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MISSION esiRNA for RNAi Screening in Mammalian Cells

RNA interference (RNAi) is a basic cellular mechanism for the control of gene expression. RNAi is induced by short double-stranded RNAs also known as ...

Max Planck Institute of Molecular Cell Biology and Genetics

Cytohesins &#x662F;&#x4E00;&#x5BB6;&#x4EBA;&#xFF0C;&#x884C;&#x4E8B; ADP &#x6838;&#x7CD6;&#x56E0;&#x7D20; &#xFF08;&#x3001;&#xFF09; &#x7684;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x540C;&#x6E90;&#x9E1F;&#x560C;&#x5464;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x4EA4;&#x6D41;&#x56E0;&#x7D20; (GEFs)&#x3002;&#x5C0F;&#x7684;&#x4E1C;&#x76DF;&#x5730;&#x533A;&#x8BBA;&#x575B; GEFs &#x53C2;&#x4E0E;&#x4E86;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3001; &#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x91CD;&#x6784;&#xFF0C;&#x548C;&#x56CA;&#x6CE1;&#x8FD0;&#x8F93;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x9009;&#x62E9;&#x548C;&#x5E94;&#x7528;&#x7279;&#x5B9A;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7ED3;&#x5408;&#x7F51;&#x7AD9;&#x5F00;&#x7F50;&#x5668;&#x4E1C;&#x76DF;&#x533A;&#x57DF;&#x8BBA;&#x575B; &#xFF08;ARNO&#xFF09; &#x7F13;&#x8680;&#x963B;&#x57A2;&#x5242; / cytohesin-2&#xFF0C;&#x660E;&#x786E;&#x533A;&#x522B; cytohesin 1 &#x548C; cytohesin-2 &#x7684; RNA &#x9002;&#x914D;&#x3002;&#x6B64;&#x8BD5;&#x5242;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; N-&#x672B;&#x7AEF;&#x7684; cytohesin-2&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x59A8;&#x788D;&#x4F53;&#x5916;&#x7684;&#x4E1C;&#x76DF;&#x5730;&#x533A;&#x8BBA;&#x575B;&#x548C;&#x5168;&#x7403;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x91D1;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x5F53;&#x67D3;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5B83;&#x6301;&#x7EED;&#x81F3;&#x5C11; 6 h &#x65E0;&#x9700;&#x7A33;&#x5B9A;&#x3002;&#x5176;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x5411;&#x4E0B;&#x8C03;&#x8282;&#x901A;&#x8FC7;&#x8840;&#x6E05;&#x53CD;&#x5E94;&#x5143;&#x7D20;&#x548C;&#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x4E1D;&#x88C2;&#x7D20;&#x6D3B;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x6FC0;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x8BE5; cytohesin-2 &#x884C;&#x4E3A;&#x4EE5;&#x4E1D;&#x88C2;&#x7D20;&#x6D3B;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x7684; N-&#x672B;&#x7AEF;&#x87BA;&#x65CB;&#x7EBF;&#x5708;&#x548C; cytohesin-2 Sec7 &#x57DF;&#x90E8;&#x5206;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x8840;&#x6E05;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x5316;&#x7684; nonimmune &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F; cytohesin-1&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; intramer &#x6280;&#x672F;&#x53EF;&#x7528;&#x4E8E;&#x4E0D;&#x53EA;&#x5206;&#x914D;&#x5230;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6216;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x57DF;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8981;&#x8BC1;&#x660E;&#x5197;&#x4F59;&#x5EA6;&#x4E3A;&#x96F6;&#x5B50;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x540C;&#x6E90;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x65B0;&#x578B;&#x751F;&#x7269;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;

&#x6B67;&#x89C6;&#x6027;&#x9002;&#x914D;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86; cytohesin 2 &#x53D7;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684;&#x8840;&#x6E05;&#x53CD;&#x5E94;&#x5143;&#x7D20;&#x8F6C;&#x5F55;&#x3002;

Cytohesins are a family of highly homologous guanine nucleotide exchange factors (GEFs) that act on ADP-ribosylation factors (ARFs). The small ARF-GEFs are involved in integrin signaling, actin cytoskeleton remodeling, and vesicle transport. Here, we selected and applied a specific inhibitor for ARF nucleotide-binding site opener (ARNO)/cytohesin-2, an RNA aptamer that clearly discriminates between cytohesin-1 and cytohesin-2. This reagent bound to an N-terminal segment of cytohesin-2 and did not inhibit ARF-GEF function in vitro. When transfected into HeLa cells, it persisted for at least 6 h without requiring stabilization. Its effect in vivo was to down-regulate gene expression mediated through the serum-response element and knockdown mitogen-activated protein kinase activation, indicating that cytohesin-2 acts by means of mitogen-activated protein kinase signaling. We conclude that the N-terminal coiled-coil and parts of the Sec7 domain of cytohesin-2 are required for serum-mediated transcriptional activation in nonimmune cells, whereas cytohesin-1 is not. Our results indicate that intramer technology can be used not only for assigning novel biological functions to proteins or protein domains but also to prove nonredundancy of highly homologous proteins.

Discriminatory aptamer reveals serum response element transcription regulated by cytohesin-2.

Cytohesins sont une famille de facteurs d&#39;&eacute;change de nucl&eacute;otide de guanine tr&egrave;s homologues (GEFs) qui agissent sur les facteurs de l&#39;ADP-ribosylation (ARFs). Les petites ARF-GEFs sont impliqu&eacute;s dans la signalisation int&eacute;grine, remodelage de l&#39;actine cytosquelette et transport v&eacute;siculaire. Ici, nous avons s&eacute;lectionn&eacute; et appliqu&eacute; un inhibiteur sp&eacute;cifique de l&#39;ouvreur de site de liaison nucl&eacute;otidique ARF (ARNO) / cytoh&eacute;sine-2, un aptam&egrave;re RNA qui discrimine clairement entre la cytoh&eacute;sine-1 et cytoh&eacute;sine-2. Ce r&eacute;actif li&eacute; &agrave; un segment N-terminal de la cytoh&eacute;sine-2 et n&#39;inhibe pas la fonction ARF-FEM in vitro. Lorsque transfect&eacute;s dans des cellules HeLa, il a persist&eacute; pendant au moins 6 h sans n&eacute;cessiter de stabilisation. Son effet in vivo &eacute;tait de down-r&eacute;gulent l&#39;expression g&eacute;nique m&eacute;di&eacute;e par la s&eacute;rum-r&eacute;ponse &eacute;l&eacute;ment knockdown mitogen-activated protein kinase activation et, ce qui indique que cytoh&eacute;sine-2 agit au moyen de la signalisation de mitogen-activated protein kinase. Nous concluons que les parties du domaine Sec7 de cytoh&eacute;sine-2 et N-terminale coiled-coil sont requis pour l&#39;activation transcriptionnelle m&eacute;di&eacute;e par le s&eacute;rum dans les cellules non immuns, tandis que la cytoh&eacute;sine-1 n&#39;est pas. Nos r&eacute;sultats indiquent que les intramer technologie peut &ecirc;tre utilis&eacute;e non seulement pour l&#39;attribution de nouvelles fonctions biologiques aux prot&eacute;ines ou domaines prot&eacute;iques, mais aussi de prouver nonredundancy des prot&eacute;ines hautement homologues.

Aptam&egrave;re discriminatoire r&eacute;v&egrave;le transcription d&#39;&eacute;l&eacute;ment de r&eacute;ponse s&eacute;rum r&eacute;gul&eacute;e par cytoh&eacute;sine-2.

Diskriminierende Aptamer zeigt Serum Response Element Transkription durch Cytohesin-2 reguliert.

Cytohesins sono una famiglia di fattori di scambio di nucleotide di guanina altamente omologhe (GEFs) che agiscono sui fattori ADP-ribosylation (ARFs). Il piccola ARF-GEFs sono coinvolti nella segnalazione dell&#39;integrina, rimodellamento del citoscheletro di actina e trasporto vescicola. Qui, abbiamo selezionato e applicato un inibitore specifico per la gara di apertura ARF nucleotide-binding sito (ARNO) / cytohesin-2, un aptamer di RNA che chiaramente discrimina tra cytohesin-1 e cytohesin-2. Questo reagente associato a un segmento N-terminale di cytohesin-2 e non inibire la funzione ARF-GEF in vitro. Quando transfected in cellule HeLa, persistenti per almeno 6 h senza la necessit&agrave; di stabilizzazione. Il suo effetto in vivo &egrave; stata di down-regolare espressione del gene mediato attraverso il siero-risposta elemento e atterramento proteina mitogene-attivata della chinasi attivazione, indicando che cytohesin-2 agisce mediante segnalazione della chinasi di proteina mitogene-attivata. Possiamo concludere che il N-terminale coiled-coil e parti del dominio Sec7 di cytohesin-2 sono necessari per l&#39;attivazione trascrizionale mediata dal siero in cellule non immune, considerando che non &egrave; cytohesin-1. I nostri risultati indicano che la tecnologia di intramer pu&ograve; essere utilizzata non solo per l&#39;assegnazione di nuove funzioni biologiche di proteine o domini della proteina, ma anche per dimostrare nonredundancy di proteine altamente omologhe.

Aptamer discriminatorio rivela trascrizione di elemento risposta siero regolata da cytohesin-2.

Cytohesins &#x306F;&#x3001;ADP &#x30EA;&#x30DC;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50; &#xFF08;ARFs&#xFF09; &#x3092;&#x52D5;&#x4F5C;&#x9AD8;&#x3044;&#x76F8;&#x540C;&#x30B0;&#x30A2;&#x30CB;&#x30F3; &#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x4EA4;&#x63DB;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF09; &#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A; Arf-gef &#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x6539;&#x9020;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5C0F;&#x80DE;&#x8F38;&#x9001;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x9078;&#x629E;&#x306E; ARF &#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x958B;&#x5E55;&#x6226; (ARNO) &#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x9069;&#x7528;/cytohesin 2 cytohesin 1 &#x3068; cytohesin 2 &#x306E;&#x9593;&#x3092;&#x660E;&#x78BA;&#x306B;&#x5DEE;&#x5225;&#x3059;&#x308B; RNA &#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x8A66;&#x85AC;&#x306F;&#x3001;cytohesin 2 &#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3057;&#x3001;in vitro ARF GEF &#x95A2;&#x6570;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;HeLa &#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3068;&#x304D;&#x306F;&#x3001;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082; 6 h &#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x305B;&#x305A;&#x4FDD;&#x6301;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092; in vivo &#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E; cytohesin 2 &#x30DE;&#x30A4;&#x30C8;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x884C;&#x70BA;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;&#x8840;&#x6E05;&#x5FDC;&#x7B54;&#x8981;&#x7D20;&#x3068;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3; &#x30DE;&#x30A4;&#x30C8;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3001;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x898F;&#x5236;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Cytohesin 1 &#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x6211;&#x3005; N &#x672B;&#x7AEF;&#x30B3;&#x30A4;&#x30EB;&#x30C9; &#x30B3;&#x30A4;&#x30EB;&#x304A;&#x3088;&#x3073; Sec7 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E; cytohesin-2 &#x306E;&#x90E8;&#x54C1;&#x304C;&#x8840;&#x6E05;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x975E;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x9AD8;&#x3044;&#x76F8;&#x540C;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E; nonredundancy &#x3092;&#x8A3C;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5272;&#x308A;&#x5F53;&#x3066;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E; intramer &#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x5DEE;&#x5225;&#x7684;&#x306A;&#x8840;&#x6E05;&#x5FDC;&#x7B54;&#x8981;&#x7D20;&#x8EE2;&#x5199; cytohesin-2 &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Cytohesins&#xB294; ADP ribosylation &#xC694;&#xC778; (ARFs)&#xC5D0; &#xB192;&#xC740; &#xB3D9;&#xC885; guanine &#xC5FC;&#xAE30; &#xAD50;&#xD658; &#xC694;&#xC778; (&#xC870;&#xB2EC;)&#xC758; &#xAC00;&#xC871;. &#xC791;&#xC740; &#xBA4D; &#xBA4D; &#xC870;&#xB2EC; integrin &#xC2E0;&#xD638;, &#xB9D0;&#xB77C; cytoskeleton &#xAC1C;&#xC7A5;, &#xC18C;&#xD3EC; &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC120;&#xD0DD;&#xD55C; ARF &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC624;&#xD504;&#xB108; (ARNO)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD2B9;&#xC815; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xC801;&#xC6A9; / cytohesin-2, cytohesin-1 cytohesin-2 &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xCC28;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294; RNA aptamer&#xB294;. &#xC774; &#xC2DC; &#xC57D; cytohesin 2&#xC758; N &#xB2E8;&#xC790; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB418;&#xBA70; ARF GEF &#xD568;&#xC218; &#xCCB4; &#xC678;&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xD5EC;&#xB7EC; &#xC138;&#xD3EC;&#xB85C; &#xD398; &#xB54C; &#xC548;&#xC815;&#xD654; &#xD544;&#xC694; &#xC5C6;&#xC774; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; 6 h&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC9C0;. In vivo &#xD6A8;&#xACFC; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xC911;&#xC7AC;&#xB294; &#xD608; &#xCCAD; &#xBC18;&#xC751; &#xC694;&#xC18C;&#xC640; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574;, cytohesin-2 &#xBB3C;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC791;&#xB3D9;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; N &#xB2E8;&#xC790;&#xC5D0; &#xCF54;&#xC77C; &#xCF54;&#xC77C; &#xBC0F; cytohesin 2 Sec7 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80;&#xB294; nonimmune &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD608; &#xCCAD; &#xC911;&#xC7AC; transcriptional &#xC815;&#xD488; &#xC778;&#xC99D;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xBC18;&#xBA74; cytohesin-1&#xC740; &#xACB0;&#xB860; &#xC9C0;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; intramer &#xAE30;&#xC220; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xB192;&#xC740; &#xB3D9;&#xC885; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; nonredundancy&#xC744; &#xC99D;&#xBA85; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB610;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD560;&#xB2F9;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCC28;&#xBCC4;&#xC801;&#xC778; aptamer &#xD608; &#xCCAD; &#xBC18;&#xC751; &#xC694;&#xC18C; &#xC804;&#xC0AC;&#xB97C; cytohesin-2&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;.

Cytohesins son una familia de la altamente hom&oacute;logas guanina nucle&oacute;tido factores de intercambio (GEFs) que act&uacute;an sobre los factores de ribosilacion-(ARFs). Los peque&ntilde;os ARF-GEFs participan en la se&ntilde;alizaci&oacute;n de integrina, remodelaci&oacute;n del citoesqueleto de actina y transporte de la ves&iacute;cula. Aqu&iacute;, seleccionamos y aplica un inhibidor espec&iacute;fico para abridor de sitio de uni&oacute;n a nucle&oacute;tido ARF (ARNO) / cytohesin-2, un apt&aacute;mero de RNA que discrimina claramente entre cytohesin-1 y cytohesin-2. Este reactivo hab&iacute;a destinada a un segmento N-terminal de cytohesin-2 y no inhibir la funci&oacute;n de ARF-FMAM in vitro. Cuando transfectadas en c&eacute;lulas HeLa, persisti&oacute; durante al menos 6 horas sin necesidad de estabilizaci&oacute;n. Su efecto in vivo fue abajo-regulan la expresi&oacute;n g&eacute;nica mediada por la suero-respuesta elemento y ca&iacute;da mit&oacute;geno activada de la prote&iacute;na cinasa activaci&oacute;n, indicando que cytohesin-2 act&uacute;a por medio de se&ntilde;alizaci&oacute;n de cinasa de prote&iacute;na mitogen-activados. Concluimos que el N-terminal coiled-coil y partes del dominio Sec7 de cytohesin-2 son necesarias para la activaci&oacute;n transcripcional mediada por suero en c&eacute;lulas no inmunitaria, Considerando que no es cytohesin-1. Nuestros resultados indican que la tecnolog&iacute;a de intramer puede utilizarse no s&oacute;lo para la asignaci&oacute;n de nuevas funciones biol&oacute;gicas para prote&iacute;nas o dominios proteicos sino tambi&eacute;n para demostrar la nonredundancy de prote&iacute;nas altamente hom&oacute;logas.

Apt&aacute;meros discriminatorias revela la transcripci&oacute;n de elemento de respuesta de suero regulado por cytohesin-2.

&#x975E;&#x7F16;&#x7801; RNA B2 &#x548C; RNA &#x9002;&#x914D; FC &#x7ED1;&#x5B9A; RNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; (Pol) &#x4E8C;&#x5E76;&#x6291;&#x5236;&#x4FE1;&#x4F7F; RNA &#x8F6C;&#x5F55;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x542F;&#x52A8;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x4F38;&#x957F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A; FC(*)&#xFF0C;FC RNA&#xFF0C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; Pol II &#x7684;&#x4E2D;&#x592E;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;FC(*) RNA &#x5F62;&#x6210; Pol II &#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x4E2D;&#x5FC3;&#xFF0C;&#x88C2;&#x5E72;&#x53CC;&#x73AF;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;B2 RNA &#x53EF;&#x80FD;&#x540C;&#x6837;&#xFF0C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5B83;&#x4E0E; FC(*) RNA Pol II &#x4E92;&#x52A8;&#x7ADE;&#x4E89;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD; RNA &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x663E;&#x7136;&#x662F;&#x9632;&#x6B62;&#x4E0B;&#x6E38; DNA &#x53CC;&#x5DE5;&#x548C;&#x6A21;&#x677F;&#x5355;&#x94FE; DNA &#x7194;&#x5316;&#x540E;&#x8FDB;&#x5165;&#x88C2;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x5E72;&#x6270;&#x6253;&#x5F00;&#x590D;&#x6742;&#x5730;&#x5C42;&#x3002;&#x4F38;&#x957F;&#x7387;&#x4E0D;&#x53D7;&#x5230;&#x6291;&#x5236;&#xFF0C;&#x5982;&#x6838;&#x9178;&#x5728;&#x816D;&#x88C2; prebound &#x5C06;&#x6392;&#x9664; RNA &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3002;&#x7ED3;&#x6784;&#x8FD8;&#x6307;&#x793A; A &#x7A97;&#x4F53; RNA &#x53EF;&#x4EE5;&#x540C;&#x6837;&#x4EA4;&#x4E92;&#x4E0E; Pol II B &#x578B; DNA &#x63A8;&#x52A8;&#x8005;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x7EC6;&#x83CC;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6291;&#x5236;&#x5242; 6S RNA &#x7684;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x3002;

&#x7ED3;&#x6784;&#x590D;&#x6742;&#x7684; RNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; II RNA &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x9610;&#x660E;&#x975E;&#x7F16;&#x7801; Rna &#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8C03;&#x63A7;&#x3002;

The noncoding RNA B2 and the RNA aptamer FC bind RNA polymerase (Pol) II and inhibit messenger RNA transcription initiation, but not elongation. We report the crystal structure of FC(*), the central part of FC RNA, bound to Pol II. FC(*) RNA forms a double stem-loop structure in the Pol II active center cleft. B2 RNA may bind similarly, as it competes with FC(*) RNA for Pol II interaction. Both RNA inhibitors apparently prevent the downstream DNA duplex and the template single strand from entering the cleft after DNA melting and thus interfere with open-complex formation. Elongation is not inhibited, as nucleic acids prebound in the cleft would exclude the RNA inhibitors. The structure also indicates that A-form RNA could interact with Pol II similarly to a B-form DNA promoter, as suggested for the bacterial transcription inhibitor 6S RNA.

Structure of an RNA polymerase II-RNA inhibitor complex elucidates transcription regulation by noncoding RNAs.

Le B2 ARN non codants et le RNA aptam&egrave;re FC lient l&#39;ARN polym&eacute;rase (Pol) II et inhibent l&#39;initiation de la transcription de l&#39;ARN messager, mais pas d&#39;allongement. Nous rapportons la structure cristalline du FC(*), la partie centrale de l&#39;ARN de FC, li&eacute; &agrave; la Pol II. FC(*) ARN forme une structure double tige-boucle dans le centre actif de Pol II une fente. B2 RNA pouvant lier de la m&ecirc;me fa&ccedil;on, comme il est en concurrence avec FC(*) ARN pour l&#39;interaction de la Pol II. Les deux inhibiteurs de la RNA apparemment emp&ecirc;chent l&#39;ADN en aval recto verso et le toron de mod&egrave;le dans la fente apr&egrave;s la fusion de l&#39;ADN et donc interf&egrave;rent avec la formation d&#39;un complexe ouvert. Allongement n&#39;est pas inhib&eacute;e, comme les acides nucl&eacute;iques pr&eacute;li&eacute;s dans la fente exclurait les inhibiteurs de la RNA. La structure indique &eacute;galement que le RNA A-formulaire pourrait interagir avec Pol II de m&ecirc;me &agrave; un promoteur de la forme B-ADN, comme l&#39;a sugg&eacute;r&eacute; la transcription bact&eacute;riennes inhibiteur 6 s ARN.

Structure d&#39;un inhibiteur de l&#39;ARN polym&eacute;rase II-RNA complex &eacute;lucide la r&eacute;gulation de la transcription par l&#39;ARN non codant.

Der nichtkodierende RNA-B2 und die RNA-Aptamer FC binden RNA-Polymerase (Pol) II und Boten-RNA-Transkription-Einleitung, aber keine Dehnung zu hemmen. Wir berichten die Kristallstruktur von FC(*), den zentralen Teil des FC RNA Pol II verpflichtet. FC(*) RNA bildet eine doppelte Haarnadelstruktur im aktiven Zentrum Pol II Gaumenspalte. B2-RNA kann ebenso binden, wie es mit FC(*) RNA Pol II Interaktion konkurriert. Beide RNA-Inhibitoren offenbar verhindern die nachgeschaltete DNA duplex und die Vorlage einzelner Strang der Hasenscharte nach DNA schmelzen und so st&ouml;ren &ouml;ffnen-Komplex-Bildung. Dehnung wird nicht gehemmt, wie Nukleins&auml;uren, die prebound in den Spalt die RNA-Inhibitoren ausschlie&szlig;en w&uuml;rde. Die Struktur zeigt, dass die A-Form-RNA Pol II &auml;hnlich zu B-Form DNA F&ouml;rderer, wie es f&uuml;r die bakterielle Transkription Inhibitor 6S RNA interagieren konnte.

Struktur eine RNS-Polymerase II-RNA-Inhibitor-komplexe erl&auml;utert Transkription Verordnung von noncoding RNAs.

La RNA B2 non codificante e il RNA aptamer FC legano RNA polimerasi (Pol) II e inibire l&#39;iniziazione di trascrizione di RNA messaggero, ma non di allungamento. Riportiamo la struttura cristallina del FC(*), la parte centrale del RNA FC, associato a Pol II. RNA FC(*) forma una struttura a doppio gambo-ciclo nel centro attivo della Pol II schisi. B2 RNA pu&ograve; associare allo stesso modo, come compete con FC(*) RNA per interazione Pol II. Entrambi gli inibitori RNA apparentemente impediscono il duplex di DNA a valle e il filamento singolo modello di entrare la schisi dopo la fusione del DNA e quindi interferiscano con la formazione open-complesso. Allungamento non &egrave; inibita, come acidi nucleici prebound nella fessura escluderebbe gli inibitori di RNA. La struttura indica anche che una forma RNA potrebbe interagire con Pol II allo stesso modo di un promotore di forma B-DNA, come suggerito per il trascrizione batterica inibitore 6S RNA.

Struttura di un inibitore di RNA polimerasi II-RNA complesso chiarisce regolamento trascrizione di RNA non codificante.

&#x975E;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9; RNA B2 &#x3068; RNA &#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC; FC RNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; (Pol) II &#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3001;&#x30E1;&#x30C3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30E3;&#x30FC; RNA &#x8EE2;&#x5199;&#x958B;&#x59CB;&#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x306E;&#x4F38;&#x9577;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;FC(*)&#x3001;FC RNA&#x3001;&#x30DD;&#x30EB; II &#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x4E2D;&#x592E;&#x90E8;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;FC(*) RNA &#x88C2;&#x30DD;&#x30EB; II &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5E79;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x30DD;&#x30EB; II &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E; FC(*) RNA &#x3092;&#x7AF6;&#x3046;&#x3088;&#x3046;&#x306B; B2 RNA &#x306F;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E21;&#x65B9; RNA &#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306F;&#x3001;&#x3069;&#x3046;&#x3084;&#x3089;&#x4E0B;&#x6D41;&#x306E; DNA &#x4E8C;&#x91CD;&#x3068;&#x30C6;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x7E4A;&#x7DAD; DNA &#x306E;&#x878D;&#x89E3;&#x5F8C;&#x88C2;&#x5165;&#x308A;&#x8FBC;&#x307E;&#x306A;&#x3044;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x958B;&#x304F;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x3068;&#x5E72;&#x6E09;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x88C2;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; prebound &#x6838;&#x9178; RNA &#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3092;&#x9664;&#x5916;&#x3059;&#x308B;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3068;&#x4F38;&#x9577;&#x3001;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x307E;&#x305F; A &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0; RNA &#x30DD;&#x30EB; II &#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x7D30;&#x83CC;&#x8EE2;&#x5199;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264; 6 s RNA &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x63D0;&#x6848;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E; B &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0; DNA &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x8907;&#x96D1;&#x306A; RNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; II RNA &#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x975E;&#x7FFB;&#x8A33; Rna &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3092;&#x89E3;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Noncoding RNA b 2&#xC640; RNA aptamer FC RNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; (Pol) II&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xACE0; &#xBA54;&#xC2E0;&#xC800; RNA &#xC804;&#xC0AC; &#xAC1C;&#xC2DC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC5B5;&#xC81C;. &#xC6B0;&#xB9AC; FC(*), FC RNA, 2 &#xCC28; &#xD22C;&#xD45C; &#xC18C;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xC911;&#xC559;&#xBD80;&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xBCF4;&#xACE0;. FC(*) RNA Pol II &#xD65C;&#xC131; &#xC13C;&#xD130; &#xCABC;&#xAC1C;&#xC9C4; &#xC774;&#xC911; &#xC904;&#xAE30; &#xB8E8;&#xD504; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD55C;&#xB2E4;. B2 RNA Pol 2 &#xCC28; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; FC(*) RNA&#xC640; &#xACBD;&#xC7C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C;, &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB450; RNA &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xBD84;&#xBA85;&#xD788; DNA &#xC6A9;&#xC735; &#xD6C4; &#xAC08;&#xB77C;&#xC9C4; &#xD2C8;&#xC5D0; &#xB4E4;&#xC5B4;&#xAC00;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; DNA &#xC774;&#xC911; &#xBC0F; &#xD15C;&#xD50C;&#xB9BF; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC00;&#xB2E5;&#xC744; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC624;&#xD508;-&#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xBC29;&#xD574;. &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC800;&#xD574; &#xD558;&#xC9C0; &#xAC08;&#xB77C;&#xC9C4; &#xD2C8;&#xC5D0; prebound &#xD575; &#xC0B0; RNA &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xB97C; &#xC81C;&#xC678;&#xD560; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C;. &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; A &#xD615;&#xD0DC;&#xC758; RNA&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; Pol II &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C; &#xC138;&#xADE0; &#xC804;&#xC0AC; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; 6S RNA&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC81C;&#xC548;&#xC73C;&#xB85C; B &#xD615;&#xD0DC;&#xC758; DNA &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; RNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; II-RNA &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; elucidates noncoding RNAs &#xC5EC; &#xC804;&#xC0AC; &#xADDC;&#xC815;.

El RNA B2 codifica y el RNA apt&aacute;meros FC unen RNA polimerasa (Pol) II e inhiben la iniciaci&oacute;n de transcripci&oacute;n del ARN mensajero, pero no de alargamiento. Divulgamos la estructura cristalina de FC(*), la parte central del ARN de la FC, obligado a Pol II. FC(*) ARN forma una estructura de doble lazo del v&aacute;stago-en el centro activo de Pol II de la hendidura. B2 RNA puede obligar de manera similar, ya que compite con el ARN FC(*) para la interacci&oacute;n de Pol II. Ambos inhibidores de RNA al parecer impiden el ADN descendente d&uacute;plex y la hebra de la plantilla en la hendidura despu&eacute;s de derretir de ADN y as&iacute; interfieran con la formaci&oacute;n del complejo abierto. Alargamiento no se inhibe, como &aacute;cidos nucleicos prebound en la hendidura excluir&iacute;a a los inhibidores de la RNA. La estructura tambi&eacute;n indica que uno-forma RNA podr&iacute;a interactuar con Pol II semejantemente a un promotor de la B-forma de ADN, como sugerido para el RNA de 6S de inhibidor de la transcripci&oacute;n bacteriana.

Estructura de un inhibidor de la ARN polimerasa II-RNA complejo aclara la regulaci&oacute;n de la transcripci&oacute;n de los RNAs.

&#x5927;&#x578B;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684; RNA &#x5E72;&#x6270; (RNAi) &#x5C4F;&#x5E55;&#x5177;&#x6709;&#x4E3B;&#x8981;&#x7528;&#x4E8E;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6270; RNA (siRNA) &#x6216;&#x77ED;&#x53D1;&#x5939; RNA (shRNA) &#x5E93;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7B97;&#x6CD5;&#x7684;&#x9884;&#x6D4B;&#x5728;&#x8BBE;&#x8BA1; RNAi &#x89E6;&#x53D1;&#x5668;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6765;&#x6807;&#x8BC6;&#x5355;&#x4E2A;&#x5E8F;&#x5217; mRNA &#x6572;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x529E;&#x6CD5;&#x66FF;&#x4EE3;&#x6700;&#x8FD1;&#x5DF2;&#x4F7F;&#x7528;&#x9176;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x51C6;&#x5907;&#x9176; shRNA &#x548C; siRNA &#x5E93;&#x7684;&#x6982;&#x5FF5;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x5176;&#x4F18;&#x70B9;&#x548C;&#x5C40;&#x9650;&#x6027;&#x3002;

&#x9176;&#x7F16;&#x5199; RNAi &#x5E93;&#x3002;

Large-scale RNA interference (RNAi) screens in mammalian cells have mainly used synthetic small interfering RNA (siRNA) or short hairpin RNA (shRNA) libraries. The RNAi triggers for both of these approaches were designed with algorithm-based predictions to identify single sequences for mRNA knockdown. Alternatives to these approaches have recently been developed using enzymatic methods. Here we describe the concepts of enzymatically prepared shRNA and siRNA libraries, and discuss their strengths and limitations.

Enzymatically prepared RNAi libraries.

&#xC0; grande &#xE9;chelle interf&#xE9;rence ARN (ARNi) &#xE9;crans dans les cellules de mammif&#xE8;res ont principalement utilis&#xE9; synth&#xE9;tiques petits ARN interf&#xE9;rent (siRNA) ou en &#xE9;pingle &#xE0; cheveux courts ARN (shRNA) biblioth&#xE8;ques. Le RNAi d&#xE9;clenche pour ces deux approches ont &#xE9;t&#xE9; con&#xE7;ues avec l&#x26;#39;algorithme &#xE0; base de pr&#xE9;dictions d&#x26;#39;identifier des s&#xE9;quences simples pour effet de choc ARNm. Solutions de rechange &#xE0; ces approches ont &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;velopp&#xE9;es r&#xE9;cemment en utilisant des m&#xE9;thodes enzymatiques. Nous d&#xE9;crivons ici les concepts de shRNA enzymatique pr&#xE9;par&#xE9; et biblioth&#xE8;ques de siARN, et discuter de leurs points forts et les limites.

Pr&#xE9;par&#xE9; par voie enzymatique biblioth&#xE8;ques ARNi

Gro&szlig;e RNA-Interferenz (RNAi)-Bildschirme in den S&auml;ugetier-Zellen haben vorwiegend synthetische small interfering RNA (SiRNA) oder kurze Haarnadel RNA (ShRNA) Bibliotheken. Die RNAi-Trigger f&uuml;r diese beiden Ans&auml;tze wurden mit Algorithmus basierenden Prognosen sollen einzelne Sequenzen f&uuml;r mRNA Niederschlag zu identifizieren. Alternativen zu diesen Ans&auml;tzen sind vor kurzem mit enzymatische Methoden entwickelt worden. Hier beschreiben wir die Konzepte der enzymatisch vorbereitete ShRNA und SiRNA-Bibliotheken, und diskutieren Sie ihre St&auml;rken und Grenzen.

Enzymatisch vorbereitete RNAi-Bibliotheken.

Gli schermi di interferenza (RNAi) RNA su larga scala in cellule di mammifero hanno utilizzato principalmente sintetica piccolo RNA interferente (siRNA) o short hairpin RNA (shRNA) librerie. I trigger di RNAi per entrambi questi approcci sono stati progettati con le previsioni basate su algoritmo per identificare le singole sequenze per atterramento di mRNA. Alternative a questi approcci sono state sviluppate recentemente utilizzando metodi enzimatici. Qui descriviamo i concetti di shRNA enzimaticamente preparato e librerie di siRNA e discutere i loro punti di forza e limitazioni.

Enzimaticamente preparato RNAi librerie.

&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3067;&#x306E;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;RNA&#x5E72;&#x6E09;&#xFF08;RNAi&#xFF09;&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x306F;&#x4E3B;&#x306B;&#x3001;&#x5408;&#x6210;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6E09;RNA&#xFF08;siRNA&#xFF09;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x77ED;&#x9396;&#x30D8;&#x30A2;&#x30D4;&#x30F3;RNA&#xFF08;shRNA&#xFF09;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; RNAi&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304C;mRNA&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30B4;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3068;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306B;&#x4EE3;&#x308F;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x306F;&#x6700;&#x8FD1;&#x3001;&#x9175;&#x7D20;&#x6CD5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x9175;&#x7D20;&#x7684;&#x306B;&#x8ABF;&#x88FD;&#x3057;&#x305F;shRNA&#x304A;&#x3088;&#x3073;siRNA&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x6982;&#x5FF5;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9577;&#x6240;&#x3068;&#x77ED;&#x6240;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x9175;&#x7D20;&#x7684;&#x306B;&#x8ABF;&#x88FD;&#x3057;&#x305F;RNAi&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC;

&#xB300;&#xADDC;&#xBAA8; RNA &#xAC04;&#xC12D; (RNAi) &#xD654;&#xBA74; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xD569;&#xC131; &#xC791;&#xC740; &#xAC04;&#xC12D; RNA (siRNA) &#xB610;&#xB294; &#xC9E7;&#xC740; &#xD5E4;&#xC5B4;&#xD540; RNA (shRNA) &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95; &#xBAA8;&#xB450;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; RNAi &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70; mRNA &#xCD5C;&#xC800;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xC608;&#xCE21; &#xC54C;&#xACE0;&#xB9AC;&#xC998;&#xC744; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xC124;&#xACC4; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB300;&#xC548; &#xCD5C;&#xADFC; &#xD6A8;&#xC18C; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; enzymatically &#xC900;&#xBE44; shRNA siRNA &#xB3C4;&#xC11C;&#xAD00;&#xC758; &#xAC1C;&#xB150;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC7A5;&#xC810;&#xACFC; &#xD55C;&#xACC4;&#xB97C; &#xB17C;&#xC758;.

Enzymatically RNAi &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC; &#xC900;&#xBE44;.

A gran escala de ARN de interferencia (RNAi) en c&#xE9;lulas de mam&#xED;feros pantallas han utilizado principalmente sint&#xE9;ticos ARN interferente peque&#xF1;o (siRNA) o horquilla corta bibliotecas RNA (shRNA). El ARNi activa de estos dos enfoques han sido dise&#xF1;ados con base en algoritmos predicciones para identificar las secuencias individuales de ca&#xED;da del mRNA. Las alternativas a estos enfoques se han desarrollado recientemente mediante m&#xE9;todos enzim&#xE1;ticos. Aqu&#xED; se describen los conceptos de shRNA bibliotecas enzim&#xE1;ticamente preparado y siRNA, y discutir sus fortalezas y limitaciones.

Preparado enzim&#xE1;tico RNAi bibliotecas

RNA &#x5E72;&#x6270; (RNAi) &#x5DF2;&#x6210;&#x4E3A;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x529F;&#x80FD;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x4E00;&#x9879;&#x91CD;&#x8981;&#x6280;&#x672F;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x5B9E;&#x73B0;&#x53EF;&#x9760;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;RNAi &#x5B9E;&#x9A8C;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6548;&#x7387;&#x548C;&#x7279;&#x5B9A;&#x6C89;&#x9ED8;&#x89E6;&#x53D1;&#x5668;&#x662F;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x76EE;&#x524D;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684; endoribonuclease &#x7F16;&#x5199;&#x77ED;&#x5E72;&#x6270; Rna (esiRNAs) &#x4E3A;&#x4EBA;&#x6743;&#x3001; &#x5C0F;&#x9F20;&#x548C;&#x5927;&#x9F20;&#x7684;&#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x6570;&#x636E;&#x96C6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x4E00;&#x79CD;&#x7B97;&#x6CD5;&#x6765;&#x9884;&#x6D4B;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4E09;&#x4E2A;&#x7269;&#x79CD;&#x7684;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x86CB;&#x767D;&#x7F16;&#x7801;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684; esiRNA &#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x6700;&#x4F73;&#x533A;&#x57DF;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x521B;&#x5EFA;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x5E93;&#xFF0C;&#x8C1C;&#xFF0C;&#x76EE;&#x6807;&#x5E8F;&#x5217;&#x548C;&#x5F15;&#x7269;&#x4FE1;&#x606F;&#x7684;&#x68C0;&#x7D22;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x901A;&#x8FC7;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x8FD9;&#x7845;&#x8D44;&#x6E90;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x751F;&#x6210;&#x53EF;&#x7528;&#x4E8E; RNAi &#x7B5B;&#x9009;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684; 16,242 esiRNAs&#x3002;&#x4E0E;&#x5316;&#x5B66;&#x5408;&#x6210; siRNAs &#x7684;&#x6BD4;&#x8F83;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x9AD8;&#x7684;&#x6D88;&#x58F0;&#x6548;&#x679C;&#x7684; esiRNAs &#x548C;&#x7F16;&#x7801; 12-fold &#x51CF;&#x5C11;&#x5173;&#x95ED;-&#x76EE;&#x6807;&#x8A8A;&#x672C;&#xFF0C;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x82AF;&#x7247;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x63D0;&#x51FA;&#x4E86;&#x7684; esiRNA &#x5E93;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x76EE;&#x524D;&#x53EF;&#x7528;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269; RNAi &#x8D44;&#x6E90;&#x7684;&#x6548;&#x7387;&#x3001; &#x6210;&#x672C;&#x6548;&#x76CA;&#x548C;&#x7279;&#x5B9A;&#x5907;&#x7528;&#x3002;

&#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7684; endoribonuclease &#x7F16;&#x5199;&#x77ED;&#x5E72;&#x6270; Rna &#x7684;&#x5177;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8D44;&#x6E90;&#x3002;

RNA interference (RNAi) has become an important technique for loss-of-gene-function studies in mammalian cells. To achieve reliable results in an RNAi experiment, efficient and specific silencing triggers are required. Here we present genome-wide data sets for the production of endoribonuclease-prepared short interfering RNAs (esiRNAs) for human, mouse and rat. We used an algorithm to predict the optimal region for esiRNA synthesis for every protein-coding gene of these three species. We created a database, RiDDLE, for retrieval of target sequences and primer information. To test this in silico resource experimentally, we generated 16,242 esiRNAs that can be used for RNAi screening in human cells. Comparative analyses with chemically synthesized siRNAs demonstrated a high silencing efficacy of esiRNAs and a 12-fold reduction of downregulated off-target transcripts as detected by microarray analysis. Hence, the presented esiRNA libraries offer an efficient, cost-effective and specific alternative to presently available mammalian RNAi resources.

Genome-wide resources of endoribonuclease-prepared short interfering RNAs for specific loss-of-function studies.

L&#x26;#39;interf&#xE9;rence ARN (ARNi) est devenue une technique importante pour la perte de g&#xE8;ne-fonction des &#xE9;tudes dans les cellules de mammif&#xE8;res. Pour obtenir des r&#xE9;sultats fiables dans une exp&#xE9;rience ARNi, efficace et silencieux d&#xE9;clencheurs sp&#xE9;cifiques sont n&#xE9;cessaires. Ici, nous pr&#xE9;sentons l&#x26;#39;ensemble du g&#xE9;nome des ensembles de donn&#xE9;es pour la production de endoribonucl&#xE9;ase pr&#xE9;par&#xE9;s courts ARN interf&#xE9;rents (esiRNAs) pour l&#x26;#39;homme, la souris et le rat. On utilise un algorithme pour pr&#xE9;dire la r&#xE9;gion pour la synth&#xE8;se optimale esiRNA pour chaque g&#xE8;ne codant pour la prot&#xE9;ine de ces trois esp&#xE8;ces. Nous avons cr&#xE9;&#xE9; une base de donn&#xE9;es, Riddle, pour la r&#xE9;cup&#xE9;ration de s&#xE9;quences cibles et de l&#x26;#39;information primaire. Pour tester cela dans les ressources silico exp&#xE9;rimentalement, nous avons g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9; 16,242 esiRNAs qui peuvent &#xEA;tre utilis&#xE9;s pour le d&#xE9;pistage RNAi dans les cellules humaines. Des analyses comparatives avec des siRNA synth&#xE9;tis&#xE9;s chimiquement d&#xE9;montr&#xE9; une efficacit&#xE9; &#xE9;lev&#xE9;e de silence esiRNAs et une r&#xE9;duction de 12 fois de downregulated hors-cible transcriptions que d&#xE9;tect&#xE9;es par analyse microarray. Par cons&#xE9;quent, les biblioth&#xE8;ques esiRNA pr&#xE9;sent&#xE9;s offrent une alternative efficace, rentable et sp&#xE9;cifique &#xE0; l&#x26;#39;heure actuelle disponibles mammif&#xE8;res ressources ARNi.

&#xC9;chelle du g&#xE9;nome entier de Ressources endoribonucl&#xE9;ase pr&#xE9;par&#xE9;s &#xE0; court ARN interf&#xE9;rents sp&#xE9;cifiques pour la perte de fonction des &#xE9;tudes

RNA-Interferenz (RNAi) ist eine wichtige Technik f&uuml;r Verlust der Genfunktion Studien in den S&auml;ugetier-Zellen geworden. Um zuverl&auml;ssige Ergebnisse in einem RNAi-Experiment zu erreichen, sind effiziente und spezifische silencing Trigger erforderlich. Hier pr&auml;sentieren wir genomweiten Datens&auml;tze f&uuml;r die Produktion von Endoribonuclease vorbereitete kurze interferierender RNAs (EsiRNAs) f&uuml;r Human, Maus und Ratte. Wir verwendet einen Algorithmus, um die optimale Region f&uuml;r EsiRNA Synthese f&uuml;r jedes Protein-kodierenden Gen dieser drei Arten vorherzusagen. Wir haben eine Datenbank, R&auml;tsel, f&uuml;r den Abruf von Ziel-Sequenzen und Grundierung Informationen erstellt. Um dies experimentell in Silico Ressource testen, generierten wir 16.242 EsiRNAs, die f&uuml;r RNAi-screening in den menschlichen Zellen verwendet werden kann. Vergleichende Analysen mit chemisch synthetisierte SiRNAs demonstrierte eine hohe silencing Wirksamkeit von EsiRNAs und eine Zw&ouml;lffache des Downregulated aus-Reduktionsziel Abschriften wie von Microarray-Analyse erkannt. Die vorgestellten EsiRNA-Bibliotheken bieten daher eine effiziente, kosteng&uuml;nstige und bestimmte Alternative zur derzeit verf&uuml;gbaren S&auml;ugetier-RNAi-Ressourcen.

Genomweiten Ressourcen des Endoribonuclease vorbereitete kurze interferierender RNAs f&uuml;r spezifische Loss of Function-Studien.

Interferenza del RNA (RNAi) &egrave; diventata un&#39;importante tecnica per studi di perdita di funzione genica in cellule di mammifero. Per ottenere risultati affidabili in un esperimento di RNAi, trigger silenziamento efficienti e specifici sono richiesti. Qui vi presentiamo il set di dati del genome-wide per la produzione di preparati cromosoma breve RNAs d&#39;interferenza (esiRNAs) per uomo, topo e ratto. Abbiamo utilizzato un algoritmo per predire la regione ottima per la sintesi di esiRNA per ogni gene di codificazione della proteina di queste tre specie. Abbiamo creato un database, RiDDLE, per il recupero di informazioni primer e sequenze target. Per fare una prova in silico risorsa sperimentalmente, abbiamo generato 16.242 esiRNAs che pu&ograve; essere utilizzato per RNAi in cellule umane di screening. Analisi comparative con siRNA chimicamente sintetizzati ha dimostrato un&#39;elevata efficacia silenziamento di esiRNAs e una riduzione di conduttori di downregolata fuori bersaglio trascrizioni come rilevato da analisi di microarray. Quindi, le librerie presentato esiRNA offrono un&#39;alternativa efficiente, conveniente e specifica risorse RNAi mammiferi attualmente disponibili.

Genome-wide risorse del cromosoma-preparato short interfering RNAs per studi specifici di perdita di funzione.

RNA&#x5E72;&#x6E09;&#xFF08;RNAi&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x640D;&#x5931;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6280;&#x8853;&#x3068;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; RNAi&#x5B9F;&#x9A13;&#x3001;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x304B;&#x3064;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x3067;&#x4FE1;&#x983C;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3001;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30DC;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x6E96;&#x5099;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x77ED;&#x3044;&#x5E72;&#x6E09;RNA&#xFF08;esiRNAs&#xFF09;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x30EF;&#x30A4;&#x30C9;&#x306A;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;3&#x7A2E;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;esiRNA&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x306A;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30EB;&#x30B4;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x6A19;&#x7684;&#x914D;&#x5217;&#x3068;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x60C5;&#x5831;&#x3092;&#x53D6;&#x5F97;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x3001;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x3001;&#x8B0E;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5B9F;&#x9A13;&#x30B7;&#x30EA;&#x30B3;&#x30EA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x3053;&#x308C;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;RNAi&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;16242 esiRNAs&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5316;&#x5B66;&#x5408;&#x6210;siRNA&#x3068;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x5206;&#x6790;&#x304C;esiRNAs&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x52B9;&#x679C;&#x3068;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x30AA;&#x30D5;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x8EE2;&#x5199;&#x7523;&#x7269;&#x306E;12&#x500D;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x63D0;&#x793A;&#x3055;esiRNA&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x306F;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;RNAi&#x30EA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x3078;&#x306E;&#x3001;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x8CBB;&#x7528;&#x5BFE;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x80A2;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x55AA;&#x5931;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30DC;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x6E96;&#x5099;&#x77ED;&#x3044;&#x5E72;&#x6E09;RNA&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x30EF;&#x30A4;&#x30C9;&#x30EA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;

&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x662F;&#x6240;&#x6709;&#x751F;&#x7269;&#x7684;&#x6839;&#x672C;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x65E8;&#x5728;&#x67E5;&#x660E;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x800C;&#x8A00;&#x975E;&#x5E38;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x5BF9;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x89C4;&#x6A21;&#x4ECB;&#x5BFC; RNA &#x5E72;&#x6270;&#x5C4F;&#x5E55;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E86;&#x56FE;&#x4E66;&#x9986;&#x7684; endoribonuclease &#x7F16;&#x5199;&#x77ED;&#x5E72;&#x6270; Rna &#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x6C89;&#x9ED8;&#x548C;&#x5DF2;&#x7528; DNA &#x542B;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6765;&#x8BC6;&#x522B;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x963B;&#x6EDE;&#x6216;&#x6539;&#x53D8;&#x5BF9;&#x6C89;&#x9ED8;&#x7684;&#x500D;&#x6027;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x548C;&#x8F85;&#x52A9;&#x68C0;&#x5B9A;&#x6CD5;&#x751F;&#x6210;&#x4E5D;&#x4E2A;&#x53C2;&#x6570;&#x529F;&#x80FD;&#x635F;&#x5931;&#x7684; phenoprint &#x4E3A;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8868;&#x578B;&#x7279;&#x5F81;&#x7801;&#x5141;&#x8BB8;&#x8F6C;&#x8BA9;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x7C7B;&#x5C42;&#x6B21;&#x805A;&#x7C7B;&#x3001; &#x8DE8;&#x7269;&#x79CD;&#x5206;&#x6790;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x6570;&#x636E;&#x6316;&#x6398;&#x76F8;&#x7ED3;&#x5408;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7A81;&#x51FA;&#x663E;&#x793A;&#x4E30;&#x5BCC;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x96C6;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x548C;&#x80DE;&#x8D28;&#x5206;&#x88C2; plato &#x65B0;&#x7684;&#x804C;&#x80FD;&#x3002;&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x627E;&#x51FA;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8FDB;&#x5316;&#x4FDD;&#x6301;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8C03;&#x63A7;&#x7F51;&#x7EDC;&#x6307;&#x5BFC;&#x80DE;&#x8D28;&#x5206;&#x88C2;&#x7684;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x7684;&#x6846;&#x67B6;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x4E2D;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5F00;&#x59CB;&#x65B0;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x89C4;&#x6A21; rnai &#x6280;&#x672F;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x57F9;&#x517B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x3002;

Cell division is fundamental for all organisms. Here we report a genome-scale RNA-mediated interference screen in HeLa cells designed to identify human genes that are important for cell division. We have used a library of endoribonuclease-prepared short interfering RNAs for gene silencing and have used DNA content analysis to identify genes that induced cell cycle arrest or altered ploidy on silencing. Validation and secondary assays were performed to generate a nine-parameter loss-of-function phenoprint for each of the genes. These phenotypic signatures allowed the assignment of genes to specific functional classes by combining hierarchical clustering, cross-species analysis and proteomic data mining. We highlight the richness of our dataset by ascribing novel functions to genes in mitosis and cytokinesis. In particular, we identify two evolutionarily conserved transcriptional regulatory networks that govern cytokinesis. Our work provides an experimental framework from which the systematic analysis of novel genes necessary for cell division in human cells can begin.

Genome-scale RNAi profiling of cell division in human tissue culture cells.

La division cellulaire est fondamentale pour tous les organismes. Nous rapportons ici un &#xE9;cran l&#x26;#39;&#xE9;chelle du g&#xE9;nome ARN interf&#xE9;rence &#xE0; m&#xE9;diation dans les cellules HeLa visant &#xE0; identifier les g&#xE8;nes humains qui sont importants pour la division cellulaire. Nous avons utilis&#xE9; une biblioth&#xE8;que de endoribonucl&#xE9;ase pr&#xE9;par&#xE9;s courts ARN interf&#xE9;rents pour le silen&#xE7;age g&#xE9;nique et ont utilis&#xE9; l&#x26;#39;analyse du contenu en ADN pour identifier les g&#xE8;nes qui induit d&#x26;#39;arr&#xEA;t du cycle cellulaire ou modifi&#xE9; plo&#xEF;die sur silence. Dosages de validation et secondaire ont &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;alis&#xE9;es pour g&#xE9;n&#xE9;rer un param&#xE8;tre de neuf perte de fonction phenoprint pour chacun des g&#xE8;nes. Ces signatures ph&#xE9;notypiques a permis l&#x26;#39;attribution de g&#xE8;nes sp&#xE9;cifiques &#xE0; des cat&#xE9;gories fonctionnelles en combinant hi&#xE9;rarchique regroupement, l&#x26;#39;analyse inter-esp&#xE8;ces et de la prot&#xE9;omique d&#x26;#39;exploration de donn&#xE9;es. Nous mettons en &#xE9;vidence la richesse de notre base de donn&#xE9;es en attribuant de nouvelles fonctions &#xE0; des g&#xE8;nes dans la mitose et la cytocin&#xE8;se. En particulier, nous identifions deux &#xE9;volutives conserv&#xE9;es transcriptionnels r&#xE9;seaux de r&#xE9;glementation qui r&#xE9;gissent la cytokin&#xE8;se. Notre travail fournit un cadre exp&#xE9;rimental &#xE0; partir de laquelle l&#x26;#39;analyse syst&#xE9;matique de nouveaux g&#xE8;nes n&#xE9;cessaires pour la division cellulaire dans les cellules humaines peut commencer.

L&#x26;#39;&#xE9;chelle du g&#xE9;nome de profilage ARNi de la division cellulaire dans les cellules de culture tissulaire de l&#x26;#39;homme

Zellteilung ist grundlegend f&uuml;r alle Organismen. Hier berichten wir einen Genom-Skala-RNA-vermittelte St&ouml;rung-Bildschirm in HeLa-Zellen entwickelt, um menschliche Gene zu identifizieren, die f&uuml;r die Zellteilung wichtig sind. Wir haben eine Bibliothek von Endoribonuclease vorbereitete kurze interferierender RNAs f&uuml;r gen-silencing und DNA-Content-Analyse zur Identifizierung von Genen, die induzierten Zellzyklus Verhaftung oder ver&auml;ndert Ploidie auf Unterdr&uuml;ckender verwendet haben. Validierung und sekund&auml;re Assays wurden durchgef&uuml;hrt, um ein neun-Parameter der Verlustfunktion Phenoprint f&uuml;r jedes der Gene zu generieren. Diese ph&auml;notypischen Signaturen erlaubt die Zuordnung von Genen f&uuml;r bestimmte funktionelle Klassen durch die Kombination von hierarchischen clustering, Kreuz-Arten Analyse und Proteomic-Data-Mining. Wir markieren den Reichtum unseres DataSet von aufgeb&uuml;rdete neuartige Funktionen um Gene in Mitose und Zellteilung. Insbesondere identifizieren wir zwei evolution&auml;r konservierte transkriptionelle regulatorische Netzwerken, die Zellteilung zu Regeln. Unsere Arbeit gibt einen experimentellen Rahmen, aus dem die systematische Analyse der neuartige Gene notwendig f&uuml;r Zellteilung in den menschlichen Zellen beginnen kann.

Genom-Skala RNAi Profilerstellung f&uuml;r Zellteilung in menschlichen Gewebekultur Zellen.

Divisione delle cellule &egrave; fondamentale per tutti gli organismi. Qui riportiamo una schermata di interferenza RNA-mediata del genoma-scala in cellule HeLa progettato per identificare geni umani che sono importanti per la divisione cellulare. Abbiamo usato una libreria del cromosoma-preparato breve RNAs d&#39;interferenza per silenziamento genico e hanno usato analisi del contenuto di DNA per identificare i geni che induce arresto del ciclo cellulare o alterato ploidia sul silenzio. Convalida e dosaggi secondari sono state eseguite per generare un phenoprint di perdita di funzione di nove parametri per ognuno dei geni. Queste firme fenotipiche ha permesso l&#39;assegnazione dei geni per specifiche classi funzionali combinando clustering gerarchico, analisi cross-specie e proteomic data mining. Evidenziamo la ricchezza del nostro dataset da attribuire nuove funzioni ai geni nella mitosi e Citocinesi in. In particolare, ci identifichiamo due evolutivamente conservati transcriptional reti regolamentari che regolano Citocinesi in. Il nostro lavoro fornisce un quadro sperimentale da cui pu&ograve; iniziare l&#39;analisi sistematica di nuovi geni necessari per la divisione delle cellule in cellule umane.

Genoma-scala RNAi profilatura di divisione delle cellule in cellule di coltura del tessuto umano.

&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x306F;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x305F;HeLa&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x898F;&#x6A21;&#x306E;RNA&#x5E72;&#x6E09;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x753B;&#x9762;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30DC;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x8ABF;&#x88FD;&#x77ED;&#x3044;&#x5E72;&#x6E09;RNA&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x306B;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x306E;&#x505C;&#x6B62;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x500D;&#x6570;&#x6027;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;DNA&#x542B;&#x6709;&#x91CF;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x691C;&#x8A3C;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4E8C;&#x6B21;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;9&#x3064;&#x306E;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x55AA;&#x5931;&#x306E;phenoprint&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CD;&#x30C1;&#x30E3;&#x306F;&#x3001;&#x968E;&#x5C64;&#x7684;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x7A2E;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3068;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x30DE;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x306B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5272;&#x308A;&#x5F53;&#x3066;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x3001;&#x6709;&#x7CF8;&#x5206;&#x88C2;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;ascribing&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x8C4A;&#x304B;&#x3055;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7279;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x5206;&#x88C2;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;2&#x9032;&#x5316;&#x7684;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8EE2;&#x5199;&#x5236;&#x5FA1;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x4ED5;&#x4E8B;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x65B0;&#x898F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7684;&#x306A;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x3001;&#x305D;&#x3053;&#x304B;&#x3089;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x306A;&#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30D2;&#x30C8;&#x7D44;&#x7E54;&#x57F9;&#x990A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x898F;&#x6A21;&#x306E;RNAi&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;

&#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC740; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xADFC;&#xBCF8; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAC8C;&#xB188; &#xC2A4;&#xCF00;&#xC77C; &#xAC04;&#xC12D; RNA &#xC911;&#xC7AC; &#xD654;&#xBA74; &#xD5EC;&#xB7EC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC124;&#xACC4; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE68;&#xBB35;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; endoribonuclease &#xC900;&#xBE44; &#xC9E7;&#xC740; &#xBC29;&#xD574; Rnas&#xC758; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xAC80;&#xAC70;&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xAC70;&#xB098; &#xCE68;&#xBB35;&#xC5D0; ploidy &#xBCC0;&#xACBD; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC744; DNA &#xCF58;&#xD150;&#xCE20; &#xBD84;&#xC11D; &#xC0AC;&#xC6A9;. &#xC720;&#xD6A8;&#xC131; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC0F; 2 &#xCC28; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; 9-&#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC190;&#xC2E4; phenoprint &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xAC01; &#xC0DD;&#xC131; &#xC704;&#xD574; &#xC218;&#xD589; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; phenotypic &#xC11C;&#xBA85;&#xC744; &#xACC4;&#xCE35;&#xC801; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xB9C1;, &#xAC04; &#xC885; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC0F; proteomic &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xB9C8;&#xC774;&#xB2DD;&#xC744; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD2B9;&#xC815; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD560;&#xB2F9;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC720;&#xC0AC; &#xBD84;&#xC5F4; &#xBC0F; cytokinesis &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC18C;&#xC124; &#xAE30;&#xB2A5; ascribing &#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC9D1;&#xD569;&#xC758; &#xD48D;&#xC694;&#xB85C;&#xC6C0;&#xC744; &#xAC15;&#xC870;. &#xD2B9;&#xD788;, &#xC6B0;&#xB9AC; cytokinesis &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC9C4;&#xD654; &#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; transcriptional &#xADDC;&#xC81C; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC791;&#xC5C5; &#xC18C;&#xC124; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC778;&#xAC04; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC801;&#xC778; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2DC;&#xC791; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC801;&#xC778; &#xD504;&#xB808;&#xC784; &#xC6CC;&#xD06C;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xAC8C;&#xB188; &#xADDC;&#xBAA8; Rnai&#xB294; &#xC778;&#xAC04; &#xC870;&#xC9C1; &#xBC30;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC758; &#xD504;&#xB85C; &#xD30C;&#xC77C;&#xB9C1;.

La divisi&#xF3;n celular es fundamental para todos los organismos. Aqu&#xED; mostramos una escala del genoma de ARN de interferencia mediada por la pantalla en c&#xE9;lulas HeLa dise&#xF1;ados para identificar los genes humanos que son importantes para la divisi&#xF3;n celular. Hemos utilizado una biblioteca de preparados endoribonuclease-ARN corto de interferencia para el silenciamiento de genes y han utilizado el an&#xE1;lisis de contenido de ADN para identificar genes que arresto del ciclo celular inducida o alterado ploid&#xED;a en el silenciamiento. Los ensayos de validaci&#xF3;n y secundaria se realizaron para generar un nueve-par&#xE1;metro de p&#xE9;rdida de funci&#xF3;n phenoprint para cada uno de los genes. Estas firmas fenot&#xED;pica permiti&#xF3; la asignaci&#xF3;n de los genes espec&#xED;ficos de las clases funcionales mediante la combinaci&#xF3;n de la agrupaci&#xF3;n jer&#xE1;rquica, entre especies de an&#xE1;lisis y miner&#xED;a de datos prote&#xF3;micos. Se destaca la riqueza de nuestra base de datos al atribuir nuevas funciones a los genes en la mitosis y la citocinesis. En particular, se identifican dos conservadas evolutivamente redes de regulaci&#xF3;n transcripcional que rigen la citocinesis. Nuestro trabajo proporciona un marco experimental a partir de la cual el an&#xE1;lisis sistem&#xE1;tico de nuevos genes necesarios para la divisi&#xF3;n celular en las c&#xE9;lulas humanas puede comenzar.

Genoma escala de perfiles de RNAi de la divisi&#xF3;n celular en las c&#xE9;lulas de Cultivo de Tejidos

&#x591A;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;) &#x786E;&#x4FDD;&#x5206;&#x5316;&#x63D0;&#x793A;&#x5FEB;&#x901F;&#x54CD;&#x5E94;&#x7684;&#x540C;&#x65F6;&#x7EF4;&#x6301;&#x81EA;&#x6211;&#x66F4;&#x65B0;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#x53D1;&#x5C55;&#x5176;&#x6F5C;&#x5728;&#x6CBB;&#x7597;&#x7528;&#x4E8E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EF4;&#x6301; ESC &#x8EAB;&#x4EFD;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x9274;&#x5B9A;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x5168;&#x7403;&#x8C03;&#x67E5;&#x5F71;&#x54CD; Oct4 &#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x901A;&#x8FC7; esc &#x952E;&#x6807;&#x8BC6;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x89C4;&#x6A21; RNAi &#x5C4F;&#x5E55;&#x3002;&#x4E0E;&#x5BF9; Oct4 &#x8868;&#x8FBE;&#x6700;&#x5F3A;&#x70C8;&#x5730;&#x5F71;&#x54CD;&#x56E0;&#x7D20;&#x5305;&#x62EC; Paf1 &#x590D;&#x6742;&#xFF0C;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x4E0E; RNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; II &#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x3001; &#x8868;&#x8FBE;&#x8C31;&#x548C;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x6C89;&#x6DC0;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#xFF0C;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA; Paf1C &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x591A;&#x6F5C;&#x80FD;&#x5173;&#x952E;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x5982;&#x9700;&#x4FDD;&#x6301;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x6D3B;&#x6027;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;Paf1C &#x53D1;&#x80B2;&#x53D7;&#x89C4;&#x7BA1;&#x548C;&#x963B;&#x6B62; ESC &#x5206;&#x5316;&#x540E;&#x8FC7;&#x5EA6;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5728;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E; Oct4 &#x6216; Nanog &#x6D88;&#x901D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE; Paf1C &#x65B9;&#x9762;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x4FDD;&#x6301; esc &#x952E;&#x6807;&#x8BC6;&#x3002;

&#x8C03;&#x5236;&#x5668; Oct4 &#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x89C4;&#x6A21; RNAi &#x5C4F;&#x5E55;&#x5B9A;&#x4E49;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8EAB;&#x4EFD; Paf1 &#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Pluripotent embryonic stem cells (ESCs) maintain self-renewal while ensuring a rapid response to differentiation cues. The identification of genes maintaining ESC identity is important to develop these cells for their potential therapeutic use. Here we report a genome-scale RNAi screen for a global survey of genes affecting ESC identity via alteration of Oct4 expression. Factors with the strongest effect on Oct4 expression included components of the Paf1 complex, a protein complex associated with RNA polymerase II. Using a combination of proteomics, expression profiling, and chromatin immunoprecipitation, we demonstrate that the Paf1C binds to promoters of key pluripotency genes, where it is required to maintain a transcriptionally active chromatin structure. The Paf1C is developmentally regulated and blocks ESC differentiation upon overexpression, and the knockdown in ESCs causes expression changes similar to Oct4 or Nanog depletions. We propose that the Paf1C plays an important role in maintaining ESC identity.

A genome-scale RNAi screen for Oct4 modulators defines a role of the Paf1 complex for embryonic stem cell identity.

Cellules souches embryonnaires pluripotentes (CES) de maintenir l&#x26;#39;auto-renouvellement, tout en assurant une r&#xE9;ponse rapide aux signaux de diff&#xE9;renciation. L&#x26;#39;identification des g&#xE8;nes en maintenant l&#x26;#39;identit&#xE9; ESC est important de d&#xE9;velopper ces cellules pour leur utilisation th&#xE9;rapeutique potentielle. Nous rapportons ici un &#xE9;cran l&#x26;#39;&#xE9;chelle du g&#xE9;nome ARNi pour une enqu&#xEA;te mondiale sur les g&#xE8;nes qui influencent l&#x26;#39;identit&#xE9; ESC par alt&#xE9;ration de l&#x26;#39;expression Oct4. Les facteurs ayant le plus d&#x26;#39;effet sur Oct4 expression comprend les composants du complexe PAF1, un complexe prot&#xE9;ine associ&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;ARN polym&#xE9;rase II. En utilisant une combinaison de la prot&#xE9;omique, le profilage d&#x26;#39;expression, et immunopr&#xE9;cipitation de la chromatine, nous d&#xE9;montrons que la Paf1C lie aux promoteurs de certains g&#xE8;nes cl&#xE9;s de pluripotence, o&#xF9; il est n&#xE9;cessaire de maintenir une structure de la chromatine transcriptionnellement actif. Le Paf1C est r&#xE9;gul&#xE9;e par le d&#xE9;veloppement et la diff&#xE9;renciation des blocs CES sur la surexpression et l&#x26;#39;effet de choc dans les CES provoque des changements d&#x26;#39;expression similaires &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;puisement des Oct4 ou Nanog. Nous proposons que le Paf1C joue un r&#xF4;le important dans le maintien de l&#x26;#39;identit&#xE9; ESC.

Un criblage du g&#xE9;nome &#xE9;chelle ARNi pour Oct4 Modulateurs D&#xE9;finit un r&#xF4;le du complexe PAF1 pour l&#x26;#39;Identit&#xE9; cellules souches embryonnaires

Pluripotenten embryonaler Stammzellen (WSR) pflegen Selbsterneuerung und gleichzeitig eine schnelle Reaktion auf Differenzierung Hinweise. Die Identifizierung von Genen gleichzeitig ESC Identit&auml;t ist wichtig, diese Zellen f&uuml;r ihre m&ouml;glichen therapeutischen Einsatz zu entwickeln. Hier berichten wir einen Genom-Skala RNAi-Bildschirm f&uuml;r eine globale Umfrage von Genen beeinflussen ESC Identit&auml;t &uuml;ber Ver&auml;nderung des Oct4 Ausdruck. Faktoren mit der st&auml;rksten Wirkung auf Oct4 Ausdruck enthalten Komponenten der Paf1 complex, ein Proteinkomplex, der RNS-Polymerase II zugeordnet. Mit einer Kombination von Proteomics, Expression profiling und Chromatin Immunopr&auml;zipitation, zeigen wir, dass die Paf1C an F&ouml;rderer der wichtigsten Pluripotenz Gene bindet, wo ist es erforderlich, eine transcriptionally aktiv Chromatin-Struktur beizubehalten. Die Paf1C ist, entwicklungspolitisch geregelt und blockiert ESC Differenzierung nach &Uuml;berexpression und der Niederschlag in WSR veranlasst Ausdruck &Auml;nderungen &auml;hnlich wie Oct4 oder Nanog Zehrung. Wir schlagen die Paf1C spielt eine wichtige Rolle bei der Aufrechterhaltung der ESC Identit&auml;t.

Ein Genom-Skala RNAi-Bildschirm f&uuml;r Oct4 Modulatoren definiert eine Rolle die Paf1 Komplex f&uuml;r embryonale Stammzellen-Identit&auml;t.

Cellule staminali embrionali pluripotenti (CES) mantenere auto-rinnovamento garantendo una risposta rapida a segnali di differenziazione. L&#39;identificazione di geni mantenendo identit&agrave; ESC &egrave; importante sviluppare queste cellule per il loro potenziale uso terapeutico. Qui riportiamo una schermata di RNAi genoma-scala per un sondaggio globale di geni che interessano identit&agrave; ESC mediante alterazione dell&#39;espressione di Oct4. Fattori con il pi&ugrave; forte effetto sull&#39;espressione di Oct4 includevano componenti di Paf1 complex, un complesso di proteine associato a RNA polimerasi II. Utilizzando una combinazione di proteomics, expression profiling e immunoprecipitazione della cromatina, dimostriamo che il Paf1C si lega ai promotori dei geni chiave pluripotenza, dove &egrave; necessario mantenere una struttura della cromatina transcriptionally active. Il Paf1C inerente allo sviluppo &egrave; regolato e blocca la differenziazione ESC su sovraespressione e l&#39;atterramento nel CES provoca cambiamenti di espressione simili a Oct4 o Nanog esaurimento. Proponiamo che il Paf1C gioca un ruolo importante nel mantenimento della identit&agrave; ESC.

Una schermata di RNAi genoma-scala per Oct4 modulatori definisce un ruolo della Paf1 complesso per l&#39;identit&agrave; delle cellule staminali embrionali.

&#x5206;&#x5316;&#x306E;&#x624B;&#x304C;&#x304B;&#x308A;&#x3078;&#x306E;&#x8FC5;&#x901F;&#x306A;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3092;&#x78BA;&#x4FDD;&#x3057;&#x3064;&#x3064;&#x3001;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;ESC&#x306F;&#xFF09;&#x81EA;&#x5DF1;&#x8907;&#x88FD;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; ESC&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Oct4&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x7D4C;&#x7531;&#x3057;&#x3066;ESC&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x306A;&#x8ABF;&#x67FB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x898F;&#x6A21;RNAi&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; Oct4&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x5F37;&#x3044;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x56E0;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;RNA&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;II&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;Paf1&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x6210;&#x5206;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3001;&#x767A;&#x73FE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x514D;&#x75AB;&#x6C88;&#x964D;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;Paf1C&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x304C;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x30AD;&#x30FC;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; Paf1C&#x306F;&#x3001;&#x767A;&#x9054;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3068;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;ESC&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x6642;&#x306B;&#x3001;&#x3068;ESC&#x306E;&#x3067;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;Oct4&#x306E;&#x307E;&#x305F;&#x306F;Nanog&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x200B;&#x200B;&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;Paf1C&#x306F;ESC&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x4E0A;&#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

Oct4&#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x898F;&#x6A21;RNAi&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8B58;&#x5225;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;Paf1&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xB9CC;&#xB2A5; &#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (ESCs) &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xB2E8;&#xC11C;&#xC5D0; &#xBE60;&#xB978; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xBCF4;&#xC7A5; &#xD558;&#xBA74;&#xC11C; &#xC790;&#xAE30; &#xAC31;&#xC2E0;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0;. ESC &#xC815;&#xCCB4;&#xC131;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; id&#xB294; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC801; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC140;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC911;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Oct4 &#xC2DD;&#xC758; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; ESC &#xC815;&#xCCB4;&#xC131;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xC124;&#xBB38; &#xC870;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC8C;&#xB188; &#xADDC;&#xBAA8; RNAi &#xD654;&#xBA74;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Oct4 &#xC2DD;&#xC5D0; &#xAC00;&#xC7A5; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC601;&#xD5A5; &#xC694;&#xC778; Paf1 &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C;, &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; RNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; II&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Proteomics, &#xC2DD; &#xD504;&#xB85C; &#xD30C;&#xC77C;&#xB9C1; &#xBC0F; chromatin immunoprecipitation&#xC758; &#xC870;&#xD569;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Paf1C transcriptionally &#xD65C;&#xC131; chromatin &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xD575;&#xC2EC; pluripotency &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD504;&#xB85C;&#xBAA8;&#xD130;&#xB97C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Paf1C &#xBC1C;&#xB2EC; &#xADDC;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558;&#xB294; overexpression, &#xC2DC; ESC &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xACE0; Escs&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; &#xC2DD; &#xBCC0;&#xACBD; Oct4 &#xB610;&#xB294; Nanog &#xB2EC;&#xCF64;&#xD558;&#xAC8C; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Paf1C ESC &#xC815;&#xCCB4;&#xC131; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Oct4 &#xBCC0;&#xC870;&#xAE30;&#xC758; &#xAC8C;&#xB188; &#xADDC;&#xBAA8; RNAi screen &#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; id&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; paf1&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC815;&#xC758;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Pluripotentes c&#xE9;lulas madre embrionarias (CME) mantener la auto-renovaci&#xF3;n al tiempo que garantiza una respuesta r&#xE1;pida a las se&#xF1;ales de diferenciaci&#xF3;n. La identificaci&#xF3;n de los genes que mantienen CES identidad es importante desarrollar estas c&#xE9;lulas para su uso terap&#xE9;utico potencial. Aqu&#xED; mostramos una pantalla de escala del genoma de RNAi para un estudio global de los genes que afectan a la identidad a trav&#xE9;s de la alteraci&#xF3;n de la CES Oct4 expresi&#xF3;n. Los factores con el mayor efecto sobre la expresi&#xF3;n de Oct4 incluidos los componentes del complejo Paf1, un complejo de prote&#xED;nas asociadas con la RNA polimerasa II. Usando una combinaci&#xF3;n de la prote&#xF3;mica, la caracterizaci&#xF3;n de la expresi&#xF3;n, y de inmunoprecipitaci&#xF3;n de la cromatina, demostramos que la Paf1C se une a los promotores de genes clave pluripotencia, en los que se requiere para mantener una estructura de la cromatina transcripcionalmente activo. El Paf1C est&#xE1; regulado por el desarrollo y la diferenciaci&#xF3;n de bloques CES a la sobreexpresi&#xF3;n y la ca&#xED;da en los CES hace los cambios de expresi&#xF3;n similares al agotamiento de Oct4 y Nanog. Proponemos que la Paf1C juega un papel importante en el mantenimiento de la identidad de la tecla ESC.

Una pantalla de escala del genoma de RNAi para Oct4 Moduladores Define un papel del complejo Paf1 de la identidad con c&#xE9;lulas madre embrionarias

&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x9700;&#x8981;&#x8BB8;&#x591A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x51C6;&#x786E;&#x5730;&#x5C06;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5212;&#x5206;&#x4E3A;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5973;&#x513F;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x534F;&#x8C03;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x51E0;&#x4E2A; RNAi &#x5C4F;&#x5E55;&#x5DF2;&#x67E5;&#x660E;&#x4EE5;&#x524D; uncharacterised &#x6240;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x529F;&#x80FD;&#x9700;&#x8981;&#x8FDB;&#x884C;&#x8C03;&#x67E5;&#xFF0C;&#x5C06;&#x5B83;&#x4EEC;&#x653E;&#x7F6E;&#x5230;&#x8DEF;&#x5F84;&#x3002;&#x8868;&#x578B;&#x5206;&#x6790;&#x662F;&#x6709;&#x7528;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x5C06;&#x5047;&#x5B9A;&#x51FD;&#x6570;&#x5206;&#x914D;&#x7ED9; uncharacterised &#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x5206;&#x6790;&#x662F;&#x6709;&#x7528;&#x6765;&#x7EC6;&#x5316;&#x8868;&#x578B;&#x7684;&#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x901A;&#x8FC7;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x5B9A;&#x4E49;&#x4EE5;&#x524D; uncharacterised &#x57FA;&#x56E0; C13orf3 &#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x663E;&#x793A;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x5B9E;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;C13orf3 &#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x4F53;&#x3001; &#x7EBA;&#x9524;&#x3001; &#x9002;&#x5EA6;&#x3001; &#x4E3B;&#x8F74;&#x6210;&#x5288;&#x88C2;&#x6C9F;&#x8BF0;&#x548C;&#x7279;&#x522B;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x671F;&#x95F4;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;C13orf3 &#x662F;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x4F53;&#x5B8C;&#x6574;&#x6027;&#x548C;&#x540E;&#x671F;&#x53D1;&#x75C5;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x7531; RNAi &#x67AF;&#x7AED;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x4E2D;&#x671F;&#x4E0E;&#x4E3B;&#x8F74;&#x88C5;&#x914D;&#x68C0;&#x67E5;&#x70B9;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x59B9;&#x59B9;&#x902E;&#x6355;&#x67D3;&#x8272;&#x5355;&#x4F53;&#x7684;&#x51DD;&#x805A;&#x529B;&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#x786E;&#x5B9A; C13orf3 &#xFF08;Ska3&#xFF09; &#x4F5C;&#x4E3A;&#x65B0;&#x7684; Ska &#x590D;&#x6742;&#x548C;&#x663E;&#x793A;&#x4E0E;&#x8C03;&#x8282;&#x4E9A;&#x57FA;&#x7684; PP2A &#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x9176;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x4EA4;&#x4E92;&#x7684;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x3002;&#x90FD;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x6807;&#x8BC6; C13orf3 &#x4E3A;&#x4E2D;&#x671F;&#x5411;&#x540E;&#x671F;&#x8FDB;&#x5C55;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x56E0;&#x7D20;&#xFF0C;&#x5E76;&#x7A81;&#x51FA;&#x663E;&#x793A;&#x7ED3;&#x5408; RNAi &#x7B5B;&#x9009;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#x3002;

&#x6BD4;&#x8F83;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x590D;&#x6742; Ska &#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6807;&#x8BC6; C13orf3&#x3002;

Proliferation of mammalian cells requires the coordinated function of many proteins to accurately divide a cell into two daughter cells. Several RNAi screens have identified previously uncharacterised genes that are implicated in mammalian cell division. The molecular function for these genes needs to be investigated to place them into pathways. Phenotypic profiling is a useful method to assign putative functions to uncharacterised genes. Here, we show that the analysis of protein localisation is useful to refine a phenotypic profile. We show the utility of this approach by defining a function of the previously uncharacterised gene C13orf3 during cell division. C13orf3 localises to centrosomes, the mitotic spindle, kinetochores, spindle midzone, and the cleavage furrow during cell division and is specifically phosphorylated during mitosis. Furthermore, C13orf3 is required for centrosome integrity and anaphase onset. Depletion by RNAi leads to mitotic arrest in metaphase with an activation of the spindle assembly checkpoint and loss of sister chromatid cohesion. Proteomic analyses identify C13orf3 (Ska3) as a new component of the Ska complex and show a direct interaction with a regulatory subunit of the protein phosphatase PP2A. All together, these data identify C13orf3 as an important factor for metaphase to anaphase progression and highlight the potential of combined RNAi screening and protein localisation analyses.

Comparative profiling identifies C13orf3 as a component of the Ska complex required for mammalian cell division.

Prolif&#xE9;ration des cellules de mammif&#xE8;res n&#xE9;cessite la fonction de nombreuses prot&#xE9;ines coordonn&#xE9;e avec pr&#xE9;cision diviser une cellule en deux cellules filles. Plusieurs &#xE9;crans ARNi ont identifi&#xE9; des g&#xE8;nes pr&#xE9;c&#xE9;demment non caract&#xE9;ris&#xE9;s qui sont impliqu&#xE9;s dans la division cellulaire chez les mammif&#xE8;res. La fonction mol&#xE9;culaire de ces g&#xE8;nes doit &#xEA;tre &#xE9;tudi&#xE9;e pour les placer dans les voies. Profilage ph&#xE9;notypique est une m&#xE9;thode utile d&#x26;#39;assigner des fonctions putatives &#xE0; des g&#xE8;nes non caract&#xE9;ris&#xE9;s. Ici, nous montrons que l&#x26;#39;analyse de la localisation de la prot&#xE9;ine est utile pour affiner un profil ph&#xE9;notypique. Nous montrons l&#x26;#39;utilit&#xE9; de cette approche en d&#xE9;finissant une fonction de l&#x26;#39;pr&#xE9;c&#xE9;demment non caract&#xE9;ris&#xE9;s g&#xE8;ne C13orf3 pendant la division cellulaire. C13orf3 se localise dans les centrosomes, le fuseau mitotique, kin&#xE9;tochores, milieu du fuseau, et le sillon de clivage pendant la division cellulaire et est sp&#xE9;cifiquement phosphoryl&#xE9;e lors de la mitose. En outre, C13orf3 est n&#xE9;cessaire pour l&#x26;#39;int&#xE9;grit&#xE9; du centrosome et l&#x26;#39;apparition anaphase. L&#x26;#39;&#xE9;puisement par RNAi conduit &#xE0; l&#x26;#39;arrestation mitotique en m&#xE9;taphase avec une activation du checkpoint du fuseau et la perte de la coh&#xE9;sion des chromatides s&#x153;urs. Identifier les analyses prot&#xE9;omiques C13orf3 (Ska3) comme une nouvelle composante du complexe Ska et de montrer une interaction directe avec un sous-unit&#xE9; r&#xE9;gulatrice de la prot&#xE9;ine phosphatase PP2A. Tous ensemble, ces donn&#xE9;es r&#xE9;v&#xE8;lent que C13orf3 un facteur important pour la m&#xE9;taphase anaphase de progression et mettre en &#xE9;vidence le potentiel de l&#x26;#39;ARNi d&#xE9;pistage combin&#xE9; et les analyses de localisation de prot&#xE9;ines.

Profilage comparative Identifie C13orf3 Comme un composant du complexe Ska requises pour la division des cellules de mammif&#xE8;res

Verbreitung der S&auml;ugetier-Zellen erfordert die koordinierte Funktion vieler Proteine genau eine Zelle in zwei Tochterzellen unterteilen. Mehrere RNAi-Bildschirme haben zuvor uncharacterised Gene identifiziert, die in S&auml;ugetieren Zellteilung verwickelt sind. Die molekulare Funktion f&uuml;r diese Gene muss untersucht werden, um sie in Bahnen zu platzieren. Ph&auml;notypische profiling ist eine n&uuml;tzliche Methode uncharacterised Gene vermeintliche Funktionen zuweisen. Hier zeigen wir, dass die Analyse von Protein-Lokalisierung eine ph&auml;notypische Profil verfeinern kann. Wir zeigen das Dienstprogramm dieses Ansatzes durch die Definition einer Funktion im zuvor uncharacterised gen C13orf3 w&auml;hrend der Zellteilung. C13orf3 dynamisches Centrosomes, die mitotische Spindel, Kinetochores, Spindel Midzone und die Trennungsfurche w&auml;hrend der Zellteilung und ist speziell w&auml;hrend der Mitose phosphoryliert. Dar&uuml;ber hinaus ist die C13orf3 f&uuml;r Zentrosom Integrit&auml;t und Anaphase Beginn erforderlich. Ersch&ouml;pfung durch RNAi f&uuml;hrt zur mitotischen Verhaftung in Metaphase mit einer Aktivierung der Spindel Baugruppe Pr&uuml;fpunkt und Verlust der Schwester Chromatid Zusammenhalt. Proteomic Analysen identifizieren C13orf3 (Ska3) als neue Komponente der Ska-komplex und zeigen eine direkte Interaktion mit einem regulatorischen Untereinheit von den Protein-Phosphatase PP2A. Alle zusammen, diese Daten C13orf3 als ein wichtiger Faktor f&uuml;r Metaphase Anaphase Fortschreiten zu identifizieren und markieren Sie das Potenzial der kombinierten RNAi-Screening und Protein-Lokalisierung-Analysen.

Vergleichende Profilerstellung bezeichnet C13orf3 als Bestandteil der komplexen Ska f&uuml;r S&auml;ugetier-Zellteilung ben&ouml;tigt.

Proliferazione delle cellule di mammiferi richiede la funzione coordinata di molte proteine accuratamente dividere una cella in due cellule figlie. Diversi schermi RNAi hanno identificato in precedenza uncharacterised geni che sono implicati nella divisione delle cellule dei mammiferi. La funzione molecolare di questi geni ha bisogno di essere indagato per posizionarli in percorsi. Analisi fenotipica &egrave; un metodo utile per assegnare funzioni putative di geni uncharacterised. Qui, ci mostrano che l&#39;analisi di localizzazione della proteina &egrave; utile a perfezionare un profilo fenotipico. Vi mostriamo l&#39;utilit&agrave; di questo approccio definendo una funzione del gene in precedenza uncharacterised C13orf3 durante la divisione cellulare. C13orf3 localizza a cntrosome, il fuso mitotico, cinetocori, mandrino midzone e il solco di clivaggio durante la divisione cellulare ed &egrave; specificamente fosforilata durante la mitosi. Inoltre, C13orf3 &egrave; necessaria per l&#39;esordio di integrit&agrave; e anafase centrosoma. Svuotamento di RNAi conduce all&#39;arresto mitotico in metafase con un&#39;attivazione del checkpoint Assemblea mandrino e la perdita della sorella coesione tra cromatidi fratelli. Analisi proteomic identificano C13orf3 (Ska3) come un nuovo componente del complesso Ska e visualizza un&#39;interazione diretta con una subunit&agrave; normativa della fosfatasi della proteina PP2A. Tutti insieme, questi dati C13orf3 per identificare come un fattore importante per la metafase alla progressione anafase ed evidenziano il potenziale di RNAi combinate lo screening e la proteina analisi di localizzazione.

Analisi comparativa identifica C13orf3 come componente del Ska complesso richiesti per la divisione delle cellule dei mammiferi.

&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x306F;&#x6B63;&#x78BA;&#x306B;2&#x3064;&#x306E;&#x5A18;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x30BB;&#x30EB;&#x3092;&#x5206;&#x5272;&#x3059;&#x308B;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x9023;&#x643A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;RNAi&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;uncharacterised&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x3001;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x3092;&#x914D;&#x7F6E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;uncharacterised&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x63A8;&#x5B9A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5272;&#x308A;&#x5F53;&#x3066;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x3092;&#x6539;&#x826F;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x6709;&#x7528;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x6642;&#x306B;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;uncharacterised&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;C13orf3&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; C13orf3&#x306F;&#x3001;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x4F53;&#x3001;&#x7D21;&#x9318;&#x4F53;&#x3001;&#x52D5;&#x539F;&#x4F53;&#x3001;&#x30B9;&#x30D4;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;midzone&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x6642;&#x306B;&#x5206;&#x88C2;&#x6E9D;&#x306B;localises&#x3001;&#x7279;&#x306B;&#x6709;&#x7CF8;&#x5206;&#x88C2;&#x6642;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;C13orf3&#x306F;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x4F53;&#x306E;&#x6574;&#x5408;&#x6027;&#x3068;&#x5F8C;&#x671F;&#x767A;&#x75C7;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002; RNAi&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x67AF;&#x6E07;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30D4;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#xB7;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x30C1;&#x30A7;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x59C9;&#x59B9;&#x67D3;&#x8272;&#x5206;&#x4F53;&#x51DD;&#x96C6;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x4E2D;&#x671F;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6709;&#x7CF8;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x505C;&#x6B62;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30FC;&#x30E0;&#x89E3;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30AB;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;C13orf3&#xFF08;Ska3&#xFF09;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;PP2A&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x9032;&#x884C;&#x3092;&#x5F8C;&#x671F;&#x306B;&#x304B;&#x3051;&#x3066;&#x3001;&#x7D50;&#x5408;RNAi&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x89E3;&#x6790;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E2D;&#x671F;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8981;&#x56E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;C13orf3&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6BD4;&#x8F03;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x30B9;&#x30AB;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x6210;&#x5206;&#x3068;&#x3057;&#x3066;C13orf3&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;

&#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD655;&#xC0B0;&#xC744; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xB538; &#xC138;&#xD3EC;&#xB85C; &#xC140;&#xC744; &#xB098;&#xB20C; &#xB9CE;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC870;&#xC815;&#xB41C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC774; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xB7EC; RNAi &#xD654;&#xBA74; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; uncharacterised &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xAC00; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBD84;&#xC790; &#xAE30;&#xB2A5; &#xACBD;&#xB85C;&#xC5D0; &#xBC30;&#xCE58;&#xB97C; &#xC870;&#xC0AC; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Phenotypic &#xD504;&#xB85C; &#xD30C;&#xC77C;&#xB9C1; uncharacterised &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; putative &#xD568;&#xC218;&#xB97C; &#xD560;&#xB2F9; &#xD558;&#xB294; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xBC95;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD604;&#xC9C0;&#xD654;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC740; phenotypic &#xD504;&#xB85C;&#xD544;&#xC744; &#xC218;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC720;&#xC6A9; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; uncharacterised &#xC720;&#xC804;&#xC790; c13orf3&#xC758; &#xD568;&#xC218;&#xB97C; &#xC815;&#xC758; &#xD558; &#xC5EC;&#xC774; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xC720;&#xD2F8;&#xB9AC;&#xD2F0;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. C13orf3 &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4; &#xB3D9;&#xC548;, centrosomes, mitotic &#xC2A4;&#xD540; &#xB4E4;, &#xC2A4;&#xD540; &#xB4E4; midzone, kinetochores, &#xBD84;&#xC5F4; &#xBA85;&#xC529; localises&#xC640; &#xC720;&#xC0AC; &#xBD84;&#xC5F4; &#xC911; phosphorylated &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;. &#xB610;&#xD55C;, c13orf3&#xB294; centrosome &#xBB34;&#xACB0;&#xC131; &#xBC0F; anaphase &#xBC1C;&#xBCD1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Rnai&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACE0;&#xAC08; &#xC2A4;&#xD540; &#xB4E4; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xAC80;&#xC0AC;&#xC810;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC640; &#xC5EC;&#xB3D9;&#xC0DD;&#xC758; &#xC190;&#xC2E4; &#xBD84;&#xC5F4; mitotic &#xCCB4;&#xD3EC; chromatid &#xC751;&#xC9D1;&#xB825;&#xC774; &#xB048;&#xB2E4;. Proteomic &#xBD84;&#xC11D; &#xC2DD;&#xBCC4; C13orf3 (Ska3) &#xC2A4; &#xCE74; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD558; &#xACE0; &#xC1FC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; pp2a&#xC758; &#xADDC;&#xC81C; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC640; &#xC9C1;&#xC811; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB85C; &#xC11C;. &#xBAA8;&#xB450; &#xD568;&#xAED8;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; anaphase &#xC9C4;&#xD589; &#xD558;&#xB294; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC694;&#xC18C;&#xB85C; c13orf3&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xACE0; &#xACB0;&#xD569; &#xB41C; RNAi &#xC2EC;&#xC0AC; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD604;&#xC9C0;&#xD654; &#xBD84;&#xC11D;&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC744; &#xAC15;&#xC870;.

&#xBE44;&#xAD50; &#xD504;&#xB85C; &#xD30C;&#xC77C;&#xB9C1; C13orf3 &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC2A4; &#xCE74;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Proliferaci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas de mam&#xED;fero requiere la funci&#xF3;n coordinada de muchas prote&#xED;nas para dividir con precisi&#xF3;n una c&#xE9;lula en dos c&#xE9;lulas hijas. Varias pantallas de RNAi han identificado genes previamente uncharacterised que est&#xE1;n implicados en la divisi&#xF3;n de c&#xE9;lulas de mam&#xED;feros. La funci&#xF3;n molecular de estos genes es necesario investigar para colocarlos en las v&#xED;as. Perfiles fenot&#xED;pica es un m&#xE9;todo &#xFA;til para asignar funciones a los genes putativos sin caracterizar. En este sentido, muestran que el an&#xE1;lisis de la localizaci&#xF3;n de la prote&#xED;na es &#xFA;til para ajustar un perfil fenot&#xED;pico. Se demuestra la utilidad de este enfoque mediante la definici&#xF3;n de una funci&#xF3;n de la anteriormente uncharacterised gen C13orf3 durante la divisi&#xF3;n celular. C13orf3 se localiza en las centrosomas, el huso mit&#xF3;tico, cinetocoros, la zona media del eje, y el surco de segmentaci&#xF3;n durante la divisi&#xF3;n celular y est&#xE1; espec&#xED;ficamente fosforilados durante la mitosis. Por otra parte, C13orf3 se requiere para la integridad del centrosoma y el inicio de la anafase. El agotamiento de RNAi conduce a la detenci&#xF3;n en metafase mit&#xF3;tica con una activaci&#xF3;n del puesto de control conjunto del eje y la p&#xE9;rdida de la cohesi&#xF3;n crom&#xE1;tida hermana. An&#xE1;lisis prote&#xF3;micos identificar C13orf3 (Ska3) como un nuevo componente del complejo de Ska y muestran una interacci&#xF3;n directa con una subunidad reguladora de la prote&#xED;na fosfatasa PP2A. En conjunto, estos datos identifican C13orf3 como un factor importante para la metafase a anafase progresi&#xF3;n y poner de relieve el potencial de la combinaci&#xF3;n de ARNi y an&#xE1;lisis de prote&#xED;nas de localizaci&#xF3;n.

Comparativo de perfiles Identifica C13orf3 Como componente del complejo de Ska exigir&#xE1; para la divisi&#xF3;n de c&#xE9;lulas de mam&#xED;fero

SKAnking &#x4E0E; Ska3&#xFF1A; Ska3 &#x63ED;&#x793A;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x4E2D;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x7ED3;&#x5408;&#x8868;&#x578B;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

SKAnking with Ska3: essential role of Ska3 in cell division revealed by combined phenotypic profiling.

Skanking avec Ska3: R&#xF4;le essentiel des Ska3 dans la division cellulaire R&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; par profilage ph&#xE9;notypique combin&#xE9;

SKAnking mit Ska3: wesentliche Rolle des Ska3 bei der Zellteilung von offenbart kombiniert ph&auml;notypische Profilerstellung.

SKAnking con Ska3: essenziale ruolo di Ska3 nella divisione cellulare rivelato da combinato di analisi fenotipica.

Ska3&#x3067;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30AF;&#xFF1A;&#x8907;&#x5408;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;Ska3&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;

Ska3&#xC640; SKAnking: &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACC4;&#xC2DC;&#xC5D0; ska3&#xC758; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560; &#xACB0;&#xD569; phenotypic &#xD504;&#xB85C; &#xD30C;&#xC77C;&#xB9C1;.

Skanking con Ska3: Rol Esencial de los Ska3 en la divisi&#xF3;n celular revelado por perfiles fenot&#xED;pica combinado

DNA &#x4FEE;&#x590D;&#x662F;&#x5FC5;&#x987B;&#x4FDD;&#x6301;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5B8C;&#x6574;&#x6027;&#xFF0C;&#x5E76;&#x7ECF;&#x5E38;&#x7A81;&#x53D8;&#x5728;&#x5404;&#x79CD;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x5728; DNA &#x4FEE;&#x590D;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x540C;&#x6E90;&#x91CD;&#x7EC4;&#x4FEE;&#x590D;&#x901A;&#x5E38;&#x65E0;&#x9700;&#x5F15;&#x5165;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x6062;&#x590D;&#x539F;&#x59CB;&#x7684; DNA &#x5E8F;&#x5217;&#x548C;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x540C;&#x6E90;&#x91CD;&#x7EC4; DNA &#x53CC;&#x94FE;&#x65AD;&#x88C2;&#x4FEE;&#x590D; (HR DSBR&#xFF09; &#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x3002;&#x4E0D;&#x8FC7;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x91CD;&#x8981;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D; DNA &#x4FEE;&#x590D;&#x9014;&#x5F84;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x5DF2;&#x4E0D;&#x6C47;&#x62A5;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C06;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x5C4F;&#x5E55;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x89C4;&#x6A21; endoribonuclease &#x7F16;&#x5199;&#x77ED;&#x5E72;&#x6270; RNA (esiRNA) &#x4E0A;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684; DNA &#x53CC;&#x94FE;&#x65AD;&#x88C2;&#x4FEE;&#x590D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A; 61 &#x57FA;&#x56E0;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684; HR DSBR &#x9891;&#x7387;&#x548C;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x7684; HR DSBR &#x9891;&#x7387;&#x4E0B;&#x964D;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x57FA;&#x56E0; KIAA0415 &#x7F16;&#x7801;&#x6307;&#x8BA4;&#x7684;&#x89E3;&#x65CB;&#x9176;&#x4E0E; SPG11 &#x548C; SPG15&#xFF0C;&#x4E24;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x7A81;&#x53D8;&#x5728;&#x9057;&#x4F20;&#x6027;&#x75C9;&#x631B;&#x6027;&#x622A;&#x762B; (HSP) &#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A; HSP &#x60A3;&#x8005;&#xFF0C;&#x53D1;&#x73B0; KIAA0415/SPG48 &#x4F5C;&#x4E3A;&#x65B0;&#x578B;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x5173;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x5E76;&#x663E;&#x793A; KIAA0415/SPG48 &#x7A81;&#x53D8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x662F;&#x5BF9; DNA &#x635F;&#x5BB3;&#x836F;&#x7269;&#x66F4;&#x654F;&#x611F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x76EE;&#x524D; HR DSBR &#x63D0;&#x4F9B;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6570;&#x636E;&#x96C6;&#xFF0C;&#x5E94;&#x52A0;&#x5FEB;&#x5728; dna &#x635F;&#x4F24;&#x4FEE;&#x590D;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x533B;&#x7597;&#x6761;&#x4EF6;&#x53D1;&#x6325;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x65B0;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x53D1;&#x73B0;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x89C4;&#x6A21;&#x7684;&#x9996;&#x6B21;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;&#x5F62;&#x6210;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x9AD8;&#x6548; HR DSBR &#x548C;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x60A3;&#x8005;&#x60A3;&#x6709;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x53D1;&#x73B0;&#x8868;&#x660E;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D;&#x548C; DNA &#x4FEE;&#x590D;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x94FE;&#x63A5;&#x3002;

&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x89C4;&#x6A21; DNA &#x4FEE;&#x590D;&#x7684; RNAi &#x5C4F;&#x5E55;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x65B0;&#x578B;&#x57FA;&#x56E0;&#x4E0E;&#x9057;&#x4F20;&#x6027;&#x75C9;&#x631B;&#x6027;&#x622A;&#x762B;&#x5173;&#x8054;&#x6807;&#x8BC6; SPG48&#x3002;

DNA repair is essential to maintain genome integrity, and genes with roles in DNA repair are frequently mutated in a variety of human diseases. Repair via homologous recombination typically restores the original DNA sequence without introducing mutations, and a number of genes that are required for homologous recombination DNA double-strand break repair (HR-DSBR) have been identified. However, a systematic analysis of this important DNA repair pathway in mammalian cells has not been reported. Here, we describe a genome-scale endoribonuclease-prepared short interfering RNA (esiRNA) screen for genes involved in DNA double strand break repair. We report 61 genes that influenced the frequency of HR-DSBR and characterize in detail one of the genes that decreased the frequency of HR-DSBR. We show that the gene KIAA0415 encodes a putative helicase that interacts with SPG11 and SPG15, two proteins mutated in hereditary spastic paraplegia (HSP). We identify mutations in HSP patients, discovering KIAA0415/SPG48 as a novel HSP-associated gene, and show that a KIAA0415/SPG48 mutant cell line is more sensitive to DNA damaging drugs. We present the first genome-scale survey of HR-DSBR in mammalian cells providing a dataset that should accelerate the discovery of novel genes with roles in DNA repair and associated medical conditions. The discovery that proteins forming a novel protein complex are required for efficient HR-DSBR and are mutated in patients suffering from HSP suggests a link between HSP and DNA repair.

A genome-scale DNA repair RNAi screen identifies SPG48 as a novel gene associated with hereditary spastic paraplegia.

R&#xE9;paration de l&#x26;#39;ADN est essentiel de maintenir l&#x26;#39;int&#xE9;grit&#xE9; du g&#xE9;nome et des g&#xE8;nes avec des r&#xF4;les dans r&#xE9;paration de l&#x26;#39;ADN sont fr&#xE9;quemment mut&#xE9;s dans une vari&#xE9;t&#xE9; de maladies humaines. R&#xE9;paration par recombinaison homologue restaure g&#xE9;n&#xE9;ralement la s&#xE9;quence d&#x26;#39;ADN d&#x26;#39;origine, sans introduire des mutations, et un certain nombre de g&#xE8;nes qui sont n&#xE9;cessaires pour la r&#xE9;paration homologue recombinaison de l&#x26;#39;ADN double-brin pause (RH-DSBR) ont &#xE9;t&#xE9; identifi&#xE9;s. Toutefois, une analyse syst&#xE9;matique de cette voie de r&#xE9;paration de l&#x26;#39;ADN des cellules de mammif&#xE8;res important dans n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; signal&#xE9;e. Ici, nous d&#xE9;crivons une &#xE9;chelle du g&#xE9;nome endoribonucl&#xE9;ase pr&#xE9;par&#xE9;e petit ARN interf&#xE9;rent (esiRNA) &#xE9;cran de g&#xE8;nes impliqu&#xE9;s dans l&#x26;#39;ADN r&#xE9;paration des cassures double brin. Nous rapportons 61 g&#xE8;nes qui ont influenc&#xE9; la fr&#xE9;quence de HR-DSBR et de caract&#xE9;riser en d&#xE9;tail l&#x26;#39;un des g&#xE8;nes qui ont diminu&#xE9; la fr&#xE9;quence de HR-DSBR. Nous montrons que le g&#xE8;ne code pour une h&#xE9;licase KIAA0415 putatif qui interagit avec SPG11 et SPG15, deux prot&#xE9;ines mut&#xE9;es dans la parapl&#xE9;gie spastique h&#xE9;r&#xE9;ditaire (HSP). Nous identifier des mutations chez les patients du PIH, la d&#xE9;couverte de KIAA0415/SPG48 comme un roman HSP g&#xE8;ne associ&#xE9;, et de montrer qu&#x26;#39;une ligne KIAA0415/SPG48 cellule mutante est plus sensible aux m&#xE9;dicaments endommageant l&#x26;#39;ADN. Nous pr&#xE9;sentons le premier l&#x26;#39;&#xE9;chelle du g&#xE9;nome de l&#x26;#39;enqu&#xEA;te HR-DSBR dans les cellules de mammif&#xE8;res fournissent un ensemble de donn&#xE9;es qui devrait acc&#xE9;l&#xE9;rer la d&#xE9;couverte de nouveaux g&#xE8;nes avec des r&#xF4;les dans la r&#xE9;paration de l&#x26;#39;ADN et des conditions m&#xE9;dicales associ&#xE9;es. La d&#xE9;couverte que des prot&#xE9;ines formant un complexe prot&#xE9;ine nouvelle sont n&#xE9;cessaires pour l&#x26;#39;efficacit&#xE9; des ressources humaines-DSBR et sont mut&#xE9;s chez des patients souffrant de HSP sugg&#xE8;re un lien entre HSP et r&#xE9;paration de l&#x26;#39;ADN.

Une &#xE9;chelle du g&#xE9;nome r&#xE9;paration de l&#x26;#39;ADN ARNi &#xE9;cran identifie SPG48 Comme un nouveau g&#xE8;ne associ&#xE9; &#xE0; la parapl&#xE9;gie spastique h&#xE9;r&#xE9;ditaire

DNA-Reparatur ist wesentlich Genom Integrit&auml;t erhalten, und Gene mit Rollen in DNA-Reparatur sind h&auml;ufig in einer Vielzahl von Krankheiten beim Menschen mutiert. Reparatur durch homologe Rekombination stellt in der Regel die urspr&uuml;ngliche DNA-Sequenz ohne Mutationen einzuf&uuml;hren, und wurde eine Reihe von Genen, die f&uuml;r homologe Rekombination DNA-Doppel-Strang-Pause-Reparatur (HR-DSBR) ermittelt. Eine systematische Analyse der diese wichtige DNA-Reparatur-Option in den S&auml;ugetier-Zellen wurde jedoch nicht berichtet. Hier beschreiben wir, Genom-Skala Endoribonuclease vorbereitete kurze interferierender RNA (EsiRNA) Leinwand f&uuml;r Genen, die in DNA-Doppelstrang-Pause-Reparatur. Wir berichten 61 Gene, die die H&auml;ufigkeit der HR-DSBR beeinflusst und im Detail eines der Gene, die die H&auml;ufigkeit der HR-DSBR zur&uuml;ckgegangen zu charakterisieren. Wir zeigen, dass das Gen KIAA0415 ein mutma&szlig;liches Helicase codiert, die mit SPG11 und SPG15, zwei Proteine mutiert in Heredit&auml;re Spastische Paraplegie (HSP) interagiert. Wir erkennen Mutationen bei HSP Patienten, KIAA0415/SPG48 als neuartige HSP-assoziierte gen, zu entdecken und zeigen, dass eine KIAA0415/SPG48-mutant-Zelllinie empfindlicher auf DNA sch&auml;digen Drogen ist. Wir pr&auml;sentieren die erste Genom-Skala-Umfrage von HR-DSBR in S&auml;ugetierzellen bietet eine Dataset, die die Entdeckung neuartiger Gene mit Rollen in der DNA-Reparatur und assoziierten Erkrankungen beschleunigen soll. Die Entdeckung, dass Proteine bilden ein neues Protein komplexe f&uuml;r effiziente HR-DSBR erforderlich sind und werden bei Patienten mit HSP mutierte schl&auml;gt eine Verbindung zwischen HSP und DNA-Reparatur.

Eine Genom-Skala-DNA reparieren RNAi Bildschirm SPG48 als ein neuartiges gen mit Heredit&auml;re Spastische Paraplegie identifiziert.

Riparazione del DNA &egrave; essenziale per mantenere l&#39;integrit&agrave; del genoma, e geni con ruoli nella riparazione del DNA sono frequentemente mutati in una variet&agrave; di malattie umane. Riparazione tramite la ricombinazione omologa in genere ripristina l&#39;originale sequenza di DNA senza introdurre mutazioni, e &egrave; stato identificato un certo numero di geni che sono necessari per la riparazione di ricombinazione omologa del DNA double-strand break (HR-DSBR). Tuttavia, un&#39;analisi sistematica di questa importante via di riparazione del DNA in cellule di mammifero non &egrave; stata segnalata. Qui, descriviamo un genoma-scala cromosoma-preparato breve interferenza RNA (esiRNA) schermo per geni coinvolti nella riparazione del DNA double strand break. Abbiamo relazione 61 geni che hanno influenzato la frequenza del HR-DSBR e caratterizzare in dettaglio uno dei geni che ha diminuito la frequenza di HR-DSBR. Dimostriamo che il gene KIAA0415 codifica un&#39;elicasi putativo che interagisce con SPG11 e SPG15, due proteine mutate in paraplegia spastica ereditaria (HSP). Noi identificare mutazioni in pazienti HSP, alla scoperta di KIAA0415/SPG48 come un romanzo HSP-associated gene e mostrano che una linea di cellule mutanti KIAA0415/SPG48 &egrave; pi&ugrave; sensibile al DNA, danneggiando la droga. Vi presentiamo la prima indagine di genoma-scala di HR-DSBR nelle cellule dei mammiferi, fornendo un dataset che dovrebbe accelerare la scoperta di nuovi geni con ruoli nella riparazione del DNA e condizioni mediche associate. La scoperta che le proteine che formano un complesso proteico romanzo sono richieste per HR-DSBR efficiente e sono mutate in pazienti affetti da HSP suggerisce un legame tra la riparazione del DNA e HSP.

Un DNA genoma-scala di riparazione RNAi schermo identifica SPG48 come un romanzo gene associato con paraplegia spastica ereditaria.

DNA&#x4FEE;&#x5FA9;&#x306F;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x5B8C;&#x5168;&#x6027;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;DNA&#x4FEE;&#x5FA9;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x304C;&#x983B;&#x7E41;&#x306B;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x7A2E;&#x3005;&#x306E;&#x75BE;&#x60A3;&#x3067;&#x5909;&#x7570;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x76F8;&#x540C;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x4FEE;&#x7406;&#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x3001;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B8;&#x30CA;&#x30EB;&#x306E;DNA&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x5FA9;&#x5143;&#x3057;&#x3001;&#x76F8;&#x540C;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;DNA&#x4E8C;&#x91CD;&#x9396;&#x5207;&#x65AD;&#x4FEE;&#x5FA9;&#xFF08;HR-DSBR&#xFF09;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6570;&#x304C;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;DNA&#x4FEE;&#x5FA9;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7684;&#x306A;&#x5206;&#x6790;&#x304C;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;DNA&#x4E8C;&#x91CD;&#x9396;&#x5207;&#x65AD;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30DC;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x6E96;&#x5099;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x77ED;&#x9396;&#x5E72;&#x6E09;RNA&#xFF08;esiRNA&#xFF09;&#x753B;&#x9762;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;HR-DSBR&#x306E;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x3001;&#x8A73;&#x7D30;&#x306B;HR-DSBR&#x306E;&#x983B;&#x5EA6;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x4E00;&#x3064;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x308B;61&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;KIAA0415&#x306F;&#x907A;&#x4F1D;&#x6027;&#x75D9;&#x6027;&#x5BFE;&#x9EBB;&#x75FA;&#xFF08;HSP&#xFF09;&#x3067;&#x5909;&#x7570;SPG11 SPG15&#x3068;&#x3001;2&#x3064;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x63A8;&#x5B9A;&#x30D8;&#x30EA;&#x30AB;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x5C0F;&#x8AAC;HSP&#x95A2;&#x9023;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068;&#x3057;&#x3066;KIAA0415/SPG48&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x3001;HSP&#x60A3;&#x8005;&#x3067;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;KIAA0415/SPG48&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306F;DNA&#x640D;&#x50B7;&#x85AC;&#x5264;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;DNA&#x4FEE;&#x5FA9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x533B;&#x7642;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3068;&#x65B0;&#x898F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x898B;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x3079;&#x304D;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;HR-DSBR&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x898F;&#x6A21;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x65B0;&#x898F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;HR-DSBR&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x3001;HSP&#x3092;&#x60A3;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x60A3;&#x8005;&#x3067;&#x5909;&#x7570;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x306F;&#x3001;HSP&#x3068;DNA&#x4FEE;&#x5FA9;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x898F;&#x6A21;&#x306E;DNA&#x4FEE;&#x5FA9;&#x306E;RNAi&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30F3;&#x306F;&#x907A;&#x4F1D;&#x6027;&#x75D9;&#x6027;&#x5BFE;&#x9EBB;&#x75FA;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x65B0;&#x898F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068;&#x3057;&#x3066;SPG48&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;

DNA &#xC218;&#xB9AC; &#xAC8C;&#xB188; &#xBB34;&#xACB0;&#xC131;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xBA70; &#xC720;&#xC804;&#xC790; DNA &#xC218;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC790;&#xC8FC;&#xB294;. &#xB3D9;&#xC885; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC218;&#xB9AC; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCC0;&#xC774; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; &#xC6D0;&#xBCF8; DNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xB3D9;&#xC885; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; DNA &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; &#xBE0C;&#xB808;&#xC774;&#xD06C; &#xC218;&#xB9AC; (HR DSBR)&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294;&#xC774; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; DNA &#xBCF5;&#xAD6C; &#xACBD;&#xB85C; &#xB300; &#xD55C; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC801;&#xC778; &#xBD84;&#xC11D; &#xB418;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xAC8C;&#xB188; &#xC2A4;&#xCF00;&#xC77C; endoribonuclease &#xC900;&#xBE44; &#xC9E7;&#xC740; &#xAC04;&#xC12D; RNA (esiRNA) &#xD654;&#xBA74; DNA &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; &#xBE0C;&#xB808;&#xC774;&#xD06C; &#xC218;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC124;&#xBA85;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; 61 &#xC720;&#xC804;&#xC790; HR DSBR&#xC758; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD558; &#xACE0; HR DSBR&#xC758; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218;&#xB97C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC911; &#xD558;&#xB098; &#xC790;&#xC138;&#xD788; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; KIAA0415 &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; SPG11 &#xBC0F; SPG15, &#xB450; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC720;&#xC804; &#xACBD;&#xB828; &#xC801;&#xC778; &#xD558;&#xBC18;&#xC2E0; (HSP)&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC0C1; helicase &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; HSP &#xD658;&#xC790;, KIAA0415/SPG48 &#xC18C;&#xC124; HSP &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB85C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD655;&#xC778; &#xD558; &#xACE0; KIAA0415/SPG48 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC138;&#xD3EC; &#xB77C;&#xC778;&#xC740; DNA &#xC190;&#xC0C1; &#xB9C8;&#xC57D;&#xC5D0; &#xB354; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. HR-DSBR DNA &#xC218;&#xB9AC;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC758;&#xB8CC; &#xC870;&#xAC74;&#xACFC; &#xC5ED;&#xD560;&#xACFC; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xBC1C;&#xACAC;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD574;&#xC57C; &#xD558;&#xB294; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC9D1;&#xD569;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xAC8C;&#xB188; &#xADDC;&#xBAA8; &#xC870;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC18C;&#xAC1C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC18C;&#xC124; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC774; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; HR DSBR&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xD558; &#xACE0; HSP &#xACE0;&#xD1B5; &#xBC1B;&#xC544; &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBC1C;&#xACAC; HSP&#xC640; DNA &#xBCF5;&#xAD6C; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xB9C1;&#xD06C;&#xB97C; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xAC8C;&#xB188; &#xADDC;&#xBAA8; DNA &#xBCF5;&#xAD6C; RNAi &#xC720;&#xC804; &#xACBD;&#xB828; &#xC801;&#xC778; &#xD558;&#xBC18;&#xC2E0;&#xACFC; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB85C; spg48&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294; &#xD654;&#xBA74;.

Reparaci&#xF3;n del ADN es esencial para mantener la integridad del genoma, y &#x200B;&#x200B;los genes con papeles en la reparaci&#xF3;n del ADN son frecuentemente mutados en una variedad de enfermedades humanas. Reparaci&#xF3;n por recombinaci&#xF3;n hom&#xF3;loga t&#xED;picamente restaura la secuencia de ADN original sin la introducci&#xF3;n de mutaciones, y un n&#xFA;mero de genes que son necesarios para la reparaci&#xF3;n del ADN hom&#xF3;loga recombinaci&#xF3;n rotura de doble hebra (HR-DSBR) han sido identificados. Sin embargo, un an&#xE1;lisis sistem&#xE1;tico de esta v&#xED;a de reparaci&#xF3;n del ADN en c&#xE9;lulas de mam&#xED;fero importante no ha sido reportado. A continuaci&#xF3;n, describimos una escala del genoma de endoribonuclease preparado ARN corto de interferencia (esiRNA) la detecci&#xF3;n de genes involucrados en la reparaci&#xF3;n de ADN de doble filamento romper. Se presenta 61 genes que influyen en la frecuencia de HR-DSBR y caracterizar en detalle uno de los genes que la disminuci&#xF3;n de la frecuencia de HR-DSBR. Se demuestra que el gen KIAA0415 codifica una helicasa putativo que interact&#xFA;a con SPG11 y SPG15, dos prote&#xED;nas mutadas en la paraplejia esp&#xE1;stica hereditaria (HSP). Se identifican mutaciones en pacientes con HSP, descubriendo KIAA0415/SPG48 como una novela de HSP-gen asociado, y demostrar que una l&#xED;nea celular mutante KIAA0415/SPG48 es m&#xE1;s sensible a las drogas que da&#xF1;an el ADN. Se presenta la primera escala del genoma de la encuesta del HR-DSBR en c&#xE9;lulas de mam&#xED;fero que proporcionan un conjunto de datos que deben acelerar el descubrimiento de nuevos genes con funciones de reparaci&#xF3;n del ADN y las condiciones m&#xE9;dicas asociadas. El descubrimiento de que las prote&#xED;nas que forman un complejo nueva prote&#xED;na son necesarios para la eficiente HR-DSBR y est&#xE1;n mutados en pacientes que sufren de HSP sugiere una relaci&#xF3;n entre HSP y reparaci&#xF3;n del ADN.

Una escala del genoma de reparaci&#xF3;n del ADN RNAi pantalla identifica SPG48 Como un nuevo gen asociado con paraplejia esp&#xE1;stica hereditaria

&#x5F00;&#x53D1;&#x5148;&#x8FDB;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5DE5;&#x5177;&#x7684;&#x5065;&#x5EB7;&#x4E0E;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x8C03;&#x67E5;&#x94FA;&#x5E73;&#x4E86;&#x9053;&#x8DEF;&#x3002;&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4; RNA &#x5E72;&#x6270; (RNAi) &#x7684;&#x6267;&#x884C;&#x60C5;&#x51B5;&#xFF0C;&#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x7B5B;&#x9009;&#x5DE5;&#x5177;&#x5DF2;&#x542F;&#x7528;&#x79D1;&#x5B66;&#x5BB6;&#x63A2;&#x6D4B;&#x96C7;&#x7528; RNAi &#x5C4F;&#x5E55;&#x5728;&#x8FD1;&#x5E74;&#x6765;&#x5DF2;&#x53D1;&#x73B0;&#x5404;&#x79CD;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#x7684;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x68C0;&#x6D4B;&#x548C;&#x8BB8;&#x591A;&#x65B0;&#x7684;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x7ED3;&#x679C;&#x8FD8;&#x8BC1;&#x660E;&#x751F;&#x7269;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x6027;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8868;&#x660E;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x6709;&#x5F88;&#x957F;&#x7684;&#x8DEF;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x7406;&#x89E3;&#x529F;&#x80FD;&#x7F51;&#x7EDC;&#x6DF1;&#x5EA6;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;RNAi &#x5C4F;&#x5E55;&#x76EE;&#x524D;&#x529F;&#x80FD;&#x5F3A;&#x5927;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6765;&#x5BA1;&#x95EE;&#x57FA;&#x56E0;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x548C;&#x5236;&#x5B9A;&#x4E86;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6765;&#x5F81;&#x6C42; RNAi &#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E86;&#x96C7;&#x7528;&#x7F16;&#x5199; (e) siRNAs endoribonuclease RNAi &#x5C4F;&#x5E55;&#x5728;&#x89C4;&#x5212;&#x65F6;&#x5E94;&#x8003;&#x8651;&#x7684;&#x6B65;&#x9AA4;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5982;&#x4F55;&#x5B9E;&#x73B0;&#x5C4F;&#x5E55;&#x548C;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x6709;&#x7528;&#x7684;&#x4FE1;&#x606F;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x547D;&#x4E2D;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x7B56;&#x7565;&#x53CA;&#x5927;&#x7EB2;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x5982;&#x4F55;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x70B9;&#x51FB;&#x4E86;&#x89E3;&#x57FA;&#x7840;&#x8868;&#x578B;&#x5206;&#x5B50;&#x91C7;&#x53D6;&#x540E;&#x7EED;&#x884C;&#x52A8;&#x3002;

&#x5728; esiRNAs &#x4E0E;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF; RNAi &#x7B5B;&#x9009;&#x3002;

The development of advanced functional genomic tools has paved the way for systematic investigations of biological processes in health and disease. In particular, the implementation of RNA interference (RNAi) as a genome-wide, loss-of-function screening tool has enabled scientists to probe the role for every gene in cellular assays and many new factors for various processes have been discovered employing RNAi screens in recent years. However, the results also demonstrate the complexity of biological systems and indicate that we are still a long way from understanding functional networks in depth. Nevertheless, RNAi screens present a powerful method to interrogate gene function in high-throughput and different methods to elicit RNAi in mammalian cells have been developed. Here, we describe steps that should be considered when planning an RNAi screen employing endoribonuclease prepared (e)siRNAs. We provide useful information on how to implement the screen and analyze the results. Furthermore, we discuss strategies for hit validation and present an outline on how to follow-up on verified hits to gain a molecular understanding of the underlying phenotypes.

High-throughput RNAi screening in mammalian cells with esiRNAs.

Le d&#xE9;veloppement d&#x26;#39;outils avanc&#xE9;s de g&#xE9;nomique fonctionnelle a ouvert la voie &#xE0; des enqu&#xEA;tes syst&#xE9;matiques des processus biologiques en mati&#xE8;re de sant&#xE9; et de la maladie. En particulier, la mise en &#x153;uvre de l&#x26;#39;ARN interf&#xE9;rence (ARNi) comme l&#x26;#39;ensemble du g&#xE9;nome, outil de d&#xE9;pistage de perte de fonction a permis aux scientifiques de sonder le r&#xF4;le de chaque g&#xE8;ne dans des dosages cellulaires et de nombreux facteurs nouveaux pour divers proc&#xE9;d&#xE9;s ont &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;couverts employant &#xE9;crans ARNi ces derni&#xE8;res ann&#xE9;es. Cependant, les r&#xE9;sultats d&#xE9;montrent &#xE9;galement la complexit&#xE9; des syst&#xE8;mes biologiques et indiquent que nous sommes encore un long chemin &#xE0; partir de la compr&#xE9;hension des r&#xE9;seaux fonctionnels en profondeur. N&#xE9;anmoins, les &#xE9;crans ARNi pr&#xE9;senter une m&#xE9;thode puissante pour interroger la fonction des g&#xE8;nes dans les m&#xE9;thodes &#xE0; haut d&#xE9;bit et diff&#xE9;rent pour obtenir des ARNi dans des cellules de mammif&#xE8;res ont &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;velopp&#xE9;s. Ici, on d&#xE9;crit les &#xE9;tapes qui devraient &#xEA;tre consid&#xE9;r&#xE9;s lors de la planification d&#x26;#39;un &#xE9;cran ARNi utilisant endoribonucl&#xE9;ase pr&#xE9;par&#xE9;s (e) siRNA. Nous fournissons des informations utiles sur la fa&#xE7;on de mettre en &#x153;uvre l&#x26;#39;&#xE9;cran et d&#x26;#39;analyser les r&#xE9;sultats. En outre, nous discutons des strat&#xE9;gies de validation hit et de pr&#xE9;senter un aper&#xE7;u sur la fa&#xE7;on d&#x26;#39;assurer le suivi sur les coups v&#xE9;rifi&#xE9;es pour acqu&#xE9;rir une compr&#xE9;hension mol&#xE9;culaire des ph&#xE9;notypes sous-jacentes.

Criblage &#xE0; haut d&#xE9;bit ARNi dans les cellules de mammif&#xE8;res avec EsiRNAs

Die Entwicklung von funktionalen genomische Sonderwerkzeuge ebnet den Weg f&uuml;r eine systematische Untersuchungen der biologischen Prozesse in Gesundheit und Krankheit. Insbesondere die Umsetzung der RNA-Interferenz (RNAi) als einer genomweiten, Verlust der Funktion Screening-Tool aktiviert hat Wissenschaftler um die Rolle f&uuml;r jedes Gen zellul&auml;re Assays und viele neue Faktoren zu untersuchen, f&uuml;r verschiedene Prozesse, dass besch&auml;ftigen RNAi Bildschirme in den letzten Jahren entdeckt worden sind. Die Ergebnisse zeigen die Komplexit&auml;t biologischer Systeme jedoch auch und darauf hinweisen, dass wir noch ein langer Weg von der funktionalen Netzwerke in der Tiefe zu verstehen sind. Dennoch RNAi-Bildschirme pr&auml;sentieren eine leistungsf&auml;hige Methode zur Genfunktion in hohem Durchsatz zu verh&ouml;ren und verschiedene Methoden zu entlocken RNAi in den S&auml;ugetier-Zellen entwickelt worden. Hier beschreiben wir die Schritte, die bei einen RNAi-Bildschirm besch&auml;ftigt Endoribonuclease vorbereitet (e) SiRNAs Planung ber&uuml;cksichtigt werden sollten. Wir bieten n&uuml;tzliche Informationen zum Implementieren des Bildschirms und die Ergebnisse analysieren. Dar&uuml;ber hinaus wir diskutieren Strategien f&uuml;r hit-Validierung und pr&auml;sentieren eine Gliederung zum Nachfassen Verifizierter Treffer, eine molekulare Verst&auml;ndnis der zugrunde liegenden Ph&auml;notypen zu gewinnen.

High-Throughput-RNAi-Screening in den S&auml;ugetier-Zellen mit EsiRNAs.

Lo sviluppo di strumenti avanzati di genomici funzionali ha aperto la strada per indagini sistematiche dei processi biologici nella salute e nella malattia. In particolare, l&#39;implementazione di interferenza del RNA (RNAi) come un genome-wide, strumento di screening di perdita di funzione ha permesso agli scienziati di sondare il ruolo di ogni gene in dosaggi cellulari e molti nuovi fattori per vari processi sono stati scoperti che RNAi impiegando schermi questi ultimi anni. Tuttavia, i risultati anche dimostrano la complessit&agrave; dei sistemi biologici e indicano che siamo ancora lontani dalla comprensione funzionale reti in profondit&agrave;. Tuttavia, gli schermi RNAi presentano un metodo potente per interrogare la funzione del gene in high-throughput e sono stati sviluppati diversi metodi per suscitare RNAi in cellule di mammifero. Descriviamo qui, passi che dovrebbero essere considerati quando si pianifica un schermo di RNAi che impiegano cromosoma preparato siRNA (e). Forniamo informazioni utili su come implementare la schermata e analizzare i risultati. Inoltre, discutere le strategie per colpire convalida e presentare un contorno su come follow-up su verificati hits di acquisire una comprensione molecolare i fenotipi sottostante.

Screening di alto-rendimento RNAi in cellule di mammifero con esiRNAs.

&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306F;&#x3001;&#x5065;&#x5EB7;&#x3068;&#x75C5;&#x6C17;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7684;&#x8ABF;&#x67FB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8217;&#x88C5;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x65B9;&#x6CD5;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7279;&#x306B;&#x3001;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x30EF;&#x30A4;&#x30C9;&#x306A;&#x3001;&#x6A5F;&#x80FD;&#x55AA;&#x5931;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;RNA&#x5E72;&#x6E09;&#xFF08;RNAi&#xFF09;&#x306E;&#x5B9F;&#x88C5;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x79D1;&#x5B66;&#x8005;&#x306F;RNAi&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x8981;&#x7D20;&#x5185;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x8FD1;&#x5E74;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C1;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x3055;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x6DF1;&#x3055;&#x3067;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304B;&#x3089;&#x9577;&#x3044;&#x9053;&#x306E;&#x308A;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;RNAi&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x304C;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;RNAi&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30DC;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x6E96;&#x5099;&#xFF08;e&#xFF09;&#x306E;siRNA&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;RNAi&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x8A08;&#x753B;&#x3059;&#x308B;&#x969B;&#x306B;&#x8003;&#x616E;&#x3059;&#x3079;&#x304D;&#x624B;&#x9806;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x753B;&#x9762;&#x3092;&#x5B9F;&#x88C5;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x6709;&#x7528;&#x306A;&#x60C5;&#x5831;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30D2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x691C;&#x8A3C;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6226;&#x7565;&#x3092;&#x8B70;&#x8AD6;&#x3059;&#x308B;&#x57FA;&#x790E;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x7406;&#x89E3;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x691C;&#x8A3C;&#x30D2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30ED;&#x30FC;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306E;&#x6982;&#x8981;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

EsiRNAs&#x3068;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;RNAi&#x200B;&#x200B;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;

&#xACE0;&#xAE09; &#xAE30;&#xB2A5; &#xAC8C;&#xB188; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xAC74;&#xAC15;&#xACFC; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xACFC;&#xC815;&#xC758; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC801;&#xC778; &#xC870;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xD3EC;&#xC7A5; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD2B9;&#xD788;, RNA &#xAC04;&#xC12D; (RNAi) &#xAC8C;&#xB188; &#xC218;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xD604; &#xC190;&#xC2E4;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC2A4;&#xD06C;&#xB9AC;&#xB2DD; &#xB3C4;&#xAD6C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xACE0;&#xC6A9; RNAi &#xD654;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD5C;&#xADFC; &#xBA87; &#xB144; &#xB3D9;&#xC548; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9CE;&#xC740; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC694;&#xC778;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xB294; &#xACFC;&#xD559;&#xC790;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xACB0;&#xACFC; &#xB610;&#xD55C; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1;&#xC131;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558; &#xACE0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xAE30;&#xB2A5; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xAE4A;&#xC774; &#xC774;&#xD574;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBA3C; &#xAE38;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7FC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0;, RNAi &#xD654;&#xBA74; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC2EC;&#xBB38; &#xD558;&#xB294; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC81C;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; Rnai&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; endoribonuclease (e) siRNAs &#xC900;&#xBE44; &#xCC44;&#xC6A9; RNAi &#xD654;&#xBA74;&#xC744; &#xACC4;&#xD68D;&#xD560; &#xB54C; &#xACE0;&#xB824;&#xD574; &#xC57C; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD654;&#xBA74;&#xC744; &#xAD6C;&#xD604; &#xD558; &#xACE0; &#xACB0;&#xACFC; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD788;&#xD2B8; &#xC720;&#xD6A8;&#xC131; &#xAC80;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC804;&#xB7B5;&#xC744; &#xB17C;&#xC758; &#xD558; &#xACE0; &#xBD84;&#xC790; &#xAE30;&#xBCF8; &#xACE0;&#xAE30; &#xC774;&#xD574;&#xB97C; &#xC5BB;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xAC80;&#xC99D; &#xB41C; &#xD788;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xAC1C;&#xC694;&#xB97C; &#xC81C;&#xC2DC;.

&#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; Esirnas&#xC640; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; RNAi &#xC2EC;&#xC0AC;.

El desarrollo de herramientas avanzadas de gen&#xF3;mica funcional ha allanado el camino para la investigaci&#xF3;n sistem&#xE1;tica de los procesos biol&#xF3;gicos en la salud y la enfermedad. En particular, la aplicaci&#xF3;n de la interferencia de ARN (RNAi), como en todo el genoma, herramienta de detecci&#xF3;n de p&#xE9;rdida de la funci&#xF3;n que ha permitido a los cient&#xED;ficos para investigar el papel de cada gen en ensayos celulares y otros muchos factores de nuevas versiones de varios procesos se han descubierto el empleo de pantallas de RNAi en los &#xFA;ltimos a&#xF1;os. Sin embargo, los resultados tambi&#xE9;n demuestran la complejidad de los sistemas biol&#xF3;gicos e indican que a&#xFA;n estamos muy lejos de comprender las redes funcionales en profundidad. Sin embargo, las pantallas de RNAi presentar un poderoso m&#xE9;todo para interrogar a la funci&#xF3;n de genes en los m&#xE9;todos de alto rendimiento y diferentes para averiguar las ARNi en c&#xE9;lulas de mam&#xED;feros se han desarrollado. A continuaci&#xF3;n, describimos los pasos que se deben considerar cuando se planifica una pantalla de RNAi utilizando endoribonuclease preparados e) siRNAs. Nos proporcionan informaci&#xF3;n &#xFA;til sobre c&#xF3;mo implementar la pantalla y analizar los resultados. Adem&#xE1;s, se discuten las estrategias para la validaci&#xF3;n de golpe y presentar un esbozo sobre la forma de seguimiento de &#xE9;xitos comprobados para obtener una comprensi&#xF3;n molecular de los fenotipos correspondientes.

De alto rendimiento de detecci&#xF3;n de RNAi en c&#xE9;lulas de mam&#xED;fero con EsiRNAs

&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x53F6;&#x6805;&#x9010;&#x6B65;&#x7624;&#x653E;&#x5F00;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x6001;&#x7684;&#x6539;&#x53D8;&#x548C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x6076;&#x6027;&#x6027;&#x72B6;&#x7684;&#x6536;&#x8D2D;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x627E;&#x51FA;&#x4E00;&#x5957; 21 &#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC; FGF9&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x7531; RNA &#x5E72;&#x6270;&#x8868;&#x578B;&#x5C4F;&#x5E55; SW480 &#x7ED3;&#x80A0;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x6001;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x9762;&#x677F;&#x548C;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x968F;&#x540E;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x8868;&#x578B;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x4E0B;&#x6E38;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7EA7;&#x8054;&#xFF0C;&#x548C;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7B7E;&#x540D; FGF &#x53D7;&#x4F53;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; FGF &#x4FE1;&#x53F7;&#x6291;&#x5236;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x548C;&#x52A8;&#x529B;&#x7684;&#x7ED3;&#x80A0;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x635F;&#x5931;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6548;&#x679C;&#x4E1D;&#x88C2;&#x7D20;&#x6D3B;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; (MAPK) &#x901A;&#x8FC7;&#x8C03;&#x89E3;&#x548C; Rho &#x86CB;&#x767D;&#x7011;&#x5E03;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x540C;&#x610F; MEK1/2 &#x6216; JNK &#x6291;&#x5236;&#x7EA7;&#x8054;&#xFF0C;&#x4F46;&#x808C;&#x9187; AKT &#x4FE1;&#x53F7;&#x8F74;&#x7684;&#x4E0D;&#x4E5F;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x6001;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; FGF9 &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x662F;&#x5F3A;&#x5728;&#x5148;&#x8FDB;&#x7ED3;&#x80A0;&#x80BF;&#x7624;&#x548C;&#x8FC7;&#x5EA6;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0E;&#x60A3;&#x8005;&#x7684;&#x751F;&#x5B58;&#x4E0D;&#x5229;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5B50;&#x96C6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E; FGF &#x53D7;&#x4F53;&#x4FE1;&#x53F7;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x7ED3;&#x80A0;&#x80BF;&#x7624;&#x3002;

RNA &#x5E72;&#x6270;&#x8868;&#x578B;&#x5C4F;&#x5E55;&#x6807;&#x8BC6; FGF &#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x7ED3;&#x80A0;&#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

In tumor cells, stepwise oncogenic deregulation of signaling cascades induces alterations of cellular morphology and promotes the acquisition of malignant traits. Here, we identified a set of 21 genes, including FGF9, as determinants of tumor cell morphology by an RNA interference phenotypic screen in SW480 colon cancer cells. Using a panel of small molecular inhibitors, we subsequently established phenotypic effects, downstream signaling cascades, and associated gene expression signatures of FGF receptor signals. We found that inhibition of FGF signals induces epithelial cell adhesion and loss of motility in colon cancer cells. These effects are mediated via the mitogen-activated protein kinase (MAPK) and Rho GTPase cascades. In agreement with these findings, inhibition of the MEK1/2 or JNK cascades, but not of the PI3K-AKT signaling axis also induced epithelial cell morphology. Finally, we found that expression of FGF9 was strong in a subset of advanced colon cancers, and overexpression negatively correlated with patients' survival. Our functional and expression analyses suggest that FGF receptor signals can contribute to colon cancer progression.

An RNA interference phenotypic screen identifies a role for FGF signals in colon cancer progression.

Dans les cellules tumorales, par &#xE9;tapes d&#xE9;r&#xE9;glementation oncog&#xE9;nique de cascades de signalisation provoque des alt&#xE9;rations de la morphologie cellulaire et favorise l&#x26;#39;acquisition de traits malins. Ici, nous avons identifi&#xE9; un ensemble de 21 g&#xE8;nes, y compris FGF9, en tant que d&#xE9;terminants de la morphologie des cellules tumorales par un &#xE9;cran ARN interf&#xE9;rence dans les cellules SW480 ph&#xE9;notypique du cancer du c&#xF4;lon. En utilisant un panel de petits inhibiteurs mol&#xE9;culaires, nous avons ensuite &#xE9;tabli des effets ph&#xE9;notypiques, des cascades de signalisation en aval, et associ&#xE9;s signatures d&#x26;#39;expression g&#xE9;nique des r&#xE9;cepteurs de signaux FGF. Nous avons trouv&#xE9; que l&#x26;#39;inhibition de signaux FGF induit l&#x26;#39;adh&#xE9;sion des cellules &#xE9;pith&#xE9;liales et la perte de la motilit&#xE9; des cellules canc&#xE9;reuses du c&#xF4;lon. Ces effets sont m&#xE9;di&#xE9;s par la prot&#xE9;ine kinase activ&#xE9;e par des mitog&#xE8;nes (MAPK) et Rho GTPases cascades. En accord avec ces conclusions, l&#x26;#39;inhibition de la MEK1 / 2 ou cascades JNK, mais pas de l&#x26;#39;axe de signalisation PI3K-AKT morphologie a &#xE9;galement induit des cellules &#xE9;pith&#xE9;liales. Enfin, nous avons constat&#xE9; que l&#x26;#39;expression de FGF9 a &#xE9;t&#xE9; forte dans un sous-ensemble des cancers du c&#xF4;lon avanc&#xE9;s, et la surexpression n&#xE9;gativement corr&#xE9;l&#xE9; avec la survie des patients. Nos analyses fonctionnelles et d&#x26;#39;expression sugg&#xE8;rent que les signaux des r&#xE9;cepteurs FGF peuvent contribuer &#xE0; la progression du cancer du c&#xF4;lon.

Un &#xE9;cran interf&#xE9;rence ARN ph&#xE9;notypique Identifie un r&#xF4;le pour les signaux FGF dans la progression du cancer du colon

In Tumorzellen schrittweise Onkogene Deregulierung der Signalisierung Kaskaden induziert Ver&auml;nderungen des zellul&auml;ren Morphologie und f&ouml;rdert den Erwerb von maligne Z&uuml;ge. Hier haben wir eine Reihe von 21 Gene, einschlie&szlig;lich FGF9, als Determinanten der Tumor Zellmorphologie durch eine RNA Interferenz ph&auml;notypische Bildschirm in SW480 Doppelpunkt Krebszellen identifiziert. Mit einem Panel von kleinen Molekulare Inhibitoren, wir etablierte anschlie&szlig;end ph&auml;notypische Effekte, nachgeschaltete Signalisierung ergie&szlig;t und zugeordneten Gen-Ausdruck-Signaturen von FGF-Rezeptor-Signalen. Wir fanden, dass Hemmung der FGF Signale epithelialen Zell-Adh&auml;sion und Verlust der Beweglichkeit in den Doppelpunkt Krebszellen induziert. Diese Effekte werden vermittelt &uuml;ber die Mitogen-aktivierte Proteinkinase (MAPK) und Rho GTPase ergie&szlig;t. Im Einvernehmen mit diesen Ergebnissen Hemmung der MEK1/2 oder JNK ergie&szlig;t, aber nicht der PI3K-AKT Signalisierung Achse auch epitheliale Zellmorphologie. Schlie&szlig;lich fanden wir, dass Ausdruck FGF9 in eine Teilmenge der erweiterte Doppelpunkt Krebsarten und &Uuml;berexpression negativ korreliert mit dem &Uuml;berleben der Patienten stark. Unsere funktionellen und Ausdruck Analysen zufolge FGF-Rezeptor-Signale zum Doppelpunkt Fortschreiten beitragen k&ouml;nnen.

Ein RNA-Interferenz ph&auml;notypische Bildschirm bezeichnet eine Rolle f&uuml;r FGF-Signale im Doppelpunkt Fortschreiten.

Nelle cellule tumorali, graduale liberalizzazione oncogenica di cascate di segnalazione induce alterazioni della morfologia cellulare e promuove l&#39;acquisizione di tratti maligni. Qui, abbiamo individuato una serie di 21 geni, tra cui FGF9, come fattori determinanti della morfologia delle cellule tumorali da uno schermo fenotipico di RNA interference in cellule di cancro del colon SW480. Utilizzando un pannello di piccoli inibitori molecolari, abbiamo stabilito successivamente effetti fenotipici, segnalazione a valle cascate e associati le firme di espressione genica dei segnali del recettore FGF. Abbiamo trovato che l&#39;inibizione dei segnali FGF induce adesione delle cellule epiteliali e la perdita di motilit&agrave; in cellule di cancro del colon. Questi effetti sono mediati attraverso la chinasi di proteina mitogene-attivata (MAPK) e Rho GTPasi cascate. D&#39;accordo con questi risultati, inibizione della MEK1/2 o JNK cascate, ma non dell&#39;asse PI3K-AKT signaling anche indotto la morfologia delle cellule epiteliali. Infine, abbiamo trovato che l&#39;espressione di FGF9 era forte in un sottogruppo di tumori del colon avanzato e iperespressione negativamente correlata con la sopravvivenza dei pazienti. Le nostre analisi funzionale e di espressione suggeriscono che segnali recettore FGF possono contribuire alla progressione del cancro del colon.

Uno schermo fenotipico di interferenza RNA identifica un ruolo per i segnali FGF nella progressione del cancro del colon.

&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30AB;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x6BB5;&#x968E;&#x767A;&#x764C;&#x898F;&#x5236;&#x7DE9;&#x548C;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x3001;&#x60AA;&#x6027;&#x5F62;&#x8CEA;&#x306E;&#x7372;&#x5F97;&#x3092;&#x63A8;&#x9032;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;SW480&#x5927;&#x8178;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;RNA&#x5E72;&#x6E09;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x3067;&#x3001;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;FGF9&#x3092;&#x542B;&#x3080;21&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x30D1;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x52B9;&#x679C;&#x3001;&#x4E0B;&#x6D41;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30AB;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C9;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;FGF&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CD;&#x30C1;&#x30E3;&#x3092;&#x8A2D;&#x7ACB;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;FGF&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x304C;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x63A5;&#x7740;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D50;&#x8178;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x904B;&#x52D5;&#x6027;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30C8;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;MAPK&#xFF09;&#x3068;Rho GTP&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x30AB;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C9;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x3001;MEK1 / 2&#x307E;&#x305F;&#x306F;JNK&#x30AB;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;PI3K-AKT&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x8EF8;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;FGF9&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x9032;&#x884C;&#x5927;&#x8178;&#x764C;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x5F37;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3001;&#x3068;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x8CA0;&#x306E;&#x60A3;&#x8005;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x3068;&#x76F8;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x79C1;&#x9054;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x767A;&#x73FE;&#x89E3;&#x6790;&#x306F;&#x3001;FGF&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x304C;&#x5927;&#x8178;&#x764C;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

RNA&#x5E72;&#x6E09;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30F3;&#x306F;&#x5927;&#x8178;&#x764C;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;FGF&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;

&#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E0;&#xD638;&#xC758; stepwise &#xAE08;&#xD558;&#xB294; &#xADDC;&#xC81C; &#xC644;&#xD654; &#xC720;&#xB3C4; &#xC138;&#xD3EC; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559;&#xC758; &#xBCC0;&#xACBD; &#xBC0F; &#xC545;&#xC131; &#xD615;&#xC9C8;&#xC758; &#xC218;&#xC9D1;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4;. &#xC5EC;&#xAE30;, FGF9, SW480 &#xACB0; &#xC7A5; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; RNA &#xAC04;&#xC12D; phenotypic &#xD654;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559;&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; 21 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC9D1;&#xD569; &#xC2DD;&#xBCC4;. &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC758; &#xD328;&#xB110;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC774;&#xD6C4;&#xC5D0; phenotypic &#xD6A8;&#xACFC; &#xC124;&#xB9BD;, &#xD3ED;&#xD3EC;, &#xD558;&#xB958; &#xC2E0;&#xD638; &#xBC0F; &#xAD00;&#xB828; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC2DD; &#xC11C;&#xBA85;&#xC758; FGF &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC2E0;&#xD638;. FGF &#xC2E0;&#xD638;&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC720;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29;&#xACFC; &#xACB0; &#xC7A5; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; (MAPK)&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC; &#xBC0F; Rho GTPase &#xD3ED;&#xD3EC;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xACC4;&#xC57D; MEK1/2 &#xB610;&#xB294; JNK&#xC758; &#xC800;&#xD574; &#xD3ED;&#xD3EC;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB610;&#xD55C; PI3K AKT &#xC2E0;&#xD638; &#xCD95; &#xD558;&#xC9C0;&#xC758; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559; &#xC720;&#xB3C4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD558;&#xB294; fgf9&#xC758; &#xC2DD; &#xACE0;&#xAE09; &#xACB0; &#xC7A5; &#xC554; &#xD658;&#xC790; &#xB4E4;&#xC758; &#xC0DD;&#xC874;&#xC5D0; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC5F0;&#xAD00; overexpression&#xC758; &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569;&#xC5D0; &#xAC15;&#xD55C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBC0F; &#xC2DD; &#xBD84;&#xC11D; FGF &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC2E0;&#xD638; &#xB300; &#xC7A5; &#xC554; &#xC9C4;&#xD589;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

RNA &#xAC04;&#xC12D; phenotypic &#xD654;&#xBA74; &#xB300; &#xC7A5; &#xC554; &#xC9C4;&#xD589;&#xC5D0; FGF &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

En las c&#xE9;lulas tumorales, la desregulaci&#xF3;n gradual de cascadas de se&#xF1;alizaci&#xF3;n oncog&#xE9;nica induce alteraciones de la morfolog&#xED;a celular y promueve la adquisici&#xF3;n de caracter&#xED;sticas malignas. En este caso, hemos identificado un conjunto de 21 genes, incluyendo FGF9, como determinantes de la morfolog&#xED;a de las c&#xE9;lulas del tumor por una pantalla de interferencia de ARN fenot&#xED;pica en las c&#xE9;lulas de c&#xE1;ncer de colon SW480. Utilizando un panel de peque&#xF1;os inhibidores moleculares, que posteriormente estableci&#xF3; los efectos fenot&#xED;picos, cascadas de se&#xF1;alizaci&#xF3;n corriente abajo, y asociados a firmas de expresi&#xF3;n gen&#xE9;tica de las se&#xF1;ales del receptor de FGF. Hemos encontrado que la inhibici&#xF3;n de las se&#xF1;ales de FGF induce la adhesi&#xF3;n celular epitelial y p&#xE9;rdida de la motilidad en c&#xE9;lulas de c&#xE1;ncer de colon. Estos efectos est&#xE1;n mediados por la prote&#xED;na quinasa activada por mit&#xF3;genos (MAPK) y cascadas de Rho GTPasa. De acuerdo con estos resultados, la inhibici&#xF3;n de la MEK 1/2 o cascadas de JNK, pero no del eje de se&#xF1;alizaci&#xF3;n PI3K-AKT morfolog&#xED;a tambi&#xE9;n inducida de c&#xE9;lulas epiteliales. Por &#xFA;ltimo, encontramos que la expresi&#xF3;n de FGF9 era fuerte en un subgrupo de c&#xE1;nceres de colon avanzado, y la sobreexpresi&#xF3;n de una correlaci&#xF3;n negativa con la supervivencia de los pacientes. Nuestros an&#xE1;lisis funcionales y de expresi&#xF3;n sugieren que las se&#xF1;ales del receptor de FGF puede contribuir a la progresi&#xF3;n del c&#xE1;ncer de colon.

Una pantalla de la interferencia de ARN fenot&#xED;pica identifica un papel para las se&#xF1;ales de FGF en la progresi&#xF3;n del c&#xE1;ncer de colon

&#x5168;&#x9762;&#x7814;&#x7A76;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7F16;&#x7801;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x53EF;&#x7528;&#xFF0C;&#x800C;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x6709;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5730;&#x8C03;&#x67E5;&#x957F;&#x975E;&#x7F16;&#x7801; Rna &#xFF08;lncRNAs&#xFF09; &#x5DF2;&#x7ECF;&#x5377;&#x5165;&#x5404;&#x79CD;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x901A;&#x8DEF;&#xFF0C;&#x662F;&#x6709;&#x9650;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x5408;&#x5E76;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x548C;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7814;&#x7A76; lncRNAs &#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x548C;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x975E;&#x7F16;&#x7801; Rna (c-&#x67EF;&#x5357;) &#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x786E;&#x5B9A;&#x8C03;&#x8282;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7279;&#x6027;&#x7684;&#x6210;&#x7EE9;&#x5355;&#x3002;

&#x7ED3;&#x5408; RNAi &#x548C;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x529F;&#x80FD;&#x5939;&#x5C42;&#x957F;&#x975E;&#x7F16;&#x7801; Rna&#x3002;

Whereas methods to comprehensively study cellular roles of protein-coding genes are available, techniques to systematically investigate long noncoding RNAs (lncRNAs), which have been implicated in diverse biological pathways, are limited. Here we report combined knockdown and localization analysis of noncoding RNAs (c-KLAN) that merges functional characterization and localization approaches to study lncRNAs. Using this technique we identified transcripts that regulate mouse embryonic stem cell identity.

Combined RNAi and localization for functionally dissecting long noncoding RNAs.

Alors que les m&#xE9;thodes d&#x26;#39;&#xE9;tude approfondie des r&#xF4;les cellulaires de g&#xE8;nes codant des prot&#xE9;ines sont disponibles, les techniques d&#x26;#39;enqu&#xEA;ter syst&#xE9;matiquement sur de longues ARN non codant (lncRNAs), qui ont &#xE9;t&#xE9; impliqu&#xE9;s dans divers processus biologiques, sont limit&#xE9;es. Nous rapportons ici knockdown combin&#xE9;s et analyse de localisation des ARN non codantes (c-KLAN) qui fusionne fonctionnels m&#xE9;thodes de caract&#xE9;risation et la localisation d&#x26;#39;&#xE9;tudier lncRNAs. En utilisant cette technique, nous avons identifi&#xE9; les transcriptions qui r&#xE9;gulent la souris identit&#xE9; de cellules souches embryonnaires.

Combin&#xE9; ARNi et de localisation pour Fonctionnellement dissection ARN non codant longues

W&auml;hrend Methoden umfassend studieren zellulare Rollen der Protein-kodierenden Gene zur Verf&uuml;gung stehen, sind Techniken, lange noncoding RNAs (LncRNAs), systematisch zu untersuchen, die in vielf&auml;ltigen biologischen Bahnen verwickelt sind, beschr&auml;nkt. Hier berichten wir kombinierten Niederschlag und Lokalisierung Analyse von noncoding RNAs (c-KLAN), die Funktionelle Charakterisierung und Lokalisierung Ans&auml;tze, um LncRNAs zu studieren zusammenf&uuml;hrt. Mit dieser Technik wurden Abschriften, die Maus an embryonalen Stammzellen Identit&auml;t zu regulieren.

Kombinierte RNAi und Lokalisierung f&uuml;r funktional sezieren lange noncoding RNAs.

Considerando che sono disponibili metodi per studiare esaurientemente cellulari ruoli di geni codificanti proteine, tecniche per investigare sistematicamente lungo non codificante RNAs (lncRNAs), che sono stati implicati in varie vie biologiche, sono limitati. Qui riportiamo combinato atterramento e localizzazione analisi di RNA non codificante (c-KLAN) che unisce approcci localizzazione e caratterizzazione funzionali per lo studio lncRNAs. Utilizzando questa tecnica abbiamo individuato le trascrizioni che regolano l&#39;identit&agrave; delle cellule staminali embrionali di topo.

Combinato RNAi e localizzazione per dissezione funzionalmente lungo non codificante RNAs.

&#x7DCF;&#x5408;&#x7684;&#x306B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x304C;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7684;&#x306B;&#x9577;&#x3044;&#x975E;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;RNA&#xFF08;lncRNAs&#xFF09;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x6280;&#x8853;&#x306F;&#x3001;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;lncRNAs&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x89E3;&#x6790;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x30DE;&#x30FC;&#x30B8;&#x3059;&#x308B;&#x975E;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;RNA&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x3068;&#x5C40;&#x5728;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#xFF08;C-KLAN&#xFF09;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30FC;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x7523;&#x7269;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x7D50;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x305F;RNAi&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x30ED;&#x30F3;&#x30B0;&#x30CE;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;RNA&#x3092;&#x89E3;&#x5256;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;

&#xC885;&#xD569;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xCF54;&#xB529; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC138;&#xD3EC; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xBC18;&#xBA74; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC624;&#xB798; noncoding RNAs (lncRNAs), &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xACBD;&#xB85C;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xB418;&#xC5B4; &#xC870;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC81C;&#xD55C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xACB0;&#xD569;&#xB41C; &#xCD5C;&#xC800; &#xBC0F; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xBD84;&#xC11D; noncoding RNAs (c-&#xB2E8;)&#xC758; lncRNAs &#xC5F0;&#xAD6C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xC811;&#xADFC;&#xC744; &#xBCD1;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC815;&#xCCB4;&#xC131;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xC131;&#xC801; &#xC99D;&#xBA85;&#xC11C; &#xD30C;&#xC545;.

&#xACB0;&#xD569; &#xB41C; RNAi &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC624;&#xB798; noncoding RNAs &#xD574; &#xBD80;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;.

Considerando que los m&#xE9;todos para el estudio de manera integral las funciones celulares de los genes que codifican prote&#xED;nas est&#xE1;n disponibles, las t&#xE9;cnicas para investigar sistem&#xE1;ticamente los ARNs no codificantes (lncRNAs largos), que han sido implicados en diversos procesos biol&#xF3;gicos, son limitadas. Aqu&#xED; mostramos ca&#xED;da combinada y el an&#xE1;lisis de la localizaci&#xF3;n de los RNAs no codificantes (c-KLAN) que combina los enfoques funcionales de caracterizaci&#xF3;n y localizaci&#xF3;n de estudiar lncRNAs. Mediante esta t&#xE9;cnica hemos identificado transcripciones que regulan la identidad de embriones de rat&#xF3;n con c&#xE9;lulas madre.

Article	Year
Discriminatory aptamer reveals serum response element transcription regulated by cytohesin-2. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America\| PubMed ID: 15277685	2004
Structure of an RNA polymerase II-RNA inhibitor complex elucidates transcription regulation by noncoding RNAs. Nature structural & molecular biology\| PubMed ID: 16341226	2006
Enzymatically prepared RNAi libraries. Nature methods\| PubMed ID: 16929314	2006
Genome-wide resources of endoribonuclease-prepared short interfering RNAs for specific loss-of-function studies. Nature methods\| PubMed ID: 17351622	2007
Genome-scale RNAi profiling of cell division in human tissue culture cells. Nature cell biology\| PubMed ID: 17994010	2007
A genome-scale RNAi screen for Oct4 modulators defines a role of the Paf1 complex for embryonic stem cell identity. Cell stem cell\| PubMed ID: 19345177	2009
Comparative profiling identifies C13orf3 as a component of the Ska complex required for mammalian cell division. The EMBO journal\| PubMed ID: 19387489	2009
SKAnking with Ska3: essential role of Ska3 in cell division revealed by combined phenotypic profiling. Cell cycle (Georgetown, Tex.)\| PubMed ID: 19838048	2009
A genome-scale DNA repair RNAi screen identifies SPG48 as a novel gene associated with hereditary spastic paraplegia. PLoS biology\| PubMed ID: 20613862	2010
High-throughput RNAi screening in mammalian cells with esiRNAs. Methods (San Diego, Calif.)\| PubMed ID: 21185384	2011
An RNA interference phenotypic screen identifies a role for FGF signals in colon cancer progression. PloS one\| PubMed ID: 21853123	2011
Combined RNAi and localization for functionally dissecting long noncoding RNAs. Nature methods\| PubMed ID: 22327834	2012

Mirko Theis

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