO) Nanopartikeln entwickelt wurde. Die Oberfl&#x102; &curren; chenbehandlung QDs und SPIO Partikel und Einbeziehung der dual QDs innerhalb der SPIO wurden durch dynamische Lichtstreuung (DLS), Quarz Kristall Mikrowaage (QCM) Analyse und Rasterkraftmikroskopie (AFM) gekennzeichnet. Die kontrastierenden optischen Eigenschaften HINP waren gekennzeichnet durch Absorption und Photolumineszenz-Spektroskopie und Fluoreszenz-Imaging. Multicolor HINP wurde in imaging die Migration von dendritischen Zellen (DCs) durch optische, zwei-Photonen und Magnetresonanz-Bildgebung-Techniken verwendet. AUS der klinischen EDITOR: Die Entwicklung eines transfecting Agent-beschichtete Hybriden imaging Nanosonde (HINP) setzt sich aus sichtbaren und nahen Infrarot Leuchtdioden Quantenpunkte (QDs) angebunden, superparamagnetischen Eisenoxid-Nanopartikeln in diesem Papier gemeldet werden. Multicolor HINP wurde in imaging die Migration von dendritischen Zellen durch optische, zwei-Photonen und Magnetresonanz-Bildgebung-Techniken verwendet.

Multimodale Bildgebung von dendritischen Zellen mit einem neuartigen Hybrid Magneto-optische Nanosonde.

Un ibrido di agente-coated transfecting imaging nanosonda (HINP) composta di visibile e vicino infrarosso (NIR) luminosa punti quantici (QDs) legati alle nanoparticelle di ossido di ferro superparamagnetico (SPIO) &egrave; stato sviluppato. La modificazione superficiale di QDs e SPIO particelle e l&#39;incorporazione della dual QDs entro lo SPIO erano caratterizzate da diffusione dinamica della luce (DLS), cristalli di quarzo (QCM) microbilancia analisi e microscopia a forza atomica (AFM). Le propriet&agrave; ottiche contrastanti di HINP sono state caratterizzate da fluorescenza imaging e spettroscopia di assorbimento e fotoluminescenza. HINP multicolor &egrave; stato utilizzato in imaging la migrazione delle cellule dendritiche (DCs) dall&#39;ottico, due-fotone e tecniche di risonanza magnetica. DA CLINICAL EDITOR: Lo sviluppo di un ibrido di agente-coated transfecting imaging nanosonda (HINP) &egrave; composta da luce visibile e nel vicino infrarosso che emettono punti quantici (QDs) nanoparticelle di ossido di ferro legato a superparamagnetico sono riferita in questa carta. HINP multicolor &egrave; stato utilizzato in imaging la migrazione delle cellule dendritiche da ottico, due-fotone e tecniche di risonanza magnetica.

Imaging multimodale delle cellule dendritiche usando un romanzo ibrido magneto-ottico nanosonda.

&#x30CA;&#x30CE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6; (HINP) &#x3092;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0; transfecting &#x5264;&#x5857;&#x5E03;&#x306E;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x8868;&#x793A;&#x306E;&#x4F5C;&#x66F2;&#x3057;&#x3001;&#x8FD1;&#x8D64;&#x5916; &#xFF08;NIR&#xFF09; &#x767A;&#x5149;&#x30CA;&#x30CE;&#x7C92;&#x5B50;&#x8D85;&#x5E38;&#x78C1;&#x6027;&#x9178;&#x5316;&#x9244; (SPIO) &#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308C;&#x305F;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8; (Qd) &#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8868;&#x9762;&#x6539;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068; SPIO &#x306E;&#x7C92;&#x5B50;&#x3084;&#x6DF7;&#x5165; SPIO &#x5185;&#x4E8C;&#x91CD;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x5149;&#x6563;&#x4E71; (DLS)&#x3001;&#x6C34;&#x6676;&#x632F;&#x52D5;&#x5B50;&#x5FAE;&#x91CF;&#x5929;&#x79E4; (QCM) &#x89E3;&#x6790;&#x3068;&#x539F;&#x5B50;&#x9593;&#x529B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1; &#xFF08;AFM&#xFF09; &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;HINP &#x306E;&#x5149;&#x306E;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306A;&#x7269;&#x6027;&#x306F;&#x5438;&#x53CE;&#x3068;&#x30D5;&#x30A9;&#x30C8;&#x30EB;&#x30DF;&#x30CD;&#x30C3; &#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x5206;&#x5149;&#x6CD5;&#x3068;&#x86CD;&#x5149;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x591A;&#x8272; HINP &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x5149;&#x5B66;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE; (Dc) &#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x3001;2 &#x5149;&#x5B50;&#x3068;&#x78C1;&#x6C17;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x6280;&#x8853;&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x81E8;&#x5E8A;&#x30A8;&#x30C7;&#x30A3;&#x30BF;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#xFF1A; &#x30C6;&#x30B6;&#x30FC;&#x306B;&#x8D85;&#x5E38;&#x78C1;&#x6027;&#x9178;&#x5316;&#x9244;&#x30CA;&#x30CE;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E;&#x5831;&#x544A;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8; (Qd) &#x53EF;&#x8996;&#x30FB;&#x8FD1;&#x8D64;&#x5916;&#x767A;&#x5149;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0; &#x30CA;&#x30CE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6; (HINP) transfecting &#x5264;&#x5857;&#x5E03;&#x306E;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3002;&#x591A;&#x8272; HINP &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x5149;&#x5B66;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x3001;2 &#x5149;&#x5B50;&#x3068;&#x78C1;&#x6C17;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x6280;&#x8853;&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1; &#x30E2;&#x30FC;&#x30C0;&#x30EB; &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x5149;&#x78C1;&#x6C17;&#x30CA;&#x30CE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3002;

Nanoprobe (HINP) &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; transfecting &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8; &#xCF54;&#xD305; &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xD45C;&#xC2DC; &#xAD6C;&#xC131; &#xBC0F; &#xADFC; &#xC801;&#xC678;&#xC120; (NIR) &#xBC1C;&#xAD11; &#xC591;&#xC790; &#xC810; (QDs) &#xC0B0;&#xD654; &#xCCA0; superparamagnetic (SPIO) &#xB098;&#xB178; &#xC785;&#xC790;&#xC5D0; &#xACC1;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xC804; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD45C;&#xBA74; &#xC218;&#xC815; QDs SPIO&#xC758; &#xC785;&#xC790;&#xC640;&#xB294; SPIO &#xB0B4; &#xB4C0;&#xC5BC; Qds&#xC758; &#xB3D9;&#xC801; &#xAD11; &#xC0B0;&#xB780; (DL), &#xC11D; &#xC601; &#xD06C;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xD0C8; &#xC911;&#xB7C9; (QCM) &#xBD84;&#xC11D; &#xBC0F; &#xC6D0;&#xC790; &#xD798; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; (AFM)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xD588;&#xB2E4;. HINP&#xC758; &#xAD11;&#xD559; &#xB300;&#xC870; &#xC18D;&#xC131; &#xD761;&#xC218; &#xBC0F; photoluminescence &#xBD84;&#xAD11;&#xD559; &#xBC0F; &#xD615;&#xAD11; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBE5B;&#xAE54;&#xC758; HINP &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xAD11;&#xD559;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; (DCs)&#xC758; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;, 2 &#xAD11;&#xC790; &#xBC0F; &#xC790;&#xAE30; &#xACF5;&#xBA85; &#xC601;&#xC0C1; &#xAE30;&#xBC95;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC784;&#xC0C1; &#xD3B8;&#xC9D1;&#xAE30;:&#xC5D0;&#xC11C; nanoprobe (HINP) &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; transfecting &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8; &#xCF54;&#xD305; &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC774;&#xC774; &#xC885;&#xC774;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB418;&#xB294; superparamagnetic&#xC5D0; &#xC18D;&#xBC15; &#xB418;&#xB294; &#xCCA0; &#xC0B0;&#xD654;&#xBB3C; &#xB098;&#xB178; &#xC785;&#xC790; &#xC591;&#xC790; &#xC810; (QDs)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC1C;&#xAD11; &#xD45C;&#xC2DC; &#xBC0F; &#xADFC; &#xC801;&#xC678;&#xC120;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;. &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBE5B;&#xAE54;&#xC758; HINP &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xAD11;&#xD559;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;, 2 &#xAD11;&#xC790; &#xBC0F; &#xC790;&#xAE30; &#xACF5;&#xBA85; &#xC601;&#xC0C1; &#xAE30;&#xBC95;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;.

&#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xAD11;&#xC790;&#xAE30; nanoprobe&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBCF5;&#xD569; &#xC601;&#xC0C1;.

Un h&iacute;brido de recubrimiento agente transfecting nanoprobe (HINP) de la proyecci&oacute;n de imagen compuesta por visible y el infrarrojo cercano (NIR) electroluminoso puntos cu&aacute;nticos (QDs) atados a las nanopart&iacute;culas de &oacute;xido de hierro superparamagn&eacute;tico (SPIO) fue desarrollado. La modificaci&oacute;n de la superficie de los QDs y SPIO part&iacute;culas e incorporaci&oacute;n de QDs duales en el SPIO se caracterizaron por la dispersi&oacute;n de la luz din&aacute;mica (DLS), cristal de cuarzo microbalanza (QCM) An&aacute;lisis y microscop&iacute;a de fuerza at&oacute;mica (AFM). Las propiedades &oacute;pticas de contraste de HINP fueron caracterizadas por espectroscopia de absorci&oacute;n y fotoluminiscencia y proyecci&oacute;n de imagen de fluorescencia. HINP multicolor fue utilizado en la migraci&oacute;n de las c&eacute;lulas dendr&iacute;ticas (DCs) por medios &oacute;pticos, dos fotones y t&eacute;cnicas de proyecci&oacute;n de imagen de resonancia magn&eacute;tica de la proyecci&oacute;n de imagen. DESDE la cl&iacute;nica EDITOR: El desarrollo de un h&iacute;brido de recubrimiento agente transfecting nanoprobe (HINP) de la proyecci&oacute;n de imagen compuesta por puntos cu&aacute;nticos (QDs) nanopart&iacute;culas de &oacute;xido de hierro atada a superparamagn&eacute;tico se divulgan en este documento de emisi&oacute;n de luz visible e infrarroja. HINP multicolor fue utilizado en la migraci&oacute;n de las c&eacute;lulas dendr&iacute;ticas por medios &oacute;pticos, dos fotones y t&eacute;cnicas de proyecci&oacute;n de imagen de resonancia magn&eacute;tica de la proyecci&oacute;n de imagen.

Proyecci&oacute;n de imagen multimodal de c&eacute;lulas dendr&iacute;ticas usando un nanoprobe magneto &oacute;pticos h&iacute;brido de novela.

&#x8C03;&#x67E5;&#x4E2D;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE; (DC) &#x589E;&#x5F3A;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x5448;&#x9012;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;-&#x57FA;&#x4E8E;&#x514D;&#x75AB;&#x6CBB;&#x7597;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7A7F;&#x900F;&#x7684;&#x9ECF;&#x86CB;&#x767D; 1 (&#x9ECF;&#x86CB;&#x767D; 1&#xFF09; &#x53D1;&#x5C55;&#x6297;&#x539F;&#x548C;&#x5176;&#x6297;&#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x6CBB;&#x7597;&#x6F5C;&#x529B;&#x3002;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC4;&#x6536;&#x5230;&#x7684;&#x9ECF;&#x86CB;&#x767D; 1-MPA (11) P &#x8109;&#x51B2; DCs &#x4E24;&#x79CD;&#x514D;&#x75AB;&#x63A5;&#x79CD;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230; DCs &#x5355;&#x72EC;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x56DE;&#x5F52;&#x6BD4;&#x8F83;&#x6216; DCs &#x8109;&#x51B2;&#x4E0E;&#x9ECF;&#x86CB;&#x767D; 1 &#x591A;&#x80BD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x8BA4;&#x7684;&#x8FC1;&#x79FB;&#x548C; DCs &#x5728;&#x78C1;&#x5171;&#x632F;&#x6210;&#x50CF;&#x7814;&#x7A76;&#x671F;&#x95F4;&#x7684;&#x8158;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7ED3;&#x4E2D;&#x5BFB;&#x3002;&#x5728;&#x4F7F;&#x7528; MPA (11) P &#x7684;&#x6458;&#x8981;&#x3001; &#x589E;&#x5F3A;&#x6297;&#x539F;&#x6444;&#x53D6;&#x4F20;&#x9012;&#x5206;&#x5B50;&#x4F1A;&#x63D0;&#x9AD8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7597;&#x6CD5;&#x3002;

&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6297;&#x80BF;&#x7624;&#x514D;&#x75AB;&#x7684;&#x611F;&#x5E94;&#x8D1F;&#x8F7D;&#x819C;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x9ECF;&#x86CB;&#x767D; 1 &#x80BD;&#x6297;&#x539F;&#x3002;

To investigate the role of enhanced antigen presentation in dendritic cell (DC)-based immunotherapy. Here, we describe the development of a cell-penetrating mucin 1 (MUC1) antigen and its immunotherapeutic potential against tumors. After animal groups received two immunizations of MUC1-MPA(11)P-pulsed DCs, we observed a marked tumor regression compared with the mice treated with DCs alone or DCs pulsed with MUC1 peptide. We confirmed the migration and homing of DCs in the popliteal lymph node using magnetic resonance imaging during the study. In summary, enhanced antigen uptake using an MPA(11)P delivery molecule improves cell therapy.

Induction of antitumor immunity by dendritic cells loaded with membrane-translocating mucin 1 Peptide antigen.

D&#39;enqu&ecirc;ter sur le r&ocirc;le de la pr&eacute;sentation des antig&egrave;nes am&eacute;lior&eacute;e dans des cellules dendritiques (DC)-bas&eacute; d&#39;immunoth&eacute;rapie. Nous d&eacute;crivons ici le d&eacute;veloppement d&#39;une p&eacute;n&eacute;tration cellulaire mucine 1 (MUC1) antig&egrave;ne et son potentiel immunoth&eacute;rapeutique contre les tumeurs. Apr&egrave;s que les groupes d&#39;animaux ont re&ccedil;u deux vaccinations de DCs P-puls&eacute; de MUC1-MPA (11), nous avons observ&eacute; une r&eacute;gression tumorale marqu&eacute;e compar&eacute;e avec les souris trait&eacute;es avec DCs seuls ou DCs puls&eacute; avec le peptide de MUC1. Nous avons confirm&eacute; la migration et la domiciliation de contr&ocirc;leurs de domaine dans le ganglion lymphatique poplit&eacute;, utilisant l&#39;imagerie par r&eacute;sonance magn&eacute;tique au cours de l&#39;&eacute;tude. Absorption antig&egrave;ne sommaire, renforc&eacute;e &agrave; l&#39;aide d&#39;une MPA (11P) mol&eacute;cule livraison am&eacute;liore la th&eacute;rapie cellulaire.

Induction d&#39;une immunit&eacute; anti-tumorale par des cellules dendritiques charg&eacute;es avec membrane-translocation des antig&egrave;nes de Peptide mucine 1.

Die Rolle der erweiterten Antigen-Pr&auml;sentation in dendritischen Zellen (DC) untersuchen-basierte Immuntherapie. Hier beschreiben wir die Entwicklung einer Zelle durchdringenden Mucin 1 (MUC1) Antigen und seinem immuntherapeutischen Potenzial gegen Tumoren. Nachdem Tiergruppen zwei Impfungen MUC1-MPA (11) P-gepulste DCS erhalten, beobachteten wir eine deutliche Tumor-Regression im Vergleich mit den M&auml;usen mit DCs allein behandelt oder DCs gepulst mit MUC1 Peptid. Wir best&auml;tigten die Migration und die Referenzfahrt DCS in das popliteale Lymphknoten mit Magnetresonanz-Bildgebung w&auml;hrend der Studie. In Zusammenfassung, verbesserte Antigen-Aufnahme mit einer MPA (11) P verbessert Lieferung Molek&uuml;l Zelltherapie.

Induktion von antitumor Immunit&auml;t durch dendritische Zellen beladen mit Membran-translocating Mucin 1 Peptid-Antigen.

Per indagare il ruolo della presentazione antigene rafforzata in cellule dendritiche (DC)-base di immunoterapia. Qui, descriviamo lo sviluppo di una cellula-penetrante mucina 1 (MUC1) antigene e il suo potenziale immunotherapeutic contro i tumori. Dopo che gruppi di animali ha ricevuto due vaccinazioni di MUC1-MPA (11) P-pulsato DCs, abbiamo osservato una regressione tumorale contrassegnato confrontato con i topi trattati con DCs da solo o DCs pulsato con MUC1 peptide. Abbiamo confermato la migrazione e l&#39;homing dei controller di dominio nel linfonodo popliteo mediante risonanza magnetica durante lo studio. Assorbimento di antigene riassunto, migliorata utilizzando un MPA (11) P di molecola consegna migliora la terapia cellulare.

Induzione dell&#39;immunit&agrave; antitumorale da cellule dendritiche caricate con membrana-translocating antigene peptidico mucina 1.

&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6297;&#x539F;&#x63D0;&#x793A;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE; (DC) &#x3067;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;-&#x514D;&#x75AB;&#x7642;&#x6CD5;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CAB;&#x901A;&#x30E0;&#x30C1;&#x30F3; 1 &#xFF08;MUC1) &#x958B;&#x767A;&#x8AAC;&#x660E;&#x6297;&#x539F;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x816B;&#x760D;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3002;&#x52D5;&#x7269;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7; MUC1 MPA (11) P &#x30D1;&#x30EB;&#x30B9; Dc &#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x4E88;&#x9632;&#x63A5;&#x7A2E;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x305F;&#x5F8C;&#x3001;DCs &#x3092;&#x5358;&#x72EC;&#x3067;&#x6295;&#x4E0E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x56DE;&#x5E30;&#x307E;&#x305F;&#x306F; DCs MUC1 &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; &#x30D1;&#x30EB;&#x30B9;&#x304C;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3002;&#x79FB;&#x884C;&#x3068; DCs &#x306E;&#x30DB;&#x30FC;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x306B; mri &#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x819D;&#x7AA9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7BC0;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8981;&#x7D04;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6297;&#x539F;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x3001;MPA (11) P &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x914D;&#x4FE1;&#x5206;&#x5B50;&#x7D30;&#x80DE;&#x6CBB;&#x7642;&#x304C;&#x5411;&#x4E0A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6297;&#x816B;&#x760D;&#x514D;&#x75AB;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306F;&#x819C;&#x8F38;&#x9001;&#x6027;&#x30E0;&#x30C1;&#x30F3; 1 &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x6297;&#x539F;&#x3092;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; (DC)&#xC5D0;&#xC11C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC81C;&#xC2DC;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xAE30;-immunotherapy &#xAE30;&#xBC18;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC140; &#xAD00;&#xD1B5; mucin 1 (MUC1)&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xC124;&#xBA85; &#xD56D; &#xC6D0; &#xBC0F; &#xC885;&#xC591;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; immunotherapeutic &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;. &#xB3D9;&#xBB3C; &#xADF8;&#xB8F9; MUC1 MPA (11) P &#xD384;&#xC2A4; Dc&#xC758; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC811;&#xC885;&#xC744; &#xBC1B;&#xC740; &#xD6C4; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xC885;&#xC591; &#xD68C;&#xADC0; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xD63C;&#xC790; Dc&#xC640; &#xC950;&#xC640; &#xBE44;&#xAD50; &#xB610;&#xB294; Dc &#xD384;&#xC2A4; MUC1 &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xAD00;&#xCC30; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD655;&#xC2E4; &#xD558; &#xAC8C; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xBC0F; &#xC790;&#xAE30; &#xACF5;&#xBA85; &#xC601;&#xC0C1; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xAE30;&#xAC04; &#xB3D9;&#xC548; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC624; &#xAE08; &#xB9BC;&#xD504;&#xC808;&#xC5D0;&#xC11C; dc &#xC720;&#xB3C4;. &#xC694;&#xC57D;, &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xD56D; &#xC6D0; &#xAE00;&#xADC0;&#xB294; MPA (11) P &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBC30;&#xB2EC; &#xBD84;&#xC790; &#xC138;&#xD3EC; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; antitumor &#xBA74;&#xC5ED;&#xC758; &#xC720;&#xB3C4; mucin 1 &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xD56D; &#xC6D0; &#xB9C9; translocating &#xD568;&#xAED8; &#xB85C;&#xB4DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Para investigar el papel de presentaci&oacute;n de ant&iacute;geno mejorada en c&eacute;lulas dendr&iacute;ticas (DC)-basado en inmunoterapia. Aqu&iacute;, describimos el desarrollo de una mucina de penetraci&oacute;n celular 1 (MUC1) ant&iacute;geno y su potencial inmunoterap&eacute;utico contra tumores. Despu&eacute;s de que grupos de animales recibieron dos vacunas de MUC1-MPA (11) P-pulsada DCs, observamos una regresi&oacute;n del tumor marcada en comparaci&oacute;n con los ratones tratados con DCs solos o DCs puls&oacute; con MUC1 p&eacute;ptido. Confirmamos la migraci&oacute;n y autoguiado hacia el blanco de DCs en el nodo de linfa popl&iacute;teo mediante resonancia magn&eacute;tica durante el estudio. En la absorci&oacute;n de ant&iacute;geno Resumen, mejorada con un MPA (11) P mol&eacute;cula entrega mejora la terapia celular.

Inducci&oacute;n de la inmunidad antitumoral por c&eacute;lulas dendr&iacute;ticas cargado con ant&iacute;geno de p&eacute;ptido de mucina 1 translocaci&oacute;n de membrana.

&#x9752;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28; (CFPs)&#xFF0C;&#x5982;&#x851A;&#x84DD;&#xFF0C;&#x88AB;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7528;&#x4F5C;&#x6350;&#x52A9;&#x8367;&#x5149; F&ouml;rster &#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB; &#xFF08;&#x97F3;&#x54C1;&#xFF09; &#x5B9E;&#x9A8C;&#x4E2D;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x5982;&#x6B64;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x6700;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x53D8;&#x79CD;&#x60A3;&#x6709;&#x7F3A;&#x70B9;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x62EC;&#x4F4E;&#x91CF;&#x5B50;&#x4EA7;&#x7387;&#x548C;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x6539;&#x5584;&#x851A;&#x84DD;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x6027;&#x80FD;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528; x &#x5C04;&#x7EBF;&#x7ED3;&#x6784;&#x5408;&#x7406;&#x76EE;&#x6807;&#x4F18;&#x5316;&#x7279;&#x5B9A;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x5B9A;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x3002;&#x675F; 7 &#x548C; 8 &#x7684; &beta;-&#x6BCF;&#x6876;&#x4E2D;&#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x4F18;&#x5316;&#x6539;&#x8FDB;&#x851A;&#x84DD;&#x7684;&#x91CF;&#x5B50;&#x4EA7;&#x91CF;&#xFF0C;&#x4ECE; 0.48 &#x5230; 0.60&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x7ED3;&#x5408;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; T65S &#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x53D1;&#x8272;&#x56E2;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x4F18;&#x5316;&#x6539;&#x8FDB;&#x91CF;&#x5B50;&#x4EA7;&#x91CF;&#x4E3A; 0.87&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x53D8;&#x4F53;&#xFF0C;mCerulean3&#xFF0C;&#x662F;&#x4EAE;&#x5EA6;&#x7684; 20%&#xFF0C;&#x663E;&#x793A;&#x5927;&#x5927;&#x964D;&#x4F4E;&#x7684;&#x8367;&#x5149; photoswitching &#x884C;&#x4E3A;&#x76F8;&#x6BD4;&#xFF0C;&#x6700;&#x8FD1;&#x63CF;&#x8FF0;&#x7684; mTurquoise &#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x4F53;&#x5916;&#x4E0E;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;MCerulean3 &#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x4E5F;&#x9002;&#x5408;&#x4E8E;&#x5355;&#x4E2A;&#x6307;&#x6570;&#x65F6;&#x95F4;&#x5E38;&#x6570;&#xFF0C;&#x4F7F; mCerulean3 &#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x663E;&#x5FAE;&#x5408;&#x9002;&#x9009;&#x62E9;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;mCerulean3 &#x4E0E; mVenus &#x7684;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x4E2D;&#x5217;&#x5165;&#x751F;&#x4EA7;&#x97F3;&#x54C1;&#x7684;&#x6BD4;&#x7387;&#x8F83;&#x5C0F;&#x65B9;&#x5DEE;&#x6BD4;&#x5728;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x542B;&#x6709; mTurquoise &#x7684;&#x878D;&#x5408;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;mCerulean3 &#x662F;&#x62E5;&#x6709;&#x51E0;&#x4E2A;&#x7279;&#x5F81;&#xFF0C;&#x662F;&#x975E;&#x5E38;&#x7406;&#x60F3;&#x7684;&#x97F3;&#x54C1;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x660E;&#x4EAE;&#xFF0C;photostable &#x9752;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;

&#x6539;&#x8FDB;&#x851A;&#x84DD;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x589E;&#x5F3A;&#x7684;&#x4EAE;&#x5EA6;&#x548C;&#x51CF;&#x5C11;&#x53EF;&#x9006; photoswitching&#x3002;

Cyan fluorescent proteins (CFPs), such as Cerulean, are widely used as donor fluorophores in FÃ¶rster resonance energy transfer (FRET) experiments. Nonetheless, the most widely used variants suffer from drawbacks that include low quantum yields and unstable flurorescence. To improve the fluorescence properties of Cerulean, we used the X-ray structure to rationally target specific amino acids for optimization by site-directed mutagenesis. Optimization of residues in strands 7 and 8 of the Î²-barrel improved the quantum yield of Cerulean from 0.48 to 0.60. Further optimization by incorporating the wild-type T65S mutation in the chromophore improved the quantum yield to 0.87. This variant, mCerulean3, is 20% brighter and shows greatly reduced fluorescence photoswitching behavior compared to the recently described mTurquoise fluorescent protein in vitro and in living cells. The fluorescence lifetime of mCerulean3 also fits to a single exponential time constant, making mCerulean3 a suitable choice for fluorescence lifetime microscopy experiments. Furthermore, inclusion of mCerulean3 in a fusion protein with mVenus produced FRET ratios with less variance than mTurquoise-containing fusions in living cells. Thus, mCerulean3 is a bright, photostable cyan fluorescent protein which possesses several characteristics that are highly desirable for FRET experiments.

An improved cerulean fluorescent protein with enhanced brightness and reduced reversible photoswitching.

Prot&eacute;ines fluorescentes cyan (CFPs), tels que Cerulean, sont largement utilis&eacute;s comme fluorophores donneur dans les exp&eacute;riences de transfert (FRET) F&ouml;rster resonance energy. N&eacute;anmoins, les variantes plus couramment souffrent d&#39;inconv&eacute;nients qui incluent des rendements quantiques faible et instable flurorescence. Pour am&eacute;liorer les propri&eacute;t&eacute;s de fluorescence de Cerulean, nous avons utilis&eacute; la diffraction des rayons x pour cibler rationnellement les acides amin&eacute;s sp&eacute;cifiques pour l&#39;optimisation par mutagen&egrave;se dirig&eacute;e. Optimisation des r&eacute;sidus en brins de 7 et 8 du &beta;-Canon a am&eacute;lior&eacute; le rendement quantique de Cerulean de 0,48 &agrave; 0,60. Optimisation en incorporant la mutation de T65S sauvage dans le chromophore am&eacute;lior&eacute; le rendement quantique de 0,87. Cette variante, le mCerulean3, est 20 % plus lumineux et montre le comportement de photoswitching de fluorescence tr&egrave;s r&eacute;duite par rapport &agrave; la prot&eacute;ine fluorescente de mTurquoise r&eacute;cemment d&eacute;crite in vitro et dans les cellules vivantes. La dur&eacute;e de vie de fluorescence de mCerulean3 s&#39;adapte &eacute;galement &agrave; une constante de temps exponentielle simple, faire mCerulean3 un choix appropri&eacute; pour la microscopie de fluorescence lifetime exp&eacute;riences. De plus, inclusion de mCerulean3 dans une prot&eacute;ine de fusion avec mVenus produit des taux de FRET avec moins de variance que mTurquoise contenant des fusions dans les cellules vivantes. Ainsi, mCerulean3 est un brillant, PhotoStation cyan fluorescent protein qui poss&egrave;de plusieurs caract&eacute;ristiques qui sont fortement souhaitables pour des exp&eacute;riences de frette.

Une prot&eacute;ine fluorescente d&#39;azur&eacute;e am&eacute;lior&eacute;e avec une luminosit&eacute; accrue et r&eacute;duit photoswitching r&eacute;versible.

Cyan fluoreszierende Proteine (GFP), wie z. B. Cerulean, werden h&auml;ufig als Spender Fluorophore F&ouml;rster Resonanz Energie Transfer (FRET) Experimente verwendet. Dennoch leiden die am weitesten verbreiteten Varianten Nachteile, die niedrige Quanten-Ausbeute und unstable Flurorescence enthalten. Um die Fluoreszenz-Eigenschaften der Cerulean zu verbessern, haben wir die x-ray-Struktur rational bestimmte Aminos&auml;uren zur Optimierung von Site-verwiesene Mutagenese als Ziel verwendet. Optimierung von R&uuml;ckst&auml;nden in Str&auml;nge 7 und 8 f&uuml;r die &beta;-Barrel verbessert die Quantenausbeute von Cerulean von 0,48 bis 0,60. Weitere Optimierung durch die Einbeziehung der Wildtyp-T65S-Mutation in der Chromophor verbessert die Quantenausbeute zu 0,87. Diese Variante, mCerulean3, ist 20 % heller und zeigt stark reduzierten Fluoreszenz Photoswitching Verhalten im Vergleich zu den k&uuml;rzlich beschriebenen mTurquoise fluoreszierenden Proteins in-vitro- und in lebenden Zellen. Die Fluoreszenz-Lebensdauer von mCerulean3 passt auch eine exponentielle Mal Konstante, machen mCerulean3 eignet sich besonders f&uuml;r die Fluoreszenzmikroskopie Lebensdauer Experimente. Dar&uuml;ber hinaus produziert Einbeziehung von mCerulean3 in einem Schmelzverfahren Protein mit mVenus FRET-Verh&auml;ltnisse mit weniger Varianz als mTurquoise-haltigen Fusionen in lebenden Zellen. MCerulean3 ist also ein hell, lichtbest&auml;ndig Cyan fluoreszierenden Protein, das verschiedene Eigenschaften besitzt, die sehr w&uuml;nschenswert f&uuml;r FRET Experimente sind.

Eine verbesserte himmelblaue fluoreszierenden Proteins mit verbesserte Helligkeit und reduzierte reversible Photoswitching.

Le proteine fluorescenti ciano (CFPs), come ad esempio ceruleo, sono ampiamente usate come donatore fluorofori in esperimenti di F&ouml;rster resonance energy transfer (FRET). Tuttavia, le varianti pi&ugrave; diffuse soffrono di svantaggi che includono quantum bassi rendimenti e flurorescence instabile. Per migliorare le propriet&agrave; di fluorescenza di ceruleo, abbiamo usato la struttura ai raggi x per razionalmente target specifici amminoacidi per l&#39;ottimizzazione di mutagenesi luogo-diretta. Ottimizzazione dei residui in fili 7 e 8 del &beta;-barilotto migliorato il rendimento quantico di ceruleo da 0,48 a 0.60. Ulteriore ottimizzazione incorporando la mutazione T65S selvaggio-tipo il cromoforo migliorato il rendimento quantico di 0,87. Questa variante, mCerulean3, &egrave; del 20% pi&ugrave; luminoso e mostra il comportamento photoswitching fluorescenza notevolmente ridotta rispetto alla proteina fluorescente mTurquoise recentemente descritto in vitro e in cellule viventi. La durata della fluorescenza di mCerulean3 si adatta anche a una costante di tempo esponenziale singolo, facendo mCerulean3 una scelta adatta per microscopia di fluorescenza vita esperimenti. Inoltre, l&#39;inclusione di mCerulean3 in una proteina di fusione con mVenus prodotto FRET rapporti con minore varianza rispetto mTurquoise contenenti fusioni in cellule viventi. Cos&igrave;, mCerulean3 &egrave; una luminoso, fotostabile ciano proteina fluorescente che possiede molte caratteristiche che sono altamente desiderabili per gli esperimenti FRET.

Una proteina fluorescente cerulea migliorata con una maggiore luminosit&agrave; e ridotto photoswitching reversibile.

&#x30B7;&#x30A2;&#x30F3;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; (&#x5F53;&#x305F;&#x308A;) &#x30BB;&#x30EB;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x306A;&#x3069;&#x306F;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5; (FRET) &#x5B9F;&#x9A13;&#x3067;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC; fluorophores &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5E83;&#x304F;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x6700;&#x3082;&#x5E83;&#x304F;&#x4F7F;&#x308F;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x4E9C;&#x7A2E;&#x306F;&#x4F4E;&#x91CF;&#x5B50;&#x53CE;&#x7387;&#x3068;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x306A; flurorescence &#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x6B20;&#x70B9;&#x304B;&#x3089;&#x82E6;&#x3057;&#x307F;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BB;&#x30EB;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x5408;&#x7406;&#x7684;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x3092;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x6307;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B; x &#x7DDA;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;7 &#x3068; 8 &#x306E; &beta; &#x30D0;&#x30EC;&#x30EB;&#x306E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x6B8B;&#x7559;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x306F;&#x3001;0.60 0.48 &#x304B;&#x3089;&#x30BB;&#x30EB;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x306E;&#x91CF;&#x5B50;&#x5229;&#x56DE;&#x308A;&#x6539;&#x5584;&#x3002;&#x767A;&#x8272;&#x56E3;&#x306E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; T65S &#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x8FBC;&#x3080;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3059;&#x308B; 0.87 &#x91CF;&#x5B50;&#x53CE;&#x7387;&#x6539;&#x5584;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;mCerulean3&#x3001;20 &#xFF05; &#x660E;&#x308B;&#x3044;&#x3068; in vitro &#x3067;&#x306E;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x8AAC;&#x660E; mTurquoise &#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3084;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x5927;&#x304D;&#x304F;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x86CD;&#x5149;&#x5149;&#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x30F3;&#x30B0;&#x52D5;&#x4F5C;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;MCerulean3 &#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x306F;&#x307E;&#x305F; mCerulean3 &#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306E;&#x9069;&#x5F53;&#x306A;&#x9078;&#x629E;&#x3092;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x6307;&#x6570;&#x6642;&#x9593;&#x5B9A;&#x6570;&#x306B;&#x53CE;&#x307E;&#x308B;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;mCerulean3 &#x3067; mVenus &#x3068;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5C01;&#x5165;&#x30D5;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8;&#x6BD4; mTurquoise &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x878D;&#x5408;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x5C11;&#x306A;&#x3044;&#x306E;&#x5206;&#x6563;&#x3068;&#x751F;&#x7523;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;mCerulean3 &#x306F;&#x30D5;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x671B;&#x307E;&#x3057;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x6240;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x660E;&#x308B;&#x3044;&#x3001;&#x5185;&#x30B7;&#x30A2;&#x30F3;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x6539;&#x826F;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30BB;&#x30EB;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x86CD;&#x5149;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x660E;&#x308B;&#x3055;&#x3068;&#x524A;&#x6E1B;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x5149;&#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x30F3;&#x30B0;&#x3002;

&#xC2DC;&#xC548;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (CFPs), &#xB9AC;&#xC548;, &#xAC19;&#xC740; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; fluorophores F&ouml;rster &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xC1A1; (&#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC;) &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC73C;&#xB85C; &#xB110;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7FC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0;, &#xAC00;&#xC7A5; &#xB110;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xBCC0;&#xC885; &#xACE0;&#xD1B5;&#xC744; &#xB0AE;&#xC740; &#xC591;&#xC790; &#xC218;&#xC728;&#xACFC; &#xBD88;&#xC548;&#xC815; &#xD55C; flurorescence&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xC810;&#xC774; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9AC;&#xC548;&#xC758; &#xD615;&#xAD11; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xAC1C;&#xC120; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC774;&#xC131;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC9C0;&#xC2DC; &#xB41C; mutagenesis, &#xCD5C;&#xC801;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD2B9;&#xC815; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;&#xC744; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; x-&#xC120; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. 7, &Beta;-&#xBC30;&#xB7F4;&#xC758; 8 &#xAC00;&#xB2E5;&#xC5D0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; 0.60&#xC5D0; 0.48&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9AC;&#xC548;&#xC758; &#xC591;&#xC790; &#xC218;&#xC728;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1;. &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; T65S &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xB860;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD1B5;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xCD94;&#xAC00; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; 0.87&#xC5D0; &#xC591;&#xC790; &#xC218;&#xC728; &#xD5A5;&#xC0C1;. &#xC774; &#xBCC0;&#xC885;, mCerulean3, 20% &#xB354; &#xBC1D;&#xC740; &#xC774;&#xBA70; &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xC124;&#xBA85;&#xB41C; mTurquoise &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xD06C;&#xAC8C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD615;&#xAD11; photoswitching &#xB3D9;&#xC791;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. MCerulean3 &#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85; &#xB610;&#xD55C; mCerulean3 &#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC801;&#xD569; &#xD55C; &#xC120;&#xD0DD;&#xC744; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC9C0; &#xC218; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC0C1;&#xC218;&#xC5D0; &#xB9DE;&#xB294; &#xC2E4;&#xD5D8;. &#xB610;&#xD55C; mCerulean3 Mvenus&#xB85C; &#xC735;&#xD574; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; mTurquoise &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; fusions &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC801;&#xC740; &#xBD84;&#xC0B0; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xBE44;&#xC728; &#xC0DD;&#xC0B0;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, Mcerulean3&#xB294; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xBC14;&#xB78C;&#xC9C1;&#xD55C; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xC720; &#xD558; &#xACE0; &#xBC1D;&#xC740; &#xC2DC;&#xC548;&#xC0C9; photostable &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xB2E4;.

&#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xD558;&#xB298;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xBC1D;&#xAE30;&#xC640; &#xAC10;&#xC18C; &#xB418;&#xB3CC;&#xB9B4; &#xC218; photoswitching.

Prote&iacute;nas fluorescentes cian (PFC), como Cerulean, son ampliamente utilizadas como fluor&oacute;foros de donantes en experimentos de transferencia (FRET) de energ&iacute;a de resonancia de F&ouml;rster. Sin embargo, las variantes m&aacute;s utilizadas sufren inconvenientes que incluyen cu&aacute;ntica bajos rendimientos y flurorescence inestable. Para mejorar las propiedades de fluorescencia de Cerulean, utilizamos la estructura de la radiograf&iacute;a para orientar racionalmente amino&aacute;cidos espec&iacute;ficos para la optimizaci&oacute;n mediante mutag&eacute;nesis sitio-dirigida. Optimizaci&oacute;n de residuos en los filamentos 7 y 8 del &beta;-barril mejor&oacute; el rendimiento cu&aacute;ntico de Cerulean de 0.48 a 0,60. Otra optimizaci&oacute;n mediante la incorporaci&oacute;n de la mutaci&oacute;n de T65S de tipo salvaje en el crom&oacute;foro mejor&oacute; el rendimiento cu&aacute;ntico a 0,87. Esta variante, mCerulean3, es 20% m&aacute;s brillante y muestra el comportamiento de photoswitching de fluorescencia muy reducidos en comparaci&oacute;n con la prote&iacute;na fluorescente recientemente descrito mTurquoise in vitro y en las c&eacute;lulas vivas. La vida de la fluorescencia del mCerulean3 tambi&eacute;n se adapta a una constante de tiempo exponencial solo, lo que mCerulean3 una opci&oacute;n conveniente para microscop&iacute;a de fluorescencia vida experimentos. Adem&aacute;s, inserci&oacute;n de mCerulean3 en una prote&iacute;na de fusi&oacute;n con mVenus hab&iacute;a producido traste relaciones con la menor variaci&oacute;n de fusiones que contienen mTurquoise en las c&eacute;lulas vivas. As&iacute;, mCerulean3 es una prote&iacute;na fluorescente brillante, de Fotoestables cian que posee varias caracter&iacute;sticas que son altamente deseables para experimentos de traste.

Una prote&iacute;na fluorescente Reinita mejorada con mayor brillo y menor photoswitching reversible.

&#x81EA;&#x5206;&#x6CCC;&#x548C;&#x65C1;&#x5206;&#x6CCC;&#xFF0C;juxtacrine &#x516C;&#x8BA4;&#x7684;&#x6A21;&#x5F0F;&#x662F;&#x884C;&#x52A8;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x5305;&#x62EC;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x3001; TGF-&alpha; (TGF&alpha;)&#x3001; &#x53CC;&#x8C03;&#x86CB;&#x767D; (AREG)&#x3001; &#x809D;&#x7D20;&#x7ED3;&#x5408;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x6837;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50; (HB EGF)&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x7D20;&#xFF0C;epiregulin &#x548C; epigen &#x7684;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x914D;&#x4F53;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8FC7;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x7684;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x914D;&#x4F53;&#x7684;&#x65B0;&#x7684;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x4E73;&#x817A;&#x764C;&#x548C;&#x7ED3;&#x76F4;&#x80A0;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x91CA;&#x653E;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x542B;&#x5168;&#x957F;&#x3001; &#x4FE1;&#x53F7;&#x4E3B;&#x7BA1;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x914D;&#x4F53;&#x3002;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x5206;&#x79BB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x5168;&#x957F;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x914D;&#x4F53;&#x663E;&#x793A;&#x5DEE;&#x5F02;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8; &#xFF1B;AREG &#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x589E;&#x52A0;&#x6536;&#x4EF6;&#x4EBA;&#x4E73;&#x817A;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4FB5;&#x88AD;&#x80FD;&#x529B;&#x9E21;&#x6C41;&#x8D85;&#x8FC7; TGF&alpha; &#x6216; HB EGF &#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x548C; 5 &#x500D;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x6570;&#x989D;&#x7B49;&#x503C;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4; AREG&#x3002;Exosomal AREG &#x663E;&#x793A;&#x819C;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x5927;&#x5927;&#x9AD8;&#x4E8E; TGF&alpha; &#x6216; HB-&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;24 AREG &#x5206;&#x5B50;&#x5E73;&#x5747;&#x88AB;&#x5305;&#x88C5;&#x5185;&#x4E2A;&#x522B; exosome&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14; AREG &#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x8FC5;&#x901F;&#x4F7F;&#x6536;&#x4EF6;&#x4EBA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x3002;&#x672A;&#x77E5;&#x662F;&#x5426; nontransformed &#x548C;&#x8F6C;&#x6362;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E4B;&#x95F4;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7EC4;&#x6210;&#x548C;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x3002;&#x4ECE; DLD 1 &#x7ED3;&#x80A0;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x5580;&#x65AF;&#x7279;&#x9AD8;&#x539F;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x4E0E;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x5C55;&#x793A; AREG &#x66F4;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x548C;&#x66F4;&#x5927;&#x521B;&#x6F5C;&#x529B;&#x6BD4;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x4ECE; isogenically &#x5339;&#x914D;&#x3001; nontransformed &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x540C;&#x6E90;&#x91CD;&#x7EC4;&#xFF0C;&#x514B;&#x62C9;&#x4EC0;&#x88AB;&#x6DD8;&#x6C70;&#x4E86;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63A8;&#x6D4B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8FC7;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x7684;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x914D;&#x4F53;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x573A;&#x6548;&#x5E94;&#x548C;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684;&#x5229;&#x57FA;&#x5438;&#x7B49;&#x591A;&#x79CD;&#x764C;&#x75C7;&#x73B0;&#x8C61;&#x3002;

&#x53CC;&#x8C03;&#x86CB;&#x767D;&#x5916;&#x6765;&#x4F53;&#x589E;&#x52A0;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4FB5;&#x88AD;&#x3002;

Autocrine, paracrine, and juxtacrine are recognized modes of action for mammalian EGFR ligands including EGF, TGF-Î± (TGFÎ±), amphiregulin (AREG), heparin-binding EGF-like growth factor (HB-EGF), betacellulin, epiregulin, and epigen. We identify a new mode of EGFR ligand signaling via exosomes. Human breast and colorectal cancer cells release exosomes containing full-length, signaling-competent EGFR ligands. Exosomes isolated from MDCK cells expressing individual full-length EGFR ligands displayed differential activities; AREG exosomes increased invasiveness of recipient breast cancer cells 4-fold over TGFÎ± or HB-EGF exosomes and 5-fold over equivalent amounts of recombinant AREG. Exosomal AREG displayed significantly greater membrane stability than TGFÎ± or HB-EGF. An average of 24Â AREG molecules are packaged within an individual exosome, and AREG exosomes are rapidly internalized by recipient cells. Whether the composition and behavior of exosomes differ between nontransformed and transformed cells is unknown. Exosomes from DLD-1Â colon cancer cells with a mutant KRAS allele exhibited both higher AREG levels and greater invasive potential than exosomes from isogenically matched, nontransformed cells in which mutant KRAS was eliminated by homologous recombination. We speculate that EGFR ligand signaling via exosomes might contribute to diverse cancer phenomena such as field effect and priming of the metastatic niche.

Amphiregulin exosomes increase cancer cell invasion.

Autocrine, paracrine, et juxtacrine sont reconnus modes d&#x26;#39;action pour les ligands EGFR mammif&#xE8;res, y compris EGF, TGF-&#x3B1; (TGFa), amphir&#xE9;guline (AREG), liant l&#x26;#39;h&#xE9;parine du facteur de croissance EGF-like (HB-EGF), b&#xEA;tacelluline, &#xE9;pir&#xE9;guline, et epigen . Nous identifions un nouveau mode de ligand EGFR signalisation via les exosomes. Maternel humain et les cellules canc&#xE9;reuses colorectales lib&#xE9;rer exosomes contenant pleine longueur, des ligands de signalisation EGFR-comp&#xE9;tentes. Les exosomes isol&#xE9;s &#xE0; partir de cellules MDCK exprimant individuels ligands EGFR pleine longueur affich&#xE9;es activit&#xE9;s diff&#xE9;rentielles; exosomes AREG augment&#xE9; invasivit&#xE9; des cellules du cancer du sein b&#xE9;n&#xE9;ficiaires de 4 fois plus de TGFa ou HB-EGF exosomes et 5 fois plus des quantit&#xE9;s &#xE9;quivalentes de AREG recombinant. AREG exosomales affich&#xE9; stabilit&#xE9; de la membrane de fa&#xE7;on significative sup&#xE9;rieure &#xE0; TGFa ou HB-EGF. Une moyenne de 24 mol&#xE9;cules AREG sont emball&#xE9;s dans un exosomes individuelle, et exosomes AREG sont rapidement internalis&#xE9;es par les cellules du receveur. Que la composition et le comportement des exosomes diff&#xE8;rent entre les cellules non transform&#xE9;es et transform&#xE9;es est inconnue. Les exosomes de DLD-1 des cellules canc&#xE9;reuses du c&#xF4;lon avec un all&#xE8;le mutant du g&#xE8;ne KRAS pr&#xE9;sentaient deux niveaux plus &#xE9;lev&#xE9;s et une plus grande AREG potentiels invasive que les exosomes de isogenically appari&#xE9;s, les cellules non transform&#xE9;es, dans lequel le g&#xE8;ne KRAS mutant a &#xE9;t&#xE9; &#xE9;limin&#xE9;e par recombinaison homologue. Nous pensons que le ligand de l&#x26;#39;EGFR signalisation via les exosomes pourraient contribuer &#xE0; des ph&#xE9;nom&#xE8;nes tels que le cancer diverses &#xE0; effet de champ et l&#x26;#39;amor&#xE7;age de la niche m&#xE9;tastatique.

Les exosomes amphir&#xE9;guline Augmenter invasion des cellules canc&#xE9;reuses

Autocrine und parakrine Juxtacrine sind anerkannte Wirkungsweisen f&uuml;r S&auml;ugetier-EGFR-Liganden EGF TGF-&alpha; (TGF&alpha;), Amphiregulin (AREG), Heparin-Binding EGF-Like Growth Factor (HB-EGF), Betacellulin, Epiregulin und Epigen. Wir identifizieren eine neue Art von EGFR-Liganden, die Signalisierung &uuml;ber Exosomes. Menschliche Brust- und Darmkrebs Zellen freigeben Exosomes mit in, Signalisierung-kompetente EGFR-Liganden. Exosomes von Ausdr&uuml;cken in EGFR Liganden angezeigt differenzielle Einzelaktivit&auml;ten MDCK-Zellen isoliert; AREG Exosomes erh&ouml;hte Invasivit&auml;t der Empf&auml;nger Brustkrebszellen 4-fach &uuml;ber TGF&alpha; oder HB-EGF-Exosomes und 5-fach &uuml;ber entsprechende Mengen von rekombinanten AREG. Exosomal AREG angezeigt deutlich stabiler Membran als TGF&alpha; oder HB-EGF. Durchschnittlich 24 AREG-Molek&uuml;le werden innerhalb eines einzelnen Exosome gepackt, und AREG Exosomes sind vom Empf&auml;nger Zellen schnell verinnerlicht. Ist unbekannt, ob die Zusammensetzung und das Verhalten des Exosomes zwischen nontransformed und transformierten Zellen unterscheiden. Exosomes von DLD-1 Doppelpunkt Krebszellen mit einer mutierten KRAS-Allel ausgestellt AREG h&ouml;heres und gr&ouml;&szlig;eres invasiven Potenzial als Exosomes aus isogenically &uuml;bereinstimmenden, nontransformed Zellen in denen Mutant KRAS schied durch homologe Rekombination. Wir spekulieren, dass diverse Krebs Ph&auml;nomenen wie Feldeffekt und Grundierung der metastasierendem Nische EGFR-Liganden, die Signalisierung &uuml;ber Exosomes beitragen k&ouml;nnten.

Amphiregulin Exosomes erh&ouml;hen Krebs Zelle Einmarsch.

Autocrino, paracrina e juxtacrine sono riconosciuti modalit&agrave; di azione di ligandi EGFR mammiferi inclusi, EGF, TGF-&alpha; (TGF&alpha;), Anfiregulina (AREG), eparina-binding EGF-like growth factor (HB-EGF), Betacellulina, Epiregulina ed epigen. Identifichiamo una nuova modalit&agrave; di ligando EGFR signaling via fatto. Materno e le cellule di cancro del colon-retto rilasciano fatto contenenti leganti EGFR signaling-competente, full-length. Fatto isolato da cellule MDCK esprimendo full-length EGFR ligandi visualizzati differenziale attivit&agrave; individuali; AREG fatto maggiore invasivit&agrave; delle cellule di cancro al seno destinatario 4 volte sopra fatto TGF&alpha; o HB-EGF e 5-fold sopra la quantit&agrave; equivalente di AREG ricombinante. Exosomal AREG visualizzati significativamente maggiore stabilit&agrave; di membrana che TGF&alpha; o HB-EGF. Una media di 24 molecole AREG sono confezionati all&#39;interno di un singolo exosome e fatto AREG &egrave; rapidamente interiorizzato da destinatario delle cellule. Se la composizione e il comportamento di fatto differiscono tra nontransformed e trasformate cellule &egrave; sconosciuto. Fatto da cellule di cancro del colon DLD-1 con un allele mutante KRAS esposto sia pi&ugrave; elevati livelli AREG e maggiore potenziale invasivo rispetto fatto da isogenically abbinate, nontransformed le cellule in cui mutante KRAS &egrave; stato eliminato da ricombinazione omologa. Si ipotizzano che ligando EGFR signaling via fatto potrebbe contribuire a fenomeni diversi tumori come effetto di campo e innesco della nicchia metastatica.

Anfiregulina fatto aumenta l&#39;invasione delle cellule di cancro.

&#x3001;&#x30AA;&#x30FC;&#x30C8;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x30E9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x3001;&#x3068;juxtacrine&#x306F;&#x3001;EGF&#x3001;TGF-&#x3B1;&#xFF08;TGF&#x3B1;&#xFF09;&#x3001;&#x30A2;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EC;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#xFF08;AREG&#xFF09;&#x3001;&#x30D8;&#x30D1;&#x30EA;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;EGF&#x69D8;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF08;HB-EGF&#xFF09;&#x3001;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x30BB;&#x30EB;&#x30EA;&#x30F3;&#x3001;epiregulin&#x3001;&#x3068;epigen&#x542B;&#x3080;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;EGFR&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x884C;&#x52D5;&#x306E;&#x8A8D;&#x8B58;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x7D4C;&#x7531;&#x3057;&#x3066;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;EGFR&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D2;&#x30C8;&#x4E73;&#x764C;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5927;&#x8178;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;EGFR&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9; - &#x6709;&#x80FD;&#x306A;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x89E3;&#x653E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5DEE;&#x52D5;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;&#x306E;EGFR&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;MDCK&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x5358;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3002;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;AREG&#x306F;&#x3001;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;AREG&#x306E;&#x76F8;&#x5F53;&#x984D;&#x4EE5;&#x4E0A;TGF&#x3B1;&#x3084;HB-EGF&#x306E;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x4E0A;&#x306E;4&#x500D;&#x3068;5&#x500D;&#x306E;&#x53D7;&#x4FE1;&#x8005;&#x306E;&#x4E73;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D78;&#x6F64;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002; Exosomal AREG&#x306F;&#x3001;TGF&#x3B1;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;HB-EGF&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x819C;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; 24 AREG&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x5E73;&#x5747;&#x306F;&#x3001;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x5185;&#x306B;&#x30D1;&#x30C3;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;AREG&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x69CB;&#x6210;&#x3068;&#x52D5;&#x4F5C;&#x306F;&#x3001;&#x975E;&#x5F62;&#x8CEA;&#x3068;&#x5F62;&#x8CEA;&#x8EE2;&#x63DB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x3067;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x5909;&#x7570;KRAS&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5BFE;&#x7ACB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x6301;&#x3064;DLD-1&#x7D50;&#x8178;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;AREG&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3068;&#x5909;&#x7570;KRAS&#x306F;&#x3001;&#x76F8;&#x540C;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9664;&#x53BB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;isogenically&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3001;&#x975E;&#x5F62;&#x8CEA;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x8D85;&#x3048;&#x3066;&#x6D78;&#x6F64;&#x80FD;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x7D4C;&#x7531;&#x3057;&#x3066;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;EGFR&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x8EE2;&#x79FB;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C1;&#x306E;&#x96FB;&#x754C;&#x52B9;&#x679C;&#x3068;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x764C;&#x306E;&#x73FE;&#x8C61;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x63A8;&#x6E2C;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30A2;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EC;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D78;&#x6F64;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;

Autocrine, paracrine, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; juxtacrine&#xC758; EGF, TGF-&alpha; (TGF&alpha;), amphiregulin (AREG), &#xD5E4; &#xD30C; &#xB9B0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; EGF &#xAC19;&#xC740; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; (EGF HB), betacellulin, epiregulin, &#xBC0F; epigen&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; EGFR ligands &#xB3D9;&#xC791; &#xC778;&#xC2DD;&#xB41C; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xAC00; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; exosomes&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC2E0;&#xD638; EGFR &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC720;&#xBC29;&#xC554;&#xACFC; &#xB300; &#xC7A5; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774;, &#xC2E0;&#xD638; &#xC720;&#xB2A5;&#xD55C; EGFR ligands exosomes &#xCD9C;&#xC2DC;. &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; EGFR ligands &#xD45C;&#xD604; MDCK &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB41C; Exosomes &#xD45C;&#xC2DC; &#xCC28;&#xB3D9; &#xD65C;&#xB3D9;; AREG exosomes &#xC99D;&#xAC00; &#xBC1B;&#xB294; &#xC0AC;&#xB78C; &#xC720;&#xBC29;&#xC554; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xCE68;&#xC785; 4-fold TGF&alpha; &#xB610;&#xB294; HB EGF exosomes &#xBC0F; 5-fold &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; AREG&#xC758; &#xC0C1;&#xC751; &#xD558;&#xB294; &#xAE08;&#xC561; &#xC774;&#xC0C1;. Exosomal AREG TGF&alpha; &#xB610;&#xB294; HB EGF &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD788; &#xD070; &#xB9C9; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. 24 AREG &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xD3C9;&#xADE0; &#xAC1C;&#xBCC4; exosome &#xB0B4;&#xC5D0; &#xD328;&#xD0A4;&#xC9C0;&#xD654; &#xB418; &#xACE0; AREG exosomes &#xBE60;&#xB974;&#xAC8C; &#xBC1B;&#xB294; &#xC0AC;&#xB78C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB0B4; &#xBA74;. Exosomes &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC791;&#xACFC; &#xAD6C;&#xC131; nontransformed &#xBC0F; &#xBCC0;&#xD658; &#xB41C; &#xC140; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xC9C0; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xC54C; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. DLD 1 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; KRA &#xB300;&#xB9BD; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC640; &#xACB0; &#xC7A5; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; Exosomes &#xC804;&#xC2DC; AREG &#xC0C1;&#xBD80;&#xC640;&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; isogenically &#xC77C;&#xCE58;, nontransformed &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; exosomes &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xD070; &#xCE68;&#xB7B5; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131; KRA &#xB3D9;&#xC885; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD0C8;&#xB77D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; EGFR &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; &#xC2E0;&#xD638; exosomes&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xD544;&#xB4DC; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBC0F; &#xC804;&#xC774;&#xC131; &#xD2C8;&#xC0C8;&#xC758; &#xC560; &#xBC8C; &#xCE60; &#xB4F1; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC554; &#xD604;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xCD94;&#xCE21; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;.

Amphiregulin exosomes &#xC554; &#xC138;&#xD3EC; &#xCE68;&#xACF5; &#xC99D;&#xAC00;.

Autocrina, paracrina y yuxtacrina se reconocen los modos de acci&#xF3;n para los ligandos del EGFR mam&#xED;feros, incluidos los EGF, TGF-&#x3B1; (TGF&#x3B1;), anfiregulina (AREG), heparina vinculante FEAG factor de crecimiento similar (HB-EGF), betacelulina, epirregulina y EPIGEN . Identificamos un nuevo modo de ligando de EGFR se&#xF1;alizaci&#xF3;n a trav&#xE9;s de exosomas. Materna humana y las c&#xE9;lulas de c&#xE1;ncer colorrectal liberar exosomas que contienen de larga duraci&#xF3;n, lo que indica-competentes ligandos del EGFR. Exosomas aisladas a partir de c&#xE9;lulas MDCK expresan individuales de longitud completa ligandos EGFR mostrados actividades diferenciales; exosomas AREG aument&#xF3; la invasividad de las c&#xE9;lulas receptoras de c&#xE1;ncer de mama 4-veces m&#xE1;s TGF&#x3B1; o exosomas HB-EGF y 5-plegado sobre cantidades equivalentes de AREG recombinante. AREG Exosomal muestran estabilidad significativamente mayor que la membrana TGF&#x3B1; o HB-EGF. Un promedio de 24 mol&#xE9;culas AREG se empaquetan en un exosoma individual, y exosomas AREG son r&#xE1;pidamente internalizados por las c&#xE9;lulas receptoras. Tanto la composici&#xF3;n y el comportamiento de exosomas difieren entre las c&#xE9;lulas no transformadas y transformado es desconocida. Los exosomas de DLD-1 en las c&#xE9;lulas de c&#xE1;ncer de colon con un alelo mutante del gen KRAS expuesto tanto a nivel AREG superior y un mayor potencial invasivo que exosomas de isogenically encontrados, las c&#xE9;lulas no transformadas en el que KRAS mutado fue eliminado por recombinaci&#xF3;n hom&#xF3;loga. Creemos que la se&#xF1;alizaci&#xF3;n del EGFR ligando a trav&#xE9;s de exosomas podr&#xED;an contribuir a fen&#xF3;menos tan diversos como el c&#xE1;ncer de efecto de campo y el cebado del nicho metast&#xE1;sico.

Los exosomas anfiregulina Aumentar la invasi&#xF3;n del c&#xE1;ncer de la c&#xE9;lula

Recessive mutations in RTTN, encoding the protein rotatin, were originally identified as cause of polymicrogyria, a cortical malformation. With time, a wide variety of other brain malformations has been ascribed to RTTN mutations, including primary microcephaly. Rotatin is a centrosomal protein possibly involved in centriolar elongation and ciliogenesis. However, the function of rotatin in brain development is largely unknown and the molecular disease mechanism underlying cortical malformations has not yet been elucidated. We performed both clinical and cell biological studies, aimed at clarifying rotatin function and pathogenesis. Review of the 23 published and five unpublished clinical cases and genomic mutations, including the effect of novel deep intronic pathogenic mutations on RTTN transcripts, allowed us to extrapolate the core phenotype, consisting of intellectual disability, short stature, microcephaly, lissencephaly, periventricular heterotopia, polymicrogyria and other malformations. We show that the severity of the phenotype is related to residual function of the protein, not only the level of mRNA expression. Skin fibroblasts from eight affected individuals were studied by high resolution immunomicroscopy and flow cytometry, in parallel with in vitro expression of RTTN in HEK293T cells. We demonstrate that rotatin regulates different phases of the cell cycle and is mislocalized in affected individuals. Mutant cells showed consistent and severe mitotic failure with centrosome amplification and multipolar spindle formation, leading to aneuploidy and apoptosis, which could relate to depletion of neuronal progenitors often observed in microcephaly. We confirmed the role of rotatin in functional and structural maintenance of primary cilia and determined that the protein localized not only to the basal body, but also to the axoneme, proving the functional interconnectivity between ciliogenesis and cell cycle progression. Proteomics analysis of both native and exogenous rotatin uncovered that rotatin interacts with the neuronal (non-muscle) myosin heavy chain subunits, motors of nucleokinesis during neuronal migration, and in human induced pluripotent stem cell-derived bipolar mature neurons rotatin localizes at the centrosome in the leading edge. This illustrates the role of rotatin in neuronal migration. These different functions of rotatin explain why RTTN mutations can lead to heterogeneous cerebral malformations, both related to proliferation and migration defects.

Heterogeneous clinical phenotypes and cerebral malformations reflected by rotatin cellular dynamics.

The mortality and morbidity of patients with congenital diaphragmatic hernia (CDH) is primarily caused by treatment-resistant, persistent pulmonary hypertension. Structural vascular changes, exemplified by extensive muscularization, are already present early in gestation, but the origin of these abnormalities is unknown. Understanding the origin of the vascular defects is important to improve treatment modalities. Here, we show that the distribution of pericytes is different and may thereby potentially initiate the vascular pathology in CDH. Transient inhibition of retinoic acid (RA) signaling early during pregnancy, the basis of the CDH mouse model, led to an increase in the number of pericytes, thereby affecting the angiogenic potential of pericytes in the fetuses. Pericytes of CDH lungs showed reduced proliferation and an increased ACTA2 expression, which indicates that these pericytes are more contractile than in control lung pericytes. This resulted in increased pericyte coverage of pulmonary vessels and reduced expansion of the capillary bed, the earliest pathological sign of the structural changes in CDH. Furthermore, the pericytes had reduced and altered collagen IV deposition in CDH, pointing to a loss of basal membrane integrity between pericytes and endothelial cells. Inhibition of RA signaling in vitro resulted in reduced migration of pericytes, reduced angiogenesis, and loss of collagen IV expression. Importantly, we confirmed our findings in lungs of human CDH patient samples. In summary, inhibition of RA signaling affects the lung pericyte population, leading to increased contractility, reduced pulmonary angiogenesis, and aberrant lung development, as observed in CDH.

Inhibition of retinoic acid signaling induces aberrant pericyte coverage and differentiation resulting in vascular defects in congenital diaphragmatic hernia.

Cell invasion through extracellular matrix (ECM) is a critical step in tumor metastasis. To study cell invasion in vitro, the internal microenvironment can be simulated via the application of 3D models.

ArticleTotal : 2	Year
Publication title Cited by 5	2010
Publication title Cited by 5	2022

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Gert-Jan Kremers

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