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Multicolor Time-lapse Imaging of Transgenic Zebrafish: Visualizing Retinal Stem Cells Activated by Targeted Neuronal Cell Ablation

High-resolution time-lapse imaging of living zebrafish larvae can be utilized to visualize how biological processes unfold (for review see 1). Compound ...

Medical College of Georgia

&#x8BB0;&#x8005;&#x6839;&#x636E;&#x5316;&#x9A8C;&#x80CC;&#x540E;&#x8BB8;&#x591A;&#x7684;&#x9AD8;&#x901A;&#x91CF;&#x7B5B;&#x9009; &#xFF08;HTS&#xFF09; &#x5E73;&#x53F0;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x90FD;&#x662F;&#x9650;&#x4E8E;&#x4F53;&#x5916;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x7B80;&#x5355;&#x7684;&#x6574;&#x4E2A;&#x673A;&#x4F53;&#x9AD8;&#x6E29;&#x8D85;&#x5BFC;&#x65B9;&#x6CD5;&#x91CF;&#x5316;&#x8BB0;&#x8005;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x968F;&#x65F6;&#x95F4;&#x79F0;&#x4E3A;&#xFF0C;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x81EA;&#x52A8;&#x5316;&#x8BB0;&#x8005;&#x91CF;&#x5316;&#x4E2A;&#x522B;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C; (ARQiv) &#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;ARQiv &#x4E0D;&#x540C;&#x4E8E;&#x5F53;&#x524D;&quot;&#x9AD8;&#x5185;&#x5BB9;&quot;(&#x4F8B;&#x5982;&#xFF0C;&#x5171;&#x7126;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#xFF09; &#x6574;&#x4E2A;&#x751F;&#x7269;&#x7B5B;&#x9009;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E00;&#x79CD;&#x7EAF;&#x7CB9;&#x7684;&#x5B9A;&#x91CF;&#x6570;&#x636E;&#x91C7;&#x96C6;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x6539;&#x5584;&#x3002;ARQiv &#x9C81;&#x68D2;&#x91CF;&#x5316;&#x7684;&#x8BB0;&#x8005;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F53;&#x5185;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x68C0;&#x6D4B;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0E;&#x4F7F;&#x7528;&#x8367;&#x5149;&#x9176;&#x6807;&#x4EEA;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x662F;&#xFF1A; 1&#xFF09; &#x8FC5;&#x901F;;&#x5B9E;&#x73B0;&#x771F;&#x6B63;&#x7684;&#x9AD8;&#x6E29;&#x8D85;&#x5BFC;&#x80FD;&#x529B; (&#x5373; &gt; &#x6BCF;&#x5929;&#x4E94;&#x4E07;&#x4E2A;&#x5355;&#x4F4D;)&#x3001; 2) &#x518D;&#x73B0; &#xFF1B;&#x5B9E;&#x73B0;&#x9AD8;&#x6E29;&#x8D85;&#x5BFC;&#x517C;&#x5BB9;&#x68C0;&#x6D4B;&#x8D28;&#x91CF; (&#x5373;&#xFF0C;Z&#39;-&ge;0.5 &#x7684;&#x56E0;&#x7D20;&#xFF09;&#xFF0C;&#x548C; 3&#xFF09; &#x7075;&#x6D3B; &#xFF1B;&#x9002;&#x4E8E;&#x5728;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x80DA;&#x80CE;&#x3001; &#x5E7C;&#x866B;&#x6216;&#x5C11;&#x5E74;&#x51E0;&#x4E4E;&#x4EFB;&#x4F55;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8BB0;&#x8005;&#x7684;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x3002;ARQiv &#x7528;&#x4E8E;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x8FDB;&#x884C;&#x91CF;&#x5316;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#xFF1A; 1&#xFF09; &#x624B;&#x673A;&#x53F7;&#x7801; &#xFF1B;&#x635F;&#x5931;&#x548C;&#x518D;&#x751F;&#x4E24;&#x79CD;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x7269;&#x8D28;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x578B; &#xFF08;&#x80F0;&#x817A; &beta; &#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x6746;&#x611F;&#x53D7;&#x5668;&#xFF09;&#xFF0C;2&#xFF09; &#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F20;&#x9012; &#xFF1B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EE3;&#x8C22;&#x76F8;&#x5BF9;&#x6D3B;&#x6027;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0; Notch &#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x8BB0;&#x8005;&#x548C; 3&#xFF09; &#xFF1B;&#x6D3B;&#x6027;&#x6C27;&#x7684;&#x79EF;&#x7D2F;&#x3002;&#x603B;&#x4E4B;&#xFF0C;ARQiv &#x662F;&#x591A;&#x624D;&#x591A;&#x827A;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x65B9;&#x4FBF;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x4FBF;&#x4E8E;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x8865;&#x5145;&#x5F53;&#x524D;&quot;&#x9AD8;&#x5185;&#x5BB9;&quot;&#x6574;&#x4E2A;&#x673A;&#x4F53;&#x7B5B;&#x67E5;&#x65B9;&#x6CD5;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7B2C;&#x4E00;&#x5C42;&#x4F53;&#x5185;&#x9AD8;&#x6E29;&#x8D85;&#x5BFC;&#x836F;&#x7269;&#x53D1;&#x73B0;&#x5E73;&#x53F0;&#x7684;&#x751F;&#x6D3B;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x548C;/&#x6216;&#x5316;&#x5B66;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3002;

&#x81EA;&#x52A8;&#x5316;&#x8BB0;&#x8005;&#x91CF;&#x5316;&#x4F53;&#x5185;&#xFF1A; &#x9AD8;&#x901A;&#x91CF;&#x7B5B;&#x9009;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8BB0;&#x8005;&#x7684;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x653E;&#x5C04;&#x514D;&#x75AB;&#x5206;&#x6790;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

Reporter-based assays underlie many high-throughput screening (HTS) platforms, but most are limited to in vitro applications. Here, we report a simple whole-organism HTS method for quantifying changes in reporter intensity in individual zebrafish over time termed, Automated Reporter Quantification in vivo (ARQiv). ARQiv differs from current "high-content" (e.g., confocal imaging-based) whole-organism screening technologies by providing a purely quantitative data acquisition approach that affords marked improvements in throughput. ARQiv uses a fluorescence microplate reader with specific detection functionalities necessary for robust quantification of reporter signals in vivo. This approach is: 1) Rapid; achieving true HTS capacities (i.e., >50,000 units per day), 2) Reproducible; attaining HTS-compatible assay quality (i.e., Z'-factors of â‰¥0.5), and 3) Flexible; amenable to nearly any reporter-based assay in zebrafish embryos, larvae, or juveniles. ARQiv is used here to quantify changes in: 1) Cell number; loss and regeneration of two different fluorescently tagged cell types (pancreatic beta cells and rod photoreceptors), 2) Cell signaling; relative activity of a transgenic Notch-signaling reporter, and 3) Cell metabolism; accumulation of reactive oxygen species. In summary, ARQiv is a versatile and readily accessible approach facilitating evaluation of genetic and/or chemical manipulations in living zebrafish that complements current "high-content" whole-organism screening methods by providing a first-tier in vivo HTS drug discovery platform.

Automated reporter quantification in vivo: high-throughput screening method for reporter-based assays in zebrafish.

Reporter essais bas&#xE9;s sur les sous-tendent de nombreux criblage &#xE0; haut d&#xE9;bit (HTS) plates-formes, mais la plupart sont limit&#xE9;s &#xE0; des applications in vitro. Nous rapportons ici un simple organisme entier m&#xE9;thode HTS pour quantifier les changements de l&#x26;#39;intensit&#xE9; journaliste chez le poisson z&#xE8;bre personne au fil du temps appel&#xE9;, Quantification automatis&#xE9;e Reporter in vivo (ARQiv). ARQiv diff&#xE8;re de courant &#x26;quot;&#xE0; forte teneur&#x26;quot; (par exemple, l&#x26;#39;imagerie confocale &#xE0; base de) l&#x26;#39;ensemble de l&#x26;#39;organisme des technologies de d&#xE9;pistage en offrant une approche purement quantitative des donn&#xE9;es d&#x26;#39;acquisition qui offre des am&#xE9;liorations notables en termes de d&#xE9;bit. ARQiv utilise un lecteur de microplaques &#xE0; fluorescence avec des fonctionnalit&#xE9;s de d&#xE9;tection sp&#xE9;cifiques n&#xE9;cessaires pour la quantification robuste des signaux reporter in vivo. Cette approche est la suivante: 1) rapide; la r&#xE9;alisation de v&#xE9;ritables capacit&#xE9;s HTS (c.-&#xE0;-&#x26;gt; 50.000 unit&#xE9;s par jour), 2) reproductible; atteindre la qualit&#xE9; de dosage HTS-compatibles (c.-&#xE0;-Z&#x26;#39;-facteurs de &#x2265; 0,5), et 3) flexible; pr&#xEA;tent &#xE0; presque n&#x26;#39;importe quel dosage journaliste bas&#xE9; en embryons de poisson z&#xE8;bre, de larves ou des juv&#xE9;niles. ARQiv est utilis&#xE9; ici pour quantifier les changements dans le nombre de cellules: 1), la perte et la r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;ration des deux diff&#xE9;rents types de cellules marqu&#xE9;es par fluorescence (cellules b&#xEA;ta du pancr&#xE9;as et les photor&#xE9;cepteurs de tige), 2) la signalisation cellulaire, l&#x26;#39;activit&#xE9; relative d&#x26;#39;un transg&#xE9;nique Notch-signalisation journaliste, et 3 Le m&#xE9;tabolisme cellulaire); accumulation d&#x26;#39;esp&#xE8;ces r&#xE9;actives de l&#x26;#39;oxyg&#xE8;ne. En r&#xE9;sum&#xE9;, ARQiv est une approche souple et facilement accessible en facilitant l&#x26;#39;&#xE9;valuation des manipulations g&#xE9;n&#xE9;tiques et / ou chimiques chez le poisson z&#xE8;bre vivre qui compl&#xE8;te actuelles &#x26;quot;haute teneur&#x26;quot; des m&#xE9;thodes de d&#xE9;pistage organisme entier en fournissant un premier niveau in vivo HTS plate-forme de d&#xE9;couverte de m&#xE9;dicaments.

Quantification in vivo automatis&#xE9; Reporter: M&#xE9;thode de d&#xE9;pistage &#xE0; haut d&#xE9;bit pour les tests bas&#xE9;s sur Reporter chez le poisson z&#xE8;bre

Reporter-basierte Assays zugrunde liegen viele Hochdurchsatz-screening (HTS) Plattformen, aber die meisten sind auf in-vitro-Anwendungen beschr&auml;nkt. Hier berichten wir &uuml;ber eine einfache ganz-Organismus-HTS-Methode zur Quantifizierung von &Auml;nderungen in der Intensit&auml;t der Reporter in einzelnen Zebrafisch im Laufe der Zeit genannt, automatisierte Reporter Quantifizierung in-vivo (ARQiv). ARQiv unterscheidet sich von der aktuellen &quot;High-Content&quot; (z.B., konfokale Darstellung-gegr&uuml;ndete) ganze-Organismus screening-Technologien durch einen rein quantitativen Daten Akquisition Ansatz, die deutliche Verbesserungen im Durchsatz bietet. ARQiv verwendet ein Fluoreszenz-Mikroplatten mit spezifischen Nachweis Funktionalit&auml;ten f&uuml;r robuste Quantifizierung der Reporter Signale in-vivo notwendig. Dieser Ansatz ist: 1) Rapid; wahre HTS-Kapazit&auml;ten zu erreichen (d. h. &gt; 50.000 Einheiten pro Tag), 2) reproduzierbare; HTS-kompatiblen Assay Qualit&auml;t zu erreichen (d. h. Z&#39;-Faktoren von &ge;0), und 3) flexibel; Parallelisierung auf nahezu jedem Reporter-gegr&uuml;ndeten Probe im Zebrafisch-Embryonen, Larven oder Jungtiere. ARQiv wird hier verwendet, um &Auml;nderungen zu quantifizieren: 1) Handy-Nummer; Verlust und Regeneration von zwei verschiedenen Leuchtstoff markiert Zelltypen (pankreatischen Betazellen und Stab Photorezeptoren), 2) Zelle signalisieren; Zellstoffwechsel relative Aktivit&auml;t von transgenen Notch-Signalisierung Reporter und 3); Anh&auml;ufung reaktiver Sauerstoffspezies. Zusammenfassend l&auml;sst sich sagen ist ARQiv ein vielseitig und leicht zug&auml;nglichen Ansatz, die Bewertung der genetischen und/oder chemischen Manipulationen in lebenden Zebrafisch, das aktuelle &quot;High-Content&quot; ganz-Organismus Screening-Methoden erg&auml;nzt durch eine erst-Reihe in-vivo HTS Droge Entdeckung Plattform zu erleichtern.

Automatisierte Reporter Quantifizierung in-vivo: Hochdurchsatz-screening-Methode f&uuml;r Reporter basierende Assays im Zebrafisch.

Reporter-based assays sono alla base di molte piattaforme di high-throughput screening (HTS), ma la maggior parte sono limitata alle applicazioni in vitro. Riportiamo un semplice metodo HTS intero organismo per quantificare le modifiche nell&#39;intensit&agrave; di reporter in zebrafish individuale nel corso del tempo definito, Automated Reporter quantificazione in vivo (ARQiv). ARQiv differisce dalla corrente &quot;ad alto contenuto&quot; (ad es., confocale basata su imaging) intero-organismo di screening technologies fornendo un approccio di acquisizione dati puramente quantitativa che offre una marcata miglioramenti nella produttivit&agrave;. ARQiv utilizza un lettore di micropiastre fluorescenza con funzionalit&agrave; di rilevamento specifico necessaria per la quantificazione solida di segnali reporter in vivo. Questo approccio &egrave;: 1) rapida; raggiungere la vera capacit&agrave; HTS (cio&egrave; &amp;gt; 50.000 unit&agrave; al giorno), 2) riproducibili; raggiungere la qualit&agrave; di dosaggio HTS-compatibile (cio&egrave;, Z&#39;-fattori di &ge;0.5) e 3) flessibile; assoggettabile a quasi qualsiasi dosaggio basato su reporter in embrioni di zebrafish, larve o avannotti. ARQiv &egrave; qui utilizzato per quantificare le modifiche in: 1) Cell numero; perdita e rigenerazione di due diversi fluorescente tagged tipi di cellule (le cellule beta del pancreas e fotorecettori asta), 2) segnalazione delle cellule; metabolismo cellulare attivit&agrave; relativa di un reporter di segnalazione Notch transgenico e 3); accumulo di specie reattive dell&#39;ossigeno. In sintesi, ARQiv &egrave; un approccio versatile e facilmente accessibile, facilitando la valutazione delle manipolazioni genetiche e/o chimiche in zebrafish vivente che complementa attuali metodi di screening intero organismo &quot;ad alto contenuto&quot; fornendo una piattaforma di scoperta primo livello droga HTS in vivo.

Automatizzato di quantificazione di reporter in vivo: high-throughput screening method for reporter-based assays in zebrafish.

&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#xFF08;HTS&#xFF09;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x6839;&#x5E95;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306F;&#x3001;in vitro&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x306B;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;in vivo&#x3067;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x3001;&#x81EA;&#x52D5;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#xFF08;ARQiv&#xFF09;&#x6642;&#x9593;&#x3092;&#x304B;&#x3051;&#x3066;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306E;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x5F37;&#x5EA6;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7C21;&#x5358;&#x200B;&#x200B;&#x306A;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x751F;&#x7269;HTS&#x6CD5;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; ARQiv&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x8457;&#x3057;&#x3044;&#x6539;&#x5584;&#x304C;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x7D14;&#x7C8B;&#x306B;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x306A;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x53CE;&#x96C6;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x306E; &#x26;quot;&#x9AD8;&#x542B;&#x6709;&#x91CF;&#x26;quot;&#xFF08;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x3001;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#xFF09;&#x306E;&#x5168;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x6280;&#x8853;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002; ARQiv&#x306F;&#x3001;in vivo&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#x5805;&#x7262;&#x306A;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x691C;&#x51FA;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x86CD;&#x5149;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#x6B21;&#x306E;&#x3068;&#x304A;&#x308A;&#x3067;&#x3059;&#x3002;1&#xFF09;&#x8FC5;&#x901F;&#x3001;&#x518D;&#x73FE;&#x6027;&#x306E;&#x771F;&#x306E;HTS&#x5BB9;&#x91CF;&#xFF08;&#x3059;&#x306A;&#x308F;&#x3061;&#x3001;&#x4E00;&#x65E5;&#x3042;&#x305F;&#x308A;&#x26;gt; 50,000&#x53F0;&#xFF09;&#x3001;2&#xFF09;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3001;HTS-&#x4E92;&#x63DB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E;&#x54C1;&#x8CEA;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#xFF08;&#x3059;&#x306A;&#x308F;&#x3061;&#x3001;&#x2265;&#x306E;Z&#x26;#39;-&#x56E0;&#x5B50;0.5&#xFF09;&#x3001;3&#xFF09;&#x67D4;&#x8EDF;&#x306A;&#x3001;&#x5F93;&#x9806;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x80DA;&#x3001;&#x5E7C;&#x866B;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5C11;&#x5E74;&#x306E;&#x307B;&#x307C;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306B;&#x3002; ARQiv&#x306F;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#xFF1A;1&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x6570;&#x3001;2&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x86CD;&#x5149;&#x6A19;&#x8B58;&#x7D30;&#x80DE;&#x578B;&#xFF08;&#x81B5;&#x3B2;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x687F;&#x4F53;&#xFF09;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x3068;&#x518D;&#x751F;&#x3001;2&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x30CE;&#x30C3;&#x30C1;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x6D3B;&#x6027;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;3 &#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x3001;&#x6D3B;&#x6027;&#x9178;&#x7D20;&#x7A2E;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3002;&#x8981;&#x7D04;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;ARQiv&#x306F;&#x3001;in vivo HTS&#x5275;&#x85AC;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x5C64;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x306E; &#x26;quot;&#x9AD8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30F3;&#x30C4;&#x26;quot;&#x5168;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x88DC;&#x5B8C;&#x3059;&#x308B;&#x751F;&#x6D3B;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x64CD;&#x4F5C;&#x306E;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x6C4E;&#x7528;&#x6027;&#x3068;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

in vivo&#x3067;&#x81EA;&#x52D5;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#xFF1A;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x6CD5;

&#xAE30;&#xC790; &#xAE30;&#xBC18; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xAE30;&#xCD08; &#xB9CE;&#xC740; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; (HTS) &#xC0C1;&#xC601; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; &#xCCB4; &#xC678; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC73C;&#xB85C; &#xC81C;&#xD55C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC2DC;&#xAC04; &#xB418; &#xB098;, &#xC790;&#xB3D9;&#xC73C;&#xB85C; &#xAE30;&#xC790; &#xBD80; &#xB7C9; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xAC1C;&#xBCC4; zebrafish&#xC758; &#xAE30;&#xC790;&#xAC00; &#xAC15;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xBCC0;&#xD654; (ARQiv) &#xCE21;&#xC815;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xC804;&#xCCB4; &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4; HTS &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. ARQiv &#xC804;&#xB958; &quot;&#xB192;&#xC740; &#xB0B4;&#xC6A9;&quot;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xB978; (&#xC608;&#xB97C; &#xB4E4;&#xC5B4;, confocal &#xC601;&#xC0C1; &#xAE30;&#xBC18;) &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4; &#xC804;&#xCCB4; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xAC1C;&#xC120;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC21C;&#xC218; &#xD558; &#xAC8C; &#xC591;&#xC801; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC218;&#xC9D1; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xC5EC; &#xAE30;&#xC220; &#xC2EC;&#xC0AC;. ARQiv &#xD615;&#xAD11; &#xBBF8; &#xD310; &#xD310;&#xB3C5;&#xAE30;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD2B9;&#xC815; &#xD0D0;&#xC9C0; &#xAE30;&#xB2A5; &#xAE30;&#xC790; &#xC2E0;&#xD638; vivo&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC815;&#xB7C9;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C;. &#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740;: 1) &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C;; &#xC0AC;&#xC2E4; HTS &#xC6A9;&#xB7C9; &#xB2EC;&#xC131; (&#xC989;, &amp;gt; &#xD558;&#xB8E8; 50, 000 &#xB2E8;&#xC704;), 2) Reproducible; HTS &#xD638;&#xD658; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xD488;&#xC9C8; &#xB2EC;&#xC131; (&#xC989;, Z&#39;-&#xC774;&#xB4E4; &#xC694;&#xC778;), &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; 3) &#xC720;&#xB3D9;; zebrafish &#xD0DC;&#xC544;, &#xC560;&#xBC8C;&#xB808;, &#xB610;&#xB294; &#xCCAD;&#xC18C;&#xB144; &#xAE30;&#xC790; &#xAE30;&#xBC18; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xAC70;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC758;&#xBB34;&#xAC00; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. ARQiv &#xC5EC;&#xAE30; &#xBCC0;&#xD654; &#xCC99;&#xB3C4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294;: 1) &#xD734;&#xB300; &#xBC88;&#xD638;; &#xC190;&#xC2E4; &#xBC0F; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xB450; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xB193;&#xC5EC;&#xC788;&#xB294;&#xC9C0; &#xC140; &#xD615;&#xC2DD; (&#xCDCC; &#xC7A5; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xB9C9;&#xB300; &#xB300;&#xB1CC;) &#xD0DC;&#xADF8; 2) &#xC138;&#xD3EC; &#xC2E0;&#xD638;; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB178;&#xCE58; &#xC2E0;&#xD638; &#xAE30;&#xC790;&#xC640; 3&#xC758; &#xC0C1;&#xB300; &#xD65C;&#xB3D9;) &#xC138;&#xD3EC; &#xB300;&#xC0AC;; &#xBC18;&#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B8; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC885;&#xC758; &#xCD95;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC694;&#xC57D; &#xD558;&#xC790;&#xBA74;, Arqiv&#xC740; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xACC4;&#xCE35; vivo&#xC5D0;&#xC11C; HTS &#xC57D;&#xBB3C; &#xAC80;&#xC0C9; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xC5EC; &#xD604;&#xC7AC; &quot;&#xB192;&#xC740; &#xB0B4;&#xC6A9;&quot; &#xC804;&#xCCB4; &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4; &#xC120;&#xBCC4; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBCF4;&#xC644; &#xC0DD;&#xD65C; zebrafish&#xC758; &#xC720;&#xC804; &#xBC0F;/&#xB610;&#xB294; &#xD654;&#xD559;&#xC801; &#xC870;&#xC791;&#xC758; &#xD3C9;&#xAC00; &#xCD09;&#xC9C4; &#xB2E4;&#xC591; &#xD558; &#xACE0; &#xC27D;&#xAC8C; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC811;&#xADFC; &#xC774;&#xB2E4;.

&#xC790;&#xB3D9;&#xC73C;&#xB85C; &#xAE30;&#xC790; &#xBD80; &#xB7C9; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;: &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xBC29;&#xBC95; zebrafish&#xC758; &#xAE30;&#xC790; &#xAE30;&#xBC18; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2EC;&#xC0AC;.

Basados &#x200B;&#x200B;en ensayos de reportero-la base de muchas de cribado de alto rendimiento (HTS) las plataformas, pero la mayor&#xED;a se limitan a aplicaciones in vitro. Aqu&#xED;, se presenta un sencillo de todo el organismo, m&#xE9;todo de HTS para cuantificar los cambios en la intensidad de reportero en el pez cebra individuo con el tiempo llamado, cuantificaci&#xF3;n automatizada de Reportero en vivo (ARQiv). ARQiv difiere de la actual &#x26;quot;alto contenido&#x26;quot; (por ejemplo, confocal de im&#xE1;genes basado en) todo el organismo, las tecnolog&#xED;as de detecci&#xF3;n, proporcionando un enfoque puramente cuantitativo de adquisici&#xF3;n de datos que ofrece notables mejoras en el rendimiento. ARQiv utiliza un lector de microplacas de fluorescencia con funcionalidades de detecci&#xF3;n espec&#xED;ficos necesarios para la cuantificaci&#xF3;n de las se&#xF1;ales de s&#xF3;lida reportero en vivo. Este enfoque es el siguiente: 1) r&#xE1;pida, logrando verdaderas capacidades de superconductores de alta temperatura (es decir,&#x26;gt; 50.000 unidades por d&#xED;a), 2) reproducible, que alcanzan HTS-compatible con la calidad del ensayo (es decir, Z &#x26;#39;factores de &#x2265; 0,5), y flexible 3), susceptibles de a casi cualquier reportero de ensayo basado en los embriones de pez cebra, larvas o juveniles. ARQiv se utiliza aqu&#xED; para cuantificar los cambios en: 1) el n&#xFA;mero de c&#xE9;lulas, la p&#xE9;rdida y la regeneraci&#xF3;n de dos tipos diferentes de c&#xE9;lulas marcado con fluorescencia (c&#xE9;lulas beta del p&#xE1;ncreas y los fotorreceptores de varilla), 2) la se&#xF1;alizaci&#xF3;n celular, la actividad relativa de un transg&#xE9;nico Notch de se&#xF1;alizaci&#xF3;n reportero, y 3 ) el metabolismo celular, la acumulaci&#xF3;n de especies reactivas del ox&#xED;geno. En resumen, ARQiv es un enfoque vers&#xE1;til y f&#xE1;cilmente accesible para facilitar la evaluaci&#xF3;n de las manipulaciones gen&#xE9;ticas y / o qu&#xED;micas en el pez cebra vida que complementa actuales de &#x26;quot;alto contenido&#x26;quot; organismo entero m&#xE9;todos de cribado, proporcionando un primer nivel in vivo plataforma HTS descubrimiento de f&#xE1;rmacos.

La cuantificaci&#xF3;n automatizada de Reportero en vivo: de alto rendimiento basados &#x200B;&#x200B;en el m&#xE9;todo de detecci&#xF3;n de Periodista-Los ensayos en el pez cebra

Junko Ariga

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