axoplasm-isolation-from-rat-sciatic-nerve

Axoplasm Isolation from Rat Sciatic Nerve

Isolation of pure axonal cytoplasm (axoplasm) from peripheral nerve is crucial for biochemical studies of many biological processes. In this article, we ...

Weizmann Institute of Science

G &#x86CB;&#x767D;&#x5C01;&#x95ED; K(+) &#x901A;&#x9053; (GIRK &#x6216; Kir3&#xFF09; &#x88AB;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6216;&#x6E38;&#x79BB; Na(+) &#x7684; Gbetagamma&#x3002;Na(+) &#x6FC0;&#x6D3B;&#x662F;&#x5FEB;&#x901F;&#x7684;&#x3001; &#x72EC;&#x7ACB;&#x7684; Gbetagamma&#xFF0C;&#x5E76;&#x53EF;&#x80FD;&#x901A;&#x8FC7;&#x76F4;&#x63A5;&#x3001; &#x4F4E; 30-40 &#x6BEB;&#x7C73; EC(50)&#xFF09; &#x7684;&#x4EB2;&#x548C;&#x6027;&#x7ED3;&#x5408;&#x7684; Na(+) &#x5230;&#x901A;&#x9053;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#x5728; Na(+) &#x7EC6;&#x80DE;&#x6D53;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x589E;&#x52A0; [Na(+)](in)&#xFF0C;(5-20 &#x6BEB;&#x7C73;)&#xFF0C;&#x5728;&#x751F;&#x7406;&#x8303;&#x56F4;&#x5185;&#x6FC0;&#x6D3B; GIRK &#x5206;&#x949F;&#x901A;&#x8FC7;&#x989D;&#x5916;&#x7684;&#x3001; &#x7F13;&#x6162;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x5185;&#x3002;&#x7F13;&#x6162;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x89C2;&#x5BDF; GIRK &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7F3A;&#x4E4F; Na(+) &#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x5B83;&#x6291;&#x5236; Gbetagamma &#x6E05;&#x9053;&#x592B;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x5B83;&#x662F; Gbetagamma-&#x76F8;&#x5173; &#xFF1B;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4E0D;&#x9700;&#x8981; GTP&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5047;&#x8BBE; Na(+) &#x63D0;&#x5347;&#x514D;&#x8D39; Gbetagamma &#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D53;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x5230;&#x514D;&#x8D39;&#x7684; Galpha(GDP) &#x548C; Gbetagamma &#x7684; Galphabetagamma heterotrimer &#x7684;&#x5206;&#x79BB;&#x3002;&#x76F4;&#x63A5;&#x751F;&#x5316;&#x6D4B;&#x91CF;&#x663E;&#x793A; Na(+) &#x5BFC;&#x81F4;&#x8F7B;&#x5FAE;&#x8DCC;&#x5E45; &#xFF08;&#x5927;&#x7EA6; 2 &#x6298;&#x9875;&#xFF09; &#x5728; Galpha(GDP) &#x548C; Gbetagamma &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x4EB2;&#x548C;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x7B26;&#x5408;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x9884;&#x6D4B;&#xFF0C;&#x6E29;&#x548C;&#x7684; Galpha(i3) &#x7684;&#x5171;&#x8868;&#x8FBE;&#x52A0;&#x5F3A;&#x6162; Na(+) &#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x63ED;&#x793A; G &#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x8C03;&#x63A7;&#x4EE5;&#x524D;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x548C;&#x5C55;&#x793A;&#x65B0;&#x578B; GIRK &#x7531; Na(+) Gbetagamma &#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE; Na(+) &#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x76D1;&#x7BA1;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x56E0;&#x7D20;&#x6216;&#x751A;&#x81F3;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4FE1;&#x4F7F;&#xFF0C;&#x89C4;&#x8303;&#x901A;&#x8FC7; Gbetagamma &#x7684;&#x6548;&#x5E94;&#x5668;&#x3002;

Na + &#x4FC3;&#x8FDB;&#x56FD;&#x5185;&#x751F;&#x4EA7;&#x603B;&#x503C; Galpha &#x4E0E; Gbeta &gamma; &#x4E4B;&#x95F4;&#x79BB;&#x6FC0;&#x6D3B; G &#x86CB;&#x767D;&#x5C01;&#x95ED; K + &#x901A;&#x9053;&#x3002;

G protein-gated K(+) channels (GIRK, or Kir3) are activated by the direct binding of Gbetagamma or of cytosolic Na(+). Na(+) activation is fast, Gbetagamma-independent, and probably via a direct, low affinity (EC(50), 30-40 mm) binding of Na(+) to the channel. Here we demonstrate that an increase in intracellular Na(+) concentration, [Na(+)](in), within the physiological range (5-20 mm), activates GIRK within minutes via an additional, slow mechanism. The slow activation is observed in GIRK mutants lacking the direct Na(+) effect. It is inhibited by a Gbetagamma scavenger, hence it is Gbetagamma-dependent; but it does not require GTP. We hypothesized that Na(+) elevates the cellular concentration of free Gbetagamma by promoting the dissociation of the Galphabetagamma heterotrimer into free Galpha(GDP) and Gbetagamma. Direct biochemical measurements showed that Na(+) causes a moderate decrease (approximately 2-fold) in the affinity of interaction between Galpha(GDP) and Gbetagamma. Furthermore, in accord with the predictions of our model, slow Na(+) activation was enhanced by mild coexpression of Galpha(i3). Our findings reveal a previously unknown mechanism of regulation of G proteins and demonstrate a novel Gbetagamma-dependent regulation of GIRK by Na(+). We propose that Na(+) may act as a regulatory factor, or even a second messenger, that regulates effectors via Gbetagamma.

Na+ promotes the dissociation between Galpha GDP and Gbeta gamma, activating G protein-gated K+ channels.

G prot&eacute;ine k (+) canaux (GIRK ou Kir3) sont activ&eacute;s par la liaison directe de Gbetagamma ou de Na cytosolique. Activation de la Na est rapide, ind&eacute;pendant de la Gbetagamma et probablement via un direct, faible fixation d&#39;affinit&eacute; (EC(50), 30-40 mm) de Na au canal. Ici, nous d&eacute;montrons qu&#39;une augmentation de la concentration intracellulaire de Na, [Na(+)](in), dans les limites physiologiques (5-20 mm), active GIRK quelques minutes gr&acirc;ce &agrave; un m&eacute;canisme suppl&eacute;mentaire, lent. L&#39;activation lente est observ&eacute;e chez les mutants GIRK d&eacute;pourvus de l&#39;effet direct de la Na. Elle est inhib&eacute;e par un charognard de Gbetagamma, d&#39;o&ugrave; il est d&eacute;pendant du Gbetagamma ; mais il ne n&eacute;cessite pas de GTP. Nous avons &eacute;mis l&#39;hypoth&egrave;se que Na &eacute;l&egrave;ve la concentration cellulaire de Gbetagamma libre en encourageant la dissociation de la heterotrimer Galphabetagamma en Galpha(GDP) libre et Gbetagamma. Directs mesures biochimiques ont montr&eacute; que Na provoque une diminution mod&eacute;r&eacute;e (environ 2 fois) de l&#39;affinit&eacute; de l&#39;interaction entre Galpha(GDP) et Gbetagamma. En outre, en accord avec les pr&eacute;dictions de notre mod&egrave;le, activation lente de Na est augment&eacute;e par coexpression douce de Galpha(i3). Nos r&eacute;sultats r&eacute;v&egrave;lent un m&eacute;canisme jusque-l&agrave; inconnu de la r&eacute;gulation des prot&eacute;ines G et d&eacute;montrent une nouvelle r&eacute;gulation Gbetagamma-d&eacute;pendante de GIRK par Na. Nous proposons que Na peut agir comme un facteur de normalisation, ou m&ecirc;me un second messager, qui r&eacute;glemente les effecteurs via Gbetagamma.

Na + favorise la dissociation entre Galpha GDP et Gbeta gamma, activation des canaux K + sensibles &agrave; la prot&eacute;ine G.

Na + f&#xF6;rdert die Dissoziation zwischen Galpha BIP und Gbeta Gamma, Aktivierung G-Protein-gated K +-Kan&#xE4;le.

G proteina-gated K(+) canali (GIRK o Kir3) sono attivati dal binding diretto di Gbetagamma o di Na(+) citosolico. Na(+) attivazione &egrave; veloce, Gbetagamma-indipendente e probabilmente tramite una diretta, basso legame di affinit&agrave; (EC(50), 30-40 mm) di Na(+) per il canale. Qui dimostriamo che un aumento della concentrazione intracellulare di Na(+), [Na(+)](in), entro il range fisiologico (5-20 mm), attiva GIRK in pochi minuti attraverso un meccanismo supplementare, lento. L&#39;attivazione lenta &egrave; osservato in mutanti GIRK manca l&#39;effetto diretto di Na(+). Essa &egrave; inibita da un Gbetagamma al tesoro, quindi &egrave; Gbetagamma-dipendente; ma non richiede GTP. Abbiamo ipotizzato che Na(+) eleva la concentrazione cellulare di libero Gbetagamma promuovendo la dissociazione di heterotrimer la Galphabetagamma in Galpha(GDP) libero e Gbetagamma. Misurazioni dirette e biochimiche hanno dimostrato che Na(+) provoca una diminuzione moderata (circa 2 volte) nell&#39;affinit&agrave; dell&#39;interazione tra Galpha(GDP) e Gbetagamma. Inoltre, in accordo con le previsioni del nostro modello, lento Na(+) attivazione fu accresciuto da lieve coexpression di Galpha(i3). I nostri risultati dimostrano un romanzo regolazione Gbetagamma-dipendente di GIRK da Na(+) e rivelano un meccanismo precedentemente sconosciuto di regolazione delle proteine G. Proponiamo che Na(+) pu&ograve; agire come un fattore regolatore, o anche un secondo messaggero, che regola effettori tramite Gbetagamma.

Na + promuove la dissociazione tra Galpha GDP e Gbeta gamma, attivando la proteina-gated K + canali di G.

G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x306B;&#x65BC;&#x3044;&#x3066;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB; (GIRK&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F; Kir3) &#x307E;&#x305F;&#x306F; Gbetagamma &#x306E;&#x30BE;&#x30EB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA; Na(+) &#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Na(+) &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x901F;&#x3001;Gbetagamma &#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x7D4C;&#x7531;&#x3067;&#x76F4;&#x63A5;&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3078;&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027; &#xFF08;EC(50)&#x3001;30 &#x301C; 40 &#x30DF;&#x30EA;&#x30E1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EB;&#xFF09; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; Na(+) &#x306E;&#x4F4E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E; Na(+) &#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; [Na(+)](in)&#x3001;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x7BC4;&#x56F2;&#x5185; (5-20 mm) &#x306B; GIRK &#x8FFD;&#x52A0;&#x3001;&#x9045;&#x3044;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x5206;&#x4EE5;&#x5185;&#x3002;&#x9045;&#x3044;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x76F4;&#x63A5; Na(+) &#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066; GIRK &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C; Gbetagamma &#x306E;&#x30B9;&#x30AB;&#x30D9;&#x30F3; &#x30B8;&#x30E3;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x6545;&#x306B;&#x305D;&#x308C;&#x306F; Gbetagamma &#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F; GTP &#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;Na(+) &#x7121;&#x6599; Galpha(GDP) &#x3068; Gbetagamma &#x306B; Galphabetagamma heterotrimer &#x306E;&#x89E3;&#x96E2;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7121;&#x6599; Gbetagamma &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x4EEE;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x76F4;&#x63A5;&#x306E;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x6E2C;&#x5B9A; Na(+) &#x306F;&#x3084;&#x3084;&#x4F4E;&#x4E0B; &#xFF08;&#x7D04; 3 &#x3064;&#x6298;&#x308A;) Galpha(GDP) &#x3068; Gbetagamma &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3067;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x9045;&#x3044; Na(+) &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316; Galpha(i3) &#x306E;&#x8EFD;&#x5EA6;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306F; G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x672A;&#x77E5;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x3066;&#x5C0F;&#x8AAC; GIRK Na(+) &#x306B;&#x3088;&#x308B; Gbetagamma &#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x306A;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3092;&#x5B9F;&#x6F14;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Na(+) &#x898F;&#x5236;&#x8981;&#x56E0;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F; Gbetagamma &#x7D4C;&#x7531;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B; 2 &#x756A;&#x76EE;&#x306E;&#x30E1;&#x30C3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30E3;&#x30FC;&#x3082;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x52D9;&#x3081;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Na + Galpha GDP &#x3068; Gbeta &#x30AC;&#x30F3;&#x30DE;&#x306E;&#x89E3;&#x96E2;&#x306F;&#x3001;G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027; K + &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBB38;&#xC774; K(+) &#xCC44;&#xB110; (GIRK, &#xB610;&#xB294; Kir3) cytosolic Na(+) &#xB610;&#xB294; Gbetagamma&#xC758; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Na(+) &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBE60;&#xB978;, Gbetagamma &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801; &#xC774;&#xBA70; &#xC544;&#xB9C8; &#xC9C1;&#xC811; &#xD1B5;&#xD574; &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0; na(+)&#xC758; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; (EC(50), 30-40 m m) &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB0AE;&#xC740;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xB294; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; Na(+) &#xB18D;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; [Na(+)](in), (5-20 m m), &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xBC94;&#xC704; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; GIRK &#xCD94;&#xAC00;, &#xB290;&#xB9B0; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBD84; &#xC774;&#xB0B4;. &#xB290;&#xB9B0; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; GIRK &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC9C1;&#xC811; Na(+) &#xD6A8;&#xACFC; &#xBD80;&#xC871;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Gbetagamma &#xD3D0;&#xD488;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574;, &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; Gbetagamma &#xC885;&#xC18D;; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; GTP&#xB97C; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Na(+) &#xBB34;&#xB8CC; Galpha(GDP) &#xBC0F; Gbetagamma Galphabetagamma heterotrimer&#xC758; &#xBD84;&#xB9AC;&#xB97C; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558; &#xC5EC; &#xBB34;&#xB8CC; Gbetagamma&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xB18D;&#xB3C4; &#xB04C;&#xC5B4;&#xC62C;&#xB9AC;&#xACE0; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xC138;&#xC6E0;&#xB2E4;. &#xC9C1;&#xC811; &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xCE21;&#xC815;&#xC744; Na(+) &#xD558;&#xBA74; &#xC801;&#xB2F9; &#xD55C; &#xAC10;&#xC18C; (&#xC57D; 2-fold) galpha(gdp)&#xC640; Gbetagamma &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xBAA8;&#xB378;&#xC758; &#xC608;&#xCE21;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C;, &#xB290;&#xB9B0; Na(+) &#xD65C;&#xC131;&#xD654; galpha(i3)&#xC758; &#xAC00;&#xBCBC;&#xC6B4; coexpression&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xADDC;&#xCE59;&#xC758; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD558; &#xACE0; &#xC18C;&#xC124; Na(+) &#xC5EC; GIRK&#xC758; Gbetagamma &#xC885;&#xC18D; &#xADDC;&#xCE59;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Na(+) &#xADDC;&#xC81C; &#xC694;&#xC18C; &#xB610;&#xB294; &#xC2EC;&#xC9C0;&#xC5B4; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBA54;&#xC2E0;&#xC800;, Gbetagamma &#xD1B5;&#xD574; &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xB97C; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xC5ED;&#xD560; &#xC218; &#xC81C;&#xC548; &#xD55C;&#xB2E4;.

Na + G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC778; K + &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; GDP&#xB294; Galpha&#xC640; Gbeta &#xAC10;&#xB9C8; &#xAC04;&#xC758; &#xBD84;&#xB9AC;&#xB97C; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

G prote&iacute;na-k canales bloqueados (GIRK o Kir3) son activados por la Uni&oacute;n directa de Gbetagamma o de na citos&oacute;lica. Na activaci&oacute;n es r&aacute;pida, independiente de la Gbetagamma y probablemente v&iacute;a directa, de baja afinidad (EC(50), 30-40 mm) de uni&oacute;n de na al canal. Aqu&iacute; demostramos que un aumento en la concentraci&oacute;n intracelular de na, [Na(+)](in), dentro de la gama fisiol&oacute;gica (5-20 mm), activa GIRK dentro de minutos a trav&eacute;s de un mecanismo adicional, lento. Se observa la activaci&oacute;n lenta en mutantes GIRK falta el efecto directo del na (+). Es inhibida por un limpiador de Gbetagamma, por lo tanto es Gbetagamma-dependiente; pero no requiere GTP. Presumimos que na eleva la concentraci&oacute;n celular de Gbetagamma libre mediante la promoci&oacute;n de la disociaci&oacute;n de la heterotrimer Galphabetagamma en Galpha(GDP) libre y Gbetagamma. Mediciones directas de bioqu&iacute;micas demostraron que na (+) provoca una disminuci&oacute;n moderada (aproximadamente 2) en la afinidad de la interacci&oacute;n entre Galpha(GDP) y Gbetagamma. Adem&aacute;s, de acuerdo con las predicciones de nuestro modelo, activaci&oacute;n de na lenta fue realzada por el suave coexpresi&oacute;n de Galpha(i3). Nuestros resultados revelan un mecanismo previamente desconocido de regulaci&oacute;n de las prote&iacute;nas G y demuestran una novela Reglamento Gbetagamma-dependiente de GIRK por na (+). Proponemos que na (+) pueden actuar como un factor regulador, o incluso un segundo mensajero, que regula los efectores v&iacute;a Gbetagamma.

Na + promueve la disociaci&oacute;n entre Galpha GDP y Gbeta gamma, activaci&oacute;n de canales K + prote&iacute;na-bloqueados de G.

G &#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x6D3B; K + &#x901A;&#x9053; &#xFF08;Kir3 &#x6216; GIRK&#xFF09; &#x88AB;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684; Gbetagamma &#x76F4;&#x63A5;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;&#x65E0;&#x5904;&#x4E0D;&#x5728;&#x7684; GIRK1 &#x5728; Gbetagamma &#x7684;&#x7ED3;&#x5408;&#x70B9; (Kir3.1) &#x4E9A;&#x57FA;&#x4E00;&#x76F4;&#x4E0D;&#x660E;&#x786E;&#x56FE;&#x8868;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5728;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684; GIRK2 (Kir3.2) &#x4E9A;&#x57FA;&#x7684; Gbetagamma &#x7ED1;&#x5B9A;&#x6CA1;&#x6709;&#x7814;&#x7A76;&#x8FC7;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x548C;&#x6269;&#x5C55;&#x5728; GIRK1 &#x7684; Gbetagamma &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x5730;&#x56FE;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E24;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF1A; &#x76F4;&#x63A5;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684; Gbetagamma &#x7528;&#x4E8E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; Gbetagamma &#x5230;&#x7247;&#x6BB5; GIRK &#x4E9A;&#x57FA; &#xFF08;&#x4E0B;&#x62C9;&#x5217;&#x8868;&#xFF09; &#x548C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7247;&#x6BB5; Galphai1 &#x4E9A;&#x57FA;&#x4E0E;&#x7ADE;&#x4E89;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E5F;&#x6620;&#x5C04;&#x5728; GIRK2 Gbetagamma &#x7ED3;&#x5408;&#x4F4D;&#x70B9;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E9A;&#x57FA;&#xFF0C;N &#x603B;&#x7AD9;&#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A; Gbetagamma&#x3002;C &#x603B;&#x7AD9;&#xFF0C;&#x5728;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E9A;&#x57FA; Gbetagamma &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4E0D;&#x76F8;&#x540C; &#xFF1B;GIRK1&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; GIRK2 &#x5177;&#x6709;&#x4EE5;&#x524D;&#x65E0;&#x6CD5;&#x8BC6;&#x522B;&#x7684; Gbetagamma &#x4EA4;&#x4E92;&#x6BB5;&#x4E2D;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21; C &#x603B;&#x7AD9;&#x7684;&#x4E00;&#x534A;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E9A;&#x57FA;&#x4E2D;&#x627E;&#x5230;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981; C &#x7EC8;&#x7AEF; Gbetagamma &#x7ED1;&#x5B9A;&#x90E8;&#x5206;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x5927;&#x7EA6;&#x4E4B;&#x95F4;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178; 320 &#x548C; 409 &#xFF08;&#x6309; GIRK1 &#x8BA1;&#x6570;&#xFF09;&#x3002;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684; C &#x7EC8;&#x7AEF; leucines 262 &#x6216; 333 GIRK1&#xFF0C;&#x5728;&#x627F;&#x8BA4;&#x4EE5;&#x524D;&#x4F5C;&#x4E3A; Gbetagamma &#x7684;&#x901A;&#x9053;&#xFF0C;&#x8C03;&#x8282;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x548C;&#x76F8;&#x5E94;&#x7684; leucines 273 &#x548C;&#x5728; GIRK2 344 &#x6025;&#x5267;&#x6539;&#x53D8;&#x5C5E;&#x6027;&#x7684; K + &#x7535;&#x6D41;&#x901A;&#x8FC7; GIRK1/GIRK2 &#x6E20;&#x9053;&#x5728;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x4F46;&#x6CA1;&#x6709;&#x4E0D;&#x663E;&#x8457;&#x5730;&#x964D;&#x4F4E;&#x5230;&#x76F8;&#x5E94;&#x7684;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x901A;&#x9053;&#x95E8;&#x63A7;&#x800C;&#x4E0D; Gbetagamma &#x7ED1;&#x5B9A; Gbetagamma &#x5F15;&#x8D77;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x89C4;&#x7BA1; Gbetagamma &#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;

&#x6620;&#x5C04;&#x4E2D;&#x7684; G &#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x6D3B; K + &#x901A;&#x9053; GIRK1 &#x548C; GIRK2 &#x4E9A;&#x57FA; Gbetagamma &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x3002;

G protein-activated K+ channels (Kir3 or GIRK) are activated by direct binding of Gbetagamma. The binding sites of Gbetagamma in the ubiquitous GIRK1 (Kir3.1) subunit have not been unequivocally charted, and in the neuronal GIRK2 (Kir3.2) subunit the binding of Gbetagamma has not been studied. We verified and extended the map of Gbetagamma-binding sites in GIRK1 by using two approaches: direct binding of Gbetagamma to fragments of GIRK subunits (pull down), and competition of these fragments with the Galphai1 subunit for binding to Gbetagamma. We also mapped the Gbetagamma-binding sites in GIRK2. In both subunits, the N terminus binds Gbetagamma. In the C terminus, the Gbetagamma-binding sites in the two subunits are not identical; GIRK1, but not GIRK2, has a previously unrecognized Gbetagamma-interacting segments in the first half of the C terminus. The main C-terminal Gbetagamma-binding segment found in both subunits is located approximately between amino acids 320 and 409 (by GIRK1 count). Mutation of C-terminal leucines 262 or 333 in GIRK1, recognized previously as crucial for Gbetagamma regulation of the channel, and of the corresponding leucines 273 and 344 in GIRK2 dramatically altered the properties of K+ currents via GIRK1/GIRK2 channels expressed in Xenopus oocytes but did not appreciably reduce the binding of Gbetagamma to the corresponding fusion proteins, indicating that these residues are mainly important for the regulation of Gbetagamma-induced changes in channel gating rather than Gbetagamma binding.

Mapping the Gbetagamma-binding sites in GIRK1 and GIRK2 subunits of the G protein-activated K+ channel.

G prot&eacute;ine K + canaux (Kir3 ou GIRK) sont activ&eacute;s par la liaison directe de Gbetagamma. Les sites de fixation de Gbetagamma dans la GIRK1 omnipr&eacute;sent sous-unit&eacute; (Kir3.1) n&#39;ont pas &eacute;t&eacute; clairement indiqu&eacute; et dans le GIRK2 neuronale sous-unit&eacute; (Kir3.2), la liaison de la Gbetagamma n&#39;a pas &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute;e. Nous avons v&eacute;rifi&eacute; et prolong&eacute; la carte des sites de liaison du Gbetagamma en GIRK1 &agrave; l&#39;aide de deux approches : liaison de Gbetagamma &agrave; des fragments de sous-unit&eacute;s GIRK (menu d&eacute;roulant) et la concurrence de ces fragments &agrave; la sous-unit&eacute; de Galphai1 pour se lier &agrave; Gbetagamma directe. Aussi, nous avons localis&eacute; les sites de liaison Gbetagamma en GIRK2. Dans les deux sous-unit&eacute;s, le terminus de N lie Gbetagamma. Dans la partie C-terminale, les sites de liaison Gbetagamma en deux sous-unit&eacute;s ne sont pas identiques ; GIRK1, mais pas GIRK2, a un pr&eacute;c&eacute;demment non reconnu Gbetagamma-interaction segments dans le premier la moiti&eacute; de la partie C terminale. Le segment principal de la liaison C-terminal Gbetagamma trouv&eacute; dans les deux sous-unit&eacute;s se situe approximativement entre acides amin&eacute;s 320 et 409 (par le comte de GIRK1). Mutation de leucines C-terminal 262 ou 333 en GIRK1, reconnu auparavant comme cruciale pour le r&egrave;glement de la Gbetagamma du canal et des leucines correspondantes 273 et 344 dans GIRK2 consid&eacute;rablement modifi&eacute; les propri&eacute;t&eacute;s de K + courants via les canaux de GIRK1/GIRK2 exprim&eacute;s dans des ovocytes de Xenopus, mais n&#39;a pas sensiblement r&eacute;duit la liaison de la Gbetagamma pour les prot&eacute;ines de fusion correspondant, indiquant que ces r&eacute;sidus sont surtout importantes pour la r&eacute;gulation des changements induits par la Gbetagamma &agrave; canal blocage plut&ocirc;t que de la liaison Gbetagamma.

Cartographie des sites de liaison Gbetagamma en sous-unit&eacute;s GIRK1 et GIRK2 de la G-prot&eacute;ine activ&eacute;e canal K +.

Die Abbildung der Gbetagamma-Bindungsstellen in GIRK1 und GIRK2 Untereinheiten der G-Protein-aktivierten K +-Kanal.

G proteina attivata K + canali (Kir3 o GIRK) sono attivati da binding diretto di Gbetagamma. I siti di legame di Gbetagamma nell&#39;onnipresente GIRK1 subunit&agrave; (Kir3.1) non sono stati inequivocabilmente classifiche e nella GIRK2 neuronale subunit&agrave; (Kir3.2) non &egrave; stata studiata l&#39;associazione del Gbetagamma. Abbiamo verificato ed esteso la mappa dei siti Gbetagamma-associazione GIRK1 utilizzando due approcci: diretto legame di Gbetagamma a frammenti di subunit&agrave; GIRK (pull-down) e la concorrenza di questi frammenti con la subunit&agrave; Galphai1 per l&#39;associazione di Gbetagamma. Abbiamo anche mappato i siti di legame di Gbetagamma in GIRK2. In entrambe le subunit&agrave;, capolinea N lega Gbetagamma. In C terminale, i siti Gbetagamma-associazione di due subunit&agrave; non sono identici; GIRK1, ma non GIRK2, ha un segmenti Gbetagamma-interacting precedentemente non riconosciuto nella prima met&agrave; del C terminale. Il principale segmento C-terminale Gbetagamma-associazione trovato in entrambe le subunit&agrave; si trova approssimativamente fra gli amminoacidi 320 e 409 (dal conte GIRK1). Mutazione di leucines C-terminale 262 o 333 in GIRK1, riconosciuta in precedenza come cruciale per Gbetagamma regolamento del canale e della corrispondente leucines 273 e 344 in GIRK2 drasticamente alterato le propriet&agrave; di K + correnti via GIRK1/GIRK2 canali espressa in Xenopus oocytes ma ha fatto non sensibilmente ridurre il legame di Gbetagamma per le corrispondenti proteine di fusione, indicando che tali residui sono soprattutto importanti per la regolazione del canale gating piuttosto che Gbetagamma associazione alterazioni indotte dalla Gbetagamma.

I siti di legame di Gbetagamma nella subunit&agrave; GIRK1 e GIRK2 del G proteina attivata K + canale di mappatura.

G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316; K + &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB; (Kir3 &#x307E;&#x305F;&#x306F; GIRK) &#x306F;&#x3001;Gbetagamma &#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30BF;&#x30B9;&#x306E; GIRK1 &#x3067; Gbetagamma &#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D; (Kir3.1) &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3063;&#x304D;&#x308A;&#x3068;&#x30C1;&#x30E3;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3057;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E; GIRK2 &#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044; (Kir3.2) &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; Gbetagamma &#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x691C;&#x8A0E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x3001;2 &#x3064;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066; GIRK1 &#x306E; Gbetagamma &#x7D50;&#x5408;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x3092;&#x62E1;&#x5F35;&#xFF1A; &#x76F4;&#x63A5; Gbetagamma &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E; GIRK &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; &#xFF08;&#x30D7;&#x30EB;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#xFF09; &#x306E;&#x65AD;&#x7247;&#x3068;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x65AD;&#x7247;&#x306E; Galphai1 &#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x306E;&#x7AF6;&#x4E89;&#x306B; Gbetagamma &#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x307E;&#x305F; GIRK2 Gbetagamma &#x7D50;&#x5408;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x3002;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x9818;&#x57DF;&#x306F; Gbetagamma &#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;C &#x672B;&#x7AEF;&#x306B; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E; Gbetagamma &#x7D50;&#x5408;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306F;&#x540C;&#x4E00;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;;GIRK1&#x3001;GIRK2 &#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x304C;&#x4EE5;&#x524D;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x3044; Gbetagamma &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x6700;&#x521D;&#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x534A;&#x5206;&#x3002;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x305F;&#x4E3B;&#x306A; C &#x30BF;&#x30FC;&#x30DF;&#x30CA;&#x30EB; Gbetagamma &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8; &#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178; 320 &#x3068; 409 (GIRK1 count) &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9593;&#x7D04;&#x306B;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;C &#x30BF;&#x30FC;&#x30DF;&#x30CA;&#x30EB; &#x30ED;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3; 262 &#x307E;&#x305F;&#x306F; 333 GIRK1 &#x3067;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x4EE5;&#x524D; Gbetagamma &#x898F;&#x5236;&#x306F;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3057;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x304C;&#x5287;&#x7684;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x30ED;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3; 273 &#x3068; GIRK2 &#x3067; 344 &#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x306E; K + &#x96FB;&#x6D41; GIRK1/GIRK2 &#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x304B;&#x306A;&#x308A; Gbetagamma &#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x304C;&#x4E3B;&#x306B;&#x898F;&#x5236; Gbetagamma &#x8A98;&#x8D77;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB; &#x30B2;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; Gbetagamma &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3078;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x6E1B;&#x3089;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;

GIRK1 &#x3068; GIRK2 &#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F; G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316; K + &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E; Gbetagamma &#x7D50;&#x5408;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; K + &#xCC44;&#xB110; (Kir3 &#xB610;&#xB294; GIRK) Gbetagamma&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC720;&#xBE44; &#xCFFC;&#xD130; &#xC2A4; girk1&#xC5D0;&#xC11C; Gbetagamma&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xBA85;&#xBC31; &#xD558; &#xAC8C; &#xCC28;&#xD2B8; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xACBD; GIRK2 (Kir3.1) &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; (Kir3.2) &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; Gbetagamma &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD655;&#xC778; &#xD558; &#xACE0; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; girk1&#xC5D0;&#xC11C; Gbetagamma &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xC9C0;&#xB3C4; &#xD655;&#xC7A5;: &#xC9C1;&#xC811; Gbetagamma&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; GIRK subunits (&#xD480; &#xB2E4;&#xC6B4;), &#xC870;&#xAC01; &#xBC0F; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC870;&#xAC01; Galphai1 &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC640;&#xC758; &#xACBD;&#xC7C1;&#xC744; Gbetagamma&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; Gbetagamma &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; girk2&#xC5D0; &#xB9E4;&#xD551;&#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB450; &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704;&#xC5D0;&#xC11C; N &#xB9D0;&#xB2E8; Gbetagamma&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. C &#xC885;&#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704;&#xC5D0;&#xC11C; Gbetagamma &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB294; &#xB3D9;&#xC77C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. GIRK1, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; GIRK2 &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC778;&#xC2DD;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; Gbetagamma &#xC791;&#xC6A9; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC808;&#xBC18;&#xC744; C &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC758;. &#xB450; subunits&#xC5D0; &#xC8FC;&#xC694; &#xB2E8;&#xC790; Gbetagamma &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8;&#xB294; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;&#xC774; 320 (GIRK1 &#xC218;)&#xC5D0;&#xC11C; 409 &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC57D; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; leucines 262 &#xB610;&#xB294; GIRK1, 333&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; Gbetagamma &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; &#xD574;&#xB2F9; leucines 273 &#xBC0F; girk2&#xC5D0;&#xC11C; 344&#xC758; &#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC18D;&#xC131; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC758; K + GIRK1/GIRK2 &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC804;&#xB958; Xenopus oocytes &#xD45C;&#xD604; &#xB418;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC740; &#xC8FC;&#xB85C; Gbetagamma&#xC744; &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; &#xBCC0;&#xD654; &#xCC44;&#xB110; Gbetagamma &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB300;&#xC2E0; &#xAC8C;&#xC774;&#xD305;&#xC5D0; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xD574;&#xB2F9; &#xD4E8;&#xC804; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Gbetagamma&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xC904;&#xC77C; &#xBD84;&#xBA85; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;.

G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; K + &#xCC44;&#xB110;&#xC758; GIRK1 &#xBC0F; GIRK2 &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704;&#xC5D0;&#xC11C; Gbetagamma &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xB9E4;&#xD551;.

G prote&iacute;na-K + canales activados (Kir3 o GIRK) son activados por la Uni&oacute;n directa de Gbetagamma. Los sitios de uni&oacute;n de Gbetagamma en el GIRK1 ubicuo subunidad (Kir3.1) no han sido inequ&iacute;vocamente planeadas y en el GIRK2 neuronal subunidad (Kir3.2) no se ha estudiado la Uni&oacute;n de Gbetagamma. Hemos verificado y ampliado el mapa de sitios de Uni&oacute;n Gbetagamma en GIRK1 mediante el uso de dos enfoques: Uni&oacute;n directa de Gbetagamma a fragmentos de subunidades GIRK (tire hacia abajo) y la competencia de estos fragmentos con la subunidad Galphai1 Uni&oacute;n Gbetagamma. Tambi&eacute;n asignan los sitios de uni&oacute;n a Gbetagamma en GIRK2. En ambas subunidades, la terminal N une Gbetagamma. En la terminal C, los sitios de Gbetagamma-Uni&oacute;n de las dos subunidades no son id&eacute;nticos; GIRK1, pero no GIRK2, tiene un segmentos previamente desconocida de interacci&oacute;n Gbetagamma en la primera mitad del terminal C. El principal segmento c-terminal Gbetagamma enlace encontrado en ambas subunidades se encuentra aproximadamente entre los amino&aacute;cidos 320 y 409 (por cuenta de GIRK1). Mutaci&oacute;n de leucines C-terminal 262 o 333 en GIRK1, reconocido previamente como crucial para la regulaci&oacute;n de la Gbetagamma del canal y de las correspondientes leucines 273 y 344 en GIRK2 alterado dr&aacute;sticamente las propiedades de K + corrientes GIRK1/GIRK2 v&iacute;a expresa en ovocitos de Xenopus pero no apreciable redujeron la Uni&oacute;n de Gbetagamma a las correspondientes prote&iacute;nas de fusi&oacute;n, indicando que estos residuos son principalmente importantes para la regulaci&oacute;n de los cambios inducidos por Gbetagamma en canal compuerta en lugar de enlace Gbetagamma.

Mapeo de los sitios de uni&oacute;n a Gbetagamma en GIRK1 y GIRK2 de subunidades de la prote&iacute;na activada K + canal de G.

G &#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x6D3B; K(+) &#x901A;&#x9053; &#xFF08;GIRKs &#xFF1B;Kir3) &#x6240;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684; Gbetagamma &#x4E9A;&#x57FA;&#x4ECE; heterotrimeric G &#x86CB;&#x767D;&#x91CA;&#x653E;&#x76F4;&#x63A5;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x673A;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#xFF0C;&#x53EA;&#x6709;&#x767E;&#x65E5;&#x54B3;&#x6BD2;&#x7D20;&#x654F;&#x611F; G &#x86CB;&#x767D;&#x7684; G(i/o) &#x5BB6;&#x5EAD;&#xFF0C;&#x6700;&#x597D;&#x662F; Galpha(i3) &#x548C; Galpha(i2)&#xFF0C;&#x662F;&#x4E3A; GIRK Gbetagamma &#x7684;&#x6350;&#x52A9;&#x8005;&#x3002;&#x4E0D;&#x77E5;&#x9053;&#x8FD9;&#x5177;&#x4F53;&#x5982;&#x4F55;&#x5B9E;&#x73B0;&#x7684;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E0B;&#x62C9;&#x5217;&#x8868;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x786E;&#x8BA4;&#x7ED1;&#x5B9A; GIRK1 N &#x603B;&#x7AD9;&#x7AD9;&#x70B9;&#x548C;&#x786E;&#x5B9A;&#x65B0;&#x578B;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x5728; GIRK2 N &#x603B;&#x7AD9;&#x548C; C &#x603B;&#x7AD9; GIRK1 &#x548C; GIRK2 Galpha(i3-GDP) &#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x975E;&#x53EF;&#x6C34;&#x89E3; GTP &#x6A21;&#x62DF;&#xFF0C;&#x82F7; 5&#39;-3-O-(&#x786B;&#x4EE3;) &#x4E09;&#x78F7;&#x9178;&#xFF0C;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86; 2-4 &#x500D;&#x7684; Galpha(i3) &#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;Galpha(i1-GDP) &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; GIRK1 &#x548C; GIRK2 &#x5927;&#x5927;&#x5F31;&#x4E8E; Galpha(i3-GDP)&#x3002;&#x9010;&#x6B65;&#x524D;&#x4F38;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; m2 &#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x5728;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x5176;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x663E;&#x793A; G(i3) &#x6FC0;&#x6D3B; GIRK G(i1)&#xFF0C;&#x6BD4;&#x4EFB;&#x4F55;&#x65F6;&#x5019;&#x90FD;&#x66F4;&#x9AD8;&#x6548;&#x66F4;&#x5927;&#x548C;&#x66F4;&#x5FEB;&#x5730;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x8BF1;&#x53D1;&#x7535;&#x6D41;&#x6240;&#x793A;&#x3002;&#x6FC0;&#x6D3B; GIRK &#x7EAF;&#x51C0; Gbetagamma &#x79BB;&#x4F53;&#x7684;&#x819C;&#x4FEE;&#x8865;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x4E2D;&#x7684;&#x662F;&#x5F3A;&#x70C8;&#x7684; Galpha(i3) &#x5171;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x589E;&#x5F3A;&#x548C;&#x8F83;&#x5C11;&#x7684; Galpha(i1)&#x3002;GIRK &#x7269;&#x7406;&#x4EA4;&#x4E92; GDP &#x7ED1;&#x5B9A; Galpha &#x4E9A;&#x57FA;&#x6216; Galphabetagamma heterotrimers &#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x53EF;&#x80FD;&#x8981;&#x6C42;&#x4E0D;&#x540C;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x7684; Galphabetagamma &#x951A;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x5F71;&#x54CD;&#x6548;&#x7387;&#x7684; Gbetagamma&#xFF0C;&#x7531; GIRK &#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x53D1;&#x6325;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x786E;&#x5B9A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x3002;

Galphai1 &#x548C; Galphai3 &#x5DEE;&#x5F02;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;&#x5E76;&#x89C4;&#x7BA1;&#xFF0C;G &#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x6D3B; K + &#x901A;&#x9053;&#x3002;

G protein-activated K(+) channels (GIRKs; Kir3) are activated by direct binding of Gbetagamma subunits released from heterotrimeric G proteins. In native tissues, only pertussis toxin-sensitive G proteins of the G(i/o) family, preferably Galpha(i3) and Galpha(i2), are donors of Gbetagamma for GIRK. How this specificity is achieved is not known. Here, using a pull-down method, we confirmed the presence of Galpha(i3-GDP) binding site in the N terminus of GIRK1 and identified novel binding sites in the N terminus of GIRK2 and in the C termini of GIRK1 and GIRK2. The non-hydrolyzable GTP analog, guanosine 5'-3-O-(thio)triphosphate, reduced the binding of Galpha(i3) by a factor of 2-4. Galpha(i1-GDP) bound to GIRK1 and GIRK2 much weaker than Galpha(i3-GDP). Titrated expression of components of signaling pathway in Xenopus oocytes and their activation by m2 muscarinic receptors revealed that G(i3) activates GIRK more efficiently than G(i1), as indicated by larger and faster agonist-evoked currents. Activation of GIRK by purified Gbetagamma in excised membrane patches was strongly augmented by coexpression of Galpha(i3) and less by Galpha(i1). Differences in physical interactions of GIRK with GDP-bound Galpha subunits, or Galphabetagamma heterotrimers, may dictate different extents of Galphabetagamma anchoring, influence the efficiency of GIRK activation by Gbetagamma, and play a role in determining signaling specificity.

Galphai1 and Galphai3 differentially interact with, and regulate, the G protein-activated K+ channel.

G prot&eacute;ine k (+) canaux (GIRKs ; Kir3) sont activ&eacute;s par la liaison directe des sous-unit&eacute;s Gbetagamma lib&eacute;r&eacute; des prot&eacute;ines G h&eacute;t&eacute;rotrim&eacute;riques. Dans les tissus natifs, seules la coqueluche sensibles &agrave; la toxine G prot&eacute;ines de la famille des G(i/o), Galpha(i2) et pr&eacute;f&eacute;rence Galpha(i3) sont des donneurs de Gbetagamma pour GIRK. Comment parvient-on &agrave; cette sp&eacute;cificit&eacute; n&#39;est pas connu. Ici, &agrave; l&#39;aide d&#39;une m&eacute;thode pull-down, a confirm&eacute; la pr&eacute;sence de Galpha(i3-GDP) binding site en N-terminal de GIRK1 et identifi&eacute; des sites de liaison de nouveau &agrave; l&#39;extr&eacute;mit&eacute; N terminale de GIRK2 et dans les terminus de C de GIRK1 et GIRK2. La guanosine non hydrolysable GTP d&#39;analogique, 5&#39; -3 - O-(thio) triphosphate, r&eacute;duit la liaison de Galpha(i3) par un facteur de 2-4. Galpha(I1-GDP) li&eacute; &agrave; GIRK1 et GIRK2 beaucoup plus faible que Galpha(i3-GDP). Expression titr&eacute;e de composants de signalisation de la voie dans des ovocytes de Xenopus et leur activation par les r&eacute;cepteurs muscariniques m2 a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que G(i3) active GIRK plus efficacement que les G(i1), comme indiqu&eacute; par les courants plus grandes et plus rapidement &eacute;voqu&eacute;e par l&#39;agoniste. Activation de GIRK de Gbetagamma purifi&eacute; dans des parcelles de membrane excis&eacute;es a &eacute;t&eacute; fortement augment&eacute;e par la coexpression de Galpha(i3) et moins de Galpha(i1). Diff&eacute;rences dans les interactions physiques GIRK avec Galpha PIB li&eacute; aux sous-unit&eacute;s ou Galphabetagamma heterotrimers, peuvent dicter des degr&eacute;s diff&eacute;rents de Galphabetagamma d&#39;ancrage, influent sur l&#39;efficacit&eacute; de l&#39;activation de Gbetagamma GIRK et jouent un r&ocirc;le dans la d&eacute;termination de sp&eacute;cificit&eacute; de signalisation.

Galphai1 et Galphai3 diff&eacute;rentiellement interagissent avec et d&#39;ajuster, le canal K + activ&eacute; par prot&eacute;ine G.

Galphai1 und Galphai3 differentiell mit interagieren und zu regulieren, das G-Protein-aktivierten K +-Kanal.

Canali K(+) G proteina attivata (GIRKs; Kir3) sono attivati da binding diretto di subunit&agrave; Gbetagamma rilasciato da eterotrimerica G di proteine. Nei tessuti nativi, sola pertosse tossina sensibile G proteine della famiglia G(i/o), preferibilmente Galpha(i3) e Galpha(i2), sono donatori di Gbetagamma per GIRK. Come si ottiene questa specificit&agrave; non &egrave; noto. Qui, utilizzando un metodo pull-down, ha confermato la presenza di Galpha(i3-GDP) binding sito in N terminale di GIRK1 e identificati i siti di legame romanzo in N terminale di GIRK2 e in termini di GIRK1 e GIRK2 C. Il non-hydrolyzable guanosina GTP analogico, 5&#39; -3 - O-(thio) trifosfato, ridotto l&#39;associazione di Galpha(i3) di un fattore di 2-4. Galpha(I1-GDP) associato a GIRK1 e GIRK2 molto pi&ugrave; debole rispetto a Galpha(i3-GDP). Titolato espressione delle componenti del signaling pathway in ovociti di Xenopus e loro attivazione di recettori muscarinici m2 ha rivelato che G(i3) attiva GIRK in modo pi&ugrave; efficiente rispetto a G(i1), come indicato dalle correnti pi&ugrave; grande e pi&ugrave; veloce evocato da agonista. Attivazione di GIRK di Gbetagamma purificato in patch di membrana escisse era fortemente aumentata di coexpression di Galpha(i3) e meno di Galpha(i1). Le differenze di interazioni fisiche di GIRK con subunit&agrave; Galpha PIL associati, o Galphabetagamma heterotrimers, possono dettare diverse estensioni di Galphabetagamma l&#39;ancoraggio, influenza l&#39;efficienza di attivazione GIRK da Gbetagamma e gioca un ruolo nel determinare la specificit&agrave; di segnalazione.

Galphai1 Galphai3 differenzialmente interagire con e regolamentare, il proteina attivata K + canale di G.

G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x65BC;&#x3044;&#x3066;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB; (GIRKs;Kir3) &#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53; G &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x304B;&#x3089;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9; Gbetagamma &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x767E;&#x65E5;&#x54B3;&#x6BD2;&#x7D20;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x306A; G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E; G(i/o) &#x5BB6;&#x65CF;&#x3001;&#x597D;&#x307E;&#x3057;&#x304F;&#x306F; Galpha(i3)&#x3001;Galpha(i2)&#x3001;Gbetagamma GIRK &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x306E;&#x5B9F;&#x73FE;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30EB;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3; &#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; GIRK1 &#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x306B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x65B0;&#x898F;&#x7D50;&#x5408;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; GIRK2 &#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x3068; C &#x30C6;&#x30EB;&#x30DF;&#x30CB; GIRK1 &#x3068; GIRK2 &#x306E;&#x8B58;&#x5225; Galpha(i3-GDP) &#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x975E;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x6027; GTP &#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0;&#x3001;&#x30B0;&#x30A2;&#x30CE;&#x30B7;&#x30F3; 5&#39;-3 - O-(&#x30C1;&#x30AA;) &#x4E09;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x3001;&#x524A;&#x6E1B; 2 4 &#x306E;&#x4FC2;&#x6570;&#x306B;&#x3088;&#x308B; Galpha(i3) &#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3002;Galpha(i1-GDP) GIRK1 GIRK2 Galpha(i3-GDP) &#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x306F;&#x308B;&#x304B;&#x306B;&#x5F31;&#x3044;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3002;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308B; m2 &#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x6EF4;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5F0F; G(i3) GIRK &#x3042;&#x308B; G(i1) &#x3088;&#x308A;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x3088;&#x308A;&#x5927;&#x304D;&#x304F;&#x3088;&#x308A;&#x901F;&#x304F;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x8A98;&#x767A;&#x96FB;&#x6D41;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6458;&#x51FA;&#x819C;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x3067;&#x6D44;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F; Gbetagamma &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; GIRK &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x5F37;&#x304F; Galpha(i3) &#x306E;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x62E1;&#x5F35;&#x73FE;&#x5B9F;&#x611F;&#x3088;&#x308A;&#x5C11;&#x306A;&#x3044; Galpha(i1) &#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;GDP &#x7D50;&#x5408; Galpha &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x307E;&#x305F;&#x306F; Galphabetagamma heterotrimers &#x3068; GIRK &#x306E;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x306E; Galphabetagamma &#x30A2;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30A8;&#x30AF;&#x30B9;&#x30C6;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x308B; Gbetagamma&#x3001;GIRK &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x52B9;&#x7387;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x3079;&#x304D;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

Galphai1 &#x3068; Galphai3 &#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x3068;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3057;&#x3001;G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316; K + &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; K(+) &#xCC44;&#xB110; (GIRKs; Kir3) heterotrimeric G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD9C;&#xC2DC; &#xB41C; Gbetagamma subunits&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xBCF8; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0; &#xAC00;&#xAE09;&#xC801; &#xC774;&#xBA74; Galpha(i3) &#xBC0F; Galpha(i2), G(i/o) &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xC720;&#xC77C;&#xD55C; &#xBC31; &#xC77C; &#xD574; &#xB3C5; &#xC18C;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; GIRK&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; Gbetagamma&#xC758; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790;&#xB294;. &#xC774; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC740; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xD480; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC; Galpha(i3-GDP) girk1&#xC758; N &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; girk2&#xC758; N &#xB9D0;&#xB2E8; &#xBC0F; GIRK1 &#xBC0F; girk2&#xC758; C &#xD14C;&#xB974;&#xBBF8;&#xB2C8; &#xC18C;&#xC124; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. Hydrolyzable &#xBE44; GTP &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8;, guanosine 5&#39;-3-O-(thio) &#xC0BC;&#xC778;&#xC0B0;, &#xAC10;&#xC18C; 2 ~ 4 &#xBC30; galpha(i3)&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;. Galpha(i1-gdp)&#xB294; girk1&#xACFC; GIRK2 Galpha(i3-GDP) &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6E8;&#xC52C; &#xC57D;&#xD55C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Titrated &#xC2DD; m2 muscarinic &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Xenopus oocytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xD1B5;&#xB85C; &#xC815;&#xD488; &#xC778;&#xC99D; &#xC2DC;&#xADF8;&#xB110;&#xB9C1;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB294; G(i3) &#xD65C;&#xC131;&#xD654; GIRK G(i1), &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD06C;&#xACE0; &#xBE60;&#xB978; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xAC16;&#xB294; &#xC804;&#xB958;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xB300;&#xB85C; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. GIRK &#xC0AD;&#xC81C; &#xB9C9; &#xD328;&#xCE58; &#xC21C;&#xD654; Gbetagamma &#xC5EC;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB294; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; galpha(i3)&#xC758; coexpression&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC99D;&#xAC15; &#xBC0F; galpha(i1)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB354; &#xC801;&#xC740;. GDP &#xBC14;&#xC778;&#xB529; Galpha &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;, &#xB610;&#xB294; Galphabetagamma heterotrimers GIRK&#xC758; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xCC28;&#xC774; Galphabetagamma &#xC815;&#xBC15;&#xC758; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xBC94;&#xC704; Gbetagamma, &#xC5EC; GIRK &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC131;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE60; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xD638; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xACB0;&#xC815;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xACB0;&#xC815;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Galphai1 &#xBC0F; Galphai3 &#xCC28;&#xB3D9; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBC0F; &#xC870;&#xC808;, G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; K + &#xCC44;&#xB110;.

G prote&iacute;na activada k canales (GIRKs; Kir3) son activados por la Uni&oacute;n directa de Gbetagamma subunidades de prote&iacute;nas heterotrim&eacute;ricas G. En tejidos nativos, s&oacute;lo tos ferina sensible a la toxina G las prote&iacute;nas de la familia G(i/o), preferiblemente Galpha(i3) y Galpha(i2), es donantes de Gbetagamma para GIRK. No se sabe c&oacute;mo se consigue esta especificidad. Aqu&iacute;, usando un m&eacute;todo de pull-down, confirmamos la presencia de Galpha(i3-GDP), sitio en el extremo N terminal de GIRK1 de enlace e identificado sitios de uni&oacute;n de novela en el extremo N terminal de GIRK2 y en los t&eacute;rminos de la C de GIRK1 y GIRK2. El no hidrolizables guanosina anal&oacute;gico, GTP 5&#39; -3 - O-(metiltio) trifosfato, reduce la Uni&oacute;n de Galpha(i3) por un factor de 2-4. Galpha(I1-GDP) obligado a GIRK1 y GIRK2 mucho m&aacute;s d&eacute;bil que Galpha(i3-GDP). Expresi&oacute;n valorada de componentes de se&ntilde;alizaci&oacute;n v&iacute;a en ovocitos de Xenopus y su activaci&oacute;n por los receptores muscar&iacute;nicos m2 revel&oacute; que G(i3) activa GIRK m&aacute;s eficientemente que G(i1), como se indica por las corrientes m&aacute;s grandes y m&aacute;s r&aacute;pido agonista-evocado. Activaci&oacute;n de GIRK por Gbetagamma purificada en los parches de membrana suprimido fue fuertemente aumentada por la coexpresi&oacute;n de Galpha(i3) y menos por Galpha(i1). Las diferencias en las interacciones f&iacute;sicas de GIRK con subunidades de PIB-limite Galpha, o Galphabetagamma heterotrimers, pueden dictar diferentes grados de Galphabetagamma anclaje, influyen en la eficacia de la activaci&oacute;n GIRK Gbetagamma y desempe&ntilde;ar un papel en la determinaci&oacute;n de la especificidad de se&ntilde;alizaci&oacute;n.

Galphai1 Galphai3 diferencialmente interaccionan y regular, el prote&iacute;na activada K + canal de G.

&#x5FC3;&#x810F;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143; G &#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x6D3B; K + &#x901A;&#x9053; (GIRK &#xFF1B;Kir3&#xFF09; &#x6253;&#x5F00;&#x540E;&#x7684; Gbetagamma &#x4E9A;&#x57FA;&#xFF0C;&#x4ECE; Gi/o &#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x7684;&#x91CA;&#x653E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;GIRKs &#x8FD8;&#x62E5;&#x6709;&#x57FA;&#x5E95;&#x6D3B;&#x52A8;&#x5728;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x4F11;&#x606F;&#x6F5C;&#x529B;&#x4F5C;&#x51FA;&#x8D21;&#x732E;&#x3002;&#x5B83;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x514D;&#x8D39;&#x7684; Gbetagamma&#xFF0C;&#x4F46; Gbetagamma &#x72EC;&#x7ACB;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x4E5F;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x8BBE;&#x60F3;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684;&#x57FA;&#x5E95; GIRK &#x6D3B;&#x52A8; Gbetagamma &#x4F9D;&#x8D56; (A(GIRK,basal)) &#x5B9A;&#x91CF;&#xFF0C;&#x7531;&#x9010;&#x6B65;&#x524D;&#x4F38;&#x7684; Gbetagamma &#x62FE;&#x8352;&#x8005;&#xFF0C;&#x5728;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE; GIRK1/2 &#x901A;&#x9053;&#x548C; m2 &#x6BD2;&#x8548;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684; Gbetagamma &#x6E05;&#x9053;&#x592B;&#xFF0C;myristoylated C &#x603B;&#x7AD9;&#x7684; beta-adrenergic &#x6FC0;&#x9176; (m cbetaARK)&#xFF0C;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86; 70-80%&#x7684; A(GIRK,basal) &#x548C;&#x6D88;&#x9664;&#x4E59;&#x9170;&#x80C6;&#x78B1;&#x8BF1;&#x53D1;&#x7535;&#x6D41; &#xFF08;I(ACh))&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;m cbetaARK &#x76F4;&#x63A5;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; GIRK&#xFF0C;&#x5E76;&#x53D1;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x6570;&#x636E;&#x89E3;&#x91CA;&#x3002;&#x5176;&#x4E2D; Gbetagamma &#x7684;&#x65B0;&#x5EFA;&#x51E0;&#x4E2A;&#x62FE;&#x8352;&#x8005;&#xFF0C;&#x6DFB;&#x52A0;&#x7684; myristoylation &#x4FE1;&#x53F7; (m phosducin) &#x4E0E; phosducin &#x662F;&#x5728;&#x51CF;&#x5C11; GIRK &#x7535;&#x6D41;&#x6548;&#x7387;&#x6700;&#x9AD8;&#x3002;m phosducin &#x8FC1;&#x5F80;&#x819C;&#x5206;&#x6570;&#x548C;&#x672A;&#x7ED1;&#x5B9A; GIRK&#x3002;&#x9010;&#x6B65;&#x524D;&#x4F38;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; m phosducin A(GIRK,basal) &#x51CF;&#x5C11;&#x5F15;&#x8D77;&#x7684;&#x8FBE; 90%&#x3002;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F; GIRK &#x966A;&#x540C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#xFF0C;&#x652F;&#x6301;&#x5B58;&#x5728; GIRK &#x9884;&#x5236;&#x914D;&#x5408; G &#x86CB;&#x767D;&#x4E9A;&#x57FA;&#x7684; Gbetagamma &#x548C; Galpha &#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x63D0;&#x9AD8;&#x3002;Gbetagamma &#x8868;&#x8FBE;&#x589E;&#x52A0;&#x53CA;&#x672C;&#x6784;&#x4E0E; GIRK &#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x5728; GIRK &#x9AD8;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#x8FC7;&#x9AD8; A(GIRK,basal) &#x7684;&#x4F9D;&#x636E;&#x3002;&#x53EA;&#x6709; 10-15%&#x7684; A(GIRK,basal) m phosducin &#x548C; cbetaARK &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x540E;&#x4ECD;&#x7136;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; Ibasal &#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E3B;&#x8981;&#x90E8;&#x5206;&#x662F;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E; Gbetagamma &#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x5404;&#x7EA7;&#x7684;&#x6E20;&#x9053;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x53EA;&#x6709;&#x4E00;&#x5C0F;&#x90E8;&#x5206; &#xFF08;&lt; 10%&#xFF09; &#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684; Gbetagamma&#x3002;

Gbetagamma &#x4F9D;&#x8D56;&#x548C;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684; Gbetagamma G &#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x6D3B; K + &#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x57FA;&#x5E95;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;

Cardiac and neuronal G protein-activated K+ channels (GIRK; Kir3) open following the binding of Gbetagamma subunits, released from Gi/o proteins activated by neurotransmitters. GIRKs also possess basal activity contributing to the resting potential in neurons. It appears to depend largely on free Gbetagamma, but a Gbetagamma-independent component has also been envisaged. We investigated Gbetagamma dependence of the basal GIRK activity (A(GIRK,basal)) quantitatively, by titrated expression of Gbetagamma scavengers, in Xenopus oocytes expressing GIRK1/2 channels and muscarinic m2 receptors. The widely used Gbetagamma scavenger, myristoylated C terminus of beta-adrenergic kinase (m-cbetaARK), reduced A(GIRK,basal) by 70-80% and eliminated the acetylcholine-evoked current (I(ACh)). However, we found that m-cbetaARK directly binds to GIRK, complicating the interpretation of physiological data. Among several newly constructed Gbetagamma scavengers, phosducin with an added myristoylation signal (m-phosducin) was most efficient in reducing GIRK currents. m-phosducin relocated to the membrane fraction and did not bind GIRK. Titrated expression of m-phosducin caused a reduction of A(GIRK,basal) by up to 90%. Expression of GIRK was accompanied by an increase in the level of Gbetagamma and Galpha in the plasma membrane, supporting the existence of preformed complexes of GIRK with G protein subunits. Increased expression of Gbetagamma and its constitutive association with GIRK may underlie the excessively high A(GIRK,basal) observed at high expression levels of GIRK. Only 10-15% of A(GIRK,basal) persisted upon expression of both m-phosducin and cbetaARK. These results demonstrate that a major part of Ibasal is Gbetagamma-dependent at all levels of channel expression, and only a small fraction (<10%) may be Gbetagamma-independent.

Gbetagamma-dependent and Gbetagamma-independent basal activity of G protein-activated K+ channels.

Cardiaques et neurones G prot&eacute;ine activ&eacute;e canaux K + (GIRK ; Kir3) ouvert suite &agrave; la liaison des sous-unit&eacute;s Gbetagamma, lib&eacute;r&eacute; de prot&eacute;ines Gi/o activ&eacute;s par des neurotransmetteurs. GIRKs poss&egrave;dent aussi une activit&eacute; basale contribuant au potentiel de repos dans les neurones. Il semble d&eacute;pendre en grande partie libre Gbetagamma, mais une composante ind&eacute;pendante de la Gbetagamma a &eacute;galement &eacute;t&eacute; envisag&eacute;e. Nous avons &eacute;tudi&eacute; la d&eacute;pendance de l&#39;activit&eacute; basale de GIRK Gbetagamma (A(GIRK,basal)) quantitativement, par expression titr&eacute;e des charognards de Gbetagamma, dans des ovocytes de Xenopus exprimant GIRK1/2 canaux et r&eacute;cepteurs muscariniques m2. Le pi&eacute;geur de Gbetagamma largement utilis&eacute;, terminus de myristoylated C de kinase b&ecirc;ta-adr&eacute;nergique (m-cbetaARK), A(GIRK,basal) a r&eacute;duit de 70 &agrave; 80 % et &eacute;limin&eacute; le courant induite par l&#39;ac&eacute;tylcholine (I(ACh)). Cependant, nous avons constat&eacute; que m-cbetaARK lie directement &agrave; GIRK, ce qui complique l&#39;interpr&eacute;tation des donn&eacute;es physiologiques. Parmi plusieurs charognards nouvellement construits de Gbetagamma, phosducin avec un signal suppl&eacute;mentaire myristoylation (m-phosducin) a &eacute;t&eacute; plus efficace dans la r&eacute;duction des courants GIRK. m-phosducin d&eacute;m&eacute;nag&eacute; &agrave; la fraction de membrane et ne lie pas GIRK. Expression titr&eacute;e de m-phosducin a entra&icirc;n&eacute; une r&eacute;duction de A(GIRK,basal) jusqu&#39;&agrave; 90 %. Expression de GIRK &eacute;tait accompagn&eacute;e d&#39;une augmentation du niveau de Gbetagamma et Galpha dans la membrane plasmique, soutenant l&#39;existence de complexes pr&eacute;form&eacute;s de GIRK aux sous-unit&eacute;s de prot&eacute;ine G. Une expression accrue de Gbetagamma et de son lien constitutif avec GIRK pourraient expliquer la A(GIRK,basal) excessivement &eacute;lev&eacute;s observ&eacute;s au niveau de la forte expression de GIRK. Seulement 10 &agrave; 15 % des A(GIRK,basal) ont persist&eacute; une expression de m-phosducin et cbetaARK. Ces r&eacute;sultats d&eacute;montrent qu&#39;une grande partie du Ibasal est Gbetagamma-d&eacute;pendante &agrave; tous les niveaux d&#39;expression des canaux et seule une petite fraction (&lt; 10 %) peut &ecirc;tre ind&eacute;pendant de la Gbetagamma.

Gbetagamma-d&eacute;pendants et ind&eacute;pendants de Gbetagamma activit&eacute; basale de G-prot&eacute;ine activ&eacute;e canaux K +.

Gbetagamma-abh&#xE4;ngigen und unabh&#xE4;ngigen Gbetagamma-basale Aktivit&#xE4;t von G-Protein-aktivierten K +-Kan&#xE4;le.

Cardiaci e neuronali G proteina attivata K + canali (GIRK; Apri Kir3) seguendo l&#39;associazione della subunit&agrave; Gbetagamma, pubblicato da proteine Gi/o attivate da neurotrasmettitori. GIRKs possiedono anche attivit&agrave; basale che contribuiscono al potenziale di riposo in neuroni. Sembra che dipendono in gran parte Gbetagamma libero, ma inoltre &egrave; stata prevista una componente indipendente Gbetagamma. Abbiamo studiato Gbetagamma dipendenza dell&#39;attivit&agrave; basale GIRK (A(GIRK,basal)) quantitativamente, dall&#39;espressione titolata di Gbetagamma spazzini, in Xenopus oocytes esprimendo GIRK1/2 canali e i recettori muscarinici m2. Ampiamente usato Gbetagamma Scavanger, myristoylated C capolinea della chinasi beta-adrenergici (m-cbetaARK), ridotta A(GIRK,basal) del 70-80% ed eliminato l&#39;attuale evocato acetilcolina (I(ACh)). Tuttavia, abbiamo trovato che m-cbetaARK si lega direttamente al GIRK, complicando l&#39;interpretazione dei dati fisiologici. Tra diversi appena costruite Gbetagamma spazzini, era pi&ugrave; efficace nel ridurre le correnti GIRK phosducin con un segnale myristoylation aggiunto (m-phosducin). m-phosducin si trasfer&igrave; alla frazione di membrana e non ha fatto associare GIRK. Espressioni titolata di m-phosducin ha causato una riduzione di A(GIRK,basal) fino al 90%. Espressione di GIRK era accompagnato da un aumento del livello di Gbetagamma e Galpha nella membrana del plasma, sostenendo l&#39;esistenza di complessi preformati di GIRK con subunit&agrave; della proteina G. Aumentata espressione di Gbetagamma e la sua associazione costitutiva con GIRK pu&ograve; essere alla base del A(GIRK,basal) eccessivamente elevato osservato a livelli di alta espressione di GIRK. Solo 10-15% di A(GIRK,basal) persistenti su espressione di m-phosducin e di cbetaARK. Questi risultati dimostrano che la maggior parte del Ibasal &egrave; Gbetagamma-dipendente a tutti i livelli di espressione di canale e solo una piccola frazione (&lt; 10%) pu&ograve; essere indipendente dalla Gbetagamma.

Gbetagamma-dipendenti e indipendenti dal Gbetagamma attivit&agrave; basale della proteina attivata K + canali di G.

&#x5FC3;&#x81D3;&#x3068;&#x795E;&#x7D4C; G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316; K + &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB; (GIRK;&#x6B21;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316; Gi/o &#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x304B;&#x3089;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E; Gbetagamma &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x7D50;&#x5408; Kir3&#xFF09; &#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x3002;GIRKs &#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x9759;&#x6B62;&#x96FB;&#x4F4D;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x57FA;&#x5E95;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x6709;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x4E3B;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x7121;&#x6599; Gbetagamma &#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x304C; Gbetagamma &#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3082;&#x60F3;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x57FA;&#x5E95;&#x306E; GIRK &#x6D3B;&#x52D5;&#x306E; Gbetagamma &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F; &#xFF08;A(GIRK,basal)) GIRK1/2 &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3001;&#x30E0;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3; m2 &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306E; Gbetagamma &#x306E;&#x30B9;&#x30AB;&#x30D9;&#x30F3; &#x30B8;&#x30E3;&#x30FC;&#x306E;&#x6EF4;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8868;&#x73FE;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x306B;&#x3002;&#x5E83;&#x304F;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; Gbetagamma &#x306E;&#x30B9;&#x30AB;&#x30D9;&#x30F3; &#x30B8;&#x30E3;&#x30FC;&#x3001;&#x69CB;&#x9020; C &#x672B;&#x7AEF; &beta;-&#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3; &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#xFF08;m-cbetaARK) &#x306E; A(GIRK,basal) 70-80 &#xFF05; &#x524A;&#x6E1B;&#x3057;&#x3001;&#x6392;&#x9664;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x8A98;&#x767A;&#x96FB;&#x6D41; (I(ACh))&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x305D;&#x306E; m cbetaARK &#x306F;&#x76F4;&#x63A5; GIRK &#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x89E3;&#x91C8;&#x3092;&#x8907;&#x96D1;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9593;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x304F;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E; Gbetagamma &#x30B9;&#x30AB;&#x30D9;&#x30F3; &#x30B8;&#x30E3;&#x30FC;&#x3001;phosducin&#x3001;&#x8FFD;&#x52A0;&#x30DF;&#x30EA;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A4;&#x30EB;&#x5316;&#x4FE1;&#x53F7; &#xFF08;m-phosducin&#xFF09; &#x3067; GIRK &#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x6E1B;&#x3089;&#x3059;&#x306B;&#x6700;&#x3082;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;m phosducin &#x306F;&#x819C;&#x753B;&#x5206;&#x306B;&#x79FB;&#x8EE2;&#x3057;&#x3001;GIRK &#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6EF4;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5F0F; m phosducin &#x306E; A(GIRK,basal) &#x306E;&#x4F4E;&#x6E1B; 90% &#x307E;&#x3067;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5F0F; GIRK &#x306E; G &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; GIRK &#x306E;&#x524D;&#x3082;&#x3063;&#x3066;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x932F;&#x4F53;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x88CF;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; Gbetagamma &#x3068; Galpha &#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306B;&#x4F34;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;Gbetagamma &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x5897;&#x52A0;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x69CB;&#x6210;&#x5F0F;&#x5354;&#x4F1A; GIRK &#x3068; GIRK &#x306E;&#x9AD8;&#x767A;&#x73FE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x89B3;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x904E;&#x5EA6;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044; A(GIRK,basal) &#x304C;&#x6839;&#x5E95;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x552F;&#x4E00;&#x306E; 10-15 %a(girk,basal) &#x306E; m-phosducin &#x3068; cbetaARK &#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x5F0F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x6C38;&#x7D9A;&#x5316;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x304B;&#x3089; Ibasal &#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x90E8;&#x5206;&#x304C; Gbetagamma &#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x3068;&#x3054;&#x304F;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059; (&lt; 10%) Gbetagamma &#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316; K + &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E; Gbetagamma &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x3068; Gbetagamma &#x72EC;&#x7ACB;&#x306E;&#x57FA;&#x5E95;&#x6D3B;&#x52D5;

&#xC2EC;&#xC7A5; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xACBD; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; K + &#xCC44;&#xB110; (GIRK; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xAE30;/o &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD9C;&#xC2DC; &#xB41C; Gbetagamma subunits&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xB2E4;&#xC74C; Kir3) &#xC624;&#xD508;. Girks&#xC5D0;&#xB294; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xD734;&#xC2DD; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xC800; &#xD65C;&#xB3D9;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xC788;&#xC5B4;&#xC694;. &#xBB34;&#xB8CC; Gbetagamma&#xC5D0; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC758;&#xC874; &#xD558; &#xCC98;&#xB7FC; &#xBCF4;&#xC774;&#xC9C0;&#xB9CC; Gbetagamma &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xB610;&#xD55C; envisaged &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; Gbetagamma &#xC758;&#xC874;&#xB3C4; &#xAE30;&#xC800; GIRK &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC870;&#xC0AC; (A(GIRK,basal)) GIRK1/2 &#xCC44;&#xB110; &#xBC0F; muscarinic m2 &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; Xenopus oocytes&#xC5D0;&#xC11C; Gbetagamma &#xCCAD;&#xC18C;&#xBD80;&#xC758; titrated &#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC591;&#xC801;. &#xB110;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; Gbetagamma &#xD3D0;&#xD488;, beta-adrenergic &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; (m cbetaARK)&#xC758; myristoylated C &#xC885;&#xC810; A(GIRK,basal) 70-80% &#xAC10;&#xC18C; &#xD558; &#xACE0; &#xC544; &#xC138; &#xD2F8; &#xCF5C;&#xB9B0;&#xC744; &#xBD88;&#xB7EC; &#xC77C;&#xC73C;&#xCF30;&#xB2E4; &#xC804;&#xB958; (I(ACh)) &#xD0C8;&#xB77D;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBC1C;&#xACAC; &#xADF8; m cbetaARK &#xC9C1;&#xC811; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; GIRK, &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC758; &#xD574;&#xC11D;. &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC0C8;&#xB85C; &#xC0DD;&#xC131;&#xB41C; &#xB41C; Gbetagamma &#xCCAD;&#xC18C;&#xBD80;, &#xCD94;&#xAC00; &#xB41C; myristoylation &#xC2E0;&#xD638; (m phosducin)&#xC640; phosducin&#xB294; GIRK &#xC804;&#xB958; &#xAC10;&#xC18C;&#xC5D0; &#xAC00;&#xC7A5; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801; &#xC774;&#xC5C8;&#xB2E4;. m phosducin &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xBD84;&#xC218;&#xC5D0; &#xC774;&#xC804; &#xD558; &#xACE0; GIRK &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. M phosducin titrated &#xD45C;&#xD604;&#xC758; &#xCD5C;&#xB300; 90 %a(girk,basal) &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. GIRK &#xC2DD; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC640; GIRK&#xC758; &#xBBF8;&#xB9AC; &#xD615;&#xC131;&#xD55C; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xC9C0;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xC6D0;&#xD615;&#xC9C8; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; Gbetagamma &#xBC0F; Galpha&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xC758;&#xD574; &#xB3D9;&#xD589; &#xD588;&#xB2E4;. Gbetagamma&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; &#xC81C;&#xC815; &#xC5F0;&#xAD00; GIRK GIRK&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC2DD; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xD558;&#xB294; &#xC9C0;&#xB098;&#xCE58;&#xAC8C; &#xB192;&#xC740; A(GIRK,basal) &#xAE30;&#xCD08; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. A(girk,basal)&#xC758; 10-15%&#xB9CC; m-phosducin &#xBC0F; Cbetaark&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC720;&#xC9C0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; Ibasal&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xBD80;&#xB294; Gbetagamma &#xC885;&#xC18D;&#xC801; &#xCC44;&#xB110; &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; &#xC720;&#xC77C;&#xD55C; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC218;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC785;&#xC99D; (&lt; 10%) Gbetagamma-&#xB3C5;&#xB9BD; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; K + &#xCC44;&#xB110;&#xC758; Gbetagamma &#xC885;&#xC18D; &#xBC0F; Gbetagamma &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xAE30;&#xC800; &#xD65C;&#xB3D9;.

Neuronales y cardiacos G prote&iacute;na-K + canales activados (GIRK; Kir3) abierto tras la Uni&oacute;n de subunidades Gbetagamma, liberado de las prote&iacute;nas Gi/o activadas por neurotransmisores. GIRKs tambi&eacute;n poseen actividad basal que contribuyen al potencial de reposo en las neuronas. Parece que dependen en gran medida de Gbetagamma libre, pero tambi&eacute;n se ha previsto un componente independiente de la Gbetagamma. Investigamos Gbetagamma dependencia de la actividad basal del GIRK (A(GIRK,basal)) cuantitativamente, por expresi&oacute;n valorada de Gbetagamma carro&ntilde;eros, en ovocitos de Xenopus expresando GIRK1/2 canales y receptores muscar&iacute;nicos m2. El tesoro de Gbetagamma ampliamente utilizado, myristoylated C terminal del beta-adren&eacute;rgico quinasa (m-cbetaARK), reducido A(GIRK,basal) un 70-80% y elimin&oacute; la corriente acetilcolina-evocado (I(ACh)). Sin embargo, encontramos que m-cbetaARK se une directamente a GIRK, que complica la interpretaci&oacute;n de datos fisiol&oacute;gicos. Entre varios reci&eacute;n construidas Gbetagamma carro&ntilde;eros, phosducin con una se&ntilde;al de mayor myristoylation (m-phosducin) fue m&aacute;s eficaz en la reducci&oacute;n de las corrientes GIRK. m-phosducin se traslad&oacute; a la fracci&oacute;n de membrana y no at&oacute; GIRK. Expresi&oacute;n valorada de m-phosducin ha provocado una reducci&oacute;n de A(GIRK,basal) hasta un 90%. Expresi&oacute;n de GIRK fue acompa&ntilde;ado por un aumento en el nivel de Gbetagamma y Galpha en la membrana plasm&aacute;tica, apoyando la existencia de complejos preformadas de GIRK con subunidades de la prote&iacute;na G. Aumento de la expresi&oacute;n de Gbetagamma y su asociaci&oacute;n constitutiva con GIRK pueden ser la base de la A(GIRK,basal) excesivamente alto observado en los niveles de alta expresi&oacute;n de GIRK. S&oacute;lo 10-15% de A(GIRK,basal) persistieron en expresi&oacute;n de m-phosducin y cbetaARK. Estos resultados demuestran que una gran parte de Ibasal es Gbetagamma-dependiente en todos los niveles de expresi&oacute;n de la canal y s&oacute;lo una peque&ntilde;a fracci&oacute;n (&lt; 10%) puede ser independiente de la Gbetagamma.

Gbetagamma-dependientes e independientes del Gbetagamma actividad basal de canales K + activada por la prote&iacute;na G.

G &#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x6D3B; K(+)(GIRK) &#x901A;&#x9053;&#x88AB;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x8BB8;&#x591A;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E8E; Gi/o &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7; G &#x86CB;&#x767D;&#x4E0E; Gbetagamma &#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;GIRK &#x6E20;&#x9053;&#x79EF;&#x6781;&#x53D7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185; Na(+) &#x901A;&#x8FC7;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x4E92;&#x52A8; &#xFF08;&#x5FEB;&#x901F;&#x901A;&#x9053;&#xFF09; &#x548C; GGbetagamma &#x4F9D;&#x8D56;&#x673A;&#x5236; &#xFF08;&#x6162;&#x901A;&#x9053;&#xFF09;&#x3002;&#x7F13;&#x6162;&#x7684;&#x8C03;&#x5236;&#x62DF;&#x4ECE; Na (+) &#x6700;&#x8FD1;&#x63CF;&#x8FF0;&#x73B0;&#x8C61;&#x51FA;&#x73B0;-&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684; GalphaGDP &#x548C; Gbetagamma G &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E9A;&#x57FA;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x4EB2;&#x548C;&#x6027;&#x7684;&#x51CF;&#x5C11;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x79CD;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x9AD8;&#x67B6;&#x7684; Na(+) &#x589E;&#x5F3A;&#x57FA;&#x5E95;&#x79BB;&#x89E3;&#x7684; G &#x86CB;&#x767D; heterotrimers&#xFF0C;&#x63D0;&#x5347;&#x514D;&#x8D39;&#x624B;&#x673A; Gbetagamma &#x548C;&#x6FC0;&#x6D3B; GIRK&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5C1A;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x662F;&#x5426;&#x8FD9;&#x4E00;&#x5047;&#x8BBE;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x89E3;&#x91CA;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x89C4;&#x4F8B;&#x7684;&#x5B9A;&#x91CF;&#x548C;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x65B9;&#x9762;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x53D1;&#x5C55;&#x7F13;&#x6162;&#xFF0C;&#x5B9A;&#x91CF;&#x6A21;&#x578B;&#x7684; Na (+)-GIRK &#x7684;&#x4F9D;&#x8D56;&#xFF0C;G &#x86CB;&#x767D;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x6D3B;&#x5316;&#x3002;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684; GIRK1F137S &#x7684;&#x6E20;&#x9053;&#xFF0C;&#x6CA1;&#x6709;&#x4E0E; Na(+) &#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;&#x662F;&#x8861;&#x91CF;&#x79BB;&#x7684;&#x819C;&#x4FEE;&#x8865;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x7528;&#x4F5C;&#x514D;&#x8D39; GGbetagamma &#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6307;&#x6807;&#x3002;&#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x6027;&#x53D8;&#x5316;&#x7528;&#x6765;&#x8BA1;&#x7B97; Na (+)-&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x53D8;&#x5316;&#x4E2D;&#x7684; G &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E9A;&#x57FA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x4EB2;&#x548C;&#x3002;&#x6839;&#x636E;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x521D;&#x59CB;&#x6761;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x6A21;&#x578B;&#x9884;&#x6D4B;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684; GalphaGDP &#x548C; GGbetagamma &#xFF08;&#x7EA6;&#x5728;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x7684;&#x53CC;&#x91CD;) &#x4EB2;&#x548C;&#x7684;&#x8DCC;&#x5E45;&#x4E3A;&#x76F8;&#x5BF9;&#x8F83;&#x5C0F;&#x5360;&#x7684;&#x53CC;&#x91CD;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684; GIRK &#x8BF1;&#x5BFC; Na(+)&#xFF0C;&#x4E0E;&#x5148;&#x524D;&#x53D1;&#x5E03;&#x7684;&#x751F;&#x5316;&#x6570;&#x636E;&#x3002;&#x8BE5;&#x6A21;&#x578B;&#x8FD8;&#x6B63;&#x786E;&#x5730;&#x63CF;&#x8FF0;&#x6162;&#x65F6;&#x95F4;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x7684; Na(+) &#x6548;&#x679C;&#x548C;&#x89E3;&#x91CA;&#x4EE5;&#x524D;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684; Na (+) &#x52A0;&#x5F3A;-&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6D3B;&#x5316; GIRK &#x7684; coexpressed Galphai3&#x3002;&#x8FD9;&#x662F;&#x63CF;&#x8FF0;&#x81EA;&#x7531;&#x548C;&#x7ED1;&#x5B9A; G &#x86CB;&#x767D;&#x4E9A;&#x57FA;&#x4E0E;&#x53CA;&#x5176;&#x540E;&#x679C;&#x7684;&#x57FA;&#x5E95;&#x5E73;&#x8861;&#x8C03;&#x8282;&#x7684; GGbetagamma &#x6548;&#x5E94;&#x5668;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5B9A;&#x91CF;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;

&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x5EFA;&#x6A21;&#x7684; Na (+)-&#x8BF1;&#x5BFC;&#xFF0C;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E; Gbetagamma &#x7684;&#x6D3B;&#x5316;&#x7684; G &#x86CB;&#x767D;&#x5C01;&#x95ED; K(+) &#x9891;&#x9053;&#x3002;

G protein-activated K(+)(GIRK) channels are activated by numerous neurotransmitters that act on Gi/o proteins, via a direct interaction with the Gbetagamma subunit of G proteins. In addition, GIRK channels are positively regulated by intracellular Na(+) via a direct interaction (fast pathway) and via a GGbetagamma-dependent mechanism (slow pathway). The slow modulation has been proposed to arise from the recently described phenomenon of Na(+)-induced reduction of affinity of interaction between GalphaGDP and Gbetagamma subunits of G proteins. In this scenario, elevated Na(+) enhances basal dissociation of G protein heterotrimers, elevating free cellular Gbetagamma and activating GIRK. However, it is not clear whether this hypothesis can account for the quantitative and kinetic aspects of the observed regulation. Here, we report the development of a quantitative model of slow, Na(+)-dependent, G protein-mediated activation of GIRK. Activity of GIRK1F137S channels, which are devoid of direct interaction with Na(+), was measured in excised membrane patches and used as an indicator of free GGbetagamma levels. The change in channel activity was used to calculate the Na(+)-dependent change in the affinity of G protein subunit interaction. Under a wide range of initial conditions, the model predicted that a relatively small decrease in the affinity of interaction of GalphaGDP and GGbetagamma (about twofold under most conditions) accounts for the twofold activation of GIRK induced by Na(+), in agreement with biochemical data published previously. The model also correctly described the slow time course of Na(+) effect and explained the previously observed enhancement of Na(+)-induced activation of GIRK by coexpressed Galphai3. This is the first quantitative model that describes the basal equilibrium between free and bound G protein subunits and its consequences on regulation of a GGbetagamma effector.

Kinetic modeling of Na(+)-induced, Gbetagamma-dependent activation of G protein-gated K(+) channels.

G prot&eacute;ine activ&eacute;e K(+)(GIRK) canaux sont activ&eacute;s par nombreux neurotransmetteurs qui agissent sur les prot&eacute;ines Gi/o, via une interaction directe avec la sous-unit&eacute; Gbetagamma des prot&eacute;ines G. En outre, les canaux GIRK rel&egrave;vent positivement na intracellulaire via une interaction directe (voie rapide) et par un m&eacute;canisme d&eacute;pendant du GGbetagamma (voie lente). La modulation lente a &eacute;t&eacute; propos&eacute;e &agrave; partir de ce ph&eacute;nom&egrave;ne r&eacute;cemment d&eacute;crit de Na (+)-a induit une r&eacute;duction de l&#39;affinit&eacute; de l&#39;interaction entre les sous-unit&eacute;s GalphaGDP et Gbetagamma des prot&eacute;ines G. Dans ce sc&eacute;nario, Na &eacute;lev&eacute;s am&eacute;liore la dissociation basale de heterotrimers de G de prot&eacute;ines, &eacute;l&eacute;vation libre Gbetagamma cellulaire et en activant GIRK. Cependant, c&#39;est ne pas clair si cette hypoth&egrave;se peut expliquer les aspects quantitatifs et cin&eacute;tiques du r&egrave;glement observ&eacute;. Nous rapportons ici le d&eacute;veloppement d&#39;un mod&egrave;le quantitatif de lent, Na (+)-activation de prot&eacute;ines par d&eacute;pendant, G de GIRK. L&#39;activit&eacute; des canaux de GIRK1F137S, qui sont d&eacute;pourvues de l&#39;interaction directe avec Na, a &eacute;t&eacute; mesur&eacute;e dans des parcelles de membrane excis&eacute;es et utilis&eacute;e comme un indicateur des niveaux de GGbetagamma libres. Le changement dans l&#39;activit&eacute; du canal a &eacute;t&eacute; utilis&eacute; pour calculer la Na (+)-changement d&eacute;pendant de l&#39;affinit&eacute; de l&#39;interaction de sous-unit&eacute; de prot&eacute;ine G. Sous un large &eacute;ventail de conditions initiales, le mod&egrave;le pr&eacute;dit qu&#39;une relativement faible diminution de l&#39;affinit&eacute; de l&#39;interaction entre GalphaGDP et GGbetagamma (environ le double dans la plupart des conditions) repr&eacute;sente l&#39;activation double de GIRK induite par na, en accord avec les donn&eacute;es biochimiques publi&eacute;es auparavant. Le mod&egrave;le &eacute;galement correctement d&eacute;crit l&#39;&eacute;volution lente de prise d&#39;effet de Na et a expliqu&eacute; l&#39;am&eacute;lioration observ&eacute;e pr&eacute;c&eacute;demment de Na (+)-induite par l&#39;activation de GIRK par Galphai3 coexpressed. C&#39;est le premier mod&egrave;le quantitatif qui d&eacute;crit l&#39;&eacute;quilibre basale entre sous-unit&eacute;s de prot&eacute;ine G libres et li&eacute;es et ses cons&eacute;quences sur la r&eacute;glementation d&#39;un effecteur de la GGbetagamma.

Cin&eacute;tique, mod&eacute;lisation de Na (+)-induite, activation Gbetagamma-d&eacute;pendante de G prot&eacute;ine k canaux.

Kinetische Modellierung von Na (+)-induzierte, Gbetagamma-abh&#xE4;ngige Aktivierung von G-Protein-gesteuerten K (+)-Kan&#xE4;le.

Canali di K(+)(GIRK) attivato proteine G sono attivati da numerosi neurotrasmettitori che agiscono sulle proteine Gi/o, attraverso una diretta interazione con la subunit&agrave; Gbetagamma delle proteine G. Inoltre, canali GIRK positivamente sono regolati da Na(+) intracellulare tramite un&#39;interazione diretta (percorso veloce) e un meccanismo di GGbetagamma-dipendente (via lenta). La modulazione lenta &egrave; stato proposto a sorgere dal fenomeno recentemente descritto del Na (+)-indotta riduzione dell&#39;affinit&agrave; dell&#39;interazione tra GalphaGDP e Gbetagamma subunit&agrave; delle proteine G. In questo scenario, Na(+) elevati migliora la dissociazione basale di G della proteina heterotrimers, elevando gratis Gbetagamma cellulare e attivazione GIRK. Tuttavia, non &egrave; chiaro se questa ipotesi pu&ograve; spiegare per gli aspetti quantitativi e cinetici del regolamento osservato. Qui, segnaliamo lo sviluppo di un modello quantitativo di lento, Na (+)-attivazione dipendente, mediata da proteine G di GIRK. Attivit&agrave; di GIRK1F137S canali, che sono privi di interazione diretta con Na(+), fu misurata in patch di membrana escisse e utilizzato come un indicatore dei livelli di GGbetagamma gratuiti. Il cambiamento nelle attivit&agrave; del canale &egrave; stato utilizzato per calcolare la Na (+)-dipendente modifica l&#39;affinit&agrave; dell&#39;interazione di subunit&agrave; della proteina G. Sotto una vasta gamma di condizioni iniziali, il modello prevede che una diminuzione relativamente piccola l&#39;affinit&agrave; di interazione di GalphaGDP e GGbetagamma (circa duplice sotto condizioni pi&ugrave;) conti per l&#39;attivazione di duplice di GIRK indotta da Na(+), d&#39;intesa con la biochimici dei dati pubblicati in precedenza. Il modello inoltre correttamente descritto il corso lento tempo di effetto Na(+) e spiegato in precedenza osservata valorizzazione del Na (+)-indotta da attivazione di GIRK da Galphai3 Rsc8p. Questo &egrave; il primo modello quantitativo che descrive l&#39;equilibrio basale tra libera e vincolata subunit&agrave; della proteina G e le sue conseguenze sul regolamento di un generatore di effetti GGbetagamma.

Cinetica di modellazione del Na (+)-indotta, attivazione Gbetagamma-dipendente dei canali K(+)-gated la proteina di G.

G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316; K(+)(GIRK) &#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB; Gbetagamma &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x5BFE;&#x8A71;&#x306E; G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x306E; Gi/o &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x6CD5;&#x5F8B;&#x591A;&#x6570;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;GIRK &#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185; Na(+) &#xFF08;&#x9AD8;&#x901F;&#x7D4C;&#x8DEF;) &#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x3068; GGbetagamma &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x6A5F;&#x69CB; (&#x9045;&#x3044;&#x7D4C;&#x8DEF;) &#x7D4C;&#x7531;&#x3067;&#x7A4D;&#x6975;&#x7684;&#x306B;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Na (+) &#x304B;&#x3089;&#x6700;&#x8FD1;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x73FE;&#x8C61;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x4F4E;&#x901F;&#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#x65B9;&#x5F0F;&#x304C;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;-G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E; GalphaGDP &#x3068; Gbetagamma &#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x9593;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x306E;&#x4F4E;&#x6E1B;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30EA;&#x30AA;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6607;&#x683C;&#x3057;&#x305F; Na(+) &#x306F;&#x7121;&#x6599;&#x306E;&#x643A;&#x5E2F;&#x96FB;&#x8A71; Gbetagamma &#x3092;&#x6607;&#x964D;&#x3068; GIRK &#x6D3B;&#x6027;&#x5316; G &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; heterotrimers &#x306E;&#x57FA;&#x5E95;&#x306E;&#x89E3;&#x96E2;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x89B3;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x904B;&#x52D5;&#x306E;&#x5074;&#x9762;&#x3092;&#x8003;&#x616E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x660E;&#x78BA;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x304C;&#x9045;&#x3044;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x5831;&#x544A; Na (+)-&#x4F9D;&#x5B58;&#x3001;G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316; GIRK &#x306E;&#x3002;&#x6D3B;&#x52D5; Na(+) &#x3068;&#x76F4;&#x63A5;&#x3084;&#x308A;&#x53D6;&#x308A;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;GIRK1F137S &#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x7121;&#x6599; GGbetagamma &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x6307;&#x6A19;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F7F;&#x308F;&#x308C;&#x6458;&#x51FA;&#x819C;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x3067;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x5909;&#x52D5; Na (+) &#x306E;&#x8A08;&#x7B97;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;-G &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x9593;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x30A2;&#x30D5;&#x30A3;&#x30CB;&#x30C6;&#x30A3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x5909;&#x5316;&#x3002;&#x521D;&#x671F;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x5E83;&#x3044;&#x7BC4;&#x56F2;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x4EE5;&#x524D;&#x516C;&#x958B;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066; Na(+) &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B; GIRK &#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B; GalphaGDP &#x3068; GGbetagamma &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528; (&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;) &#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x6E1B;&#x5C11;&#x304C;&#x5360;&#x3081;&#x308B;&#x3068;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3002;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x6B63;&#x3057;&#x304F;&#x9045;&#x3044;&#x6642;&#x9593;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9; Na(+) &#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x3001;Na (+) &#x306E;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x89B3;&#x6E2C;&#x306E;&#x5F37;&#x5316;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;-&#x5171;&#x767A;&#x73FE; Galphai3 &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; GIRK &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x57FA;&#x5E95;&#x306E;&#x5E73;&#x8861;&#x9593;&#x7121;&#x6599;&#x3068;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E; G &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059; GGbetagamma &#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x30AD;&#x30CD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF; Na (+) &#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;-G &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x306B;&#x65BC;&#x3044;&#x3066;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E; Gbetagamma &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3002;

G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; K(+)(GIRK) &#xCC44;&#xB110; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; Gbetagamma &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC640; &#xC9C1;&#xC811; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; Gi/o &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC218;&#xB9CE;&#xC740; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, GIRK &#xCC44;&#xB110; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9C1;&#xC811; &#xC0C1;&#xD638; (&#xBE60;&#xB978; &#xD1B5;&#xB85C;)&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBC0F; GGbetagamma &#xC885;&#xC18D; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; (&#xB290;&#xB9B0; &#xD1B5;&#xB85C;)&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; na(+)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB290;&#xB9B0; &#xBCC0;&#xC870; Na (+)&#xC758; &#xCD5C;&#xADFC; &#xC124;&#xBA85;&#xB41C; &#xD604;&#xC0C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC81C;&#xC548; &#xB41C;-G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; GalphaGDP &#xBC0F; Gbetagamma &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4;&#xC758; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xC720;&#xBC1C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC2DC;&#xB098;&#xB9AC;&#xC624;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB192;&#xC740; Na(+) &#xBB34;&#xB8CC; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; Gbetagamma &#xB192;&#xC774;&#xAE30; &#xBC0F; GIRK &#xD65C;&#xC131;&#xD654; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; heterotrimers&#xC758; &#xAE30;&#xC800; &#xBD84;&#xB9AC;&#xB97C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;,&#xC774; &#xAC00;&#xC124;&#xC740; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xADDC;&#xC81C;&#xC758; &#xC591;&#xC801; &#xCE21;&#xBA74;&#xACFC; &#xC6B4;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACC4;&#xC815; &#xC218; &#xC788;&#xB294;&#xC9C0; &#xD655;&#xC2E4; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xACE0;, &#xC591;&#xC801; &#xBAA8;&#xB378;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C; Na (+)-GIRK&#xC758; &#xC885;&#xC18D;, G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC911;&#xC7AC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;. Na(+)&#xC640;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xACB0;&#xC5EC;&#xB294; GIRK1F137S &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC0AD;&#xC81C; &#xB9C9; &#xD328;&#xCE58; &#xCE21;&#xC815; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xBB34;&#xB8CC; GGbetagamma &#xB808;&#xBCA8;&#xC758; &#xC9C0;&#xD45C;&#xB85C; &#xC11C; &#xC0AC;&#xC6A9;. &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xBCC0;&#xD654;&#xB294; Na (+)&#xB97C; &#xACC4;&#xC0B0; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;-G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xBCC0;&#xD654; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xCD08;&#xAE30; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBAA8;&#xB378; (&#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0;)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; GalphaGDP &#xBC0F; Ggbetagamma&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xC740; &#xAC10;&#xC18C; &#xACC4;&#xC815; GIRK &#xC774;&#xC804; &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC640; Na(+)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC815;&#xD488; &#xC778;&#xC99D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC608;&#xCE21; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB378;&#xB3C4; &#xC81C;&#xB300;&#xB85C; Na(+) &#xD6A8;&#xACFC;&#xC758; &#xB290;&#xB9B0; &#xC2DC;&#xAC04; &#xACFC;&#xC815;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558; &#xACE0; Na (+)&#xC758; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC124;&#xBA85;-coexpressed galphai3&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; GIRK&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. GGbetagamma &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC790;&#xC720;&#xB86D;&#xACE0; &#xBC14;&#xC6B4;&#xB4DC; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC640; &#xADF8; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xAE30;&#xC800; &#xADE0;&#xD615;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xB294; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC591;&#xC801; &#xBAA8;&#xB378;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Na (+)&#xC758; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xD0A4;&#xB124;&#xD2F1;-&#xC720;&#xB3C4;, G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBB38;&#xC774; K(+) &#xCC44;&#xB110;&#xC758; Gbetagamma &#xC885;&#xC18D; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;.

G prote&iacute;na activada K(+)(GIRK) canales son activados por numerosos neurotransmisores que act&uacute;an sobre las prote&iacute;nas Gi/o, mediante una interacci&oacute;n directa con la subunidad Gbetagamma de las prote&iacute;nas G. Adem&aacute;s, los canales GIRK positivamente son regulados por na intracelular a trav&eacute;s de una interacci&oacute;n directa (v&iacute;a r&aacute;pida) y un mecanismo dependiente de GGbetagamma (v&iacute;a lenta). La modulaci&oacute;n lenta ha comenzado a surgir del fen&oacute;meno descrito recientemente de Na (+)-inducida por la reducci&oacute;n de la afinidad de la interacci&oacute;n entre las subunidades GalphaGDP y Gbetagamma de las prote&iacute;nas G. En este escenario, elevada na mejora basal disociaci&oacute;n de G prote&iacute;na heterotrimers, elevaci&oacute;n libre Gbetagamma celular y activar GIRK. Sin embargo, no est&aacute; claro si esta hip&oacute;tesis puede explicar los aspectos cuantitativos y cin&eacute;ticos de la regulaci&oacute;n observado. Aqu&iacute;, se presenta el desarrollo de un modelo cuantitativo de lento, Na (+)-dependiente, activaci&oacute;n mediada por la prote&iacute;na de G de GIRK. Actividad de los canales de GIRK1F137S, que carezcan de una interacci&oacute;n directa con na, se midi&oacute; en parches de membrana suprimido y utilizada como un indicador de niveles de GGbetagamma libres. El cambio en la actividad del canal se utiliz&oacute; para calcular la Na (+)-cambio dependiente en la afinidad de la interacci&oacute;n de la subunidad de la prote&iacute;na G. Bajo una amplia gama de condiciones iniciales, el modelo predijo que una relativamente peque&ntilde;a disminuci&oacute;n en la afinidad de la interacci&oacute;n de GalphaGDP y GGbetagamma (sobre la doble mayor&iacute;a en condiciones) representa la activaci&oacute;n del doble de GIRK inducida por na (+), de acuerdo con los datos bioqu&iacute;micos publicados previamente. El modelo tambi&eacute;n correctamente se describe el curso del tiempo lento del efecto del na (+) y explic&oacute; la mejora observada previamente de Na (+)-inducida por la activaci&oacute;n de GIRK por Galphai3 coexpressed. Este es el primer modelo cuantitativo que describe el equilibrio b&aacute;sico entre subunidades de prote&iacute;na G libres y encuadernadas y sus consecuencias en la regulaci&oacute;n de un generador de efectos GGbetagamma.

Cin&eacute;tica de modelado de Na (+)-inducida, activaci&oacute;n de la Gbetagamma dependiente de G prote&iacute;na-bloqueado k canales.

&#x8BB8;&#x591A;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x663E;&#x793A;&#x4F4E;&#x57FA;&#x5E95;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x662F;&#x6309;&#x6709;&#x5173;&#x6D47;&#x6CE8;&#x56E0;&#x5B50;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x6570;&#x767E;&#x500D;&#x3002;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7ECF;&#x5178;&#x7684;&#x4F8B;&#x5B50;&#x662F;&#x7531; Gbetagamma &#x4E9A;&#x57FA;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B; G &#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x6D3B; K(+) &#x6E20;&#x9053; (GIRK)&#x3002;&#x6FC0;&#x6D3B; &#xFF08;&#x76F8;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x57FA;&#x5E95;&#x5F53;&#x524D;&#xFF09;&#xFF0C;&#x5730;&#x79EF;&#xFF0C;&#x591A;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x53C2;&#x6570;&#xFF0C;&#x901A;&#x5E38;&#x5F88;&#x5BB9;&#x6613;&#x4F30;&#x8BA1;&#x4ECE;&#x5168;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8BB0;&#x5F55;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x901A;&#x5E38;&#x8BA1;&#x7B97;&#x5730;&#x79EF;&#x53D8;&#x6210;&#x975E;&#x5E73;&#x51E1;&#x591A;&#x901A;&#x9053;&#x4FEE;&#x8865;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x56E0;&#x4E3A;&#x6781;&#x7AEF;&#x53D8;&#x5316;&#x540E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x5230;&#x4E00;&#x79CD;&#x5B8F;&#x89C2;&#x7684;&#x770B;&#x4F3C;&#x5355;&#x901A;&#x9053;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4E2D;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x79CD;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x8BA1;&#x7B97;&#x7684;&#x51C0;&#x5F53;&#x524D;&#x6D41;&#x7ECF;&#x7684;&#x6E20;&#x9053;&#x4E2D;&#x7684;&#x4FEE;&#x8865;&#x7A0B;&#x5E8F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4E4B;&#x524D;, &#x548C;&#x4E4B;&#x540E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x53EF;&#x80FD;&#x9700;&#x8981;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x8981;&#x89E3;&#x51B3;&#x6B64;&#x95EE;&#x9898;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5229;&#x7528;&#x7531;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x79BB;&#x4F53;&#x4FEE;&#x8865;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x4E2D;&#x7684;&#x7EAF;&#x51C0; Gbetagamma &#x6FC0;&#x6D3B;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143; GIRK &#x6E20;&#x9053;&#x3002;&#x6E20;&#x9053;&#x6709;&#x4EBA;&#x5728;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x5BC6;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x51E0;&#x4E2A;&#x81F3;&#x6570;&#x767E;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x4FEE;&#x8865;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x51FA;&#x4E00;&#x79CD;&#x8BA1;&#x7B97;&#x6211;&#x4F7F;&#x7528;&#x5E45;&#x5EA6;&#x76F4;&#x65B9;&#x56FE;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x7B80;&#x5355;&#x548C;&#x5FEB;&#x901F;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x5176;&#x51C6;&#x786E;&#x6027;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E0E;&#x6211;&#x6BD4;&#x8F83;&#x8BA1;&#x7B97;&#x4ECE;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x5217;&#x8868;&#x3002;&#x6B64;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5141;&#x8BB8;&#x6781;&#x7AEF;&#x53D8;&#x5316;&#x5206;&#x6790;&#x4E2D;&#x6211;&#x5728;&#x591A;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x4FEE;&#x8865;&#x7A0B;&#x5E8F;&#xFF0C;&#x5C31;&#x4E0D;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x7406;&#x60F3;&#x5316;&#x548C;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x5217;&#x8868;&#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x6807;&#x51C6;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

&#x632F;&#x5E45;&#x7684;&#x4FEE;&#x8865;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x5939;&#x5F55;&#x5236;&#x7684;&#x6D89;&#x53CA;&#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x52A8;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x6781;&#x7AEF;&#x53D8;&#x5316;&#x5206;&#x6790;&#x57FA;&#x4E8E;&#x76F4;&#x65B9;&#x56FE;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

Many ion channels show low basal activity, which is increased hundreds-fold by the relevant gating factor. A classical example is the activation G-protein-activated K(+) channels (GIRK) by Gbetagamma subunit dimer. The extent of activation (relative to basal current), R(a), is an important physiological parameter, usually readily estimated from whole cell recordings. However, calculation of R(a) often becomes non-trivial in multi-channel patches because of extreme changes in activity upon activation, from a seemingly single-channel pattern to a macroscopic one. In such cases, calculation of the net current flowing through the channels in the patch, I, before and after activation may require different methods of analysis. To address this problem, we utilized neuronal GIRK channels activated by purified Gbetagamma in excised patches of Xenopus oocytes. Channels were expressed at varying densities, from a few to several hundreds per patch. We present a simple and fast method of calculating I using amplitude histogram analysis and establish its accuracy by comparing with I calculated from event lists. This method allows the analysis of extreme changes in I in multichannel patches, which would be impossible using the standard methods of idealization and event list generation.

Amplitude histogram-based method of analysis of patch clamp recordings that involve extreme changes in channel activity levels.

Nombreux canaux ioniques montre la faible activit&eacute; basale, ce qui est des centaines-multipli&eacute; par le facteur de blocage. Les canaux de k G-prot&eacute;ine-activ&eacute; d&#39;activation (GIRK) par dim&egrave;re de sous-unit&eacute; de Gbetagamma en est un exemple classique. Le degr&eacute; d&#39;activation (courant par rapport &agrave; la base), d&eacute;fini, est un param&egrave;tre physiologique important, estim&eacute; g&eacute;n&eacute;ralement facilement des enregistrements de cellules enti&egrave;res. Cependant, calcul de d&eacute;fini souvent devient non n&eacute;gligeable en plaques multicanaux en raison des changements extr&ecirc;mes en activit&eacute; lors de l&#39;activation, &agrave; partir d&#39;un mod&egrave;le apparemment monocanal macroscopique &agrave; un. Dans ce cas, calculer le net courant traversant les canaux dans le patch, j&#39;ai, avant et apr&egrave;s activation peut n&eacute;cessiter diff&eacute;rentes m&eacute;thodes d&#39;analyse. Pour r&eacute;soudre ce probl&egrave;me, nous avons utilis&eacute; neuronale canaux GIRK activ&eacute;e par Gbetagamma purifi&eacute;e en plaques excis&eacute;s des ovocytes de Xenopus laevis. Canaux ont &eacute;t&eacute; exprim&eacute;es &agrave; diff&eacute;rentes densit&eacute;s, de quelques-uns &agrave; plusieurs centaines par patch. Nous pr&eacute;sentons une m&eacute;thode simple et rapide de calcul j&#39;ai analyse histogramme amplitude et d&#39;&eacute;tablir l&#39;exactitude des informations en comparant avec j&#39;ai calcul&eacute; &agrave; partir des listes d&#39;&eacute;v&eacute;nements. Cette m&eacute;thode permet l&#39;analyse des variations extr&ecirc;mes dans I en patches multicanaux, ce qui seraient impossibles en utilisant les m&eacute;thodes standards d&#39;id&eacute;alisation et de g&eacute;n&eacute;ration de liste &eacute;v&eacute;nement.

Amplitude histogramme-m&eacute;thode d&#39;analyse des enregistrements de serrage patch qui impliquent des changements extr&ecirc;mes de niveaux d&#39;activit&eacute; de canal.

Viele Ionenkan&auml;le zeigen niedrigen basalen Aktivit&auml;t, der erh&ouml;hte Hunderte-fach mit dem relevanten gating Faktor ist. Ein klassisches Beispiel ist die Aktivierung K(+) G-Protein-aktivierte Kan&auml;le (GIRK) von Gbetagamma Untereinheit Dimer. Das Ausma&szlig; der Aktivierung (bezogen auf die basalen aktuell), R(a), ist ein wichtiger physiologische Parameter, die gesamte Zelle Aufnahmen in der Regel leicht gesch&auml;tzt. Jedoch wird Berechnung der R(a) oft wegen der extremen Ver&auml;nderungen in Aktivit&auml;t nach der Aktivierung auf ein scheinbar Einkanal-Muster zu einer makroskopischen nicht trivialen Mehrkanal-Patches. In solchen F&auml;llen kann die Berechnung der net flie&szlig;ende Strom durch die Kan&auml;le in den Patch, ich, vor und nach der Aktivierung verschiedene Methoden der Analyse verlangen. Um dieses Problem zu beheben, verwendet wir neuronale GIRK-Kan&auml;le, die durch gereinigte Gbetagamma in excised Flecken von Xenopus Oocytes aktiviert. Kan&auml;le wurden bei unterschiedlichen dichten, von wenigen bis mehreren hundert pro Patch ge&auml;u&szlig;ert. Wir pr&auml;sentieren eine einfache und schnelle Methode zur Berechnung ich benutze Amplitude Histogramm-Analyse und herzustellen, deren Richtigkeit durch den Vergleich mit I aus Ereignis listet berechnet. Diese Methode erlaubt die Analyse von extremen &Auml;nderungen in ich in Mehrkanal Patches, die welche unter Verwendung von Standardmethoden der Idealisierung und Ereignis generieren unm&ouml;glich w&auml;re.

Amplitude Histogramm basierende Methode zur Analyse des Patch Clamp Aufnahmen, bei denen extreme Ver&auml;nderungen im Kanal Aktivit&auml;tsniveau.

Molti canali ionici mostrano bassa attivit&agrave; basale, che &egrave; aumentato centinaia-piega per il fattore di controllo pertinente. Un esempio classico &egrave; l&#39;attivazione K(+) G-proteina-attivato canali (GIRK) di dimero di subunit&agrave; Gbetagamma. L&#39;estensione dell&#39;attivazione (corrente relativo al basale), R(a), &egrave; un importante parametro fisiologico, solitamente prontamente stimato da registrazioni intera cellula. Tuttavia, calcolo di R(a) spesso diventa banale in patch multicanale a causa di modifiche estreme in attivit&agrave; dopo l&#39;attivazione, da un modello apparentemente monocanale ad un macroscopico. In tali casi, calcolo del netto corrente circolante attraverso i canali della patch, I, prima e dopo l&#39;attivazione possa richiedere differenti metodi di analisi. Per risolvere questo problema, abbiamo utilizzato un neurone canali GIRK attivati da Gbetagamma purificato in escisse patch di ovociti di Xenopus. Canali sono stati espressi a densit&agrave; variabile, da pochi a diverse centinaia per ogni patch. Noi presentiamo un metodo semplice e veloce di calcolo utilizzando analisi istogramma ampiezza e stabilire l&#39;esattezza confrontando con I calcolato da elenchi di eventi. Questo metodo permette l&#39;analisi dei cambiamenti estremi in I in patch multicanale, che sarebbe impossibile utilizzando i metodi standard di idealizzazione e generazione della lista di eventi.

Ampiezza istogramma metodo basato sull&#39;analisi delle registrazioni di morsetto patch che coinvolgono estremi cambiamenti nei livelli di attivit&agrave; del canale.

&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB; &#x30B2;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x8981;&#x56E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5897;&#x52A0;&#x6570;&#x767E;&#x500D;&#x3067;&#x3059;&#x4F4E;&#x306E;&#x57FA;&#x5E95;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x53E4;&#x5178;&#x7684;&#x306A;&#x4F8B; Gbetagamma &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; &#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x65BC;&#x3044;&#x3066;&#x306E; G &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB; (GIRK) &#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316; (&#x57FA;&#x5E95;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x96FB;&#x6D41;&#xFF09;&#x3001;R(a) &#x306E;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x306F;&#x901A;&#x5E38;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x30BB;&#x30EB;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x9332;&#x97F3;&#x304B;&#x3089;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x8A08;&#x7B97; R(a) &#x306E;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x6975;&#x7AEF;&#x306A;&#x5909;&#x66F4;&#x306E;&#x305F;&#x3081; 1 &#x3064;&#x306E;&#x5DE8;&#x8996;&#x7684;&#x306B;&#x4E00;&#x898B;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB; &#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5F8C;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306B;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1; &#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x3067;&#x306F;&#x4E9B;&#x7D30;&#x306A;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5834;&#x5408;&#x306B;&#x3001;net &#x79C1;&#x306F;&#x3001;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x5185;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x524D;&#x306B;&#x3001;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x8A8D;&#x8A3C;&#x5F8C;&#x6D41;&#x308C;&#x308B;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x8A08;&#x7B97;&#x89E3;&#x6790;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x3092;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x7CBE;&#x88FD; Gbetagamma &#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x57F9;&#x5730;&#x306E;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x3067;&#x795E;&#x7D4C; GIRK &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x6D3B;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6570;&#x767E;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x3054;&#x3068;&#x306B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x3067;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x8A08;&#x7B97;&#x79C1;&#x306F;&#x632F;&#x5E45;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30B7;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3067;&#x9AD8;&#x901F;&#x306A;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x3066;&#x79C1;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8; &#x30EA;&#x30B9;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x8A08;&#x7B97;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;&#x6975;&#x7AEF;&#x306A;&#x5909;&#x52D5;&#x89E3;&#x6790;&#x3067;&#x79C1;&#x306F;&#x7406;&#x60F3;&#x5316;&#x3068;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x4E00;&#x89A7;&#x306E;&#x751F;&#x6210;&#x306E;&#x6A19;&#x6E96;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1; &#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB; &#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x632F;&#x5E45;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x6975;&#x7AEF;&#x306A;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x4F34;&#x3046;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1; &#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x9332;&#x97F3;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

&#xB9CE;&#xC740; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; &#xD45C;&#xC2DC;&#xB294; &#xAD00;&#xB828; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC694;&#xC778;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC99D;&#xAC00; &#xC218;&#xBC31; &#xBC30; &#xB0AE;&#xC740; &#xAE30;&#xC800; &#xD65C;&#xB3D9;. &#xACE0;&#xC804;&#xC801;&#xC778; &#xC608;&#xC81C;&#xB294; Gbetagamma &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC774;&#xD569;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; K(+) &#xCC44;&#xB110; (GIRK)&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD65C;&#xC131;&#xD654; (&#xAE30;&#xC800;&#xB97C; &#xAE30;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xD604;&#xC7AC;), R(a), &#xBC94;&#xC704;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218;, &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC27D;&#xAC8C; &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xB179;&#xC74C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD94;&#xC815;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC885;&#xC885; r(a)&#xC758; &#xACC4;&#xC0B0;&#xC774; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBA40;&#xD2F0; &#xD328;&#xCE58;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xC218; &#xADF9;&#xB2E8;&#xC801;&#xC778; &#xAE30;&#xD6C4; &#xBCC0;&#xD654; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xAC70;&#xC2DC;&#xC801;&#xC778; &#xAC83; &#xAC89;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xCC44;&#xB110; &#xD328;&#xD134;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC2DC; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0;&#xB294; net &#xD750;&#xB974;&#xB294; &#xC804;&#xB958; &#xB098;, &#xD328;&#xCE58;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC804;&#xD6C4;&#xC758; &#xACC4;&#xC0B0; &#xBD84;&#xC11D;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xBC29;&#xBC95; &#xD544;&#xC694;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBB38;&#xC81C;&#xB97C; &#xD574;&#xACB0; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC0AD;&#xC81C; &#xD328;&#xCE58; Xenopus oocytes&#xC758; &#xC21C;&#xD654; Gbetagamma&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC2E0;&#xACBD; GIRK &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCC44;&#xB110; &#xD328;&#xCE58; &#xB2F9; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC218;&#xBC31; &#xBA87;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBC00;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB098; &#xC9C4;&#xD3ED; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB7A8; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACC4;&#xC0B0;&#xC758; &#xAC04;&#xD3B8; &#xD558; &#xACE0; &#xBE60;&#xB978; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC81C;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xB098; &#xBE44;&#xAD50; &#xD558; &#xC5EC; &#xC815;&#xD655;&#xC131; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; &#xBAA9;&#xB85D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACC4;&#xC0B0; &#xC124;&#xC815;. &#xC774; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB294; &#xAC83;&#xC740; &#xBD88;&#xAC00;&#xB2A5; &#xD558;&#xB2E4; &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xACE0; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; &#xBAA9;&#xB85D; &#xC0DD;&#xC131;&#xC758; &#xD45C;&#xC900; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBA40;&#xD2F0; &#xCC44;&#xB110; &#xD328;&#xCE58;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB098;&#xC5D0; &#xADF9;&#xB2E8;&#xC801;&#xC778; &#xBCC0;&#xD654; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xADF9;&#xB2E8;&#xC801;&#xC778; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xD328;&#xCE58; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xB179;&#xC74C;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC758; &#xC9C4;&#xD3ED; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB7A8; &#xAE30;&#xBC18; &#xBC29;&#xBC95;.

Muchos canales i&oacute;nicos muestran actividad basal baja, que es mayor cientos veces por el correspondiente factor bloquea. Un ejemplo cl&aacute;sico es los activaci&oacute;n k G-prote&iacute;na-activa los canales (GIRK) por d&iacute;mero de subunidades Gbetagamma. El grado de activaci&oacute;n (actual comparado con basal), R(a), es un par&aacute;metro fisiol&oacute;gico importante, estimado generalmente f&aacute;cilmente de grabaciones de c&eacute;lulas enteras. Sin embargo, c&aacute;lculo de R(a) a menudo llega a ser no trivial en parches multicanal debido a cambios extremos en actividad despu&eacute;s de la activaci&oacute;n, de un patr&oacute;n aparentemente un canal a otro macrosc&oacute;pico. En tales casos, el c&aacute;lculo de la red corriente que fluye a trav&eacute;s de los canales en el parche, que, antes y despu&eacute;s de la activaci&oacute;n puede requerir diferentes m&eacute;todos de an&aacute;lisis. Para solucionar este problema, utilizamos canales GIRK neuronales activados por Gbetagamma purificada en parches suprimidos de ovocitos de Xenopus. Canales se expresaron en diferentes densidades, de algunos centenares por parche. Presentamos un m&eacute;todo simple y r&aacute;pido de calcular utilizando an&aacute;lisis del histograma de amplitud y establecer su exactitud comparando con lo calcula a partir de listas de eventos. Este m&eacute;todo permite el an&aacute;lisis de cambios extremos en I en parches multicanales, que ser&iacute;an imposibles usando los m&eacute;todos est&aacute;ndar de la idealizaci&oacute;n y la generaci&oacute;n de listas de eventos.

Amplitud histograma m&eacute;todo basado en an&aacute;lisis de grabaciones de abrazadera del remiendo que implican cambios extremos en los niveles de actividad de canal.

&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x518D;&#x751F;&#x7684;&#x5468;&#x56F4;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x8981;&#x6C42;&#x5185;&#x5728;&#x8F74;&#x7A81;&#x4EA7;&#x7269;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x8C03;&#x52A8;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x9006;&#x884C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x75C5;&#x53D8;&#x7684;&#x90E8;&#x4F4D;&#x548C;&#x7D22;&#x739B;&#x4E4B;&#x95F4;&#x63D0;&#x4F9B;&#x51C6;&#x786E;&#x548C;&#x53CA;&#x65F6;&#x7684;&#x4FE1;&#x606F;&#x7684;&#x6027;&#x8D28;&#x548C;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x7684;&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x635F;&#x4F24;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E89;&#x53D6;&#x9002;&#x5F53;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x8EAB;&#x4F53;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x65E9;&#x671F;&#x7684;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x4FE1;&#x53F7;&#x540E;&#x8DDF;&#x5408;&#x594F;&#x7684;&#x7535;&#x673A;&#x9A71;&#x52A8;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x4E00;&#x4E9B;&#x4F9D;&#x8D56;&#x672C;&#x5730;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x8F74;&#x7A81;&#x548C; importins &#x534F;&#x8C03;&#x7684;&#x9006;&#x884C;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x4ECE;&#x800C;&#x5F15;&#x8D77;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x9664;&#x4E86;&#x8BA1;&#x7B97;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x53CC;&#x76F8;&#x673A;&#x5236;&#x53EF;&#x80FD;&#x8054;&#x751F;&#x7F51;&#x7AD9;&#x4ECE;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x7684;&#x8DDD;&#x79BB;&#x4E0A;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4FE1;&#x606F;&#x3002;&#x9F13;&#x52B1;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x663E;&#x793A;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x5C06;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x65B0;&#x5174;&#x9006;&#x884C;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5185;&#x5728;&#x518D;&#x751F;&#x673A;&#x5236;&#x4E5F;&#x5728;&#x589E;&#x957F;&#x8010;&#x706B;&#x6750;&#x6599;&#x4E2D;&#x592E;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x7406;&#x89E3;&#x3002;

&#x9006;&#x884C;&#x8F74;&#x7A81;&#x518D;&#x751F;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;

Neuronal regeneration in the peripheral nervous system requires mobilization of intrinsic neurite outgrowth mechanisms. This process depends on retrograde signaling between lesion site and soma to provide accurate and timely information on the nature and extent of axonal damage, and to elicit an appropriate cell body response. An early phase of electrophysiological signaling is followed by an ensemble of motor-driven signals, some of which are dependent on local protein translation in the axon and formation of an importins-coordinated retrograde complex. In addition to eliciting the cell body response, computational analyses suggest that this biphasic mechanism may provide information on the distance of the leson site from the neuronal cell body. Encouraging recent data suggest that it may be possible to apply this emerging understanding of retrograde signaling mechanisms to activate intrinsic regeneration mechanisms also in growth-refractory central neurons.

Retrograde signaling in axonal regeneration.

La r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;ration neuronale dans le syst&#xE8;me nerveux p&#xE9;riph&#xE9;rique n&#xE9;cessite la mobilisation de m&#xE9;canismes intrins&#xE8;ques excroissance des neurites. Ce processus d&#xE9;pend de signalisation r&#xE9;trograde entre le site de la l&#xE9;sion et le soma de fournir des informations exactes et &#xE0; jour sur la nature et l&#x26;#39;&#xE9;tendue des l&#xE9;sions axonales, et pour provoquer une r&#xE9;ponse cellulaire de l&#x26;#39;organe appropri&#xE9;. Une premi&#xE8;re phase de signalisation &#xE9;lectrophysiologique est suivie par un ensemble de signaux &#xE0; moteur, dont certains d&#xE9;pendent de la traduction locale de prot&#xE9;ines dans l&#x26;#39;axone et la formation d&#x26;#39;un complexe importines coordonn&#xE9;e r&#xE9;trograde. En plus de d&#xE9;clencher la r&#xE9;action corps cellulaire, des analyses de calcul indiquent que ce m&#xE9;canisme biphasique peut fournir des informations sur la distance de l&#x26;#39;emplacement leson du corps cellulaire neuronale. Encourager les donn&#xE9;es r&#xE9;centes sugg&#xE8;rent qu&#x26;#39;il pourrait &#xEA;tre possible d&#x26;#39;appliquer cette nouvelle compr&#xE9;hension des m&#xE9;canismes de signalisation r&#xE9;trograde pour activer les m&#xE9;canismes de r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;ration intrins&#xE8;ques &#xE9;galement dans la croissance r&#xE9;fractaires neurones centraux.

Signalisation r&#xE9;trograde dans la r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;ration axonale

Neuronale Regeneration im peripheren Nervensystems erfordert die Mobilisierung der systeminternen Neurit Auswuchs Mechanismen. Dieser Prozess h&auml;ngt davon ab, retrograde Signalisierung zwischen L&auml;sion und Soma, genaue und aktuelle Informationen &uuml;ber Art und Umfang der axonale Sch&auml;den und zu eine entsprechenden Zellk&ouml;rper Antwort zu entlocken. Eine fr&uuml;he Phase des elektrophysiologische Signale folgt ein Ensemble von motorische Signale, von denen einige Atomtypen &Uuml;bersetzung im Axon und Bildung von einem Importins koordinierte retrograde Komplex abh&auml;ngig sind. Neben die Zellk&ouml;rper Reaktion hervorrufen, zufolge computational Analysen dieser biphasische-Mechanismus auf die Entfernung des Standortes Leson aus dem neuronalen Zelle K&ouml;rper Informationen liefern kann. Ermutigende j&uuml;ngste Daten zufolge gilt dies m&ouml;glich m&ouml;glicherweise entstehenden Verst&auml;ndnis der retrograden Signalisierungsmechanismen systeminterne Regenerierung Mechanismen auch in Wachstum-resistentem zentralen Neuronen aktivieren.

Retrograde axonale Regeneration signalisiert.

Rigenerazione neuronale nel sistema nervoso periferico richiede la mobilitazione di meccanismi escrescenza intrinseca dei neuriti. Questo processo dipende dalla segnalazione retrograda tra il sito di lesione e soma per fornire informazioni accurate e tempestive sulla natura e l&#39;entit&agrave; del danno assonale e di suscitare una risposta appropriata corpo cellulare. Una fase in anticipo del segnale elettrofisiologico &egrave; seguita da un ensemble di segnali motorizzato, alcuni dei quali dipendono dalla traduzione proteica locale nell&#39;assone e formazione di un complesso retrogrado importins-coordinato. Oltre a suscitare la risposta del corpo cellulare, analisi computazionale suggeriscono che questo meccanismo bifasico pu&ograve; fornire informazioni sulla distanza del sito leson dal corpo delle cellule neuronale. Incoraggianti i dati recenti suggeriscono che potrebbe essere possibile applicare questo emergente la comprensione dei meccanismi di segnalazione retrogradi per attivare meccanismi di rigenerazione intrinseco anche nei neuroni centrali crescita-refrattario.

Retrogrado, segnalazione nella rigenerazione assonale.

&#x672B;&#x68A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C;&#x518D;&#x751F;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x795E;&#x7D4C;&#x7A81;&#x8D77;&#x4F38;&#x9577;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x52D5;&#x54E1;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x8EF8;&#x7D22;&#x640D;&#x50B7;&#x306E;&#x6027;&#x8CEA;&#x3068;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x6B63;&#x78BA;&#x3067;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x30EA;&#x30FC;&#x306A;&#x60C5;&#x5831;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x4F53;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x75C5;&#x5909;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3068;&#x30BD;&#x30FC;&#x30DE;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x9006;&#x884C;&#x6027;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x96FB;&#x6C17;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x6BB5;&#x968E;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C1;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30CD;&#x30FC;&#x30C8;&#x9006;&#x884C;&#x6027;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x3068;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5C40;&#x6240;&#x7684;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x99C6;&#x52D5;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#x30A2;&#x30F3;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EB;&#x304C;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x4F53;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;&#x8A08;&#x7B97;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x4E8C;&#x76F8;&#x6027;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x4F53;&#x304B;&#x3089;leson&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x200B;&#x200B;&#x306E;&#x8DDD;&#x96E2;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x60C5;&#x5831;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6709;&#x671B;&#x306A;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x304C;&#x6210;&#x9577;&#x96E3;&#x6CBB;&#x6027;&#x4E2D;&#x67A2;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x3082;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x518D;&#x751F;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x9006;&#x884C;&#x6027;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x7406;&#x89E3;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x8EF8;&#x7D22;&#x518D;&#x751F;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x9006;&#x884C;&#x6027;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;

&#xB9D0; &#xCD08; &#xC2E0; &#xACBD;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xB0B4;&#xC7A5; neurite &#xD30C;&#xC0DD;&#xBB3C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758; &#xB3D9;&#xC6D0;&#xC744; &#xC694;&#xAD6C; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB294; &#xC790;&#xC5F0;&#xACFC; axonal &#xC190;&#xC0C1;&#xC758; &#xC815;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xACE0; &#xC2DC;&#xAE30; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xC140; &#xC2E0;&#xCCB4; &#xBC18;&#xC751;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD1F4;&#xD589; &#xC131; &#xBCD1; &#xBCC0; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC640; &#xC18C;&#xB9C8; &#xAC04;&#xC758; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4;. Electrophysiological &#xC2DC;&#xADF8;&#xB110;&#xB9C1;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xB2E8;&#xACC4; &#xB4A4;&#xC5D0; &#xC77C;&#xBD80;&#xB294; &#xCD95; &#xC0AD;&#xACFC; importins &#xC870;&#xC815; &#xD1F4;&#xD589; &#xC131; &#xBCF5;&#xD569; &#xD615;&#xC131; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC88;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD558;&#xB294; &#xBAA8;&#xD130; &#xAD6C;&#xB3D9; &#xC2E0;&#xD638;&#xC758; &#xC559;&#xC0C1;&#xBE14;. &#xC140; &#xBC14;&#xB514; &#xC751;&#xB2F5; &#xB3C4;&#xCD9C;, &#xC678; &#xC804;&#xC0B0; &#xBD84;&#xC11D;&#xC774; &#xB098;&#xC544;&#xC84C;&#xB2E4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; leson &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC; &#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xAC70;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACA9;&#xB824; &#xD558; &#xC5EC; &#xCD5C;&#xADFC; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC218; &#xC801;&#xC6A9;&#xC774; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC2E0;&#xD765; &#xC131;&#xC7A5;-&#xB0B4; &#xD654;&#xBB3C; &#xC911;&#xC559; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xD1F4;&#xD589; &#xC131; &#xC2E0;&#xD638; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758; &#xC774;&#xD574;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2E0;&#xD638; axonal &#xC911;&#xC0DD;&#xC5D0; &#xC5ED;&#xD589;.

La regeneraci&#xF3;n neuronal en el sistema nervioso perif&#xE9;rico requiere la movilizaci&#xF3;n de los mecanismos intr&#xED;nsecos de neurite resultado. Este proceso depende de la se&#xF1;alizaci&#xF3;n retr&#xF3;grada entre sitio de la lesi&#xF3;n y el soma para proporcionar informaci&#xF3;n precisa y oportuna sobre la naturaleza y extensi&#xF3;n del da&#xF1;o axonal, y para provocar una respuesta de las c&#xE9;lulas del cuerpo apropiado. Una primera fase de se&#xF1;alizaci&#xF3;n electrofisiol&#xF3;gico es seguido por un conjunto de se&#xF1;ales a motor, algunos de los cuales dependen de la traducci&#xF3;n de prote&#xED;nas local en el ax&#xF3;n y la formaci&#xF3;n de un complejo retr&#xF3;grada importins-coordinada. Adem&#xE1;s de provocar la respuesta de c&#xE9;lulas del cuerpo, los an&#xE1;lisis computacionales sugieren que este mecanismo bif&#xE1;sica puede proporcionar informaci&#xF3;n sobre la distancia del sitio LeSon desde el cuerpo celular neuronal. Alentar a los datos recientes sugieren que puede ser posible aplicar este entendimiento emergente de los mecanismos de se&#xF1;alizaci&#xF3;n retr&#xF3;grada de activar los mecanismos intr&#xED;nsecos de regeneraci&#xF3;n tambi&#xE9;n en el crecimiento de las neuronas centrales refractarios.

Se&#xF1;alizaci&#xF3;n retr&#xF3;grada en la regeneraci&#xF3;n axonal

&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x8F74;&#x7A81;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28; (&#x795E;&#x7ECF;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8F74;&#x6D46;) &#x7EC4;&#x6210;&#x53D8;&#x5316;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x8BB8;&#x591A;&#x751F;&#x7269;&#x8FC7;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x8F74;&#x7A81;&#x7684;&#x6307;&#x5BFC;&#xFF0C;&#x5E94;&#x5BF9;&#x635F;&#x4F24;&#x3001; &#x7A81;&#x8D77;&#x548C;&#x8F74;&#x7A81;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x751F;&#x5316;&#x4E0E;&#x5206;&#x5B50;&#x7814;&#x7A76;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x673A;&#x5236;&#x5DF2;&#x5927;&#x91CF;&#x96C6;&#x4E2D;&#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7531;&#x4E8E;&#x83B7;&#x5F97;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x63D0;&#x53D6;&#x7269;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7684;&#x56F0;&#x96BE;&#x3002;&#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E0D;&#x53EF;&#x80FD;&#x590D;&#x5236;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#xFF0C;&#x6574;&#x4E2A;&#x795E;&#x7ECF;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8F74;&#x6D46;&#x63D0;&#x53D6;&#x7684;&#x53EF;&#x9760;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5C06;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x795E;&#x7ECF;&#x8F74;&#x7A81;&#x7684;&#x673A;&#x7406;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x548C;&#x8BC4;&#x4F30;&#x65B0;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x5927;&#x9F20;&#x5468;&#x56F4;&#x795E;&#x7ECF;&#xFF0C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5B75;&#x5316;&#x7684;&#x6E17;&#x6DB2;&#xFF0C;&#x5355;&#x72EC;&#x7684;&#x9AD3;&#x9798;&#x548C;&#x6EB6;&#x8840; nonaxonal &#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x5176;&#x6B21;&#x662F;&#x5269;&#x4F59;&#x7684;&#x8F74;&#x7A81;&#x4E30;&#x5BCC;&#x6750;&#x6599;&#x4E2D;&#x63D0;&#x53D6;&#x795E;&#x7ECF;&#x5206;&#x518C;&#x5931;&#x6563;&#x77ED;&#x7F51;&#x6BB5;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8F74;&#x6D46;&#x7684;&#x5236;&#x5907;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x8FD9;&#x9879;&#x65B0;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x53EF;&#x4EE5;&#x964D;&#x4F4E;&#x8840;&#x6E05;&#x548C;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6C61;&#x67D3;&#x548C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x8F74;&#x7A81;&#x5185;&#x5BB9;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

&#x5916;&#x5468;&#x795E;&#x7ECF;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8F74;&#x6D46;&#x5206;&#x79BB;&#x3002;

Localized changes in the composition of axonal cytoplasm (axoplasm) are critical for many biological processes, including axon guidance, responses to injury, neurite outgrowth, and axon-glia interactions. Biochemical and molecular studies of these mechanisms have been heavily focused on in vitro systems because of the difficulty of obtaining subcellular extracts from mammalian tissues in vivo. As in vitro systems might not replicate the in vivo situation, reliable methods of axoplasm extraction from whole nerve would be helpful for mechanistic studies on axons. Here we develop and evaluate a new procedure for preparation of axoplasm from rat peripheral nerve, based on incubation of separated short segements of nerve fascicles in hypotonic medium to separate myelin and lyse nonaxonal structures, followed by extraction of the remaining axon-enriched material. We show that this new procedure reduces serum and glial cell contamination and facilitates proteomic analyses of axonal contents.

Axoplasm isolation from peripheral nerve.

Changements localis&#xE9;s dans la composition du cytoplasme axonal (axoplasme) sont essentielles pour de nombreux processus biologiques, y compris le guidage axonal, les r&#xE9;ponses &#xE0; des blessures, la croissance des neurites, et des axones des cellules gliales-interactions. Des &#xE9;tudes biochimiques et mol&#xE9;culaires de ces m&#xE9;canismes ont &#xE9;t&#xE9; fortement ax&#xE9;e sur des syst&#xE8;mes in vitro en raison de la difficult&#xE9; d&#x26;#39;obtenir des extraits de tissus de mammif&#xE8;res subcellulaires in vivo. Comme dans les syst&#xE8;mes in vitro pourrait ne pas reproduire la situation in vivo, des m&#xE9;thodes fiables d&#x26;#39;extraction axoplasme de nerf entier serait utile pour les &#xE9;tudes m&#xE9;canistiques sur les axones. Ici, nous d&#xE9;velopper et d&#x26;#39;&#xE9;valuer une nouvelle proc&#xE9;dure pour la pr&#xE9;paration de axoplasme du nerf p&#xE9;riph&#xE9;rique chez le rat, bas&#xE9; sur l&#x26;#39;incubation d&#x26;#39;s&#xE9;par&#xE9;s segements courts de faisceaux nerveux dans un milieu hypotonique &#xE0; s&#xE9;parer de la my&#xE9;line et lyser structures nonaxonal, suivie par l&#x26;#39;extraction de l&#x26;#39;axone reste-mat&#xE9;riau enrichi. Nous montrons que cette nouvelle proc&#xE9;dure permet de r&#xE9;duire la contamination de cellules gliales et le s&#xE9;rum et facilite les analyses prot&#xE9;omiques de contenu axonales.

Isolement axoplasme de nerfs p&#xE9;riph&#xE9;riques

Lokalisierte &Auml;nderungen in der Zusammensetzung der axonalen Zytoplasma (Axoplasm) sind entscheidend f&uuml;r viele biologische Prozesse, einschlie&szlig;lich Axon Anleitung, Antworten zu Verletzungen, Neurit Auswuchs und Axon-Glia Interaktionen. Biochemische und Molekulare Studien dieser Mechanismen haben stark konzentriert auf in-vitro-Systemen wegen der Schwierigkeit, subzellulare Ausz&uuml;ge aus in-vivo S&auml;ugetier-Gewebe zu erhalten. Wie in Vitro Systeme m&ouml;glicherweise nicht repliziert die in-vivo Situation, zuverl&auml;ssige Methoden der Axoplasm Extraktion von ganzen Nerv w&auml;re hilfreich f&uuml;r mechanistische Studien &uuml;ber Axone. Hier wir Entwicklung und Bewertung ein neues Verfahrens zur Vorbereitung der Axoplasm aus Ratte peripherer Nerven, basierend auf einer Bebr&uuml;tungszeit von getrennten kurze Segmente der Nerv Faszikeln hypotones Medium zu trennen Myelin und Nonaxonal Strukturen, gefolgt durch Extraktion des verbleibenden Axon angereicherten Materials aufzul&ouml;sen. Wir zeigen, dass dieses neue Verfahren Serum und Gliazelle Kontamination reduziert und Proteomic Analysen axonale Inhaltsverzeichnis erleichtert.

Axoplasm Isolation von peripheren Nerven.

Localizzate le modifiche nella composizione del citoplasma assonale (assoplasma) sono fondamentali per molti processi biologici, tra cui orientamento assone, risposte a lesioni, escrescenza dei neuriti e assone-glia Interazioni. Studi di biochimici e molecolari di questi meccanismi sono stati fortemente concentrati su sistemi in vitro a causa della difficolt&agrave; di ottenere sottocellulari estratti da tessuti di mammiferi in vivo. Come in vitro sistemi non potrebbero replicare la situazione in vivo, affidabili metodi di estrazione assoplasma dall&#39;intero nervo sarebbe utile per gli Studi meccanicistici su assoni. Qui abbiamo sviluppare e valutare una nuova procedura per la preparazione di assoplasma da nervi periferici ratto, basato sull&#39;incubazione di separati brevi segmenti di fascicoli nervosi in mezzo ipotonico per separare la mielina e lyse nonaxonal strutture, seguite da estrazione del restante materiale arricchita di assone. Dimostriamo che questa nuova procedura riduce il siero e la contaminazione delle cellule gliali e facilita l&#39;analisi proteomic Sommario assonale.

Isolamento assoplasma dai nervi periferici.

&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x7D44;&#x6210;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5909;&#x66F4;&#xFF08;&#x8EF8;&#x7D22;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x8EF8;&#x7D22;&#x30AC;&#x30A4;&#x30C0;&#x30F3;&#x30B9;&#x3001;&#x50B7;&#x5BB3;&#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x7A81;&#x8D77;&#x4F38;&#x9577;&#x3057;&#x3001;&#x8EF8;&#x7D22;&#x30B0;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5206;&#x5B50;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x304D;&#x304F;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x7D44;&#x7E54;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x62BD;&#x51FA;&#x7269;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E;&#x96E3;&#x3057;&#x3055;&#x306E;in vitro&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x3066;&#x304D;&#x305F;&#x3002; in vivo&#x306E;&#x72B6;&#x6CC1;&#x3067;&#x8907;&#x88FD;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x8EF8;&#x7D22;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x62BD;&#x51FA;&#x306E;&#x4FE1;&#x983C;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;&#x8EF8;&#x7D22;&#x4E0A;&#x306E;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5F79;&#x7ACB;&#x3064;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30DF;&#x30A8;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x5206;&#x96E2;&#x3057;&#x3001;&#x6B8B;&#x308A;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306B;&#x5BCC;&#x3080;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x62BD;&#x51FA;&#x306B;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;nonaxonal&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x6EB6;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x4F4E;&#x5F35;&#x57F9;&#x5730;&#x4E2D;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x675F;&#x306E;&#x533A;&#x5207;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x77ED;&#x3044;segements&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x672B;&#x68A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x3092;&#x8ABF;&#x88FD;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x624B;&#x9806;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x3001;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E3;&#x306F;&#x3001;&#x8840;&#x6E05;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B0;&#x30EA;&#x30A2;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6DF7;&#x5165;&#x3092;&#x4F4E;&#x6E1B;&#x3057;&#x3001;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;&#x5185;&#x5BB9;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x672B;&#x68A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x5206;&#x96E2;

&#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB41C; axonal &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; (axoplasm)&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xBCC0;&#xD654;&#xB294; &#xB9CE;&#xC740; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xACFC;&#xC815;, &#xCD95; &#xC0AD; &#xC9C0;&#xCE68;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; neurite &#xD30C;&#xC0DD;&#xBB3C; &#xBD80;&#xC0C1;&#xACFC; axon &#xBA85;&#xACFC; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758; &#xC0DD; &#xD654; &#xD559;&#xC801; &#xBC0F; &#xBD84;&#xC790; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xBB34; &#xAC81; &#xAC8C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC870;&#xC9C1; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; subcellular &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;&#xC744; &#xC5BB;&#xAE30;&#xC758; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6C0; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xC9D1;&#xC911; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCCB4; &#xC678;&#xB85C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC0C1;&#xD669; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC804;&#xCCB4; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; axoplasm &#xCD94;&#xCD9C;&#xC758; &#xC2E0;&#xB8B0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95; &#xCD95; &#xC0AD;&#xC5D0; &#xAE30;&#xACC4; &#xB860; &#xC801;&#xC778; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774; &#xB420; &#xAC83; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558; &#xACE0; &#xD3C9;&#xAC00; axoplasm myelin&#xB97C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD558; &#xACE0; nonaxonal &#xAD6C;&#xC870;, &#xB098;&#xBA38;&#xC9C0; &#xCD95; &#xC0AD; &#xB18D;&#xCD95; &#xBB3C;&#xC9C8;&#xC758; &#xCD94;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBBF8;&#xD589;&#xC744; lyse &#xACE0;&#xC628; &#xB9E4;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xC2E0;&#xACBD; fascicles&#xC758; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB41C; &#xC9E7;&#xC740; &#xC5F4;&#xAD50;&#xD658;&#xAE30;&#xC758; &#xBD80; &#xD654;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC950; &#xB9D0; &#xCD08; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC900;&#xBE44;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC808;&#xCC28;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC0C8; &#xC774;&#xB807;&#xAC8C; &#xD608; &#xCCAD; &#xBC0F; &#xAD50; &#xC138;&#xD3EC; &#xC624;&#xC5FC; &#xAC10;&#xC18C; &#xBC0F; axonal &#xB0B4;&#xC6A9;&#xC758; proteomic &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB9D0; &#xCD08; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; axoplasm &#xACA9;&#xB9AC;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Cambios localizados en la composici&#xF3;n del citoplasma axonal (axoplasma) son fundamentales para muchos procesos biol&#xF3;gicos, incluyendo el direccionamiento del ax&#xF3;n, las respuestas a las lesiones, el crecimiento neur&#xED;tico, y las interacciones ax&#xF3;n-glia. Los estudios bioqu&#xED;micos y moleculares de estos mecanismos han sido fuertemente centrado en sistemas in vitro debido a la dificultad de obtenci&#xF3;n de extractos subcelulares de tejidos de mam&#xED;feros in vivo. Al igual que en sistemas in vitro no se puede reproducir la situaci&#xF3;n in vivo, m&#xE9;todos confiables de la extracci&#xF3;n de axoplasma de los nervios en su conjunto ser&#xED;a muy &#xFA;til para los estudios sobre los mecanismos de los axones. Aqu&#xED; desarrollar y evaluar un nuevo procedimiento para la preparaci&#xF3;n de axoplasma de nervio perif&#xE9;rico de rata, basado en la incubaci&#xF3;n de separados segements cortos de fasc&#xED;culos nerviosos en medio hipot&#xF3;nico para separar la mielina y lisar las estructuras nonaxonal, seguido por extracci&#xF3;n de los restantes ax&#xF3;n material enriquecido. Se demuestra que este nuevo procedimiento reduce la contaminaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas glial y el suero y facilita los an&#xE1;lisis prote&#xF3;micos de contenidos axonal.

Axoplasma Aislamiento de los nervios perif&#xE9;ricos

&#x9006;&#x884C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4ECE;&#x8F74;&#x7A81;&#x7D22;&#x739B;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5185;&#x5728;&#x518D;&#x751F;&#x673A;&#x5236;&#x5DF4;&#x80FA;&#x5916;&#x56F4;&#x7684;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143; &#xFF1B;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x635F;&#x4F24;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x8054;&#x7CFB;&#x4E0D;&#x662F;&#x5341;&#x5206;&#x6E05;&#x695A;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x4E8E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x7814;&#x7A76;&#x548C;&#x57FA;&#x56E0;&#x82AF;&#x7247;&#x6307;&#x8BC1;&#x5927;&#x7EA6; 900 &#x78F7;&#x9178;&#x9006;&#x884C;&#x635F;&#x4F24;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5728;&#x5927;&#x9F20;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x5750;&#x9AA8;&#x795E;&#x7ECF;&#x8F74;&#x7A81;&#x548C;&#x80CC;&#x6839;&#x795E;&#x7ECF;&#x8282;&#x635F;&#x4F24;&#x4F53;&#x5185;&#x53CD;&#x5E94;&#x5927;&#x7EA6; 4500 &#x6210;&#x7EE9;&#x5355;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x96C6;&#x7684;&#x8BA1;&#x7B97;&#x5206;&#x6790;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x5927;&#x7EA6; 400 &#x5197;&#x4F59;&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x4FE1;&#x4EE4;&#x7F51;&#x7EDC;&#x8FDE;&#x63A5;&#x5230; 39 &#x5377;&#x5165;&#x5BF9;&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x635F;&#x4F24;&#x7684;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;&#x4E2A;&#x522B;&#x4EFB;&#x804C;&#x4EBA;&#x6570;&#x8FC7;&#x591A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x96C6;&#x7EBF;&#x5668;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC; Abl&#x3001; AKT&#x3001; p38&#x3001; &#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C &#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x6444;&#x52A8;&#x5F71;&#x54CD;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x7A81;&#x8D77;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x77DB;&#x76FE;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;Abl &#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6;&#x96C6;&#x7EBF;&#x5668;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x7684;&#x6270;&#x52A8;&#x4E86;&#x76F8;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x5355;&#x4E2A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x6444;&#x52A8;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x795E;&#x7ECF;&#x635F;&#x4F24;&#x53CD;&#x5E94;&#x7531;&#x591A;&#x4E2A;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7EC4;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x63A7;&#x5236;&#x548C;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x7F51;&#x7EDC;&#x5197;&#x4F59;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5230;&#x635F;&#x4F24;&#x54CD;&#x5E94;&#x9C81;&#x68D2;&#x6027;&#x3002;

&#x4E2D;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x9006;&#x884C;&#x635F;&#x4F24;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7F51;&#x7EDC;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;

Retrograde signaling from axon to soma activates intrinsic regeneration mechanisms in lesioned peripheral sensory neurons; however, the links between axonal injury signaling and the cell body response are not well understood. Here, we used phosphoproteomics and microarrays to implicate approximately 900 phosphoproteins in retrograde injury signaling in rat sciatic nerve axons in vivo and approximately 4500 transcripts in the in vivo response to injury in the dorsal root ganglia. Computational analyses of these data sets identified approximately 400 redundant axonal signaling networks connected to 39 transcription factors implicated in the sensory neuron response to axonal injury. Experimental perturbation of individual overrepresented signaling hub proteins, including Abl, AKT, p38, and protein kinase C, affected neurite outgrowth in sensory neurons. Paradoxically, however, combined perturbation of Abl together with other hub proteins had a reduced effect relative to perturbation of individual proteins. Our data indicate that nerve injury responses are controlled by multiple regulatory components, and suggest that network redundancies provide robustness to the injury response.

Signaling to transcription networks in the neuronal retrograde injury response.

Signalisation r&#xE9;trograde de l&#x26;#39;axone vers le soma active des m&#xE9;canismes de r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;ration intrins&#xE8;ques dans l&#xE9;s&#xE9;s neurones sensoriels p&#xE9;riph&#xE9;riques, mais les liens entre la signalisation des l&#xE9;sions axonales et la r&#xE9;ponse du corps cellulaire ne sont pas bien comprises. Ici, nous avons utilis&#xE9; phosphoprot&#xE9;omique et des micror&#xE9;seaux d&#x26;#39;impliquer environ 900 phosphoprot&#xE9;ines des blessures r&#xE9;trograde de signalisation dans les axones du nerf sciatique de rat in vivo et environ 4500 dans les transcriptions de la r&#xE9;ponse in vivo &#xE0; des blessures dans les ganglions de la racine dorsale. Analyses computationnelles de ces ensembles de donn&#xE9;es identifi&#xE9; environ 400 r&#xE9;seaux de signalisation redondants axonales connect&#xE9;s &#xE0; 39 facteurs de transcription impliqu&#xE9;s dans la r&#xE9;ponse des neurones sensoriels de l&#xE9;sions axonales. Perturbation exp&#xE9;rimentale de l&#x26;#39;individu surrepr&#xE9;sent&#xE9;s prot&#xE9;ines de signalisation, y compris les moyeux Abl, AKT, p38, et la prot&#xE9;ine kinase C, affect&#xE9; la croissance des neurites dans les neurones sensoriels. Paradoxalement, cependant, des perturbations combin&#xE9; de Abl ainsi que les prot&#xE9;ines du moyeu d&#x26;#39;autres ont eu un effet r&#xE9;duite par rapport &#xE0; la perturbation des prot&#xE9;ines individuelles. Nos donn&#xE9;es indiquent que les r&#xE9;ponses des blessures nerveuses sont contr&#xF4;l&#xE9;s par de multiples composants de r&#xE9;gulation, et de sugg&#xE9;rer que les licenciements du r&#xE9;seau offrent la robustesse de la r&#xE9;ponse des blessures.

Signalisation aux r&#xE9;seaux de transcription dans la r&#xE9;ponse neuronale r&#xE9;trograde des blessures

Retrograde Signalisierung von Axon Soma aktiviert systeminterne Regenerierung Mechanismen in lesioned periphere sensorische Neuronen; Allerdings sind die Verbindungen zwischen axonale Sch&auml;digung zu signalisieren und die Zellk&ouml;rper Antwort nicht gut verstanden. Hier haben wir Phosphoproteomics und Microarrays rund 900 Phosphoproteine retrograde Verletzungen signalisieren in Ratte Ischiasnerv Axone in-vivo und etwa 4500 Abschriften der in-vivo als Reaktion auf Verletzung in den Spinalganglien hineinzuziehen. Computational Analysen diese Datens&auml;tze identifiziert rund 400 redundante axonale Signalling verbundenen Netzwerke zu 39 Transkriptionsfaktoren, die die sensorischen Neuron-Reaktion auf axonale Sch&auml;digung in Verbindung gebracht. Experimentelle St&ouml;rung individueller &uuml;berrepr&auml;sentiert Signalling Hub-Proteine, einschlie&szlig;lich Abl, AKT, p38 und Proteinkinase C, betroffen Neurit Auswuchs in sensorischen Neuronen. Paradoxerweise hatte jedoch kombinierte St&ouml;rung von Abl zusammen mit anderen Proteinen Nabe eine geringere Wirkung im Verh&auml;ltnis zu einer St&ouml;rung der einzelnen Proteine. Unsere Daten zeigen, dass Nerven Verletzung Antworten von mehreren regulatorische Komponenten kontrolliert werden und schlagen vor, da&szlig; Netzwerk Entlassungen Robustheit der Verletzung Antwort bieten.

Signalisierung Transkription Netzwerke in der neuronalen retrograde Verletzungen-Antwort.

Segnalazione retrograda dall&#39;axon a soma attiva meccanismi di rigenerazione intrinseco in elettivamente neuroni sensoriali periferici; Tuttavia, i collegamenti tra la segnalazione di danno assonale e la risposta del corpo cellulare non sono ben compresi. Qui, abbiamo usato phosphoproteomics e microarrays per implicare circa 900 fosfoproteine retrograda lesioni segnalazione in circa 4500 trascrizioni nella risposta in vivo a lesioni nei gangli spinali e assoni di nervo sciatico di ratto in vivo. Analisi computazionale di questi insiemi di dati identificati circa 400 ridondante assonale segnalazione reti collegate al 39 fattori di trascrizione implicati nella risposta al danno assonale neurone sensoriale. Perturbazione sperimentale di singoli sovrarappresentati segnalazione hub proteine, tra cui Abl, AKT e p38 chinasi di proteina C, colpite escrescenza dei neuriti in neuroni sensoriali. Paradossalmente, tuttavia, perturbazione combinato di Abl insieme ad altre proteine hub ha avuto un effetto ridotto rispetto alla perturbazione delle singole proteine. I nostri dati indicano che risposte lesioni nervose sono controllate da pi&ugrave; componenti di regolamentazione e suggeriscono che licenziamenti rete forniscano robustezza alla risposta lesioni.

Segnalazione alle reti di trascrizione nella risposta lesione neuronale retrograda.

&#x8EF8;&#x7D22;&#x304B;&#x3089;&#x7D30;&#x80DE;&#x4F53;&#x3078;&#x306E;&#x9006;&#x884C;&#x6027;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306F;&#x3001;&#x75C5;&#x5909;&#x672B;&#x68A2;&#x611F;&#x899A;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x518D;&#x751F;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x8EF8;&#x7D22;&#x640D;&#x50B7;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x4F53;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x306F;&#x3001;&#x3088;&#x304F;&#x7406;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x5750;&#x9AA8;&#x795E;&#x7D4C;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;&#x9006;&#x884C;&#x6027;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3051;&#x304C;&#x3067;&#x7D04;900&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x5DFB;&#x304D;&#x8FBC;&#x3080;&#x3068;&#x5F8C;&#x6839;&#x795E;&#x7D4C;&#x7BC0;&#x306E;&#x640D;&#x50B7;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x751F;&#x4F53;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x7D04;4500&#x8EE2;&#x5199;&#x3059;&#x308B;phosphoproteomics&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x8A08;&#x7B97;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x8EF8;&#x7D22;&#x640D;&#x50B7;&#x306E;&#x611F;&#x899A;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;39&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306B;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x7D04;400&#x5197;&#x9577;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#xB7;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x3092;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x6442;&#x52D5;&#x306F;&#x3001;ABL&#x3001;AKT&#x3001;P38&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;C&#x3001;&#x611F;&#x899A;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x305F;&#x795E;&#x7D4C;&#x7A81;&#x8D77;&#x4F38;&#x9577;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30CF;&#x30D6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x3001;&#x4EE3;&#x8868;&#x8005;&#x306E;&#x591A;&#x904E;&#x304E;&#x308B;&#x3002;&#x9006;&#x8AAC;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x30CF;&#x30D6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;Abl&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x6442;&#x52D5;&#x306F;&#x3001;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6442;&#x52D5;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x6E1B;&#x5C11;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x640D;&#x50B7;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306F;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x6210;&#x5206;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x5197;&#x9577;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x50B7;&#x5BB3;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x5805;&#x7262;&#x6027;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x795E;&#x7D4C;&#x9006;&#x884C;&#x6027;&#x50B7;&#x5BB3;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x3078;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;

Lesioned &#xC8FC;&#xBCC0; &#xAC10;&#xAC01; &#xB274;&#xB7F0;;&#xC5D0; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC18C;&#xB9C8;&#xB97C; &#xCD95; &#xC0AD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD1F4;&#xD589; &#xC131; &#xC2E0;&#xD638; &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, axonal &#xBD80;&#xC0C1; &#xC2E0;&#xD638; &#xBC0F; &#xC140; &#xBC14;&#xB514; &#xC751;&#xB2F5; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xB9C1;&#xD06C;&#xB294; &#xC798; &#xC774;&#xD574; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD1F4;&#xD589; &#xC131; &#xBD80;&#xC0C1; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC950; &#xC88C; &#xACE8; &#xC2E0;&#xACBD; &#xCD95; &#xC0AD;&#xACFC; &#xB290; &#xB8E8;&#xD2B8; &#xC911;&#xCD94;&#xC5D0; &#xBD80;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC57D; 4500 &#xB179;&#xCDE8; &#xB85D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC57D; 900 phosphoproteins &#xC5F0;&#xB8E8;&#xB97C; phosphoproteomics &#xBC0F; microarrays &#xC0AC;&#xC6A9;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC138;&#xD2B8;&#xC758; &#xC804;&#xC0B0; &#xBD84;&#xC11D; &#xC57D; 400 &#xC911;&#xBCF5; axonal &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; axonal &#xBD80;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC10;&#xAC01; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5F0;&#xB8E8; 39 &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778; &#xD655;&#xC778;. &#xAC1C;&#xBCC4; overrepresented &#xC2E0;&#xD638; &#xD5C8;&#xBE0C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, Abl, AKT, p38, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C, &#xB4F1;&#xC758; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC801;&#xC778; &#xC12D; &#xB3D9; neurite &#xD30C;&#xC0DD;&#xBB3C; &#xAC10;&#xAC01; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xC5ED;&#xC124;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;,, &#xB2E4;&#xB978; &#xD5C8;&#xBE0C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD568;&#xAED8; Abl&#xC758; &#xACB0;&#xD569; &#xB41C; &#xC12D; &#xB3D9; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC12D; &#xB3D9;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC778; &#xAC10;&#xC18C; &#xD6A8;&#xACFC;&#xAC00; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBD80;&#xC0C1; &#xC751;&#xB2F5; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xADDC;&#xC81C; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xC5B4; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xC911;&#xBCF5; &#xACAC;&#xACE0;&#xC131; &#xBD80;&#xC0C1; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2E0;&#xACBD; &#xD1F4;&#xD589; &#xC131; &#xBD80;&#xC0C1; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xC0AC; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xC2E0;&#xD638;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Se&#xF1;alizaci&#xF3;n retr&#xF3;grada del ax&#xF3;n hasta el soma activa los mecanismos intr&#xED;nsecos de regeneraci&#xF3;n en las neuronas sensoriales perif&#xE9;ricas lesionadas, sin embargo, los v&#xED;nculos entre la se&#xF1;alizaci&#xF3;n de lesi&#xF3;n axonal y la respuesta de las c&#xE9;lulas del cuerpo no son bien entendidos. En este caso, hemos utilizado fosfoprote&#xF3;mica y microarrays para implicar a unos 900 fosfoprote&#xED;nas en la lesi&#xF3;n retr&#xF3;grada de se&#xF1;alizaci&#xF3;n en los axones del nervio ci&#xE1;tico de ratas in vivo y de cerca de 4.500 expedientes en la respuesta in vivo a una lesi&#xF3;n en los ganglios de la ra&#xED;z dorsal. An&#xE1;lisis computacional de estos conjuntos de datos identificado aproximadamente 400 redes redundantes de se&#xF1;alizaci&#xF3;n axonal conectados a 39 factores de transcripci&#xF3;n implicados en la respuesta de las neuronas sensoriales a la lesi&#xF3;n axonal. Perturbaci&#xF3;n experimental del individuo excesivamente representados prote&#xED;nas de se&#xF1;alizaci&#xF3;n del cubo, incluyendo Abl, AKT, p38 y la prote&#xED;na quinasa C, fruto afectado neuritas en las neuronas sensoriales. Parad&#xF3;jicamente, sin embargo, perturbaci&#xF3;n combinada de Abl junto con las prote&#xED;nas otro cubo ten&#xED;a un efecto reducido en relaci&#xF3;n a la perturbaci&#xF3;n de las prote&#xED;nas individuales. Nuestros datos indican que las respuestas nerviosas de lesiones son controlados por m&#xFA;ltiples elementos de regulaci&#xF3;n, y sugieren que los despidos de red proporcionan robustez a la respuesta de la lesi&#xF3;n.

Se&#xF1;alizaci&#xF3;n de redes de transcripci&#xF3;n en la respuesta de lesi&#xF3;n neuronal retr&#xF3;grada

&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x808C;&#x662F;&#x4ECE;&#x6839;&#x672C;&#x4E0A;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x8FD0;&#x8F93;&#x5404;&#x79CD;&#x57FA;&#x672C;&#x8D27;&#x7269;&#x6CBF;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x5728;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5185;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x771F;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6B64;&#x590D;&#x6742;&#x8FD8;&#x5728;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x66F4;&#x52A0;&#x4E13;&#x95E8;&#x5316;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#x3002;&#x8BE5;&#x5EFA;&#x7B51;&#x7FA4;&#x5305;&#x62EC;&#x86CB;&#x767D;&#x7684; 11 &#x4EA4;&#x4E92;&#x76F8;&#x4E92;&#x4E4B;&#x95F4;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4E0E;&#x5916;&#x90E8;&#x9002;&#x914D;&#x5668;&#x3001; &#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x6784;&#x53CA;&#x8D27;&#x7269;&#x7684;&#x7C7B;&#x578B;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x808C;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x77E5;&#x4E4B;&#x8F83;&#x5C11;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#x7684;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x548C;&#x51E0;&#x4E2A;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x4E2D;&#x5B58;&#x5728;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x6211;&#x4EEC;&#x80FD;&#x591F;&#x63A2;&#x7D22;&#x6574;&#x4E2A;&#x6709;&#x673A;&#x4F53;&#x7684;&#x4E0A;&#x4E0B;&#x6587;&#x4E2D;&#x808C;&#x63A7;&#x5236;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x7F3A;&#x9677;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x91C7;&#x53D6;&#x4E00;&#x57FA;&#x56E0;&#x578B;&#x9A71;&#x52A8;&#x7684;&#x529E;&#x6CD5;&#x5728;&#x9F20;&#x6807; (&#x9F20;) &#x6765;&#x5206;&#x6790;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E9A;&#x57FA;&#xFF0C;&#x808C;&#x8F7B;&#x4E2D;&#x95F4;&#x94FE; 1 (Dync1li1) &#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x51FA;&#x4EBA;&#x610F;&#x6599;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5728; N235Y &#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6539;&#x53D8;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#xFF0C;&#x5982;&#x4ECE;&#x4F53;&#x5185;&#x7814;&#x7A76;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x56FD;&#x5BB6;&#x7684;&#x76AE;&#x5C42;&#x548C;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x4E2D;&#x6240;&#x793A;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x5C0F;&#x9F20;&#x663E;&#x793A;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x7126;&#x8651;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x9996;&#x6B21;&#x5C06;&#x808C;&#x529F;&#x80FD;&#x94FE;&#x63A5;&#x5230;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x884C;&#x4E3A;&#x8868;&#x578B;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x808C;&#x63A7;&#x5236;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0E;&#x6B63;&#x786E;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x7684;&#x808C;&#x8F7B;&#x4E2D;&#x95F4;&#x94FE; 1 &#x7A81;&#x53D8;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x8868;&#x578B;&#x3002;

The cytoplasmic dynein complex is fundamentally important to all eukaryotic cells for transporting a variety of essential cargoes along microtubules within the cell. This complex also plays more specialized roles in neurons. The complex consists of 11 types of protein that interact with each other and with external adaptors, regulators and cargoes. Despite the importance of the cytoplasmic dynein complex, we know comparatively little of the roles of each component protein, and in mammals few mutants exist that allow us to explore the effects of defects in dynein-controlled processes in the context of the whole organism. Here we have taken a genotype-driven approach in mouse (Mus musculus) to analyze the role of one subunit, the dynein light intermediate chain 1 (Dync1li1). We find that, surprisingly, an N235Y point mutation in this protein results in altered neuronal development, as shown from in vivo studies in the developing cortex, and analyses of electrophysiological function. Moreover, mutant mice display increased anxiety, thus linking dynein functions to a behavioral phenotype in mammals for the first time. These results demonstrate the important role that dynein-controlled processes play in the correct development and function of the mammalian nervous system.

Behavioral and other phenotypes in a cytoplasmic Dynein light intermediate chain 1 mutant mouse.

Le complexe dyn&#xE9;ine cytoplasmique est fondamentalement important pour toutes les cellules eucaryotes pour le transport de diverses cargaisons essentielles le long des microtubules dans la cellule. Ce complexe joue &#xE9;galement des r&#xF4;les plus sp&#xE9;cialis&#xE9;s dans les neurones. Le complexe se compose de 11 types de prot&#xE9;ines qui interagissent les uns avec les autres et avec des adaptateurs externes, des r&#xE9;gulateurs et des cargaisons. Malgr&#xE9; l&#x26;#39;importance du complexe dyn&#xE9;ine cytoplasmique, nous savons relativement peu des r&#xF4;les de chaque prot&#xE9;ine composant, et chez les mammif&#xE8;res mutants existent qui nous permettent d&#x26;#39;explorer les effets des d&#xE9;fauts dans la dyn&#xE9;ine processus contr&#xF4;l&#xE9;s dans le contexte de l&#x26;#39;organisme entier. Ici, nous avons adopt&#xE9; une approche ax&#xE9;e sur le g&#xE9;notype de la souris (Mus musculus) &#xE0; analyser le r&#xF4;le d&#x26;#39;un sous-unit&#xE9;, la dyn&#xE9;ine lumi&#xE8;re interm&#xE9;diaire de la cha&#xEE;ne 1 (Dync1li1). Nous constatons que, de fa&#xE7;on surprenante, une mutation ponctuelle dans cette N235Y r&#xE9;sultats de prot&#xE9;ines dans le d&#xE9;veloppement neuronal modifi&#xE9;, comme indiqu&#xE9; par des &#xE9;tudes in vivo dans le cortex en d&#xE9;veloppement, et les analyses de la fonction &#xE9;lectrophysiologique. En outre, les souris mutantes afficher augmentation de l&#x26;#39;anxi&#xE9;t&#xE9;, reliant ainsi les fonctions de dyn&#xE9;ine &#xE0; un ph&#xE9;notype comportemental chez les mammif&#xE8;res pour la premi&#xE8;re fois. Ces r&#xE9;sultats d&#xE9;montrent le r&#xF4;le important que la dyn&#xE9;ine processus contr&#xF4;l&#xE9;s par jouer dans le d&#xE9;veloppement correct et la fonction du syst&#xE8;me nerveux des mammif&#xE8;res.

Ph&#xE9;notypes comportementaux et autres dans une lumi&#xE8;re dyn&#xE9;ine cytoplasmique interm&#xE9;diaire cha&#xEE;ne 1 de souris mutantes

Die cytoplasmatische Dynein Komplex ist grundlegend wichtig, alle eukaryotischen Zellen f&uuml;r den Transport von eine Vielzahl von wesentlichen Frachten entlang der Mikrotubuli innerhalb der Zelle. Dieser Komplex spielt auch spezialisiertere Rollen in Neuronen. Der Komplex besteht aus 11 Arten von Protein, die untereinander und mit externen Adapter, Regulierungsbeh&ouml;rden und Ladungen interagieren. Trotz der Bedeutung der komplexen cytoplasmatische Dynein vergleichsweise wenig der Rollen der einzelnen Komponenten-Protein bekannt und bei S&auml;ugetieren existieren einige Mutanten, die uns erm&ouml;glichen, die Auswirkungen von M&auml;ngeln Dynein-gesteuerte Prozesse im Kontext des gesamten Organismus zu erkunden. Hier haben wir eine Genotyp-gesteuerte Maus (Mus Musculus) analysieren die Rolle der eine Untereinheit, die Dynein Mittelstufe Leichtketten 1 (Dync1li1) Ansatz. Wir finden, dass &uuml;berraschenderweise eine Punktmutation N235Y in dieses Protein in ver&auml;nderte neuronale Entwicklung, Ergebnisse, wie von in-vivo-Studien in die Entwicklung der Hirnrinde, und Analysen der elektrophysiologischen Funktion gezeigt. Dar&uuml;ber hinaus zeigen Mutante M&auml;use erh&ouml;hten Angst, damit verkn&uuml;pfen Dynein-Funktionen mit einer verhaltensbasierten Ph&auml;notyp bei S&auml;ugetieren zum ersten Mal. Diese Ergebnisse zeigen die wichtige Rolle, die die richtige Entwicklung und Funktion des S&auml;ugetier-Nervensystems Dynein-gesteuerte Prozesse spielen.

Verhaltens- und andere Ph&auml;notypen in eine cytoplasmatische Dynein Leichtketten Mittelstufe 1 mutant Maus.

La dineina citoplasmatica complesso &egrave; di fondamentale importanza per tutte le cellule eucariote per trasportare una variet&agrave; di carichi essenziali lungo microtubuli all&#39;interno della cellula. Questo complesso, svolge ruoli pi&ugrave; specializzati in neuroni. Il complesso &egrave; costituito da 11 tipi di proteine che interagiscono con gli altri e con carichi, regolatori e adattatori esterni. Nonostante l&#39;importanza della dineina citoplasmatica complessa, sappiamo relativamente poco dei ruoli di ciascuna proteina componente, e nei mammiferi pochi mutanti esistano che ci permettono di esplorare gli effetti dei difetti nei processi di dineina controllata nel contesto dell&#39;intero organismo. Qui abbiamo preso un approccio orientato al genotipo nel topo (Mus musculus) per analizzare il ruolo di una subunit&agrave;, la dineina luce catena intermedio 1 (Dync1li1). Troviamo che, sorprendentemente, una mutazione puntiforme N235Y in questa proteina risultati nello sviluppo neuronale alterato, come dimostrato da studi in vivo su corteccia in via di sviluppo e analisi della funzione elettrofisiologica. Inoltre, topi mutanti visualizzano maggiore ansia, collegando cos&igrave; dineina funzioni un fenotipo comportamentale nei mammiferi per la prima volta. Questi risultati dimostrano l&#39;importante ruolo che i processi controllati dineina giocano nel corretto sviluppo e funzione del sistema nervoso dei mammiferi.

Fenotipi comportamentali e altri in citoplasmatico mouse catena leggera intermedio 1 dineina mutante.

&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3067;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x3066;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x8CA8;&#x7269;&#x306E;&#x69D8;&#x3005;&#x3092;&#x8F38;&#x9001;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x771F;&#x6838;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x5C02;&#x9580;&#x7684;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x4E92;&#x3044;&#x306B;&#x53CA;&#x3073;&#x5916;&#x90E8;&#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x3001;&#x898F;&#x5236;&#x5F53;&#x5C40;&#x3068;&#x8CA8;&#x7269;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;11&#x7A2E;&#x985E;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x5404;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x77E5;&#x3063;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x3067;&#x306F;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x751F;&#x7269;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x5236;&#x5FA1;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x63A2;&#x7D22;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;1&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3001;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x8EFD;&#x4E2D;&#x9593;&#x9396;1&#xFF08;Dync1li1&#xFF09;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#xFF08;&#x30CF;&#x30C4;&#x30AB;&#x30CD;&#x30BA;&#x30DF;&#xFF09;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x578B;&#x4E3B;&#x5C0E;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x3068;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x9A5A;&#x304F;&#x3079;&#x304D;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x795E;&#x7D4C;&#x767A;&#x9054;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;N235Y&#x70B9;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x9014;&#x4E0A;&#x76AE;&#x8CEA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;in vivo&#x8A66;&#x9A13;&#x304B;&#x3089;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x308A;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x5909;&#x7570;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x521D;&#x3081;&#x3066;&#x306E;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x884C;&#x52D5;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306B;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3057;&#x3001;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x4E0D;&#x5B89;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x5236;&#x5FA1;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306E;&#x6B63;&#x5E38;&#x306A;&#x767A;&#x9054;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD68C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC140; &#xB0B4;&#xC758; microtubules &#xB530;&#xB77C; &#xD544;&#xC218; &#xD654;&#xBB3C; &#xC218;&#xC1A1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC9C4; &#xD575; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xADFC;&#xBCF8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C;&#xC740; &#xB610;&#xD55C; &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC804;&#xBB38;&#xC801;&#xC778;&#xB41C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC678;&#xBD80; &#xC5B4;&#xB311;&#xD130;, &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xBC0F; &#xD654;&#xBB3C; &#xD558; &#xACE0; &#xC11C;&#xB85C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; 11 &#xD615;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD68C; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBE44;&#xAD50;&#xC801; &#xC791;&#xC740; &#xAC01; &#xAD6C;&#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC54C;&#xACE0; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958;&#xC5D0; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC804;&#xCCB4; &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4;&#xC758; &#xCEE8;&#xD14D;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD68C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACB0;&#xD568;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xD0D0;&#xAD6C; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC874;&#xC7AC;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; (&#xC0DD;&#xC950;) &#xD55C; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;, &#xD68C; &#xBE5B; &#xC911;&#xAC04; &#xCCB4;&#xC778; 1 (Dync1li1)&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558;&#xC5D0; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD615; &#xAD6C;&#xB3D9; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC744; &#xCD2C;&#xC601; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294;, &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;,&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; N235Y &#xC810; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACB0;&#xACFC; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD53C; &#xC9C8;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; electrophysiological &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0;&#xC11C; in vivo &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC640; &#xAC19;&#xC774; &#xCC3E;&#xC73C;&#xC2ED;&#xC2DC;&#xC624;. &#xB610;&#xD55C;, &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC0DD;&#xC950; &#xC99D;&#xAC00; &#xBD88;&#xC548;, &#xCC98;&#xC74C;&#xC73C;&#xB85C; &#xD68C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD589;&#xB3D9; &#xD45C;&#xD604; &#xD615;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD45C;&#xC2DC;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xD68C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xC62C;&#xBC14;&#xB978; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBC0F; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD68C; &#xBE5B; &#xC911;&#xAC04; &#xCCB4;&#xC778; 1 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD589;&#xB3D9; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E4;&#xB978; &#xACE0;&#xAE30;.

El complejo dine&#xED;na citoplasm&#xE1;tica es de importancia fundamental para todas las c&#xE9;lulas eucariotas para el transporte de una variedad de cargas esenciales a lo largo de los microt&#xFA;bulos de la c&#xE9;lula. Este complejo tambi&#xE9;n desempe&#xF1;a funciones m&#xE1;s especializadas en las neuronas. El complejo consta de 11 tipos de prote&#xED;nas que interact&#xFA;an entre s&#xED; y con los adaptadores externos, reguladores y las cargas. A pesar de la importancia del complejo dine&#xED;na citoplasm&#xE1;tica, sabemos relativamente poco de los roles de cada componente proteico, y en los mam&#xED;feros existen pocos mutantes que nos permiten explorar los efectos de los defectos de dine&#xED;na procesos controlados en el contexto de todo el organismo. Aqu&#xED; hemos adoptado un enfoque basado en el genotipo del rat&#xF3;n (Mus musculus) para analizar el papel de una subunidad, la cadena ligera de dine&#xED;na intermedio 1 (Dync1li1). Nos parece que, sorprendentemente, una mutaci&#xF3;n puntual en el N235Y esta prote&#xED;na resulta en el desarrollo neuronal alterada, como se muestra en los estudios in vivo en el desarrollo de la corteza, y el an&#xE1;lisis de la funci&#xF3;n electrofisiol&#xF3;gica. Por otra parte, los ratones mutantes muestran aumento de la ansiedad, vinculando as&#xED; las funciones de dine&#xED;na a un fenotipo conductual en los mam&#xED;feros, por primera vez. Estos resultados demuestran el importante papel que dine&#xED;na procesos controlados por jugar en el correcto desarrollo y funcionamiento del sistema nervioso de los mam&#xED;feros.

Fenotipos conductuales y de otro con una luz dine&#xED;na citoplasm&#xE1;tica intermedio de la cadena un rat&#xF3;n mutante

&#x9006;&#x884C;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x635F;&#x4F24;&#x4FE1;&#x53F7;&#x523A;&#x6FC0;&#x5916;&#x56F4;&#x5DF4;&#x80FA;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;Importins &#x9006;&#x884C;&#x8FD0;&#x8F93;&#x4E2D;&#x7684;&#x53C2;&#x4E0E;&#x8868;&#x660E;&#x5728;&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x635F;&#x4F24;&#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x76F4;&#x63A5;&#x53C2;&#x4E0E;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50; &#xFF08;TFs&#xFF09;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x591A;&#x4E2A; TFs &#x5728;&#x795E;&#x7ECF;&#x8F74;&#x7A81;&#x4E2D;&#x627E;&#x5230;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5C06;&#x4E0E;&#x5728;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8F74;&#x6D46;&#x4ECE;&#x53D7;&#x635F;&#x795E;&#x7ECF;&#x808C;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x751F;&#x5316;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x4E3A;&#x4E00;&#x4E2A; TF &#x5BB6;&#x5EAD;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x4E86;&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22; STAT3 &#x662F;&#x672C;&#x5730;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x548C;&#x540E;&#x635F;&#x4F24;&#xFF0C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x808C;&#x548C;&#x79C9;&#x6301; &alpha;5 &#x8C03;&#x8282;&#x5916;&#x56F4;&#x7684;&#x611F;&#x89C9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x635F;&#x4F24;&#x540E;&#x751F;&#x5B58;&#x9006;&#x884C;&#x8FD0;&#x9001;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x8F74;&#x7D22;&#x75C5;&#x53D8;&#x90E8;&#x4F4D; TFs &#x7684;&#x9006;&#x884C;&#x8FD0;&#x8F93;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x8F74;&#x7A81;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x8054;&#x7CFB;&#x3002;

&#x9006;&#x884C;&#x5728;&#x635F;&#x4F24;&#x5468;&#x56F4;&#x795E;&#x7ECF;&#x8F74;&#x7A81;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x7D20;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;

Retrograde axonal injury signalling stimulates cell body responses in lesioned peripheral neurons. The involvement of importins in retrograde transport suggests that transcription factors (TFs) might be directly involved in axonal injury signalling. Here, we show that multiple TFs are found in axons and associate with dynein in axoplasm from injured nerve. Biochemical and functional validation for one TF family establishes that axonal STAT3 is locally translated and activated upon injury, and is transported retrogradely with dynein and importin Î±5 to modulate survival of peripheral sensory neurons after injury. Hence, retrograde transport of TFs from axonal lesion sites provides a direct link between axon and nucleus.

Axonal transcription factors signal retrogradely in lesioned peripheral nerve.

R&#xE9;trograde de signalisation des l&#xE9;sions axonales stimule les r&#xE9;ponses du corps cellulaire dans l&#xE9;s&#xE9;s neurones p&#xE9;riph&#xE9;riques. L&#x26;#39;implication des importines dans le transport r&#xE9;trograde sugg&#xE8;re que des facteurs de transcription (FT) pourrait &#xEA;tre directement impliqu&#xE9;e dans la signalisation des l&#xE9;sions axonales. Ici, nous montrons que plusieurs facteurs de transcription se trouvent dans les axones et de s&#x26;#39;associer avec la dyn&#xE9;ine dans axoplasme du nerf l&#xE9;s&#xE9;. La validation biochimique et fonctionnel pour une famille TF &#xE9;tablit que STAT3 axonale est localement traduit et activ&#xE9; lors d&#x26;#39;une l&#xE9;sion, et est transport&#xE9; par voie r&#xE9;trograde avec la dyn&#xE9;ine et importine &#x3B1;5 de moduler la survie des neurones sensoriels p&#xE9;riph&#xE9;riques apr&#xE8;s la blessure. Par cons&#xE9;quent, le transport r&#xE9;trograde de FO &#xE0; partir de sites de l&#xE9;sion axonale fournit un lien direct entre l&#x26;#39;axone et le noyau.

Facteurs de transcription axonales signal r&#xE9;trograde dans des nerfs p&#xE9;riph&#xE9;riques l&#xE9;s&#xE9;s

Retrograde axonale Sch&auml;digung Signalisierung stimuliert Zellk&ouml;rper Antworten in lesioned peripheren Neuronen. Die Einbeziehung der Importins retrograde Transport zufolge Transkriptionsfaktoren (TFs) direkt in die axonale Sch&auml;digung Signalisierung einbezogen werden k&ouml;nnte. Hier zeigen wir, dass mehrere TFs findet man in Axonen und Dynein in Axoplasm von verletzten Nerv zuordnen. Biochemische und funktionelle Validierung f&uuml;r eine TF-Familie legt fest, dass axonale STAT3 lokal ist &uuml;bersetzt beim Verletzungen aktiviert und ist retrogradely mit Dynein und importin &alpha;5, &Uuml;berleben der peripheren sensorischen Neuronen nach Verletzung modulieren transportiert. Retrograde Transport von TFs von axonale L&auml;sion Websites stellt daher eine direkte Verbindung zwischen Axon und Nucleus.

Axonale Transkription Faktoren Signal retrogradely in lesioned peripherer Nerven.

Segnalazione danno assonale retrogrado stimola risposte corpo delle cellule in neuroni periferici elettivamente. Il coinvolgimento di importins nel trasporto retrogrado suggerisce che i fattori di trascrizione (TFs) potrebbero essere coinvolti direttamente nella lesione assonale segnalazione. Qui, vi mostriamo che TFs multiple sono trovati in assoni e associare dineina nell&#39;assoplasma dal nervo ferito. Convalida biochimica e funzionale per una famiglia TF stabilisce che assonale STAT3 &egrave; localmente tradotto e attivato su lesioni e viene trasportata retrogradely con dineina e importin &alpha;5 a modulare la sopravvivenza dei neuroni sensoriali periferici dopo l&#39;infortunio. Quindi, il trasporto retrogrado del TFs da siti di lesione assonale fornisce un collegamento diretto tra assone e nucleo.

Assonale trascrizione fattori segnale retrogradely in elettivamente dei nervi periferici.

&#x9006;&#x884C;&#x6027;&#x8EF8;&#x7D22;&#x640D;&#x50B7;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306F;&#x3001;&#x75C5;&#x5909;&#x672B;&#x68A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x4F53;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x9006;&#x884C;&#x6027;&#x8F38;&#x9001;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x306F;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF08;TF&#xFF09;&#x304C;&#x76F4;&#x63A5;&#x8EF8;&#x7D22;&#x640D;&#x50B7;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;TF&#x304C;&#x8EF8;&#x7D22;&#x3068;&#x50B7;&#x3064;&#x3044;&#x305F;&#x795E;&#x7D4C;&#x304B;&#x3089;&#x8EF8;&#x7D22;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x306B;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; 1 TF&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x691C;&#x8A3C;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;STAT3&#x304C;&#x5C40;&#x6240;&#x7684;&#x306B;&#x7FFB;&#x8A33;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x50B7;&#x5BB3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CB;&#x30F3;&#x3068;&#x640D;&#x50B7;&#x5F8C;&#x306E;&#x672B;&#x68A2;&#x611F;&#x899A;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3B1;5&#x3092;&#x30A4;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x9006;&#x884C;&#x8F38;&#x9001;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;&#x75C5;&#x5909;&#x90E8;&#x4F4D;&#x304B;&#x3089;TF&#x306E;&#x9006;&#x884C;&#x8F38;&#x9001;&#x306F;&#x8EF8;&#x7D22;&#x3068;&#x6838;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x672B;&#x68A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x75C5;&#x5909;&#x306B;&#x9006;&#x884C;&#x6027;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;

&#xC5ED;&#xD589; axonal &#xBD80;&#xC0C1; &#xC2E0;&#xD638; &#xC140; &#xBC14;&#xB514; &#xC751;&#xB2F5; lesioned &#xC8FC;&#xBCC0; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC790;&#xADF9;. &#xD1F4;&#xD589; &#xC131; &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0;&#xC11C; importins&#xC758; &#xCC38;&#xC5EC; &#xC81C;&#xC548; &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778; (TFs) &#xC9C1;&#xC811; axonal &#xBD80;&#xC0C1; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB420; &#xC218;&#xB3C4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC5EC;&#xB7EC; TFs axons&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418; &#xACE0; &#xBD80;&#xC0C1;&#xB41C; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; axoplasm&#xC5D0; &#xD68C;&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0DD; &#xD654; &#xD559;&#xC801; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC720;&#xD6A8;&#xC131;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD55C; TF &#xC81C;&#xD488;&#xAD70; axonal stat3&#xB294; &#xB85C;&#xCEEC; &#xC124;&#xC815;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC88;&#xC5ED; &#xBD80;&#xC0C1; &#xC2DC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &#xBCC0;&#xC870; &#xBD80;&#xC0C1; &#xD6C4; &#xB9D0; &#xCD08; &#xAC10;&#xAC01; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC0DD;&#xC874;&#xC744; &#xD68C; &#xACE0; importin &alpha;5&#xC640; retrogradely &#xC774;&#xC1A1;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, axonal &#xBCD1; &#xBCC0; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; Tfs&#xC758; &#xC5ED;&#xD589; &#xC804;&#xC1A1; &#xCD95; &#xC0AD;&#xACFC; &#xD575; &#xC0AC;&#xC774; &#xC9C1;&#xC811; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Lesioned &#xB9D0; &#xCD08; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; retrogradely axonal &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778; &#xC2E0;&#xD638;.

Se&#xF1;alizaci&#xF3;n retr&#xF3;grada lesi&#xF3;n axonal estimula respuestas de las c&#xE9;lulas del cuerpo lesionadas en las neuronas perif&#xE9;ricas. La participaci&#xF3;n de importins en el transporte retr&#xF3;grado sugiere que los factores de transcripci&#xF3;n (TF) podr&#xED;an estar directamente implicados en la se&#xF1;alizaci&#xF3;n de lesi&#xF3;n axonal. Aqu&#xED;, mostramos que el TF se encuentran varios de los axones y de asociaci&#xF3;n con la dine&#xED;na en el axoplasma del nervio lesionado. Validaci&#xF3;n bioqu&#xED;mica y funcional para una familia TF establece que STAT3 axonal se traduce a nivel local y activado despu&#xE9;s de la lesi&#xF3;n, y es transportado retr&#xF3;gradamente con la dine&#xED;na y la importina &#x3B1;5 para modular la supervivencia de las neuronas sensoriales perif&#xE9;ricas despu&#xE9;s de la lesi&#xF3;n. Por lo tanto, el transporte retr&#xF3;grado de TFS de los sitios de lesi&#xF3;n axonal proporciona un v&#xED;nculo directo entre el ax&#xF3;n y el n&#xFA;cleo.

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Na+ promotes the dissociation between Galpha GDP and Gbeta gamma, activating G protein-gated K+ channels. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 12488455	2003
Mapping the Gbetagamma-binding sites in GIRK1 and GIRK2 subunits of the G protein-activated K+ channel. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 12743112	2003
Galphai1 and Galphai3 differentially interact with, and regulate, the G protein-activated K+ channel. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 14963032	2004
Gbetagamma-dependent and Gbetagamma-independent basal activity of G protein-activated K+ channels. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 15728579	2005
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Ida Rishal

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