intraperitoneal-injection-into-adult-zebrafish

Intraperitoneal Injection into Adult Zebrafish

A convenient method for chemically treating zebrafish is to introduce the reagent into the tank water, where it will be taken up by the fish. However, ...

The University of Chicago

&#x82E5;&#x8981;&#x6807;&#x8BC6;&#x4E0A;&#x8C03;&#x89E3;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x9F20;&#x6807; GnRH (mGnRH) &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x533A;&#x57DF;&#xFF0C;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5DF2;&#x751F;&#x6210;&#x4E0E; mGnRH &#x57FA;&#x56E0;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x878D;&#x5408;&#x5230;&#x8367;&#x5149;&#x7D20;&#x9176;&#x62A5;&#x544A;&#x57FA;&#x56E0;&#x7247;&#x6BB5;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x4EFD;&#x624B;&#x7A3F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7814;&#x7A76;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5C0F;&#x9F20;&#xFF0C;&#x751F;&#x6210;&#x7684;-356 / &#x8D85;&#x8584; bp &#x548C;-249 / &#x8D85;&#x8584; bp mGnRH &#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7247;&#x6BB5;&#x7684; mGnRH &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x76EE;&#x6807;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x7D20;&#x9176;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x5375;&#x5DE2;&#x8868;&#x8FBE;&#x4F46;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x8367;&#x5149;&#x7D20;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x53EA;&#x5C0F;&#x9F20;&#x8F74;&#x627F;-356-bp &#x7247;&#x6BB5;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x57FA;&#x672C;&#x6307;&#x6325; GnRH &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; DNA &#x5E8F;&#x5217;&#x4F4D;&#x4E8E;-356 &#x548C;-249 bp &#x4E4B;&#x95F4;&#x3002;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5171;&#x8BC6;&#x7ED3;&#x5408;&#x4F4D;&#x70B9;&#x7684; Otx2 &#x53D1;&#x73B0;&#x5728;&#x6B64;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x533A;&#x53CA;&#x5DF2;&#x88AB;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;EMSAs &#x8868;&#x660E;&#x7279;&#x5B9A;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684; Otx2 &#x5230; mGnRH &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#xFF0C;&#x548C; Otx2 &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x589E;&#x52A0;&#x5728;&#x77AC;&#x65F6;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7814;&#x7A76; mGnRH &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x5F53;&#x4E24;&#x4E2A; Otx2 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x88AB;&#x6D88;&#x706D;&#x4E86;&#x65F6;&#xFF0C;Otx2 &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5E76;&#x65E0;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;GnRH &#x8868;&#x8FBE;&#x6C38;&#x751F; GnRH &#x5206;&#x6CCC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x4E2D;&#x7684;&#x8FD8;&#x53D1;&#x73B0;&#x80FD;&#x591F;&#x5C06;&#x4E0E; Otx2 &#x8868;&#x8FBE;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5C0F;&#x9F20;&#xFF0C;&#x8F74;&#x627F; 356 Otx2 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x88AB;&#x6D88;&#x9664;&#x7684; mGnRH &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x7247;&#x6BB5;&#x5728;&#x65B0;&#x751F;&#x513F;&#x5927;&#x8111;&#x4E0E;&#x5C0F;&#x9F20;&#x751F;&#x6210;&#x4E0E;&#x5B8C;&#x597D; Otx2 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x76F8;&#x6BD4;&#x5927;&#x5927;&#x964D;&#x4F4E;&#x8367;&#x5149;&#x7D20;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x8367;&#x5149;&#x7D20;&#x9176;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4E86;&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x4ECD;&#x5B58;&#x5728;&#x4E8E;&#x5375;&#x5DE2;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x8BC1;&#x636E; Otx2 &#x53EF;&#x80FD;&#x5177;&#x6709;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6307;&#x5BFC; mGnRH &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#xFF0C;&#x4F46;&#x6CA1;&#x6709;&#x5375;&#x5DE2;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;

&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x8C03;&#x89E3;&#x7684;&#x9F20;&#x6807;&#x4FC3;&#x6027;&#x817A;&#x6FC0;&#x7D20;&#x91CA;&#x653E;&#x6FC0;&#x7D20;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x8868;&#x8FBE; 107 &#x78B1;&#x57FA;&#x5BF9;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x5143;&#x7D20;&#x7684;&#x6807;&#x8BC6;&#x3002;

To identify regions of the mouse GnRH (mGnRH) promoter that mediate tissue-specific gene expression, transgenic mice have been generated with fragments of mGnRH promoter fused to the luciferase reporter gene. In this manuscript, we examine transgenic mice, generated with -356/+28 bp and -249/+28 bp of the mGnRH gene. Both fragments of mGnRH promoter target ovarian expression of the luciferase transgene, but neuronal luciferase activity is detected only in the mice bearing the -356-bp fragment, suggesting that the DNA sequences essential for directing neuron-specific expression of the GnRH gene are located between -356 and -249 bp. Two consensus binding sites for Otx2 were identified in this promoter region and were confirmed to be functional. EMSAs demonstrated specific binding of Otx2 to the mGnRH promoter, and overexpression of Otx2 increased transcriptional activity of the mGnRH promoter in transient transfection studies. When both Otx2 binding sites were eliminated, overexpression of Otx2 had no effect. GnRH mRNA expression in immortalized GnRH-secreting cell lines was also found to correlate with Otx2 expression. In addition, transgenic mice, bearing the 356 fragment of the mGnRH gene in which the Otx2 binding sites were eliminated, have significantly lower luciferase activity in the neonatal brain compared with mice generated with intact Otx2 binding sites. Luciferase activity was, however, still present in the ovary. Our findings provide evidence that Otx2 may have a critical role in directing tissue-specific expression of the mGnRH gene to the neuron, but not the ovary.

In vivo identification of a 107-base pair promoter element mediating neuron-specific expression of mouse gonadotropin-releasing hormone.

Pour identifier les r&eacute;gions du promoteur GnRH (mGnRH) souris qui m&eacute;dient l&#39;expression des g&egrave;nes sp&eacute;cifiques des tissus, des souris transg&eacute;niques ont &eacute;t&eacute; g&eacute;n&eacute;r&eacute;s avec des fragments de mGnRH promoteur fusionn&eacute;e &agrave; la g&egrave;ne rapporteur lucif&eacute;rase. Dans ce manuscrit, nous examinons des souris transg&eacute;niques, g&eacute;n&eacute;r&eacute;s avec-356 / + 28 bp et-249 / + 28 PB du g&egrave;ne mGnRH. Les deux fragments de mGnRH promoteur ciblent ovarienne expression du transg&egrave;ne lucif&eacute;rase, mais l&#39;activit&eacute; neuronale lucif&eacute;rase est d&eacute;tect&eacute;e seulement chez les souris portant le-356-PB, ce qui sugg&egrave;re que les s&eacute;quences d&#39;ADN essentiels pour diriger l&#39;expression neurone-sp&eacute;cifique du g&egrave;ne de la GnRH sont situ&eacute;s entre-356 et-249 bp. Deux sites de liaison d&#39;un consensus pour Otx2 ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;es dans cette r&eacute;gion promotrice et ont &eacute;t&eacute; confirm&eacute;s pour &ecirc;tre fonctionnel. EMSA a d&eacute;montr&eacute; une liaison sp&eacute;cifique de Otx2 au promoteur mGnRH et la surexpression de Otx2 a augment&eacute; l&#39;activit&eacute; transcriptionnelle du promoteur mGnRH dans les &eacute;tudes de transfection transitoire. Lorsque les deux sites de liaison Otx2 ont &eacute;t&eacute; &eacute;limin&eacute;s, la surexpression de Otx2 n&#39;avait aucun effet. Expression de l&#39;ARNm GnRH dans les lign&eacute;es cellulaires immortalis&eacute;es s&eacute;cr&eacute;tant des GnRH a &eacute;galement constat&eacute; que mettre en corr&eacute;lation avec l&#39;expression Otx2. En outre, les souris transg&eacute;niques, portant le fragment 356 du g&egrave;ne mGnRH dans laquelle les sites de liaison Otx2 ont &eacute;t&eacute; &eacute;limin&eacute;s, ont significativement plus faible activit&eacute; de la lucif&eacute;rase dans le cerveau n&eacute;onatal par rapport aux souris g&eacute;n&eacute;r&eacute;s avec des sites de liaison Otx2 intacts. Activit&eacute; de la lucif&eacute;rase a &eacute;t&eacute;, cependant, encore pr&eacute;sents dans l&#39;ovaire. Nos r&eacute;sultats prouvent que les Otx2 peuvent avoir un r&ocirc;le essentiel dans la mise en sc&egrave;ne expression tissu-sp&eacute;cifique du g&egrave;ne mGnRH vers le neurone, mais pas l&#39;ovaire.

Identification in vivo d&#39;un &eacute;l&eacute;ment de promoteur de 107-nucl&eacute;otide m&eacute;diant l&#39;expression sp&eacute;cifique des neurones de souris gonadotropin - releasing hormone.

Um Regionen des Projekttr&auml;gers Maus GnRH (mGnRH) zu identifizieren, die Gewebe-spezifischen Genexpression zu vermitteln, wurden transgene M&auml;use mit Fragmenten des mGnRH-Promotors verschmolzen, die Luciferase Reporter-gen generiert. Wir pr&uuml;fen in diesem Manuskript, transgene M&auml;use, erzeugt mittels-356 / + 28 bp und-249 / + 28 bp im mGnRH-gen. Beide Fragmente des mGnRH-Promotors Ziel ovariellen Ausdruck des Luciferase-Transgen, sondern neuronale Luciferase Aktivit&auml;t erkannt wird, nur in die M&auml;use, die mit der-356-bp Fragment, darauf hindeutet, dass die DNA-Sequenzen, die wesentlich f&uuml;r die Leitung der Neuron-spezifische Expression des Gens GnRH zwischen-356 und-249 bp befinden. Zwei Konsens-Bindungsstellen f&uuml;r Otx2 wurden in dieser Region Projekttr&auml;ger identifiziert und funktionsf&auml;hig sein best&auml;tigt wurden. EMSAs demonstrierte spezifische Bindung der Otx2 an den mGnRH-Projekttr&auml;ger, und eine &Uuml;berexpression von Otx2 erh&ouml;hte transkriptionelle Aktivit&auml;t des Projekttr&auml;gers mGnRH in transiente Transfektion Studien. Wenn beide Otx2-Bindungsstellen beseitigt wurden, hatten eine &Uuml;berexpression von Otx2 keine Auswirkungen. GnRH mRNA Ausdruck in verewigt GnRH-sezernierende Zelllinien wurde auch zum korrelieren mit Otx2 Ausdruck gefunden. Dar&uuml;ber hinaus haben transgene M&auml;use, tr&auml;gt das 356 Fragment im mGnRH-gen, in denen die Otx2-Bindungsstellen beseitigt wurden, deutlich niedriger Luciferase-Aktivit&auml;t im neonatalen Gehirn verglichen mit M&auml;usen mit intakten Otx2-Bindungsstellen generiert. Luciferase-Aktivit&auml;t war jedoch noch im Eierstock vorhanden. Unsere Ergebnisse belegen, dass Otx2 eine entscheidende Rolle in der Leitung Gewebe-spezifischen Ausdruck im mGnRH-gen, das Neuron, aber nicht dem Eierst&ouml;cke haben kann.

In-vivo-Kennung eines 107-Basenpaar-Promotor-Elements Vermittlung Neuron-spezifische Ausdruck der Maus Gonadotropin - Releasing-Hormon.

Per identificare le regioni del promotore del GnRH (mGnRH) del mouse che mediano l&#39;espressione genica tessuto-specifici, topi transgenici sono stati generati con i frammenti del promotore mGnRH fusi per il gene reporter luciferasi. In questo manoscritto, esaminiamo topi transgenici, generati con-356 / + 28 bp e-249 / + 28 bp del gene mGnRH. Due frammenti del promotore mGnRH destinazione ovarica espressione del transgene luciferasi, ma attivit&agrave; neuronale luciferase viene rilevato solo nei topi tenendo il-356-frammento di bp, suggerendo che le sequenze di DNA essenziale per dirigere il neurone specifica espressione del gene GnRH si trovano tra-356 e-249 bp. Due siti di legame di consenso per Otx2 sono stati identificati in questa regione del promotore e sono stati confermati per essere funzionale. EMSAs dimostrato il legame specifico di Otx2 al promotore mGnRH, e la sovraespressione di Otx2 aumento dell&#39;attivit&agrave; trascrizionale del promotore mGnRH negli studi di trasfezione transiente. Quando entrambi i siti di legame Otx2 sono stati eliminati, la sovraespressione di Otx2 ha avuto alcun effetto. Espressione del mRNA GnRH in linee di cellule secernenti GnRH immortalate inoltre &egrave; stato trovato per correlare con espressione Otx2. Inoltre, topi transgenici, recanti il frammento 356 del gene mGnRH in cui sono stati eliminati i siti di legame Otx2, hanno attivit&agrave; luciferase significativamente pi&ugrave; bassa nel cervello neonatale rispetto ai topi generati con siti di legame Otx2 intatti. Luciferase attivit&agrave; era, tuttavia, ancora presenti nell&#39;ovaio. I nostri risultati forniscono la prova che Otx2 possono avere un ruolo critico nel dirigere l&#39;espressione tessuto-specifica del gene della mGnRH per il neurone, ma non dell&#39;ovaio.

Identificazione in vivo di un elemento promotore 107-base coppia mediando neurone specifica espressione del mouse GnRH.

&#x7D44;&#x7E54;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; GnRH (mGnRH) &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3092;&#x30EB;&#x30B7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x878D;&#x5408;&#x3057;&#x305F; mGnRH &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7A3F;&#x3067;&#x306F;, &#x6211;&#x3005; &#x3068;-356 &#x751F;&#x6210;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;/+28 bp &#x3068;-249/+28 bp mGnRH &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x3002;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E; mGnRH &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x65AD;&#x7247;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x30EB;&#x30B7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; transgene &#x306E;&#x5375;&#x5DE3;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x304C;&#x795E;&#x7D4C;&#x30EB;&#x30B7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x304C;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;-356 &#x8EF8;&#x53D7;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x306E;&#x307F;-GnRH &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x5C0E;&#x304F;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306E; DNA &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x304C;-356 &#x3068;-249 &#x306E; bp &#x306E;&#x9593;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x306E; bp &#x306E;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3002;Otx2 &#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30B9; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x9818;&#x57DF;&#x3067;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;EMSAs Otx2 mGnRH &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3078;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x3001;Otx2 &#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x904E;&#x6E21;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; mGnRH &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E21;&#x65B9; Otx2 &#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x304C;&#x6392;&#x9664;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x3001;Otx2 &#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;GnRH mRNA &#x767A;&#x73FE;&#x4E0D;&#x6B7B;&#x5316; GnRH &#x3092;&#x5206;&#x6CCC;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x3082; Otx2 &#x5F0F;&#x3068;&#x3092;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;Otx2 &#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x304C;&#x9664;&#x53BB;&#x3055;&#x308C;&#x305F; mGnRH &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E; 356 &#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x8EF8;&#x53D7;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x3088;&#x308A;&#x4F4E;&#x3044;&#x30EB;&#x30B7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E; Otx2 &#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3068;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x65B0;&#x751F;&#x5150;&#x306E;&#x8133;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30EB;&#x30B7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x307E;&#x3060;&#x5375;&#x5DE3;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306F; Otx2 &#x7D44;&#x7E54;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x5375;&#x5DE3; mGnRH &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; gnrh &#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x7279;&#x7570;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B; 107 &#x5869;&#x57FA;&#x5BFE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x8981;&#x7D20;&#x306E; in vivo &#x3067;&#x306E; id&#x3002;

&#xC870;&#xC9C1; &#xAD00;&#xB828; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC744; &#xC911;&#xC7AC; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xD22C;&#xC5EC; (mGnRH) &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC758; &#xC601;&#xC5ED;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC950; &#xB8E8;&#xC2DC;&#xD398;&#xB77C;&#xC544;&#xC81C; &#xB9AC;&#xD3EC;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC735;&#xD569; mGnRH &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC758; &#xD30C;&#xD3B8; &#xC0DD;&#xC131; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC6D0;&#xACE0;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAC80;&#xC0AC;-356 &#xC0DD;&#xC131; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC950; / 28 &#xD608;&#xC555; &#xBC0F;-249 / 28 mGnRH &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD608;&#xC555;. MGnRH &#xBAA8;&#xD130;&#xC758; &#xC870;&#xAC01;&#xC744; &#xBAA8;&#xB450; &#xB300;&#xC0C1; &#xB8E8;&#xC2DC;&#xD398;&#xB77C;&#xC544;&#xC81C; transgene&#xC758; &#xB09C;&#xC18C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC2E0;&#xACBD; &#xB8E8;&#xC2DC;&#xD398;&#xB77C;&#xC544;&#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC740;-356 &#xBCA0;&#xC5B4;&#xB9C1; &#xC950;&#xC5D0;&#xB9CC; &#xAC10;&#xC9C0; &#xB418;-bp &#xC870;&#xAC01;, GnRH &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC2DD; &#xC5F0;&#xCD9C;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801; DNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB294;-356 &#xBC0F;-249 &#xD608;&#xC555; &#xC0AC;&#xC774; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Otx2&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xD569;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xAC00; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD655;&#xC778; &#xB41C; &#xBC0F; &#xC791;&#xB3D9; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. EMSAs &#xC2DC;&#xC5F0; mGnRH &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC5D0; otx2&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; otx2&#xC758; overexpression &#xACFC;&#xB3C4; transfection &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; mGnRH &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC758; transcriptional &#xD65C;&#xB3D9; &#xC99D;&#xAC00;. Otx2 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xBAA8;&#xB450; &#xD0C8;&#xB77D; &#xD588;&#xB2E4; otx2&#xC758; overexpression&#xC5D0; &#xC544;&#xBB34;&#xB7F0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xC9C0;&#xB97C; &#xD588;&#xB2E4;. GnRH mRNA &#xC2DD;&#xC740; &#xBD88;&#xBA78; &#xD558; &#xAC8C; GnRH &#xBD84; &#xBE44; &#xC138;&#xD3EC; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0;&#xB3C4; Otx2 &#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC0DD;&#xC950;, &#xBCA0;&#xC5B4;&#xB9C1; Otx2 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC81C;&#xAC70; &#xD588;&#xB2E4; mGnRH &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; 356 &#xC870;&#xAC01; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; Otx2 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC640; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC544; &#xB1CC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xB0AE;&#xC740; &#xB8E8;&#xC2DC;&#xD398;&#xB77C;&#xC544;&#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC774; &#xC788;&#xC5B4;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xB8E8;&#xC2DC;&#xD398;&#xB77C;&#xC544;&#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xD588;&#xB2E4;,, &#xC544;&#xC9C1;&#xB3C4; &#xB09C;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; Otx2 mGnRH &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; &#xC2E0;&#xACBD;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xB09C;&#xC18C;&#xC758; &#xC870;&#xC9C1; &#xAD00;&#xB828; &#xD45C;&#xD604; &#xC5F0;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC0DD;&#xC2DD; &#xC120; &#xC790;&#xADF9; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC;-&#xBC29;&#xCD9C; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC;&#xC758; &#xC2E0;&#xACBD; &#xAD00;&#xB828; &#xC2DD; &#xC911;&#xC7AC; 107 &#xC790;&#xB8CC; &#xC30D; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xC694;&#xC18C;&#xC758; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Para identificar regiones del promotor de la GnRH (mGnRH) de rat&oacute;n que median la expresi&oacute;n g&eacute;nica espec&iacute;fica de tejido, se han generado ratones transg&eacute;nicos con fragmentos de mGnRH promotor fusionado al gen reportero de luciferasa. En este manuscrito, examinamos los ratones transg&eacute;nicos, generados con-356 / + 28 bp y-249 / + 28 bp del gen mGnRH. Ambos fragmentos del promotor mGnRH objetivo ov&aacute;rico expresi&oacute;n del transg&eacute;n luciferasa, pero se detecta actividad de luciferasa neuronal s&oacute;lo en los ratones el-356-fragmento de bp, sugiriendo que las secuencias de ADN esenciales para dirigir enolase expresi&oacute;n del gen GnRH se encuentran entre-356 y-249 bp. Dos sitios de uni&oacute;n de consenso para Otx2 fueron identificados en esta regi&oacute;n del promotor y confirmaron a ser funcional. EMSAs demostr&oacute; uni&oacute;n espec&iacute;fica de Otx2 al promotor mGnRH, y la sobreexpresi&oacute;n de Otx2 aument&oacute; la actividad transcripcional del promotor mGnRH en estudios de transfecci&oacute;n transitoria. Cuando fueron eliminados dos sitios de uni&oacute;n de Otx2, sobreexpresi&oacute;n de Otx2 no tuvo efecto. Expresi&oacute;n del mRNA de GnRH en las l&iacute;neas celulares inmortalizadas secretoras de GnRH tambi&eacute;n fue encontrada para correlacionar con expresi&oacute;n Otx2. Adem&aacute;s, ratones transg&eacute;nicos, el 356 fragmento del gen mGnRH en el cual se eliminaron los sitios de uni&oacute;n de Otx2, tienen menor actividad de luciferasa en el cerebro neonatal en comparaci&oacute;n con los ratones generados con sitios de uni&oacute;n de Otx2 intactos. Actividad de luciferasa fue, sin embargo, todav&iacute;a presentes en el ovario. Nuestros resultados proporcionan evidencia que Otx2 puede tener un papel fundamental en la direcci&oacute;n de tejidos espec&iacute;ficos expresi&oacute;n del gen mGnRH a la neurona, pero no el ovario.

En la identificaci&oacute;n de un elemento promotor de 107-base par mediaci&oacute;n enolase expresi&oacute;n de hormona liberadora de gonadotropina rat&oacute;n en vivo.

Cdx &#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x524D;&#x540E;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x548C;&#x4E2D;&#x80DA;&#x5C42;&#x7684;&#x683C;&#x5C40;&#x4E2D;&#x5177;&#x6709;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x91CD;&#x70B9; cdx4 &#x5728;&#x9635;&#x5217;&#x5185;&#x7684;&#x80DA;&#x5C42;&#x5728;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x8BE5; cdx4 &#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A;&#x80F0;&#x817A; &beta; &#x7EC6;&#x80DE;&#x6570;&#x91CF;&#x3001; &#x6307;&#x5BFC;&#x4E2D;&#x7EBF;&#x8D8B;&#x540C;&#x7684; beta &#x7EC6;&#x80DE;&#x65E9;&#x671F;&#x80F0;&#x5C9B;&#x5F62;&#x6210;&#xFF0C;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x548C;&#x6307;&#x5B9A;&#x7684;&#x524D;&#x540E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x524D;&#x5185;&#x810F;&#x53EB;&#x673A;&#x5173;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#x3002;&#x80DA;&#x80CE; cdx4 &#x6709;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x4E4B;&#x5904;&#x6709;&#x6273;&#x624B;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684;&#x80F0;&#x3001; &#x809D;&#x3001; &#x5C0F;&#x80A0;&#x3002;&#x8868;&#x578B;&#x662F;&#x989D;&#x5916;&#x7684; Cdx &#x56E0;&#x5B50;&#x3001; cdx1a &#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x66F4;&#x52A0;&#x4E25;&#x91CD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x8BE5; cdx4 &#x5185;&#x80DA;&#x5C42;&#x8FDB;&#x884C;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x80F0;&#x817A;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x5185;&#x80DA;&#x5C42; cdx4 &#x7684; Morpholino &#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x7EAA;&#x8981; cdx4 &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x4E2D;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x6273;&#x624B;&#x79FB;&#x4F4D;&#x7684;&#x80F0;&#x817A;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x5185;&#x80DA;&#x5C42; cdx4 &#x8DB3;&#x4EE5;&#x6539;&#x53D8;&#x80F0;&#x817A;&#x6273;&#x624B;&#x3002;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x5728;&#x54EA;&#x4E9B; cdx4 &#x6A21;&#x578B;&#x8D4B;&#x4E88;&#x540E;&#x8EAB;&#x4EFD;&#x7684;&#x5185;&#x80DA;&#x5C42;&#x3002;Cdx4 &#x53EF;&#x80FD;&#x51FD;&#x6570;&#x6765;&#x963B;&#x6B62;&#x80F0;&#x817A;&#x8EAB;&#x4EFD;&#x901A;&#x8FC7;&#x9632;&#x6B62;&#x89C6;&#x9EC4;&#x9178; (RA) &#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x540E;&#x5185;&#x80DA;&#x5C42;&#x3002;&#x4E3A;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x5728;&#x6CBB;&#x7597; RA cdx4 &#x7F3A;&#x80DA;&#x80CE;&#xFF0C;&#x5F02;&#x4F4D;&#x7684; beta &#x7EC6;&#x80DE;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x597D;&#x540E;&#x5230;&#x6B63;&#x5E38;&#x80F0;&#x817A;&#x57DF;&#x3002;

Cdx4 &#x9700;&#x8981;&#x5185;&#x80DA;&#x5C42;&#xFF0C;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x80F0;&#x817A;&#x548C;&#x9650;&#x5236; beta &#x7EC6;&#x80DE;&#x6570;&#x3002;

Cdx transcription factors have crucial roles in anteroposterior patterning of the nervous system and mesoderm. Here we focus on the role of cdx4 in patterning the endoderm in zebrafish. We show that cdx4 has roles in determining pancreatic beta-cell number, directing midline convergence of beta-cells during early pancreatic islet formation, and specifying the anteroposterior location of foregut organs. Embryos deficient in cdx4 have a posteriorly shifted pancreas, liver and small intestine. The phenotype is more severe with knockdown of an additional Cdx factor, cdx1a. We show that cdx4 functions within the endoderm to localize the pancreas. Morpholino knockdown of cdx4 specifically in the endoderm recapitulates the posteriorly shifted pancreas observed in cdx4 mutants. Conversely, overexpression of cdx4 specifically in the endoderm is sufficient to shift the pancreas anteriorly. Together, these results suggest a model in which cdx4 confers posterior identity to the endoderm. Cdx4 might function to block pancreatic identity by preventing retinoic acid (RA) signal transduction in posterior endoderm. In support of this, we demonstrate that in cdx4-deficient embryos treated with RA, ectopic beta-cells are located well posterior to the normal pancreatic domain.

Cdx4 is required in the endoderm to localize the pancreas and limit beta-cell number.

Facteurs de transcription Cdx ont un r&#xF4;le crucial dans la structuration ant&#xE9;ro-post&#xE9;rieur du syst&#xE8;me nerveux et le m&#xE9;soderme. Nous nous concentrons ici sur le r&#xF4;le des cdx4 dans la structuration de l&#x26;#39;endoderme chez le poisson z&#xE8;bre. Nous montrons que cdx4 a un r&#xF4;le dans la d&#xE9;termination des cellules b&#xEA;ta pancr&#xE9;atiques nombre, la direction de convergence de la ligne m&#xE9;diane des cellules b&#xEA;ta des &#xEE;lots pancr&#xE9;atiques pendant la formation au d&#xE9;but, et en pr&#xE9;cisant l&#x26;#39;emplacement ant&#xE9;ro-post&#xE9;rieure de l&#x26;#39;intestin ant&#xE9;rieur organes. Les embryons d&#xE9;ficients en cdx4 ont un pancr&#xE9;as en arri&#xE8;re d&#xE9;cal&#xE9;, le foie et l&#x26;#39;intestin gr&#xEA;le. Le ph&#xE9;notype est plus s&#xE9;v&#xE8;re avec knockdown d&#x26;#39;un facteur additionnel Cdx, cdx1a. Nous montrons que cdx4 fonctions au sein de l&#x26;#39;endoderme de localiser le pancr&#xE9;as. Knockdown morpholino de cdx4 sp&#xE9;cifiquement dans les r&#xE9;capitule l&#x26;#39;endoderme du pancr&#xE9;as en arri&#xE8;re d&#xE9;cal&#xE9; observ&#xE9; dans cdx4 mutants. Inversement, la surexpression de cdx4 sp&#xE9;cifiquement dans l&#x26;#39;endoderme est suffisante pour d&#xE9;placer le pancr&#xE9;as ant&#xE9;rieurement. Ensemble, ces r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent un mod&#xE8;le dans lequel cdx4 conf&#xE8;re l&#x26;#39;identit&#xE9; post&#xE9;rieure &#xE0; l&#x26;#39;endoderme. Cdx4 pourrait fonctionner pour bloquer l&#x26;#39;identit&#xE9; du pancr&#xE9;as en emp&#xEA;chant l&#x26;#39;acide r&#xE9;tino&#xEF;que (RA) de transduction du signal dans l&#x26;#39;endoderme post&#xE9;rieur. &#xC0; l&#x26;#39;appui de cela, nous d&#xE9;montrons que dans cdx4 d&#xE9;ficientes embryons trait&#xE9;s avec la polyarthrite rhumato&#xEF;de, ectopiques b&#xEA;ta-cellules sont situ&#xE9;es bien post&#xE9;rieure au domaine du pancr&#xE9;as normal.

Cdx4 est requis dans l&#x26;#39;endoderme de localiser le pancr&#xE9;as et la limite des cellules b&#xEA;ta Nombre

CDX-Transkriptionsfaktoren haben entscheidende Rollen im anteroposterioren Musterung des Nervensystems und Mesoderm. Hier konzentrieren wir uns auf die Rolle der cdx4 in der Musterung der Endodermis in Zebrafisch. Wir zeigen, dass die cdx4 Rollen in Betazellen-Anzahl bestimmen, Regie Mittellinie Konvergenz der Beta-Zellen bei fr&uuml;hen Pankreas Inselchen Bildung und Angabe des Speicherorts der anteroposterioren Vorderdarm Organe hat. Embryonen, die einen Mangel an cdx4 haben eine posteriorly verschobene Bauchspeicheldr&uuml;se, Leber und D&uuml;nndarm. Der Ph&auml;notyp ist strenger mit Niederschlag &uuml;ber einen zus&auml;tzlichen Cdx-Faktor, cdx1a. Wir zeigen, dass cdx4 Funktionen innerhalb der Endodermis die Bauchspeicheldr&uuml;se lokalisiert. Morpholino Knockdown von cdx4 speziell in der Endodermis rekapituliert die posteriorly verschobene Bauchspeicheldr&uuml;se beobachtet in cdx4 Mutanten. Dagegen reicht eine &Uuml;berexpression von cdx4 speziell in der Endodermis, teilt die Bauchspeicheldr&uuml;se zu verlagern. Zusammen, diese Resultate schlagen ein Modell in die cdx4 &uuml;bertr&auml;gt posterior Identit&auml;t an die Endodermis. Cdx4 funktionieren um pankreatischen Identit&auml;t zu blockieren, durch die Verhinderung der Retinoic S&auml;ure (RA)-Signaltransduktion in posterior Endodermis. Zur Unterst&uuml;tzung dieses beweisen wir, dass im cdx4-defizienten Embryonen behandelt mit RA, ektopische Beta-Zellen auch posterior der normalen Pankreas-Dom&auml;ne befinden.

Cdx4 ist in der Endodermis die Bauchspeicheldr&uuml;se zu lokalisieren und begrenzen Anzahl von Beta-Zellen erforderlich.

Fattori di trascrizione CDX hanno ruoli cruciali in anteroposteriore patterning del sistema nervoso e del mesoderma. Qui ci concentriamo sul ruolo della cdx4 nella creazione di serie l&#39;endoderma nello zebrafish. Mostriamo che cdx4 ha ruoli nel determinare il numero delle cellule beta del pancreas, dirigendo la convergenza della linea mediana delle beta-cellule durante la precoce formazione di isole pancreatiche e specificando la posizione anteroposteriore di organi apparentemente. Carenti di cdx4 gli embrioni hanno un spostato posteriormente pancreas, fegato e intestino tenue. Il fenotipo &egrave; pi&ugrave; grave con atterramento di un ulteriore fattore di Cdx, cdx1a. Mostriamo che cdx4 le funzioni all&#39;interno dell&#39;endoderma a localizzare il pancreas. Oligonucleotides atterramento di cdx4 in particolare l&#39;endoderma racchiude in sintesi il pancreas posteriormente spostato osservato in cdx4 mutanti. Al contrario, la sovraespressione di cdx4 in particolare l&#39;endoderma &egrave; sufficiente a spostare il pancreas anteriormente. Insieme, che questi risultati suggeriscono un modello nel quale cdx4 conferisce identit&agrave; posteriore per l&#39;endoderma. Cdx4 potrebbe funzionare per bloccare l&#39;identit&agrave; del pancreas impedendo trasduzione retinoic acid (RA) del segnale in endoderma posteriore. A sostegno di questo, ci dimostrano che in cdx4-deficient embrioni trattati con RA, beta-cellule ectopiche sono situate ben posteriore al dominio del pancreas normale.

Cdx4 &egrave; necessaria l&#39;endoderma a localizzare il pancreas e limitare il numero delle beta-cellule.

CDX&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x3068;&#x4E2D;&#x80DA;&#x8449;&#x306E;&#x524D;&#x5F8C;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5185;&#x80DA;&#x8449;&#x306E;cdx4&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306B;&#x7126;&#x70B9;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;cdx4&#x306F;&#x65E9;&#x671F;&#x81B5;&#x5CF6;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x6642;&#x306B;&#x3B2;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6B63;&#x4E2D;&#x7DDA;&#x306E;&#x53CE;&#x675F;&#x3092;&#x6307;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x524D;&#x8178;&#x306E;&#x5668;&#x5B98;&#x306E;&#x524D;&#x5F8C;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3092;&#x6307;&#x5B9A;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x81B5;&#x81D3;&#x3B2;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6570;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x62C5;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; cdx4&#x6B20;&#x640D;&#x80DA;&#x306F;&#x5F8C;&#x65B9;&#x306B;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;&#x81B5;&#x81D3;&#x3001;&#x809D;&#x81D3;&#x3068;&#x5C0F;&#x8178;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306F;&#x3001;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;CDX&#x56E0;&#x5B50;&#x3001;cdx1a&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x3067;&#x3088;&#x308A;&#x6DF1;&#x523B;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x5185;&#x80DA;&#x8449;&#x5185;cdx4&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x81B5;&#x81D3;&#x3092;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x5185;&#x80DA;&#x8449;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3059;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x306E;&#x7279;&#x306B;cdx4 cdx4&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5F8C;&#x65B9;&#x306B;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;&#x81B5;&#x81D3;&#x306E;&#x30E2;&#x30EB;&#x30DB;&#x30EA;&#x30CE;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x3002;&#x9006;&#x306B;&#x3001;&#x5185;&#x80DA;&#x8449;&#x306B;&#x7279;&#x7570;cdx4&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x524D;&#x65B9;&#x306B;&#x81B5;&#x81D3;&#x3092;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;cdx4&#x306F;&#x3001;&#x5185;&#x80DA;&#x8449;&#x306E;&#x5F8C;&#x65B9;&#x306B;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; Cdx4&#x306F;&#x3001;&#x30EC;&#x30C1;&#x30CE;&#x30A4;&#x30F3;&#x9178;&#xFF08;RA&#xFF09;&#x5F8C;&#x65B9;&#x5185;&#x80DA;&#x8449;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x9632;&#x6B62;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x81B5;&#x81D3;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;RA&#x3067;&#x200B;&#x200B;&#x51E6;&#x7406;cdx4&#x6B20;&#x640D;&#x80DA;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7570;&#x6240;&#x6027;&#x3B2;-&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x6B63;&#x5E38;&#x306A;&#x81B5;&#x81D3;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x3082;&#x5F8C;&#x65B9;&#x306B;&#x914D;&#x7F6E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Cdx4&#x306F;&#x3001;&#x81B5;&#x81D3;&#x3092;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x3B2;&#x7D30;&#x80DE;&#x6570;&#x3092;&#x5236;&#x9650;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x5185;&#x80DA;&#x8449;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;

Cdx &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; &#xC2E0; &#xACBD;&#xACC4; &#xBC0F; mesoderm anteroposterior &#xD328;&#xD134;&#xD654; &#xD560; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; endoderm zebrafish&#xC758; &#xD328;&#xD134;&#xD654;&#xC5D0; cdx4&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0; &#xCD08;&#xC810;&#xC744;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xADF8; cdx4&#xB294; &#xCDCC; &#xC7A5; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC140; &#xBC88;&#xD638;&#xC5D0; &#xAC10;&#xB3C5; &#xCD08;&#xAE30; &#xCDCC; &#xC7A5; &#xC12C; &#xD615;&#xC131; &#xB3D9;&#xC548; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC911;&#xAC04; &#xC120; &#xC735;&#xD569; foregut &#xC7A5;&#xAE30; anteroposterior &#xC704;&#xCE58;&#xB97C; &#xC9C0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Cdx4&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD80;&#xC871; &#xD55C; &#xBC30;&#xC544;&#xAC00; &#xB4A4;&#xB85C; &#xC774;&#xB3D9;&#xD55C; &#xCDCC; &#xC7A5;, &#xAC04;, &#xC18C;&#xC7A5;. Phenotype &#xCD94;&#xAC00; Cdx &#xC694;&#xC18C;, cdx1a&#xC758; &#xCD5C;&#xC800;&#xB85C; &#xB354; &#xC2EC;&#xAC01; &#xD558;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; cdx4 &#xD45C;&#xC2DC; &#xCDCC; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xD560; endoderm&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xB2A5;. Morpholino &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; endoderm&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xD788; cdx4&#xC758; cdx4 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xB4A4;&#xB85C; &#xC774;&#xB3D9;&#xD55C; &#xCDCC; &#xC7A5;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xC0DD;. &#xBC18;&#xB300;&#xB85C; endoderm&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xD788; cdx4&#xC758; overexpression&#xC740; &#xCDCC; anteriorly &#xC774;&#xB3D9; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; cdx4&#xC5D0;&#xC11C; &#xBAA8;&#xB378; &#xC81C;&#xC548; &#xC218; &#xD6C4;&#xBD80; id endoderm &#xC5EC;. Retinoic acid (RA) &#xC2E0;&#xD638; &#xBCC0;&#xD658; &#xD6C4;&#xBD80; endoderm&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558; &#xC5EC; &#xCDCC; &#xC7A5;&#xC758; &#xC815;&#xCCB4;&#xC131;&#xC744; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558;&#xB294; Cdx4 &#xC791;&#xB3D9; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC9C0;&#xC6D0; cdx4 &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xBC30;&#xC544; RA &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC18C;&#xC131; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC138;&#xD3EC; &#xC815;&#xC0C1; &#xCDCC; &#xC7A5; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xC798; &#xD6C4;&#xBD80; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Cdx4 &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xCDCC; &#xC7A5; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC140; &#xC218;&#xB97C; &#xC81C;&#xD55C; &#xD558; endoderm&#xC5D0;&#xC11C; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Factores de transcripci&#xF3;n Cdx tienen un papel crucial en el patr&#xF3;n anteroposterior del sistema nervioso y el mesodermo. Aqu&#xED; nos centramos en el papel de cdx4 en la morfog&#xE9;nesis del endodermo en el pez cebra. Se demuestra que cdx4 tiene papeles en la determinaci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas beta pancre&#xE1;ticas n&#xFA;mero, la direcci&#xF3;n de convergencia de la l&#xED;nea media de las c&#xE9;lulas beta durante la formaci&#xF3;n de principios de los islotes pancre&#xE1;ticos, y especificar la ubicaci&#xF3;n antero-posterior de los &#xF3;rganos del intestino anterior. Los embriones deficientes en cdx4 tienen un p&#xE1;ncreas posteriormente cambi&#xF3;, el h&#xED;gado y el intestino delgado. El fenotipo es m&#xE1;s severo con el derribo de un factor adicional Cdx, cdx1a. Se demuestra que cdx4 funciones dentro del endodermo para localizar el p&#xE1;ncreas. Morpholino ca&#xED;da de cdx4 espec&#xED;ficamente en las recapitula el p&#xE1;ncreas endodermo posterior cambi&#xF3; observado en cdx4 mutantes. Por el contrario, la sobreexpresi&#xF3;n de cdx4 espec&#xED;ficamente en el endodermo es suficiente para desplazar el p&#xE1;ncreas anteriormente. En conjunto, estos resultados sugieren un modelo en el que cdx4 confiere identidad posterior al endodermo. Cdx4 podr&#xED;a funcionar para bloquear la identidad de p&#xE1;ncreas mediante la prevenci&#xF3;n de &#xE1;cido retinoico (RA) transducci&#xF3;n de se&#xF1;al en endodermo posterior. En apoyo de esto, nos demuestran que en cdx4 deficientes en los embriones tratados con AR, las c&#xE9;lulas beta ect&#xF3;picos se encuentran bien por detr&#xE1;s del dominio de p&#xE1;ncreas normal.

Cdx4 se requiere en el endodermo para localizar el p&#xE1;ncreas y el n&#xFA;mero l&#xED;mite de las c&#xE9;lulas beta

&#x6C38;&#x4E45;&#x65B0;&#x751F;&#x513F;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x662F;&#x751F;&#x547D;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x7F55;&#x89C1;&#x7684;&#x9700;&#x8981;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x5185;&#x7B2C;&#x51E0;&#x5468;&#x6216;&#x51E0;&#x4E2A;&#x6708;&#x3002;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x662F;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5F62;&#x5F0F;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4E2A;&#x6700;&#x5E38;&#x89C1;&#x7684;&#x539F;&#x56E0;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F4D;&#x4E8E; preproinsulin &#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x533A;&#x57DF;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x59A8;&#x788D;&#x6B63;&#x5E38;&#x5904;&#x7406;&#x6216; preproinsulin/&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x6298;&#x53E0;&#x3002;&#x6765;&#x63CF;&#x8FF0;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x77ED;&#x6682;&#x8868;&#x793A;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x539F; GFP &#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE; MIN6 &#x5C0F;&#x9F20;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x663E;&#x793A;&#x4E09;&#x4E2A;&#x7EC4;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF1A; 1&#xFF09; &#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x539F;&#x5728;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51; (ER) &#x4FDD;&#x7559;&#x548C;&#x8870;&#x51CF;&#x7684; cotransfected &#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x5206;&#x6CCC;&#xFF1A; C43G&#x3001; F48C&#x3001; C96Y &#xFF1B;2&#xFF09; &#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x90E8;&#x5206; ER &#x4FDD;&#x7559;&#x3001; &#x9897;&#x7C92;&#xFF0C;&#x548C;&#x8870;&#x51CF;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x5206;&#x6CCC;&#x5206;&#x90E8;&#x62DB;&#x8058;&#xFF1A; G32R&#x3001; G32S&#x3001; G47V&#x3001; G90C&#x3001; Y108C &#xFF1B;&#x548C; 3&#xFF09; &#x76F8;&#x4F3C; &#xFF08;2&#xFF09;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8F83;&#x4E0D;&#x663E;&#x8457;&#x8870;&#x51CF;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x5206;&#x6CCC;&#xFF1A; A24D &#x548C; R89C&#x3002;&#x7A81;&#x53D8;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E0D;&#x80FD;&#x9632;&#x6B62;&#x9488;&#x5BF9;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x7684;&#x5206;&#x6CCC;&#x9897;&#x7C92;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5927;&#x591A;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x5BFC;&#x81F4;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x7684;&#x5206;&#x6CCC;&#x51CF;&#x5C11;&#x3002;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x89E6;&#x53D1;&#x65A9;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x5B58;&#x5728;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x5E94;&#x6FC0;&#x7684;&#x6D46;&#x6DB2;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;

&#x4F53;&#x5916;&#x5904;&#x7406;&#x548C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6C38;&#x4E45;&#x65B0;&#x751F;&#x513F;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x7684;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x7A81;&#x53D8;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x5206;&#x6CCC;&#x3002;

Permanent neonatal diabetes mellitus is a rare form of insulin-requiring diabetes presenting within the first few weeks or months of life. Mutations in the insulin gene are the second most common cause of this form of diabetes. These mutations are located in critical regions of preproinsulin and are likely to prevent normal processing or folding of the preproinsulin/proinsulin molecule. To characterize these mutations, we transiently expressed proinsulin-GFP fusion proteins in MIN6 mouse insulinoma cells. Our study revealed three groups of mutant proteins: 1) mutations that result in retention of proinsulin in the endoplasmic reticulum (ER) and attenuation of secretion of cotransfected wild-type insulin: C43G, F48C, and C96Y; 2) mutations with partial ER retention, partial recruitment to granules, and attenuation of secretion of wild-type insulin: G32R, G32S, G47V, G90C, and Y108C; and 3) similar to (2) but with no significant attenuation of wild-type insulin secretion: A24D and R89C. The mutant insulin proteins do not prevent targeting of wild-type insulin to secretory granules, but most appear to lead to decreased secretion of wild-type insulin. Each of the mutants triggers the expression of the proapoptotic gene Chop, indicating the presence of ER stress.

In vitro processing and secretion of mutant insulin proteins that cause permanent neonatal diabetes.

Permanent diab&#xE8;te n&#xE9;onatal est une forme rare de diab&#xE8;te n&#xE9;cessitant de l&#x26;#39;insuline se pr&#xE9;sentant dans les premi&#xE8;res semaines ou quelques mois de la vie. Des mutations dans le g&#xE8;ne de l&#x26;#39;insuline sont la deuxi&#xE8;me cause la plus fr&#xE9;quente de cette forme de diab&#xE8;te. Ces mutations sont situ&#xE9;es dans des r&#xE9;gions critiques de pr&#xE9;proinsuline et sont susceptibles d&#x26;#39;emp&#xEA;cher le traitement normal ou pliage de la mol&#xE9;cule pr&#xE9;proinsuline / proinsuline. Pour caract&#xE9;riser ces mutations, nous exprim&#xE9;e de mani&#xE8;re transitoire des prot&#xE9;ines de fusion proinsuline-GFP dans les cellules d&#x26;#39;insulinome MIN6 souris. Notre &#xE9;tude a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; trois groupes de prot&#xE9;ines mutantes: 1) les mutations qui se traduisent par le maintien de la proinsuline dans le r&#xE9;ticulum endoplasmique (RE) et de l&#x26;#39;att&#xE9;nuation de la s&#xE9;cr&#xE9;tion de cotransfect&#xE9;e de type sauvage d&#x26;#39;insuline: C43G, F48C, et C96Y; 2) mutations avec ER r&#xE9;tention partielle , recrutement partiel &#xE0; granul&#xE9;s, et l&#x26;#39;att&#xE9;nuation de la s&#xE9;cr&#xE9;tion de l&#x26;#39;insuline de type sauvage: G32R, G32S, G47V, G90C, et Y108C et 3) similaire &#xE0; (2), mais sans att&#xE9;nuation significative de la s&#xE9;cr&#xE9;tion de l&#x26;#39;insuline de type sauvage: A24D et R89C . Les prot&#xE9;ines mutantes d&#x26;#39;insuline ne fait pas obstacle &#xE0; cibler de type sauvage d&#x26;#39;insuline pour les granules de s&#xE9;cr&#xE9;tion, mais la plupart semblent conduire &#xE0; diminution de la s&#xE9;cr&#xE9;tion d&#x26;#39;insuline de type sauvage. Chacun des mutants d&#xE9;clenche l&#x26;#39;expression de la Chop g&#xE8;ne pro-apoptotique, indiquant la pr&#xE9;sence de stress du RE.

Dans le traitement in vitro et la s&#xE9;cr&#xE9;tion des prot&#xE9;ines mutantes qui insuline cause permanente du diab&#xE8;te n&#xE9;onatal

Permanente neonatalen Diabetes Mellitus ist eine seltene Form von Insulin voraussetzen Diabetes innerhalb der ersten Wochen oder Monaten des Lebens pr&auml;sentieren. Mutationen des Insulin-Gens sind die zweith&auml;ufigste Ursache f&uuml;r diese Form des Diabetes. Diese Mutationen befinden sich in kritischen Regionen Preproinsulin und d&uuml;rften sich die normale Verarbeitung oder Faltung des Molek&uuml;ls Preproinsulin/Proinsulin zu verhindern. Um diese Mutationen zu charakterisieren, haben wir vor&uuml;bergehend Proinsulin-GFP Schmelzverfahrensproteine in MIN6 Maus Insulinom Zellen. Unsere Studie ergab drei Gruppen von mutierten Proteinen: 1) Mutationen, die Speicherung von Proinsulin in dem Endoplasmatischen Retikulum (ER) und D&auml;mpfung der Sekretion von cotransfected Wildtyp Insulin f&uuml;hren: C43G, F48C und C96Y; 2) Mutationen mit teilweiser ER Aufbewahrung, teilweise Anwerbung f&uuml;r Granulate und D&auml;mpfung der Sekretion von Insulin Wildtyp: G32R, G32S, G47V, G90C und Y108C; und 3) (2) &auml;hnlich, aber mit keine signifikante Abschw&auml;chung der Wildtyp Insulinsekretion: A24D und R89C. Der mutant Insulin-Proteine verhindern nicht die Ausrichtung der Wildtyp Insulin sekretorisches Granulat, aber die meisten scheinen zu einer verminderten Sekretion von Wildtyp Insulin f&uuml;hren. Jedes der Mutanten l&ouml;st die Expression des Gens Proapoptotischen Chop, das Vorhandensein von ER Stress.

In-vitro-Verarbeitung und Sekretion von mutant Insulin-Proteine, die permanenter neonataler Diabetes verursachen.

Mellito di diabete neonatale permanente &egrave; una rara forma di diabete insulina-richiedere presentando entro le prime settimane o mesi di vita. Mutazioni nel gene dell&#39;insulina sono la seconda causa pi&ugrave; comune di questa forma di diabete. Queste mutazioni sono situate in aree critiche del preproinsulin e sono suscettibili di impedire la normale elaborazione o ripiegamento della molecola preproinsulin/proinsulina. Per caratterizzare queste mutazioni, abbiamo espresso transitoriamente proteine di fusione di GFP proinsulina in celle di insulinoma MIN6 del mouse. Il nostro studio ha rivelato tre gruppi delle proteine mutanti: 1) mutazioni che provocano ritenzione di proinsulina nel reticolo endoplasmatico (ER) e l&#39;attenuazione della secrezione di insulina selvaggio-tipo cotransfected: C43G, F48C e C96Y; 2) mutazioni con parziale ritenzione ER, parziale assunzione di granuli e attenuazione della secrezione di insulina selvaggio-tipo: G32R, G32S, G47V, G90C e Y108C; e 3) simile a (2), ma con nessuna attenuazione significativa della secrezione dell&#39;insulina del selvaggio-tipo: A24D e R89C. Le proteine mutanti insulina non impediscono di targeting del selvaggio-tipo insulina a granuli secretori, ma la maggior parte sembrano portare ad una diminuita secrezione di insulina wild-type. Ciascuno dei mutanti che innesca l&#39;espressione del gene Miselli Chop, che indica la presenza di stress di ER.

Trattamento in vitro e la secrezione delle proteine mutanti insulina che causano il diabete neonatale permanente.

&#x6052;&#x4E45;&#x7684;&#x306A;&#x65B0;&#x751F;&#x5150;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x306F;&#x4EBA;&#x751F;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x6570;&#x9031;&#x9593;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6570;&#x30F6;&#x6708;&#x4EE5;&#x5185;&#x306B;&#x63D0;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x306E;&#x307E;&#x308C;&#x306A;&#x5F62;&#x614B;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;2&#x756A;&#x76EE;&#x306E;&#x6700;&#x3082;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x539F;&#x56E0;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30EC;&#x30D7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5730;&#x57DF;&#x306B;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3057;&#x3001;&#x30D7;&#x30EC;&#x30D7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;/&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x51E6;&#x7406;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6298;&#x308A;&#x305F;&#x305F;&#x307F;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306B;MIN6&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30CE;&#x30FC;&#x30DE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;-GFP&#x878D;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x5171;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x5206;&#x6CCC;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#xFF08;ER&#xFF09;&#x3068;&#x6E1B;&#x8870;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x4FDD;&#x6301;&#x3067;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;1&#xFF09;&#xFF1A;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x5909;&#x7570;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x4E09;&#x3064;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x304C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;C43G&#x3001;F48C&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;C96Y&#x3001;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306A;ER&#x4FDD;&#x6301;2&#xFF09;&#x5909;&#x7570;&#x3001;&#x9846;&#x7C92;&#x5264;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x5206;&#x6CCC;&#x306E;&#x6E1B;&#x8870;&#x91CF;&#x3092;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x63A1;&#x7528;&#xFF1A;G32R&#x3001;G32S&#x3001;G47V&#x3001;G90C&#x3068;&#x3001;Y108C&#x3001;3&#xFF09;&#xFF08;2&#xFF09;&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x5206;&#x6CCC;&#x306E;&#x6709;&#x610F;&#x306A;&#x6E1B;&#x8870;&#xFF1A;A24D&#x3068;R89C &#x3002;&#x5909;&#x7570;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x5206;&#x6CCC;&#x9846;&#x7C92;&#x306B;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x5316;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x304C;&#x3001;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x5206;&#x6CCC;&#x306E;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x5404;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x4FC3;&#x9032;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30C1;&#x30E7;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6C38;&#x4E45;&#x65B0;&#x751F;&#x5150;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x5909;&#x7570;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x8A66;&#x9A13;&#x7BA1;&#x5185;&#x51E6;&#x7406;&#x3068;&#x5206;&#x6CCC;&#x306B;

&#xC601;&#xAD6C; &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC544; &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1; mellitus &#xC778;&#xC290;&#xB9B0;&#xC744; &#xD544;&#xC694;&#xB85C; &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1; &#xCC98;&#xC74C; &#xBA87; &#xC8FC; &#xB610;&#xB294; &#xBA87; &#xB2EC; &#xC0DD;&#xD65C;&#xC758; &#xB0B4; &#xC81C;&#xC2DC;&#xC758; &#xB4DC;&#xBB38; &#xD615;&#xD0DC;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC774; &#xD615;&#xD0DC;&#xC758;&#xC774; &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1;&#xC758; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC6D0;&#xC778;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB4E4;&#xC774; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; preproinsulin&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xC788;&#xC73C;&#xBA70; &#xBC29;&#xC9C0; &#xCC98;&#xB9AC; &#xB610;&#xB294; preproinsulin/proinsulin &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xC811;&#xB294; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xAC83;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xC6B0;&#xB9AC; transiently proinsulin GFP &#xC735;&#xD574; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; MIN6 &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; insulinoma &#xC140;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xBC1D;&#xD600; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; 3 &#xAC1C; &#xADF8;&#xB8F9;: 1) endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; (&#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;)&#xC5D0;&#xC11C; proinsulin&#xC758; &#xBCF4;&#xC874; &#xBC0F; &#xAC10;&#xC1C4; cotransfected &#xC57C;&#xC0DD; &#xD615; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0;&#xC758; &#xBD84; &#xBE44;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;: C43G, F48C, &#xBC0F; C96Y; 2) &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBD80;&#xBD84; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4; &#xBCF4;&#xC874;,&#xACFC; &#xB9BD;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD615; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0;&#xC758; &#xBD84; &#xBE44;&#xC758; &#xAC10;&#xC1E0;&#xB97C; &#xBD80;&#xBD84; &#xBAA8;&#xC9D1;: G32R, G32S, G47V, G90C, &#xBC0F; Y108C; &#xACE0; 3) (2)&#xC640; &#xC720;&#xC0AC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC;, &#xC57C;&#xC0DD; &#xD615; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xBD84; &#xBE44;&#xC758; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xAC10;&#xC1C4; &#xC5C6;&#xC774;: A24D &#xBC0F; R89C. &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBD84;&#xACFC; &#xB9BD;, &#xC57C;&#xC0DD; &#xD615; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0;&#xC744; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xC9C0; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD615; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0;&#xC758; &#xAC10;&#xC18C; &#xBD84; &#xBE44; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C8; &#xB4EF;&#xD558;&#xB2E4;. &#xAC01; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; proapoptotic &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC808;&#xB2E8;, ER &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xD45C;&#xD604;&#xC744; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xCC98;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xC601;&#xAD6C; &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC544; &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1;&#xC758; &#xC6D0;&#xC778;&#xC774; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBD84; &#xBE44;.

Mellitus diabetes neonatal permanente es una forma rara de diabetes insulinodependiente que presentaban dentro de las primeras semanas o meses de vida. Las mutaciones en el gen de la insulina son la segunda causa m&#xE1;s com&#xFA;n de este tipo de diabetes. Estas mutaciones se encuentran en regiones cr&#xED;ticas de la preproinsulina y es probable que impedir el procesamiento normal o plegamiento de la mol&#xE9;cula de preproinsulina / proinsulina. Para la caracterizaci&#xF3;n de estas mutaciones, se expresa de forma transitoria la proinsulina-GFP prote&#xED;nas de fusi&#xF3;n en c&#xE9;lulas de rat&#xF3;n MIN6 insulinoma. Nuestro estudio revel&#xF3; tres grupos de prote&#xED;nas mutantes: 1) las mutaciones que dan lugar a la retenci&#xF3;n de la proinsulina en el ret&#xED;culo endopl&#xE1;smico (RE) y la atenuaci&#xF3;n de la secreci&#xF3;n de cotransfected de tipo salvaje a la insulina: C43G, F48C, y C96Y; 2) mutaciones con parciales de retenci&#xF3;n del RE , la contrataci&#xF3;n parcial de gr&#xE1;nulos, y la atenuaci&#xF3;n de la secreci&#xF3;n de la insulina de tipo salvaje: G32R, G32S, G47V, G90C, y Y108C, y 3) similar a (2), pero sin atenuaci&#xF3;n significativa de la secreci&#xF3;n de insulina de tipo salvaje: A24D y R89C . Las prote&#xED;nas mutantes de insulina no impiden que la orientaci&#xF3;n de tipo salvaje de gr&#xE1;nulos de secreci&#xF3;n de insulina, pero la mayor&#xED;a parecen conducir a la disminuci&#xF3;n de la secreci&#xF3;n de la insulina de tipo salvaje. Cada uno de los mutantes desencadena la expresi&#xF3;n de la tajada gen proapopt&#xF3;tico, indicando la presencia de estr&#xE9;s ER.

En Procesamiento de Vitro y secreci&#xF3;n de prote&#xED;nas de insulina mutante que causa la diabetes neonatal permanente

&#x6210;&#x4EBA;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x6210;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4E0E;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x5B9E;&#x73B0;&#x8FD9;&#x4E00;&#x6F5C;&#x529B;&#xFF0C;&#x5C0F;&#x89C4;&#x6A21;&#x5206;&#x6790;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x80F0;&#x817A;&#x529F;&#x80FD;&#x9700;&#x8981;&#x3002;&#x8840;&#x7CD6;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x6D4B;&#x91CF;&#x662F;&#x8BC4;&#x4EF7; &beta; &#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5E38;&#x7528;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5C0F;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x7684;&#x5927;&#x5C0F;&#x6311;&#x6218;&#x6536;&#x96C6;&#x8840;&#x6DB2;&#x6837;&#x672C;&#x548C;&#x6D4B;&#x91CF;&#x8840;&#x7CD6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5236;&#x5B9A;&#x4E86;&#x6536;&#x96C6;&#x5FAE;&#x91CF;&#x5168;&#x8840;&#x548C;&#x8840;&#x6D46;&#x7684;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x538B;&#x79EF;&#x53CA;&#x8840;&#x7CD6;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x4E13;&#x4F9B;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x60A3;&#x8005;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x624B;&#x6301;&#x8840;&#x7CD6;&#x4EEA;&#x8FD4;&#x56DE;&#x6709;&#x6548;&#x7ED3;&#x679C;&#x4E0E;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x8840;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x73B0;&#x6709;&#x7684;&#x7528;&#x4E8E;&#x7A7A;&#x8179;&#x548C;&#x9910;&#x540E;&#x8840;&#x7CD6;&#x53CA;&#x8179;&#x8154;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x8010;&#x53D7;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x6267;&#x884C;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x627E;&#x5230;&#x7684;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x8840;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x7A33;&#x6001;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7B26;&#x5408;&#x62A5;&#x544A;&#x5176;&#x4ED6;&#x6742;&#x98DF;&#x6027;&#x7684;&#x786C;&#x9AA8;&#x9C7C;&#x7684;&#x56FE;&#x6848;&#x3002;

&#x5728;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x4E2D;&#x7684;&#x8840;&#x7CD6;&#x6D4B;&#x91CF;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x7CD6;&#x7A33;&#x6001;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x3002;

The adult zebrafish has the potential to become an important model for diabetes-related research. To realize this potential, small-scale methods for analyzing pancreas function are required. The measurement of blood glucose level is a commonly used method for assessing beta-cell function, but the small size of the zebrafish presents challenges both for collecting blood samples and for measuring glucose. We have developed methods for collecting microsamples of whole blood and plasma for the measurement of hematocrit and blood glucose. We demonstrate that two hand-held glucose meters designed for use by human diabetics return valid results with zebrafish blood. Additionally, we present methods for fasting and for performing postprandial glucose and intraperitoneal glucose tolerance tests. We find that the dynamics of zebrafish blood glucose homeostasis are consistent with patterns reported for other omnivorous teleost fish.

Blood sugar measurement in zebrafish reveals dynamics of glucose homeostasis.

Le poisson z&#xE8;bre adulte a le potentiel pour devenir un mod&#xE8;le important pour recherche sur le diab&#xE8;te. Pour r&#xE9;aliser ce potentiel, &#xE0; petite &#xE9;chelle des m&#xE9;thodes pour analyser la fonction du pancr&#xE9;as sont n&#xE9;cessaires. La mesure du niveau de glucose dans le sang est une m&#xE9;thode couramment utilis&#xE9;e pour &#xE9;valuer la fonction des cellules b&#xEA;ta-, mais la petite taille des cadeaux de poisson z&#xE8;bre conteste &#xE0; la fois pour la collecte des &#xE9;chantillons de sang et de mesure du glucose. Nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; m&#xE9;thodes de collecte micro&#xE9;chantillons de sang total et du plasma pour la mesure de l&#x26;#39;h&#xE9;matocrite et la glyc&#xE9;mie. Nous d&#xE9;montrons que deux glucom&#xE8;tres portatifs con&#xE7;us pour &#xEA;tre utilis&#xE9;s par les diab&#xE9;tiques humains retourner des r&#xE9;sultats valables avec le sang du poisson z&#xE8;bre. En outre, nous pr&#xE9;sentons les m&#xE9;thodes pour le je&#xFB;ne et pour effectuer la glyc&#xE9;mie postprandiale et intrap&#xE9;riton&#xE9;ales tests de tol&#xE9;rance au glucose. Nous constatons que la dynamique de l&#x26;#39;hom&#xE9;ostasie du glucose dans le sang du poisson z&#xE8;bre sont conformes aux mod&#xE8;les indiqu&#xE9;s pour les poissons t&#xE9;l&#xE9;ost&#xE9;ens d&#x26;#39;autres omnivores.

Mesure de la glyc&#xE9;mie chez le poisson z&#xE8;bre r&#xE9;v&#xE8;le la dynamique de l&#x26;#39;hom&#xE9;ostasie du glucose

Die Erwachsenen Zebrafisch hat das Potenzial, ein wichtiges Modell f&uuml;r Diabetes-Forschung geworden. Um dieses Potenzial zu realisieren, sind die handwerkliche Methoden zur Analyse von Pankreas-Funktion erforderlich. Die Messung des Blutzuckerspiegels ist eine h&auml;ufig verwendete Methode zur Bewertung von Beta-Zell-Funktion, aber die geringe Gr&ouml;&szlig;e der Zebrafisch stellt eine Herausforderung f&uuml;r das Sammeln von Blutproben sowohl zur Messung von Glukose. Wir haben Methoden f&uuml;r die Sammlung von Vollblut und Plasma zur Messung des H&auml;matokrit und Blut-Glukose Mikroanalytik entwickelt. Wir zeigen, dass zwei handgef&uuml;hrten Blutzuckermessger&auml;te, entworfen f&uuml;r den Gebrauch von menschlichen Diabetiker g&uuml;ltige Ergebnisse mit Zebrafisch Blut zur&uuml;ck. Dar&uuml;ber hinaus pr&auml;sentieren wir Methoden zum Fasten und zur Durchf&uuml;hrung von Miniature Glukose und intraperitoneale Glukose-Toleranztests. Wir finden, dass die Dynamik der Zebrafisch-Blut-Glukose-Hom&ouml;ostase konsistent mit Mustern, die f&uuml;r andere Allesfresser teleost Fische gemeldet sind.

Blutzucker-Messung im Zebrafisch verr&auml;t Dynamik der Glukose-Hom&ouml;ostase.

The zebrafish adulto ha il potenziale per diventare un importante modello per le ricerche legate al diabete. Per realizzare questo potenziale, sono necessari piccoli metodi per analizzare la funzione del pancreas. La misurazione del livello di glucosio nel sangue &egrave; un metodo comunemente usato per valutare la funzione delle cellule beta, ma le piccole dimensioni del the zebrafish presenta sfide per la raccolta di campioni di sangue e per la misurazione della glicemia. Abbiamo sviluppato metodi di raccolta opportunamente di sangue intero e plasma per la misurazione dell&#39;ematocrito e nel sangue di glucosio. Dimostriamo che due glucometri portatile progettati per essere utilizzato dai diabetici umani restituiscono risultati validi con sangue di zebrafish. Inoltre, vi presentiamo metodi per digiuno e per l&#39;esecuzione di glicemia postprandiale e prove di tolleranza del glucosio intraperitoneale. Troviamo che la dinamica dell&#39;omeostasi del glucosio sangue zebrafish &egrave; coerente con i modelli riportati per altri pesci teleostei onnivoro.

Misura di zucchero nel sangue in zebrafish rivela dinamica dell&#39;omeostasi del glucosio.

&#x5927;&#x4EBA;&#x306E;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306F;&#x3001;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x95A2;&#x9023;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x3068;&#x3063;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x79D8;&#x3081;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5B9F;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x81B5;&#x81D3;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x89E3;&#x6790;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x3001;&#x5C0F;&#x898F;&#x6A21;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8840;&#x7CD6;&#x5024;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306F;&#x3001;&#x3B2;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306E;&#x30D7;&#x30EC;&#x30BC;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x304C;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x306E;&#x8840;&#x6DB2;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3092;&#x53CE;&#x96C6;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306B;&#x6311;&#x6226;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30D8;&#x30DE;&#x30C8;&#x30AF;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C8;&#x5024;&#x53CA;&#x3073;&#x8840;&#x7CD6;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5168;&#x8840;&#x3068;&#x8840;&#x6F3F;&#x306E;&#x5FAE;&#x5C11;&#x3092;&#x53CE;&#x96C6;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x60A3;&#x8005;&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x305F;2&#x3064;&#x306E;&#x30CF;&#x30F3;&#x30C9;&#x30D8;&#x30EB;&#x30C9;&#x8840;&#x7CD6;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x5668;&#x306F;&#x3001;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306E;&#x8840;&#x3067;&#x6709;&#x52B9;&#x306A;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x8FD4;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x7A7A;&#x8179;&#x6642;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x98DF;&#x5F8C;&#x8840;&#x7CD6;&#x5024;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8179;&#x8154;&#x5185;&#x30D6;&#x30C9;&#x30A6;&#x7CD6;&#x8CA0;&#x8377;&#x8A66;&#x9A13;&#x3092;&#x5B9F;&#x884C;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x7D39;&#x4ECB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306E;&#x8840;&#x7CD6;&#x5024;&#x306E;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x96D1;&#x98DF;&#x6027;&#x306E;&#x786C;&#x9AA8;&#x9B5A;&#x306E;&#x9B5A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x8840;&#x7CD6;&#x5024;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306F;&#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;

&#xC131;&#xC778; zebrafish &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1; &#xAD00;&#xB828; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC774; &#xB420; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC744; &#xC2E4;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xCDCC; &#xC7A5; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xC18C;&#xADDC;&#xBAA8; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB294; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD608;&#xC561; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xC218;&#xC900; &#xCE21;&#xC815; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95; &#xC774;&#xC9C0;&#xB9CC; zebrafish&#xB294; &#xC18C;&#xD615; &#xB3C4;&#xC804; &#xD608;&#xC561; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC744; &#xC218;&#xC9D1; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xACE0; &#xD608;&#xB2F9;&#xC744; &#xCE21;&#xC815; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xC120;&#xBB3C;. &#xC804;&#xCCB4; &#xD608;&#xC561;&#xACFC; &#xBCF4;&#xD1B5; &#xBC0F; &#xD608;&#xC561; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xCE21;&#xC815;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8;&#xC758; microsamples&#xB97C; &#xC218;&#xC9D1; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1; &#xD658;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC124;&#xACC4; &#xB41C; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xD734;&#xB300;&#xC6A9; &#xD608;&#xB2F9; &#xCE21;&#xC815;&#xAE30; zebrafish &#xD608;&#xC561;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xD6A8;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xBC18;&#xD658; &#xD558;&#xB294;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xAE08;&#xC2DD; &#xD558; &#xACE0; &#xC2DD; &#xD6C4; &#xD608;&#xB2F9; &#xBC0F; intraperitoneal &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xB0B4;&#xC131; &#xAC80;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC18C;&#xAC1C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; zebrafish &#xD608;&#xC561; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131; &#xC5ED;&#xD559; &#xD328;&#xD134; &#xB2E4;&#xB978; &#xC7A1; &#xC2DD; teleost &#xBB3C;&#xACE0;&#xAE30;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xB294; &#xCC3E;&#xC744;.

Zebrafish&#xC758; &#xD608;&#xB2F9; &#xCE21;&#xC815; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131;&#xC758; &#xC5ED;&#xB3D9;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;.

El pez cebra adulto tiene el potencial para convertirse en un modelo importante para la diabetes relacionada con la investigaci&#xF3;n. Para aprovechar este potencial, de peque&#xF1;a escala los m&#xE9;todos para el an&#xE1;lisis de la funci&#xF3;n del p&#xE1;ncreas son obligatorios. La medici&#xF3;n del nivel de glucosa en sangre es un m&#xE9;todo com&#xFA;nmente utilizado para evaluar la funci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas beta, pero el peque&#xF1;o tama&#xF1;o de los presentes pez cebra cuestiona tanto para recoger muestras de sangre y para medir la glucosa. Hemos desarrollado m&#xE9;todos para la recogida micromuestras de sangre entera y plasma para la medici&#xF3;n de hematocrito y la glucosa en sangre. Demostramos que dos port&#xE1;tiles medidores de glucosa dise&#xF1;ados para ser utilizados por los diab&#xE9;ticos humanos devolver resultados v&#xE1;lidos con la sangre de pez cebra. Adem&#xE1;s, se presentan m&#xE9;todos para el ayuno y para la realizaci&#xF3;n de la glucosa postprandial y intraperitoneales pruebas de tolerancia a la glucosa. Nos parece que la din&#xE1;mica de la homeostasis de la glucosa en sangre de pez cebra son consistentes con los patrones reportados en otros peces tele&#xF3;steos omn&#xED;vora.

Article	Year
In vivo identification of a 107-base pair promoter element mediating neuron-specific expression of mouse gonadotropin-releasing hormone. Molecular endocrinology (Baltimore, Md.)\| PubMed ID: 17095579	2007
Cdx4 is required in the endoderm to localize the pancreas and limit beta-cell number. Development (Cambridge, England)\| PubMed ID: 18234725	2008
In vitro processing and secretion of mutant insulin proteins that cause permanent neonatal diabetes. American journal of physiology. Endocrinology and metabolism\| PubMed ID: 19952343	2010
Blood sugar measurement in zebrafish reveals dynamics of glucose homeostasis. Zebrafish\| PubMed ID: 20515318	2010

Stefani C. Eames

Biography

JoVE Journal Publications

Other Publications