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Generation of Transgenic <em>C. elegans</em> by Biolistic Transformation

The number of laboratories using the free living nematode C. elegans is rapidly growing. The popularity of this biological model is attributed to a rapid ...

University of Pittsburgh

Nur &#x56E0;&#x7D20;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x8C03; (POMC) &#x8BF1;&#x5BFC; CRH &#x7684; corticotrophs&#xFF0C;&#x4F46; CRH &#x6302;&#x94A9; Nur &#x7684;&#x9014;&#x5F84;&#x4E0D;&#x8BE6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x663E;&#x793A;&#x5728; AtT 20 corticotrophs CRH &#x548C;&#x8425;&#x4FC3;&#x4F7F; Nur77 &#x53CA;&#x76F8;&#x5173;&#x56E0;&#x5B50; 1 &#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x8F6C;&#x5F55;&#x5728; NurRE &#x7AD9;&#x70B9;&#x4E0A;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; A &#xFF08;PKA&#xFF09; &#x548C;&#x9499;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E0E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x9499;&#x8DEF;&#x5F84;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x9499;&#x8C03;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; II (CAMKII&#xFF09; &#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x5E76;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4E8E;&#x9499;&#x7684;&#x9014;&#x5F84;&#x5165;&#x8D26;&#x90E8;&#x5206;&#x901A;&#x8FC7;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x5316; (Rap1/B-Raf/MAPK-ERK &#x6FC0;&#x9176;/ERK1/2&#xFF09;&#xFF0C;&#x8BC1;&#x660E;&#x5206;&#x5B50;&#x548C;&#x836F;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;AtT 20 corticotrophs &#x8868;&#x793A; B-&#x82F1;&#x56FD;&#x7687;&#x5BB6;&#x7A7A;&#x519B;&#xFF0C;&#x54EA;&#x4E00;&#x4E2A;&#x9635;&#x8425;&#x4E2D;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x523A;&#x6FC0; MAPK &#x7684;&#x4E00;&#x6837;&#x3002;CRH/&#x8425;&#x5730;&#x523A;&#x6FC0;&#x4E86; ERK2 &#x6D3B;&#x52A8;&#x548C;&#x589E;&#x52A0;&#x8F6C;&#x5F55;&#x86CB;&#x767D;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684; Gal4 Elk1&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E8E;&#x6240;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x663E;&#x6027;&#x8D1F;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x4E0E;&#x6FC0;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x963B;&#x6B62;&#x7531;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F; B-&#x82F1;&#x56FD;&#x7687;&#x5BB6;&#x7A7A;&#x519B;&#x7684;&#x523A;&#x6FC0;&#x3002;MAPK &#x6FC0;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x4E0D;&#x5F71;&#x54CD; Nur77 &#x548C;&#x76F8;&#x5173;&#x56E0;&#x5B50; 1 mRNA &#x8BF1;&#x5BFC;&#x4F46;&#x963B;&#x6B62; CRH &#x6216;&#x8425;&#x523A;&#x6FC0; Nur &#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;MAPK &#x6FC0;&#x53D1;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x548C; Nur77 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8DEF;&#x5F84;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x5F71;&#x54CD;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x5728;&#x9ED1;&#x76AE;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x5728; AtT 20 corticotrophs CRH/&#x8425;&#x5730;&#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4; Nur77/&#x76F8;&#x5173;&#x56E0;&#x5B50; 1 mRNA &#x8BF1;&#x5BFC;&#x548C;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C; POMC &#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x662F;&#x4F9D;&#x8D56;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; A &#x548C;&#x6D89;&#x53CA;&#x9499;/&#x9499;&#x8C03;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; II &#xFF08;Nur &#x611F;&#x5E94;/&#x6FC0;&#x6D3B;&#xFF09; &#x548C; MAPK &#x9499;&#x4F9D;&#x8D56;&#x548C;&#x72EC;&#x7ACB; &#xFF08;Nur &#x78F7;&#x9178;&#x5316;-&#x6FC0;&#x6D3B;&#xFF09; &#x9014;&#x5F84;&#x3002;

&#x6FC0;&#x6D3B;&#x53CA;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684; CRH/&#x8425;&#x5730; corticotrophs NUR77/&#x76F8;&#x5173;&#x56E0;&#x5B50; 1&#xFF1A; &#x9499;&#x3001; &#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; A &#x548C; MAPK &#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x53C2;&#x4E0E;&#x3002;

Nur factors are critical for proopiomelanocortin (POMC) induction by CRH in corticotrophs, but the pathways linking CRH to Nur are unknown. In this study we show that in AtT-20 corticotrophs CRH and cAMP induce Nur77 and Nurr1 expression and transcription at the NurRE site by protein kinase A (PKA) and calcium-dependent and -independent mechanisms. Calcium pathways depend on calmodulin kinase II (CAMKII) activity, and calcium-independent pathways are accounted for in part by MAPK activation (Rap1/B-Raf/MAPK-ERK kinase/ERK1/2), demonstrated by the use of molecular and pharmacological tools. AtT-20 corticotrophs express B-Raf, as do other cells in which cAMP stimulates MAPK. CRH/cAMP stimulated ERK2 activity and increased transcriptional activity of a Gal4-Elk1 protein, which was blocked by overexpression of dominant negative mutants and kinase inhibitors and stimulated by expression of B-Raf. The MAPK kinase inhibitors did not affect Nur77 and Nurr1 mRNA induction but blocked CRH or cAMP-stimulated Nur transcriptional activity. Moreover, MAPK stimulated phosphorylation and transactivation of Nur77. The functional impact of these pathways was confirmed at the POMC promoter. In conclusion, in AtT-20 corticotrophs the CRH/cAMP signaling that leads to Nur77/Nurr1 mRNA induction and transcriptional activation, and thus POMC expression, is dependent on protein kinase A and involves calcium/calmodulin kinase II (Nur induction/activation) and MAPK calcium-dependent and -independent (Nur phosphorylation-activation) pathways.

Activation and induction of NUR77/NURR1 in corticotrophs by CRH/cAMP: involvement of calcium, protein kinase A, and MAPK pathways.

Nur facteurs sont essentiels pour l&#39;induction de la pro-opiom&eacute;lanocortine (POMC) par CRH dans corticotropes, mais les voies reliant les CRH &agrave; Nur sont inconnus. Dans cette &eacute;tude nous montrent que dans AtT-20 corticotropes CRH et cAMP induisent l&#39;expression Nur77 et Nurr1 et transcription sur le site NurRE par la prot&eacute;ine kinase A (PKA) et des m&eacute;canismes ind&eacute;pendants et d&eacute;pendants du calcium. Voies de calcium d&eacute;pendent II (CAMKII) activit&eacute; de la kinase calmoduline et voies ind&eacute;pendantes de calcium sont expliqu&eacute;es en partie par activation MAPK (Rap1/B-Raf/MAPK-ERK kinase/ERK1/2), d&eacute;montr&eacute;e par l&#39;utilisation d&#39;outils mol&eacute;culaires et pharmacologiques. AtT-20 corticotropes expriment B-Raf, tout comme les autres cellules dans quel cAMP stimule la MAPK. CRH/cAMP stimulent l&#39;activit&eacute; ERK2 et augmentation de l&#39;activit&eacute; transcriptionnelle d&#39;une prot&eacute;ine de Gal4-Elk1, qui a &eacute;t&eacute; bloqu&eacute;e par la surexpression de mutants n&eacute;gatifs dominants et inhibiteurs de la kinase et stimul&eacute;e par l&#39;expression de B-Raf. Les inhibiteurs de kinases MAPK n&#39;affectaient pas Nur77 et induction de l&#39;ARNm Nurr1 mais bloqu&eacute; CRH ou stimul&eacute;e par le cAMP de Nur activit&eacute; transcriptionnelle. Par ailleurs, MAPK stimule la phosphorylation et la transactivation de Nur77. L&#39;impact fonctionnel de ces voies a &eacute;t&eacute; confirm&eacute;e au promoteur de la POMC. En conclusion, en AtT-20 corticotropes la CRH/cAMP de signalisation qui conduit &agrave; l&#39;induction de l&#39;ARNm Nur77/Nurr1 et activation de la transcription et ainsi d&#39;expression de la POMC, d&eacute;pendant de la prot&eacute;ine kinase A et implique de calcium/calmoduline kinase II (Nur induction/activation) et les voies MAPK calcium-d&eacute;pendant et ind&eacute;pendants (Nur la phosphorylation d&#39;activation).

Activation et induction de NUR77/NURR1 dans corticotropes de CRH/cAMP : participation de calcium, prot&eacute;ine kinase A et voies MAPK.

Aktivierung und Induktion der NUR77/NURR1 in kortikotropen von CRH / cAMP: Beteiligung von Calcium, Proteinkinase A und MAPK.

Nur fattori sono critici per la Proopiomelanocortina (POMC) induzione di CRH nel corticotrophs, ma le vie che collegano CRH a Nur sono sconosciute. In questo studio dimostriamo che in AtT-20 corticotrophs CRH e cAMP indurre espressione Nur77 e Nurr1 e trascrizione presso il sito NurRE dalla proteina chinasi A (PKA) e meccanismi di calcio-dipendente e - indipendenti. Percorsi di calcio dipendono dalla calmodulina chinasi attivit&agrave; II (CAMKII) e percorsi di calcio-indipendenti sono contabilizzati in parte dall&#39;attivazione di MAPK (Rap1/B-Raf/MAPK-ERK chinasi/ERK1/2), ha dimostrato con l&#39;uso di strumenti molecolari e farmacologici. Corticotrophs AtT-20 express B-Raf, come fanno altre cellule in quale campo stimola MAPK. CRH/cAMP stimolato attivit&agrave; di ERK2 e aumento dell&#39;attivit&agrave; trascrizionale di una proteina Gal4-Elk1, che &egrave; stata bloccata da iperespressione del dominante negativi mutanti e gli inibitori della chinasi e stimolata dall&#39;espressione di B-Raf. Gli inibitori di chinasi MAPK non influisce sulla Nur77 e induzione Nurr1 mRNA ma bloccato CRH o cAMP-stimolato attivit&agrave; transcriptional Nur. Inoltre, MAPK stimolata fosforilazione e transactivation di Nur77. L&#39;impatto funzionale di questi percorsi &egrave; stato confermato presso il promotore POMC. In conclusione, in corticotrophs AtT-20 il CRH/campo di segnalazione che conduce a Nur77/Nurr1 mRNA induzione e attivazione trascrizionale e quindi espressione di POMC, &egrave; dipendente della chinasi di proteina A e coinvolge calcio/calmodulina chinasi II (Nur induzione o attivazione) e vie MAPK calcio-dipendente e - indipendente (Nur fosforilazione-attivazione).

Attivazione e induzione di NUR77/NURR1 in corticotrophs da CRH/cAMP: coinvolgimento di calcio, proteina chinasi A e percorsi di MAPK.

Nur &#x8981;&#x56E0; CRH &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30D7;&#x30ED;&#x30AA;&#x30D4;&#x30AA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30CE;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30F3; POMC &#x8A98;&#x5C0E; corticotrophs &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;CRH &#x30CC;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x3064;&#x306A;&#x3050;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x79C1;&#x9054;&#x306F; AtT-20 &#x3067; CRH &#x3068;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x306E; corticotrophs Nur77 &#x3068; Nurr1 &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x8EE2;&#x5199; NurRE &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; A(PKA) &#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3068;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x4F9D;&#x5B58;&#x30FB;&#x975E;&#x4F9D;&#x5B58;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3002;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x4F9D;&#x5B58;&#x30AB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3; &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; II (CAMKII) &#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3068;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3082;&#x8003;&#x616E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x4E00;&#x90E8; MAPK &#x306E;&#x6D3B;&#x6027; (Rap1/B-Raf/MAPK-ERK &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;/ERK1/2), &#x5206;&#x5B50;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;AtT 20 corticotrophs B Raf &#x306F;&#x3001;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3059;&#x308B; MAPK do &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8868;&#x73FE;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;CRH/&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7; ERK2 &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3057;&#x3001;&#x652F;&#x914D;&#x7684;&#x306A;&#x5426;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3068;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x3001;B Raf &#x306E;&#x5F0F;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x523A;&#x6FC0; Gal4 Elk1 &#x86CB;&#x767D;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;MAPK &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264; Nur77 &#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3068; Nurr1 mRNA &#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x304C; CRH &#x304C;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3057;&#x305F;&#x308A;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x523A;&#x6FC0; Nur &#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;MAPK &#x306F;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3068; Nur77 &#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x5F71;&#x97FF; POMC &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB; CRH/&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7; &#x30EA;&#x30FC;&#x30C9; Nur77/Nurr1 mRNA &#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x3053;&#x3046;&#x3057;&#x3066; POMC &#x5F0F;&#x306B; AtT 20 corticotrophs &#x3067;&#x306F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; A &#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;/&#x30AB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3; &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; II (Nur &#x8A98;&#x5C0E;/&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x5316;) &#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3068; MAPK &#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x4F9D;&#x5B58;&#x30FB;&#x975E;&#x4F9D;&#x5B58; &#xFF08;Nur &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#xFF09; &#x306E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3002;

&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068; CRH/&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x3067; corticotrophs NUR77/NURR1 &#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;: &#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;, &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; A &#x3068; MAPK &#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3002;

Nur &#xC694;&#xC778; corticotrophs&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xAD6D; &#xCCA0;&#xB85C; &#xACE0;&#xC18D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; proopiomelanocortin (POMC) &#xC720;&#xB3C4; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; Nur &#xC911;&#xAD6D; &#xCCA0;&#xB85C; &#xACE0;&#xC18D; &#xC5F0;&#xACB0; &#xACBD;&#xB85C; &#xC54C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; at &amp;amp; t 20&#xC5D0; corticotrophs &#xC911;&#xAD6D; &#xCCA0;&#xB85C; &#xACE0;&#xC18D; &#xBC0F; &#xCEA0;&#xD504; &#xC720;&#xB3C4; nur77&#xACFC; Nurr1 &#xC2DD;&#xACFC; NurRE &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xC0AC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; A (PKA) &#xD558; &#xC5EC; &#xD45C;&#xC2DC; &#xBC0F; &#xCE7C;&#xC298; &#xC885;&#xC18D; &#xBC0F;-&#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;. &#xCE7C;&#xC298; &#xD1B5;&#xB85C; calmodulin &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; 2 &#xCC28; (CAMKII) &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB974;&#xBA70; &#xCE7C;&#xC298; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xACBD;&#xB85C; MAPK &#xD65C;&#xC131;&#xD654; (Rap1/B-&#xC601;&#xAD6D; &#xACF5;&#xAD70;/MAPK-ERK &#xB2C8;/ERK1/2)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xCC28;&#xC9C0;&#xB294; &#xBD84;&#xC790; &#xC57D;&#xB9AC;&#xD559; &#xC801;&#xC778; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. At &amp;amp; T&#xB294;-20 corticotrophs MAPK&#xB97C; &#xC790;&#xADF9; &#xD558;&#xB294; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xCEA0;&#xD504;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xC140;&#xC73C;&#xB85C; B-&#xC601;&#xAD6D; &#xACF5;&#xAD70;, &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4;. &#xC911;&#xAD6D; &#xCCA0;&#xB85C; &#xACE0;&#xC18D;/&#xCEA0;&#xD504; ERK2 &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC790;&#xADF9; &#xD558; &#xACE0; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBC0F; kinase &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; overexpression&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC28;&#xB2E8; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xD45C;&#xD604;&#xC758; B-&#xC601;&#xAD6D; &#xACF5;&#xAD70;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC790;&#xADF9; &#xD558;&#xB294; Gal4 Elk1 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; transcriptional &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. Nur77 MAPK kinase &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; &#xACE0; Nurr1 mRNA &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC911;&#xAD6D; &#xCCA0;&#xB85C; &#xACE0;&#xC18D; &#xCC28;&#xB2E8; &#xB610;&#xB294; &#xCEA0;&#xD504; &#xC790;&#xADF9; Nur transcriptional &#xD65C;&#xB3D9;. &#xB610;&#xD55C;, MAPK &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC640; Nur77 transactivation&#xC744; &#xC790;&#xADF9;. &#xC774; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC601;&#xD5A5; POMC &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD655;&#xC778; &#xB410;&#xB2E4;. &#xB05D;&#xC73C;&#xB85C;, at &amp;amp; T&#xB294;-20 corticotrophs &#xC911;&#xAD6D; &#xCCA0;&#xB85C; &#xACE0;&#xC18D;/&#xCEA0;&#xD504;&#xB294; &#xC2E0;&#xD638; &#xB9AC;&#xB4DC; Nur77/Nurr1 mRNA &#xC720;&#xB3C4; &#xBC0F; transcriptional &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; POMC &#xC2DD;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; A&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; &#xCE7C;&#xC298;/calmodulin &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; 2 &#xCC28; (Nur &#xC720;&#xB3C4;/&#xD65C;&#xC131;&#xD654;)&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C;&#xB2E4;&#xC640; MAPK &#xCE7C;&#xC298; &#xC885;&#xC18D; &#xBC0F; &#xB3C5;&#xB9BD; (Nur &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;) &#xACBD;&#xB85C;.

&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &#xC911;&#xAD6D; &#xCCA0;&#xB85C; &#xACE0;&#xC18D;/&#xCEA0;&#xD504;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; corticotrophs&#xC5D0; NUR77/nurr1&#xC758; &#xC720;&#xB3C4;: &#xCE7C;&#xC298;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; A&#xC640; MAPK &#xACBD;&#xB85C;&#xC758; &#xCC38;&#xC5EC;.

Nur factores son esenciales para la inducci&oacute;n de la proopiomelanocortina (POMC) por CRH en Corticotrofos, pero desconocen las v&iacute;as que enlazan a CRH a Nur. En este estudio demostramos que en AtT-20 Corticotrofos CRH y campamento inducen expresi&oacute;n Nur77 y Nurr1 y transcripci&oacute;n en el sitio NurRE por prote&iacute;na quinasa A (PKA) y mecanismos dependiente de calcio y - independientes. V&iacute;as de calcio dependen de la calmodulina Kinasa actividad II (CAMKII), y v&iacute;as independientes de calcio se contabilizan en parte por la activaci&oacute;n de MAPK (Rap1/B-Raf/MAPK-ERK kinase/ERK1/2), demostrado por el uso de herramientas moleculares y farmacol&oacute;gicas. AtT-20 Corticotrofos expresan B-Raf, tal como lo hacen otras c&eacute;lulas en que campo estimula MAPK. CRH/cAMP hab&iacute;a estimulado ERK2 actividad y aument&oacute; la actividad transcripcional de una prote&iacute;na Gal4-Elk1, que fue bloqueada por la sobreexpresi&oacute;n de mutantes negativos dominantes e inhibidores de la cinasa y estimulada por la expresi&oacute;n de B-Raf. Los inhibidores de la cinasa MAPK no afect&oacute; a Nur77 e inducci&oacute;n del mRNA Nurr1 pero bloqueado CRH o campo-estimulado Nur actividad transcripcional. Por otra parte, MAPK estimul&oacute; la fosforilaci&oacute;n y la transactivaci&oacute;n del Nur77. El impacto funcional de estas v&iacute;as fue confirmado en el promotor de la POMC. En conclusi&oacute;n, en Corticotrofos AtT-20 el CRH/campo de se&ntilde;alizaci&oacute;n que conduce a la inducci&oacute;n del mRNA de Nur77/Nurr1 y activaci&oacute;n transcripcional y as&iacute; la expresi&oacute;n de POMC, es dependiente de kinase de prote&iacute;na A y consiste en calcio/calmodulina Kinasa II (Nur inducci&oacute;n/activaci&oacute;n) y v&iacute;as de MAPK dependiente de calcio y - independientes (Nur fosforilaci&oacute;n-activaci&oacute;n).

Activaci&oacute;n e inducci&oacute;n de NUR77/NURR1 en Corticotrofos por CRH/campamento: participaci&oacute;n de calcio, kinase de prote&iacute;na A y v&iacute;as MAPK.

&#x9E1F;&#x560C;&#x5464;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x4EA4;&#x6D41;&#x56E0;&#x7D20; (GEFs) &#x548C;&#x5176;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x7684; GTP &#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; (G &#x86CB;&#x767D;) &#x7EE7;&#x7535;&#x5668;&#x4FE1;&#x606F;&#x4ECE;&#x80DE;&#x5916;&#x73AF;&#x5883;&#x6210;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x53CD;&#x5E94;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x673A;&#x5236;&#x76D1;&#x7BA1;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x8981;&#x7D20;&#x3002;&#x5176;&#x4E2D;&#xFF0C;MAPK &#x7EA7;&#x8054;&#x8868;&#x793A;&#x65E0;&#x5904;&#x4E0D;&#x5728;&#x7684;&#x4E0B;&#x6E38;&#x6548;&#x5E94;&#x8DEF;&#x5F84;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5148;&#x524D;&#x6240;&#x8FF0;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E; Ras &#x4F9D;&#x8D56;&#x6FC0;&#x6D3B; Erk-1/2 &#x9014;&#x5F84;&#x7684;&#x5C0F; G &#x86CB;&#x767D;&#x7684; Rho &#x5BB6;&#x65CF;&#x6210;&#x5458;&#x6FC0;&#x6D3B; JNK &#x68AF;&#x7EA7; GTP &#x7531;&#x5176;&#x76F8;&#x5E94; GEFs &#x52A0;&#x8F7D;&#x65F6;&#x3002;&#x641C;&#x7D22;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A; Epac (&#x4EA4;&#x6362;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x8425;&#x5730;&#xFF09; JNK &#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x65B0;&#x578B;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x6784;&#x7684; JNK 1 &#x5F3A;&#x6D3B;&#x5316;&#x5242;&#x3002;Epac &#x662F;&#x4E13;&#x95E8;&#x5728; Ras &#x5C0F; G &#x86CB;&#x767D;&#x7684; Rap &#x4E9A;&#x79D1;&#x663E;&#x793A;&#x4EA4;&#x6D41;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684; GEFs &#x8D8A;&#x6765;&#x8D8A;&#x591A;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x6210;&#x5458;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x62A5;&#x544A;&#x867D;&#x7136; Epac &#x6FC0;&#x6D3B; JNK severalfold&#xFF0C;&#x4E00;&#x6D3B;&#x52A8; (G12V) &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; Rap1b &#x6CA1;&#x6709;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A; Rap GTP &#x4E0D;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x6362;&#x80FD;&#x5668; Epac &#x4F9D;&#x8D56; JNK &#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;Epac &#x4FE1;&#x53F7;&#x5230; JNKs &#x662F;&#x4E0D;&#x88AB;&#x963B;&#x6B62;&#x7684;&#x706D;&#x6D3B;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; Rap&#xFF0C;&#x6697;&#x793A; Rap &#x6FC0;&#x6D3B;&#x4E0D;&#x5FC5;&#x8981;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x6839;&#x636E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x610F;&#x89C1;&#xFF0C;&#x57DF;&#x5220;&#x9664;&#x7A81;&#x53D8;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x50AC;&#x5316;&#x5168;&#x7403;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x91D1;&#x57DF;&#x662F;&#x53EF;&#x6709;&#x53EF;&#x65E0;&#x7684; JNK &#x4ECB;&#x5BFC; Epac &#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x53D1;&#x73B0;&#x91CD;&#x53E0; Ras &#x4EA4;&#x6362;&#x6BCD;&#x9898;&#x57DF;&#x4F5C;&#x4E3A; JNK &#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x5730;&#x533A;&#x3002;&#x4E0E;&#x6B64;&#x76F8;&#x4E00;&#x81F4;&#xFF0C;&#x4ECE; Epac &#x5B64;&#x7ACB;&#x7684; Ras &#x4EA4;&#x6362;&#x6BCD;&#x9898;&#x57DF;&#x5C31;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x6FC0;&#x6D3B; JNK&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x6D89;&#x53CA;&#x5176;&#x89C4;&#x8303;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x884C;&#x52A8;&#xFF0C;&#x5373;&#x7279;&#x5B9A;&#x533A;&#x57DF;&#x884C;&#x52A8;&#x65B9;&#x6848;&#x7684; GDP/GTP &#x4EA4;&#x6D41; Epac &#x4FE1;&#x53F7;&#x5BF9; JNK &#x68AF;&#x7EA7;&#x3002;&#x8FD9;&#x8868;&#x793A;&#x4E0D;&#x4EC5;&#x65B0;&#x9896;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x6FC0;&#x6D3B; JNKs&#xFF0C;&#x4F46;&#x5C1A;&#x672A;&#x53D8;&#x79CD;&#x7684; Epac &#x7684;&#x4E0B;&#x6E38;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

&#x7531; Epac JNK &#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x662F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684; Rap &#x9E1F;&#x560C;&#x5464;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x6362;&#x70ED;&#x5668;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5176;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;

Guanine nucleotide exchange factors (GEFs) and their associated GTP-binding proteins (G-proteins) are key regulatory elements in the signal transduction machinery that relays information from the extracellular environment into specific intracellular responses. Among them, the MAPK cascades represent ubiquitous downstream effector pathways. We have previously described that, analogous to the Ras-dependent activation of the Erk-1/2 pathway, members of the Rho family of small G-proteins activate the JNK cascade when GTP is loaded by their corresponding GEFs. Searching for novel regulators of JNK activity we have identified Epac (exchange protein activated by cAMP) as a strong activator of JNK-1. Epac is a member of a growing family of GEFs that specifically display exchange activity on the Rap subfamily of Ras small G-proteins. We report here that while Epac activates the JNK severalfold, a constitutively active (G12V) mutant of Rap1b does not, suggesting that Rap-GTP is not sufficient to transduce Epac-dependent JNK activation. Moreover, Epac signaling to the JNKs was not blocked by inactivation of endogenous Rap, suggesting that Rap activation is not necessary for this response. Consistent with these observations, domain deletion mutant analysis shows that the catalytic GEF domain is dispensable for Epac-mediated activation of JNK. These studies identified a region overlapping the Ras exchange motif domain as critical for JNK activation. Consistent with this, an isolated Ras exchange motif domain from Epac is sufficient to activate JNK. We conclude that Epac signals to the JNK cascade through a new mechanism that does not involve its canonical catalytic action, i.e. Rap-specific GDP/GTP exchange. This represents not only a novel way to activate the JNKs but also a yet undescribed mechanism of downstream signaling by Epac.

Activation of JNK by Epac is independent of its activity as a Rap guanine nucleotide exchanger.

&Eacute;change de nucl&eacute;otide de guanine facteurs (GEFs) et leurs prot&eacute;ines associ&eacute;es de liant le GTP (prot&eacute;ines G) sont les principaux &eacute;l&eacute;ments de r&eacute;gulation dans les m&eacute;canismes de transduction du signal qui relaie les informations de l&#39;environnement extracellulaire dans des r&eacute;ponses intracellulaires sp&eacute;cifiques. Parmi eux, les cascades MAPK repr&eacute;sentent des voies effecteur omnipr&eacute;sent. Nous avons d&eacute;j&agrave; d&eacute;crit que, analogue &agrave; l&#39;activation de Ras-d&eacute;pendante de la voie Erk-1/2, les membres de la famille Rho des petites prot&eacute;ines G activent la cascade JNK lors du chargement de leurs correspondants GEFs GTP. La recherche de nouveaux r&eacute;gulateurs de l&#39;activit&eacute; JNK Qu&#39;epac (prot&eacute;ine d&#39;&eacute;change activ&eacute; par cAMP), nous avons identifi&eacute; comme un puissant activateur de JNK-1. EPAC est membre du regroupement de GEFs affichant sp&eacute;cifiquement des activit&eacute; d&#39;&eacute;change sur la sous-famille de Rap des petites prot&eacute;ines G Ras. Nous rapportons ici que tandis que Epac active la JNK plusieurs fois, un mutant (G12V) constitutivement actif de Rap1b n&#39;a pas, ce qui sugg&egrave;re que le Rap-GTP n&#39;est pas suffisante pour transmettre l&#39;activation d&eacute;pendante Epac JNK. En outre, Epac de signalisation aux JNKs pas bloqua l&#39;inactivation du Rap endog&egrave;ne, ce qui sugg&egrave;re que l&#39;activation de la Rap n&#39;est pas n&eacute;cessaire pour cette r&eacute;ponse. Conform&eacute;ment &agrave; ces observations, domaine suppression mutant analyse montre que le domaine catalytique de la FEM est dispensable pour activation par Epac de JNK. Ces &eacute;tudes a identifi&eacute; une r&eacute;gion chevauchant le domaine du motif change Ras comme essentielle pour l&#39;activation de JNK. Conform&eacute;ment &agrave; cela, un domaine isol&eacute; de motif change de Ras d&#39;Epac est suffisant pour activer JNK. Nous concluons qu&#39;Epac signale &agrave; la cascade JNK par un nouveau m&eacute;canisme qui n&#39;implique pas son action catalytique canonique, c&#39;est &agrave; dire des &eacute;changes sp&eacute;cifiques Rap GDP/GTP. Cela repr&eacute;sente non seulement une nouvelle fa&ccedil;on d&#39;activer les JNKs mais &eacute;galement un m&eacute;canisme non encore d&eacute;crit de signalisation en aval par Epac.

Activation des JNK par Epac ne d&eacute;pend pas de son activit&eacute; comme un &eacute;changeur de nucl&eacute;otide de guanine de Rap.

Die Aktivierung von JNK durch Epac ist unabh&#xE4;ngig von seiner T&#xE4;tigkeit als Rap Guanin-Nukleotid-W&#xE4;rmetauscher.

Fattori di scambio di nucleotide della guanina (GEFs) e loro associati GTP-binding proteins (proteine G) sono gli elementi chiave di regolamentazione delle macchine di trasduzione del segnale che trasmette informazioni dall&#39;ambiente extracellulare in risposte intracellulari specifiche. Fra loro, le cascate MAPK rappresentano vie effettrici downstream onnipresente. Abbiamo descritto in precedenza che, analoga per l&#39;attivazione di Ras-dipendente del percorso Erk-1/2, membri della famiglia di piccole proteine G Rho attivano la cascata JNK quando GTP &egrave; caricato da loro GEFs corrispondente. Alla ricerca di nuovi regolatori dell&#39;attivit&agrave; JNK che abbiamo identificato Epac (proteina di scambio attivata da cAMP) come un forte attivatore della JNK-1. EPAC &egrave; un membro di una famiglia crescente di GEFs che visualizzano in particolare attivit&agrave; di scambio sulla sottofamiglia Rap di Ras piccole G-proteine. Segnaliamo qui che mentre Epac attiva il JNK molteplicemente, un mutante costitutivamente attivo (G12V) di Rap1b non, suggerendo che Rap-GTP non &egrave; sufficiente a trasdurre attivazione JNK Epac-dipendente. Inoltre, Epac segnalazione per il JNKs non &egrave; stato bloccato da inattivazione del Rap endogena, suggerendo che l&#39;attivazione del Rap non &egrave; necessario per questa risposta. Coerentemente con queste osservazioni, dominio eliminazione mutante analisi dimostra che il dominio catalitico GEF &egrave; superfluo per l&#39;attivazione mediata da Epac di JNK. Questi studi identificato una regione di sovrapposizione del dominio di motif scambio Ras come critico per attivazione JNK. Coerente con questa, un dominio motivo di scambio Ras isolato da Epac &egrave; sufficiente attivare JNK. Concludiamo che Epac segnali a cascata della JNK attraverso un nuovo meccanismo che non coinvolge la sua azione catalitica canonica, cio&egrave; scambio GDP/GTP Rap-specifici. Questo rappresenta non solo un nuovo modo per attivare il JNKs, ma anche un meccanismo di segnalazione a valle da Epac ancora nuovo.

Attivazione di JNK da Epac &egrave; indipendente dalla sua attivit&agrave; come uno scambiatore di nucleotide della guanina Rap.

&#x30B0;&#x30A2;&#x30CB;&#x30F3; &#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x4EA4;&#x63DB;&#x56E0;&#x5B50; (GEFs) &#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F; GTP &#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; &#xFF08;G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF09; &#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x306E;&#x74B0;&#x5883;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x60C5;&#x5831;&#x3092;&#x4E2D;&#x7D99;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F1D;&#x9054;&#x7CFB;&#x6A5F;&#x68B0;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x898F;&#x5236;&#x8981;&#x7D20;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30BF;&#x30B9;&#x4E0B;&#x6D41;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x7D4C;&#x8DEF; MAPK &#x30AB;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C9;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;GTP &#x306F;&#x3001;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B; GEFs &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8AAD;&#x307F;&#x8FBC;&#x307E;&#x308C;&#x308B;&#x3068;&#x304D; Erk 1/2 &#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E; Ras &#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x985E;&#x4F3C;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A; G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; Rho &#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC; JNK &#x30AB;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C9; &#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x3001;&#x524D;&#x8FF0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;JNK &#x306E;&#x6D3B;&#x6027; Epac &#xFF08;cAMP &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316; exchange &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF09; &#x3092;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x8ABF;&#x7BC0; JNK 1 &#x306E;&#x5F37;&#x3044;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x304A;&#x63A2;&#x3057;&#x3002;Epac &#x306F;&#x3001;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B; Ras &#x5C0F;&#x3055;&#x306A; G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x4E9C;&#x79D1;&#x306E;&#x4EA4;&#x6D41;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x8868;&#x793A; GEFs &#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x3059;&#x308B;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067; Epac &#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x78E8;&#x304B;&#x308C; JNK &#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;&#x6052;&#x5E38;&#x6D3B;&#x6027; (G12V) &#x5909;&#x7570;&#x4F53; Rap1b &#x30E9;&#x30C3;&#x30D7; GTP &#x304C; Epac &#x4F9D;&#x5B58;&#x578B; JNK &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x5909;&#x63DB;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3001;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;Epac &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B; JNKs &#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x304C;&#x3053;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306F;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x306B;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6240;&#x898B;&#x3068;&#x6574;&#x5408;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x524A;&#x9664;&#x5909;&#x7570;&#x89E3;&#x6790;&#x89E6;&#x5A92;&#x306E; GEF &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; JNK &#x306E; Epac &#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;Ras exchange &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A; JNK &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x91CD;&#x8907;&#x9818;&#x57DF;&#x8B58;&#x5225;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x3001;&#x5206;&#x96E2;&#x306E; Ras exchange &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; Epac &#x304B;&#x3089;&#x306F; JNK &#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F; JNK &#x30AB;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C9;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6B63;&#x898F;&#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x4F5C;&#x7528;, &#x3059;&#x306A;&#x308F;&#x3061;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x56FA;&#x6709; GDP/GTP exchange &#x3092;&#x542B;&#x307E;&#x306A;&#x3044;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092; Epac &#x3092;&#x7DE0;&#x7D50;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;JNKs &#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x4E0B;&#x6D41; Epac &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x307E;&#x3060;&#x672A;&#x8A18;&#x8F09;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x65AC;&#x65B0;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Epac &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; JNK &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;Rap &#x30B0;&#x30A2;&#x30CB;&#x30F3; &#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x4EA4;&#x63DB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Guanine &#xC5FC;&#xAE30; &#xAD50;&#xD658; &#xC694;&#xC778; (&#xC870;&#xB2EC;) &#xBC0F; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; GTP &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;) &#xD2B9;&#xC815; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC751;&#xB2F5;&#xC73C;&#xB85C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xD658;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xB9B4;&#xB808;&#xC774; &#xD558;&#xB294; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC; &#xAE30;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD575;&#xC2EC; &#xADDC;&#xC81C; &#xC694;&#xC18C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8; &#xC911; MAPK &#xACC4;&#xACE1; &#xC720;&#xBE44; &#xCFFC;&#xD130; &#xC2A4; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xACBD;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0;, Erk-1/2 &#xACBD;&#xB85C;&#xC758; Ras &#xC885;&#xC18D; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC640; &#xC720;&#xC0AC; Rho &#xAC00;&#xC871; &#xC791;&#xC740; G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; JNK &#xCE90;&#xC2A4;&#xCF00;&#xC774;&#xB4DC; GTP&#xC758; &#xD574;&#xB2F9; &#xC870;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB85C;&#xB4DC; &#xB420; &#xB54C; &#xC124;&#xBA85; &#xD588;&#xB2E4;. JNK 1&#xC758; &#xAC15;&#xD55C; &#xD65C;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; JNK &#xD65C;&#xB3D9; &#xC6B0;&#xB9AC; Epac (exchange &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xCEA0;&#xD504;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574;) &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC758; &#xC18C;&#xC124; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC80;&#xC0C9;. Epac &#xD2B9;&#xD788; Ras &#xC791;&#xC740; G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB7A9; &#xC544;&#xC5D0; &#xAD50;&#xD658; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xC870;&#xB2EC;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xC5EC;&#xAE30; Epac severalfold JNK&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; rap1b&#xC758; constitutively &#xD65C;&#xC131; (G12V) &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCCB4; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294;&#xB2E4;&#xB294; &#xAC83;, &#xB7A9;-GTP Epac &#xC885;&#xC18D; JNK &#xD65C;&#xC131;&#xD654; transduce &#xCDA9;&#xBD84; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, Epac &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; JNKs &#xD558;&#xB294; &#xB7A9; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C;&#xC774; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC81C;&#xC548; &#xB0B4; &#xB7A9;&#xC758; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC28;&#xB2E8; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAD00;&#xCC30;&#xACFC; &#xC77C;&#xCE58;, &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC0AD;&#xC81C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBD84;&#xC11D; &#xCD09;&#xB9E4; GEF &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; JNK &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Epac &#xC911;&#xC7AC;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xBD88;&#xAC00;&#xACB0; &#xC774;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC601;&#xC5ED;&#xC73C;&#xB85C; JNK &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; Ras exchange &#xC8FC;&#xC81C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC911;&#xBCF5; &#xD655;&#xC778;. &#xC774; &#xC77C;&#xAD00; &#xB41C; Epac&#xC5D0;&#xC11C; &#xACA9;&#xB9AC; &#xB41C; Ras exchange &#xC8FC;&#xC81C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; JNK&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD558;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Epac &#xC2E0;&#xD638; JNK &#xCE90;&#xC2A4;&#xCF00;&#xC774;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC815;&#xC2DD; &#xCD09;&#xB9E4; &#xC791;&#xC5C5;, &#xC989; &#xB7A9; &#xAD00;&#xB828; GDP/GTP exchange&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xACB0;&#xB860;. &#xC774; JNKs &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC544;&#xC9C1; undescribed &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; Epac &#xC5EC; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xC2DC;&#xADF8;&#xB110;&#xB9C1;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC18C;&#xC124; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

JNK Epac&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB7A9; guanine &#xC5FC;&#xAE30; &#xAD50;&#xD658;&#xAE30;&#xB85C; &#xC11C; &#xADF8; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Factores de intercambio de guanina nucle&oacute;tido (GEFs) y sus asociadas prote&iacute;nas de uni&oacute;n a GTP (prote&iacute;nas G) son elementos reguladores claves en los mecanismos de transducci&oacute;n de se&ntilde;al que transmite informaci&oacute;n del ambiente extracelular en determinadas respuestas intracelulares. Entre ellos, las cascadas MAPK representan v&iacute;as omnipresente efectoras aguas abajo. Hemos descrito previamente que, an&aacute;logamente a la activaci&oacute;n de Ras-dependiente de la v&iacute;a Erk-1/2, miembros de la familia Rho de prote&iacute;nas G peque&ntilde;as activan la cascada JNK cuando GTP es cargado por sus correspondientes GEFs. La b&uacute;squeda de nuevos reguladores de la actividad JNK, que hemos identificado Epac (prote&iacute;na de intercambio activada por campo) como un fuerte activador de JNK-1. EPAC es miembro de una familia creciente de GEFs que muestran espec&iacute;ficamente la actividad de intercambio en la subfamilia Rap de Ras G-prote&iacute;nas peque&ntilde;as. Divulgamos aqu&iacute; que mientras Epac activa la JNK repetida, un mutante constitutivamente activo de (G12V) de Rap1b no, sugiriendo que el Rap-GTP no es suficiente para transducir la activaci&oacute;n de JNK Epac-dependiente. Por otra parte, Epac se&ntilde;alizaci&oacute;n a las JNKs no estaba bloqueado por la inactivaci&oacute;n del Rap end&oacute;geno, sugiriendo que la activaci&oacute;n de Rap no es necesaria para esta respuesta. De acuerdo con estas observaciones, an&aacute;lisis mutantes de deleci&oacute;n de dominio muestran que el dominio catal&iacute;tico del FMAM es prescindible para Epac mediada por la activaci&oacute;n de JNK. Estos estudios identificaron una regi&oacute;n superposici&oacute;n del dominio de motivo de intercambio de Ras como cr&iacute;tico para la activaci&oacute;n de JNK. De acuerdo con esto, un dominio de motivo de intercambio aislado Ras de Epac es suficiente para activar JNK. Concluimos que Epac se&ntilde;ala a la cascada JNK a trav&eacute;s de un nuevo mecanismo que implique su acci&oacute;n catal&iacute;tica can&oacute;nica, es decir, intercambio de Rap espec&iacute;ficos PIB/GTP. Esto representa no s&oacute;lo una forma novedosa para activar los JNKs sino tambi&eacute;n un mecanismo a&uacute;n no descrito de se&ntilde;alizaci&oacute;n aguas abajo por el Epac.

La activaci&oacute;n de JNK por Epac es independiente de su actividad como un intercambiador de nucle&oacute;tido de guanina de Rap.

&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E;&#x7D2B;&#x5916;&#x7EBF;&#x8F90;&#x5C04;&#x6E90;&#x3001; &#x5982;&#x592A;&#x9633;&#x5149;&#xFF0C;&#x8BF1;&#x4F7F;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x4F9D;&#x8D56;&#x5B83;&#x80FD;&#x591F;&#x5F71;&#x54CD;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x6B21;&#x6570;&#x3002;&#x5F53;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x5FEB;&#x901F;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4E3A;&#x4E24;&#x5B50;&#x65CF;&#x7684; proto-&#x764C;&#x57FA;&#x56E0;&#x86CB;&#x767D;&#x7F16;&#x7801;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684; Fos &#x548C; Jun&#xFF0C;&#x6784;&#x6210; AP 1 &#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF0C;&#x968F;&#x540E;&#x53C2;&#x4E0E; DNA &#x4FEE;&#x590D;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x902E;&#x6355;&#x3001; &#x6B7B;&#x4EA1;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#xFF0C;&#x5E76;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8D28;&#x91CD;&#x5851;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x8C03;&#x63A7;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x4E86;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x9664;&#x4E86;&#x541B;&#x88AB;&#x8F6C;&#x5F55;&#x4E00;&#x7EA7;&#xFF0C;&#x7BA1;&#x5236;&#x548C; Fos &#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4E5F;&#x53D7;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x800C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x53F6;&#x6805;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x65B9;&#x9762;&#xFF0C;c &#x541B;&#x7684;&#x7D2B;&#x5916;&#x7EBF;&#x8BF1;&#x5BFC; JNK &#x78F7;&#x9178;&#x968F;&#x65F6;&#x8BB0;&#x8F7D;&#x4E86;&#xFF0C;&#x800C;&#x7D2B;&#x5916;&#x7EBF;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x53CD;&#x5E94;&#x548C; Fos &#x6FC0;&#x6D3B;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x9274;&#x5B9A; Fos &#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x4ECD;&#x96BE;&#x4EE5;&#x6349;&#x6478;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5173;&#x8054;&#x4E0E; C-fos &#x548C; phosphorylate &#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x5176;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x57DF;&#x6807;&#x8BC6; p38 MAPKs&#x3002;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x88AB;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x8F6C;&#x53D8;&#x5176;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#xFF0C;&#x5982;&#x6FC0;&#x6D3B; p38 C-fos &#x589E;&#x5F3A;&#x9A71;&#x52A8; AP1 &#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x7531;&#x4E8E;&#x7D2B;&#x5916;&#x7EBF;&#x5149;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x5E94;&#x529B;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; C-fos &#x6210;&#x4E3A; p38 MAPKs &#x7684;&#x886C;&#x5E95;&#xFF0C;&#x9996;&#x6B21;&#x63D0;&#x4F9B;&#x8BC1;&#x636E;&#x8BC1;&#x660E;&#x5728;&#x8C03;&#x89E3;&#x5E94;&#x6FC0;&#x8BF1;&#x5BFC; C-fos &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x4E0E;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B; p38 MAPKs &#x7684;&#x652F;&#x6301;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x836F;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;&#x6291;&#x5236;&#x5242; p38alpha &#x548C; beta &#x7248;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x6700;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x8C03;&#x89E3;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x7D2B;&#x5916;&#x7EBF;&#x8BF1;&#x5BFC; C-fos &#x78F7;&#x9178;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x65B0;&#x63CF;&#x8FF0;&#x7684;&#x8DEF;&#x5F84;&#x884C;&#x52A8;&#x540C;&#x65F6;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684; c &#x541B;&#x7684; JNK/MAPKs&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x63A8;&#x52A8; AP1 &#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x6027;&#x3002;

&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684; c-Fos &#x7531; p38 MAPK &#x5BB6;&#x65CF;&#x6210;&#x5458;&#x3002;&#x5728;&#x7D2B;&#x5916;&#x5149; AP 1 &#x54CD;&#x5E94;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Exposure to sources of UV radiation, such as sunlight, induces a number of cellular alterations that are highly dependent on its ability to affect gene expression. Among them, the rapid activation of genes coding for two subfamilies of proto-oncoproteins, Fos and Jun, which constitute the AP-1 transcription factor, plays a key role in the subsequent regulation of expression of genes involved in DNA repair, cell proliferation, cell cycle arrest, death by apoptosis, and tissue and extracellular matrix remodeling proteases. Besides being regulated at the transcriptional level, Jun and Fos transcriptional activities are also regulated by phosphorylation as a result of the activation of intracellular signaling cascades. In this regard, the phosphorylation of c-Jun by UV-induced JNK has been readily documented, whereas a role for Fos proteins in UV-mediated responses and the identification of Fos-activating kinases has remained elusive. Here we identify p38 MAPKs as proteins that can associate with c-Fos and phosphorylate its transactivation domain both in vitro and in vivo. This phosphorylation is transduced into changes in its transcriptional ability as p38-activated c-Fos enhances AP1-driven gene expression. Our findings indicate that as a consequence of the activation of stress pathways induced by UV light, endogenous c-Fos becomes a substrate of p38 MAPKs and, for the first time, provide evidence that support a critical role for p38 MAPKs in mediating stress-induced c-Fos phosphorylation and gene transcription activation. Using a specific pharmacological inhibitor for p38alpha and -beta, we found that most likely these two isoforms mediate UV-induced c-Fos phosphorylation in vivo. Thus, these newly described pathways act concomitantly with the activation of c-Jun by JNK/MAPKs, thereby contributing to the complexity of AP1-driven gene transcription regulation.

Phosphorylation of c-Fos by members of the p38 MAPK family. Role in the AP-1 response to UV light.

Exposition &agrave; des sources de rayonnement UV, comme le soleil, induit un certain nombre d&#39;alt&eacute;rations cellulaires qui sont fortement tributaires de sa capacit&eacute; d&#39;influer sur l&#39;expression des g&egrave;nes. Parmi eux, l&#39;activation rapide des g&egrave;nes codant pour deux sous-familles de proto-oncoprot&eacute;ines, Fos et Jun, qui constituent le facteur de transcription AP-1, jouent un r&ocirc;le cl&eacute; dans le r&egrave;glement ult&eacute;rieur de l&#39;expression des g&egrave;nes impliqu&eacute;s dans la r&eacute;paration de l&#39;ADN, la prolif&eacute;ration cellulaire, arr&ecirc;t du cycle cellulaire, la mort par apoptose et de tissus et de remodelage des prot&eacute;ases de la matrice extracellulaire. Outre &ecirc;tre r&eacute;glement&eacute; au niveau transcriptionnel, Jun et Fos transcriptionnelles activit&eacute;s sont &eacute;galement r&eacute;glement&eacute;es par phosphorylation par suite de l&#39;activation des cascades de signalisation intracellulaires. &Agrave; cet &eacute;gard, la phosphorylation de c-Jun par JNK par les rayons UV a &eacute;t&eacute; facilement document&eacute;e, alors qu&#39;un r&ocirc;le pour les prot&eacute;ines de Fos en r&eacute;ponses v&eacute;hicul&eacute;es par les UV et l&#39;identification des kinases Fos-activation reste vague. Ici, nous identifions p38 MAPK des prot&eacute;ines qui peuvent associer &agrave; c-Fos et phosphoryler &agrave; son domaine de transactivation in vitro et in vivo. Cette phosphorylation est transduite des changements dans sa capacit&eacute; de transcription c-Fos activ&eacute;e par p38 am&eacute;liore l&#39;expression g&eacute;n&eacute;tique ax&eacute;e sur l&#39;AP1. Nos r&eacute;sultats indiquent que par suite de l&#39;activation des voies de stress induit par la lumi&egrave;re UV, c-Fos endog&egrave;ne devient un substrat de p38 MAPK et, pour la premi&egrave;re fois, fournir des preuves qui prennent en charge un r&ocirc;le critique pour p38 MAPK dans la m&eacute;diation de phosphorylation de c-Fos induite par le stress et l&#39;activation de transcription des g&egrave;nes. &Agrave; l&#39;aide d&#39;un inhibiteur pharmacologique sp&eacute;cifique de p38alpha et - beta, nous avons constat&eacute; que tr&egrave;s probablement ces deux isoformes de la m&eacute;dient par les rayons UV-c-Fos phosphorylation in vivo. Ainsi, ces voies nouvellement d&eacute;crits agissent concomitamment avec l&#39;activation de c-Jun par JNK/MAPK, contribuant ainsi &agrave; la complexit&eacute; de la r&eacute;gulation de la transcription g&eacute;nique ax&eacute;e sur l&#39;AP1.

Phosphorylation de c-Fos par des membres de la famille de p38 MAPK. R&ocirc;le dans la r&eacute;ponse de l&#39;AP-1 &agrave; la lumi&egrave;re UV.

Die Phosphorylierung von c-Fos durch Mitglieder der p38-MAPK-Familie. Rolle in der AP-1-Reaktion auf UV-Licht.

L&#39;esposizione a fonti di radiazioni UV, come la luce solare, induce una serie di alterazioni cellulari che sono altamente dipendenti dalla sua capacit&agrave; di influenzare l&#39;espressione genica. Tra questi, la rapida attivazione dei geni che codificano per due sottofamiglie di proto-oncoproteins, Fos e Jun, che costituiscono il fattore di trascrizione AP-1, gioca un ruolo chiave nella regolazione successiva dell&#39;espressione di geni coinvolti nella riparazione del DNA, la proliferazione cellulare, arresto del ciclo cellulare, morte per apoptosi e tessuto e matrice extracellulare che ritocca le proteasi. Oltre ad essere regolato a livello trascrizionale, Jun e Fos attivit&agrave; transcriptional sono anche regolate dalla fosforilazione a seguito dell&#39;attivazione di cascate di segnalazione intracellulare. A questo proposito, la fosforilazione di c-Jun di JNK UV-indotta ha prontamente documentata, mentre un ruolo per le proteine Fos nelle risposte UV-mediata e l&#39;identificazione di Fos-attivazione chinasi &egrave; rimasta elusivo. Qui ci identifichiamo p38 MAPKs come proteine che possono associare con c-Fos e fosforila il dominio di transattivazione sia in vitro che in vivo. Questa fosforilazione &egrave; transduced in cambiamenti nella sua capacit&agrave; trascrizionale come p38-attivato c-Fos aumenta l&#39;espressione di gene AP1-driven. I nostri risultati indicano che in conseguenza dell&#39;attivazione di percorsi di stress indotta da luce UV, endogeni c-Fos diventa un substrato di p38 MAPKs e, per la prima volta, fornire la prova che supportano un ruolo critico per p38 MAPKs nella mediazione della fosforilazione di c-Fos indotta da stress e attivazione trascrizione genica. Utilizzando un inibitore specifico farmacologico per p38alpha e - beta, abbiamo riscontrato che molto probabilmente queste due isoforme mediare c-Fos indotta da UV fosforilazione in vivo. Cos&igrave;, questi percorsi appena descritti agiscono simultaneamente con l&#39;attivazione di c-Jun di JNK/MAPKs, contribuendo in tal modo la complessit&agrave; della regolazione di trascrizione genica AP1-driven.

Fosforilazione di c-Fos dai membri della famiglia p38 MAPK. Ruolo nella risposta AP-1 a luce UV.

&#x7D2B;&#x5916;&#x7DDA;&#x65E5;&#x5149;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x60C5;&#x5831;&#x6E90;&#x3078;&#x306E;&#x66B4;&#x9732;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x304F;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x6570;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E2D;&#x3067;&#x3082;&#x3001;proto &#x764C;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A; Fos &#x3068; Jun, AP 1 &#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x3092;&#x69CB;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x30AD;&#x30FC;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;DNA &#x4FEE;&#x5FA9;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x306E;&#x505C;&#x6B62;&#x3001;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D44;&#x7E54;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x6539;&#x9020;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6B7B;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5F8C;&#x7D9A;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3067;&#x3002;&#x8EE2;&#x5199;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306F;&#x3001;6 &#x6708;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3068; Fos &#x307B;&#x304B;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3082;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30AB;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Fos &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; UV &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3068; Fos &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x3001;&#x3068;&#x3089;&#x3048;&#x3069;&#x3053;&#x308D;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x307E;&#x307E;&#x3044;&#x308B;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3053;&#x306E;&#x70B9;&#x306F;&#x3001;c-Jun JNK &#x7D2B;&#x5916;&#x7DDA;&#x306E;&#x7167;&#x5C04;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3001;&#x8A18;&#x8F09;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005; p38 map &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; C-fos &#x3068;&#x3092;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E; in vitro &#x304A;&#x3088;&#x3073; in vivo &#x3092;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;P38 &#x6D3B;&#x6027;&#x5316; C-fos AP1 &#x99C6;&#x52D5;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x3068;&#x540C;&#x6642;&#x3053;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3078;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x305D;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x80FD;&#x529B;&#x306E;&#x5C0E;&#x5165;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x7D2B;&#x5916;&#x7DDA;&#x5149;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x8D77;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5FDC;&#x529B;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3001;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5185;&#x56E0;&#x6027; C-fos p38 map &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x3001;&#x521D;&#x3081;&#x3066;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x8A98;&#x767A; C-fos &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3068;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3067; p38 map &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x85AC;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306B;&#x306F;&#x3001;p38alpha &#x3068;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;-&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6700;&#x3082;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x3053;&#x308C;&#x3089; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0; C-fos &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x306E; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x7D2B;&#x5916;&#x7DDA;&#x306E;&#x7167;&#x5C04;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x304F;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E; c-Jun JNK/&#x3010; AP1 &#x99C6;&#x52D5;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x8EE2;&#x5199;&#x5236;&#x5FA1;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x3055;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x4ED8;&#x968F;&#x3057;&#x3066;&#x884C;&#x52D5;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

P38 MAPK &#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x308B; C-fos &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3002;AP 1 UV &#x5149;&#x306B;&#x5FDC;&#x3048;&#x3066;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3002;

&#xD587;&#xBE5B; &#xB4F1; &#xC790;&#xC678;&#xC120; &#xBC29;&#xC0AC;&#xC120;&#xC758; &#xADFC;&#xC6D0;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C;&#xC744; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE60; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;&#xB294; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC758;&#xC874; &#xD558;&#xB294; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xBCC0;&#xACBD; &#xC720;&#xB3C4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;-oncoproteins&#xC758; 2 &#xAC1C;&#xC758; &#xC11C;&#xBE0C;&#xD328;&#xBC00;&#xB9AC;&#xAC00; &#xB300; &#xD55C; &#xCF54;&#xB529; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xAC00;&#xC6B4;&#xB370; Fos &#xBC0F; 6 &#xC6D4;, AP 1 &#xC804;&#xC0AC; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xAD6C;&#xC131; &#xD558;&#xB294; DNA &#xC218;&#xB9AC;, &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD;, &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xAC80;&#xAC70;, apoptosis, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC870;&#xC9C1;&#xACFC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xD504;&#xB85C; &#xD14C;&#xC544;&#xB97C; &#xB9AC; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xD558; &#xC5EC; &#xC8FD;&#xC74C;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC758; &#xD6C4;&#xC18D; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD575;&#xC2EC;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. 6 &#xC6D4; transcriptional &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADDC;&#xC81C; &#xB418; &#xACE0; &#xACE0; &#xD3EC; &#xC678; transcriptional &#xD65C;&#xB3D9; &#xB610;&#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC2DC;&#xADF8;&#xB110;&#xB9C1;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;&#xB85C; &#xC778; &#xD55C; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC640; &#xAD00;&#xB828;, c-6 &#xC6D4; UV &#xC720;&#xB3C4; JNK&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB294; &#xC27D;&#xAC8C; &#xBB38;&#xC11C;&#xD654; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xBC18;&#xBA74; UV &#xC911;&#xC7AC; &#xC751;&#xB2F5; &#xBC0F; Fos &#xD65C;&#xC131;&#xD654; kinases &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC5D0; Fos &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD558;&#xAE30; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6B4; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; c-Fos &#xC5F0;&#xAD00; &#xD558; &#xACE0; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; vivo&#xC5D0;&#xC11C; transactivation &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; phosphorylate &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; &#xC11C; p38 Mapks&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; p38 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; c-Fos &#xD5A5;&#xC0C1; AP1 &#xAE30;&#xBC18; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC73C;&#xB85C; transcriptional &#xB2A5;&#xB825; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD88;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xACE0; &#xC790;&#xC678;&#xC120;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xBC1C; &#xB41C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;&#xB85C; &#xC0DD; c-Fos p38 Mapks&#xC758; &#xAE30;&#xD310;&#xC740;, &#xCC98;&#xC74C;&#xC73C;&#xB85C; p38 MAPKs c-Fos &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC720;&#xBC1C; &#xBC0F; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC0AC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC9C0; &#xC6D0;&#xD558;&#xB294; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD2B9;&#xC815; &#xC57D;&#xB9AC; &#xBC18;&#xC751; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; p38alpha &#xBC0F;-&#xBCA0;&#xD0C0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC774; &#xB450; isoforms UV &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; c-Fos &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC7AC; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C; &#xC124;&#xBA85;&#xD55C; &#xACBD;&#xB85C; c-6 &#xC6D4; JNK/MAPKs, AP1 &#xAE30;&#xBC18; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC0AC; &#xC870;&#xC808;&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1;&#xC131;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD568;&#xC73C;&#xB85C;&#xC368; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; concomitantly &#xD589;&#xB3D9;.

C-Fos, p38 MAPK &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;. &#xC790;&#xC678;&#xC120;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; AP 1 &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5ED;&#xD560;.

Exposici&oacute;n a fuentes de radiaci&oacute;n ultravioleta, como la luz del sol, induce a una serie de alteraciones celulares que dependen mucho de su capacidad de afectar la expresi&oacute;n g&eacute;nica. Entre ellos, la r&aacute;pida activaci&oacute;n de genes que codifican para dos subfamilias de proto-oncoprote&iacute;nas, Fos y Jun, que constituyen el factor de transcripci&oacute;n AP-1, juega un papel clave en la posterior regulaci&oacute;n de la expresi&oacute;n de genes implicados en la reparaci&oacute;n del ADN, proliferaci&oacute;n celular, la detenci&oacute;n del ciclo celular, muerte por apoptosis y tejido y matriz extracelular proteasas de remodelaci&oacute;n. Adem&aacute;s de ser regulada a nivel transcripcional, Jun y Fos transcripcionales actividades tambi&eacute;n est&aacute;n reguladas por fosforilaci&oacute;n como resultado de la activaci&oacute;n de cascadas de se&ntilde;alizaci&oacute;n intracelulares. En este sentido, la fosforilaci&oacute;n de c-Jun por JNK inducida por UV ha sido f&aacute;cilmente documentada, mientras que un papel para las prote&iacute;nas Fos en las respuestas mediadas por UV y la identificaci&oacute;n de Fos-activar quinasas sigue siendo esquivo. Aqu&iacute; identificamos p38 MAPKs como prote&iacute;nas que pueden asociarse con c-Fos y fosforilan su dominio de transactivaci&oacute;n tanto in vitro como in vivo. Esta fosforilaci&oacute;n es transduced en cambios en su capacidad transcripcional como c-Fos p38-activa mejora la expresi&oacute;n g&eacute;nica basadas en AP1. Nuestros resultados indican que como consecuencia de la activaci&oacute;n de v&iacute;as de estr&eacute;s inducido por la luz UV, c-Fos end&oacute;geno se convierte en un sustrato de las MAPKs p38 y, por primera vez, aportar pruebas que apoyan un papel cr&iacute;tico para MAPKs p38 en la mediaci&oacute;n de la fosforilaci&oacute;n de c-Fos inducida por el estr&eacute;s y la activaci&oacute;n de la transcripci&oacute;n de genes. Usando un inhibidor farmacol&oacute;gico espec&iacute;fico para p38alpha y - beta, encontramos que probablemente estas dos isoformas median UV-inducida c-Fos fosforilaci&oacute;n in vivo. As&iacute;, estas v&iacute;as nuevamente descritas act&uacute;an concomitante con la activaci&oacute;n de c-Jun por JNK/MAPKs, contribuyendo a la complejidad de la regulaci&oacute;n de la transcripci&oacute;n de genes basadas en AP1.

Fosforilaci&oacute;n de c-Fos por miembros de la familia de p38 MAPK. Papel en la respuesta de la AP-1 a los rayos UV.

&#x8425;&#x5730;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x5728;&#x8BB8;&#x591A;&#x5F62;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x3002;&#x8BB8;&#x591A;&#x5E74;&#x6765;&#xFF0C;&#x8425;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; (PKA) &#x4EE3;&#x8868;&#x552F;&#x4E00;&#x5DF2;&#x77E5;&#x8425;&#x5730;&#x6548;&#x5E94;&#x3002;Pka &#x503C;&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x5B8C;&#x5168;&#x6A21;&#x4EFF;&#x8425;&#x5730;&#xFF0C;&#x7684;&#x884C;&#x52A8;&#x8868;&#x660E; PKA &#x72EC;&#x7ACB;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x4E25;&#x683C;&#x8981;&#x6C42;&#x5BF9; mitogenesis &#x7684;&#x8425;&#x5730;&#x5F71;&#x54CD; cAMP &#x4ECB;&#x5BFC;&#x6D3B;&#x5316;&#x7684; G &#x86CB;&#x767D; Rap1 &#x548C;&#x7531; PKA &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5047;&#x8BBE;&#xFF0C;Epac Rap1 &#x6D3B;&#x5316;&#x5242;&#x53EF;&#x80FD;&#x4EE3;&#x8868;&#x7684;&#x72EC;&#x7ACB; PKA &#x7684;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A; Epac PKA &#x4E0E;&#x534F;&#x540C;&#x884C;&#x4E3A;&#x4E2D; cAMP &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684; mitogenesis&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x4EA7;&#x751F;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x65B0;&#x5360;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x5730;&#x4F4D;&#x7684;&#x6D88;&#x6781; Epac &#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86; Epac &#x6FC0;&#x6D3B;&#x662F;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x4FC3;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x6FC0;&#x7D20;&#x6216; DNA &#x5408;&#x6210;&#x8425;&#x523A;&#x6FC0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x5BF9; cAMP &#x4ECB;&#x5BFC;&#x6D3B;&#x5316;&#x7684; Rap1 &#x8BE5; Epac &#x884C;&#x52A8;&#x548C; cAMP &#x4ECB;&#x5BFC; mitogenesis &#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E; Epac &#x7684;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B9A;&#x4F4D;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x5176; DEP &#x57DF;&#x3002;Epac &#x4F9D;&#x8D56; DEP &#x7684;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9488;&#x5BF9;&#x4E2D;&#x65AD;&#x5E9F;&#x9664; cAMP &#x4ECB;&#x5BFC; Epac Rap1 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x4FC3;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x6FC0;&#x7D20;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A; Epac-Rap-PKA &#x4FE1;&#x53F7;&#x5355;&#x4F4D;&#x8425;&#x5730;&#x7684;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;

Epac&#xFF0C;&#x5728;&#x8425;&#x5730;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; (PKA) &#x7684;&#x534F;&#x8C03;&#x914D;&#x5408;&#x662F;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684; cAMP &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684; mitogenesis&#x3002;

cAMP stimulates proliferation in many cell types. For many years, cAMP-dependent protein kinase (PKA) represented the only known cAMP effector. PKA, however, does not fully mimic the action of cAMP, indicating the existence of a PKA-independent component. Since cAMP-mediated activation of the G-protein Rap1 and its phosphorylation by PKA are strictly required for the effects of cAMP on mitogenesis, we hypothesized that the Rap1 activator Epac might represent the PKA-independent factor. Here we report that Epac acts synergistically with PKA in cAMP-mediated mitogenesis. We have generated a new dominant negative Epac mutant that revealed that activation of Epac is required for thyroid-stimulating hormone or cAMP stimulation of DNA synthesis. We demonstrate that Epac's action on cAMP-mediated activation of Rap1 and cAMP-mediated mitogenesis depends on the subcellular localization of Epac via its DEP domain. Disruption of the DEP-dependent subcellular targeting of Epac abolished cAMP-Epac-mediated Rap1 activation and thyroid-stimulating hormone-mediated cell proliferation, indicating that an Epac-Rap-PKA signaling unit is critical for the mitogenic action of cAMP.

Epac, in synergy with cAMP-dependent protein kinase (PKA), is required for cAMP-mediated mitogenesis.

cAMP stimule la prolif&eacute;ration de plusieurs types de cellules. Pendant de nombreuses ann&eacute;es,-prot&eacute;ine kinase AMPc d&eacute;pendante (PKA) a repr&eacute;sent&eacute; le seul effecteur cAMP connu. PKA, cependant, ne pas enti&egrave;rement reproduit l&#39;action du cAMP, indiquant l&#39;existence d&#39;une composante ind&eacute;pendante de la PKA. &Eacute;tant donn&eacute; que l&#39;activation induite par le cAMP de la G-prot&eacute;ine de Rap1 et sa phosphorylation par la PKA sont strictement n&eacute;cessaires pour les effets du cAMP sur la mitogen&egrave;se, nous avons suppos&eacute; que l&#39;activateur Rap1 Epac pourrait constituer le facteur ind&eacute;pendant de la PKA. Nous rapportons ici que Epac agit en synergie avec un PKA de mitog&eacute;n&egrave;se induite par le cAMP. Nous avons g&eacute;n&eacute;r&eacute; un nouveau dominant n&eacute;gatif Epac mutant qui a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que l&#39;activation d&#39;Epac est requise pour la thyr&eacute;ostimuline ou cAMP stimulation de la synth&egrave;se de l&#39;ADN. Nous d&eacute;montrer une action de cette Epac sur cAMP m&eacute;di&eacute;e par l&#39;activation de Rap1 et mitog&eacute;n&egrave;se induite par le cAMP d&eacute;pend de la localisation subcellulaire d&#39;Epac, par l&#39;interm&eacute;diaire de son domaine DEP. Perturbation du ciblage subcellulaire DEP-d&eacute;pendante du CCPE aboli activation de Rap1 v&eacute;hicul&eacute;e par Epac-cAMP et de la prolif&eacute;ration cellulaire induite par l&#39;hormone thyr&eacute;otrope, indiquant qu&#39;une unit&eacute; de signalisation Epac-Rap-PKA est essentielle pour l&#39;action mitog&eacute;nique du cAMP.

EPAC, en synergie avec-prot&eacute;ine kinase AMPc d&eacute;pendante (PKA), est n&eacute;cessaire pour la mitogen&egrave;se induite par le cAMP.

Lager stimuliert Verbreitung in vielen Zelltypen. Seit vielen Jahren vertreten Lager-abh&auml;ngige Proteinkinase (PKA) den einzigen bekannten cAMP Effektor. PKA, jedoch nicht vollst&auml;ndig die Wirkung von cAMP, nachbilden, die Existenz einer PKA-unabh&auml;ngige Komponente angibt. Da Lager-vermittelte Aktivierung von G-Protein-Rap1 und die Phosphorylierung von PKA sind unbedingt erforderlich, um die Auswirkungen des Lagers auf Mitogenesis, Hypothese wir, dass der Rap1-Aktivator Epac den PKA-unabh&auml;ngige-Faktor darstellen k&ouml;nnte. Hier berichten wir, dass Epac synergistisch mit PKA im Lager-vermittelte Mitogenesis wirkt. Wir haben eine neue dominante negative Epac Mutante generiert, die ergab, dass die Aktivierung der Epac f&uuml;r Thyreoidea - stimulierendes Hormon oder cAMP Stimulation der DNA-Synthese ben&ouml;tigt. Wir zeigen, dass Epac Aktion auf Lager-vermittelte Aktivierung der Rap1 und Lager-vermittelte Mitogenesis h&auml;ngt die subzellulare Lokalisation der Epac &uuml;ber seine DEP-Dom&auml;ne. St&ouml;rung der DEP-abh&auml;ngige subzellulare Ausrichtung der Epac Lager-Epac-vermittelter Rap1 Aktivierung und Schilddr&uuml;sen - Hormon-vermittelte Zellproliferation, darauf hinweist, dass eine Epac-Rap-PKA Signalling Unit kritisch f&uuml;r die mitogenen Aktion des Lagers ist abgeschafft.

EPAC, ist in Synergie mit Lager-abh&auml;ngige Proteinkinase (PKA), Lager-vermittelte Mitogenesis erforderlich.

cAMP stimola la proliferazione in molti tipi di cellule. Per molti anni, chinasi di proteina accampamento-dipendente (PKA) ha rappresentato il solo effettrici cAMP conosciuto. PKA, tuttavia, non completamente imitano l&#39;azione dell&#39;accampamento, che indica l&#39;esistenza di una componente indipendente dalla PKA. Poich&eacute; l&#39;accampamento-mediata attivazione della G-proteina Rap1 e sua fosforilazione da PKA sono strettamente necessari per gli effetti dell&#39;accampamento sulla mitogenesi, abbiamo ipotizzato che l&#39;attivatore Rap1 Epac potrebbe rappresentare il fattore indipendente dalla PKA. Qui riportiamo che Epac agisce in sinergia con PKA nell&#39;accampamento-mediata endoteliali. Noi abbiamo generato un nuovo dominante negativo Epac mutante che ha rivelato che l&#39;attivazione di Epac &egrave; richiesto per Ormone tireostimolante o accampamento stimolazione della sintesi del DNA. Dimostriamo azione di quel Epac all&#39;accampamento-mediata attivazione del Rap1 e accampamento-mediata endoteliali dipende la localizzazione sottocellulare di Epac via suo dominio DEP. Interruzione di DEP-dipendente targeting sottocellulare di Epac abolito cAMP-Epac-mediata Rap1 attivazione e proliferazione delle cellule ormone tireostimolante-mediata, che indica che un&#39;unit&agrave; di segnalazione Epac-Rap-PKA &egrave; critica per l&#39;azione dell&#39;accampamento mitogeni.

EPAC, in sinergia con la chinasi di proteina accampamento-dipendente (PKA), &egrave; richiesto per endoteliali accampamento-mediata.

&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x578B;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9577;&#x5E74;&#x306B;&#x308F;&#x305F;&#x308A;&#x3001;cAMP &#x4F9D;&#x5B58;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; (PKA) &#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E; cAMP &#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;PKA&#x3001;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7; &#x30FB; PKA &#x4F9D;&#x5B58;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x6A21;&#x5023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x53B3;&#x5BC6;&#x306B;&#x306F;&#x5FC5;&#x8981;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x306B; G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; Rap1 &#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x305D;&#x306E; PKA &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306A;&#x306E;&#x3067;&#x3001;Rap1 &#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; Epac PKA &#x4F9D;&#x5B58;&#x8981;&#x56E0;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x305F;.&#x3053;&#x3053; Epac &#x76F8;&#x4E57;&#x7684; PKA &#x304C;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x3067;&#x884C;&#x52D5;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Epac &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x304C;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x523A;&#x6FC0;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x307E;&#x305F;&#x306F; DNA &#x5408;&#x6210;&#x306E; cAMP &#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x652F;&#x914D;&#x7684;&#x306A;&#x8CA0;&#x306E; Epac &#x30DF;&#x30E5;&#x30FC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x305D;&#x306E; Epac Rap1 &#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3057;&#x3001;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1; Epac &#x5185;&#x5C40;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x305D;&#x306E; DEP &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;DEP &#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x4E0B;&#x306E; Epac &#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x4E2D;&#x65AD;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7; Epac &#x4ECB;&#x3057;&#x305F; Rap1 &#x6D3B;&#x6027;&#x3068;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x523A;&#x6FC0;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x3001;Epac &#x30E9;&#x30C3;&#x30D7; PKA &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x7814;&#x7A76;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x304C; b-14-11 &#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3002;

Epac&#x3001;cAMP &#x4F9D;&#x5B58;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; A(PKA) &#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E57;&#x52B9;&#x679C;&#x3067;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#xCEA0;&#xD504; &#xB9CE;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xD615;&#xC5D0; &#xD655;&#xC0B0;&#xC744; &#xC790;&#xADF9;. &#xBA87; &#xB144; &#xB3D9;&#xC548;, &#xCEA0;&#xD504; &#xC885;&#xC18D; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; (PKA) &#xC720;&#xC77C;&#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xCEA0;&#xD504; &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; PKA, &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0; &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xBAA8;&#xBC29; &#xCEA0;&#xD504;, &#xC791;&#xC5C5; PKA &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xAD6C;&#xC131;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294;. PKA&#xC5D0; &#xC758;&#xD574;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC640; G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; rap1&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xCEA0;&#xD504; &#xC911;&#xC7AC; mitogenesis&#xC5D0; &#xCEA0;&#xD504;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xB300; &#xD55C; &#xC5C4;&#xACA9; &#xD558; &#xAC8C; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xBBC0;&#xB85C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Rap1 &#xD65C;&#xC131;&#xAE30; Epac PKA &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0BC; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;&#xB294; &#xAC00;&#xC124;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xCEA0;&#xD504; &#xC911;&#xC7AC; mitogenesis&#xC5D0;&#xC11C; Epac PKA&#xC640; synergistically &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; Epac &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; Epac&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB294; &#xAC11; &#xC0C1;&#xC120;-&#xC790;&#xADF9; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC; &#xB610;&#xB294; DNA &#xD569;&#xC131;&#xC758; &#xCEA0;&#xD504; &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xACF5;&#xAC1C;&#xB294; &#xC0DD;&#xC131;. Rap1 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xCEA0;&#xD504; &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; Epac &#xC791;&#xC5C5; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xBC0F; &#xCEA0;&#xD504; &#xC911;&#xC7AC; mitogenesis DEP &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xD1B5;&#xD574; Epac subcellular &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. DEP&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; subcellular &#xD0C0;&#xAC9F;&#xD305; Epac&#xC758; &#xC911;&#xB2E8; Rap1 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xCEA0;&#xD504; Epac &#xC911;&#xC7AC;&#xC640; &#xC911;&#xC7AC; &#xAC11; &#xC0C1;&#xC120;-&#xC790;&#xADF9; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD;, Epac &#xB7A9; PKA &#xC2E0;&#xD638; &#xB2E8;&#xC704; &#xCEA0;&#xD504;&#xC758; mitogenic &#xC791;&#xC5C5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xD3D0;&#xC9C0;.

Epac, &#xCEA0;&#xD504; &#xC885;&#xC18D; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; (PKA)&#xC640; &#xC2DC;&#xB108;&#xC9C0; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC5D0; &#xCEA0;&#xD504; &#xC911;&#xC7AC; mitogenesis &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Campamento estimula la proliferaci&oacute;n en muchos tipos celulares. Durante muchos a&ntilde;os, quinasa dependiente de cAMP (PKA) represent&oacute; el &uacute;nico efector campamento conocido. PKA, sin embargo, no totalmente imitan la acci&oacute;n de campo, indicando la existencia de un componente de PKA-independiente. Puesto que la activaci&oacute;n mediada por el campo de la prote&iacute;na G Rap1 y su fosforilaci&oacute;n por PKA es estrictamente necesaria para los efectos de campo en la mitog&eacute;nesis, presumimos que el activador Rap1 Epac podr&iacute;a representar el factor de PKA-independiente. Aqu&iacute; divulgamos que Epac act&uacute;a sin&eacute;rgicamente con PKA en la mitog&eacute;nesis mediada por cAMP. Hemos generado a un nuevo dominante negativo Epac mutante que revel&oacute; que la activaci&oacute;n de Epac es necesaria para la tirotropina o campo estimulaci&oacute;n de la s&iacute;ntesis de ADN. Demostramos la acci&oacute;n de eso Epac en activaci&oacute;n mediada por campo de Rap1 y mitog&eacute;nesis mediada por campo depende de la localizaci&oacute;n subcelular de Epac mediante su dominio DEP. Interrupci&oacute;n de la focalizaci&oacute;n subcelular DEP-dependiente de Epac hab&iacute;a suprimido mediada por cAMP-Epac Rap1 activaci&oacute;n y proliferaci&oacute;n celular mediada por la hormona estimulante de tiroides, lo que indica que una unidad de se&ntilde;alizaci&oacute;n de Epac-Rap-PKA es cr&iacute;tica para la acci&oacute;n mitog&eacute;nica de campamento.

EPAC, en sinergia con la quinasa dependiente de cAMP (PKA), se requiere para la mitog&eacute;nesis mediada por cAMP.

Rap1b &#x6709;&#x7275;&#x8FDE;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684; cAMP &#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#xFF0C;&#x8FC5;&#x901F;&#x589E;&#x52A0;&#x80DE;&#x5185;&#x8425;&#x6FC0;&#x6D3B; &#xFF08;&#x5373; GTP &#x7ED1;&#x5B9A;&#xFF09; &#x548C;&#x5176; C &#x603B;&#x7AD9; phosphorylate Rap1b Ser(179) &#x4E0A;&#x7684;&#x3002;&#x8425;&#x5730;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; (PKA)-&#x4ECB;&#x5BFC;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684; Rap1b &#x662F;&#x9700;&#x8981;&#x4F9D;&#x8D56;&#x8425;&#x5730;&#x7684; mitogenesis&#x3001; &#x80BF;&#x7624;&#x53D1;&#x751F;&#x3001; &#x548C; AKT &#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x4F5C;&#x7528;&#x4ECD;&#x7136;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5229;&#x7528;&#x9170;&#x80FA;&#x6C22;/&#x6C18;&#x4EA4;&#x6362;&#x8D28;&#x8C31; (DXMS) &#x6765;&#x8BC4;&#x4F30;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x53D8;&#x5316;&#x548C;/&#x6216;&#x6D41;&#x52A8;&#x6027;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x62A5;&#x544A; DXMS &#x6570;&#x636E;&#x6BD4;&#x8F83; PKA &#x78F7;&#x9178;&#x5316; (Rap1-P) &#x548C; S179D (Rap1 D) phosphomimetic Rap1b &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x6C47;&#x7387;&#x3002;Rap1 P &#x548C; Rap1 D &#x8868;&#x73B0;&#x5B8C;&#x5168;&#x76F8;&#x540C;&#xFF0C;&#x63ED;&#x793A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28; &#xFF1B; &#x6CBF;&#x79BB;&#x6563;&#x5730;&#x533A;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x6C47;&#x7387;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5730;&#x533A;&#x5305;&#x62EC;&#x5468;&#x56F4;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x57DF;&#x548C;&#x4E24;&#x4E2A;&#x610F;&#x5916;&#x5207;&#x6362;&#x5FAA;&#x73AF;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x672C;&#x5730;&#x6548;&#x679C; Ser(179) &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x8BF1;&#x5BFC; allosterically &#x4E0E;&#x5176;&#x8FDC;&#x7AEF;&#x57DF;&#x53C2;&#x4E0E;&#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#x6548;&#x5E94;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6548;&#x5E94;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x5DEE;&#x522B;&#x5F71;&#x54CD; Rap1 &#x901A;&#x8FC7; PKA &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x673A;&#x68B0;&#x89E3;&#x91CA;&#x3002;

Rap1b &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5F15;&#x8D77;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x53D8;&#x5316;&#xFF1A; &#x4EA4;&#x6362;&#x673A;&#x57DF;&#x548C;&#x6548;&#x5E94;&#x5668;&#x5FAA;&#x73AF;&#x7684;&#x53D8;&#x6784;&#x6548;&#x5E94;&#x3002;

Rap1b has been implicated in the transduction of the cAMP mitogenic response. Agonists that increase intracellular cAMP rapidly activate (i.e. GTP binding) and phosphorylate Rap1b on Ser(179) at its C terminus. cAMP-dependent protein kinase (PKA)-mediated phosphorylation of Rap1b is required for cAMP-dependent mitogenesis, tumorigenesis, and inhibition of AKT activity. However, the role of phosphorylation still remains unknown. In this study, we utilized amide hydrogen/deuterium exchange mass spectroscopy (DXMS) to assess potential conformational changes and/or mobility induced by phosphorylation. We report here DXMS data comparing exchange rates for PKA-phosphorylated (Rap1-P) and S179D phosphomimetic (Rap1-D) Rap1b proteins. Rap1-P and Rap1-D behaved exactly the same, revealing an increased exchange rate in discrete regions along the protein; these regions include a domain around the phosphorylation site and unexpectedly the two switch loops. Thus, local effects induced by Ser(179) phosphorylation communicate allosterically with distal domains involved in effector interaction. These results provide a mechanistic explanation for the differential effects of Rap1 phosphorylation by PKA on effector protein interaction.

Phosphorylation-induced conformational changes in Rap1b: allosteric effects on switch domains and effector loop.

Rap1b a &eacute;t&eacute; impliqu&eacute; dans la transduction de l&#39;AMPc r&eacute;ponse mitog&egrave;ne. Agonistes AMPc intracellulaire d&#39;accro&icirc;tre rapidement activer (c&#39;est-&agrave;-dire liant GTP) et phosphoryler Rap1b sur Ser(179) &agrave; son extr&eacute;mit&eacute; C terminale. prot&eacute;ine kinase AMPc d&eacute;pendante (PKA)-m&eacute;di&eacute;e par la phosphorylation de Rap1b est requise pour la mitogen&egrave;se cAMP-d&eacute;pendante, tumorigen&egrave;se et inhibition de l&#39;activit&eacute; de l&#39;AKT. Cependant, le r&ocirc;le de la phosphorylation reste encore inconnu. Dans cette &eacute;tude, nous avons utilis&eacute; la spectroscopie de masse change amide hydrog&egrave;ne/deut&eacute;rium (DXMS) pour &eacute;valuer les changements conformationnels potentiels et/ou mobilit&eacute; induite par la phosphorylation. Nous rapportons ici les donn&eacute;es DXMS en comparant les taux de change pour les prot&eacute;ines de Rap1b phosphomimetic (D-Rap1) PKA-phosphoryl&eacute;s (Rap1-P) et S179D. Rap1-P et Rap1-D comportaient exactement la m&ecirc;me chose, r&eacute;v&eacute;lant un taux accru d&#39;&eacute;change dans des r&eacute;gions discr&egrave;tes le long de la prot&eacute;ine ; ces r&eacute;gions incluent un domaine autour du site de phosphorylation et inattendue, les deux commutation boucles. Ainsi, des effets locaux induites par la phosphorylation de Ser(179) communiquent allost&eacute;riquement avec distales domaines impliqu&eacute;s dans l&#39;interaction de l&#39;effecteur. Ces r&eacute;sultats fournissent une explication m&eacute;caniste des effets diff&eacute;rentiels de Rap1 phosphorylation de PKA sur interaction prot&eacute;ine effectrice.

Phosphorylation induit par des changements conformationnels dans Rap1b : effets allost&eacute;riques sur commutateur domaines et boucle effectrice.

Rap1b hat in der Signaltransduktion der cAMP mitogenen Antwort verwickelt. Agonisten, die intrazellul&auml;ren cAMP sehr schnell ansteigen zu aktivieren (d.h. GTP-Bindung) und phosphoryliert Rap1b auf Ser(179) seine C-Terminus. Lager-abh&auml;ngige Proteinkinase (PKA)-vermittelten Phosphorylierung von Rap1b ist f&uuml;r Lager-abh&auml;ngige Mitogenesis, Tumorentstehung und Hemmung der AKT-Aktivit&auml;t erforderlich. Die Rolle der Phosphorylierung ist jedoch noch unbekannt. In dieser Studie benutzt wir Amid Wasserstoff/Deuterium Austausch Massenspektroskopie (DXMA) zur Bewertung der potenzieller Konformationsver&auml;nderungen und/oder Mobilit&auml;t induziert durch Phosphorylierung. Wir berichten hier DXMA Daten vergleichen Wechselkurse f&uuml;r PKA phosphoryliert (Rap1-P) und S179D Phosphomimetic (Rap1-D) Rap1b Proteine. Genau das gleiche, verhielt offenbart einen erh&ouml;hten Wechselkurs in diskrete Regionen entlang dem Protein, Rap1-P und Rap1-D; Diese Regionen geh&ouml;ren eine Domain rund um die Phosphorylierung-Website und unerwartet wechseln die beiden Schleifen. So werden lokale Effekte induziert durch Ser(179) Phosphorylierung phosphorylierter mit Effektor-Wechselwirkung beteiligt distale Dom&auml;nen kommunizieren. Diese Ergebnisse liefern eine mechanistische Erkl&auml;rung f&uuml;r die Wirkungen von Rap1 Phosphorylierung von PKA auf Effektor-Protein-Interaktion.

Induziert durch Phosphorylierung Konformationsver&auml;nderungen in Rap1b: allosterische Effekte auf Switch Domains und Effektor-Schleife.

Rap1b &egrave; stata implicata nella trasduzione della risposta mitogeni cAMP. Attivare agonisti che aumentano rapidamente cAMP intracellulare (cio&egrave; associazione GTP) e fosforila Rap1b su Ser(179) al suo capolinea C. chinasi di proteina accampamento-dipendente (PKA)-fosforilazione mediata di Rap1b &egrave; richiesta per cAMP-dependent endoteliali, tumorigenesi e inibizione dell&#39;attivit&agrave; AKT. Tuttavia, il ruolo della fosforilazione rimane ancora sconosciuto. In questo studio, abbiamo utilizzato la spettroscopia di massa scambio del idrogeno/deuterio di ammide (DXMS) per valutare potenziali cambiamenti conformazionali e/o mobilit&agrave; indotta dalla fosforilazione. Riportiamo qui dati DXMS confrontando i tassi di cambio per le proteine fosforilate PKA (Rap1-P) e S179D phosphomimetic (Rap1-D) Rap1b. Rap1-P e D-Rap1 comportati esattamente lo stesso, rivelando un maggiore tasso di cambio nelle regioni discreti lungo la proteina; queste regioni includono un dominio intorno al sito di fosforilazione e inaspettatamente i due switch loop. Cos&igrave;, gli effetti locali indotti da fosforilazione Ser(179) allosterically comunicano con distale domini coinvolti nell&#39;interazione effettore. Questi risultati forniscono una spiegazione meccanicistica per gli effetti differenziali di Rap1 fosforilazione da PKA sull&#39;interazione di proteine effettrici.

Alterazioni conformazionali indotte dalla fosforilazione Rap1b: effetti allosterici sull&#39;interruttore domini ed effettrici loop.

Rap1b &#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x306E;&#x764C;&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306E;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185; cAMP &#x3092;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x5897;&#x3084;&#x3059;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3059;&#x308B; (&#x3059;&#x306A;&#x308F;&#x3061; GTP &#x7D50;&#x5408;) &#x3068;&#x305D;&#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x306B; Rap1b Ser(179) &#x3092;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;cAMP &#x4F9D;&#x5B58;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; (PKA)-Rap1b &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x305F;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x3001;&#x816B;&#x760D;&#x5F62;&#x6210;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; AKT &#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;, &#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x6C34;&#x7D20;/&#x91CD;&#x6C34;&#x7D20;&#x4EA4;&#x63DB;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x5149; (DXMS) &#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x79FB;&#x52D5;&#x5EA6;&#x3092;&#x6D3B;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;DXMS &#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E; PKA &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B; (Rap1-P) &#x3068; S179D phosphomimetic &#xFF08;Rap1-D&#xFF09; Rap1b &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x70BA;&#x66FF;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Rap1 P &#x3068; Rap1 D &#x307E;&#x3063;&#x305F;&#x304F;&#x540C;&#x3058;&#x5897;&#x52A0;&#x70BA;&#x66FF;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x3066;&#x4E0D;&#x9023;&#x7D9A;&#x306A;&#x9818;&#x57DF;&#x3067;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3075;&#x308B;&#x307E;&#x3063;&#x305F;;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x5468;&#x308A;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5730;&#x57DF;&#x3092;&#x542B;&#x3081;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x304C;&#x4E88;&#x671F;&#x305B;&#x305A;&#x3001;2 &#x3064;&#x306E;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x5207;&#x308A;&#x66FF;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;Ser(179) &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x8D77;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5C40;&#x6240;&#x52B9;&#x679C;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x9060;&#x4F4D;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x901A;&#x4FE1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x304B;&#x3089; Rap1 &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308B; PKA &#x306E;&#x5DEE;&#x52D5;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x306A;&#x8AAC;&#x660E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Rap1b &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x8A98;&#x8D77;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DB;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5909;&#x5316;: &#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC; &#x30EB;&#x30FC;&#x30D7; &#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x52B9;&#x679C;&#x3002;

Rap1b &#xCEA0;&#xD504; mitogenic &#xC751;&#xB2F5;&#xC758; &#xBCC0;&#xD658;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xB418;&#xC5B4;&#xC788;&#xB2E4;. &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xCEA0;&#xD504;&#xB97C; &#xAE09;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xC99D;&#xAC00; agonists &#xD65C;&#xC131;&#xD654; (&#xC989;, GTP &#xBC14;&#xC778;&#xB529;)&#xC758; C &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0; ser(179)&#xC5D0;&#xC11C; rap1b&#xB97C; phosphorylate &#xD558; &#xACE0;. &#xCEA0;&#xD504; &#xC885;&#xC18D; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; (PKA)-rap1b&#xC758; &#xC911;&#xC7AC; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB294; &#xCEA0;&#xD504; &#xC885;&#xC18D; mitogenesis, tumorigenesis, &#xBC0F; AKT &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC800;&#xD574;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC740; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC544; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xC758; &#xC218;&#xC18C;/&#xC911;&#xC218;&#xC18C; &#xAD50;&#xD658; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xAD11;&#xD559; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; (DXMS) &#xBC0F; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xC774;&#xB3D9;&#xC131; &#xD65C;&#xC6A9;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xC5EC;&#xAE30; DXMS &#xB370;&#xC774;&#xD130; PKA phosphorylated (Rap1 P) &#xBC0F; S179D (Rap1 D) phosphomimetic Rap1b &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD658;&#xC728;&#xC744; &#xBE44;&#xAD50; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Rap1 P&#xC640; Rap1 D &#xD589;&#xB3D9; &#xC815;&#xD655;&#xD788; &#xAC19;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;; &#xB530;&#xB77C; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD658;&#xC728; &#xACF5;&#xAC1C; &#xC774; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xACE0; &#xC608;&#xAE30;&#xCE58; &#xC54A;&#xAC8C; &#xB450; &#xB8E8;&#xD504; &#xC804;&#xD658;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, Ser(179) &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xB85C;&#xCEEC; &#xD6A8;&#xACFC; allosterically &#xC6D0;&#xC2EC; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xACFC; &#xD1B5;&#xC2E0;&#xD560; &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; effector &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; Rap1 PKA&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xCC28;&#xB3D9; &#xD6A8;&#xACFC; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xACC4; &#xB860; &#xC801;&#xC778; &#xC124;&#xBA85;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;.

Rap1b&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBCC0;&#xD654; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC720;&#xB3C4;: &#xC2A4;&#xC704;&#xCE58; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBC0F; &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xB8E8;&#xD504;&#xC5D0; allosteric &#xD6A8;&#xACFC;.

Rap1b se ha implicado en la transducci&oacute;n de la respuesta mitog&eacute;nica de campo. Agonistas que aumentan r&aacute;pidamente campamento intracelular activan (es decir, Uni&oacute;n de GTP) y fosforilan Rap1b en Ser(179) en su terminal C. quinasa dependiente de cAMP (PKA)-fosforilaci&oacute;n mediada de Rap1b se requiere para campo dependiente mitog&eacute;nesis y tumorigenesis inhibici&oacute;n de la actividad AKT. Sin embargo, el papel de la fosforilaci&oacute;n de sigue siendo desconocido. En este estudio, se utilizaron espectroscopia de masas intercambio (DXMS) para evaluar los potenciales cambios conformacionales de amida hidr&oacute;geno/deuterio o movilidad inducida por fosforilaci&oacute;n. Aqu&iacute; divulgamos datos DXMS comparaci&oacute;n de tasas de intercambio para las prote&iacute;nas de Rap1b de phosphomimetic (Rap1-D) PKA-fosforilada (Rap1-P) y S179D. Rap1-P y Rap1-D comportaron igual, revelando un tipo de cambio mayor en regiones discretas a lo largo de la prote&iacute;na; estas regiones incluyen un dominio alrededor del sitio de fosforilaci&oacute;n e inesperadamente los dos cambiar lazos. As&iacute;, la locales efectos inducidos por fosforilaci&oacute;n Ser(179) allosterically comunican con distales dominios implicados en la interacci&oacute;n efectora. Estos resultados proporcionan una explicaci&oacute;n mecanicista de los efectos diferenciales de Rap1 fosforilaci&oacute;n por PKA en interacci&oacute;n de prote&iacute;nas efectoras.

Cambios conformacionales inducidos por fosforilaci&oacute;n en Rap1b: efectos alost&eacute;ricos en dominios de interruptor y bucle de efectos.

&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x764C;&#x662F;&#x6700;&#x5E38;&#x89C1;&#x7684;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x6076;&#x6027;&#x80BF;&#x7624;&#xFF0C;&#x6DB5;&#x76D6;&#x5404;&#x79CD;&#x7EA7;&#x522B;&#x7684;&#x4FB5;&#x88AD;&#x6027;&#x751F;&#x957F;&#x548C;&#x653B;&#x51FB;&#x6027;&#x4E0E;&#x80BF;&#x7624;&#x7C7B;&#x578B;&#x3002;Rap1GAP&#xFF0C;Rap1 &#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x5BF9;&#x56FD;&#x5185;&#x751F;&#x4EA7;&#x603B;&#x503C;&#x7684; GTP &#x6C34;&#x89E3;&#x6291;&#x5236; RAS &#x8D85;&#x5BB6;&#x65CF;&#x86CB;&#x767D; Rap1&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5206;&#x6790;&#x4E86; 197 &#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x80BF;&#x7624;&#x6807;&#x672C;&#x548C;&#x663E;&#x793A; Rap1GAP &#x662F;&#x7ECF;&#x5E38;&#x4E22;&#x5931;&#x6216;&#x7F16;&#x7801;&#x4E2D;&#x5404;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#xFF0C;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x5728;&#x6700;&#x4FB5;&#x88AD;&#x6027;&#x548C;&#x4FB5;&#x7565;&#x6027;&#x7684;&#x5F62;&#x5F0F;&#x7684;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x764C;&#x3002;&#x4E0B;&#x8C03;&#x662F;&#x7531;&#x4E8E;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x548C;/&#x6216;&#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x6742;&#x5408;&#x6027;&#xFF0C;&#x53D1;&#x73B0;&#x5728;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x80BF;&#x7624;&#x3002;&#x53BB;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x66F2;&#x4EE3;&#x7406; 5-&#x6C2E;&#x6742;-&#x8131;&#x6C27;&#x80DE;&#x82F7;&#x548C; &#xFF08;&#x6216;&#xFF09; &#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x8131;&#x4E59;&#x9170;&#x5316;&#x6291;&#x5236;&#x53E4;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0; reexpression &#x6CBB;&#x7597;&#x3002;&#x9057;&#x4F20;&#x591A;&#x6001;&#x6027;&#xFF0C;Y609C&#xFF0C;&#x51FA;&#x73B0;&#x5728;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x80BF;&#x7624;&#x7684; 7%&#xFF0C;&#x800C;&#x57FA;&#x56E0;&#x4E0B;&#x8C03;&#x65E0;&#x5173;&#x3002;Rap1GAP &#x8868;&#x8FBE;&#x4E0E;&#x80BF;&#x7624;&#x4FB5;&#x88AD;&#x7684;&#x5173;&#x7CFB;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x4E0E;&#x7279;&#x5B9A;&#x7A81;&#x53D8;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4E1D;&#x88C2;&#x7D20;&#x6D3B;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x901A;&#x8DEF;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x635F;&#x5931;&#x3002;Rap1GAP &#x4E0B;&#x8C03;&#x9700;&#x8981;&#x4F53;&#x5916;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x548C; Matrigel &#x5165;&#x4FB5;&#x3002;&#x6062;&#x590D;&#x7684; Rap1GAP &#x8868;&#x8FBE;&#x6291;&#x5236;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x548C;&#x96C6;&#x843D;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x603B;&#x4F53;&#x800C;&#x8A00;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; Rap1GAP &#x7684;&#x8868;&#x89C2;&#x9057;&#x4F20;&#x6216;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x635F;&#x5931;&#x662F;&#x975E;&#x5E38;&#x5E38;&#x89C1;&#x7684;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x764C;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x5728;&#x54EA;&#x91CC;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x548C;&#x4FB5;&#x88AD;&#x3002;

Rap1GAP &#x901A;&#x8FC7;&#x8868;&#x89C2;&#x9057;&#x4F20;&#x6C89;&#x9ED8;&#x548C;&#x6742;&#x5408;&#x4E22;&#x5931;&#x7684;&#x4E0B;&#x8C03;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x5165;&#x4FB5;&#x548C;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8FDB;&#x5C55;&#x3002;

Thyroid cancer is the most common type of endocrine malignancy, encompassing tumors with various levels of invasive growth and aggressiveness. Rap1GAP, a Rap1 GTPase-activating protein, inhibits the RAS superfamily protein Rap1 by facilitating hydrolysis of GTP to GDP. In this study, we analyzed 197 thyroid tumor samples and showed that Rap1GAP was frequently lost or downregulated in various types of tumors, particularly in the most invasive and aggressive forms of thyroid cancer. The downregulation was due to promoter hypermethylation and/or loss of heterozygosity, found in the majority of thyroid tumors. Treatment with demethylating agent 5-aza-deoxycytidine and/or histone deacetylation inhibitor trichostatin A induced gene reexpression in thyroid cells. A genetic polymorphism, Y609C, was seen in 7% of thyroid tumors but was not related to gene downregulation. Loss of Rap1GAP expression correlated with tumor invasiveness but not with specific mutations activating the mitogen-activated protein kinase pathway. Rap1GAP downregulation was required in vitro for cell migration and Matrigel invasion. Recovery of Rap1GAP expression inhibited thyroid cell proliferation and colony formation. Overall, our findings indicate that epigenetic or genetic loss of Rap1GAP is very common in thyroid cancer, where these events are sufficient to promote cell proliferation and invasion.

Downregulation of Rap1GAP through epigenetic silencing and loss of heterozygosity promotes invasion and progression of thyroid tumors.

Cancer de la thyro&iuml;de est le type le plus commun de malignit&eacute; endocrinienne, englobant les tumeurs avec diff&eacute;rents niveaux de croissance invasive et agressivit&eacute;. Rap1GAP, une prot&eacute;ine Rap1 GTPase-activating, inhibe la prot&eacute;ine superfamille RAS Rap1 en facilitant l&#39;hydrolyse du GTP au PIB. Dans cette &eacute;tude, nous avons analys&eacute; des &eacute;chantillons de tumeur thyro&iuml;de 197 et a montr&eacute; que Rap1GAP &eacute;tait souvent perdu ou r&eacute;prim&eacute;s dans diff&eacute;rents types de tumeurs, en particulier dans les formes les plus envahissantes et agressives de cancer de la thyro&iuml;de. La diminution de l&#39;expression a &eacute;t&eacute; due &agrave; l&#39;hyperm&eacute;thylation du promoteur et/ou perte d&#39;h&eacute;t&eacute;rozygotie, trouv&eacute; dans la plupart des tumeurs de la thyro&iuml;de. Traitement par d&eacute;m&eacute;thylation agent 5-aza-d&eacute;soxycytidine et/ou histones d&eacute;sac&eacute;tylation inhibiteur trichostatine un r&eacute; induite de g&egrave;ne dans les cellules de la glande thyro&iuml;de. Un polymorphisme g&eacute;n&eacute;tique, Y609C, a &eacute;t&eacute; observ&eacute; dans 7 % des tumeurs de la thyro&iuml;de, mais n&#39;&eacute;tait pas li&eacute; &agrave; la diminution de l&#39;expression g&eacute;nique. Perte d&#39;expression Rap1GAP, corr&eacute;l&eacute;e avec l&#39;invasion de la tumeur mais pas avec les mutations sp&eacute;cifiques, activation de la voie de mitogen-activated protein kinase. Rap1GAP downregulation devait in vitro pendant la migration cellulaire et l&#39;invasion de Matrigel. R&eacute;cup&eacute;ration d&#39;expression Rap1GAP inhibe la prolif&eacute;ration des cellules thyro&iuml;diennes et la formation de colonies. Dans l&#39;ensemble, nos r&eacute;sultats indiquent que la perte &eacute;pig&eacute;n&eacute;tique ou g&eacute;n&eacute;tique de Rap1GAP est tr&egrave;s fr&eacute;quente dans les cancers de la thyro&iuml;de, o&ugrave; ces &eacute;v&eacute;nements ne suffisent pas &agrave; promouvoir l&#39;invasion et la prolif&eacute;ration cellulaire.

Downregulation de Rap1GAP par le biais de silen&ccedil;age &eacute;pig&eacute;n&eacute;tique et perte d&#39;h&eacute;t&eacute;rozygotie favorise l&#39;invasion et la progression des tumeurs de la thyro&iuml;de.

Schilddr&uuml;senkrebs ist die h&auml;ufigste endokrine Hyperkalz&auml;mie, umfassende Tumoren mit unterschiedlichem invasiven Wachstum und Aggressivit&auml;t. Rap1GAP, ein Protein Rap1 GTPase-Aktivierung hemmt das RAS &Uuml;berfamilie Protein Rap1 durch Hydrolyse von GTP zum BIP zu erleichtern. In dieser Studie, die wir analysiert 197 Schilddr&uuml;sen Tumor Proben und zeigte, dass Rap1GAP h&auml;ufig verloren oder Downregulated in verschiedenen Arten von Tumoren, besonders in invasiven und aggressiven Formen von Schilddr&uuml;senkrebs. Das Medikament wurde durch Promotor Hypermethylierung und/oder Verlust der Heterozygotie, gefunden in der Mehrzahl der Tumoren der Schilddr&uuml;se. Behandlung mit demethylating Agent 5-Aza-Deoxycytidine und/oder Histon Deacetylierung Inhibitor Trichostatin A induzierte gen Reexpression in den Zellen der Schilddr&uuml;se. Eine genetische Polymorphie, Y609C, wurde in 7 % der Tumoren der Schilddr&uuml;se gesehen aber war nicht im Zusammenhang mit Gen-Medikament. Verlust des Rap1GAP Ausdrucks korreliert mit Tumor Invasivit&auml;t aber nicht mit spezifischen Mutationen der Mitogen-aktivierte Protein-Kinase-Signalweg aktivieren. Rap1GAP Medikament wurde in-vitro f&uuml;r Zellmigration und Matrigel Invasion erforderlich. Wiederherstellung der Rap1GAP Ausdruck gehemmt Schilddr&uuml;se Zellproliferation und Kolonie-Gr&uuml;ndung. Unsere Ergebnisse zeigen insgesamt, dass epigenetische oder genetischen Verlust der Rap1GAP sehr h&auml;ufig in Schilddr&uuml;senkrebs, wo diese Ereignisse zur F&ouml;rderung der Zellproliferation und Invasion ausreichen.

Heraufregulation des Rap1GAP durch epigenetische silencing und Verlust der Heterozygotie f&ouml;rdert Invasion und Progression von Tumoren der Schilddr&uuml;se.

Cancro della tiroide &egrave; il tipo pi&ugrave; comune di neoplasia endocrina, che comprende i tumori con vari livelli di crescita invasiva e aggressivit&agrave;. Rap1GAP, una proteina Rap1 Gap, inibisce la proteina Superfamiglia RAS Rap1 facilitando l&#39;idrolisi del GTP a GDP. In questo studio, abbiamo analizzato 197 campioni di tumore della tiroide e ha mostrato che il Rap1GAP &egrave; stato spesso perso o downregolata in vari tipi di tumori, soprattutto nelle forme pi&ugrave; invasive e aggressive di cancro della tiroide. La downregulation era dovuto ipermetilazione del promotore e/o perdita di eterozigosi, trovato nella maggior parte dei tumori della tiroide. Trattamento con agente 5-aza-deoxycytidine e/o dell&#39;istone deacetilazione inibitore trichostatin A reexpression gene indotta in cellule della tiroide di demethylating. Un polimorfismo genetico, Y609C, &egrave; stato visto nel 7% dei tumori della tiroide ma non era legato al gene downregulation. Perdita di espressione di Rap1GAP correlate con invasivit&agrave; tumorale ma non con specifiche mutazioni attivando il pathway della chinasi di proteina mitogene-attivata. Rap1GAP downregulation era necessaria in vitro per la migrazione cellulare e l&#39;invasione di Matrigel. Recupero dell&#39;espressione Rap1GAP ha inibito la proliferazione delle cellule della tiroide e la formazione di Colonia. Nel complesso, i nostri risultati indicano che perdita genetica o epigenetica di Rap1GAP &egrave; molto comune nel cancro della tiroide, dove questi eventi sono sufficienti per promuovere l&#39;invasione e la proliferazione cellulare.

Downregulation del Rap1GAP attraverso la perdita di eterozigosi e silenziamento epigenetico promuove invasione e progressione dei tumori della tiroide.

&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x304C;&#x3093;&#x306F;&#x3001;&#x816B;&#x760D;&#x306B;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x4FB5;&#x8972;&#x7684;&#x306A;&#x6210;&#x9577;&#x3068;&#x7A4D;&#x6975;&#x6027;&#x3092;&#x53D6;&#x56F2;&#x3080;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x306E;&#x60AA;&#x6027;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x6700;&#x3082;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x3067;&#x3059;&#x3002;Rap1GAP Rap1 gtp &#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; RAS &#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D; Rap1 &#x306F; GDP &#x3092; GTP &#x306E;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;, 197 &#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x816B;&#x760D;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x3001;Rap1GAP &#x304C;&#x983B;&#x7E41;&#x306B;&#x5931;&#x308F;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x307E;&#x305F;&#x306F; downregulated &#x306E;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306E;&#x816B;&#x760D;&#x3001;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x304C;&#x3093;&#x306E;&#x6700;&#x3082;&#x4FB5;&#x8972;&#x7684;&#x3001;&#x7A4D;&#x6975;&#x7684;&#x306A;&#x5F62;&#x614B;&#x3067;&#x7279;&#x306B;&#x3002;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x3084;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x63A5;&#x5408;&#x3001;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x3067;&#x767A;&#x898B;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x304C;&#x539F;&#x56E0;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8; 5 &#x5B57;&#x30C7;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3;&#x3084;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x8131;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x30C8;&#x30EA;&#x30B3;&#x30B9;&#x30BF;&#x30C1;&#x30F3; A demethylating &#x3068;&#x6CBB;&#x7642;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30AF;&#x30EA;&#x30B9;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8A98;&#x767A;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x591A;&#x578B;&#x3001;Y609C&#x3001;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x816B;&#x760D;&#x306E; 7% &#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x816B;&#x760D;&#x6D78;&#x6F64;&#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x30DE;&#x30A4;&#x30C8;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3067;&#x76F8;&#x95A2; Rap1GAP &#x5F0F;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x3002;Rap1GAP &#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092; in vitro &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x904A;&#x8D70;&#x3068;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30B2;&#x30EB;&#x4FB5;&#x7565;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;Rap1GAP &#x5F0F;&#x306E;&#x56DE;&#x5FA9;&#x306F;&#x3001;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x3068;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;Rap1GAP &#x306E;&#x30A8;&#x30D4;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x306A;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x640D;&#x5931;&#x304C;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x304C;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x3068;&#x6D78;&#x6F64;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5341;&#x5206;&#x306A;&#x3067;&#x3059;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x764C;&#x3067;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x5171;&#x901A;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E; Rap1GAP &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30A8;&#x30D4;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x306A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x63A5;&#x5408;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x4FB5;&#x7565;&#x3068;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xAC11; &#xC0C1;&#xC120; &#xC554; &#xC885;&#xC591; &#xCE68;&#xB7B5; &#xC801; &#xC131;&#xC7A5;&#xACFC; &#xC801;&#xADF9;&#xC131;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xB808;&#xBCA8;&#xC744; &#xD3EC;&#xAD04; &#xD558;&#xB294; &#xB0B4; &#xBD84; &#xBE44; &#xC545;&#xC131; &#xC885;&#xC591;&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC720;&#xD615;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Rap1GAP, Rap1 GTPase &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; GDP GTP&#xC758; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574;&#xB97C; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558; &#xC5EC; RAS superfamily &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; Rap1 &#xC5B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; 197 &#xAC11; &#xC0C1;&#xC120; &#xC885;&#xC591; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC744; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558; &#xACE0; Rap1GAP &#xC790;&#xC8FC; &#xBD84;&#xC2E4; &#xD588;&#xB2E4; &#xB610;&#xB294; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC885;&#xB958;&#xC758; &#xC885;&#xC591;, &#xD2B9;&#xD788; &#xAC11; &#xC0C1;&#xC120; &#xC554;&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5; &#xCE68;&#xB7B5; &#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xACF5;&#xACA9;&#xC801;&#xC778; &#xD615;&#xD0DC;&#xC5D0;&#xC11C; downregulated. Downregulation &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; hypermethylation &#xB610;&#xB294; &#xC190;&#xC2E4; heterozygosity, &#xAC11; &#xC0C1;&#xC120; &#xC885;&#xC591;&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8; 5-&#xC544; &#xC790;-deoxycytidine &#xB610;&#xB294; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; deacetylation &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; trichostatin &#xAC11; &#xC0C1;&#xC120; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; reexpression demethylating &#xCE58;&#xB8CC;. &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB2E4;&#xD615;&#xC131;, Y609C, &#xAC11; &#xC0C1;&#xC120; &#xC885;&#xC591;&#xC758; 7%&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; downregulation &#xAD00;&#xB828; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Rap1GAP &#xC2DD;&#xC758; &#xC190;&#xC2E4; &#xC0C1;&#xAD00; &#xC885;&#xC591; &#xCE68;&#xC785; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD2B9;&#xC815; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD1B5;&#xB85C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xC9C0;. Rap1GAP downregulation &#xC140; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xACFC; Matrigel &#xCE68;&#xACF5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD544;&#xC694;&#xB85C; &#xD588;&#xB2E4;. Rap1GAP &#xC2DD;&#xC758; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xAC11; &#xC0C1;&#xC120; &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD; &#xBC0F; &#xCF5C;&#xB85C; &#xB2C8; &#xD615;&#xC131; &#xC800;&#xD574;. &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; rap1gap&#xC758; epigenetic &#xB610;&#xB294; &#xC720;&#xC804; &#xC190;&#xC2E4;&#xC774; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xD655;&#xC0B0;&#xACFC; &#xCE68;&#xC785;&#xC744; &#xD64D;&#xBCF4; &#xD558;&#xAE30;&#xC5D0; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xAC11; &#xC0C1;&#xC120; &#xC554;&#xC5D0; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Epigenetic &#xC785;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; heterozygosity &#xC190;&#xC2E4; Rap1GAP Downregulation &#xCE68;&#xC785;&#xACFC; &#xAC11; &#xC0C1;&#xC120; &#xC885;&#xC591;&#xC758; &#xC9C4;&#xD589;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El c&aacute;ncer de tiroides es el tipo m&aacute;s com&uacute;n de neoplasia endocrina, abarcando tumores con varios niveles de crecimiento invasor y agresividad. Rap1GAP, una prote&iacute;na activadora de GTPasa de Rap1, inhibe la prote&iacute;na de la Superfamilia RAS Rap1 facilitando la hidr&oacute;lisis de GTP a GDP. En este estudio, analiz&aacute;bamos 197 muestras de tumor de la tiroides y demostr&oacute; que la Rap1GAP era con frecuencia perdido o reguladas en diversos tipos de tumores, particularmente en las formas m&aacute;s invasivos y agresivos de c&aacute;ncer de tiroides. La regulaci&oacute;n a la baja se deb&iacute;a a la hipermetilaci&oacute;n del promotor y/o p&eacute;rdida de heterocigosidad, encontrado en la mayor&iacute;a de los tumores de la tiroides. Tratamiento con demethylating agente 5-aza-desoxicitidina y/o histona desacetilaci&oacute;n inhibidor tricostatina una reexpresi&oacute;n de gene inducida en c&eacute;lulas de la tiroides. Un polimorfismo gen&eacute;tico, Y609C, fue visto en el 7% de los tumores de la tiroides pero no estaba vinculado a downregulation del gene. P&eacute;rdida de expresi&oacute;n de Rap1GAP correlacionada con la invasi&oacute;n del tumor pero no con mutaciones espec&iacute;ficas de activaci&oacute;n de la v&iacute;a de la cinasa de prote&iacute;na mitogen-activados. Rap1GAP downregulation exig&iacute;a in vitro para la migraci&oacute;n celular y Matrigel invasi&oacute;n. Recuperaci&oacute;n de Rap1GAP expresi&oacute;n inhibi&oacute; la proliferaci&oacute;n de c&eacute;lulas de la tiroides y la formaci&oacute;n de la Colonia. En general, nuestros resultados indican que la p&eacute;rdida gen&eacute;tica o epigen&eacute;tica de Rap1GAP es muy com&uacute;n en el c&aacute;ncer de tiroides, donde estos eventos son suficientes para promover la invasi&oacute;n y proliferaci&oacute;n celular.

Regulaci&oacute;n a la baja de Rap1GAP a trav&eacute;s de silenciamiento epigen&eacute;tico y p&eacute;rdida de heterocigosidad promueve invasi&oacute;n y progresi&oacute;n de tumores de la tiroides.

&#x8425;&#x662F;&#x65E0;&#x5904;&#x4E0D;&#x5728;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4FE1;&#x4F7F;&#x3002;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x9886;&#x57DF;&#x4E0E;&#x9AD8;&#x6D53;&#x5EA6;&#x8425;&#x5730;&#xFF0C;&#x5373;&#x8425;&#x5FAE;&#x533A;&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4F18;&#x96C5;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x6765;&#x751F;&#x6210;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x548C;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x6548;&#x7387;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x57FA;&#x7840;&#x8425;&#x6548;&#x5E94;&#x9488;&#x5BF9;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x9694;&#x6210;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x4ECD;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8425;&#x7684;&#x6548;&#x5E94;&#x5668;&#xFF0C;Epac &#x548C; PKA &#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#x5355;&#x5143; radixin &#x7684;&#x9274;&#x5B9A;&#x3002;&#x6B64;&#x590D;&#x6742;&#x672C;&#x5730;&#x5316; submembrane &#x8F66;&#x53A2;&#x8425;&#x5730;&#x5408;&#x6210;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3002;&#x8F66;&#x53A2;&#x4E2D;&#x65AD;&#x7684; shRNA &#x548C;&#x5360;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x5730;&#x4F4D;&#x7684;&#x6D88;&#x6781;&#x529E;&#x6CD5;&#x4EA7;&#x751F;&#x6D88;&#x6781;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x8425;&#x5730;&#x7684;&#x884C;&#x52A8;&#x3002;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6551;&#x51FA; Rap1b&#x3001; Epac1 &#x548C; PKA&#xFF0C;&#x4F46;&#x53EA;&#x6709;&#x5728;&#x5176; GTP &#x7ED1;&#x5B9A;&#x57FA;&#x677F;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x6291;&#x5236;&#x72B6;&#x6001;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#xFF0C;radixin &#x652F;&#x67B6;&#x4E3A;&#x6709;&#x6548;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E0B;&#x6E38;&#x4FE1;&#x53F7;&#x96C6;&#x6210;&#x5546;&#x4F7F;&#x7528; Rap1 &#x8425;&#x5730;&#x9065;&#x611F;&#x529F;&#x80FD;&#x8231;&#x5185;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8425;&#x5730;&#x6548;&#x5E94;&#x5668;&#x3002;

Radixin &#x5728;&#x529F;&#x80FD;&#x8425;&#x5730;&#x8231;&#x88C5;&#x914D;&#x8425;&#x5730;&#x6548;&#x5E94;&#x5668; Epac &#x548C; PKA&#xFF1A; &#x8425;&#x5730;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

cAMP is an ubiquitous second messenger. Localized areas with high cAMP concentration, i.e. cAMP microdomains, provide an elegant mechanism to generate signaling specificity and transduction efficiency. However, the mechanisms underlying cAMP effector targeting into these compartments is still unclear. Here we report the identification of radixin as a scaffolding unit for both cAMP effectors, Epac and PKA. This complex localizes in a submembrane compartment where cAMP synthesis occurs. Compartment disruption by shRNA and dominant negative approaches negatively affects cAMP action. Inhibition can be rescued by expression of Rap1b, a substrate for both Epac1 and PKA, but only in its GTP-bound and phosphorylated state. We propose that radixin scaffolds both cAMP effectors in a functional cAMP-sensing compartment for efficient signal transduction, using Rap1 as a downstream signal integrator.

Radixin assembles cAMP effectors Epac and PKA into a functional cAMP compartment: role in cAMP-dependent cell proliferation.

le cAMP est un second messager omnipr&eacute;sent. Zones localis&eacute;es avec forte concentration cAMP, c&#39;est-&agrave;-dire de cAMP de microdomaines, fournissent un m&eacute;canisme &eacute;l&eacute;gant pour g&eacute;n&eacute;rer la signalisation efficacit&eacute; de sp&eacute;cificit&eacute; et de transduction. Cependant, les m&eacute;canismes qui sous-tendent l&#39;effecteur cAMP ciblage dans ces compartiments est encore incertain. Nous rapportons ici l&#39;identification du radixine comme une unit&eacute; d&#39;&eacute;chafaudage pour les deux camps effecteurs, Epac et PKA. Ce complexe se localise dans un compartiment de d&eacute;gagement o&ugrave; se produit la synth&egrave;se de cAMP. Perturbation de compartiment de shARN et approches n&eacute;gatives dominantes affecte n&eacute;gativement l&#39;action de cAMP. L&#39;inhibition peut &ecirc;tre sauv&eacute;e par l&#39;expression de Rap1b, un substrat pour les Epac1 et les PKA, mais seulement dans sa limite-GTP et phosphoryl&eacute;e &Eacute;tat. Nous vous proposons cette radixine &eacute;chafaudages deux effecteurs camps dans un compartiment fonctionnel de cAMP de d&eacute;tection pour la transduction du signal efficace, &agrave; l&#39;aide de Rap1 comme un int&eacute;grateur de signal en aval.

Radixine assemble camps effecteurs Epac et PKA dans un compartiment de cAMP fonctionnel : r&ocirc;le dans la prolif&eacute;ration cellulaire d&eacute;pendante de l&#39;AMPc.

cAMP ist eine allgegenw&auml;rtige second Messenger. Lokalisierte Bereiche mit hohen cAMP-Konzentration, d.h. Lager Microdomains, bieten einen eleganten Mechanismus zur Signalisierung Spezifit&auml;t und Transduktion Effizienz zu generieren. Die Mechanismen, die cAMP-Effektor gezielt in diese F&auml;cher ist jedoch noch unklar. Hier berichten wir &uuml;ber die Identifizierung von Radixin als ein Ger&uuml;stbau-Einheit f&uuml;r beide Lager Effektoren, Epac und PKA. Dieser Komplex lokalisiert in einem Submembrane Fach in dem cAMP-Synthese erfolgt. Fach St&ouml;rung durch ShRNA und dominierenden negativen Ans&auml;tze wirkt sich nachteilig auf cAMP-Aktion. Hemmung von Ausdruck der Rap1b, ein Substrat f&uuml;r Epac1 und PKA, aber nur in seine GTP-gebundenen gerettet und phosphoryliert werden kann Zustand. Wir schlagen vor, dass Radixin Ger&uuml;ste beide Lager Effektoren in einem funktionalen Lager-Sensorik-Fach f&uuml;r effiziente Signaltransduktion, mithilfe von Rap1 als Integrator nachgeschalteten Signal.

Radixin assembliert cAMP Effektoren Epac und PKA in einem funktionalen cAMP Fach: Rolle im Lager-abh&auml;ngige Zellproliferation.

cAMP &egrave; un secondo messaggero onnipresente. Aree localizzate con alta concentrazione di cAMP, cio&egrave; cAMP microdomains, forniscono un meccanismo elegante per generare efficienza specificit&agrave; e trasduzione del segnale. Tuttavia, i meccanismi alla base cAMP effettrici targeting in questi compartimenti &egrave; ancora poco chiaro. Qui riportiamo l&#39;identificazione del radixin come un&#39;unit&agrave; di ponteggi per entrambi effettori cAMP, Epac e PKA. Questo complesso si localizza in un vano di submembrane dove avviene la sintesi di cAMP. Perturbazione vano da shRNA e approcci negativi dominanti lede il campo d&#39;azione. L&#39;inibizione pu&ograve; essere salvato da espressione di Rap1b, un substrato per Epac1 e la PKA, ma solo nel suo GTP-bound e fosforilato dello stato. Proponiamo che radixin ponteggi entrambi effettori cAMP in un vano cAMP-sensing funzionale per la trasduzione del segnale efficiente, utilizzando Rap1 come un integratore del segnale a valle.

Radixin assembla effettori cAMP Epac e PKA in un vano Campo funzionale: ruolo nella proliferazione cellulare cAMP-dipendente.

&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x306F;&#x3001;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30BF;&#x30B9;&#x306E; 2 &#x756A;&#x76EE;&#x306E;&#x30E1;&#x30C3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30E3;&#x30FC;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5730;&#x57DF;&#x9AD8;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x6FC3;&#x5EA6;, &#x3059;&#x306A;&#x308F;&#x3061;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7; &#x30DF;&#x30AF;&#x30ED; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3001;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3068;&#x4F1D;&#x9054;&#x52B9;&#x7387;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C8;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B; cAMP &#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3067;&#x3059;&#x307E;&#x3060;&#x30AF;&#x30EA;&#x30A2;&#x3002;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x3001;Epac &#x3068; PKA &#x7528;&#x8DB3;&#x5834;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30E9;&#x30C7;&#x30A3;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x304C;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x3092;&#x767A;&#x751F; submembrane &#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x7834;&#x58CA; shRNA &#x3068;&#x652F;&#x914D;&#x7684;&#x306A;&#x5426;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x60AA;&#x5F71;&#x97FF;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7; &#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x963B;&#x5BB3;&#x306E; Rap1b&#x3001;Epac1 &#x3068; PKA&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x305D;&#x306E; GTP &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x307F;&#x3067;&#x306E;&#x57FA;&#x677F;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6551;&#x51FA;&#x3057;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x72B6;&#x614B;&#x3002;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x30E9;&#x30C7;&#x30A3;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x9AA8;&#x683C;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF; Rap1 &#x4E0B;&#x6D41;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7; &#x30BB;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0; &#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x3002;

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&#xCEA0;&#xD504;&#xB294; &#xC720;&#xBE44; &#xCFFC;&#xD130; &#xC2A4; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBA54;&#xC2E0;&#xC800;. &#xB192;&#xC740; &#xCEA0;&#xD504; &#xC9D1;&#xC911; &#xCEA0;&#xD504; microdomains &#xC989;, &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB41C; &#xC601;&#xC5ED; &#xC2E0;&#xD638; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xBC0F; &#xBCC0;&#xD658; &#xD6A8;&#xC728;&#xC131;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC6B0;&#xC544;&#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xCEA0;&#xD504; effector&#xC774;&#xC774; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC5D0; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xD305;&#xC744; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC740; &#xC544;&#xC9C1; &#xBD88;&#xBD84;&#xBA85;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB450; &#xCEA0;&#xD504; &#xC774;&#xD399;&#xD130; Epac&#xC640; PKA&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xBE44; &#xACC4; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; radixin &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xCEA0;&#xD504; &#xD569;&#xC131; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; submembrane &#xAD6C;&#xD68D;&#xC5D0;&#xC11C; localizes. Shrna&#xC640; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAD6C;&#xD68D; &#xC911;&#xB2E8; &#xCEA0;&#xD504; &#xC791;&#xC5C5;&#xC744; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC800;&#xD574; Rap1b, Epac1 &#xBC0F; PKA, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; GTP &#xBC14;&#xC6B4;&#xB4DC;&#xC5D0;&#xB9CC; &#xAE30;&#xD310;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAD6C;&#xCD9C; &#xD558; &#xACE0; phosphorylated &#xC0C1;&#xD0DC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; radixin &#xAE30;&#xB2A5; &#xCEA0;&#xD504; &#xAC10;&#xC9C0; &#xAD6C;&#xD68D; rap1&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xC2E0;&#xD638; &#xD1B5;&#xD569;&#xC73C;&#xB85C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC591;&#xCABD; &#xCEA0;&#xD504; &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xD22C;&#xC5B4;.

Radixin &#xAE30;&#xB2A5;&#xC131; &#xCEA0;&#xD504; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC5D0; &#xCEA0;&#xD504; &#xC774;&#xD399;&#xD130; Epac&#xC640; PKA &#xC870;&#xB9BD;: &#xCEA0;&#xD504; &#xC885;&#xC18D; &#xC140; &#xD655;&#xC0B0;&#xC5D0; &#xC5ED;&#xD560;.

cAMP es un segundo mensajero omnipresente. &Aacute;reas localizadas con alta concentraci&oacute;n de campo, es decir, campamento microdominios, proporcionan un mecanismo elegante para generar eficiencia especificidad y transducci&oacute;n de se&ntilde;ales. Sin embargo, los mecanismos subyacentes a campo efectoras focalizaci&oacute;n en estos compartimentos es todav&iacute;a incierta. Aqu&iacute; divulgamos la identificaci&oacute;n de radixin como una unidad de andamio para ambos efectores campo, Epac y PKA. Este complejo se localiza en un compartimiento de submembrane donde se produce la s&iacute;ntesis de campo. Interrupci&oacute;n del compartimiento por shRNA y enfoques negativos dominantes afecta negativamente la acci&oacute;n de campo. Inhibici&oacute;n puede ser rescatada por la expresi&oacute;n de Rap1b, un substrato para Epac1 tanto PKA, pero solamente en su GTP-limite y fosforila estado. Proponemos que radixin andamios ambos efectores campamentos en un compartimento de detecci&oacute;n de campo funcional para la transducci&oacute;n de la se&ntilde;al eficiente, utilizando Rap1 como un integrador de aguas abajo de la se&ntilde;al.

Radixin monta campamentos efectores Epac y PKA en un compartimiento de campo funcional: papel en la proliferaci&oacute;n celular dependiente de campo.

&#x7EC6;&#x83CC;&#x6709;&#x8BB8;&#x591A;&#x7535;&#x538B;&#x548C;&#x914D;&#x4F53;&#x95E8;&#x63A7;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#xFF0C;&#x800C;&#x4EBA;&#x53E3;&#x6C34;&#x5E73;&#x6D4B;&#x91CF;&#x8868;&#x660E;&#x819C;&#x7535;&#x4F4D;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x751F;&#x5B58;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x6CA1;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x6765;&#x63A2;&#x6D4B;&#x7535;&#x538B;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x4E2D;&#x5B8C;&#x6574;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x6765;&#x63ED;&#x793A;&#x7535;&#x6C14;&#x6263;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x3002;&#x6765;&#x63A2;&#x6D4B;&#x7EC6;&#x83CC;&#x819C;&#x7535;&#x4F4D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x7684;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7EFF;&#x8272;&#x5438;&#x6536; proteorhodopsin &#x7535;&#x538B;&#x654F;&#x611F;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;Proteorhodopsin &#x5149;&#x5B66;&#x8D28;&#x5B50;&#x4F20;&#x611F;&#x5668; (&#x9053;&#x5177;) &#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x8868;&#x8FBE;&#x900F;&#x9732;&#x7535;&#x6C14;&#x6263;&#x5728;&#x8FBE; 1 &#x8D6B;&#x5179;&#x3002;&#x6263;&#x7403;&#x662F;&#x654F;&#x611F;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x548C;&#x7269;&#x7406;&#x6270;&#x52A8;&#x548C;&#x6B63;&#x503C;&#x7684;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x8367;&#x5149;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x7EC6;&#x83CC;&#x5C04;&#x6D41;&#x673A;&#x68B0;&#x53EF;&#x80FD;&#x7535;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684;&#x5FEB;&#x901F;&#x5916;&#x6392;&#x3002;

&#x7535;&#x6C14;&#x6263;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x63A2;&#x6D4B;&#x4E0E;&#x7535;&#x538B;&#x6307;&#x793A;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;

Bacteria have many voltage- and ligand-gated ion channels, and population-level measurements indicate that membrane potential is important for bacterial survival. However, it has not been possible to probe voltage dynamics in an intact bacterium. Here we developed a method to reveal electrical spiking in Escherichia coli. To probe bacterial membrane potential, we engineered a voltage-sensitive fluorescent protein based on green-absorbing proteorhodopsin. Expression of the proteorhodopsin optical proton sensor (PROPS) in E. coli revealed electrical spiking at up to 1 hertz. Spiking was sensitive to chemical and physical perturbations and coincided with rapid efflux of a small-molecule fluorophore, suggesting that bacterial efflux machinery may be electrically regulated.

Electrical spiking in Escherichia coli probed with a fluorescent voltage-indicating protein.

Les bact&eacute;ries ont de nombreux canaux d&#39;ion voltage - et ligand-d&eacute;pendants, et les mesures de niveau de la population indiquent que le potentiel de membrane est important pour la survie des bact&eacute;ries. Toutefois, il n&#39;a pas &eacute;t&eacute; possible sonder la dynamique de la tension dans une bact&eacute;rie intacte. Ici, nous avons d&eacute;velopp&eacute; une m&eacute;thode pour faire appara&icirc;tre le dopage &eacute;lectrique chez Escherichia coli. Pour sonder le potentiel de la membrane bact&eacute;rien, nous avons con&ccedil;u une prot&eacute;ine fluorescente sensibles au voltage bas&eacute;e sur prot&eacute;orhodopsine vert-absorbant. Expression du capteur optique proton prot&eacute;orhodopsine (accessoires) chez e. coli a r&eacute;v&eacute;l&eacute; le dopage &eacute;lectrique chez hertz jusqu&#39;&agrave; 1. Fortification &eacute;tait sensible aux perturbations chimiques et physiques et a co&iuml;ncid&eacute; avec l&#39;efflux rapide d&#39;un fluorophore de petites mol&eacute;cules, ce qui sugg&egrave;re que machines d&#39;efflux bact&eacute;rienne soit contr&ocirc;l&eacute;e &eacute;lectriquement.

Le dopage &eacute;lectrique chez Escherichia coli hybrid&eacute;s avec une prot&eacute;ine fluorescente d&#39;indication de tension.

Bakterien haben viele Spannung und ligandengesteuerte Ionenkan&auml;le und Bev&ouml;lkerungsebene Messungen zeigen, dass potenzielle Membran f&uuml;r bakterielle &Uuml;berleben wichtig ist. Jedoch war es nicht m&ouml;glich, die Spannung Dynamik in einer intakten Bakterium Pr&uuml;fpunkt. Hier haben wir eine Methode zu zeigen, elektrische spiking in Escherichia coli entwickelt. Um m&ouml;gliche bakterielle Membran-Sonde entwickelt wir eine Spannung-empfindlichen fluoreszierenden Proteins basierend auf gr&uuml;n-absorbierenden Proteorhodopsin. Ausdruck des Proteorhodopsin optische Proton Sensors (PROPS) in E. Coli offenbart elektrische spiking bis 1 Hertz. Spiking war empfindlich auf chemische und physikalische Perturbationen und fiel mit rapid Efflux von ein klein-Molek&uuml;l-Fluorophor, was darauf hindeutet, dass bakterielle Efflux Maschinen elektrisch geregelt werden kann.

Elektrische spiking in Escherichia coli untersucht mit einem fluoreszierenden Protein der Spannung-Angabe.

I batteri hanno molti canali ionici voltaggio - e ligand-gated e misurazioni del livello di popolazione indicano che il potenziale di membrana &egrave; importante per la sopravvivenza batterica. Tuttavia, non &egrave; possibile sondare la dinamica della tensione in un batterio intatto. Qui abbiamo sviluppato un metodo per rivelare elettrici chiodare in Escherichia coli. Potenziale di membrana batterica della sonda, abbiamo progettato una proteina fluorescente tensione sensibile basata sull&#39;assorbimento di verde proteorhodopsin. Espressione del sensore ottico protone proteorhodopsin (PROPS) in e. coli ha rivelato elettrici chiodare a fino a 1 hertz. Chiodare era sensibile alle perturbazioni chimiche e fisiche e coincise con un rapido efflusso di un fluoroforo piccolo-molecola, suggerendo che macchine di efflusso batterica possono essere regolata elettricamente.

Chiodare elettrici in Escherichia coli sondato con una proteina fluorescente che indica tensione.

&#x7D30;&#x83CC;&#x591A;&#x304F;&#x96FB;&#x5727;&#x3068;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;&#x4EBA;&#x53E3;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x819C;&#x96FB;&#x4F4D;&#x304C;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x83CC;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x96FB;&#x5727;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3092;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30AF;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x819C;&#x96FB;&#x4F4D;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30B0;&#x30EA;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x5438;&#x53CE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x96FB;&#x4F4D;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x5149;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30F3;&#x306E;&#x611F;&#x77E5; &#xFF08;&#x5C0F;&#x9053;&#x5177;&#xFF09; &#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3067;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x96FB;&#x6C17;&#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30AF;&#x6700;&#x5927; 1 &#x30D8;&#x30EB;&#x30C4;&#x3067;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30AF;&#x5316;&#x5B66;&#x3068;&#x7269;&#x7406;&#x306E;&#x6442;&#x52D5;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x6D41;&#x51FA;&#x6A5F;&#x68B0;&#x96FB;&#x6C17;&#x8ABF;&#x6574;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3059;&#x308B;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50; fluorophore &#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x6D41;&#x51FA;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;

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&#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xB294; &#xB9CE;&#xC740; &#xC804;&#xC555; &#xBC0F; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; &#xAC1C;&#xD3D0; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110;&#xACFC; &#xC778;&#xAD6C; &#xB808;&#xBCA8; &#xCE21;&#xC815; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB9C9; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC138;&#xADE0; &#xC0DD;&#xC874;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC758; &#xC804;&#xC555; &#xC5ED;&#xD559; &#xC870;&#xC0AC; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xAE30; &#xAE09;&#xC0C1;&#xC2B9;&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C;. &#xC138;&#xADE0; &#xB9C9; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xB97C; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC804;&#xC555;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD761;&#xC218; &#xD558;&#xB294; &#xB179;&#xC0C9; proteorhodopsin&#xC744; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xC124;&#xACC4;. Proteorhodopsin &#xAD11; &#xC591;&#xC790; &#xC13C;&#xC11C; (&#xC18C;&#xD488;) &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC2DD; &#xCD5C;&#xB300; 1 &#xD5E4;&#xB974;&#xCE20; &#xC804;&#xAE30; &#xAE09;&#xC0C1;&#xC2B9; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xAE09;&#xC0C1;&#xC2B9; &#xD654;&#xD559; &#xBC0F; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801; &#xBB3C;&#xACB0;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xC138;&#xADE0; &#xACBD;&#xACFC; &#xAE30;&#xACC4; &#xC804;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD1B5;&#xC81C; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; fluorophore&#xC758; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xACBD;&#xACFC;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xAE30; &#xAE09;&#xC0C1;&#xC2B9; &#xD615;&#xAD11; &#xC804;&#xC555;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; &#xC870;&#xC0AC;.

Las bacterias tienen muchos canales del ion Voltaje y ligando-bloqueado y poblacional mediciones indican que el potencial de membrana es importante para la supervivencia bacteriana. Sin embargo, no ha sido posible sondear la din&aacute;mica de la tensi&oacute;n en una bacteria intacta. Aqu&iacute; se desarroll&oacute; un m&eacute;todo para revelar clavar el&eacute;ctrico en Escherichia coli. Para probar el potencial de la membrana bacteriana, hemos dise&ntilde;ado una prote&iacute;na fluorescente sensibles al voltaje basada en proteorhodopsin absorbe la verde. Expresi&oacute;n del sensor &oacute;ptico prot&oacute;n proteorhodopsin (apoyos) en e. coli revel&oacute; clavar el&eacute;ctrico en hertz hasta 1. Clavar era sensible a las perturbaciones f&iacute;sicas y qu&iacute;micas y coincidi&oacute; con r&aacute;pida emanaci&oacute;n de un fluor&oacute;foro de mol&eacute;culas peque&ntilde;as, lo que sugiere que podr&iacute;a estar regulada el&eacute;ctricamente maquinaria de eflujo bacteriano.

Clavar el&eacute;ctrico en Escherichia coli hurgarla con una prote&iacute;na fluorescente que indica el voltaje.

DAF 12 &#x6838;&#x53D7;&#x4F53;&#x5728;&#x6B63;&#x5E38;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#xFF0C;&#x51B3;&#x5B9A;&#x7EE7;&#x7EED;&#x5728;&#x4E0D;&#x5229;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x548C;&#x6210;&#x4EBA;&#x8001;&#x5316;&#x7684;&#x8C03;&#x5236; dauer &#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#x3002;DAF 12 &#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x8FD9;&#x79CD;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x9776;&#x57FA;&#x56E0;&#x662F;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x6807;&#x8BC6; DAF 12 &#x76EE;&#x6807;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6267;&#x884C;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x6C89;&#x6DC0;&#x540E;&#x8DDF;&#x6742;&#x4EA4;&#x7684;&#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5E73;&#x94FA;&#x6570;&#x7EC4;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86; 1,175 &#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x533A;&#x57DF;&#x53D7;&#x4F53;&#x5185;&#xFF0C;DAF-12&#xFF0C;&#x548C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x533A;&#x57DF;&#x4E2D;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684; DAF 12 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x56FE;&#x6848;&#x4E30;&#x5BCC;&#x548C;&#x5145;&#x5F53; DAF 12 &#x54CD;&#x5E94;&#x5143;&#x7D20;&#x5728;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8815;&#x866B;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x5408;&#x4F4D;&#x70B9;&#x9644;&#x8FD1;&#x7684; DAF 12 &#x76EE;&#x6807;&#x57FA;&#x56E0;&#x5305;&#x62EC;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x7F51;&#x7EDC;&#x76F8;&#x4E92;&#x8FDE;&#x63A5;&#x7684; heterochronic &#x548C; microRNA &#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x786E;&#x5B9A;&#x7F16;&#x7801;&#x7684; miRISC&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x76EE;&#x6807;&#x7684; DAF 12 &#x8C03;&#x8282;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x9776;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684; microRNA&#xFF0C;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x751F;&#x6B96;&#x53D1;&#x80B2;&#x671F;&#x95F4;&#x8BB8;&#x591A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x76EE;&#x6807;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; daf-12(0)&#xFF0C;misregulated&#xFF0C;&#x4F46;&#x8FD9;&#x53EA;&#x6709;&#x5F88;&#x5C11;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x53D1;&#x80B2;&#x8868;&#x578B;&#x3002;&#x4E0E;&#x6B64;&#x76F8;&#x53CD;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x4EBA;&#x53D1;&#x73B0;&#x7A7A; daf 12 &#x7A81;&#x53D8;&#x63D0;&#x9AD8;&#x5F88;&#x591A;&#x7684; miRISC &#x548C; heterochronic &#x76EE;&#x6807;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x578B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x53D1;&#x73B0;&#x73AF;&#x5883;&#x6CE2;&#x52A8;&#x5927;&#x5927;&#x52A0;&#x5F3A;&#x8584;&#x5F31; heterochronic &#x578B;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0; daf 12 &#x7A7A;&#x3002;&#x6EDE;&#x80B2;&#xFF0C;&#x671F;&#x95F4; DAF 12 &#x538B;&#x6291;&#x8BB8;&#x591A; heterochronic &#x548C; miRISC &#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0E;&#x5148;&#x524D;&#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x8868;&#x660E; dauer &#x5F62;&#x6210;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5236;&#x6B62;&#x8BB8;&#x591A;&#x90AE;&#x653F; dauer &#x53D1;&#x5C55;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x76EE;&#x6807;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684; heterochronic &#x578B;&#x3002;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x90FD;&#x7B26;&#x5408; daf 12 &#x91C7;&#x53D6;&#x884C;&#x52A8;&#xFF0C;&#x786E;&#x4FDD;&#x53D1;&#x5C55;&#x9C81;&#x68D2;&#x6027;&#x7531;&#x81F4;&#x529B;&#x4E8E;&#x6210;&#x4EBA;&#x6216; dauer &#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x7A0B;&#x5E8F;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x53D8;&#x91CF;&#x7684;&#x5185;&#x90E8;&#x6216;&#x5916;&#x90E8;&#x6761;&#x4EF6;&#x7684;&#x52A8;&#x7269;&#x3002;

DAF 12 &#x89C4;&#x7BA1;&#x8FDE;&#x63A5;&#x7684;&#x7F51;&#x7EDC;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x786E;&#x4FDD;&#x7A33;&#x5065;&#x53D1;&#x5C55;&#x4F5C;&#x51FA;&#x51B3;&#x5B9A;&#x3002;

The nuclear receptor DAF-12 has roles in normal development, the decision to pursue dauer development in unfavorable conditions, and the modulation of adult aging. Despite the biologic importance of DAF-12, target genes for this receptor are largely unknown. To identify DAF-12 targets, we performed chromatin immunoprecipitation followed by hybridization to whole-genome tiling arrays. We identified 1,175 genomic regions to be bound in vivo by DAF-12, and these regions are enriched in known DAF-12 binding motifs and act as DAF-12 response elements in transfected cells and in transgenic worms. The DAF-12 target genes near these binding sites include an extensive network of interconnected heterochronic and microRNA genes. We also identify the genes encoding components of the miRISC, which is required for the control of target genes by microRNA, as a target of DAF-12 regulation. During reproductive development, many of these target genes are misregulated in daf-12(0) mutants, but this only infrequently results in developmental phenotypes. In contrast, we and others have found that null daf-12 mutations enhance the phenotypes of many miRISC and heterochronic target genes. We also find that environmental fluctuations significantly strengthen the weak heterochronic phenotypes of null daf-12 alleles. During diapause, DAF-12 represses the expression of many heterochronic and miRISC target genes, and prior work has demonstrated that dauer formation can suppress the heterochronic phenotypes of many of these target genes in post-dauer development. Together these data are consistent with daf-12 acting to ensure developmental robustness by committing the animal to adult or dauer developmental programs despite variable internal or external conditions.

DAF-12 regulates a connected network of genes to ensure robust developmental decisions.

Le r&#xE9;cepteur nucl&#xE9;aire DAF-12 a un r&#xF4;le dans le d&#xE9;veloppement normal, la d&#xE9;cision de poursuivre le d&#xE9;veloppement dauer dans des conditions d&#xE9;favorables, et la modulation de vieillissement des adultes. Malgr&#xE9; l&#x26;#39;importance biologique de DAF-12, les g&#xE8;nes cibles de ce r&#xE9;cepteur sont en grande partie inconnue. Pour identifier les DAF-12 cibles, nous avons effectu&#xE9; immunopr&#xE9;cipitation de la chromatine suivie d&#x26;#39;une hybridation &#xE0; des tableaux carrelage du g&#xE9;nome entier. Nous avons identifi&#xE9; 1.175 r&#xE9;gions g&#xE9;nomiques &#xE0; &#xEA;tre li&#xE9;s in vivo par DAF-12, et ces r&#xE9;gions sont enrichies en connues DAF-12 des motifs de liaison et d&#x26;#39;agir comme des &#xE9;l&#xE9;ments de r&#xE9;ponse DAF-12 dans des cellules transfect&#xE9;es et dans les vers transg&#xE9;niques. Les g&#xE8;nes cibles DAF-12 &#xE0; proximit&#xE9; de ces sites de liaison comprennent un vaste r&#xE9;seau de h&#xE9;t&#xE9;rochronique interconnect&#xE9;s et les g&#xE8;nes de microARN. Nous avons &#xE9;galement d&#x26;#39;identifier les g&#xE8;nes codant pour des composants de la miRISC, qui est n&#xE9;cessaire pour le contr&#xF4;le de g&#xE8;nes cibles par les microARN, comme une cible de DAF-12 la r&#xE9;glementation. Au cours du d&#xE9;veloppement en mati&#xE8;re de reproduction, beaucoup de ces g&#xE8;nes cibles sont misregulated dans daf-12 (0) mutants, mais ce que rarement des r&#xE9;sultats dans les ph&#xE9;notypes de d&#xE9;veloppement. En revanche, nous et d&#x26;#39;autres ont constat&#xE9; que nulles daf-12 mutations am&#xE9;liorer les ph&#xE9;notypes de miRISC nombreux g&#xE8;nes cibles h&#xE9;t&#xE9;rochroniques. Nous constatons &#xE9;galement que les fluctuations de l&#x26;#39;environnement de mani&#xE8;re significative &#xE0; renforcer les ph&#xE9;notypes faibles h&#xE9;t&#xE9;rochroniques de null daf-12 all&#xE8;les. Au cours de la diapause, DAF-12 r&#xE9;prime l&#x26;#39;expression de nombreux g&#xE8;nes h&#xE9;t&#xE9;rochronique cibles miRISC, et le travail pr&#xE9;alable a montr&#xE9; que la formation dauer pouvez supprimer les ph&#xE9;notypes h&#xE9;t&#xE9;rochroniques d&#x26;#39;un grand nombre de ces g&#xE8;nes cibles de l&#x26;#39;apr&#xE8;s-dauer d&#xE9;veloppement. Ensemble, ces donn&#xE9;es sont compatibles avec daf-12 agit pour assurer la robustesse de d&#xE9;veloppement en s&#x26;#39;engageant &#xE0; l&#x26;#39;animal de programmes pour adultes ou dauer d&#xE9;veloppement, malgr&#xE9; la variabilit&#xE9; des conditions internes ou externes.

DAF-12 r&#xE9;glemente un r&#xE9;seau connect&#xE9; de g&#xE8;nes pour assurer la validit&#xE9; des d&#xE9;cisions de d&#xE9;veloppement

Die Kernempf&auml;nger DAF-12 hat Rollen in der normalen Entwicklung, die Entscheidung zur Entwicklung der Dauer in ung&uuml;nstigen Bedingungen und die Beeinflussung der Erwachsenen Altern zu verfolgen. Trotz der biologischen Bedeutung der DAF-12 sind Zielgene f&uuml;r diesen Rezeptor weitgehend unbekannt. Um DAF-12 Ziele zu identifizieren, f&uuml;hrten wir Chromatin Immunopr&auml;zipitation gefolgt von Hybridisierung in ganz-Genom-Fliesen-Arrays. Wir identifiziert 1.175 genomische Regionen von DAF-12 in-vivo gebunden zu sein, und diese Regionen sind in bekannten DAF-12 Bindung Motive bereichert und fungieren als DAF-12-Response-Elemente in transfected Zellen und transgenen W&uuml;rmer. Die DAF-12-Zielgene nahe diese Bindungsstellen enthalten ein dichtes Netz von miteinander verbundenen Heterochronic und MicroRNA Gene. Wir ermitteln auch die Genen Komponenten von der MiRISC, die als Ziel der DAF-12 Verordnung zur Bek&auml;mpfung der Zielgene von MicroRNA, erforderlich ist. W&auml;hrend der reproduktiven Entwicklung viele diese Zielgene sind misregulated in daf-12(0)-Mutanten, aber dies f&uuml;hrt nur selten zu Entwicklungsst&ouml;rungen Ph&auml;notypen. Im Gegensatz dazu haben wir u.a. festgestellt, dass null Daf-12 Mutationen die Ph&auml;notypen viele MiRISC und Heterochronic Zielgene erh&ouml;hen. Wir finden auch, dass die Umwelt bedingte Schwankungen die schwachen Heterochronic Ph&auml;notypen null Daf-12 Allele deutlich st&auml;rken. W&auml;hrend Diapause DAF-12 unterdr&uuml;ckt den Ausdruck viele Heterochronic und MiRISC Zielgene und vorherige Arbeit hat gezeigt, dass Dauer-Gr&uuml;ndung die Heterochronic-Ph&auml;notypen vieler dieser Zielgene in Post-Dauer Entwicklung unterdr&uuml;cken kann. Zusammen sind diese Daten konsistent mit Daf-12 handeln, um Entwicklungsst&ouml;rungen Robustheit zu gew&auml;hrleisten, indem Sie das Tier zu Erwachsenen oder Dauer Entwicklungs-Programme trotz variabler interne oder externe Bedingungen verpflichten.

DAF-12 regelt ein verbundenes Netzwerk von Genen, die robuste entwicklungspolitischen Entscheidungen sicherzustellen.

Il recettore nucleare DAF-12 ha ruoli nello sviluppo normale, la decisione di perseguire lo sviluppo di dauer in condizioni sfavorevoli e la modulazione dell&#39;invecchiamento degli adulti. Nonostante l&#39;importanza biologica del DAF-12, geni bersaglio per questo recettore sono in gran parte sconosciuti. Per identificare gli obiettivi DAF-12, abbiamo eseguito immunoprecipitazione della cromatina seguita da ibridazione di matrici whole genome tiling. Abbiamo identificato 1.175 regioni genomiche di essere vincolato in vivo da DAF-12, e queste regioni sono ricchi di motivi noti DAF-12 e fungono da elementi di risposta DAF-12 celle transfected e vermi transgenici. I geni bersaglio di DAF-12 vicino a questi siti di legame includono un&#39;ampia rete di geni eterocronico e microRNA interconnessi. Abbiamo inoltre identificare i geni che codificano per componenti di miRISC, che &egrave; necessaria per il controllo dei geni bersaglio di microRNA, come bersaglio del regolamento DAF-12. Durante lo sviluppo riproduttivo, molti di questi geni bersaglio sono misregulated in daf-12(0) mutanti, ma questo solo di rado si traduce in developmental fenotipi. Al contrario, noi ed altri abbiamo trovato che null daf-12 mutazioni migliorano i fenotipi di molti geni bersaglio miRISC ed eterocronico. Troviamo anche che le fluttuazioni ambientali rafforzare significativamente il debole eterocronico fenotipi di null daf-12 alleli. Durante la diapausa, DAF-12 reprime l&#39;espressione di molti geni bersaglio eterocronico e miRISC, e previo lavoro ha dimostrato che la formazione dauer pu&ograve; sopprimere i fenotipi eterocronico di molti di questi geni bersaglio nello sviluppo post-dauer. Insieme questi dati sono coerenti con la recitazione di daf-12 per garantire robustezza developmental commettendo l&#39;animale adulto o dauer programmi sviluppo nonostante condizioni variabili interne o esterne.

DAF-12 regola una rete collegata dei geni affinch&eacute; le decisioni sullo sviluppo robuste.

&#x6838;&#x5185;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;DAF-12&#x306F;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3001;&#x4E0D;&#x5229;&#x306A;&#x6761;&#x4EF6;&#x3067;dauer&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x8FFD;&#x6C42;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x5927;&#x4EBA;&#x306E;&#x8001;&#x5316;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; DAF-12&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x306A;&#x70B9;&#x304C;&#x591A;&#x3044;&#x3002; DAF-12&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5168;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x30BF;&#x30A4;&#x30EB;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x3078;&#x306E;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x514D;&#x75AB;&#x6C88;&#x964D;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;DAF-12&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;in vivo&#x3067;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x308B;1175&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x3084;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x7DDA;&#x866B;&#x306E;DAF-12&#x5FDC;&#x7B54;&#x30A8;&#x30EC;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;DAF-12&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3068;&#x884C;&#x70BA;&#x306B;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;DAF-12&#x6A19;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x76F8;&#x4E92;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7570;&#x6642;&#x6027;&#x3068;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;RNA&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;DAF-12&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;RNA&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6A19;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x308B;miRISC&#x306E;&#x69CB;&#x6210;&#x8981;&#x7D20;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x751F;&#x6B96;&#x767A;&#x751F;&#x6642;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306F;&#x3001;DAF-12&#xFF08;0&#xFF09;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3067;&#x306F;misregulated&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x767A;&#x9054;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3067;&#x3053;&#x308C;&#x3060;&#x3051;&#x983B;&#x7E41;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x3068;&#x4ED6;&#x306E;&#x30CC;&#x30EB;DAF-12&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x591A;&#x304F;&#x306E;miRISC&#x3068;&#x7570;&#x6642;&#x6027;&#x6A19;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x74B0;&#x5883;&#x5909;&#x52D5;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x30CC;&#x30EB;DAF-12&#x306E;&#x5BFE;&#x7ACB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5F31;&#x3044;&#x7570;&#x6642;&#x6027;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4F11;&#x7720;&#x4E2D;&#x306B;&#x3001;DAF-12&#x306F;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7570;&#x6642;&#x6027;&#x3068;miRISC&#x6A19;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x3001;&#x524D;&#x306E;&#x200B;&#x200B;&#x4ED5;&#x4E8B;&#x306F;dauer&#x5F62;&#x6210;&#x304C;&#x30DD;&#x30B9;&#x30C8;dauer&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7570;&#x6642;&#x6027;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;DAF-12&#x306F;&#x3001;&#x53EF;&#x5909;&#x5185;&#x90E8;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5916;&#x90E8;&#x306E;&#x72B6;&#x6CC1;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x5927;&#x4EBA;&#x3084;dauer&#x767A;&#x9054;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x306B;&#x52D5;&#x7269;&#x3092;&#x30B3;&#x30DF;&#x30C3;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x958B;&#x767A;&#x5805;&#x7262;&#x6027;&#x3092;&#x78BA;&#x4FDD;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6F14;&#x6280;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

DAF-12&#x5805;&#x7262;&#x306A;&#x767A;&#x9054;&#x610F;&#x601D;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3092;&#x78BA;&#x4FDD;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x63A5;&#x7D9A;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;

&#xD575; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; DAF 12 &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBD88;&#xB9AC; &#xD55C; &#xC870;&#xAC74;&#xACFC; &#xC131;&#xC778; &#xB178;&#xD654;&#xC758; &#xBCC0;&#xC870; dauer &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xCD94;&#xAD6C; &#xD558;&#xB294; &#xACB0;&#xC815;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0;. DAF 12 &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0;&#xC774; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C0;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740;.&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. DAF 12 &#xBAA9;&#xD45C;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4;, &#xB2E4;&#xC74C;&#xC5D0; &#xAD50; &#xC7A1; &#xC804;&#xCCB4; &#xAC8C;&#xB188; &#xBC14;&#xB451;&#xD310;&#xC2DD; &#xBC30;&#xC5F4; chromatin immunoprecipitation &#xC218;&#xD589;. DAF 12 &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC900;&#xC218; 1175 &#xAC8C;&#xB188; &#xC601;&#xC5ED; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0;&#xC774; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; DAF 12 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xD504;&#xC5D0; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; transfected &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC6DC; DAF 12 &#xC751;&#xB2F5; &#xC694;&#xC18C; &#xC5ED;&#xD560;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xADFC;&#xCC98; DAF 12 &#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC0C1;&#xD638; heterochronic&#xC640; microRNA &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB610;&#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; DAF 12 &#xADDC;&#xC81C;&#xC758; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC11C; microRNA, &#xC5EC; &#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC81C;&#xC5B4;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xD544;&#xC694;&#xB294; Mirisc&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0DD;&#xC2DD; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xB9CE;&#xC740; daf-12(0) &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC5D0; misregulated&#xB294; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xACE0;&#xAE30;&#xB97C; &#xC790;&#xC8FC; &#xADF8;&#xB7EC;&#xBA74;. &#xBC18;&#xBA74;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC640; &#xB2E4;&#xB978; null daf 12 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB9CE;&#xC740; miRISC &#xBC0F; heterochronic &#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xACE0;&#xAE30;&#xB97C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD658;&#xACBD; &#xBCC0;&#xB3D9; null daf 12 &#xB300;&#xB9BD; &#xC57D;&#xD55C; heterochronic &#xACE0;&#xAE30;&#xB97C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xAC15;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Diapause, &#xB3D9;&#xC548; DAF 12 &#xB204;&#xB974;&#xB294; &#xB9CE;&#xC740; heterochronic &#xBC0F; miRISC &#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD45C;&#xD604; &#xBC0F; &#xC0AC;&#xC804; &#xC791;&#xC5C5; dauer &#xD615;&#xC131; &#xAC8C;&#xC2DC;&#xBB3C; dauer &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xB9CE;&#xC740; &#xAC83;&#xC758; heterochronic &#xACE0;&#xAE30;&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC785;&#xC99D; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; &#xBCC0;&#xC218; &#xB0B4;&#xBD80; &#xB610;&#xB294; &#xC678;&#xBD80; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xC131;&#xC778; &#xB610;&#xB294; dauer &#xBC1C;&#xB2EC; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC744; &#xD22C;&#xC785; &#xD558; &#xC5EC; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xACAC;&#xACE0;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xC7A5; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; daf 12 &#xC5F0;&#xAE30;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

DAF 12 &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xACB0;&#xC815; &#xB418;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;.

El receptor nuclear DAF-12 tiene funciones en el desarrollo normal, la decisi&#xF3;n de continuar con el desarrollo dauer en condiciones desfavorables, y la modulaci&#xF3;n del envejecimiento de los adultos. A pesar de la importancia biol&#xF3;gica de la DAF-12, los genes diana de este receptor son en gran parte desconocido. Para identificar los objetivos de DAF-12, se realiz&#xF3; la inmunoprecipitaci&#xF3;n de la cromatina seguida por la hibridaci&#xF3;n de arrays de baldosas de todo el genoma. Se identificaron 1.175 regiones del genoma de quedar obligado en vivo por daf-12, y estas regiones se enriquecen en los conocidos DAF-12 motivos de uni&#xF3;n y act&#xFA;an como elementos de DAF-12 en respuesta a las c&#xE9;lulas transfectadas y en los gusanos transg&#xE9;nicos. Los genes diana DAF-12 cerca de estos sitios de uni&#xF3;n incluyen una extensa red de heterocr&#xF3;nicos interconectados y genes de microARN. Tambi&#xE9;n identificar los genes que codifican los componentes de la miRISC, que se requiere para el control de los genes diana por microARN, como un objetivo de DAF-12 regulaci&#xF3;n. Durante el desarrollo reproductivo, muchos de estos genes diana est&#xE1;n mal regulados en el daf-12 (0) mutantes, pero esto s&#xF3;lo en raras ocasiones da lugar a fenotipos de desarrollo. Por el contrario, nosotros y otros han encontrado que los nulos daf-12 mutaciones aumentan los fenotipos de miRISC muchos y los genes heterocr&#xF3;nicos objetivo. Tambi&#xE9;n encontramos que las fluctuaciones ambientales reforzar significativamente los fenotipos d&#xE9;biles heterocr&#xF3;nicos nulos de daf-12 alelos. Durante la diapausa, DAF-12 reprime la expresi&#xF3;n de genes y muchas heterocr&#xF3;nicos miRISC objetivo, y el trabajo previo ha demostrado que la formaci&#xF3;n de dauer puede suprimir los fenotipos heterocr&#xF3;nicos de muchos de estos genes diana en el desarrollo post-dauer. En conjunto, estos datos son consistentes con el daf-12 que act&#xFA;a para garantizar la solidez del desarrollo por la comisi&#xF3;n de los animales a los programas de adultos o dauer desarrollo a pesar de las diversas condiciones internas o externas.

DAF-12 regula una red conectada de genes para asegurar s&#xF3;lidas decisiones de desarrollo

&#x53EF;&#x9760;&#x7684;&#x5149;&#x5B66;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E2D;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A;&#x52A8;&#x4F5C;&#x7535;&#x4F4D;&#x4E00;&#x76F4;&#x957F;&#x5728;&#x795E;&#x7ECF;&#x79D1;&#x5B66;&#x4E2D;&#x9762;&#x4E34;&#x7684;&#x6311;&#x6218;&#x4E4B;&#x4E00;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FBE;&#x5230;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x76EE;&#x6807;&#x6240;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x7684;&#x89C6;&#x7D2B;&#x7EA2;&#x8D28;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;Archaerhodopsin 3 (&#x62F1;) &#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x8367;&#x5149;&#x5149;&#x8C31;&#x4ECE; Halorubrum sodomense&#xFF0C;&#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x57F9;&#x517B;&#x6D77;&#x9A6C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E2D;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x57FA;&#x56E0;&#x7F16;&#x7801;&#x7684;&#x7535;&#x538B;&#x6307;&#x6807;&#x5C55;&#x793A;&#x5728;&#x7075;&#x654F;&#x5EA6;&#x548C;&#x901F;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x8D85;&#x8FC7;&#x73B0;&#x6709;&#x7684;&#x57FA;&#x4E8E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x7535;&#x538B;&#x6307;&#x6807;&#xFF0C;-150 &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x4EAE;&#x5EA6;&#x5927;&#x7EA6;&#x7EBF;&#x6027;&#x53CC;&#x91CD;&#x589E;&#x52A0;&#x5927;&#x7EA6; 10 &#x500D;&#x6539;&#x5584; mV &#x548C; + 150 mV&#xFF0C;sub-millisecond &#x7684;&#x54CD;&#x5E94;&#x65F6;&#x95F4;&#x3002;&#x62F1;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x5355;&#x7535;&#x89E6;&#x53D1;&#x52A8;&#x4F5C;&#x7535;&#x4F4D;&#x4E0E;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x4FE1;&#x566A;&#x6BD4; &gt; 10&#x3002;Arch(D95N) &#x7F3A;&#x4E4F;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x8D28;&#x5B50;&#x6CF5;&#x548C;&#x5DF2;&#x6BD4;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; 50%&#x66F4;&#x5927;&#x7684;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#xFF0C;&#x4F46;&#x54CD;&#x5E94;&#x8F83;&#x6162; &#xFF08;41 &#x6BEB;&#x79D2;&#xFF09;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x5982;&#x6B64;&#xFF0C;Arch(D95N) &#x8FD8;&#x89E3;&#x51B3;&#x4E2A;&#x522B;&#x52A8;&#x4F5C;&#x7535;&#x4F4D;&#x3002;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x57FA;&#x4E8E;&#x89C6;&#x7D2B;&#x7EA2;&#x8D28;&#x7684;&#x7535;&#x538B;&#x6307;&#x6807;&#x627F;&#x8BFA;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x7535;&#x8DEF;&#x548C;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x5149;&#x5B66;&#x5BA1;&#x8BAF;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7535;&#x6781;&#x6280;&#x672F;&#x662F;&#x5177;&#x6709;&#x6311;&#x6218;&#x6027;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x3002;

&#x4F7F;&#x7528;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x7684;&#x89C6;&#x7D2B;&#x7EA2;&#x8D28;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x52A8;&#x4F5C;&#x7535;&#x4F4D;&#x7684;&#x5149;&#x5B66;&#x8BB0;&#x5F55;&#x3002;

Reliable optical detection of single action potentials in mammalian neurons has been one of the longest-standing challenges in neuroscience. Here we achieved this goal by using the endogenous fluorescence of a microbial rhodopsin protein, Archaerhodopsin 3 (Arch) from Halorubrum sodomense, expressed in cultured rat hippocampal neurons. This genetically encoded voltage indicator exhibited an approximately tenfold improvement in sensitivity and speed over existing protein-based voltage indicators, with a roughly linear twofold increase in brightness between -150 mV and +150 mV and a sub-millisecond response time. Arch detected single electrically triggered action potentials with an optical signal-to-noise ratio >10. Arch(D95N) lacked endogenous proton pumping and had 50% greater sensitivity than wild type but had a slower response (41 ms). Nonetheless, Arch(D95N) also resolved individual action potentials. Microbial rhodopsin-based voltage indicators promise to enable optical interrogation of complex neural circuits and electrophysiology in systems for which electrode-based techniques are challenging.

Optical recording of action potentials in mammalian neurons using a microbial rhodopsin.

D&eacute;tection optique fiable des potentiels d&#39;action simples dans des neurones chez les mammif&egrave;res a &eacute;t&eacute; l&#39;un des d&eacute;fis plus anciens en neurosciences. Ici, nous avons atteint cet objectif en utilisant la fluorescence endog&egrave;ne d&#39;une prot&eacute;ine rhodopsin microbienne, Archaerhodopsin 3 (Arch) de sodomense Halorubrum, exprim&eacute; dans les neurones hippocampal cultiv&eacute;s de rat. Cet indicateur de tension cod&eacute; g&eacute;n&eacute;tiquement expos&eacute; un environ dix fois am&eacute;lioration dans la sensibilit&eacute; et la vitesse sur des indicateurs existants de tension &agrave; base de prot&eacute;ines, avec une augmentation du double &agrave; peu pr&egrave;s lin&eacute;aire de luminosit&eacute; entre -150 mV et + 150 mV et un temps de r&eacute;ponse sub-millisecond. Arch d&eacute;tect&eacute; seul d&eacute;clenche &eacute;lectrique des potentiels d&#39;action avec un rapport signal sur bruit optique &gt; 10. Arch(D95N) manquait endog&egrave;ne proton pompage et avait une plus grande sensibilit&eacute; de 50 % que le type sauvage, mais avait une r&eacute;ponse plus lente (41 ms). N&eacute;anmoins, Arch(D95N) a &eacute;galement r&eacute;solu des potentiels d&#39;action individuelles. Indicateurs microbiens tension ax&eacute;e sur la rhodopsine promettent permettre l&#39;interrogatoire optique des circuits neurones complexes et &eacute;lectrophysiologie dans les syst&egrave;mes pour lesquels les techniques bas&eacute;es sur l&#39;&eacute;lectrode sont difficiles.

Enregistrement optique des potentiels d&#39;action dans des neurones chez les mammif&egrave;res utilisant une rhodopsine microbienne.

Zuverl&auml;ssige Optische Erkennung von einzelnen Aktionspotentiale in S&auml;ugetier-Neuronen war einer der am l&auml;ngsten bestehende Herausforderungen der Neurowissenschaften. Hier erreichten wir dieses Ziel mit die endogene Fluoreszenz eines mikrobiellen Rhodopsin-Proteins, Archaerhodopsin 3 (Arch) von Halorubrum Sodomense, in kultivierten Ratte hippocampal Neuronen exprimiert. Dieses genetisch codierte Spannung-Kennzeichen ausgestellt eine etwa zehnfache Verbesserung Empfindlichkeit und Geschwindigkeit &uuml;ber vorhandene Protein-basierte Spannung Indikatoren, mit einem ungef&auml;hr lineare zweifachen Anstieg der Helligkeit zwischen-150 mV und + 150 mV und eine Reaktionszeit von Buszykluszeiten. Bogen erkannt einzigen elektrisch ausgel&ouml;st Aktionspotentiale mit einem optischen Signal-Rausch-Verh&auml;ltnis &gt; 10. Arch(D95N) fehlte endogene Proton Pumpen und hatte 50 % h&ouml;here Empfindlichkeit als Wildtyp aber eine langsamere Reaktion (41 ms). Dennoch wurde Arch(D95N) einzelne Aktionspotentiale beschlossen. Mikrobielle Rhodopsin-basierte Spannung Indikatoren Versprechen optische Verh&ouml;r komplexe neuronale Schaltkreise und Elektrophysiologie in Systemen aktivieren f&uuml;r die Elektrode-basierte Techniken anspruchsvoll sind.

Optische Aufnahme der Aktionspotentiale in S&auml;ugetier-Neuronen mit einer mikrobiellen Rhodopsin.

Rilevamento ottico affidabile dei singoli potenziali di azione in neuroni dei mammiferi &egrave; stata una delle sfide pi&ugrave; lungo-levantesi in piedi in neuroscienze. Qui abbiamo raggiunto questo obiettivo mediante la fluorescenza di una proteina microbica rodopsina, Archaerhodopsin 3 (Arch) endogena da Halorubrum sodomense, espresso in neuroni ippocampali colto ratto. Questo indicatore di tensione geneticamente codificati esposto un approssimativamente dieci volte miglioramento nella sensibilit&agrave; e velocit&agrave; sopra gli indicatori di tensione a base di proteine esistenti, con un aumento di duplice approssimativamente lineare in luminosit&agrave; tra -150 mV e + 150 mV e un tempo di risposta sub-millisecond. Arco rilevato singolo attivato elettricamente potenziali d&#39;azione con un rapporto segnale-rumore ottico &amp;gt; 10. Arch(D95N) mancava protone endogeno di pompaggio e aveva 50% sensibilit&agrave; maggiore rispetto ai wild type, ma ha avuto una risposta pi&ugrave; lenta (41 ms). Tuttavia, Arch(D95N) risolto anche singoli potenziali d&#39;azione. Indicatori di tensione basato su rodopsina microbica promettono di attivare ottico interrogatorio di circuiti neurali complessi ed elettrofisiologia nei sistemi per i quali sono impegnative tecniche basate sull&#39;elettrodo.

Registrazione ottica dei potenziali di azione in neuroni mammiferi utilizzando una rodopsina microbica.

&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x96FB;&#x4F4D;&#x306E;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x4FE1;&#x983C;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x5149;&#x5B66;&#x7684;&#x691C;&#x51FA;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x79D1;&#x5B66;&#x306E;&#x6700;&#x9577;&#x7ACB;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x8AB2;&#x984C;&#x306E; 1 &#x3064;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005; &#x3053;&#x306E;&#x76EE;&#x6A19;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3; 3 &#xFF08;&#x30A2;&#x30FC;&#x30C1;&#xFF09; &#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x86CD;&#x5149;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x57F9;&#x990A;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x6D77;&#x99AC;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x3001;Halorubrum sodomense &#x304B;&#x3089;&#x9054;&#x6210;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x5316;&#x96FB;&#x5727;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B8;&#x30B1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5C55;&#x793A;&#x306F;&#x3001;&#x307B;&#x307C;&#x7DDA;&#x5F62;&#x306E;&#x4E8C;&#x500D;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;-150 &#x9593;&#x306B;&#x660E;&#x308B;&#x3055;&#x3068;&#x611F;&#x5EA6;&#x3068;&#x65E2;&#x5B58;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x96FB;&#x5727;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B8;&#x30B1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x3067;&#x7D04; 10 &#x500D;&#x6539;&#x5584; mV &#x3068; +150 mV &#x3068;&#x30B5;&#x30D6;&#x30DF;&#x30EA;&#x79D2;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x6642;&#x9593;&#x3002;&#x30A2;&#x30FC;&#x30C1;&#x304C;&#x691C;&#x51FA;&#x5358;&#x4E00;&#x96FB;&#x6C17;&#x7684;&#x6D3B;&#x52D5;&#x96FB;&#x4F4D;&#x306E;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#x96D1;&#x97F3;&#x6BD4;&#x3092;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x76EE; 10&#x3002;Arch(D95N) &#x30DD;&#x30F3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3088;&#x308A; 50 &#xFF05; &#x3088;&#x308A;&#x9AD8;&#x3044;&#x611F;&#x5EA6;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x9045;&#x3044;&#x5FDC;&#x7B54; (41 ms) &#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x306E;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30F3;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;Arch(D95N) &#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x500B;&#x3005; &#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x96FB;&#x4F4D;&#x3092;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3; &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x96FB;&#x5727;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B8;&#x30B1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5149;&#x5B66;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x795E;&#x7D4C;&#x56DE;&#x8DEF;&#x3068;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x96FB;&#x6975;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x6280;&#x8853;&#x306B;&#x6311;&#x6226;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x7D04;&#x675F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x96FB;&#x4F4D;&#x306E;&#x5149;&#x5B66;&#x7684;&#x8A18;&#x9332;&#x3002;

&#xB2E8;&#xC77C; &#xC791;&#xC5C5; &#xD6C4;&#xBCF4; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xAD11;&#xD559; &#xD0D0;&#xC9C0; &#xC2E0;&#xACBD; &#xACFC;&#xD559;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xAC00;&#xC7A5; &#xAE34; &#xC11C; &#xB3C4;&#xC804;&#xC758; &#xD558;&#xB098; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAD50;&#xC591;&#xB41C; &#xC950; hippocampal &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; Halorubrum sodomense&#xC5D0;&#xC11C; Archaerhodopsin 3 (&#xC544;&#xCE58;) &#xBBF8;&#xC0DD;&#xBB3C; rhodopsin &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0DD; &#xD615;&#xAD11;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;&#xC774; &#xBAA9;&#xD45C; &#xB2EC;&#xC131;. &#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xB41C; &#xC804;&#xC555; &#xD45C;&#xC2DC;&#xAE30; &#xC804;&#xC2DC;&#xB294; &#xAC10;&#xB3C4;&#xC640; &#xAE30;&#xC874; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAE30;&#xBC18;&#xC758; &#xC804;&#xC555; &#xD45C;&#xC2DC;&#xAE30;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC18D;&#xB3C4; &#xBC1D;&#xAE30;-150 &#xC0AC;&#xC774;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB300;&#xB7B5; &#xC120;&#xD615; 2 &#xC911; &#xC99D;&#xAC00; &#xD568;&#xAED8; &#xC57D; 10 &#xBC30;&#xB85C; &#xAC1C;&#xC120; Mv&#xC640; 150 Mv&#xC640; sub-millisecond &#xC751;&#xB2F5; &#xC2DC;&#xAC04;. &#xC544;&#xCE58; &#xAC10;&#xC9C0; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC804;&#xAE30; &#xAD11;&#xD559; &#xC2E0;&#xD638; &#xB300; &#xC7A1;&#xC74C; &#xBE44;&#xC728;&#xC744; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC804;&#xC704; &#xBC1C;&#xC0DD; &amp;gt; 10. Arch(D95N) &#xBD80;&#xC871; &#xC0DD; &#xC591;&#xC131;&#xC790; &#xD38C;&#xD551; &#xD558; &#xACE0; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD0C0;&#xC785; &#xBCF4;&#xB2E4; 50% &#xB354; &#xD070; &#xAC10;&#xB3C4; &#xD588;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB290;&#xB9B0; &#xBC18;&#xC751; (41 ms) &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7FC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0;, arch(d95n)&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC561;&#xC158; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825; &#xD574;&#xACB0;. &#xBBF8;&#xC0DD;&#xBB3C; rhodopsin &#xAE30;&#xBC18; &#xC804;&#xC555; &#xD45C;&#xC2DC;&#xAE30; &#xC804;&#xADF9; &#xAE30;&#xBC18; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xB3C4;&#xC804; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD68C;&#xB85C; &#xBC0F; &#xC804;&#xAE30; &#xC0DD;&#xB9AC;&#xD559;&#xC758; &#xAD11;&#xD559; &#xC2EC;&#xBB38; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC57D;&#xC18D; &#xB4DC;&#xB9BD;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC791;&#xC5C5; &#xD6C4;&#xBCF4; &#xBBF8;&#xC0DD;&#xBB3C; rhodopsin&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD558;&#xB294; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xAD11; &#xAE30;&#xB85D;.

Detecci&oacute;n &oacute;ptica confiable de potenciales de acci&oacute;n solos en las neuronas mam&iacute;feros ha sido uno de los retos m&aacute;s antiguos en neurociencia. Aqu&iacute; hemos logrado este objetivo mediante el uso de la fluorescencia end&oacute;gena de una prote&iacute;na microbiana de la rodopsina, Archaerhodopsin 3 (arco) de Halorubrum sodomense, expresado en neuronas de hipocampo de rata culta. Este indicador de voltaje gen&eacute;ticamente codificados exhibi&oacute; un aproximadamente diez veces mejora en sensibilidad y velocidad sobre indicadores de tensi&oacute;n basados en prote&iacute;nas existentes, con un aumento de aproximadamente lineal doble en brillo entre -150 mV y + 150 mV y un tiempo de respuesta de sub-milisegundos. Arco detectado solo accionado el&eacute;ctricamente los potenciales de acci&oacute;n con una relaci&oacute;n se&ntilde;al / ru&iacute;do &oacute;ptico &gt; 10. Arch(D95N) carec&iacute;a de protones end&oacute;gena de bombeo y ten&iacute;a una mayor sensibilidad de 50% de tipo salvaje pero ten&iacute;a una respuesta m&aacute;s lenta (41 ms). Sin embargo, Arch(D95N) tambi&eacute;n resolvieron potenciales de acci&oacute;n individuales. Indicadores de tensi&oacute;n basadas en rodopsina microbiana prometen permitir interrogatorios &oacute;ptico de circuitos neuronales complejos y electrofisiolog&iacute;a en sistemas para que las t&eacute;cnicas basadas en el electrodo son desafiantes.

Article	Year
Activation and induction of NUR77/NURR1 in corticotrophs by CRH/cAMP: involvement of calcium, protein kinase A, and MAPK pathways. Molecular endocrinology (Baltimore, Md.)\| PubMed ID: 12089357	2002
Activation of JNK by Epac is independent of its activity as a Rap guanine nucleotide exchanger. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 12783872	2003
Phosphorylation of c-Fos by members of the p38 MAPK family. Role in the AP-1 response to UV light. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 15708845	2005
Epac, in synergy with cAMP-dependent protein kinase (PKA), is required for cAMP-mediated mitogenesis. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 18063584	2008
Phosphorylation-induced conformational changes in Rap1b: allosteric effects on switch domains and effector loop. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 19651783	2009
Downregulation of Rap1GAP through epigenetic silencing and loss of heterozygosity promotes invasion and progression of thyroid tumors. Cancer research\| PubMed ID: 20124489	2010
Radixin assembles cAMP effectors Epac and PKA into a functional cAMP compartment: role in cAMP-dependent cell proliferation. The Journal of biological chemistry\| PubMed ID: 21047789	2011
Electrical spiking in Escherichia coli probed with a fluorescent voltage-indicating protein. Science (New York, N.Y.)\| PubMed ID: 21764748	2011
DAF-12 regulates a connected network of genes to ensure robust developmental decisions. PLoS genetics\| PubMed ID: 21814518	2011
Optical recording of action potentials in mammalian neurons using a microbial rhodopsin. Nature methods\| PubMed ID: 22120467	2012

Daniel Hochbaum

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