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Immunofluorescent Detection of Two Thymidine Analogues (CldU and IdU) in Primary Tissue

Accurate measurement of cell division is a fundamental challenge in experimental biology that becomes increasingly complex when slowly dividing cells are ...

University of Pennsylvania-School of Medicine

&Beta; &#x7EC6;&#x80DE;&#x5927;&#x89C4;&#x6A21;&#x6269;&#x5F20;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x4ECD;&#x7136;&#x77E5;&#x4E4B;&#x751A;&#x5C11;&#x3002;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D; D2 &#x662F;&#x4E3B;&#x8981;&#x7684; D &#x578B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x4E2D;&#x8868;&#x793A;&#x7684; beta &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x6210;&#x4EBA;&#x7684; beta &#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5047;&#x8BBE; D2 &#x80FD;&#x79EF;&#x6781;&#x8C03;&#x8282; &beta;-&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x8BE5;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x5141;&#x8BB8;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x523A;&#x6FC0; &beta; &#x7EC6;&#x80DE;&#x6269;&#x5F20;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;D2 &#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D;&#x53C8;&#x5927;&#x5E45;&#x5EA6;&#x5730;&#x589E;&#x52A0;&#x540E;&#x80F0;&#x817A;&#x90E8;&#x5206;&#x5207;&#x9664;&#xFF0C;&#x4F46;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D; D2 mRNA &#x662F;&#x7EF4;&#x6301;&#x4E0D;&#x53D8;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x8F6C;&#x5F55;&#x540E;&#x6C34;&#x5E73;&#x8C03;&#x63A7;&#x673A;&#x5236;&#x5F71;&#x54CD; &beta; &#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D; D2 &#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x7B26;&#x5408;&#x8FD9;&#x4E00;&#x5047;&#x8BBE;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F; D2 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x662F;&#x6709;&#x529B;&#x5730;&#x8C03;&#x8282;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;&#x82CF;&#x6C28;&#x9178; 280 &#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D; D2 &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#xFF0C;&#x548C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6B8B;&#x4F59;&#x4F24;&#x52BF;&#x4E25;&#x91CD;&#x9650;&#x5236;&#x4E86; D2 &#x7A33;&#x5B9A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6D3E;&#x751F;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178; (T280A) &#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D; D2 &#x6C28;&#x9178; 280 (tg) &#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6216;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D; D2 &#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x63A7;&#x5236;&#x4E0B;&#x7684;&#x3002;D2 T280A &#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D;&#x6709;&#x4EBA;&#x5728;&#x66F4;&#x9AD8;&#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#xFF0C;&#x6BD4;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D; D2 &#x86CB;&#x767D; &beta;-&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x7BA1; tg mRNAs &#x7684;&#x7B49;&#x6548;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x3002;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D; D2 T280A tg &#x5C0F;&#x9F20;&#x5C55;&#x51FA;&#x4E00;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D; D2 &#x672C;&#x5730;&#x5316; &beta;-&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D; D2 &#x7A33;&#x5B9A;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x82CF;&#x6C28;&#x9178; 280 &#x7A81;&#x53D8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D; D2 tg &#x5C0F;&#x9F20;&#x6781;&#x5927;&#x5730;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86; beta &#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#xFF0C;&#x6291;&#x5236;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x6D46;&#x6DB2;&#x3002;&#x82CF;&#x6C28;&#x9178; 280 &#x7A81;&#x53D8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D; D2 tg &#x5C0F;&#x9F20;&#x6291;&#x5236;&#x7684; &beta; &#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x5BFC;&#x81F4;&#x8001;&#x5E74;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x5927;&#x5927;&#x589E;&#x52A0;&#x7684; &beta;-&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x533A;&#x57DF;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D; D2 &#x53D7;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x80F0;&#x817A; &beta;-&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x82CF;&#x6C28;&#x9178; 280 &#x540E;&#x91C7;&#x53D6;&#x884C;&#x52A8;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x9650;&#x5236;&#x5728; &beta;-&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D; D2 &#x7A33;&#x5B9A;&#x548C;&#xFF0C;&#x82CF;&#x6C28;&#x9178; 280 &#x7A81;&#x53D8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D; D2 &#x8868;&#x8FBE;&#x5EF6;&#x957F; beta &#x7EC6;&#x80DE;&#x5B58;&#x6D3B;&#x548C;&#x6269;&#x5145;&#x4E86; beta &#x7EC6;&#x80DE;&#x5927;&#x89C4;&#x6A21;&#x6269;&#x5F20;&#x3002;

&#x80F0;&#x817A; &beta;-&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D; D2 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x4F5C;&#x4E86;&#x89C4;&#x5B9A;&#x3002;

The molecular determinants of beta-cell mass expansion remain poorly understood. Cyclin D2 is the major D-type cyclin expressed in beta-cells, essential for adult beta-cell growth. We hypothesized that cyclin D2 could be actively regulated in beta-cells, which could allow mitogenic stimuli to influence beta-cell expansion. Cyclin D2 protein was sharply increased after partial pancreatectomy, but cyclin D2 mRNA was unchanged, suggesting posttranscriptional regulatory mechanisms influence cyclin D2 expression in beta-cells. Consistent with this hypothesis, cyclin D2 protein stability is powerfully regulated in fibroblasts. Threonine 280 of cyclin D2 is phosphorylated, and this residue critically limits D2 stability. We derived transgenic (tg) mice with threonine 280 of cyclin D2 mutated to alanine (T280A) or wild-type cyclin D2 under the control of the insulin promoter. Cyclin D2 T280A protein was expressed at much higher levels than wild-type cyclin D2 protein in beta-cells, despite equivalent expression of tg mRNAs. Cyclin D2 T280A tg mice exhibited a constitutively nuclear cyclin D2 localization in beta-cells, and increased cyclin D2 stability in islets. Interestingly, threonine 280-mutant cyclin D2 tg mice had greatly reduced beta-cell apoptosis, with suppressed expression of proapoptotic genes. Suppressed beta-cell apoptosis in threonine 280-mutant cyclin D2 tg mice resulted in greatly increased beta-cell area in aged mice. Taken together, these data indicate that cyclin D2 is regulated by protein stability in pancreatic beta-cells, that signals that act upon threonine 280 limit cyclin D2 stability in beta-cells, and that threonine 280-mutant cyclin D2 overexpression prolongs beta-cell survival and augments beta-cell mass expansion.

Cyclin D2 protein stability is regulated in pancreatic beta-cells.

Les d&#xE9;terminants mol&#xE9;culaires de l&#x26;#39;expansion de masse des cellules b&#xEA;ta sont encore mal connus. Cycline D2 est le principal type de cycline D-exprim&#xE9;e dans les cellules b&#xEA;ta, essentielles pour les adultes des cellules b&#xEA;ta de croissance. Nous avons suppos&#xE9; que la cycline D2 pourrait &#xEA;tre activement r&#xE9;glement&#xE9;e dans les cellules b&#xEA;ta, qui pourraient permettre stimuli mitog&#xE8;nes pour influencer l&#x26;#39;expansion des cellules b&#xEA;ta. Prot&#xE9;ine cycline D2 a &#xE9;t&#xE9; fortement augment&#xE9; apr&#xE8;s pancr&#xE9;atectomie partielle, mais l&#x26;#39;ARNm cycline D2 est rest&#xE9; inchang&#xE9;, ce qui sugg&#xE8;re des m&#xE9;canismes de r&#xE9;gulation post-transcriptionnels influencer l&#x26;#39;expression de cycline D2 dans les cellules b&#xEA;ta. Conform&#xE9;ment &#xE0; cette hypoth&#xE8;se, la stabilit&#xE9; des prot&#xE9;ines cycline D2 est puissamment r&#xE9;glement&#xE9;e dans les fibroblastes. Thr&#xE9;onine 280 de la cycline D2 est phosphoryl&#xE9;e, et ce r&#xE9;sidu limite critique de la stabilit&#xE9; D2. On d&#xE9;riv&#xE9;e transg&#xE9;niques (tg) souris avec la thr&#xE9;onine 280 de la cycline D2 mut&#xE9;e en alanine (T280i) ou D2 cycline de type sauvage, sous le contr&#xF4;le du promoteur d&#x26;#39;insuline. Cycline D2 prot&#xE9;ines T280i a &#xE9;t&#xE9; exprim&#xE9; &#xE0; des niveaux beaucoup plus &#xE9;lev&#xE9;s que les prot&#xE9;ines cycline de type sauvage D2 dans les cellules b&#xEA;ta, en d&#xE9;pit de l&#x26;#39;expression des ARNm &#xE9;quivalent tg. Cycline D2 T280i souris Tg montr&#xE9; une localisation nucl&#xE9;aire de cycline D2 dans constitutive des cellules b&#xEA;ta, et une stabilit&#xE9; accrue cycline D2 dans les &#xEE;lots. Fait int&#xE9;ressant, la thr&#xE9;onine 280-mutantes cycline D2 souris Tg avait consid&#xE9;rablement r&#xE9;duit l&#x26;#39;apoptose des cellules b&#xEA;ta-, avec l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes pro-apoptotiques supprim&#xE9;. Supprim&#xE9;e b&#xEA;ta-apoptose des cellules de la thr&#xE9;onine 280-mutantes cycline D2 souris Tg provoquait une hausse de cellules b&#xEA;ta chez des souris &#xE2;g&#xE9;es zone. Pris ensemble, ces donn&#xE9;es indiquent que la cycline D2 est r&#xE9;gie par la stabilit&#xE9; des prot&#xE9;ines dans les cellules b&#xEA;ta pancr&#xE9;atiques, qui signale que la loi sur la thr&#xE9;onine 280 de la stabilit&#xE9; cycline D2 dans la limite des cellules b&#xEA;ta, et que la surexpression de la cycline thr&#xE9;onine 280-mutant D2 prolonge la survie des cellules b&#xEA;ta et l&#x26;#39;expansion augmente la masse des cellules b&#xEA;ta.

Stabilit&#xE9; des prot&#xE9;ines cycline D2 est r&#xE9;glement&#xE9;e dans les cellules b&#xEA;ta du pancr&#xE9;as

Die molekularen Determinanten der Beta-Zelle Masse Expansion bleiben weitgehend unverstanden. Cyclin D2 ist die D-Haupttyp cyclin ausgedr&uuml;ckt in Beta-Zellen, f&uuml;r Erwachsenen Beta-Zelle Wachstum unerl&auml;sslich. Wir die Hypothese, dass cyclin D2 aktiv konnte, in Beta-Zellen geregelt werden, die mitogenen Reize, Beta-Zell-Erweiterung zu beeinflussen zulassen k&ouml;nnte. Cyclin D2-Protein wurde stark zugenommen hat, nach teilweiser Pancreatectomy, aber cyclin D2-mRNA war unver&auml;ndert, was darauf hindeutet, dass Posttranscriptionale Regulierungsmechanismen cyclin D2-Ausdruck in Beta-Zellen beeinflussen. In &Uuml;bereinstimmung mit dieser Hypothese, cyclin D2 Protein Stabilit&auml;t kraftvoll in Fibroblasten reguliert. Threonin 280 von cyclin D2 ist phosphoryliert und diese R&uuml;ckst&auml;nde kritisch begrenzt D2 Stabilit&auml;t. Wir transgene (tg)-M&auml;use mit Threonin 280 von cyclin D2 mutiert zu Alanin (T280A) abgeleitet oder Wildtyp cyclin D2 von der Insulin-Promoter gesteuert. Cyclin D2 T280A Protein wurde auf viel h&ouml;heren Ebenen als Wildtyp cyclin D2 Protein in Beta-Zellen, trotz &auml;quivalenten Ausdruck tg mRNAs ausgedr&uuml;ckt. Cyclin D2 T280A tg M&auml;use stellte eine konstitutiv nukleare cyclin D2-Lokalisierung in Beta-Zellen und erh&ouml;hte cyclin D2-Stabilit&auml;t in Inselchen. Interessanterweise hatte Threonin 280-Mutant cyclin D2 tg M&auml;use Beta-Zelle Apoptosis, mit unterdr&uuml;ckten Expression von Proapoptotischen Genen stark reduziert. Unterdr&uuml;ckte Beta-Zelle Apoptosis Threonin 280-Mutant cyclin D2 tg M&auml;usen ergab stark erh&ouml;hte Beta-Zell-Bereich im Alter von M&auml;usen. Zusammen genommen, zufolge diese Daten cyclin D2 wird durch Protein Stabilit&auml;t in pankreatischen Betazellen, Signale, die nach Threonin 280 fungieren begrenzen cyclin D2-Stabilit&auml;t in Beta-Zellen, und die Threonin 280-Mutant cyclin D2 &Uuml;berexpression Beta-Zellen &uuml;berleben verl&auml;ngert und erweitert Beta-Zell-Masse-Erweiterung.

Cyclin D2 Protein Stabilit&auml;t wird im Pankreas-Beta-Zellen reguliert.

I determinanti molecolari di espansione massa beta-cellulare restano scarsamente comprensibili. Cyclin D2 &egrave; il D-tipo ciclina espresse in beta-cellule, essenziali per la crescita della beta-cellula adulta. Abbiamo ipotizzato che ciclina D2 potrebbe essere regolato attivamente nelle beta-cellule, che potrebbe consentire a stimoli mitogeni influenzare l&#39;espansione delle cellule beta. Cyclin D2 proteina &egrave; stata aumentata acutamente dopo Pancreatectomia parziale, ma cyclin D2 mRNA era invariato, suggerendo meccanismi regolatori posttranscriptional influenzano cyclin D2 espressione in cellule beta. Coerente con questa ipotesi, ciclina D2 della stabilit&agrave; proteica &egrave; fortemente regolata nei fibroblasti. Treonina 280 di cyclin D2 &egrave; fosforilata, e questo residuo limita criticamente D2 stabilit&agrave;. Abbiamo derivato topi transgenici (tg) con treonina 280 di cyclin D2 mutato di alanina (T280A) o il selvaggio-tipo D2 cyclin sotto il controllo del promotore della insulina. Cyclin D2 T280A proteina &egrave; stata espressa a livelli molto pi&ugrave; elevati rispetto a selvaggio-tipo cyclin D2 proteina nelle cellule beta, nonostante equivalente espressione dei mRNAs tg. Topi T280A D2 GS cyclin esposto una localizzazione di D2 cyclin costitutivamente nucleare nelle cellule beta e maggiore stabilit&agrave; cyclin D2 in isolotti. &Egrave; interessante notare, topi di treonina 280-mutante cyclin D2 GS avevano notevolmente ridotta apoptosi beta-cellule, con espressione repressa di Miselli geni. Soppresso beta-cell apoptosis in topi di treonina 280-mutante cyclin D2 GS ha portato nella zona notevolmente aumentata beta-cellule nei topi anziani. Presi insieme, questi dati indicano che cyclin D2 &egrave; regolato dalla stabilit&agrave; della proteina nelle cellule beta del pancreas, che segnali che agiscono su treonina 280 limitano cyclin D2 stabilit&agrave; nelle beta-cellule e quello sovraespressione di treonina 280-mutante cyclin D2 prolunga la sopravvivenza delle cellule beta e potenzia l&#39;espansione di massa beta-cellulare.

Stabilit&agrave; di proteina cyclin D2 &egrave; regolata nelle cellule beta del pancreas.

&#x3B2;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5927;&#x91CF;&#x5C55;&#x958B;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x56E0;&#x5B50;&#x306F;&#x3088;&#x304F;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x307E;&#x307E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;D2&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x4EBA;&#x306E;&#x3B2;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306A;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;D&#x578B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;D2&#x304C;&#x7A4D;&#x6975;&#x7684;&#x306B;&#x30DE;&#x30A4;&#x30C8;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x523A;&#x6FC0;&#x304C;&#x3B2;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x62E1;&#x5927;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3B2;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x7ACB;&#x3066;&#x305F;&#x3002;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;D2&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x81B5;&#x5207;&#x9664;&#x5F8C;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;D2 mRNA&#x306F;&#x5909;&#x308F;&#x3089;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x5F8C;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306F;&#x3001;&#x3B2;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;D2&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x200B;&#x200B;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;D2&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3092;&#x5F37;&#x529B;&#x306B;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;D2&#x306E;&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;280&#x304C;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306F;&#x3001;&#x6279;&#x5224;&#x7684;&#x306B;D2&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3092;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#xFF08;T280A&#xFF09;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x4E0B;&#x3067;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;D2&#x306B;&#x5909;&#x7570;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;D2&#x306E;&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;280&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#xFF08;Tg&#xFF09;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3092;&#x5C0E;&#x51FA;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;D2 T280A&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;TG mRNA&#x306E;&#x540C;&#x7B49;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x3B2;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;D2&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x306F;&#x308B;&#x304B;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;D2 T280A Tg&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x3B2;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x6052;&#x5E38;&#x7684;&#x306B;&#x6838;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;D2&#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x5CF6;&#x306B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;D2&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;280&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;D2 Tg&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x3B2;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;280-&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;D2 Tg&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6291;&#x5236;&#x3B2;&#x7D30;&#x80DE;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x8001;&#x9F62;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;&#x3B2;&#x7D30;&#x80DE;&#x9762;&#x7A4D;&#x3068;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;D2&#x306F;&#x81B5;&#x3B2;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;280&#x306E;&#x5236;&#x9650;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;D2&#x5B89;&#x5B9A;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x884C;&#x70BA;&#x3092;&#x901A;&#x77E5;&#x3059;&#x308B;&#x3B2;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;280&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;D2&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3B2;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x3092;&#x5EF6;&#x9577;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3068;&#x88DC;&#x5F37;&#x3B2;&#x7D30;&#x80DE;&#x584A;&#x306E;&#x62E1;&#x5927;&#x3002;

&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;D2&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x81B5;&#x81D3;&#x3B2;-&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;

&#xBCA0;&#xD0C0; &#xC138;&#xD3EC; &#xB300;&#xB7C9; &#xD655;&#xC7A5;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778; &#xB0A8;&#xC544; &#xC81C;&#xB300;&#xB85C; &#xC774;&#xD574;. Cyclin d 2 &#xC8FC;&#xC694; D &#xD0C0;&#xC785; &#xF06C; &#xD45C;&#xD604;&#xB41C;&#xC5D0; &#xBCA0;&#xD0C0;-&#xC140;, &#xC131;&#xC778; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;. &#xF06C; d 2&#xB294; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC801;&#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xADDC;&#xC81C;&#xAC00; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xC138;&#xC6E0;&#xB2E4;&#xB294; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC138;&#xD3EC; &#xD655;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; mitogenic &#xC790;&#xADF9; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Cyclin d 2 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBD80;&#xBD84; pancreatectomy &#xD6C4; &#xAE09;&#xACA9;&#xD788; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; cyclin d 2 mRNA &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; cyclin d 2 &#xC2DD; posttranscriptional &#xADDC;&#xC81C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xAC00;&#xC124;&#xACFC; &#xC77C;&#xCE58;, D2 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC548;&#xC815;&#xC131; &#xF06C; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xADDC;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC8C;&#xC7AC;&#xC5D0;. &#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC; 280 cyclin d 2&#xC758; phosphorylated &#xACE0;&#xC774; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC740; &#xBE44;&#xD310;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; D2 &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC744; &#xC81C;&#xD55C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD30C;&#xC0DD; &#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC; 280 cyclin d 2&#xC758; &#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC; (T280A)&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC640; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; (tg) &#xC950; &#xB610;&#xB294; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; cyclin d 2 &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xD504;&#xB85C;&#xBAA8;&#xD130;&#xC758; &#xD1B5;&#xC81C;. Tg Mrnas&#xC758; &#xB4F1;&#xAC00; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; cyclin d 2 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; cyclin d 2 T280A &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD588;&#xB2E4;. Cyclin d 2 T280A tg &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xB294; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; constitutively &#xD575; cyclin d 2 &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xB3C5;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xC99D;&#xAC00; cyclin d 2 &#xC548;&#xC815;&#xC131; &#xC804;&#xC2DC;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC; 280 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; cyclin d 2 tg &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; proapoptotic &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C; &#xB41C; &#xD45C;&#xD604;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC138;&#xD3EC; apoptosis&#xB97C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5B5;&#xC81C; &#xB41C; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC138;&#xD3EC; apoptosis &#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC; 280 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; cyclin d 2 tg &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB098;&#xC774; &#xB4E0;&#xB41C; &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC99D;&#xAC00; &#xB41C; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC140; &#xC601;&#xC5ED; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; cyclin d 2&#xB294; &#xCDCC; &#xC7A5; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC; 280&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD589;&#xB3D9; &#xD558;&#xB294; &#xC2E0;&#xD638; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; cyclin d 2 &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC744; &#xC81C;&#xD55C; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8; &#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC; 280 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; cyclin d 2 overexpression &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874;&#xC744; &#xC5F0;&#xC7A5; &#xD558; &#xACE0; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC138;&#xD3EC; &#xB300;&#xB7C9; &#xD655;&#xC7A5;&#xC744; &#xC99D;&#xB300; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCDCC; &#xC7A5; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; cyclin d 2 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC548;&#xC815;&#xC131; &#xD1B5;&#xC81C; &#xB41C;&#xB2E4;.

Los factores moleculares determinantes de la expansi&#xF3;n masiva de las c&#xE9;lulas beta siguen siendo poco conocidos. Ciclina D2 es el principal tipo D de la ciclina se expresa en las c&#xE9;lulas beta, esenciales para el adulto el crecimiento de las c&#xE9;lulas beta. La hip&#xF3;tesis de que la ciclina D2 puede ser regulada en forma activa las c&#xE9;lulas beta, lo que podr&#xED;a permitir a los est&#xED;mulos mitog&#xE9;nicos para influir en la expansi&#xF3;n de las c&#xE9;lulas beta. Prote&#xED;na ciclina D2 se aument&#xF3; de forma pronunciada despu&#xE9;s de la pancreatectom&#xED;a parcial, pero ARNm de la ciclina D2 se mantuvo sin cambios, lo que sugiere mecanismos reguladores postranscripcionales influir en la expresi&#xF3;n de ciclina D2 en las c&#xE9;lulas beta. De acuerdo con esta hip&#xF3;tesis, la estabilidad de la prote&#xED;na ciclina D2 se encuentra fuertemente regulada en los fibroblastos. Treonina 280 de ciclina D2 es fosforilada, y este residuo cr&#xED;ticamente limita estabilidad D2. Se deriva transg&#xE9;nicos (tg) ratones con treonina 280 de ciclina D2 mutado a alanina (T280a) o de tipo salvaje ciclina D2 bajo el control del promotor de insulina. Prote&#xED;na ciclina D2 T280a se expres&#xF3; en niveles mucho m&#xE1;s altos que la prote&#xED;na de tipo salvaje ciclina D2 en las c&#xE9;lulas beta, a pesar de la expresi&#xF3;n equivalente de ARNm Tg. Ciclina D2 T280a ratones tg mostraron una localizaci&#xF3;n nuclear de ciclina D2 constitutivamente en las c&#xE9;lulas beta, y el aumento de la estabilidad de ciclina D2 en los islotes. Curiosamente, treonina 280-mutante ciclina D2 ratones tg hab&#xED;a reducido en gran medida la apoptosis de las c&#xE9;lulas beta, con la expresi&#xF3;n de genes pro-apopt&#xF3;ticos suprimida. Supresi&#xF3;n de la apoptosis de las c&#xE9;lulas beta en treonina 280-mutante ciclina D2 ratones tg resultado mucho mayor de las c&#xE9;lulas beta &#xE1;rea en ratones viejos. Tomados en conjunto, estos datos indican que la ciclina D2 est&#xE1; regulado por la estabilidad de prote&#xED;nas en las c&#xE9;lulas beta pancre&#xE1;ticas, que se&#xF1;ala que act&#xFA;an sobre treonina 280 estabilidad ciclina l&#xED;mite D2 en las c&#xE9;lulas beta, y que treonina 280-mutante sobreexpresi&#xF3;n de ciclina D2 prolonga la supervivencia de las c&#xE9;lulas beta y aumenta masa de c&#xE9;lulas beta de expansi&#xF3;n.

Daniel J. Sartori

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